荧光标记

实验方法原理:取一定量的细胞悬液，先加入特异的第1抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，在加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体复合物，以流式细胞仪检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。

0 . 05 ) 。标记后的软骨细胞显示环状红色荧光 ,胞核未着色 。 体外培养和体内培养的软骨细胞 - 支架复合物 , 均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达 。结论 : D i I 荧光染料能够有效标记软骨细胞 ,标记的细胞 - 支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察 ,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法 。

荧光微球系列细胞荧光标记试剂是近年研发的一种新型染料，具有强烈、稳定的荧光，不转染周围细胞，可以长时间地追踪活细胞迁移、运动、贴附的特点。它可使用于MSCs、胚胎干细胞、肿瘤细胞以及心肌、平滑肌细胞等各类细胞的标记。

荧光标记及成像已经成为生命科学领域最重要的表征技术之一。细胞、组织切片，活体组织、模式生物、活体动、植物中的蛋白质分子，亚细胞结构以及单个细胞都可以使用相应的荧光染料进行特异性的标记，大多数的科研工作者使用共聚焦显微镜对荧光标记样品的拍照成像。

NanoSight 的LM 系列的新型荧光仪器不仅能够实时跟踪单个荧光纳米颗粒还能测定标记的颗粒尺寸大小和浓度。在光散射模式下可以测定颗粒物总数，然后在荧光模式测定时与标记颗粒物浓度进行对照，从而知道体系中荧光颗粒物的含量或荧光标定比率。

本篇应用文章对在竞争反应中无荧光标记的配体进行了研究，结果显示了一个从Shewanella Denitrificans中占据主导地位的Kef体系。

荧光显微镜是一种利用荧光的成像技术，通过内在发射或人工添加荧光团，以提供显微镜图像的对比。 在生物医学成像中，由于使用多种荧光标记，不同的荧光团可用于同时识别特定的目标分子和细胞结构，提供高度的特异性和选择性。在材料科学中，荧光(光致发光)显微镜可以用来观察发光纳米粒子和半导体表面缺陷的图像。

本文将比较使用无标记细胞分析技术进行细胞计数与使用传统的荧光染料标记细胞核和整个细胞进行计数的区别。同样展示出如何通过无标记细胞分析技术来替代荧光染料标记的方法来获得化合物处理细胞后的IC50曲线。

本篇文章主要介绍如何用免疫荧光技术和间接免疫荧光技术标记大肠杆菌，以及具体的实验方法和需要用到的仪器。

分子信标作为一种荧光标记的分子探针，具有极强的特异性和较高的灵敏度，目前已经成为基础医学和生物学的重要研究工具。基于HORIBA Scientific（Jobin Yvon光谱技术）设计生产的荧光光谱仪，讨论了水解ssDNA荧光发射光谱、杂交ssDNA荧光发射光谱以及退火过程中荧光光谱的变化。

分子信标作为一种荧光标记的分子探针，具有强的特异性和较高的灵敏度，目前已经成为基础医学和生物学的重要研究工具。基于HORIBA Scientific（Jobin Yvon光谱技术）设计生产的荧光光谱仪，讨论了水解ssDNA荧光发射光谱、杂交ssDNA荧光发射光谱以及退火过程中荧光光谱的变化。

105。实际应用中，动态检测范围则受限于高含量条带的荧光饱和以及非特异性结合造成的背景因素。由于不使用CCD不会出现高光溢出现象，而这却是化学发光和普通荧光检测的常见问题，所以此方法能够提供非常锐利的条带和出色的图像质量。这一新颖的多功能酶标仪检测平台上的Sc a n l a t e rWestern Blot检测系统以其操作简便、检测灵敏和信号的超高稳定性，提供了出色的WBs检测性能表现，必将给多功能酶标仪在实验室应用方面带来又一重大突破！

捷克全球变化研究所与丹麦哥本哈根大学长期合作研究开发一种环境毒性物质如除草剂、重金属等的高通量生物标记筛选方法。他们使用高等植物的光自养细胞悬液，结合FluorCam叶绿素荧光成像系统、FMT150藻类培养与在线监测系统、AlgaeTron AG230藻类培养箱等仪器开展了大量相关研究。实验结果表明光自养细胞悬液结合FluorCam叶绿素荧光成像技术就是一种非常好的环境毒性生物标记。

实验步骤① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不时振荡。④ 取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度,一般可用“+”表示:(-)无荧光 (±)极弱的可疑荧光 (+)荧光较弱,但清楚可见 (++)荧光明亮 (+++ --++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上,而各种对照显示为(±)或(-),即可判定为阳性。

本应用纪要介绍了一种利用RapiFluor-MS标记游离N-糖并采用配备荧光(FLR)检测器和ACQUITY QDa质谱检测器的ACQUITY UPLC H-Class Bio系统分析标记N-糖的精简方法。采用这一全新的监测工作流程，研究人员在30分钟内即可完成UPLC-FLR/MS分析的糖蛋白样品制备过程。除了能够缩短样品制备时间，RapiFluor-MS与2-AB相比，能够将荧光响应提高14倍，同时将MS响应提高160倍。这些改进使得研究人员能够将FLR检测和通过ACQUITY QDa实现的质谱检测应用到常规分析中。在本应用纪要中，我们将RapiFluor-MS与UPLC® -FLR-MS相结合，用于监测特性、质量和相对丰度各不相同的标记游离寡糖。

绿色荧光蛋白GFP的应用绿色荧光蛋白GFP的应用主要集中在利用其荧光性质的基础上作为一种标记物。1 绿色荧光蛋白GFP在分子生物学上的应用1.1 绿色荧光蛋白GFP作为报告基因 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的DNA，如传统的荧光素酶（LUX）基因和β-葡萄糖苷酶（GUS）基因。绿色荧光蛋白GFP作为基因报告可用来检测转基因效率，把绿色荧光蛋白GFP基因连接到目的基因的启动子之后，通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。目前，此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得到非常广泛的应用，特别是在活细胞基因表达的时空成像方面。 1.2 绿色荧光蛋白GFP作为融合标签绿色荧光蛋白GFP最成功的一类应用就是把绿色荧光蛋白GFP作为标签融合到主体蛋白中来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。在多数情况下，绿色荧光蛋白GFP基因在N-或C-末端与异源基因用常规的分子生物学手段就可以接合构成编码融合蛋白的嵌合基因，其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性，又表现出与天然GFP相似的荧光特性。GFP的这种特性为蛋白质提供了一种荧光标记，不仅可以检测蛋白质分子的定位、迁移，还可以研究蛋白质分子的相互作用以及蛋白质构象变化，并依靠荧光共振能量转移即FRET来进行检测。

上转换发光材料(Upco n v e r s i o n p h o s p h o r smaterial,UPM) 是一类在长波长激发下发射短波长光的材料，其特点是所吸收的光子能量低于发射的光子能量。由于使用红外光作为激发光源，此类材料在防伪标记、激光探测和立体显示上的用途已经广为人知。最近几年来, 科学家们又发现上转换发光材料有不易发生光漂白和发光强度高等优点, 用在生物标记中可以大大提高检测灵敏度和线性范围，因此上转换发光材料的荧光发射光谱是表征其性能的一个重要指标，具有非常重要意义。PerkinElmer 公司的LS-55 荧光光谱仪连接激光做光源的荧光分析方法能够准确的测试上转换材料的荧光发射峰，测试结果良好，为上转换材料的发光表征提供了完美的解决方案。该方法操作简单，使用方便，成本低廉，能够满足绝大多数样品的测试，并且易于拆卸，也能满足常规样品的测试，是一个非常实用的解决方案。

脊柱关键结构如椎间盘和小关节等的损伤常常引起腰疼。到目前为止，准确、无创地检测这些组织中的微损伤仍然非常困难。本文报道了一种基于胶原杂交肽(CHP)的体内成像方法，该方法在分子尺度上专门针对细胞外基质结构的破坏进行标记。利用荧光标记的CHP、活体动物成像和光片荧光显微镜成像，绘制了腰椎胶原蛋白破坏的3D图。

ViroCyt通过技术创新，在数分钟内直接、特异性地进行病毒定量，远远胜于耗时、低精度的噬斑法、TCID50等传统方法。利用荧光标记的高亲和力抗体，特异性识别目标病毒的特定抗原表位，既可以提高检测精度，也可以达到混合病毒中目的病毒鉴定的功能。

钙离子通道是一种跨越细胞膜的结构，它严格控制着钙离子进入细胞的过程。由于钙离子信号与很多重要生理功能相关，例如心脏收缩、基因转录等，因此调节钙离子进入细胞的精确反馈机制就至关重要，但其内部机制尚不清楚。目前常用的研究方式有荧光探针离子成像分析技术。钙离子成像技术是通过一些特定的荧光探针，对细胞内钙离子作荧光标记，并对它们空间分布随时间变化测定。从钙离子浓度变化研究钙离子通道。

实验对做形态计量观察的骨标本和含金属植入物的软硬组织标本采用不脱钙有机玻璃包埋技术进行处理。实验采用EXAKT硬组织切磨系统制作皮质骨和含金属植入物的软硬组织切片，能获得厚薄均一的5-10μ m薄切片。实验发现EXAKT硬组织切磨系统制作的薄切片在高倍镜下更容易聚焦，可清晰显示组织结构及荧光标记。

电阻抗测量技术广泛应用于材料科学、生命科学、食品安全、疾病诊断等领域。基于电阻抗检测的流式细胞仪作为无标记、非侵入式技术而被广泛的应用于细胞的计数、分选、捕获、分离及鉴别等。随着电阻抗测量技术的快速发展，基于电阻抗测量的流式细胞仪正向着快速的、高通量的单细胞分析方向发展。目前，结合荧光激活细胞分选(fluorescent activated cell sorting，FACS)的荧光标记技术可以快速、准确的实现高通量的细胞分选。但是，FACS技术有两个主要缺点：一是需要使用标记和抗体对细胞进行修饰，这意味着有可能会改变研究对象 二是FACS设备非常昂贵且操作复杂。基于电阻抗检测的微流控技术由于无需对测量对象做标记，也不会侵入到其内部，从而不会对其造成任何破坏。此外，微流控电阻抗检测技术所用的样品量较小，而且基于电阻抗检测的设备易于操作和携带。所以，基于电阻抗检测的微流控技术为细胞检测提供了一个全新的分析方法。

UVP推出的iBox Explorer2 显微活体成像系统整合了显微镜和高灵敏度的制冷CCD，使得研究者在大体、活体和显微状态下对样品进行从宏观到微观的探究，并可深入皮下和体腔内进行更详细的研究。iBox Explorer2可以轻易检测活体中绿色荧光蛋白（GFP）/红色荧光蛋白（RFP）和其他荧光标记物。在肿瘤（血管形成、微环境、生长、外溢）研究、组织追踪（造血、淋巴）、细胞转移（宏观/微观）等中具广泛的应用价值。

T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白一样，是由多个基因片段的基因重组产生的。这种重组产生了大量的T细胞，每一个都针对一种独特的多肽抗原 (peptide antigen)。T细胞对病毒、细菌、肿瘤细胞以及来自正常组织的多肽（在自身免疫性疾病中）有反应。每个多肽的特异性只在循环T细胞的一小部分中被发现，这使得抗原特异性反应的研究变得困难。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集后分析流程将目的稀有细胞以抗体磁珠标记，再对其他分析标记物进行不同多色荧光标记(Sample treatment)，直接上样流式细胞仪(Load sample)。先使用预富集模块功能，在内建的磁力柱上富集目的稀有细胞 (MACS enrichment)，随后进行细胞分析(Flow analysis)，不因过多操作流程而损失细胞，同时获得更多分析数据。

本稿报道了一种基于PMP标记法1）的可以抑制剥皮反应的O-聚糖的化学切除方法，并报告了研究结果。以抗体药物为代表的蛋白质类药物，多由来源于真核生物的培养细胞如CHO（Chinese hamster ovary）细胞合成。出于这个原因，生物合成的蛋白质中不可避免地会存在众多翻译后修饰。其中，多聚糖的修饰除参与蛋白质的功能调节外，根据其结构的不同，有时还会产生抗原性，因此在生物药品质量相关评价方面备受瞩目。但是，聚糖的评价尚存在许多技术上的挑战。尤其是O-结合型聚糖（O-聚糖），很难用酶将其从蛋白质上完全切除，因此，主要采用肼解反应和β 消除反应这两种化学切除方法进行聚糖的切除，但上述方法还存在必须改善的问题。肼解反应过程中需要处理一种爆炸性试剂，必须小心注意，所以操作性不强。而β 消除技术由于连续的β 消除反应会引发使多糖逐步降解的剥皮反应（peeling reaction）。一般来说，在使用β 消除反应分析O-聚糖时，加入还原性试剂的还原性β 消除技术可以在碱性条件下释放聚糖的同时还原糖链根部，而不引发连续的β 消除反应。但由于该方法会完全还原聚糖的根部，无法在切除糖链后用荧光试剂等进行标记，这限制了该方法的应用。此外，由于聚糖自身的离子化效率不高，使用质谱对该方法获得的样品进行分析时，灵敏度较低。为了解决这个问题，研究者对一种可以结合2-AB或PA等荧光标记试剂而不还原聚糖根部的非还原性β 消除/荧光标记技术进行了探索，但未能大幅度抑制连续的β 消除反应。即使如此，在以O-聚糖为分析对象的学术研究中，剥皮反应生成的副产物的存在并未对研究造成重大妨碍。但是，对于生物药品等应用于人体的药物而言，必须对多糖进行评价以进行质量控制，此时如何处理评价过程中的副产物便成为了一大问题。

荧光探针通过特定波段（700-800nm）的荧光染料标记，并与生物体内肿瘤特异性的目标蛋白靶向结合、表达，以组织蛋白和蛋白酶作为近红外荧光成像靶点，通过近红外成像系统获得肿瘤标记物图像，实现对肿瘤的示踪、定性甚至定量诊断。

抗体的准备：取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中，再加人生理盐水及碳酸盐缓冲液，使zui后免疫球蛋白浓度为20mg／ml，碳酸盐缓冲液容量为总量的1／10，混匀，将烧瓴置电磁搅拌器上（速度适当以不起泡沫为宜）5～10min。

Thermal shift assay（TSA），也被称为差示扫描荧光法（DSF）是表征蛋白热稳定性的常用方法之一，广泛应用于蛋白配体互作表征，突变体、缓冲液、去垢剂筛选等领域。但DSF的实验操作较繁琐，需要根据蛋白的特性及去垢剂兼容性选择合适的染料，优化蛋白和染料的比例，在配制样品时还要考虑染料自带的有机溶剂对蛋白的影响。时下被行业深度认可的无标记的TSA验证方法-也称nanoDSF技术，可解决DSF技术的局限性，样品无需加染料就可以直接上机检测了。下面我们一起通过用户的文献案例来进一步了解。

由于红外光谱技术对于分子结构的敏感性，能够在无任何标记的情况下实现对生物样品成分的鉴定和分布解析，对于不便于荧光标记的生物组分鉴别十分有利，使得其在生命科学领域的应用越来越广泛。近期Maryam Rahmati等人使用亚微米红外拉曼同步测量技术在Materials Today上报道骨生物材料对骨骼再生的研究中成功揭示了红外显微镜在组织样品分析中的潜力。众所周知，生物骨骼有机材料能够模仿天然组织功能，是作为受损骨骼良好的替代物。Maryam等通过设计两个富含脯氨酸的无序肽(IDP2和IDP6)并将它们添加到SmartBone(SBN)生物杂交替代物中，成功合成了具备改善由于植入物导致的组织矿化问题的新型材料。通过对家猪开颅损伤后8周和16周愈合情况的研究，作者团队发现这种材料能够很好的帮助颅骨愈合。

生物检测技术的发展通常旨在提高检测的分辨率，或增加可以同时检测的生物特征数量。利用荧光素标记检测细胞特征的传统荧光流式是临床检测的常用技术，但由于荧光素数量限制，可同步检测的指标有限。流式质谱技术利用稳定的金属同位素标记抗体，可以在单细胞分辨率下同时检测超过40个生物学指标，显著增强了流式细胞术分析生理、病理过程中免疫系统的能力。本文在临床应用场景中比较了传统荧光流式和流式质谱两种技术手段对淋巴细胞的分群能力，旨在说明流式质谱技术具有优于荧光流式的技术特点，在未来能够广泛应用于临床样本检测。