标记反应

求助写出两种用于免疫分析的荧光标记物和化学发光标记物，写出它们的标记反应。

大家好。我想问一下。 我的做1，4-对氨基苯与FITC(异硫氰酸荧光素)反应的时候。其条件完全是按照蛋白质的氨基与FITC的条件。即氨基与异硫氰根的反应条件进行的。但是却标记不上。不知道是不是苯环上的氨基具有惰性？还是反应条件不适合？有哪位高手指教一下！谢谢啊

各位，用标记物对蛋白质进行标记时常用EDC和NHS，有文献标记方法如下：1、先配标记液 标记物+EDC+NHS 2、用标记液对蛋白进行标记。个人现有疑问：EDC作为交联剂，主要使氨基和羧基聚合，如果标记液中EDC过量的话，再用其标记蛋白质，同时应该会使蛋白质自身的氨基和羧基发生聚合反应而降低标记效率，那有什么办法可以消除这种影响呢？希望大家指导！谢谢。顺便有啥好的标记方法请提供参考！再次感谢！

毒性标记（T）EP毒性标记（E）急性毒性标记（H）易燃性的标记（I）腐蚀性的标记（C）反应性的标记（R）

[font=宋体]什么是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]？[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体结合也被称为抗体标记，是一种可将特定标记物共价连接到抗体分子上的抗体修饰技术。这些标记抗体可用于从细胞，组织，或者整个个体的混合物中分离和纯化的目的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）是最常见的抗体酶标记类型。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]上仅有[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]等，均可用于标记抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]高质量的标记抗体：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/font][font=宋体]⑥生物素标记抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]常见的抗体标记方法：[/b][/font][font=宋体]和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]（琥珀酰亚胺）酯法[/font][/font][font=宋体]应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]吉妥珠单抗（[/font][font=Calibri]Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg[/font][font=宋体]）是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物（[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]）。半合成的卡奇霉素衍生物具有[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]酯，以便将卡奇霉素与人源化[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，[/font][font=Calibri]Mylotarg[/font][font=宋体]已于[/font][font=Calibri]2010[/font][font=宋体]年退市。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异硫氰酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③碳二亚胺法[/font][font=宋体][font=宋体]碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。最常用的碳二亚胺为[/font][font=Calibri]EDC[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该方法操作简单，但与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]一样，[/font][font=Calibri]EDS[/font][font=宋体]具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④高碘酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法可用于制备特异性的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情抗体标记详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[font=宋体]抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体，是免疫电镜样品制备的一种方法，用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。抗体标记主要是用于抗原的定位分析，在某些情况下，也可以对混杂有大量其他分子的样本中的抗原进行定量检测。由于抗体与其相应抗原具有很高的亲和力，因此带有易识别标记物的抗体可以定位分析抗原，并且是一种理想的快速价廉的定量测定方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]荧光素标记[/b][/font][font=宋体]荧光色素是最常用于标记抗体的标记物之一。荧光素经恰当的激发可发光，从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况，主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色，是一种非常好的亚细胞水平精确定位的方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]酶标记[/b][/font][font=宋体]酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成，其应用范围非常广泛，结果即时可见、敏感性高，但较难应用于定量分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记[/b][/font][font=宋体]生物素标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性，将生物素与抗体共价结合是一种非常简便、直接的标记方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体标记，作为生物学和医学领域的关键技术，它的核心在于将标记物（如酶、荧光素、生物素等）以共价的方式连接到抗体上。这一过程犹如赋予抗体一双[/font][font=宋体]“魔法眼睛”，使其能够精准地识别并结合特定的抗原。抗体与标记物的结合，再与待检测抗原发生特异性反应，形成一种多元复合物。这种复合物的形成，不仅增强了检测的灵敏度，也提高了识别的特异性。这一特性使得抗体标记技术在生物学、医学和生物工程领域中发挥着举足轻重的作用。借助高端的仪器设备，如荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等，我们能够直接观察或自动化测定试验结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这不仅在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上对抗原、抗体反应进行深入的定性和定位研究，还为各种[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]和固相免疫分析方法提供了强大的技术支持，从而在体液中的半抗原、抗原进行精准的定性和定量测定。如今，抗体标记技术已经成为医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药等领域不可或缺的分析与研究工具。而酶标记法、生物素化标记法、荧光素标记法和胶体金标记法等常见的抗体标记技术，更是推动了相关领域的飞速发展。抗体标记技术，不仅为我们打开了一扇探索生物微观世界的大门，更为相关领域的研究与应用提供了强大的技术支持。在未来的生物学、医学和生物工程研究中，抗体标记技术无疑将继续发挥其无可替代的作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]常用的抗体标记技术[/font][/b][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]抗体的酶标记法[/font][/b][/font][font=宋体]通过共价键经适当方法将酶联结在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，这些有色产物可用肉眼、光学显微镜和电子显微镜观查，也可以用分光光度计测定，呈色反应显示了酶的存在，从而证明发生了相应的免疫反应。[/font][font=宋体][font=宋体]实验中使用偶联剂使酶与抗体结合，即通过应用单、双或多功能试剂，分别与大分子的抗体所存在的功能性基团发生反应，生成酶[/font][font=宋体]—抗体偶联复合物。不同的酶—抗体复合物制备方法中，最广泛应用的戊二醛法，本法与其它偶联方法相比，具有操作简单、反应条件温和，及实用面广等长处。[/font][/font][font=宋体]酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]辣根过氧化物酶[/font][font=Calibri](HRP)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化物酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]后该醛基与 [/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]氨基结合，形成[/font][font=Calibri]Schiff[/font][font=宋体]氏碱。为了防止[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。氧化反应末了，用硼氢化钠稳定[/font][font=Calibri]Schiff[/font][font=宋体]氏碱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]碱性磷酸酶（[/font][font=Calibri]AKP[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体][font=宋体]碱性磷酸酶（[/font][font=Calibri]AKP[/font][font=宋体]）用于标记抗体，常用戊二醛一步法，将酶和单抗混合，再加入适量戊二醛，使酶和抗体蛋白的[/font][font=Calibri]NH2[/font][font=宋体]分别与两个醛基结合，制备成结合物。该法简便，但所得产物不均一，抗体活性损失大，酶标记率低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]抗体的生物素化标记[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]亲和素与生物素都可与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括抗原、抗体、酶等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、荧光素等分子结合而不影响后者的生物活性，是理想的标记剂。一个抗体分子可偶联数十个生物素或亲和素分子，而亲和素或生物素分子又可与酶或荧光素结合，从而组成一个生物放大系统，显著提高检测的灵敏度。常用的有亲和素–生物素标记法[/font][font=Calibri](Labeled avidin biotin[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]LAB)[/font][font=宋体]、亲和素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素桥法[/font][font=Calibri](bridged avidin biotin, BAB)[/font][font=宋体]和亲和素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物法[/font][font=Calibri](avidin biotin peroxid ase complex[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ABC)[/font][font=宋体]。本实验可使抗体或其它蛋白质的ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合。其后，生物素化的分子可应用酶标[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉亲和素复合物来检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]抗体的荧光标记法[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质结合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。当它与相应的抗原特异结合后，借助于荧光显微镜观察呈现明亮的特异荧光。实验中常用异硫氰基荧光黄（[/font][font=Calibri]fluorescein isothiocyanate, FITC[/font][font=宋体]）作为标记物，在碱性溶液中，[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]上的化学基团异硫氰基（[/font][font=Calibri]-N=C=S[/font][font=宋体]）与抗体蛋白自由氨基（主要是赖氨酸的ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基）结合，形成荧光抗体，以测定细胞相应抗原的存在。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]具有很高的量子产量（发射光与吸收光的比值[/font][font=Calibri],0 .85[/font][font=宋体]），而且形成的偶联物的稳定性很好。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是应用最广的荧光染料，流式细胞仪就按[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的特性，设计了激光波长为[/font][font=Calibri]488 nm,[/font][font=宋体]很接近于[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的最大激发波长[/font][font=Calibri]492nm[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]免疫胶体金标记抗体及检测抗原[/font][/b][/font][font=宋体]胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能利用到。[/font][font=宋体][font=宋体]胶体金在光镜和电镜中均为有效的标记物，可以检测单一和多重抗原。胶体金在电解质中不稳定，但被蛋白质包被的胶体金是稳定的。一般常用免疫球蛋白或蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]包被胶体金，可作标记二抗进行免疫检测，本方法应用范围广，染色后的样品可以长期保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[em06] 我遇到一个这样的问题，我们老板让我做一个这样的试验，让我做免疫化学发光，但是我们不是用磁微球的，他让我用毛细管电泳分离标记过的和没有标记的hpr，我做了快一个礼拜了，发现了一个问题，我的hpr标记反应实在指定的缓冲溶液中进行的，反应完成以后直接对这个反映之后的溶液进行分离，我使用的是50微米内径的毛细管，电动进样，但是我觉得样品根本就进不去，我暂时还没有压力进样，我觉得电动进样应该能够进去，但是很奇怪，没有一点反应。希望有做过这个方面的高人指点一下迷津。非常感激！

[font=宋体][font=宋体]辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）是最常见的抗体酶标记类型。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]上仅有[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]等，均可用于标记抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]辣根过氧化物酶标记二抗通常用于如免疫印迹、酶联免疫吸附试验以及免疫组织化学等应用。无论在化学发光法中、在比色法中还是在荧光法中，[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记二抗需要结合高信噪比的底物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]常见的抗体标记方法[/b][/font][font=宋体]和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]（琥珀酰亚胺）酯法[/font][/font][font=宋体]应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]吉妥珠单抗（[/font][font=Calibri]Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg[/font][font=宋体]）是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物（[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]）。半合成的卡奇霉素衍生物具有[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]酯，以便将卡奇霉素与人源化[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，[/font][font=Calibri]Mylotarg[/font][font=宋体]已于[/font][font=Calibri]2010[/font][font=宋体]年退市。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②[/font][font=宋体]异硫氰酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③[/font][font=宋体]碳二亚胺法[/font][font=宋体][font=宋体]碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。最常用的碳二亚胺为[/font][font=Calibri]EDC[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该方法操作简单，但与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]一样，[/font][font=Calibri]EDS[/font][font=宋体]具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④[/font][font=宋体]高碘酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法可用于制备特异性的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]荧光素异硫氰酸酯（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）是一种常用的荧光染料，它可以与蛋白质分子中的氨基、巯基或羟基等基团结合，从而实现对蛋白质的标记。[/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记的蛋白质可以用于免疫荧光、流式细胞术等实验中，具有很高的灵敏度和特异性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]下面是[/font] [font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白的一般步骤：[/font][/font][/b][font=宋体]①准备蛋白质溶液：将需要标记的蛋白质溶解在适当的缓冲液中，使其浓度达到适当的标记浓度。[/font][font=宋体][font=宋体]②准备 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]溶液：将 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]溶解在 [/font][font=Calibri]DMSO [/font][font=宋体]中，制成浓度为 [/font][font=Calibri]1mg/mL [/font][font=宋体]的储备液。使用前，将储备液稀释到适当的标记浓度。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③标记反应：将蛋白质溶液和 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]溶液混合，使蛋白质与 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]的摩尔比为 [/font][font=Calibri]1:10 [/font][font=宋体]至 [/font][font=Calibri]1:50[/font][font=宋体]。在反应体系中加入适量的缓冲液，使总体积为 [/font][font=Calibri]100uL [/font][font=宋体]左右。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④反应条件：将反应体系置于室温或 [/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下孵育 [/font][font=Calibri]1-2 [/font][font=宋体]小时，以促进标记反应的进行。[/font][/font][font=宋体]⑤终止反应：标记反应结束后，加入适量的终止液（如甘氨酸或硼酸缓冲液），以终止反应。[/font][font=宋体][font=宋体]⑥纯化标记蛋白：为了去除未结合的 [/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]，可以使用凝胶过滤、透析或离心等方法对标记蛋白进行纯化。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑦储存标记蛋白：将纯化后的标记蛋白储存于适当的缓冲液中，在 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下避光保存。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]需要注意的是，[/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白的效率和特异性可能会受到多种因素的影响，如蛋白质的性质、缓冲液的组成、标记条件等。因此，在进行 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白实验时，需要对每种蛋白质进行优化，以获得最佳的标记效果。同时，在实验过程中应注意避免荧光染料的淬灭和光漂白，以保证实验结果的准确性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]fitc[/font][font=宋体]标记蛋白常见问题解析：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]哪些因素可能会影响[/font] [font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白的效率和特异性？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]①蛋白质的性质：不同的蛋白质具有不同的化学性质，例如等电点、亲水性、分子量等，这些性质可能会影响蛋白质与 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]的结合效率和特异性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②缓冲液的组成：缓冲液的 [/font][font=Calibri]pH [/font][font=宋体]值、离子强度、添加剂等都会影响蛋白质与 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]的结合效率和特异性。[/font][/font][font=宋体]③标记条件：标记反应的温度、时间、摩尔比等条件也会影响标记效率和特异性。[/font][font=宋体][font=宋体]④未结合的 [/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]：未结合的 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]可能会与蛋白质发生非特异性结合，从而影响标记的特异性。[/font][/font][font=宋体]⑤荧光染料的淬灭和光漂白：荧光染料在光照下容易发生淬灭和光漂白，这可能会影响标记蛋白的荧光强度和稳定性。[/font][font=宋体][font=宋体]因此，在进行[/font] [font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白实验时，需要对每种蛋白质进行优化，以获得最佳的标记效果。同时，在实验过程中应注意避免荧光染料的淬灭和光漂白，以保证实验结果的准确性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]fitc[/font][font=宋体]标记蛋白注意事项有哪些？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①光照控制：整个标记过程应在避光条件下进行，以减少[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]荧光淬灭的可能性。使用黑色或不透明的容器存储和操作试剂，并确保实验室内光线柔和且避免直射阳光。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②温度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值调控：在标记反应过程中，严格控制温度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值。过高或过低的温度都可能影响[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]与蛋白质的结合效果，而[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值的波动也可能导致非特异性结合的增加。因此，应根据实验需求选择合适的反应条件，并进行严格的控制。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③蛋白质稳定性保护：在标记过程中，应采取措施保护蛋白质的稳定性。避免使用可能导致蛋白质变性或降解的试剂和条件，确保蛋白质在标记过程中保持其原有的结构和功能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④去除未结合[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的重要性：未结合的[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]可能导致背景荧光增强，从而影响实验结果的准确性。因此，在标记后应彻底去除未结合的[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]。这可以通过多次透析或离心等方法实现，确保标记后的蛋白质纯净且荧光信号清晰。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白服务[/b][/url]，更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]重组蛋白标签[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体]抗体标记是一种生物技术，通过将标记物（如酶、荧光素、生物素等）共价连接到抗体上，使其与待检测物（如特定抗原）特异性反应，形成多元复合物。随后，借助相关仪器，可以直接观察试验结果或进行自动化测定，从而对抗原、抗体反应进行定性和定位研究，或进行定性和定量测定。下面为大家介绍几种高质量的标记抗体：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①荧光色素标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这种标记方法是将荧光素与相应的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]结合，将荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]与标本中相应的抗原形成荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原复合物，用荧光显微镜观察。在显微镜若存在荧光则意味着存在抗原抗体复合物，因此可根据已知的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]推断出另一种未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②[/b][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记抗体[/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体标记中生物素的引入使整个过程灵敏度大大提高！这种方法可使抗体或其它蛋白质的[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基与酰化的生物素共价结合，生物素化的分子可以通过酶标记的抗生物素蛋白或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉抗生物素蛋白复合物来检测。小分子水溶性生物素对链霉亲和素的高亲和力是该方法的设计基础。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③放射性碘标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质的碘标记方法有很多种，比如我们常用的化学法或酶促法通过氧化对蛋白质分子进行碘化等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]④[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体是指将[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料与特定抗体结合而成的复合物，这种技术常用于生物医学研究中的荧光标记。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料是从红藻属藻类中提取得到的一种特殊色素，具有较高的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体主要应用在流式细胞术和免疫组化等实验中。在流式细胞术中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞表面标记物的表达情况，如[/font][font=Calibri]CD4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD8[/font][font=宋体]等，可以实现对免疫细胞亚群的研究。在免疫组化和免疫组织化学等实验中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞内标记物的表达，如细胞因子、转录因子等，可以深入研究细胞内信号传导通路及相关的生物学功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体是一种荧光标记的二抗，通常是在单抗上进行标记，具有很强的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体可以与细胞或细胞组分中的特定抗原结合，用于细胞表面标记、蛋白质定量分析、细胞周期和细胞凋亡研究等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑥[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体是将[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体经适当方法连接而成的复合物。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是一种荧光染料，能够与各种抗体蛋白结合，并产生强烈的荧光信号。这种标记技术常用于生物医学研究中的荧光标记，特别是在免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州除了为客户提供抗体开发，还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。更多关于抗体标记及抗体标记方法详情可以参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[b]对细胞进行荧光标记后，有时会出现影响定量实验的三种情况。[/b]一是所有细胞都能标记上荧光，但样品荧光强度过高，甚至饱和。克服方法是降低标记细胞时胞外荧光探针的浓度；或改变标记样品的条件，例如减少标记探针与样品的反应时间。二是出现“环岛效应”或“边缘效应”，表现为即连成片的细胞最外环的边缘的细胞荧光强度明显高于被包围在中间的细胞的荧光强度。克服办法是①在不影响实验的情况下，尽量减低细胞种植密度；②由于染料浓度过高时，更容易产生边缘效应；③适当延长标记时间，以使染料在细胞间达到充分的平衡时间；④染色后，上机前要进行充分洗涤附着探针(不需要洗涤的探针除外

本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。　　1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。　　2．方法以标记蛋白质抗原为例。　　（1）反应液组成：蛋白质2～5μg溶于磷酸缓冲液10～25μl中，加入Na125i 1m Ci(10μl)、乳过氧化物酶溶液25ng(10μl)、H2O2200ng(10μl)；　　（2）在室温保温7min；　　（3）加入H2O2200ng(10μl)；　　（4）过7min再加入H2O2(3μl)；　　（5）保温7min后，加入0.5ml、10mmol/L巯基乙醇以停止反应；　　（6）10min后加入NaI载体溶液1ml ；　　（7）按常规方法分离纯化。　　3．注意事项　　（1）LPO质量好坏，可直接影响标记率，LPO应在使用前新鲜配制，以防酶活性降低。　　（2）LPO用量应小于总蛋白质用量的1%，以减少酶自身碘化而带入的放化杂质。　　（3）碘化反应速率分析表明，酶的催化速度很快。　　（4）碘化反应在pH4.0～8.5较宽范围内均可进行，最适pH值应依据蛋白质本身性质而定。　　（5）H2O2应保持低浓度，如高于0.1mmol/L，对酶的活性将有抑制作用。

[size=3][b][font=宋体][/font][/b][/size][size=3][font=Times New Roman][sup] 11[/sup]C[/font][font=宋体]可通过核反应[/font][font=Times New Roman][sup]14[/sup]N(p,α)[sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]B(p,n)[sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]及[/font][font=Times New Roman][sup]10[/sup]B(d,n)[sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]等生产，其中以核反应[/font][font=Times New Roman][sup]14[/sup]N(p,α)[sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]最为常用，可以生产无载体[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]。回旋加速器通过核反应[/font][font=Times New Roman][sup]14[/sup]N(p,α)[sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]生产的最主要标记原料[/font][font=Times New Roman]([/font][font=宋体]前体[/font][font=Times New Roman])[/font][font=宋体]为[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]CH[sub]4[/sub][/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]。只有[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]可用于直接制备某些有机分子，如[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]通过格氏反应可直接制备心肌代谢显像剂[/font][font=Times New Roman][1-[sup]11[/sup]C][/font][font=宋体]乙酸，若要进一步制备较复杂的正电子发射药物，必须合成各种合适的标记试剂[/font][font=宋体]。[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]标记药物的制备属于同位素标记，不会改变药物分子的性质。[/font][/size]

[font=宋体]抗体标记技术是一种广泛应用于生物学、医学及免疫学等领域的重要技术。它通过将特定的标记物与抗体结合，实现对抗体及其所识别的抗原的检测、定位和定量等操作。本文将介绍抗体标记技术的原理、方法及实际应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、抗体标记技术的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体标记技术是将特定的标记物与抗体结合，使抗体带上示踪基团，从而实现对抗体及其所识别的抗原的检测、定位和定量等操作。根据标记物的性质，抗体标记技术可分为放射性标记、荧光标记、化学发光标记和生物发光标记等。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、抗体标记技术的方法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]放射性标记[/font][font=宋体][font=宋体]放射性标记是将放射性核素与抗体结合，通过放射性衰变产生的射线实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的放射性核素包括[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]14C[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]35S[/font][font=宋体]等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在放射性污染的问题。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光标记[/font][font=宋体][font=宋体]荧光标记是将荧光染料与抗体结合，利用荧光信号实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的荧光染料包括异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）、藻红蛋白（[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]）和罗丹明等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在光漂白和光干扰等问题。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]化学发光标记[/font][font=宋体]化学发光标记是将化学发光剂与抗体结合，利用化学反应产生的光信号实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的化学发光剂包括吖啶酯类、过氧化物酶和碱性磷酸酶等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在化学反应的不稳定性等问题。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生物发光标记[/font][font=宋体]生物发光标记是将生物发光物质与抗体结合，利用生物发光产生的光信号实现对抗体及其所识别的抗原的检测和定量。常用的生物发光物质包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶等。该方法具有灵敏度高、特异性强等优点，但存在生物发光的不稳定性等问题。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、抗体标记技术的应用[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化染色[/font][font=宋体]免疫组化染色是一种用于检测组织中特定抗原的定位和定量技术。通过抗体标记技术将特异性抗体与组织中的抗原结合，再利用组织化学方法显示抗原的位置和分布。该技术可用于诊断疾病、研究组织结构和功能等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术[/font][font=宋体]流式细胞术是一种用于检测细胞表面抗原的表达水平的技术。通过抗体标记技术将特异性抗体与细胞表面抗原结合，再利用流式细胞仪对细胞进行计数和分选。该技术可用于研究细胞分化、免疫应答和肿瘤发生等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫沉淀[/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀是一种用于分离和纯化特异性抗原的技术。通过抗体标记技术将特异性抗体与抗原结合，再利用蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]或蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]等亲和层析方法将抗原与抗体分离。该技术可用于研究抗原的性质、结构和功能等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，抗体标记技术是一种广泛应用于生物学、医学及免疫学等领域的重要技术。它通过将特定的标记物与抗体结合，实现对抗体及其所识别的抗原的检测、定位和定量等操作。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同时义翘神州还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

吖啶酯以及相关化合物通过简单的加入氢氧化钠以及过氧化氢就可以使吖啶酯标记的抗原或抗体发光，这种抗原或抗体采用一种活性标记物[2',6'-dimethyl-4'-(N-succinimidyloxycarbonyl) phenyl 10-methylacridinium-9-carboxylate]来获得。发光过程非常短暂，只是快速的一闪，持续时间小于5s。这么短暂的发光过程给反应的起始与测量带来了一定的限制(Weeks et al．1983，Law et al．1989)。通常是将试剂直接注入放在光度计暗仓内光探测器前面的试管内来检测发光。吖啶酯以及氨甲酰吖啶类似物[acridinium-9-(N-sulronyl) carboxamide](Kinkel et al．1989，Mattingly 1991)是用于免疫分析的主要化学发光标记物(可从Assay Designs lnc，Athens，GA；Behringwerke AG，Marburg，Germany；Ciba Coming Diagnostics，Medfield，MA以及Molecular Light Technology Research Ltd，Cardiff，UK等处获得)。这类标记的检测的最小量为~0.5attomol(0.5X10-18mol)。基于杂交保护的非分离DNA探针分析(nonseparation DNA probe assay)方法已被设计出来(Arnold et al．1989)。这种类型的分析无需将结合与未结合的标记物分开，因而分析可方便的一步完成。这种杂交保护分析利用已与互补DNA杂交的吖啶酯标记探针与溶液中游离探针之间水解速率相差百万倍的特性，在pH7.6的硼酸缓冲液中破坏游离探针的化学发光特性，从而使水解后的化学发光仅仅来源于已杂交的标记探针(可从Gen-Probe，San Diego，CA获得)。 鲁米诺及其类似物鲁米诺(Luminol)是第一个用于免疫学分析标记的化学发光化合物(Schroeder et al．1978)。在合适的催化剂(辣根过氧化物酶、微过氧化物酶(microperoxidase)、铁氰化物)存在的情况下，通过加入氧化剂(如：过氧化氢)可导致发光。然而，通过鲁米诺的5-氨基进行标记会使发光量减少10倍。异鲁米诺，一种鲁米诺6氨基异构体，其发光效率较鲁米诺低(量子产额0.1％)，但当通过第6位进行标记时可使发光量增加10倍。因而，这种化合物以及其氨基取代类似物，比如ABEI(N-(4-aminobutyl)-N-ethylisoluminol)，已在免疫分析应用中成为最受欢迎的标记物(Kohen et al．1979；Pazzagli et al．1982)。吡啶哒嗪(Pyridopyridazines)代表另一类化学发光化合物。早期的数据显示这些化合物，尤其是8-氨基-5-氯-7-苯基和8-羟基-7苯基衍生物，可作为检测过氧化物酶标记的标记和协同底物(co-substrates)。与鲁米诺相比，这类化合物具有很强的化学发光特性(约为50倍)(Masuya et al．1992)。 碱性磷酸酶磷酸金刚烷基1,2-二氧杂环丁烷(如：AMPPD；disodium 3-(4-methoxyspiro[1,2-dioxetane-3,2'-tricyclo[3.3.13,7]decan]-4-yl)-phenylphosphate)以及5-位取代类似物(如：5-choro：CSPD；可从Tropix Inc获得)已成为碱性磷酸酶标记的最为广泛使用的化学发光底物(Bronstein et al．1989，1990，1991；Schaap et al．1989)。这种酶的检测极限是1 zeptomole(10-21摩尔)并且其发光持续时间超长(1h)，因而特别适合与基于膜的分析。这个反应的发光强度可被尼龙膜表面以及特定的多聚物增强，如：聚氯苄(苄基二甲基铵)乙烯(polyvinylbenzyl(benzyldimethylammonium)chloride)。对尼龙膜来说，这种增强作用是用于其疏水性基团对去磷酸化的反应中间体的螯合作用；从而稳定和减少中间体的非发光性降解。碱性磷酸酶标记的化学发光分析目前被广泛地用于印迹试验以及DNA序列测定(Beck and Koster 1990，Tizard et al．1990)。 beta-半乳糖苷酶AMPGD(Adamantyl 1,2-dioxetane aryl galactoside)做为这种酶的底物现已越来越流行。这种酶从芳香环的第3位裂解半乳糖苷基团产生一种苯氧化物中间体，这种中间体的降解可导致发光。对这种酶采用这种分析方法的检测极限为30zeptomol。 辣根过氧化物酶鲁米诺以及其他环状二酰基酰肼(cyclic diacylhydrazides)化合物是辣根过氧化物酶的化学发光协同底物。采用鲁米诺、过氧化氢，以及一种增效剂(如：4-碘苯酚或4-羟基肉桂酸)，辣根过氧化物酶的碱性同工酶可被检测出的最小量96h)。 葡萄糖氧化酶目前已经发展了几种用于葡萄糖氧化酶的法学发光分析。异鲁米诺或鲁米诺在微过氧化物酶催化剂存在的情况下可用于分析葡萄糖氧化酶与葡萄糖反应所产生的过氧化物(Sekiya et al．1991)；另一种方法是采用化学发光荧光基团致敏的bis(2,4,6-trichlorophenyl)oxalate反应来检测(Arakawa et al．1982)。 商业试剂、试剂盒及光度计对于可获得的化学发光试剂和试剂盒以及用于发光测定的光度计的全面的评述已有发表(请参见Stanley 1992，1993)。一系列关于化学发光在基础及应用领域的当前进展的资料汇编也同样可以得到(请参见Kricka and Stanley 1992，Kricka et al．1993，Wilkinson 1998)。化学发光可采用一系列的检测设备来进行检测，包括光电倍增管(采用光子计数或灵敏度较低的光子流模式(photon current mode))、硅光电二级管、CCD照相(Wick 1989)摄影或胶片摄影(Kricka and Thorpe 1986)。CCD照相由于是检测二维光源(如膜以及96孔微板)的方便且灵敏的方法而被广泛使用。除此以外，它还能容易的监测发光动力学、可通过图像增强以及背景减影来改善结果质量。

有人问到 NHS化的染料蛋白标记我有跟帖简单回答 为了更清楚说明 并让更多人了解 NHS活化的荧光探针标记反应鉴于 荧光分析于毛细管电泳联用的广阔 前景单独发个主题帖 这大都是我的经验和理解 本人不是有机专业 有关合成方面 说错的地方还请拍砖 NHS化的荧光染料 是指 N-羟基琥珀酰亚胺 酯化的荧光染料标记 即N上的羟基与荧光探针上的羧基酯化反应[IMG]http://www.sigmaaldrich.com/structureimages/16/mfcd00005516.gif[/IMG]这些荧光探针与蛋白或者小分子胺偶联的原理很简单 都是 羧基与胺基反应生成酰胺键但是 一般的羧酸更倾向于 与胺基形成 铵盐因此引入个较好的离去基团就可以使羧基活化 促进羧基与胺基的共价键形成那么琥珀酰就是个很好的离去基团将荧光探针 用NHS进行酯化后 既可以相对稳定的保存，也可以直接用于与胺基分子的偶联，降低反应动力学壁垒与蛋白分子 或是 小分子胺 的偶联，原理相同 都是最终NHS基团离去，剩下的活化羧基与蛋白的胺基反应。在了解了原理的基础上，在进行NHS酯化的荧光探针标记策略上，应当着重注意以下几点：不用过多考虑蛋白的等电点，但需记住 胺基作为亲核基团的这个反应一般在 弱碱条件（pH=8~9）下进行 [B]！[/B]考虑到蛋白的特殊性 配制缓冲液注意需要避免 1）极端pH （2）重金属污染 和（3）过大的离子强度 导致的蛋白变性 [B] ！[/B]考虑到NHS酯化物的活泼程度，NHS化的荧光染料需要现配现加，不宜配制后静置过久。 [B] ！[/B]考虑到 反应原理 ，选择缓冲液和反应容器 需要严格避免胺基或者氨基污染，避免与蛋白分子竞争反应掉荧光染料。 e.g. 常用缓冲液 有 borate buffer，NaHCO3，磷酸盐等等此外，还需注意： A.一般 的protocol都是针对 抗体的，抗体是比较 坚强的蛋白 B.虽说暴露在蛋白表面所有的侧链胺基都有可能跟羧基反应 但是 反应动力学最大的还是 Lys的那个长侧链上的e-伯胺基，因此富含lys的蛋白偶联有福啦。 C.一般来说，反应活性 伯胺＞仲胺 D.别忘了 缓冲液选择也要考虑荧光探针自身特性，如果荧光探针自己带一个 很兴奋的胺基，那么由于自体的二聚反应，这个探针用于标记可能会效率很低当然NHS酯化的商品荧光探针有限，也可以用直接用 带油羧基的荧光探针偶联 蛋白，这时一般考虑使用 NHS EDC活化体系其原理就是 EDC先与 羧基形成个 不稳定的活化中间体然后 NHS接力 替代EDC形成 较稳定的 羧基活化体接下来的 就和上述原理一样了至于 标记上的蛋白 和未标记探针的蛋白 相互分离 每家公司各有法宝 我用过 BD公司的葡聚糖柱洗脱回收 也用CZE分离过小分子胺的标记产物其他更先进的方法就要看 论坛各位大神们的功夫啦附件上传的是 Pierce的NHS化荧光素的protocol 以及 Dynal beads羧基化表面偶联抗体的protocol 本文的 参考资料 有：http://en.wikipedia.org/wiki/N-hydroxysuccinimide[~185396~][~185397~]

[font=宋体]什么是抗体结合？抗体结合也被称为[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]，是一种可将特定标记物共价连接到抗体分子上的抗体修饰技术。这些标记抗体可用于从细胞，组织，或者整个个体的混合物中分离和纯化的目的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）是最常见的抗体酶标记类型。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]上仅有[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]等，均可用于标记抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]标记方法：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是[/font][font=Calibri]BNHS[/font][font=宋体]；对于偏酸性的抗原，标记时多采用[/font][font=Calibri]BHZ[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）标记酶：以生物素标记[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]为例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]标记注意事项：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]待标记物的蛋白浓度不能过低，如若浓度过低需经超滤浓缩等手段提高浓度至[/font][font=Calibri]0.1mg/mL[/font][font=宋体]以上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]一个蛋白质可能被多个生物素标记，标记时，生物素与待标记物应有合适的比例，确保标记后不影响待标记物的活性。推荐生物素：抗原蛋白比例为[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]，生物素：抗体比例为[/font][font=Calibri]5~20[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]或根据标记试剂盒说明书推荐比例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]为减少空间位阻影响，基于检测灵敏度特异性等要求，可在生物素与被标记物之间加入交联臂结构。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]如果偶联基团为氨基，待标记物的系统不得含有游离的氨基（[/font][font=Calibri]Tris,[/font][font=宋体]氨基酸）、载体蛋白（[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]）或者其他干扰物，若有干扰物需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净，若采用其他基团偶联试剂，待标记物系统亦不能有含对应的游离基团的物质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]如果待标记物为分子量较小的物质，在纯化过程中注意超滤管、脱盐柱、透析袋的截留分子量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6. [/font][font=宋体]标记反应后的体积量至少在[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]以上，以达到纯化时的最小上样量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7. [/font][font=宋体]标记反应完成后（氨基偶联体系），可在体系中加入适量的含游离含氨基小分子物质，中和游离的生物素活化试剂，提高纯化效率，减少后续反应的假阳性和高背景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8. [/font][font=宋体]纯化后的标记蛋白可采用[/font][font=Calibri]A280[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]法测定蛋白含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]9. [/font][font=宋体]标记纯化后的蛋白可根据蛋白性质进行分装长期保存，减少冻融次数。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多抗体标记详情可以参考：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]抗体是生物体内重要的免疫分子，它们能够识别并攻击外部入侵者，如病毒和细菌。在医学、生物学和免疫学等领域，抗体标记与检测技术广泛应用于疾病诊断、治疗监测、药物研发等方面。本文将详细介绍[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]与检测的种类和方法，包括直接标记、间接标记、免疫荧光、酶联免疫吸附试验等。通过对这些技术的了解和应用，我们可以更好地利用抗体进行疾病诊断和治疗监测，提高医疗水平和治疗效果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]抗体与标记物[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体广泛应用于多种免疫分析中，用于检测和定量抗原。直接识别抗原的抗体被称为一抗（[/font][font=Calibri]primary antibody[/font][font=宋体]），赋予检测的特异性。同时，在检测中还需加入标记物（详见后文“间接标记法 [/font][font=Calibri]Vs.[/font][font=宋体]直接标记法”），标记物的加入赋予可检测性。表[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]中列出了一些常用的免疫分析技术，及可能使用到的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]免疫分析方法[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]标记物[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]免疫印迹[/font][font=微软雅黑](WB)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶[/font][font=微软雅黑](通常为辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP)[/font][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶联免疫吸附试验[/font][font=微软雅黑](ELISA)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶、生物素[/font][font=微软雅黑]/链亲和素[/font][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]免疫荧光[/font][font=微软雅黑](Immunofluorescence)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]荧光染料[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]免疫组化[/font][font=微软雅黑](Immunohistochemistry)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶、生物素[/font][font=微软雅黑]/链亲和素[/font][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]流式细胞术[/font][font=微软雅黑](Flow Cytometry)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]荧光蛋白或染料、串联染料[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]直接检测法 [/font][font=Calibri]Vs.[/font][font=宋体]间接检测法[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]检测技术可分为两大类：直接法和间接法。对于直接检测法，标记物通过共价键连接到一抗上。而对于间接检测法，标记物则是共价连接到与一抗特异性结合的二抗上。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在间接法中，检测由两个部分组成：第一步，用未标记的一抗进行孵育（通常[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]小时），[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]若存在抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]部分抗体与抗原结合，未结合的抗体则通过洗涤去掉，然后加入标记二抗。再次孵育（通常[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]小时），洗涤去掉未结合的二抗。然后对结合在抗体上的标记物进行量化。若有抗原存在时，标记物通常导致有色物质的生成或某一个波长的发射光量增加。当无抗原存在时，则无一抗的结合，也无二抗试剂的结合，因此无信号产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在直接法中，标记物直接与一抗共价结合，因此仅需一轮孵育及洗涤步骤，而间接法则需要两轮孵育及洗涤步骤。直接法简化了试验的流程，但检测的灵活性降低。下表列举出了直接法[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]间接法的主要利弊。[/font][/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]方法[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]优点[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]缺点[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]直接法[/font][/td][td][font=微软雅黑]仅需使用一抗，检测快速[/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]无二抗的非特异性结合[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]由于标记可能导致一抗的免疫反应性降低[/font][font=微软雅黑] [/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]信号放大作用较弱[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]间接法[/font][/td][td][font=微软雅黑]一抗含有多个标记，二抗可结合的表位，因而灵敏度升高，信号放大作用较强。[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]二抗可能发生非特异性结合[/font][font=微软雅黑] [/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]孵育及洗涤步骤增多[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]尽管直接标记法具有诸多潜在的优点，但为何如今众多的免疫分析仍采用间接法原理呢[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]无疑，最主要的原因就是直接标记一抗相对较复杂，确实从历来经验看，抗体标记都是由那些具有化学修饰技术的专业人员来完成的。在间接法中二抗试剂所起的信号放大效应究竟如何呢？是否直接标记法所产生的信号就很弱？其实在很多情况下，间接法的放大效应是让人产生错觉的。在与二抗试剂的孵育过程及洗涤过程中，一些一抗会与抗原发生解离，因此真正被放大的只是逐渐减少的一抗的量。其实在很多情况下，直接法也可获得与间接法相同甚至更好的结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]常见的抗体标记方法[/font][/b][/font][font=宋体]和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]（琥珀酰亚胺）酯法[/font][/font][font=宋体]应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]吉妥珠单抗（[/font][font=Calibri]Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg[/font][font=宋体]）是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物（[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]）。半合成的卡奇霉素衍生物具有[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]酯，以便将卡奇霉素与人源化[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，[/font][font=Calibri]Mylotarg[/font][font=宋体]已于[/font][font=Calibri]2010[/font][font=宋体]年退市。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异硫氰酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③碳二亚胺法[/font][font=宋体][font=宋体]碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。最常用的碳二亚胺为[/font][font=Calibri]EDC[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该方法操作简单，但与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]一样，[/font][font=Calibri]EDS[/font][font=宋体]具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④高碘酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法可用于制备特异性的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统 [/font][font=Calibri](biotin-avidin system[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]BAS)[/font][font=宋体]，是[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点，两者的亲和常数（[/font][font=Calibri]K=1015 mol/L[/font][font=宋体]）比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体（[/font][font=Calibri]K=105[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1011 mol/L[/font][font=宋体]）至少高[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万倍，是目前已知强度最高的非共价作用，这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素蛋白标记常见问题：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、什么是生物素标记蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在生物化学中，生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素亲和常数至少比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体高一万倍[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此，生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现，也为类似于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验简化了流程，提高了效率。此外，由于生物素的小尺寸（[/font][font=Calibri]MW = 244.31g / mol[/font][font=宋体]），不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、生物素标记蛋白有哪些应用？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析，将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，[/font] [font=宋体]改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢？这需要非常严苛的条件（例如，[/font][font=Calibri]pH=1.5[/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]GuHCl[/font][font=宋体]），这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质，最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密，但是在降低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]以后，亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低[/font][font=Calibri]pH([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]pH=4)[/font][font=宋体]从柱子上释放。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测中的应用：在常规[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]原理的基础上，结合生物素[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]与亲和素[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如抗体等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]western[/font][font=宋体]印迹和其他免疫分析方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记注意事项：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]用量比[/font][font=Calibri](mg/mg)[/font][font=宋体]宜为[/font][font=Calibri]2:1, IgG[/font][font=宋体]应用浓度[/font][font=Calibri]0.5~5[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/ml [/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ag[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ab[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font]

兄弟姐妹们，有没有做反应机理研究的伙伴，想请教一下，做反应机理一定要用同位素标记吗，还有没有可以验证反应途径的方法。谢谢谢谢！！

[font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-Tag[/font][font=宋体]生物素标记蛋白：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]重组蛋白融合一个额外的[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸序列，即[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]，通常连接至蛋白的[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]末端。 [/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]肽段被大肠杆菌生物素连接酶[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]所识别，[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]连接酶通过酶促反应将生物素连接到[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]序列内的单个赖氨酸残基。因此，[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签蛋白以特定位点的方式进行生物素化，从而实现标记均一。 这使固定在亲和素包被表面的蛋白方向具有一致性，并且由于[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签位于蛋白的末端，因此对蛋白活性的影响通常很小，有助于保持生物素化的蛋白与未标记的蛋白保持相同的特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素与链霉亲和素[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]亲和素（[/font][font=Calibri]SA[/font][font=宋体]）之间的强非共价相互作用，具有高灵敏度和高特异性。义翘神州开发了多种[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]生物素标记的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势：[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性，经[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BLI[/font][font=宋体]等验证[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 多种属，覆盖细胞治疗、抗体、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体等热门靶点[/font][/font][font=宋体]? 高批间一致性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]化学标记生物素蛋白：[/font][font=宋体][font=宋体]化学标记法，是将蛋白[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合，通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、[/font][font=Calibri]tag free[/font][font=宋体]等特点，是常用的生物学方法之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势：[/font][font=宋体]? 高信号强度，每个蛋白分子通常平均含有多个生物素，有助于对其检测。[/font][font=宋体]? 标记方法简单，检测灵敏度高。[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]等验证，批间一致性高[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记蛋白应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、用于生物素标记的三种天然产物分子探针的设计与合成研究[/font][/font][font=宋体]从中药中提取分离得到的天然产物具有结构多样、药理作用广泛的特点，常被用来作为先导化合物开发新药，因此需要对其具体作用机制进行研究。天然产物药理作用广泛对应着多靶点的特性，但其靶标蛋白的难以确定也阻碍了人们对其的进一步研究与开发。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]基于亲和性蛋白组学分析方法（[/font][font=Calibri]Affinity-based Protein Profiling,ABPP[/font][font=宋体]）是基于活性小分子与靶标蛋白之间的亲和作用，在活性小分子上引入报告基团，利用亲和层析技术可以将靶标蛋白进行分离的一种方法，其作为一种十分有效的工具被广泛应用于天然产物靶标蛋白的发现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选取三个从中药中提取分离得到的活性天然小分子，设计合成相应的小分子探针，旨在为它们靶标蛋白的发现以及作用机制的研究提供一个有效的工具，具体内容如下：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、对目前主要的用于天然小分子的靶标蛋白鉴定方法进行了介绍，且着重介绍了[/font][font=Calibri]ABPP[/font][font=宋体]方法及其在天然产物靶标蛋白鉴定的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、以薯蓣皂苷元和生物素为原料，经过酯化、酰胺化、取代、水解反应等步骤分别合成含有长臂亲脂性链和亲水性链的薯蓣皂苷元生物素标记探针[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8,[/font][font=宋体]并以[/font][font=Calibri]MTT[/font][font=宋体]法对其进行抗肿瘤活性评价。实验得到的探针分子、重要中间体用[/font][font=Calibri]MS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1H-NMR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]13C-NMR[/font][font=宋体]表征，确认所得化合物结构与目标化合物一致。细胞活性实验结果表明合成的探针分子[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]具有与薯蓣皂苷元相当的抗肿瘤活性，且对探针分子标记的靶标蛋白进行电泳分析，发现了三条薯蓣皂苷元可能特异性作用的蛋白条带，这些结果都为后续薯蓣皂苷元抗肿瘤靶标蛋白的发现奠定基础。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font]

[b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]在生物学和医学的研究中，抗体标记技术已成为一种重要的研究手段。其中，生物素标记抗体凭借其独特的优势，在许多领域中得到了广泛应用。本文将详细介绍生物素标记抗体的原理、应用及发展前景。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、生物素标记抗体的原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素，又称维生素[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]，是一种存在于自然界中的小分子有机物质。它可以通过化学反应与抗体结合，生成生物素标记抗体。这一过程通常是在抗体的氨基基团上连接一个生物素衍生物，形成共价键。这种连接方式不会改变抗体的免疫活性，同时使得生物素标记抗体能够与相应的抗原结合。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]三、生物素标记抗体的应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫分析：生物素标记抗体在免疫分析中发挥了重要作用。通过将生物素标记抗体与相应的抗原结合，可以实现对抗原的灵敏检测。这种方法被广泛应用于生物学、医学及食品安全等领域。[/font][font=宋体]蛋白质组学研究：在蛋白质组学研究中，生物素标记抗体可用于蛋白质的分离和纯化。通过生物素标记抗体与抗原的特异性结合，可以从复杂的蛋白质混合物中分离出目标蛋白质。[/font][font=宋体]细胞生物学研究：生物素标记抗体在细胞生物学研究中具有广泛的应用价值。例如，通过生物素标记抗体追踪细胞内蛋白质的分布和动态变化，有助于深入了解细胞的生命活动。[/font][font=宋体]疾病诊断与治疗：生物素标记抗体在疾病诊断和治疗中也发挥了重要作用。例如，针对癌症的免疫治疗中，生物素标记抗体可以用于识别和攻击癌细胞，从而达到治疗目的。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、发展前景[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]随着生物学和医学技术的不断进步，生物素标记抗体的应用前景日益广阔。未来，随着技术的不断创新和完善，生物素标记抗体的性能将得到进一步提升，从而推动其在更多领域中的应用。同时，随着人类对生命现象认识的深入，将有更多具有挑战性的研究课题需要借助生物素标记抗体这一强大工具。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]五、结语[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记抗体作为一种重要的研究手段，在生物学、医学及其他相关领域中发挥着不可或缺的作用。随着技术的不断进步和应用领域的拓展，我们有理由相信，生物素标记抗体的未来将更加光明，为人类探索生命奥秘提供更多可能性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]相关产品，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

合肥国肽生物科技有限公司（简称：国肽生物TM）成立于2014年，是一家专业从事多肽产品的研发、生产和销售以及多肽技术转让的高新技术企业。BP公司成立之初，便成功收购了国内几家多肽、抗体公司，是目前国内的专业多肽合成、抗体制备、蛋白表达的规模型生产企业。国肽生物专长于荧光标记肽、同位素标记肽、人工胰岛素、药物肽、化妆品肽、长肽困难肽等产品的合成与研发，致力于学术水平的科研提升，搭建学术交流平台，促进前沿、专业的学术知识推广，推动多肽在生物医学材料等领域的研究与应用。公司产品广泛应用于药物研发，抗体的制备（包括单抗与双抗），荧光分子探针的构建以及细胞透膜研究、活体成像、新型材料研发和质谱分析等研究领域国肽生物按照客户定制要求供应高品质普通多肽。我们拥有成熟的多肽合成纯化方法，利用SPPS方法和液相合成方法为客户提供高品质多肽。我们的服务特点是:1. 纯度：我们提供粗品肽和纯度纯度为70%，75%，80%,85%,90%,95%,98%,99%的纯品多肽。2.脱盐和转盐：根据客户要求，我们可以对多肽进行脱TFA盐处理，也可以转为醋酸盐。3.交货期限：30个氨基酸之内，一般2-3周，最快1-2周。4.质量控制：每条多肽都免费提供合格的HPLC，MS和COA文件。5.售后服务：1-2周内可以提出异议，我们免费复测，不合格免费退货，1-3个月内使用不合格可以免费提供复测，样品免费保存3个月。国肽生物根据客户要求，供应各种修饰型多肽。1.磷酸化的Ser、Tyr和Thr修饰的多肽：我们提供单磷酸化和多磷酸化多肽服务，目前我们已经能够提供四个磷酸化位点修饰的多肽。2.5(6)-FAM，FITC，CY5，RhodamineB，PNA，EDNAS/dabcyl等荧光标记修饰的多肽：荧光标记修饰多肽技术是我们国肽生物的代表性多肽合成技术，我们的这项技术已经相当成熟。3.生物素Biotin，Lys(Biotin)修饰的多肽：生物素是维生素B2的组成部分，Biotin，Lys(Biotin)修饰的多肽也是客户经常定制的多肽。我们提供生物素修饰的多肽已经有将近100%的成功率。4.含有一对或多对二硫键修饰的多肽：二硫键在蛋白质的结构稳定中起到重要作用，目前我们已经能够为客户提供四对二硫键修饰的多肽。5.含有同位素C13，N15修饰的多肽：同位素标记的多肽主要应用于医学和生物学领域，通常价格较高，为了满足客户需要，我们接受微克级的同位素多肽定制。6.含有特殊氨基酸修饰的多肽：例如，D型氨基酸，氨基酸衍生物，脂肪族羧酸等等，都在我们接受的定制范围内。国肽生物提供150个氨基酸以内的长肽合成服务。多肽合成过程中，肽链过长时，经常会出现缺残基，氨基酸缩合困难等情况，基于这些现象，我们开发了三种有效提高反应成功率的方案：1. 微波合成法：对于合成过程中出现的一些难以缩合的氨基酸，我们采用微波法进行合成，该方法效果显著，并且大大缩短了反应时间。2. 片段合成法：当某些多肽用常规合成方法合成困难，我们也会采用将多肽中某一段的某几个氨基酸缩合之后作为一个整体缩合到肽链上去，这种方法也能够解决许多合成中存在的问题。3.酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是将固相合成的 N末端Cys 多肽和 C末端多肽酰肼之间的化学选择性反应形成酰胺键而实现多肽的连接，该方法根据肽链中Cys的位置，将整条肽链分成多条序列分别合成，最终经过液相缩合反应得到目标肽，显著地提高了最终产物纯度，广泛适用于含有Cys的长链多肽的合成。国肽生物拥有成熟的长肽合成工艺，能够根据客户定制的多肽序列，快速有效地设计合成方案并迅速开始合成，更快更好的为客户提供所需的服务是我们不变的坚持。详情请咨询合肥国肽生物www.bankpeptide.com

大家好，我最近做了同位素标记反应，用D2O代替H2O 想证明水中的H转到产物中，现在通过质谱看出产物中确实有D，但具体在哪个位置不确定，想请教大家，用核磁的H谱可不可以确定D的位置，望大家不吝赐教，谢谢

[size=3][b][font=宋体][/font][/b][/size] [size=3][font=宋体]在合成放射性示踪剂时，应考虑正电子核素的化学形式。有一些标记物如[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]标记的[/font][font=Times New Roman]CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]或[/font][font=Times New Roman]CO[/font][font=宋体]等，在轰击结束（[/font][font=Times New Roman]end of bombardment EOB[/font][font=宋体]）极短的时间内可以在线生产而不需要进行前体的转化过程，其产物可直接用于病人进行[/font][font=Times New Roman]PET[/font][font=宋体]显像。然而，目前开发和应用的大多数示踪剂需要进行特殊的有机合成，对此，将[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]转化为适当的标记前体是极其重要的步骤，如将在线产生的[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]或[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CO[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-HCN[/font][font=宋体]经转化为[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CH[sub]3[/sub]I[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-[/font][font=宋体]乙酸盐，可进行多种[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]标记化合物的合成[/font][font=宋体]。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]由于半衰期很短，因此要求合成时间应尽可能地短。目前，获得的[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C[/font][font=宋体]大多是以[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]或[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CH[sub]4[/sub][/font][font=宋体]形式存在，而[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CH[sub]4[/sub][/font][font=宋体]的反应活性不强，需要将其转化为具有较高反应活性且易于快速高效合成的标记前体试剂。这类标记试剂较多，以[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CH[sub]3[/sub]I[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-HCN[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CH[sub]3[/sub]NO[sub]2[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-COCl[sub]2[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CO(NH[sub]2[/sub])[sub]2[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-C[sub]2[/sub]H[sub]2[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-CH[sub]3[/sub]NH[sub]2[/sub][/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman][sup]11[/sup]C-HCO[/font][font=宋体]等较为常用。[/font][/size]

1．概述环丙沙星酶联免疫反应测试盒是利用竞争性的酶联反应原理，用于饲料、肉类组织（牛肉、鸡肉和猪肉）、鱼虾、牛奶、组织、血清和尿液中环丙沙星残留的定量检测。该试剂盒具有以下特点：Ø 快速，高回收率(75-95%)，多种样品的低成本提取方法。Ø 高灵敏度（0.35ng/g或ppb），低检测下限（饲料有机提取法0.525ng/g或ppb）。Ø 高重复性。Ø 检测过程只需要不到1.5小时。 2．试剂盒原理环丙沙星酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有环丙沙星抗体的药物已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同HRP酶标记物共同被添加到板孔中。如果样品中含有环丙沙星，会竞争包被抗体，抑制HRP酶标记物与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中药物的浓度成反比。

1．概述 REAGEN™ 萘啶酸酶联免疫反应测试盒是利用竞争性的酶联反应原理，用于鱼、虾和肉中萘啶酸残留的定量检测。为食品加工厂和政府监督管理部门提供了检测限为5ppb的快速检测技术。满足消费者对食品安全问题的需求。该试剂盒有以下特点：Ø 快速鱼虾肉提取方法且回收率达到75-105%。Ø 快速的检测（在不考虑样品数量的情况下只需50min）。Ø 高重现性。 2．试剂盒原理REAGEN™萘啶酸酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有萘啶酸抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同萘啶酸酶标记物共同被添加到板孔中。如果样品中含有药物，会竞争萘啶酸抗体，抑制酶标记物与板上包被的萘啶酸抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中萘啶酸的浓度成反比。