肝癌检测

原发性肝癌是全球常见的五大恶性肿瘤之一，占肿瘤致死原因的第3位。全世界每年新发肝癌患者约六十多万，其中一半以上在中国，原因在于我国乙肝患病人数多，丙型肝炎的发病率近年亦有明显的上升趋势，肝癌多在乙肝、丙肝等慢性肝炎后肝硬化的基础上形成，是我国发病率高的一个重要原因。由于处于早中期的肝癌患者无明显的临床表现，不易及时发现，已经发现多数属于中晚期，给肝癌治疗带来较大难度。肝癌当今治疗提倡外科切除、介入栓塞、消融、生物治疗（分子靶向治疗）、免疫治疗等多学科应用、综合治疗方式。而生物技术进步，生物靶向药物（单克隆抗体药物）的研究和应用，一直是肝癌治疗和攻克的新亮点，受到高度重视和关注。生物单抗靶向治疗因作用靶点特异性高、毒性小、副作用相对较小等优点，已成为抗癌领域的重要药物类型，其巨大的市场及前景使得国际大制药公司纷纷投入巨资研制和生产，罗氏、诺华、强生、拜耳、默沙东等均有重要抗体药物上榜，罗氏公司的阿瓦斯汀（贝伐珠单抗）、利妥昔单抗（美罗华）、曲妥珠单抗（赫赛汀）是抗癌单抗的“重磅级炸弹”，2011年销售额分别是58亿美元、66亿美元、48.8亿美元。国内上市用于肝癌治疗的靶向药物有华神生物公司生产的利卡汀（碘美妥昔单抗注射液）。利卡汀是全球首个用于原发性肝细胞肝癌的单抗药物，于2007年上市，已在全国许多医院进行临床应用，资料显示，改善肝癌患者生存质量、延长患者生存期能够使患者获益，靶向性和内照射作用机制是利卡汀的突出特点。

以下转自http://gi.cmt.com.cn/detail/253665.html基于核酸适配子毛细管电泳分析技术的肝癌诊断新方法 目的 在前期工作中我们筛选出一批针对肝癌血清特异的核酸适配子。毛细管电泳是一种微量分析技术。本研究旨在建立一种基于毛细管电泳技术的核酸适配子与血清结合程度的分析方法，为适配子在肝癌诊断中的应用提供一种简便有效的新方法。　　方法 人工合成5’端FAM标记的核酸适配子；将等差梯度浓度的适配子溶液进行毛细管电泳，以确定适配子的合适用量；将合适用量的适配子与等差梯度体积的肝癌混合血清孵育后进行毛细管电泳，以确定血清标本的合适用量；以适配子的合适用量为中心，将梯度浓度的适配子分别与合适用量的肝癌混合血清和正常混合血清孵育及检测，确定最佳的适配子用量；重复性试验分析毛细管电泳检测适配子与血清结合程度的精确性；以最佳的适配子用量与血清用量为条件进行临床标本检测，评价其对肝癌的诊断价值。　　结果 本研究以适配子AP-HCS-9-90为模型，确定的最佳适配子用量为0.9pmol，合适的血清标本用量为1ml，毛细管电泳检测适配子与血清结合程度的重复性良好。以上述优化条件检测了41例肝癌血清标本和34例正常血清标本。适配子与血清孵育后毛细管电泳可显示A、B、C三个峰。肝癌血清标本的A、B、C峰面积分别为77949±158035、1328940±1882435、49909±9481，正常血清标本的A、B、C峰面积分别为15273±21043、377308±680039、50178±6868，两组间以B峰面积差异具有极显著性意义（t=3.009， P=0.004），A峰面差异有显著性意义（t=2.513， P=0.016），C峰面积差异无统计学意义（t=0.138， P=0.891）。B峰的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.869，诊断肝癌的敏感度为82.9%，特异度为79.4%，准确度分别为81.3%。多因素Logistic回归分析建立诊断模型，诊断价值可进一步提高，AUC为0.885，诊断肝癌的敏感度为90.2%，特异度为82.4%，准确度为86.7%。　　结论 成功创建起基于毛细管电泳技术的核酸适配子与血清结合程度的检测方法，并在基于核酸适配子的肝癌诊断中具有良好的价值。

肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是发病率高、治疗困难、死亡率高的恶性肿瘤，全球每年有1000000人死于肝癌。我国肝癌的死亡率在所有恶性肿瘤中居第二位，年死于肝癌的人数占全世界肝癌年死亡总数的53%。虽然肝癌的诊断和治疗有了长足的进步，但生存率在总体水平上变化不是很明显。迄今已建立的一系列人肝癌细胞系（cell line）和人肝癌细胞系的动物模型，为肝癌的发病机理和治疗研究奠定了良好的基础。咱们坛子里是否有做这方面工作的战友，分享一下相关文献。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=122088]人肝癌细胞系研究进展[/url]

我国是肝癌大国，每年死于肝癌的人约有11万，占全世界肝癌死亡人数的45%。在福建人高发的恶性肿瘤当中，肝癌排在前三位，而且这种肿瘤“重男轻女”的现象相当严重。福建省肿瘤医院腹外科陈夏主任医师说，大家都知道黄曲霉素容易致癌，可不知道，平时吃的花生，如果是发了芽的，那危险性要高得多。发了芽的花生最致癌福建省肿瘤医院腹外科陈夏主任医师告诉记者，很多人知道黄曲霉素，但不知道它究竟是什么，简单地说，它是目前发现最强的致癌物质之一。“其实黄曲霉素最主要是存在土壤里，比如农作物在含有黄曲霉素的土壤里生长，那么很容易受到污染。”陈夏主任说，受黄曲霉素污染的花生、花生油、玉米、大米、棉籽最为常见，其中以发了芽的花生毒性最强。在干果类食品如胡桃、杏仁、榛子、干辣椒中，在动物性食品如肝、咸鱼中，以及在奶和奶制品中也曾发现过黄曲霉素。南京军区福州总医院肿瘤科陈樟树副主任医师表示，除此之外，有裂缝的甘蔗等都含有较高的黄曲霉素。同安为啥成肝癌高发区“闽南地区有些地方喜欢用发霉的花生压榨花生油，长期食用这样的花生油，也被认为是肝癌高发的原因之一。”陈樟树副主任说，比如厦门同安区就是我国肝癌高发区。另外，莆田、福清、长乐、平潭等地，也是我省肝癌高发地区，这与长期食用腌制品有关。“福州地区，长乐和平潭的肝癌患者比例最高。”陈夏主任说，来就诊的患者当中，能够手术的人少之又少，因为基本上都已转移。陈夏主任说，患肝癌的生存率在众多肿瘤当中，是以月来计算的，因为它的进展速度比较快，另外还跟患者及家属的观念有很大的关系。什么东西让肝癌“重男轻女”？陈樟树副主任表示，肝癌好发于中年人，现在30多岁、40多岁的肝癌患者很常见，男性患者明显比女性多。在福州总医院肿瘤科门诊上，有60%-70%的肝癌患者都是男性。肝癌好发于男性，可能与几个因素有关。陈樟树副主任认为，主要是男女生活习性的差别比较大，比如男性有饮酒习惯的人比较多，而且经常参加社会活动，感染肝炎病毒的机会比较多。就拿许多有饮酒习惯的男性来说，如果过度饮酒就容易患上酒精性脂肪肝，酒精性脂肪肝发展成肝硬化后，就容易发生癌变形成肝癌了。而意大利也有研究结果显示，无论男性还是女性，每日饮酒超过60克，患肝癌的危险性就会大大增加。花生因含有较多的蛋白质、脂肪、多种维生素以及铁、磷、钙等有机盐而受到人们普遍喜爱，成为一种物美价廉的大众化食品。但是由于我省处于江淮地带，属高湿、高温地区，空气湿度大，各种食物极易长出一种被称为黄曲霉的霉菌，而花生收获季节正处于多雨季节，空气湿度较大，起出的花生在运输、贮存过程中极易霉变，生出一种叫做黄曲霉的霉菌，这是一种毒性物质，主要污染糖、油及其制品，如花生、玉米、棉籽等，黄曲霉素的毒性是滴滴涕的６０倍、砒霜的６８倍、氰化钾的１０倍，它是目前所发现的最强的化学致癌物质，常吃霉变的花生能引发肝癌。为此特提醒喜食花生者切记：霉变花生不能吃。从菜市场买回的花生应仔细检查挑选，去除霉变颗粒，常放于阳光下晾晒，以保人的身心健康。

原发性肝癌是严重危害人类生命健康的重大疾病。我国是肝癌疾病的高发地区，新患肿瘤病人中约55 %发生在中国。由于老百姓对肝癌的发病因素认识模糊，很多可防可治的肝病最终发展为肝癌，本可以早期发现的肝癌错过最佳手术时间；一些可以改变生活质量的患者因为缺乏信心而放弃了治疗。其实，肝癌并非不治之症，尤其近年来，肝癌综合治疗策略的兴起，给肝癌患者带来了新的希望。1) 关注肝癌的早期预防流行病学研究发现，肝癌的发病诱因很多。例如 ①黄曲霉毒素(有强烈的致癌作用，存在于霉变的玉米，花生以及腌制食品中)②化学致癌物质：污染的食物/饮水中，腌制食品等含有大量化学致癌物质（以N-亚硝基化合物为主），也是肝癌发生的重要诱因之一。③饮酒：大量研究表明，酒精对肝脏有直接的损伤作用。因此，保持健康的生活方式，可以有效的预防肝癌的发生。2) 治疗方式的选择很关键对于肝癌的患者来讲，治疗方法很关键。对于身体状况较好、肝硬化不重、单个瘤体的患者，可以首选以手术为主的综合治疗，而且争取尽早手术；若肝功能较差，手术切除风险比较大，若肿瘤小于5CM时，可以选择微创消融的局部治疗；对于肝功能特别差的小肝癌，则最好的治疗就是肝移植了；而对于上述方式都无法实施的中晚期肝癌患者，介入治疗是最好的选择。随着分子生物学研究的发展，靶向治疗药物成为肝癌药物研发的热点。国内第四军医大学陈志南院士和成都华神生物合作研发的放射性标记抗体药物-利卡汀（碘美妥昔单抗注射液）已在肝癌治疗临床应用。3) 综合治疗新的时代已经来临2011年，卫生部颁布《原发性肝癌诊疗规范（2011年版）》，提出了原发性肝癌多学科综合治疗模式建议。由于原发性肝癌的特殊性，特别强调多学科规范化的综合治疗，并且在此基础上，提倡针对不同患者或者同一患者不同时期实施个体化治疗。而以靶向治疗药物为代表的新型药品由于其作用机理和常规治疗方式不同，可以很好的弥补其他治疗方式的不足。例如前文提到的国产靶向治疗药物利卡汀，已开展了联合手术、介入等治疗方式的综合治疗，取得了令人鼓舞的临床疗效。利卡汀联合TACE治疗中晚期肝癌，可以延长中期肝细胞肝癌患者中位生存期；利卡汀在肝癌肝移植术后使用，可以降低肝癌肝移植术后患者的复发。

人民网北京3月26日电 （记者 赵敬菡）世界领先的医药健康企业赛诺菲宣布，旗下乐沙定（注射用奥沙利铂）于3月12日获得国家食品药品监督管理局批准用于“不适合手术切除或局部治疗的局部晚期和转移的肝细胞癌（HCC）的治疗”的适应症，成为全球首个获批的用于肝癌系统化疗的药物，为晚期肝细胞癌这一具有中国特色癌症的治疗带来了突破与希望。 我国每年肝癌发病人数超过40万，占全球的55%；肝癌可以称为最具“中国特色”的癌症病种。如何通过多学科联合攻关以取得理想的规范化综合诊疗效果成为了众多专业医生亟待攻克的难题。 EACH研究首次证实，含有乐沙定?（注射用奥沙利铂）的FOLFOX化疗新方案使晚期肝癌患者死亡风险降低20%，复发转移风险降低38%，且肿瘤客观缓解率显著提高到达8.2%。解放军南京八一医院秦叔逵表示：“含乐沙定?（注射用奥沙利铂）化疗新方案的提出和治疗效果的确定，首次改变了医生对肝癌系统化疗的传统认识，为医生和患者提供了切实有效的治疗方案。中国肝癌患者终于拥有了疗效好，花费低以及对肝脏损伤较小的治疗方案。” 赛诺菲亚太研发总裁江宁军介绍说：“基于当前肝癌在中国的临床实践和需求的急迫性，凭借EACH研究中证实的明显生存获益，乐沙定?成为全球首个获批的肝癌系统化疗药物, 可为临床提供一个有明确疗效证据的治疗选择，也有利于在今后肝细胞癌领域内临床研究的开展，为患者带来更多获益。” 目前，FOLFOX方案为主的系统化疗被收录于国家卫生部颁发的《原发性肝癌诊疗规范（2011年版）》，推荐用于治疗晚期HCC的全身系统治疗。并且，该方案的化疗药物全部纳入我国医保报销范围，更多的中国患者可以承受治疗费用。

[align=center][font='宋体'][size=21px]以肝癌组织单外泌体表面蛋白组为基础的肝癌预后模型构建[/size][/font][/align]1、 [font='宋体']：[/font][align=left][size=16px]研究内容[/size][/align][align=left][size=16px]从肝细胞肝癌和癌旁组织中提取外泌体，深入探讨肝癌组织外泌体和癌旁组织外泌体的差异，通过生物信息学手段发现关键分子，并通过实验验证关键分子的作用，[/size][size=16px]结合临床信息构建肝癌预后模型，[/size][size=16px]具体研究内容为：[/size][/align][align=left][font='calibri'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]）临床样本收集：收集肝细胞肝癌和癌旁组织[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]例，分别提取外泌体；后期验证收集肝细胞肝癌和癌旁组织[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]80[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]例。[/color][/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]）外泌体表面蛋白测定及关键分子检测：前期采[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]?[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]邻近编码技术（[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]Proximity Barcoding Assay, PBA[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]）对单外泌体进行分析，对样本中的外泌体进行高通量、单颗粒、多种蛋白的检测；[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]miRNA[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]组学分析：与疾病发生相关的外泌体源功能分子；差异分子的功能、通路的富集与注释；组织外泌体验证关键分子；关键分子上下游通路预测、功能富集、表型预测；[/color][/size][/font][/align][font='calibri'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]）功能机制研究：获得或缺失关键分子后的外泌体处理肿瘤细胞，检测干性表型；体内实验验证[/color][/size][/font][font='calibri'][size=16px][color=#000000]其对小鼠成瘤的影响。[/color][/size][/font]1、 [font='宋体']研究方案：[/font][font='宋体'][size=16px]1.研究方案（有关方法、技术路线、实验手段、关键技术等说明，项目可行性分析）[/size][/font][font='宋体'][size=16px]研究方法[/size][/font][font='宋体'][size=16px]（1）临床样本收集：收集肝细胞肝癌和癌旁组织20例，分别提取外泌体；[/size][/font][font='宋体'][size=16px]（2）[/size][/font][font='宋体'][size=16px]外泌体表面蛋白测定及关键分子检测：[/size][/font][font='宋体'][size=16px]前期采用[/size][/font][font='宋体'][size=16px]邻近编码技术（[/size][/font][size=16px]Proximity Barcoding Assay[/size][size=16px],[/size][size=16px] [/size][size=16px]PBA[/size][font='宋体'][size=16px]）对单外泌体进行分析，[/size][/font][font='宋体'][size=16px]对样本中的外泌体进行高[/size][/font][font='宋体'][size=16px]通量、单颗粒、多种[/size][/font][font='宋体'][size=16px]蛋白[/size][/font][font='宋体'][size=16px]的检测；[/size][/font][size=16px]miRNA[/size][font='宋体'][size=16px]组学分析：与疾病发生相关的[/size][/font][font='宋体'][size=16px]外泌体[/size][/font][font='宋体'][size=16px]源功能分子；差异分子的功能、通路的富集与注释；组织外泌体验证关键分子；关键分子上下游通路预测、功能富集、表型预测[/size][/font][font='宋体'][size=16px]；[/size][/font][font='宋体'][size=16px]（3）功能机制研究：获得或缺失关键分子后的外泌体处理肿瘤细胞，检测干[/size][/font][font='宋体'][size=16px]性表型；体内实验验证其对小鼠成瘤的影响；[/size][/font][font='宋体'][size=16px]（[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4[/size][/font][font='宋体'][size=16px]）预后模型的构建：将临床信息与关键分子信息相结合，构建肝癌预后模型。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]实验方案[/size][/font][font='宋体'][size=16px]一、组织外泌体的提取[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.组织切片解离，获得[/size][/font][font='宋体'][size=16px]外泌体[/size][/font][font='宋体'][size=16px]悬液[/size][/font][size=16px]（[/size][size=16px]1[/size][size=16px]）冰冻切片机对组织进行切片处理[/size][size=16px], [/size][size=16px]（[/size][size=16px]2[/size][size=16px]）将提前配好的消化酶转移到[/size][size=16px]50[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml[/size][size=16px]的离心管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）[/size][font='宋体'][size=16px]将[/size][/font][size=16px]装有切片组织的离心管转移至于[/size][size=16px]37℃[/size][size=16px]水浴锅中水浴孵育[/size][size=16px] 10[/size][size=16px]-[/size][size=16px]15[/size][size=16px] [/size][size=16px]min[/size][size=16px]，过程每隔[/size][size=16px] 5[/size][size=16px] [/size][size=16px]min[/size][size=16px]充分混合一次观察组织形态消化情况。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）[/size][size=16px]37℃[/size][size=16px]孵育结束后将组织消化混合液放置在冰上，用[/size][size=16px]70[/size][size=16px] [/size][size=16px]μm[/size][size=16px]滤膜过滤上述溶液到新的[/size][size=16px]15[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml[/size][size=16px]的离心管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]5[/size][size=16px]）向每个[/size][size=16px]15[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml[/size][size=16px]的离心管中加入[/size][size=16px] 25[/size][size=16px] [/size][size=16px]ul [/size][size=16px]蛋白酶和磷酸酶抑制剂[/size][size=16px]（[/size][size=16px]1:100[/size][size=16px]）[/size][size=16px]。[/size][size=16px] [/size][size=16px]2.[/size][size=16px]外泌体[/size][size=16px]悬液差速离心[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]1[/size][size=16px]）[/size][size=16px]4℃[/size][size=16px]，[/size][size=16px]300×g[/size][size=16px]，离心[/size][size=16px] 10 min[/size][size=16px]，转移上清到新的[/size][size=16px] 15[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml [/size][size=16px]离心管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]2[/size][size=16px]）[/size][size=16px]4℃[/size][size=16px]，[/size][size=16px]2000×g[/size][size=16px]，离心[/size][size=16px] 10 min[/size][size=16px]，转移上清到新的[/size][size=16px] 15[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml [/size][size=16px]离心管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）[/size][size=16px]4℃[/size][size=16px]，[/size][size=16px]10, 000×g[/size][size=16px]，离心[/size][size=16px] 20 min[/size][size=16px]，上清转移到新的[/size][size=16px] 15[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml [/size][size=16px]离心管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）步骤（[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）得到的上清液用[/size][size=16px] 10[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml [/size][size=16px]注射器通过[/size][size=16px] 0.22[/size][size=16px] [/size][size=16px]μm [/size][size=16px]滤膜过滤进入大超离管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]5[/size][size=16px]）[/size][size=16px]4℃[/size][size=16px]，[/size][size=16px]150,000[/size][size=16px] [/size][size=16px]×g[/size][size=16px]，超离[/size][size=16px]2 h[/size][size=16px]。[/size][size=16px] [/size][font='宋体'][size=16px]（[/size][/font][size=16px]6[/size][size=16px]）超离结束后，弃上清，沉淀以[/size][size=16px]0.4 ml+0.4 ml[/size][size=16px]遇冷的[/size][size=16px]PBS[/size][size=16px]（含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂）溶解后，获得小囊泡。[/size][size=16px] [/size][size=16px]3. SEC [/size][size=16px]排阻[/size][size=16px]+[/size][size=16px]超滤[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]1[/size][size=16px]）将超离后[/size][size=16px]1[/size][size=16px] [/size][size=16px]ml[/size][size=16px]的[/size][size=16px]PBS[/size][size=16px]洗涤的外泌体加入到排阻柱中，待液面下降至上筛板时，依次加入[/size][size=16px]PBS[/size][size=16px]，并同时[/size][size=16px]（[/size][size=16px]2[/size][size=16px]）收集对应馏分加入[/size][size=16px] 100kd [/size][size=16px]超滤管中。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）[/size][size=16px]4℃[/size][size=16px]，[/size][size=16px]4000×g[/size][size=16px]，离心[/size][size=16px] 1min[/size][size=16px]。[/size][size=16px]（[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）超滤至合适体积后，对着滤膜反复吹打，吸出[/size][size=16px]200[/size][size=16px] [/size][size=16px]ul[/size][size=16px]后进行[/size][size=16px]BCA[/size][size=16px]蛋白浓度检测。[/size][size=16px] [/size][size=16px]4. BCA[/size][size=16px]检测[/size][size=16px] [/size][size=16px]将超滤得到的外泌体进行[/size][size=16px]BCA[/size][size=16px]蛋白浓度检测。[/size][size=16px]二、外泌体表面蛋白及[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]组学分析[/size][size=16px]1.[/size][size=16px] [/size][size=16px]与疾病发生相关的[/size][size=16px]外泌体[/size][size=16px]源功能分子，差异分子的功能、通路的富集和注释。[/size][size=16px]2.[/size][size=16px] [/size][size=16px]组织外泌体验证关键分子，供体细胞的推断。[/size][size=16px]3.[/size][size=16px] [/size][size=16px]关键分子上下游通路预测，功能富集，表型预测。[/size][size=16px]4.[/size][size=16px] [/size][size=16px]预后模型的构建：将临床信息与关键分子信息相结合，构建肝癌预后模型。[/size][size=16px]三、功能机制研究[/size][size=16px]1.[/size][size=16px] [/size][size=16px]获得或缺失关键分子后的外泌体处理肿瘤细胞，检测干性表型。[/size][size=16px]2.[/size][size=16px] [/size][size=16px]体内实验验证其对小鼠成瘤的影响：经溯源分析得出不同亚群外泌体的来源，将特定来源的外泌体注入小鼠体内，研究其对小鼠成瘤的影响。[/size][size=16px]可行性分析[/size][size=16px]本课题组前期进行了外泌体提取的相关研究，已取得学术成果。[/size][size=16px]1[/size][size=16px]）科研基础扎实：申请者研究团队从事相关基础研究多年，近年在国内外期刊上发表论文多篇，具备高质量完成项目的能力。[/size][size=16px]2[/size][size=16px]）研究目标切实：本课题密切联系外泌体研究现状，旨在研究组织外泌体与疾病关系，并为疾病的诊断和治疗提供切实合理的方案。[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）技术平台与硬件设施完善：申请者所在单位的分子生物学及生物信息学各项研究方法比较成熟，具备完成实验所需的全套设备，并且已熟练掌握上述技术路线涉及的各种实验方法。[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）项目组成员近年来连续从事外泌体捕获及分离方法研究，熟悉该研究领域的动态前沿，有一定的研究功底。[/size][size=16px]5[/size][size=16px]）本项目的研究团队人员配置合理，骨干成员均为年富力强的中青年科学工作者和技术骨干，有较强科研履约能力和良好履约记录。[/size]创新点：[size=16px]目前对于外泌体的研究大多局限于体液外泌体，体液来源的[/size][size=16px]外泌体[/size][size=16px]在疾病研究和早诊方面存在一定的局限性。首先，体液[/size][size=16px]外泌体[/size][size=16px]来源于机体内的各种细胞、组织导致其组成复杂，鉴定出的标志物是否为肿瘤所特异并无清晰阐述。其次，组织微环境中包括肿瘤细胞和其他各种细胞的复杂作用。本研究直接从组织中提取的[/size][size=16px]外泌体（[/size][size=16px]Ti-EVs[/size][size=16px]）[/size][size=16px]具有组织特异性、准确反映组织微环境以及携带更丰富的信息等优点。[/size]

肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全球发病率已超过62.6万/年，居于恶性肿瘤的第5位：死亡接近60万/年，位居肿瘤相关死亡的第3位。原发性肝癌在我国属于高发，目前我国发病人数约占全球的55%；在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌，位居第二。肝癌正严重威胁我国人民健康和生命。肝炎病毒包括乙型肝炎和丙型肝炎是人类肝癌发病诸多因素中的主要启动因素。患过乙肝的人比没有患过乙肝的人患肝癌的机会要多，这种危险性高达10.7倍之多。长期进食霉变食物、食含亚硝酸盐食物以及食物中微量元素硒的缺乏也是促发肝癌的重要因素之一。有酗酒嗜好者，肝硬化的发病率很高，特别是在肝炎基础上，大量饮酒，就会加快加重肝硬化的形成和发展，促进肝癌的发生。根据2011年卫生部颁布的《原发性肝癌诊疗规范（2011年版）》，对于≥40岁的男性或≥50岁女性，具有HBV和/或HCV感染，嗜酒、合并糖尿病以及有肝癌家族史的高危人群，一般是每隔6个月进行一次检查。得了肝癌并不可怕，因为针对肝癌的治疗方法很多，涉及到多个学科，如果能够得到正确合理的治疗，肝癌远期疗效还是比较理想的。目前肝癌治疗总的原则是早期发现和早期诊断，强调实施多学科综合治疗（即联合手术治疗和药物治疗）。肝癌常用的手术治疗方法可分为外科手术和非外科手术治疗两种。外科手术治疗包括肝脏移植术和肝切除术，是肝癌首选的治疗方法，能够完整的清除肿瘤组织，达到根治的目的。肝癌非外科手术治疗包括动脉化疗栓塞(TACE)、局部消融治疗（射频消融、微波消融、酒精注射、高强度聚焦超声）、放疗以及药物等，主要用于由于各种原因不能接受手术治疗的患者，或手术前后的辅助治疗。动脉化疗栓塞即常说的介入治疗，属于非外科手术治疗中的首选方法，常用于不能手术切除的中晚期肝癌患者，能够达到控制疾病延长生存的目的。对于直径≤5cm的单发肿瘤或最大直径≤3cm的多发结节（3个以内），无血管胆管侵犯，肝功能良好的早期肝癌患者，射频或微波消融是外科手术以外的最好选择。由于肝癌的发病机制十分复杂，其发生、发展和转移与多种基因的突变、细胞信号传导通路和新生血管增生异常等密切相关，其中存在着多个关键性环节，正是进行靶向药物治疗的理论基础和重要的潜在靶点。靶向治疗药物治疗在控制肝癌的肿瘤增殖、预防和延缓复发转移以及提高患者的生活质量等方面具有独特的优势。近年来，应用靶向治疗药物治疗肝癌已成为新的研究热点, 受到高度的关注和重视。如国产的肝癌靶向治疗药物利卡汀与肝动脉介入治疗联合应用，与单纯的肝动脉介入治疗比较，可以延长患者的中位生存时间；利卡汀在肝癌肝移植术后患者的应用，可以降低肝

水果树莓可明显抑制肝癌细胞系增殖，使肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达减弱，并使抑癌基因野生p53的表达增强。由哈医大附属第四医院刘明博士完成的一项国家自然基金课题，首次成功锁定树莓预防肝癌生长的两个特异性蛋白质作用靶点，为果蔬预防原发性肝癌提供了重要的理论依据。这一成果近日获得2008年度黑龙江省医药卫生科技进步一等奖。 　　2000年，刘明博士赴美国康奈尔大学研修深造期间，尝试将树莓中的鞣化酸与肝癌细胞混合培养，发现前者能显著抑制后者的生长。近年来，他从医学、营养学等角度开展了“树莓预防及抑制肝癌机制的研究”。 　　研究结果表明，随着树莓中植物化学物质浓度的增加，总抗氧化自由基清除能力也随之增强。0.25毫克/毫升至10毫克/毫升的树莓提取物对肝癌细胞系HepG-2的抑制率呈逐渐增加趋势，最高抑制率可达90%%左右。 　　在利用化学毒物黄曲霉毒素和二乙基亚硝胺建立的稳定大鼠原发肝癌模型上，随着树莓提取物浓度的增高，实验组大鼠肝脏上的瘤径变小，肿瘤的数量减少，成瘤率减低，结节程度减轻；肝癌细胞VEGF、增殖细胞核抗原表达的程度亦明显降低。同时，实验组大鼠血清在两种特异蛋白(M2597、M4513)质峰上与树莓干预组及正常大鼠血清差异明显，说明蛋白质峰M2597、M4513极有可能为树莓预防肝癌的蛋白质作用靶点。 　　专家评价，今后，利用树莓中提取的植物化学成分，进行合理搭配及组成预防剂，十分有助于防范肝癌的发生，并能抑制肝癌的发展，提高患者生存率。

著名演员傅彪肝癌晚期，现在仍在医院抢救，希望他能顺利康复，也希望喜欢看他的节目观众朋友一起为他祈祷祝福！[em20]

肝癌是全球第3大癌症死亡原因，其中肝细胞癌约占所有肝癌类型的80%[1]。据世界卫生组织统计，每年因肝细胞癌死亡的人数高达83万例，且其发病率和死亡率仍呈现上升趋势，严重损害人类生命健康[2]。在慢性肝病的基础上，基因突变、表观遗传变化、信号通路失调和血管生成异常等分子机制相互作用，共同推动慢性肝病向肝细胞癌过程的发展[3]。目前肝细胞癌治疗的一线药物主要是索拉菲尼、仑伐替尼等靶向药及阿替利珠单抗、贝伐珠单抗等免疫治疗药物[4]。然而，靶向药及免疫治疗药的耐药性和不良反应导致肝细胞癌的5年生存率仍然不高。因此，亟需寻找安全性高、不良反应少的治疗药物，为肝细胞癌患者提供更有效、安全的治疗选择。 近年来，随着对肝细胞癌研究的不断深入，自噬在肝细胞癌中的作用逐渐被关注。在肝细胞癌的发展过程中，自噬一方面通过维持细胞内稳态来抑制肿瘤起始，另一方面通过影响信号通路的效应因子来抑制早期肝细胞癌的进程[5]。自噬受到多种机制的严格调控和影响，涉及自噬的几条重要信号通路有Wnt/β-catenin、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p53通路等[6]，这些通路在肝细胞癌中异常激活，参与肝癌细胞的增殖、凋亡和自噬等生物学行为。研究表明，mTOR通路在自噬调控机制中发挥至关重要的作用[7]，mTOR是自噬的负性调控因子，可以与UNC-51样激酶1（Unc-51 like autophagy activating kinase 1，ULK1）的丝氨酸结合抑制自噬的启动过程，也可以通过磷酸化使自噬调节复合物失活影响自噬小体的发生，磷酸化自噬相关蛋白14（autophagy-related protein 14，Atg14）、自噬和Beclin-1调节器1（activating molecule in beclin-1 regulated autophagy protein 1，AMBRA1）和核受体结合因子2（nuclear receptor binding factor 2，NRBF2）直接调节自噬的成核步骤[8]。因此，针对自噬及其机制开展治疗可能是肝细胞癌的有效对抗策略。 地榆为蔷薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.的干燥根，具有凉血止血、解毒敛疮的功效。地榆皂苷II是从地榆中提取的一种三萜皂苷类化合物，现代药理学研究发现，地榆皂苷II不仅具有抗炎、抗氧化、免疫调节的药理作用，同时具有广泛的抗肿瘤活性[9-11]，能通过多种途径抑制多种癌症的发生和发展，其机制可能与阻滞细胞周期、促进细胞凋亡和细胞自噬有关[12-15]。课题组前期研究发现，地榆皂苷II能够抑制小鼠肝细胞癌的发展[15]。然而，地榆皂苷II是否能通过影响Akt/mTOR通路诱导凋亡和自噬抑制肝细胞癌尚不明确。本研究中选择人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞作为研究对象，探究地榆皂苷II对肝癌细胞增殖、自噬和凋亡的影响，探讨地榆皂苷II在抗肝细胞癌方面的潜在作用机制，为将来用于临床治疗提供数据支持。 1 材料 1.1 细胞 HepG2细胞购自中国科学院上海细胞生物学研究所，Hepa1-6细胞购自上海富衡生物科技有限公司。 1.2 药品与试剂 地榆皂苷II（批号MUST-11051204，质量分数≥98%）购自上海源叶生物科技有限公司；PVDF膜（批号IPVH00010）购自美国Sigma公司；青霉素-链霉素（批号S11JV）购自上海源培生物科技股份有限公司；DMEM培养基（批号C11995500BT）、胎牛血清（批号A3160801）购自美国Gibco公司；PBS（批号WHB823K091）购自武汉普诺赛生命科技有限公司；0.25%胰酶消化液（批号C0203）、RIPA组织/细胞裂解液（批号P0013C）、蛋白酶抑制剂混合物（批号P1050-1）、磷酸酶抑制剂混合物（批号P1050-2）、EdU-555细胞增殖检测试剂盒（批号C0075S）购自上海碧云天生物技术有限公司；CCK-8试剂盒（批号A311-02）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（批号E112-01）、高敏型ECL化学发光检测试剂盒（批号E412-01）、相对分子质量为1.8×105的蛋白marker（批号MP-102AA）购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；一抗稀释液（批号G2025）、二抗稀释液（批号G2009）、高相对分子质量marker（批号26625）购自武汉赛维尔生物科技有限公司；7.5% PAGE凝胶快速制备试剂盒（批号PG111）、10% PAGE凝胶快速制备试剂盒（批号PG112）、12.5% PAGE凝胶快速制备试剂盒（批号PG113）购自上海雅酶生物医药科技有限公司；β-actin、Beclin1抗体（批号分别为20536-1-AP、11306-1-AP）购自美国Proteintech公司；B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、p62抗体（批号分别为ab196495、ab56416）购自英国Abcam公司；Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，Caspase-3）、Caspase-8、cleaved Caspase-3、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR抗体（批号分别为5023T、9662S、4790T、9664T、4685S、4060T、2972S、5536T）购自美国CST公司；甲醇（批号10014118）购自国药集团化学试剂有限公司；山羊抗兔二抗（批号RS0002）购自美国ImmunoWay公司；Annexin V-FITC染色液（批号E-CK-A211）购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司。 1.3 仪器 AL104型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多有限公司）；HH-S型恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；CKX53型倒置生物显微镜、IX73倒置荧光显微镜（日本Olympus公司）；3111型CO2培养箱、Multiskan Go-1510型全波长酶标仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）；Centrifuge 5424R型微量离心机（德国Eppendorf公司）；SDS PAGE凝胶电泳及转膜电泳仪（美国Bio-Rad公司）；BETS-M5型转移微型翘板摇床（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；XH-C型涡旋混合器（金坛市医疗仪器厂）；MINI-4K型微型离心机（杭州米欧仪器有限公司）；5200型全自动化学发光图像分析系统（上海天能科技有限公司）；CytoFLEX流式细胞仪（美国贝克曼库尔特有限公司）；ThermoCell恒温金属浴（杭州博日科技股份有限公司）。 2 方法 2.1 CCK-8实验 将HepG2和Hepa1-6细胞分别以1×105个/mL接种于96孔板中，贴壁生长24 h，设置对照组、不同剂量地榆皂苷II组，对照组仅加入培养基，其余各组分别加入5、10、15、20、30、40、60、80、100 μmol/L相应药物，继续培养24 h，用CCK-8试剂盒测定各组吸光度（A）值，计算细胞存活率。 细胞存活率＝(A实验－A空白)/(A对照－A空白) 2.2 EdU实验 将HepG2和Hepa1-6细胞分别以1×105个/mL接种于96孔板中，贴壁生长24 h，设置对照组和地榆皂苷II（10、20、40 μmol/L）组，给药组给予相应药物，对照组仅加入培养基，继续培养24 h。将EdU稀释到2×EdU工作液（20 μmol/L），预热后等体积加入96孔板中，孵育细胞2 h后去除培养液，加入100 μL固定液（4%多聚甲醛），孵育10 min后去除固定液，用100 μL洗涤液洗涤细胞3次后每孔加入100 μL通透液（含0.3% Triton X-100的PBS），室温孵育15 min。去除通透液，每孔用1 mL洗涤液洗涤细胞2次，每次5 min。参考说明书配制Click反应液。每孔加入50 μL Click反应液，轻轻摇晃培养板后室温避光孵育30 min。洗涤液洗涤3次，吸除洗涤液后，每孔加Hoechst 33342溶液100 μL，室温避光孵育10 min。用洗涤液洗涤3次，每次3～5 min，随后进行荧光检测。 2.3 细胞凋亡检测 将HepG2和Hepa1-6细胞分别以1×105个/mL接种于6孔板中，贴壁生长24 h，设置对照组和地榆皂苷II（10、20、40 μmol/L）组，给药组给予相应药物，对照组仅加入培养基，继续培养24 h。用胰酶消化细胞，300×g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤，轻轻重悬细胞，300×g离心5 min，弃上清。用PBS洗涤细胞，离心后弃上清，加入Annexin V Binding Buffer重悬细胞。细胞悬液中加入Annexin V-FITC Reagent和5 μL的碘化丙啶（PI），轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15～20 min，立即上机检测。 2.4 Western blotting检测相关蛋白表达 将HepG2和Hepa1-6细胞分别以1×105个/mL接种于6孔板中，贴壁生长24 h，设置对照组和地榆皂苷II（10、20、40 μmol/L）组，给药组给予相应药物，对照组仅加入培养基，继续培养24 h。加入RIPA中强度缓冲液裂解后收集细胞，使用BCA蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度。蛋白样品经凝胶电泳，转至PVDF膜，加入5%脱脂奶粉，封闭1.5 h，加入一抗，4 ℃孵育过夜；洗膜3次后加入二抗，4 ℃孵育1.5 h；最后使用ECL化学发光检测试剂盒，用化学发光图像分析系统显影。 2.5 统计学分析 采用GraphPad Prism 9统计软件对实验数据进统计学分析，计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。 3 结果 3.1 地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6肝癌细胞增殖的影响 如图1所示，与对照组比较，随着地榆皂苷II浓度的升高，HepG2和Hepa1-6肝癌细胞的存活率明显降低，且呈剂量相关性。经GraphPad Prism 9软件分析，地榆皂苷II对HepG2、Hepa1-6细胞的IC50值分别为26.94、26.18 μmol/L，因此以10、20、40 μmol/L作为后续地榆皂苷II的给药剂量。 图片 3.2 地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6肝癌细胞增殖的影响 EdU-555阳性表示细胞正处于增殖状态，Hoechst33342阳性指示细胞为活细胞，EdU-555/Hoechst33342表示细胞的增殖率。如图2所示，与对照组比较，地榆皂苷II给药后HepG2和Hepa1-6细胞的EdU-555/Hoechst33342值明显降低（P＜0.05、0.001），表明地榆皂苷II能够抑制肝癌细胞的增殖。 图片 3.3 地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6肝癌细胞凋亡的影响 如图3所示，与对照组比较，地榆皂苷II给药组HepG2和Hepa1-6细胞凋亡率显著升高（P＜0.01、0.001）。凋亡蛋白（包括调控凋亡的激活因子和执行凋亡的效应因子）参与细胞凋亡的过程。采用Western blotting检测地榆皂苷II对HepG2细胞和Hepa1-6细胞凋亡相关蛋白表达的影响，如图4所示，与对照组比较，地榆皂苷II给药组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2蛋白表达量显著降低（P＜0.05、0.01、0.001），cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达量显著升高（P＜0.05、0.01）。以上结果说明地榆皂苷II促进HepG2和Hepa1-6细胞的凋亡。 图片 图片 3.4 地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6肝癌细胞自噬的影响 采用Western blotting检测细胞中代表自噬的核心蛋白LC3II、LC3Ⅰ、Beclin1、p62表达量，如图5所示，与对照组比较，地榆皂苷II给药组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值明显升高（P＜0.05、0.01、0.001），Beclin1蛋白表达量上升（P＜0.05、0.01），p62蛋白表达量明显下降（P＜0.05、0.01），表明地榆皂苷II促进HepG2和Hepa1-6肝癌细胞的自噬。 图片 3.5 地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6细胞中Akt/mTOR信号通路蛋白表达的影响 采用Western blotting检测地榆皂苷II给药后Akt/mTOR信号通路蛋白表达量，如图6所示，与对照组比较，地榆皂苷II给药组p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值明显下降（P＜0.05、0.01、0.001），表明地榆皂苷II能够抑制Akt/mTOR信号通路。 图片 4 讨论 肝细胞癌具有高发病率、高病死率的特点，虽然目前肝细胞癌研究备受关注，但其5年生存率仍为14.1%[16]。因此，迫切需要发现新的治疗策略和候选药物。近年来，地榆皂苷II在抗肿瘤方面的研究不断深入，研究发现地榆皂苷II抑制肿瘤与细胞自噬和凋亡存在紧密的关联，地榆皂苷II可通过诱导细胞凋亡来显著抑制乳腺癌MDA-MB-435细胞和胃癌BGC-823细胞的增殖[14-15]，诱导自噬显著抑制结直肠癌细胞增殖[17]。课题组既往研究证明，地榆皂苷II可在体内抑制肝细胞癌，其机制可能与抑制表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）信号通路有关[15]。然而，目前关于地榆皂苷II是否通过自噬和凋亡抑制肝细胞癌及其机制尚不明确。因此，本研究利用体外实验对地榆皂苷II刺激后肝癌细胞的增殖、自噬、凋亡及相关机制进行探究，结果表明，地榆皂苷II能抑制肝癌细胞的增殖，促进肝癌细胞的凋亡和自噬，其机制与抑制Akt/mTOR通路有关。 自噬又被称为II型程序性死亡，负责真核生物细胞质中细胞器、蛋白质和大分子的降解和回收。细胞中降解和回收的底物被吞噬后形成自噬体，自噬体与溶酶体结合形成自噬酶体最后降解。本研究检测了自噬中具有代表性的LC3、p62和Beclin1蛋白。Beclin1蛋白是一种自噬启动子，帮助自噬过程中囊泡的形成[18]，地榆皂苷II作用于肝癌细胞后，Beclin1蛋白表达量上升，促进自噬启动，囊泡形成增多，从而自噬水平升高。在自噬形成时，LC3I通过泛素激活酶E1和泛素结合酶E2与磷脂酰乙醇胺偶联，生成LC3II，LC3II存在于自噬体的表面，负责膜的融合和选择性降解过程[19]，p62在自噬体表面与LC3II相互作用后包裹进自噬体降解，与LC3II共同调节选择性降解过程[20]。地榆皂苷II给药后LC3II/LC3I值增高，p62蛋白表达量下降，促进自噬过程中自噬囊泡的融合和降解，进而促进自噬。Beclin1是自噬过程中的核心因子，已有研究证明Beclin1可以与抗凋亡因子Bcl-2相互作用，从而对凋亡过程产生影响[21]。细胞凋亡是一种生理性或病理性的程序性的死亡过程，近年来通过诱导促进癌细胞的凋亡来控制癌症一直是抗肿瘤的热点。Caspase级联反应是细胞凋亡过程的关键步骤，其启动受到抗凋亡因子和促凋亡因子Bcl-2和Bax的调节。在Caspase级联反应中，启动性Caspase包括Caspase-8、Caspase-9被激活后调控下游执行性Caspase如Caspase-3进而引起凋亡反应[22-24]。地榆皂苷II作用于肝癌细胞后，细胞中的Bcl-2蛋白表达量减少，Bax蛋白表达量增多，Bax蛋白在线粒体表面形成孔道，释放细胞色素C，引发Caspase级联反应，Caspase-8、Caspase-9激活进而诱导下游的Caspase-3活化为cleaved Caspase-3，切割下游多种底物，促进细胞凋亡典型形态变化。 Akt/mTOR信号通路在正常细胞生理过程中发挥关键作用，同时在多种癌症中，该通路的异常激活对自噬、细胞凋亡、化疗耐药性及转移过程产生重要影响[25]。诸多研究证据表明，Akt/mTOR途径是调控癌症细胞自噬反应的核心通路[26-28]。地榆皂苷II作用于肝癌细胞后，Akt和mTOR蛋白的磷酸化水平显著下降，Akt/mTOR信号通路被抑制，激活肝癌细胞凋亡和自噬，抑制肝癌细胞的增殖（图7，由Figdraw绘制）。 图片 上述体外研究结果初步解析了地榆皂苷II抑制肝细胞癌的机制，即地榆皂苷II通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导肝癌细胞的凋亡和自噬，抑制肝癌细胞增殖，为地榆皂苷II在肝细胞癌治疗的药物研究开发中提供了药理学证据。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=71912]近红外线光学成像诊断微小肝癌的初步研究[/url]

[align=center][size=18px]外[/size][size=18px]泌[/size][size=18px]体[/size][size=18px]在[/size][size=18px]肝癌的预后及靶[/size][size=18px]向治疗[/size][size=18px]中的[/size][size=18px]作用[/size][/align][size=16px]肝细胞癌（[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]）是世界上第三大常见恶性肿瘤，占原发性肝癌的[/size][size=16px]85%-90%[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][1-3][/size][/sup][/font][size=16px]。肝细胞癌新发病例估计约为[/size][size=16px]841[/size][size=16px]，[/size][size=16px]000[/size][size=16px]例[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4][/size][/sup][/font][size=16px]。乙型肝炎病毒（[/size][size=16px]HBV[/size][size=16px]）感染被认为是中国发生肝细胞癌的主要危险因素[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][5][/size][/sup][/font][size=16px]。尽管影像技术、化疗、介入放射学、外科技术和肝移植近年取得了新的突破，晚期肝癌患者预后依然很差，至今没有有效的治疗[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][6-8][/size][/sup][/font][size=16px]。目前，肝细胞癌的[/size][size=16px]5[/size][size=16px]年生存率不超过[/size][size=16px]20%[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][9[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]，[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]10][/size][/sup][/font][size=16px]，[/size][size=16px]然而，[/size][size=16px]早期诊断可显著降低肝癌患者的死亡率[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][11][/size][/sup][/font][size=16px]。因此，提高肝细胞癌的总生存率依赖于对肝细胞癌的生物学行为机制的深入研究和新治疗靶点的开发。[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体是小的纳米级[/size][size=16px]细胞外[/size][size=16px]囊泡，[/size][size=16px]是细胞间通讯的重要介质[/size][size=16px]，通过多种生物分子（如蛋白质、[/size][size=16px]RNA[/size][size=16px]和[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]）调节细胞之间的微环境和免疫系统[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px], [/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]12[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]-[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]13][/size][/sup][/font][size=16px]以及细胞的遗传和表观遗传机制[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][14][/size][/sup][/font][size=16px]。研究表明，外[/size][size=16px]泌体不仅[/size][size=16px]将下游信号传递给靶细胞，还将遗传物质转移到下游细胞，为细胞间通讯提供了新的机制[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]已有的研究结果表明[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Vesiclepedia[/size][size=16px]、[/size][size=16px]EVpedia[/size][size=16px]、[/size][size=16px]Exocarta[/size][size=16px]等数据库提供的不同类型的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体成分存在于生理或病理条件相似的不同细胞中[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][15-17][/size][/sup][/font][size=16px]。此外，外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体还参与血管生成、肿瘤细胞转移和正常细胞向肿瘤细胞的转化[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][18][/size][/sup][/font][size=16px]。许多类型的细胞，如间充质细胞、免疫细胞和肿瘤细胞可以诱导外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体的释放[/size][size=16px]，[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体在这些细胞中[/size][size=16px]上调[/size][size=16px]，[/size][size=16px]间接[/size][size=16px]表明外[/size][size=16px]泌体参与[/size][size=16px]肿瘤的发生、发展、转移、免疫逃逸和耐药性。此外，肿瘤来源的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体中含有大量的肿瘤相关[/size][size=16px]的生物[/size][size=16px]标志物[/size][size=16px]（[/size][size=16px]如[/size][size=16px]miRNAs[/size][size=16px]）[/size][size=16px]，可用于检测早期[/size][size=16px]HCC[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][20][/size][/sup][/font][size=16px]。因此[/size][size=16px]，[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体对肝癌的预后及靶[/size][size=16px]向治疗[/size][size=16px]可能发挥了重要作用[/size][size=16px]由于外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体携带的生物分子与来源细胞具有一致性，近年来，肿瘤源性外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体（[/size][size=16px]Tumor-derived exosomes[/size][size=16px]，[/size][size=16px]TDE[/size][size=16px]）作为肿瘤分子标志物在肿瘤诊治中的应用得到了越来越多的关注。研究发现，与健康对照组比较，[/size][size=16px]HCC [/size][size=16px]患者血清中有[/size][size=16px]19[/size][size=16px]种[/size][size=16px]miRNAs[/size][size=16px]显著增加。其中，[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]分泌由[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞来源的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导，因此，[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]也可作为[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]诊断的生物学标志物之一[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]21[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Pu[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][22][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者血清中外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]has-miR-21-5p[/size][size=16px]和[/size][size=16px]has-miR-144-3p[/size][size=16px]表达水平显著高于慢性乙型肝炎[/size][size=16px]（[/size][size=16px]CHB[/size][size=16px]）[/size][size=16px]患者，[/size][size=16px]ROC[/size][size=16px]曲线显示，两者在[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]诊断上的表现优于甲胎蛋白，敏感度和特异性更高，作为肿瘤分子标志物具有良好的临床应用前景。肿瘤微环境是由肿瘤细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、抗原递呈细胞以及细胞外基质、生长因子、炎性细胞因子等组成。不同细胞外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体通过携带不同信号分子发挥细胞通讯作用，参与肝癌的发生、转移、血管生成以及免疫抑制型微环境构建。当癌基因表达过度活化或抑癌基因表达过度受抑时，细胞表现为增殖能力的过度增强和凋亡能力的过度削弱，进而导致肿瘤的发生。[/size]

酒鬼酒被曝塑化剂超标260% 影响发育可致肝癌

【序号】：1【作者】：陈宁1郭安然1谢文静【题名】：新型液体栓塞剂在肝癌中的基础研究现状与进展【期刊】：湖北科技学院学报(医学版). 【年、卷、期、起止页码】：2023,37(05)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=1ya23wS0yuBR_slFA2vUIfzwUAS-RLyQjGqRN46AzfkeQJ95yww0izGQe8izF0kg4ZSasRKtuftQTcdDfKG3ugp1A6hYcT2pcDSrak6mOetD-2V2dX23EjYc5y8MjlV4aJeRG3krQRsAE9k7iCeiuA==&uniplatform=NZKPT&language=CHS

原发性肝癌起源于肝细胞或肝内胆管上皮细胞，是一种恶性肿瘤疾病，其中肝细胞癌的患病率尤为显著［1］。据统计，我国肝癌的发病率和死亡率在恶性肿瘤中分别排在第5位和第2位［2］，严重威胁国民健康。此外，肝癌患者中发生抑郁的比例较高［3］，而抑郁症是一种精神障碍性疾病，其他疾病一旦并发抑郁症则复发风险增加，严重程度和死亡率更高，增加了治疗成本和持续时间，加重经济负担［4］，故探索出有效治疗肝癌并发抑郁症的方案十分迫切。 研究表明，源自古代《太平惠民和剂局方》的经方逍遥散，由柴胡、茯苓、白芍、当归、甘草、白术、薄荷、生姜8味药材组成［5］，可治疗多种疾病，陈士铎等明清名医认为其主治“五郁”，并具有广泛的适用性，可灵活搭配用于治疗各种内伤杂症［6］，而抑郁症中以肝郁脾虚型最常见［7］。本课题组总结前期研究，表明肝癌患者亦是以此证型最常见，加上近年来有不少逍遥散类方治疗肝癌的研究，表明逍遥散和简化方均具有保肝作用，不仅能够有效降低丙氨酸氨基转氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基转氨酶（AST）水平，提高抗氧化水平，减轻药物引起的肝毒性［8］，还可抑制炎症因子，下调神经内分泌激素表达，抑制肿瘤的生长［9］以及抗脂质作用［10］。 本研究主要通过网络药理学整体阐释复方中药的作用机制［11］，结合分子对接进一步验证分子层面机制，挖掘出逍遥散对肝癌并抑郁症的作用机制，阐释逍遥散更加全面有效的临床实践科学内涵，为中医药尤其是中医复杂理论的现代化研究提供实验依据。 1　资料与方法 1.1　成分收集与筛选 运用中药系统药理学数据库与分析平台TCMSP数据库（http：//tcmspw.com/tcmsp.php），以逍遥散组方中药的“柴胡”“茯苓”“白芍”“当归”“甘草”“白术”“薄荷”“生姜”为检索词，以口服生物利用度（OB）＞30%及类药性（DL）＞0.18为筛选条件，获取组方中药的有效成分［12］，通过有效成分MOL ID获取相应靶点，并将其对应的Target name导入STRING数据库标准化处理靶点名称。 1.2　肝癌及抑郁症疾病靶点收集 通过GeneCards数据库（http：//www.genecards.org/）搜索疾病靶点，其中肝癌以相关简写（PHC、PLC、HCC）、抑郁症以简写MDD为检索词获取相关疾病靶点。 1.3　蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络构建 将筛选得到的逍遥散药物靶点与肝癌、抑郁症相关的疾病靶点进行重叠分析，以获取共同靶点，保存为逍遥散及肝癌-抑郁症共同交集靶点文件，并通过STRING数据库预测PPI互作关系，通过在线作图工具绘制韦恩图［13］，再利用Cytoscape 3.9.1软件进行可视化处理。 1.4　逍遥散成分-靶点网络构建 将逍遥散的全部活性成分和靶点导入Cytoscape3.9.1，进行网络分析，并绘制成分-靶点相互作用图，节点代表药物成分和靶点，边则代表二者的相互作用。 1.5　基因本体（GO）注释及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析 将交集靶点导入DAVID数据库进行GO、KEGG分析，以揭示其生物学意义，并使用微生信平台绘制GO和KEGG富集分析柱状图。 1.6　分子对接验证及筛选 选择度值排名前10的核心交集靶点为受体，度值排名前10的活性成分为配体进行对接［14］。通过Pubchem数据库获取成分的3D结构并借助Discovery Studio Visualizer软件将10个受体合并为一个文件，命名为LIG-，并保存为MDL MOL/SD File格式，从PDB数据库中获取蛋白晶体结构数据，随后借助PyMOL软件进行处理，以清除水分子和杂质，分别将各个处理后的靶点分别导入AutoDock Tool1.5.7软件中加氢键并保存为PBDQT文件，使用PyRx和PyMOL进行分子对接与可视化展示。 2　结果与分析 2.1　逍遥散活性成分及靶点 筛选得到逍遥散活性成分共161个，其中柴胡活性成分17个，当归活性成分2个，白芍活性成分13个，茯苓活性成分15个，白术活性成分7个，生姜活性成分5个，薄荷活性成分10个，甘草活性成分92个，对以上中药活性成分进行靶标预测，导入STRING数据库进行Target name标准化处理共得到661个靶点，去重后最终得到238个靶点。 2.2　疾病靶点的筛选与PPI网络的构建 通过GeneCards数据库获得肝癌疾病靶点10 227个、抑郁症疾病靶点977个，将二者靶点和逍遥散靶点取交集，得到69个交集靶点，并制作韦恩图（图1）。 借助STRING数据库，构建交集靶点的PPI网络图（图2），并将其导入至Cytoscape 3.9.1进行优化，此图共含69个节点，918条边，根据度（degree）值进行升序排列，越靠近圆圈内部代表度值越高，核心靶点根据度值筛选，前10名依次为：肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素1b（ILIB）、白细胞介素6（IL6）、苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）、雌激素受体1（ESR1）、凋亡抑制基因（BCL2）、前列腺素G/H合酶2（PTGS2）、肿瘤蛋白p53基因（TP53）、缺氧诱导因子1a（HIF1A）、信号传导和转录激活因子3（STAT3）。这些关键靶点可能为逍遥散治疗肝癌并发抑郁症的关键靶点。 2.3　药物活性成分-靶点网络的构建 将逍遥散的活性成分及靶点数据导入Cytoscape 3.9.1软件，在Cytoscape软件中的“Apps”选择插件Centiscape 2.2中，同时选中“度值”“介度”“紧密度”后进行网络分析，得到该网络的度值为4.22、介度为662.34、紧密度为0.001 1，以大于以上三者的值为筛选标准，最终得到逍遥散的主要活性成分-靶点网络，该网络包含了271个节点（其中包含39个活性成分和232个靶点及572条边），并选取OB值排名前20的活性成分进行展示（表1），随后又依据度值从小到大的顺序，构建逍遥散活性成分与靶点间的相互作用图（图3），图中内部圆圈矩形排列为所有靶点，外围环绕各三角形图代表所有活性成分，图形形状越大代表度值排名越靠前，结果显示逍遥散中度值排名前10的活性成分为异鼠李素、堪非醇、苜蓿毒素、β-谷甾醇、豆甾醇、毛地黄黄酮、茵陈黄酮、山槐素、3β-乙酰氧基苍术酮、熊竹素。 2.4　GO富集分析 采用DAVID数据库进行69个交集靶点的GO富集分析，得到生物过程（BP）、分子功能（MF）和细胞组分（CC）共607条GO条目（P＜0.05）。其中BP相关条目471条，包括基因表达的正调控、信号转导、以DNA为模板的转录调控、炎症反应调节、基因表达抑制等。MF相关条目88条，包括相同的蛋白质、酶、血红素结合，蛋白质同源二聚化、细胞因子活性等。CC相关条目48条，P值靠前的包括细胞外间隙、胞外区、大分子配合物、突触后膜的整体成分、突触前膜的整体成分等。利用微生信在线工具对BP、CC、MF前10条通路制作GO富集柱状图（图4）。 2.5　KEGG富集分析 富集分析共获得143条KEGG功能条目（P＜0.05），最终取前20条通路制作KEGG富集柱状图（图5），结果显示基因主要富集在糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、恰加斯病、癌症、HIF-1等信号通路。此外，发现IL6、BCL2、STAT3、AKT1等关键靶点在糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路和HIF-1信号通路中均显著富集，见表2。 2.6　“中药-成分-靶点-疾病-通路”网络选择KEGG排名前20条通路与逍遥散、肝癌、抑郁症及三者的交集靶点及对应的成分导入Cytoscape构建网络图，见图6和表3。 2.7　分子对接结果 通过分子对接验证度值排名前10的核心靶点与活性成分之间的亲和度。结果表明，活性成分β-乙酰氧基苍术酮与靶点BCL2、IL6、ESR1、IL1B、STAT3、AKT1的对接结合能低于-20.9 kJmol-1，结合活性较好；与TP53、PTGS2、TNF、HIF1A结合能均低于-29.3 kJmol-1，结合活性强，说明靶点和活性成分之间能稳定结合［15-16］，具体结合能数据见表4，并构建β-乙酰氧基苍术酮与关键靶点分子对接模式图（图7），显示β-乙酰氧基苍术酮分别与TP53在LYS-1516、ASP-1526位点形成氢键；与PTGS2在GLN-461、HIS-39位点形成氢键；与TNF在THR-139、ASN-135位点形成氢键；与HIF1A在SER-148、ARG-89位点形成氢键；与BCL2在GLN-190、ARG-6位点形成氢键；与IL6在SER-108、THR-44位点形成氢键；与ESR1在HIS-3、TRP-195位点形成氢键；与IL1B在SER-43、ASN-7、GLU-64位点形成氢键；与STAT3在ASN-315、GLN-232位点形成氢键；与AKT1在ARG-15、THR-87位点形成氢键。 3　讨论 中医学认为，原发性肝癌属“癥瘕”“积聚”“鼓胀”“肝积”等病范畴［17］，而抑郁症的主要症状为肝郁［18］，是一种常见于癌症、糖尿病等慢性疾病患者的共病［19］，二者可互为因果，相互影响。 而经典方剂逍遥散方中以柴胡为君药，发挥着疏肝解郁的关键作用；当归和白芍则协同养血柔肝，共为臣药；茯苓、白术健脾益气，生姜温胃和中，薄荷则协助柴胡疏理肝气，四者同为佐药；甘草不仅发挥着调和诸药的关键作用，还具备健脾益气的效果，因此作为佐使之用。以上8味药物相互协作，共同发挥疏肝理气、养血健脾的治疗效果［20］。因此逍遥散不仅能够治疗抑郁症，同时其组方中大多化合物对肝癌均具有靶向作用，比如君药柴胡的主要活性成分柴胡皂苷，在体内外均展现出显著的抗炎、抗肿瘤、抗病毒以及保护肝脏的活性作用［21-23］。 本研究通过网络药理学以及分子对接验证了白术的主要成分3β-乙酰氧基苍术酮与核心靶点结合力强，研究表明该成分通过PI3K/Akt、IL-17等信号通路作用于MAPK1、TP53、ESR1，调节神经生理过程和神经细胞的生理功能［24］，并具有很强的穿透血脑屏障的能力，直接作用于大脑，还能调节IL-6、一氧化氮合酶3（NOS）、ESR1和TNF水平［25］，缓解炎症并抑制细胞凋亡［26］，发挥抗抑郁、抗肿瘤作用。 同时度值排名靠前的核心交集靶点中大部分为炎症因子，文献表明炎症因子与肝癌［27］、抑郁症发生密切相关，比如TNF-α和IL-6是两种常见的炎性细胞因子，参与抑郁症的神经炎症反应［28］，和抑郁严重程度呈正相关［29］，抑郁症急性发作期间，IL-6、TNF-α水平显著升高［30］。TNF-α还通过将Caspase-3与死亡域蛋白（FADD）结合来诱导细胞凋亡［31］，发挥抗肿瘤作用。上调Bcl-2基因表达可改善抑郁症状［32］，而Bcl-2表达下调，Bcl-2相关X蛋白（Bax）水平上调可诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡［33］。低HIF-1α血浆水平与肝癌更好的治疗反应和较高的总生存周期显著相关［34］，以及与NF-κB、STAT3一起影响炎症的发生［35］，还能引起抑癌基因p53基因发生突变，参与铁死亡调控［36］，影响肝癌的发展［37］。而ESR1则通过调节5-羟色胺（5-HT）信号传导［38］，改善抑郁症状。综上表明，核心交集靶点在炎症反应、细胞凋亡、肿瘤发展等方面发挥重要作用，进一步揭示了其在肝癌和抑郁症发病机制中的关键角色。 通过KEGG富集发现，富集最显著的AGEs-RAGE信号通路激活能介导炎症反应，促使炎症因子，如TNF-α、IL-6等分泌增多，而炎症因子的高表达状态又能反向调节AGEs-RAGE轴，抑制下游NF-κB信号通路的活化，从而减少多种炎症介质的产生与释放，进而减轻机体的炎症反应［39］，参与脑组织损伤过程［40］。缺氧状态下，还可诱导AGEs-RAGE介导的HIF1α活化、NF-κB、ERK和Akt信号通路影响癌症的进展［41］。比如，AGEs通过ERK途径诱导自噬，下调RAGE降低自噬和肿瘤细胞的存活，进而导致凋亡细胞的死亡［42］。AGEs与其细胞结合的AGE受体（RAGE）的相互作用增加了氧自由基的产生、激活NF-κB［43］，造成炎症细胞因子与活性氧产生，引发炎症与免疫抑制［44］，加速形成的衰老蛋白衍生物［45］，介导肿瘤细胞与其微环境成分之间的关联，以诱导缺氧、线粒体功能障碍、内质网应激、自噬、表观遗传修饰和癌症干性［46］，调控细胞增殖、分化、死亡、炎症、免疫［47］，进而发挥抗肿瘤、抗抑郁功效。 中药方剂为复杂网络，其特点是多组分组合，并通过多层次、多靶点发挥综合效应，使机体恢复生物网络平衡［48］。本研究通过网络药理学和分子对接验证，逍遥散主要通过活性成分3β-乙酰氧基苍术酮等介导IL6、TNF、BCL2、HIF等靶点，调控AGEs-RAGE和HIF-1信号通路等，发挥抑制炎症、免疫调控、促进细胞凋亡等作用，从而改善肝癌并抑郁症的临床症状。

放射免疫治疗对于淋巴瘤效果良好 　　经过对多种肿瘤的大量试验发现，放射免疫治疗对于淋巴瘤效果良好。目前经FDA 批准上市的治疗淋巴瘤的放射免疫药物有90Y－ibritu－momab（Zevalin）和I131－tositumomab（Bexxar），两者的靶抗原都是CD20。另外，所有研究均显示放射免疫治疗有很好的安全性，骨髓抑制是其主要不良反应。北京佑安医院肿瘤介入治疗中心李睿晚期肺癌患者新的生命希望　　由上海美恩研发的131I-chTNT(碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗注射液)经中国SFDA批准用于放化疗失败的晚期肺癌治疗。131I-chTNT的上市为广大一线治疗失败的晚期肺癌患者提供了一种新的生命希望。据介绍，TNT抗体仅锁定实体瘤的变性坏死组织，131I-chTNT与肿瘤细胞核抗原结合，与单抗chTNT结合的放射性核素对坏死区边缘的肿瘤活细胞进行杀伤，造成新的坏死，接着单抗chTNT扩展到新的坏死区，周而复始使肿瘤坏死区不断扩大，由内向外摧毁肿瘤，达到治疗目的。肝癌治疗新突破利卡汀是由第四军医大学和成都华神生物研发，2005年获得新药证书，2007年上市，这个抗体的轻、重链可变区基因序列以及抗原蛋白结构都是我们首次发现并确定的，也是我国唯一具有自主知识产权全新靶点的抗体药物。美国FDA批准的26个抗体药物只有12个靶点，比如EGFR、VEGF等，我国批准的抗体药物的靶点也只有5个，利卡汀的靶点是第四军医大学确认的，国际上还没有同类药物上市。　　从单抗制备、中试放大、新药申报、抗原分析、靶点确定、临床研究和产品GMP论证，历经25年，于2007年5月成功上市的我国自主研发的国家生物制品一类新靶点肝癌靶向药物：“碘美妥昔单抗注射液”——“利卡汀”，实现了该抗体药物的产业化。利卡汀用于治疗原发性肝癌的临床控制率（CR+PR+MR+SD）为86.3%，临床有效率（CR+PR+MR）为27.40%，临床缓解率（CR+PR）为8.22%，24[/

【序号】：2【作者】： 李爽1,2刘哲睿1,2赵琦【题名】：嵌合抗原受体T细胞治疗原发性肝癌临床研究进展【期刊】：临床肝胆病杂志. 【年、卷、期、起止页码】：2023,39(05)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKu87-SJxoEJu6LL9TJzd50nI0DjkU0CSu7pAH5H12y2Hz0YPKtNX023recmbj_ZiKaPt0FLpIr2G&uniplatform=NZKPT

亚洲动物基金中国高级外科兽医莫妮卡透露，在该机构曾经救治过的277头黑熊中，没有一只黑熊的胆囊是正常的。165头被使用无管引流术取胆的熊，99%的患有胆囊炎，一半以上患有胆囊息肉等。还有很多黑熊死于肝癌。

【序号】：1【作者】： 董伟1,2李大玉2惠景【题名】：壳聚糖-磺酸甜菜碱对人肝癌HepG-2细胞的siRNA递送实验研究【期刊】：遵义医学院学报. 【年、卷、期、起止页码】：2017,40(01)【全文链接】：[url]https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDLAST2017&filename=ZYYB201701008&uniplatform=NZKPT&v=StH2kq_HG2bzzyIrTM3pmPFVDXkwXZsKpFyzf0WcfKLJzHZVemREjOiPpJtEz2wK[/url]

原发性肝癌(下称肝癌)是我国第二位的肿瘤死亡原因，其根治性切除术后的高复发率严重影响肝癌总体外科疗效。国内外的临床研究表明：肝癌术后的3年复发率为40％～50％左右，5年复发率为60％～70％乃至更高。高复发率也见于局部微创治疗和肝移植后。探索肝癌术后复发的治疗措施是有效延长患者生存时间的重要课题。从临床病理角度分析，肝癌术后复发转移是指肝癌的原有病灶，虽经“根治性切除”，由于微小原发灶的残留，原发癌在肝内播散形成的微小转移灶，癌细胞经门、体循环播散至重要隐匿部位，形成肝外转移并待机再度侵犯肝脏等原因。而从分子生物学的角度看，肝癌复发转移是一个多步骤、多环节的过程。 其分子机制涉及癌基因、抑癌基因、转移相关基因、生长因子及其受体、黏附分子及细胞外基质、肿瘤血管及机体免疫等多个环节。国产靶向治疗药物利卡汀（碘美妥昔单抗注射液）的靶抗原为肝癌细胞膜抗原HAb18G/CD147是肝癌侵袭、转移过程中重要的信号转导分子，利卡汀结合到靶抗原后，一方面能阻断肝癌的侵袭和转移，同时能杀灭残余的微小病灶和肿瘤细胞。从肝癌的复发机制来看，残余的微小病灶和肿瘤细胞是复发的重要因素。通过现在的治疗方式的综合应用，增强对已有病灶的杀灭能力，可有效的降低复发率。对有乙肝病毒背景的肝癌患者来说，乙肝病毒的慢性感染也能增大术后复发的几率。因此目前临床上肝癌术后（切除术、移植术、消融术）后进行抗病毒治疗、化疗栓塞治疗等已普遍开展，取得了不错的疗效。近年来随着分子靶向药物的出现，肝癌术后联合靶向治疗逐步成为了临床研究和应用的热点。通过已经进行的临床研究已经证实，利卡汀能降低肝癌移植术后、消融术后和TACE术后的降低。

随着对癌症相关研究的深入，化学治疗、靶向治疗、免疫治疗等治疗手段不断推陈出新，癌症治疗水平得到了长足的进步。而癌症患者的精准治疗离不开分子生物学及诊断技术的发展，液态活检作为新兴的检测技术在肺癌临床中的应用日趋成熟。而尿液检测是临床最常见的检测项目之一，不仅可以反映肾脏、肝脏、泌尿系统、内分泌系统等疾病状况，也可间接反映全身代谢性及循环等系统的功能。在生物医学研究中，蛋白质组学被广泛应用于生物标志物(Biomarkers)的发现和鉴定。随着技术的发展，尿液蛋白质组学分析成为备受关注的生物标志物发现研究领域之一。一方面，尿液中含有由肾脏滤过的血浆蛋白质以及由泌尿系统分泌的蛋白质，通过分析尿液中的蛋白质组成，可以了解人体健康状况和疾病状态的变化。另一方面，更重要的是，与变化较为稳定的血液蛋白组相比，尿液蛋白组能够更早期、更敏感地反映身体内由于疾病而产生的变化。再加上尿液作为一种无创可得的样本，使得尿液成为疾病诊断，尤其是早期检测的生物标志物的理想样本之一。[color=#0070c0][b]因此，尿液也被誉为寻找生物标志物的“金矿”，挖掘这个潜在金矿可能会极大地加快精准医疗的发展。[/b][/color][align=center][img]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/73ad66a9-8eec-4eff-be45-3c455d562e13.jpg[/img][/align][align=center]图源：PanGIA[/align]总部位于美国的生物技术公司PanGIA即将完成一个为期三年的关于前列腺癌液体活检的临床研究。同时,PanGIA公司计划启动额外的临床研究,目标是实现各种癌症类型的早期检测,所有这些研究都将由PanGIA液体活检平台提供支持。[b][color=#0070c0]PanGIA液体活检平台是什么？[/color][/b]PanGIA 是一种基于尿液的非侵入性机器学习驱动的生物分子特征液体活检平台,目前该领域还存在很大的空白。这项创新技术[b][color=#0070c0]融合了人工智能(AI)和基于尿液的液体活检技术[/color][/b],旨在[color=#0070c0][b]对癌症进行早期诊断、监测和管[/b][/color]理，从而有可能挽救无数生命。通过在全球范围内提高癌症诊断的可用性和可扩展性,[b][color=#0070c0]PanGIA液体活检平台有望改变癌症检测和治疗方式。[/color][/b]这项研究最初在2020年获得IRB（伦理审查委员会）批准并开始,招募了在美国各地进行前列腺活检的泌尿科医生。虽然研究结果尚未公布,但结果的高灵敏度和特异性催生了PanGIA生物技术公司计划进行进一步研究。[align=center][img]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/487d7def-9056-4234-9d31-3f39293871af.jpg[/img][/align]该公司现在正在准备在另外10种癌症类型上开展后续研究。这些包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌和脑癌。该公司目前正在全美范围寻找医学专业人员建立临床研究点,并将在ClinicalTrials.gov网站上列出研究结果。这项扩大的研究预计将在2024年年中启动。PanGIA公司的方法结合了分子生物学、计算生物学和机器学习的细微差别。这种结合有助于检测与疾病相关的模式,重点是对一系列疾病的非侵入性检测，这种方法的主要重点是各种癌症的早期第一阶段检测。【1】 BNN Breaking [url]https://bnnbreaking.com/breaking-news/health/pangia-biotech-to-extend-cancer-detection-studies-with-proprietary-liquid-biopsy-platform/[/url][来源：仪器信息网译] 未经授权不得转载[align=right][/align]

近日，知名方便面品牌农心在韩国生产的6款方便面被卷入致癌物苯并芘风波，消息引起各界高度关注。苯并芘是碳水化合物、蛋白质和脂肪在不完全燃烧时产生的高活性间接性致癌物质，研究表明，苯并芘可致肺癌、肝癌、肠胃道癌症等，属于一级致癌物。苯并芘广泛存在于烟熏、油炸、烧烤、烘焙等食品中。欧盟、世卫组织都针对烟熏食物分别定有苯并芘不得超过5ppb和10ppb的上限标准。 我国《GB 17400-2003 方便面卫生标准》中，并无对苯并芘的含量标准，但我国《GB 2762-2005 食品中污染物限量》明确规定，食用油标准不超过10ppb，熏烤肉不超过5ppb，粮食不超过5ppb。这和欧盟、世卫组织制定的标准其实一致的。迪马科技此前曾开发过植物油及水产品中苯并芘检测专用固相萃取柱-ProElut BaP，用户使用后均反映效果良好。在此基础上，迪马科技开发出方便面中苯并芘的检测解决方案，使用ProElut BaP成功实现方便面中苯并芘的检测，具有净化效果良好，回收率结果稳定，操作步骤简便等特点。 以下为详细解决方案，供您参考！

赛分科技发布橙汁中多菌灵检测解决方案 近期，可口可乐公司在橙汁中发现未经许可的杀菌剂，并向美国食品与药物管理局(FDA)报告。此次检出杀菌剂多菌灵的橙汁，原料橙来自巴西，当地多菌灵多用于杀灭霉菌，但实验时发现，该物质有导致动物肝癌病变的高风险。这一事件引发了外界对中国橙汁饮料食品安全的担忧。中国是巴西橙汁第四大进口国，据悉，中国市场现售的熟知品牌橙汁，不同程度地兑入了巴西橙汁。 目前，国内对于果汁中多菌灵的检测主要依据SN/T 1753-2006《进出口浓缩果汁中噻菌灵、多菌灵残留检测方法高效液相色谱法》，赛分科技日前建立了采用QuEChERS和LC/MS/MS检测橙汁中多菌灵的方法，不仅操作上更加快速简单，而且大大提高了目标物质的检出限（多菌灵检测限达到ppb级）。

癌症是人类健康、长寿的大敌。它与心脑血管疾病号称世界“三大死神”。据美国科学家皮埃特教授通过一系列的科研证实：人类癌症65％以上是由饮食不当所诱发的。现将中外科学家关于饮食不当所诱发的各种癌症简述如下：　　亚硝胺与食道癌 在1978年国际抗癌大会上，亚硝胺被确定为强致癌物质。不仅经常摄入能诱发癌症，而且一次大冲击量亦可导致癌变。据国内外的一些流行病学调查表明，人类的食道癌等癌症与亚硝胺有关。我国华北地区南端有一个食道癌高发地带，高发区林县和低发区范县人群与饲养的鸡，在食道癌的发病率上相差近10倍。分析两地食品结果证实：林县食品亚硝胺检出率为23．3％，而范县只有1．2％，亚硝胺除诱发食道癌外，还可诱发胃癌、肝癌、肺癌、肾癌、乳腺癌与膀胱癌等症。为从根本上减少食道癌等发病率，请尽量少吃盐腌制品和亚硝酸盐处理过的食品，如咸肉、咸鱼、酸菜、泡菜与浆水菜等。　　苯并芘与胃癌 在1933年苯并芘被确定为强致癌物质。据流行病学调查表明，冰岛国家胃癌发病率很高，这与他们常吃熏烤肉有直接关系。为从根本上避免苯并芘对食物的污染，建议在日常生活中，尽量少吃熏制和烘烤食品，诸如熏肉、熏鱼、香肠、烤肉、烤鱼及烤羊肉串等，以减少胃癌的发病率。　　黄曲霉素与肝癌 黄曲霉素是黄曲霉和寄生曲霉代谢的产物。1962年鉴定了黄曲霉毒素为强致癌物质。据亚非及我国肝病流行病学调查证实：凡食物中黄曲霉毒素污染严重和实际摄入量高的地区，则肝癌发病率就高。黄曲霉素主要作用于肝脏，故易诱发肝癌。亦可诱发胃癌、肠癌、肾癌和乳腺癌等。黄曲霉毒素主要污染花生、大米、玉米和花生油等粮油类食物。请在日常生活中，坚决不要食用已霉变的粮油食品，杜绝黄曲霉毒素的污染，以减少肝癌等癌症的发病率。　　丙烯酰胺与癌症 这是食品中新发现的一种强致癌物质。据瑞典斯德哥尔摩大学科学家在研究谷物、土豆、薯类等烹饪方法时，发现了高含量的丙烯酰胺。据对200多种经煎、炸或烤等高温加工处理的碳水化合物食品进行的多次重复检测结果：1000克炸薯条(片)中丙烯酰胺含量平均1000微克；一些婴儿饼子含丙烯酰胺600-800微克／千克；炸土豆片平均含量高达1200-1600微克／千克。德国的卫生标准中规定：“每升饮水中丙烯酰胺的含量不应超过0．1微克。”德国联邦风险评估中心曾于2002年11月份就此发布评估报告指出：动物实验发现丙烯酰胺对健康的损害程度要比亚硝胺及强烈致肝癌的黄曲霉素“厉害上百倍”。世界卫生组织认为这种可能是存在的，需要立即采取行动。笔者建议：应尽量少吃煎、炸、烤的碳水化合物食品，预防丙烯酰胺强致癌物所诱发的癌症。　　脂肪与乳腺癌 凡高脂肪饮食人群中、乳腺癌、胰腺癌与大肠癌的发病率和死亡率均高，尤其是动物脂肪的摄取量与上述三种癌的发病率、死亡率成正比。据美国科研证实，脂肪消费量高的国家，乳腺癌的发病率为低消费量国家的5～10倍。动物性脂肪是诱发癌症的主要根源，而多不饱和脂类有更大的促癌性。若脂肪摄入量达到总热量的20％以上时，其患癌危险性将更大。　　高动物蛋白与结肠癌 据调查表明，动物蛋白质的摄入量越多，则结肠癌、直肠癌、乳腺癌与胰腺癌、子宫内膜癌发病率也越高。其原因是动物蛋白质摄取量与总脂肪摄取量呈正相关性，即动物蛋白质摄取得多时，总脂肪摄取量也必然高。这是食物中脂肪与蛋白质同时作用的关系，请在日常生活中，注意动物蛋白质的适当摄入。　　热量过多与癌症 若男性过于肥胖，易患前列腺癌、结肠癌与直肠癌；而女性过于肥胖，易患乳腺癌、子宫癌、宫颈癌和卵巢癌等。其机理就是高热量的饮食，会促使人体产生激发细胞转化为癌细胞的激素，从而增加患癌的危险性。故在日常生活中，应注意热量的摄入，每餐不要吃得过饱，有七八成饱即可。

蒙牛纯牛奶检出强致癌物 高管称问题产品未出厂国家质检总局24日公布了近期对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。其中，蒙牛乳业（眉山）有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。对此，昨日蒙牛在其官网承认这一检测结果并“向全国消费者郑重致歉”，此外表示对该批次全部产品进行了封存和销毁。　　蒙牛纯牛奶一致癌物超标140%　　据悉，国家质检总局是在今年10月对涉及21个省市128家企业生产的200种液体乳产品展开的抽查，涉及蛋白质、酸度、铅、无机砷、总汞、铬、黄曲霉毒素M1、金黄色葡萄球菌、三聚氰胺等18个项目。　　质检总局发布的检测报告显示，蒙牛乳业此批次超标产品由国家加工食品质量监督福州检验中心检出。被检测出黄曲霉毒素M1实测值为1.2μg/kg，国家规定的最高值为0.5μg/kg，蒙牛该批次产品超标140%。蒙牛该批次超标的产品为该集团眉山公司2011年10月18日生产的250ML/盒包装的纯牛奶产品。　　公开资料显示，黄曲霉毒素M1为已知的致癌物，具有很强的致癌性。　　另一款福建长富乳品有限公司生产的长富纯牛奶（精品奶）也被检出黄曲霉毒素M1不合格，较标准超标80%。　　蒙牛称抽检的问题产品尚未出厂　　对于这一检测结果，昨日蒙牛在其官网发布《关于蒙牛眉山工厂产品抽检的情况说明》承认这一检测结果并“向全国消费者郑重致歉”。　　记者发现，在蒙牛的声明中，对于消费者关心的检出的问题产品是否已经销售到市场？销售出去的产品将如何处理？这一批次的产品具体有多少？以及是否涉及给消费者的赔偿这些问题解释的并不明晰。　　对此，昨日记者联系蒙牛乳业副总裁卢建军，他表示，该批次产品为福州质检机构到蒙牛的四川眉山工厂里检测出来的，所以产品都还没销售出去。在检测出有问题后企业进行了封存和销毁处理，因此不涉及召回等一系列问题。　　昨晚21时30分，蒙牛乳业对此事件再次发布声明强调，该批次产品在接受抽检时尚未出库。　　■ 调查　　眉山产蒙牛不会流入北京　　含致癌物的纯牛奶，北京会有售吗？相关产品是否会下架？　　记者昨晚咨询家乐福、物美、沃尔玛等超市，相关人士都表示目前没有接到要下架的任何通知，而且蒙牛产品多为本地产，不会有眉山的产品进入北京。　　■ 链接　　黄曲霉毒素可致肝癌　　乳业专家王丁棉昨日表示，牛奶中的黄曲霉毒素来源于奶牛的饲料中，即使超量一点点，随着人在食物中的摄入，慢慢在人体积累也会致癌。而此次蒙牛牛奶中检测出黄曲霉毒素M1超标超过100%，如产品已上市，那必须要下架处理。　　据了解，由于黄曲霉毒素M1相当稳定，巴氏灭菌法也无法将其杀灭，所以检测黄曲霉毒素M1不仅要在饲料原料中检测，而且在最终产品中也需要进行鉴定。　　黄曲霉毒素1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时，可导致肝癌甚至死亡。

黄曲毒素（aflatoxin），也称作黄曲霉素，是一种有强烈生物毒性的化合物，常由黄曲霉及另外几种霉菌在霉变的谷物中产生，如大米、豆类、花生等，是目前为止最强的致癌物质。加热至280℃以上才开始分解，所以一般的加热不易破坏其结构。黄曲毒素主要有B1、B2、G1与G2等4种，又以B1的毒性最强。食米储存不当，极容易发霉变黄，产生黄曲毒素。黄曲毒素与肝癌有密切关系，还会引起组织失血、厌食等症状。1960年在英国发生了因喂食黄曲毒素花生粕而导致大批火鸡暴毙事件。警惕黄曲毒素的危害，要注意剔除霉变的食物颗粒，还可采用以水淘洗的办法进一步净化易沾染的食物中的霉菌。当然，用高温烧、炸至280℃以上也可以达到分解毒素现在国家越来越重视这方面的检测，因为它只需要很少的量就可以危害人的生命，它的单位是ppb,很微量的单位。相当于32年中的一秒。