工业菌株

专家来实验室检查时 对我们购买的菌株不认可 我们购买自一个微生物试剂公司，没有菌种证明，但有注明菌种编号，专家说这不是标准菌株只能作为质控菌株，做培养基验证可以使用，所以标准菌株全部要重新购买，我的疑问是，标准菌株也可以作为质控，也作为检测中阳性对照，那么标准菌株和质控菌株区别在哪里呢？质控菌株可以做阳性对照吗？标准菌株还有什么其他的作用呢？我是小白，请大神赐教

[font=黑体, SimHei]菌种是用于发酵过程中作为活细胞催化剂的微生物，是指食用菌、工业菌、农用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料，其中包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。[/font][font=黑体, SimHei]菌株是一种菌类系列中一个品种，表示同种微生物不同来源的纯种培养，从自然界中分离得到的每一个微生物纯培养都可称一个菌株。[/font] [font=黑体, SimHei][size=17px][color=#0070c0]一、菌种是什么[/color][/size][/font] [font=黑体, SimHei]1、菌种是指一组由相同菌属、菌种命名的单一或分枝链单一紫菌纲细胞形态和遗传特征相似的细菌总称。菌株则指在同一菌种下，由不同的来源（不同的患者、不同的环境，在不同的时间或地点分离出的）而分离出的，具有明显特征差异的亚种。 [/font] [font=黑体, SimHei]2、菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究、药物的抑菌试验、药品微生物检验等方面都有一套完整的菌种，菌种又分为母种、原种以及栽培种三级。[/font] [font=黑体, SimHei][size=17px][color=#0070c0]二、主要区别[/color][/size][/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]1. 定义不同[/color][/font][font=黑体, SimHei] [/font] [font=黑体, SimHei]菌种和菌株的定义不同，菌种是按照分类学上的规定按照一定的科学标准来定义，而菌株则是根据临床或科研实验需要，将同一菌种中表现出显著性状差异的菌体分为不同次级群体。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]2. 特征不同[/color][/font] [font=黑体, SimHei]同一菌种之间可以有很大的表型和基因型的差异，因此，菌株之间也会存在很多差异，或者在进行各类实验和应用时，选择具有特殊性状的分离物。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]3. 应用范围不同[/color][/font] [font=黑体, SimHei]菌株主要用于临床和实验室应用等方面，如药物敏感性试验、免疫诊断、研究微生物生态学、基因工程及发酵工业等方面。菌种则主要用于微生物学研究中，较少直接应用。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]4、实[/color][/font][font=黑体, SimHei][color=#c00000]际应用[/color][/font] [font=黑体, SimHei]在实际应用中，菌株和菌种的概念有时候也会有所关联。比如，一些研究人员会选择不同来源的菌株作为同一菌种的代表，以构建菌种的典型菌株集合，为了便于分类鉴定，常常会存放在菌种库中。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]5、总结[/color][/font] [font=黑体, SimHei]综上所述，菌种和菌株虽然在概念上存在一定的差异，但在微生物的研究和应用中，却又常常密切关联。科研人员在应用中要严格根据概念区分，避免混淆误用。[/font] [font=黑体, SimHei][size=17px][color=#0070c0]三、菌群、菌型、菌属是什么[/color][/size][/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]1、菌群：[/color][/font][font=黑体, SimHei]指的是大量真菌或细菌形成肉眼可见的集团，生活在健康动物各部位、数量大、种类较稳定、一般能发挥有益作用的微生物种群叫正常菌群。 [/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]2、菌型：[/color][/font][font=黑体, SimHei]同一菌种的不同细菌，在某些方面有较小差异的为同一菌型，通常一个菌种内的细菌可以分为多种不同的菌型。[/font] [font=黑体, SimHei][color=#c00000]3、菌属：[/color][/font][font=黑体, SimHei]菌种的上一级分类，通常性状相近、亲缘关系密切的若干菌种组成一个菌属，如芽孢杆菌属、葡萄球菌属、乳杆菌属等。[/font]

菌株传至第3代方才可以做工作菌株么，有没有其他要求呢

请教一下冻干菌株复苏后马上就可以用于传代吗？保存于斜面上的菌株一般传几代后不可以再用呢？

如题，公司刚刚开发微生物的环境检测方法，想问问粪大肠菌群的阳性和阴性菌株可以在瓷珠菌种保存管中进行菌株传代保存吗？还有，像这些定性菌株如果可以进行传代，那定量的菌株也可以进行传代吗？怎么操作呢？有没有微生物检测比较好的书籍推荐，谢谢！

菌株保存的是第三代，-80℃保存, 再取出来活化的话属于第几代？ 答：保存的是第三代复活出来后，如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代，就是第四代，如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上，这一支斜面一直就是第三代，如果转接到另一支斜面就是第四代。传代原则，菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代。 [b]02[/b] 菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗？ 答：不一定非挑单菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是说从同一个菌落纯化出来的，以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑，宁多勿少。 [b]03[/b] 菌株冷冻保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么？ 答：有标准。《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准，大家可以学习一下，各个保存方式都有介绍，但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。GB4789.28-2013建议长期冷冻储存是在不高于-70℃条件下。 [b]04[/b] 怎样延长菌株的保存时间呢？ 答：大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。例如甘油冻存管，在-80℃保存时间大于在-20℃。冻干菌粉在-20℃保存时间会比2~8℃长。 [b]05[/b] 怎样纯化菌株？ 答：纯化就是从可疑菌落平板上挑取单菌落再划线到合适的非选择性平板（如TSA、NA等）上，分离出单菌落的过程。 [b]06[/b] 我们只保存第一代菌株是不是要重新传代保存呢，认证老师会不会认为这是个错误？ 答：一般情况下认证老师不会提出这种问题。最佳储存方式应该是，制备第一代菌株的甘油冻存管，置于超低温冰箱进行长期保存。第二代菌株作为工作储备菌株，进行斜面保存。使用第二代工作储备菌株进行转接后为第三代工作菌株。 [b]07[/b] 为何要将第三代作为工作菌株？ 答：菌株在多次传代后，菌株的变异概率会大大增加，因此菌株传代需控制在五代以内，而第一代菌株通常相对不稳定，需传至第三代使菌株稳定。因此实际工作中通常选择第三代菌株作为工作菌株。 [b]08[/b] 质控菌株是不是传代超过五代就必须销毁处理？ 答：不一定。传代超过五代只是存在菌种变异可能，但如果传代到第六代、第七代……经过形态、生化特性、DNA特征等验证，性状保持稳定，那么这些五代后的菌还是可以正常使用。 [b]09[/b] 菌种编号意义？ 答：以金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003为例，CMCC为中国医学菌种保藏中心缩写，其它常见菌种保藏中心还包括ATCC（美国标准菌种收藏所）、CICC（工业微生物菌种保藏中心）、FSCC（食品安全菌种保藏中心）；B的意思是细菌，对应还有F（真菌）；26003为CMCC的保藏编号。 [b]10[/b] 同样是金黄色葡萄球菌ATCC6538与ATCC25923有什么不同？ 答：ATCC6538与ATCC25923均为来自美国标准菌种收藏所（ATCC）的菌株，不同的编号表明这两株最初始的分离来源不同。但不同的编号的生化特性是否一样，需要进行具体分析。比如在实际生物学检验中发现金黄色葡萄球菌ATCC6538溶血能力较ATCC25923要强。 [b]11[/b] 使用瓷珠保藏管保存菌株，加入菌液摇匀后为什么要吸干菌液？ 答：瓷珠保存的原理为瓷珠为多孔结构，细菌吸附在瓷珠上，除去液体，则避免反复冻融时，液体冷冻过程中形成的冰晶损伤细菌，从而达到保护细菌的作用。如果不吸干菌液的话，那么瓷珠保存就达不到可以进行反复冻融的效果。 [b]12[/b] TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里吗？ 答：一般细菌的TSA斜面，2-8℃保存，即冷藏，但弧菌、绿脓杆菌、嗜水气单胞菌等对低温较敏感菌株，短期置于室温20-25℃保存，长期保存需使用甘油管或者瓷珠冻存。 [b]13[/b] 复苏冻干菌株是否可以采用液体培养基？ 答：可以，但使用液体复苏的话只能观察到培养基混浊，无法确定是否有污染。建议使用平板培养基复苏冻干菌株，有助于简单通过肉眼观察菌落形态以分辨复苏出来菌株是否存在污染，初步鉴定菌株纯度。 [b]14[/b] 复苏冻干菌株是否可以采用显色培养基？ 答：不建议采用显色培养基复苏冻干菌株。冻干菌株在冻干过程中会受到一定的损伤，复苏需要一个最适生长环境，故复苏培养基不能选用含有抑菌成分不利于菌株复苏的这类选择性培养基（显色培养基属于选择性培养基）。[b]15[/b] 产气荚膜梭菌做冻存时是否需要保持厌氧状态？ 答：不需要。产气荚膜梭菌虽属厌氧性细菌，但对厌氧程度要求并不太严格，按照一般菌株冻存方法进行冻存即可。如果是冻存严格厌氧菌，则需特殊的冻存方法。

最近做水质粪大肠的验证，精密度和准确度提到的标准菌株是指什么菌株，实验室耐热菌株可以做标准菌株用吗？

最近实验室要扩项，谁知道耐热大肠菌、粪大肠菌和大肠埃希氏菌的标准菌株是什么吗？我在网上查到了大肠埃希氏菌，但是有好多啊，不知道必须用ATCC25922和ATCC 13048呢，还是也可以用其他的标准菌株？网上有人说耐热大肠菌和粪大肠菌是一样的，到底一不一样呢？

最近实验室要扩项，谁知道耐热大肠菌、粪大肠菌和大肠埃希氏菌的标准菌株是什么吗？我在网上查到了大肠埃希氏菌，但是有好多啊，不知道必须用ATCC25922和ATCC 13048呢，还是也可以用其他的标准菌株？网上有人说耐热大肠菌和粪大肠菌是一样的，到底一不一样呢？

大家好，我平时是做理化跟仪器分析的，现在想了解下微生物的一些知识，想请教下标准菌株（阴性对照）的作用是什么，比如金黄色葡萄球菌（阴性标准菌株）我不知道有没有这个，举个例子，它的作用是什么，然后它后面的分离鉴定的相关步骤是不是跟阳性菌株呈现的反应是一样的，忘大家不吝赐教。或者大家有没有哪个标准有提到这些，我可以自己先去看标准，谢谢！

我们要做微生物实验，我想请教下：药检所买的安剖瓶装的干粉ATCC菌株和CMCC菌株的价格是怎样的？？

请问大家，我们做实验室认可买的标准菌株（大肠杆菌、金金黄色葡萄球菌、沙门氏菌）需要给供货方要什么相关的资料还有大家如果有标准菌株的程序文件，给我一份做为参考，谢谢！

我们实验室刚买了金黄色葡萄球菌菌株、沙门氏菌菌株及大肠杆菌菌株，因为以前没有接触过这些东西，所以从代理商那近来之后，看到这几株菌株就是用普通试管装着，用斜面培养而成的，而大肠杆菌菌株上还明显涨了几个蓝色菌点，请问标准菌株是这样的吗？而且给我们的菌株也没有菌株代号及生产厂家之类的东西，那实验室认可时，会不会要菌株的证明之类的资料啊

质控菌株如何管理呢？有没有具体的规定呢

最近做水质粪大肠的新方法认证，请问精密度和准确度中提到的标准菌株是什么，实验室有耐热菌株，可以作为标准菌株用吗

新华网社华盛顿4月22日电(记者任海军)美国研究人员22日公布研究报告称，一种致命隐球菌菌株正在美国西北地区以及加拿大不列颠哥伦比亚省扩散。　　研究人员表示，隐球菌通常只感染器官移植者、艾滋病患者等免疫力低下人群，但在北美传播的这种新菌株与之不同。领导这项研究的杜克大学学者埃德蒙伯恩斯表示，这种菌株令人不安，因为它似乎对其他健康人也构成威胁。　　据研究人员介绍，这种菌株致死率非常高，在他们研究的20多例病例中，死亡率约为25%。1999年至2003年，这种菌株仅局限于加拿大温哥华岛，但2003年至2006年，该菌株开始向加拿大不列颠哥伦比亚省大陆地区扩散，2005年至2009年扩散至美国华盛顿州和俄勒冈州，目前还可能进一步扩散至美国加利福尼亚州北部以及更远的地方。　　研究人员表示，目前感染者除人类外，还包括猫、狗、羊驼以及绵羊等动物，人畜感染这种菌株后可在两周后出现诸如持续数周的咳嗽、胸部剧痛、呼吸短促、头疼、发烧、盗汗及体重下降等症状。冷冻可以杀死这种菌株，但气候变化可促其传播。　　相关研究成果已发表在美国《公共科学图书馆病原体》杂志上。

购买回来的冻干菌株复壮活化以后怎么作为阳性对照实验使用呀？食品检测里，是吸取多少菌液放入单25ml稀释液，直接当样品做吗？还是先放到培养基里培养，再吸取25ml放入225ml里当样品做？谢谢

[align=center][b]化妆品项目中标准菌株的管理[/b][/align] 公司新增化妆品检测项目，为加强微生物实验室的工作管理，保证实验室的检测质量，保证微生物实验室标准菌株的质量控制和管理，本文根据 SNT 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程 SN/T1538.1-2005.培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则进行讲解化妆品项目中标准菌株的管理。 首先确定范围和依据，这个上述已讲，然后确定人员职责，确定使用者编写，管理者审核，负责人批准。 1、购置 微生物实验室主管每年根据检定菌株的使用情况，提出购买计划，交由实验室经理审批后，向有资质的机构或者供应商采购所需的标准菌株，购买时，需询问与确定菌株的编号和代数，以便确认菌株种属和传代时控制代数。 2、验收 购买标准菌株到货后，由试剂管理员和微生物检测人员共同核对生产企业提供的资料、菌株名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。同时应填写“标准菌株接收记录”，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并按照产品说明要求储存于适宜的温度环境。 3、储存实验室采用MAST Cryobank菌种保藏管对标准菌株进行保存。菌种保藏管内含特制的小珠多颗和特殊溶液，将培养好的菌株接入溶液中，摇匀成菌悬液，菌体即吸附于小珠上，然后吸出溶液，将保藏管置-70℃可保存 10 年，置-10℃至-15℃可保存 1-3 年。对需要保存的菌株进行必要的纯化，挑取生长旺盛时期的菌落，接入Cryobank 小管中，通常需要接 入4-7 环，对于苛养菌应多接一些。拧上盖子，充分剧烈震荡，用无菌吸管将溶液吸走，尽可能吸干，马上放入冰箱中，温度越低越有利于保存。4、复苏将Cryobank 小管从冰柜中取出。不要让小管内融化。若一次取出多支小管可以使用CRYOBLOCK 以防止融化现象。在无菌条件下，打开小管用无菌针或无菌镊子取出一颗小珠。将小珠放在适合该菌生长的平板上滚动或直接置于肉汤中培养。最后，将小珠以污染材料的推荐处理方式安全地丢弃。5、制备标准储备菌株复苏标准菌株前应准备适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。 启开标准菌株前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开塑盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞，加入复苏液（购买菌株包装中提供），将标准菌株冻干菌种（干粉）制成悬浮液，然后用无菌滴管或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]吸取适量，移至非选择性固体培养基平板（或液体培养基）上（除特殊情况或特别推荐外），按附件2所述的培养条件进行培养和传代保存以标准储备菌株。有个别冻干菌种（如弧菌属、乳杆菌属等）复苏速度较慢，可操作后，同时将菌悬液置推荐的培养条件培养过夜，再选用适合生长的选择性培养基进行分离，操作见培养后观察菌种的生长情况，并检查其纯度，如发现纯度不能满足要求时，应选用适合该标准菌株生长的选择性培养基进行分离，并按推荐的培养条件进行培养，培养后观察目标菌的菌落特征与生化特征，挑取典型菌落做纯培养后再使用。6、制备工作菌株当工作菌株代数小于5时，可直接用上一代工作菌株转接下一代工作菌株。取在冰箱 2～8℃保存的工作菌株用适宜的培养基进行传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。也可取用MAST Cryobank菌种保藏管保存的菌种，进行复苏，直接作为工作菌株。细菌每1个月传代一次；霉菌、酵母菌每2个月传代一次。当超过5代，须用标准储备菌株传代。传代时注意无菌操作，使菌株不死亡，不污染、不丢失。同时实验人员也要采取有效的预防措施进行自我保护，如工作时必须穿工作服，佩带无菌手套，实验完成以后消毒实验进行的区域、实验仪器和器具。如发生意外，如菌株泄漏或人员受伤，微生物学检测人员应立即向主管报告以便及时进行处理。代后，按标准菌株的编号原则编号，并在每一支菌种管上贴上标签，标签内容包括：名称、编号、代数、传代日期、操作人、有效期。同时及时填写《菌种传代、分离记录》7、编号及保管标准菌株的编号采用字母加数字表示：英文缩写字母—代次—传代日期—顺序号菌株的英文缩写字母：大肠埃希菌（E.c）、金黄色葡萄球菌（S.a）、黑曲霉菌（A.n）代数用一位带有下标数字的字母表示：标准储备菌株用G表示；工作菌株用W表示；如G3表示标准储备菌株第3代；W3表示工作菌株第3代。传代日期用6位数字表示：年份取最后两位数，月、日分别用两位数。如2019年10月12日传代的第一支大肠埃希菌作为标准储备菌株的编号为：E.c - G[sub]1[/sub]- 01。标准菌株的保管标准菌株设专人加双锁保管，并对所保存的菌种建立《标准菌株保存、领用登记台账》8、检定菌种的定期检查与鉴定 （期间核查）在菌种的保存期间，应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉，并及时填写《标准菌株检查记录》（附表4），如有异常应及时处理。菌种在保存期内均应根据菌种的特性（工作菌株每转种两代一次、标准储备菌株每三个月一次）检查其菌落性状、革兰染色、显微镜下菌体形态及生化特性等项目，若发现与原菌种变异较大，应重新分离、纯化、鉴定、再加以保存或购置新的标准菌株，并做好《标准菌株鉴定记录》9、领用与使用微生物检测人员从微生物实验室主管领取工作菌株或标准储备菌株，用于日常检验或验证试验，使用后及时填写《标准菌株使用登记台账》，以便追踪菌株使用历史。10、销毁下列情况的菌株或培养物或被污染的器具等，必须采用121℃、45分钟湿热灭活处理：新一代菌株制备成功后的上一代菌株；使用完后的菌株和带有标准菌株的器具和培养物；超过有效期的菌株；凡被污染、变异、可疑等异常情况菌株；其他应废弃的菌株。废弃菌株的销毁由微生物检测人员提出申请，交微生物实验室主管批准后，由微生物检测人员进行灭活处理，并有其他人在场监督，并填写《废弃菌株（物品）销毁处理记录》综上，购置标准菌株后，应通过接收、验收、复苏、传代、存储、使用、期间核查和废弃销毁等工作步骤进行严格的质量控制，并建立相应的表格，保证可追溯。

初入食品微生物三方检测，小白一枚，最近要开始扩项，想问一下食品微生物方法学验证阳性对照试验怎么选择菌株？要查哪个标准？谢谢

内裤产品做抗菌的话主要测哪种菌株啊？

标准菌株复苏后怎么保存，是要自己用培养基配冻存液，放入冻存管 冷冻保存？

1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。 通派（上海）生物科技有限公司是供应国内/外各类细胞（人/大鼠/小鼠细胞 等），菌种，ELISA试剂盒（人/大鼠/猪），PCR试剂盒，免疫组化试剂盒，单克隆抗体，多克隆抗体，移液器，培养皿，BD培养基，实验室耗材，实验室小型耗材等产品的国内一流服务商。公司集生物科技产品生产、销售于一体，公司实验室热门提供：传代细胞，原代细胞，耐药株，细胞染色，免疫组化，ELISA试剂盒 等。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。

[b]1. 目的[/b]规范微生物实验室用于实验质量控制和操作评估的标准菌株的管理与使用，保障实验结果可靠及人员和环境安全。[b]2. 适用范围[/b]适用于微生物实验室所有标准菌株的管理与使用。[b]3. 职责[/b]3.1 微生物实验室负责人负责组织标准菌株的采购、溯源，并对标准菌株的使用进行监督和管理。3.2 微生物室检验人员严格按照本规程要求转种、保存、保管、使用和弃置标准菌株。[b]4. 工作程序[/b]微生物实验室保存有满足试验需要的标准菌株，目前仅限于三类、四类致病菌，即一般和低致病性细菌，不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体和真菌等标准菌株。保存的标准菌株主要用于各类培养基、检检测剂的性能检测和质量控制。4.1 标准菌株来源4.1.1直接从通过认可的微生物标准菌株保藏机构购入。每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，证明所采购的标准菌株是合格的。4.1.2标准菌株也可采用其他可追溯到认可标准菌株保藏机构的途径获得。4.2 标准菌株的保管4.2.1实验室标准菌株保存于P2实验室专用的标准菌株保存冰箱。4.2.2标准菌株保管员及科室负责人双人双锁负责保管标准菌株。4.2.3标准菌株应按规定的时间定期转种，一般每转种2代做一次鉴定，如发现污染或变异应及时处理。4.2.4保管人员工作变动时应作好交接工作。4.3 标准菌株的使用和保存4.3.1标准菌株的类别实验室内的标准标准菌株根据用途不同，分为储存标准菌株、传代用标准菌株和工作用标准菌株。a. 储存标准菌株：以冷冻干燥保藏为主，用于标准菌株的长期保存，一般是从标准菌株保藏中心或专业实验室购买得到的标准菌株。一般可保存3～5年。b. 传代用标准菌株：采用磁珠冻存管保藏或液体石蜡覆盖保藏，用于标准菌株的传代。磁珠冻存管保藏一般可保存2年；液体石蜡覆盖保藏一般可保存3～6个月。c. 工作标准菌株：保存于琼脂斜面培养基中，作为工作用标准菌株。一般可保存1～2个月。4.3.2标准菌株的接收实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。4.3.3冷冻干燥标准菌株的恢复培养 从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。按标准菌株保藏中心的要求进行恢复培养。标准菌株活化前，将安瓿管保存在5-10℃的环境下。方法一：无菌操作，去除菌株包装物，将菌移入营养肉汤，置建议温度下增菌18～24小时，挑一环划营养琼脂平板作为工作菌株使用，其余的肉汤直接放保种磁珠加甘油，放低温冰箱-70℃冻存做为储存菌株，此为第1代。方法二：用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰将安瓿管顶端加热，滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂，用锉刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基（如营养肉汤），滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜平板培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下培养18～24h，均为第1代。对自带培养液的ATCC菌株，可在无菌条件下捏碎安瓿管顶端，让培养液自行流入塑料管内，置36℃放置一会，使标准菌株完全溶解于培养基中，用接种环划营养琼脂平板，在建议的温度下培养18～24h，此为第1代。某些标准菌株经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。4.3.4标准菌株的传代标准菌株传代一般不超过5代,从标准菌株保存中心获得的冷冻干燥标准菌株为第0代。a. 冻干标准菌株在液体培养基内溶解，再转种至平板培养基上得到单个纯菌落，此为第1代，挑取平板上纯菌落到磁珠冻存管，作为第1代传用标准菌株。或者，冻干标准菌株在液体培养基内复壮后直接加磁珠甘油保存，作为第1代传代用标准菌株。如有必要，可在复壮后转种平板或TSB，再挑取菌落或肉汤培养物，加入磁珠冻存管保存，此为第2代传代用标准菌株。b. 在保留传代标准菌株的同时，挑取纯菌落转接斜面，此标准菌株作为工作用标准菌株，为第2代或第3代。c. 将传代用标准菌株管冷冻保存（-70℃以下），将第2代或第3代工作用标准菌株以适当温度下培养适当时间后可用于实验。某些标准菌株需经2-3代培养后才能恢复其生化特性，建议用第3代以后菌株作为工作菌株。d. 取一支冷冻保存的第1或第2代传代用标准菌株转种于平板和斜面培养基上，平板上的标准菌株转入磁珠冻存管，为第2代或第3代传代用标准菌株；斜面培养基经适当温度下培养适当时间后可用作第3代或第4代工作用标准菌株。e. 当工作用标准菌株代数小于5时，可直接用上一代工作用标准菌株转接下一代工作用标准菌株。f. 按上述程序操作，直至第4代传代菌株全部转种为第5代工作菌株为止，重新购入标准菌株，重复上述操作程序保藏和使用标准菌株。4.3.5标准菌株的保存方法4.3.5.1 磁珠低温保存法磁珠低温保存法适用于保存传代用标准菌株，一般可保存2年。[color=#3e3e3e]用接种环挑取经[/color][color=#3e3e3e]18-24[/color][color=#3e3e3e]小时纯培养的菌落，接种到冻存管中的液体保存剂中，充分研磨。盖好瓶盖并颠倒[/color][color=#3e3e3e]4-5 [/color][color=#3e3e3e]次，让菌株吸附于磁珠上，注意不要剧烈振荡。静置[/color][color=#3e3e3e]15[/color][color=#3e3e3e]分钟后用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]尽量吸走冻存管内的液体，使磁珠保持干爽。盖上瓶盖，做好标记，置[/color][color=#3e3e3e]-70[/color][color=#3e3e3e]℃下[/color][color=#3e3e3e]保存。[/color]4.3.5.2甘油冷冻管保存法甘油冷冻管保存法适用于保存传代用标准菌株，一般可保存2年。a. 将待保存用标准菌株接种至平板或琼脂斜面，经37℃24～48h培养后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，移至预先装有试管的无菌蒸馏水中，调整菌液浓度，使其等同于麦氏比浊管第10号管。b. 向已制备好的菌悬液中加入等体积，浓度为20%的无菌甘油，得到10%甘油菌悬液。c. 轻轻振摇，使10%甘油菌悬液充分混合，分装于无菌小试管中，在-30℃条件下保存。4.3.5.3液体石蜡覆盖保存法液体石蜡覆盖保藏法适用于保存传代用标准菌株，一般可保存3-6个月。a. 取纯化标准菌株穿刺接种于半固体培养基中，经37℃18～24h培养后，加无菌液体石蜡覆盖半固体表面（高度1厘米为宜）。b. 石蜡油封存以后，放入4℃冰箱中保存，也可直接放在低温干燥处保存。c. 肠道细菌、葡萄球菌一般可保存3-6个月；保存O1群和非O1群霍乱弧菌时宜放置室温阴暗处；保存副溶血性弧菌时，用含3.5%氯化钠半固体，宜放置室温阴暗处；保存葡萄球菌、链球菌可用10%血半固体。4.3.5.4斜面低温保存法斜面低温保存法适用于保存工作用标准菌株，一般可保存1～2个月。取纯化标准菌株转接种于适宜的固体斜面培养基上，经37℃18～24℃培养后，用封口膜将试管塞部分包扎好，放4℃冰箱中保存。4.3.6 标准菌株的使用4.3.6.1 内部质量控制：用于阳性对照、培养基的技术性验收、人员培训、方法确认/证实等。4.3.6.2 外部质量控制：用于能力验证、实验室比对。4.4标准菌株实验室编号规则4.4.1 标准菌株名称使用中文简称，如“副溶血性弧菌”用“副溶”表示；“金黄色葡萄球菌”用“金葡”表示；“奇异变形杆菌”用“奇变”表示。4.4.2 标准标准菌株编号规则：简称+菌号+传代次数-制备管数，另需标注传代日期。例如：福氏志贺氏菌ATCC12022第2代共3管分别用志贺ATCC12022-0201 20140306、志贺ATCC12022-0202 20140306、志贺ATCC12022-0203 20140306表示。4.4.3 实验室从样本中分离得到的标准菌株编号规则：简称+菌号+传代次数-制备管数，菌株号用SFH+序号表示，例如实验室分离的福氏志贺氏菌于2014年6月3日传5代1管，用志贺SFH01-0501 20140603表示。4.5 标准菌株期间核查4.5.1 期间核查的频率：每年对常用的标准菌株进行一次期间核查。4.5.2 工作菌株期间核查的方法及依据：同工作菌株的确认。4.5.3建立标准菌株期间核查记录。4.6 标准菌株的废弃4.6.1 废弃标准菌株先用高压蒸汽灭菌：121℃，30分钟，然后委托有资质的单位处理。4.6.2 下列标准菌株需及时销毁处理：发生污染或变异的标准菌株；超过保存期限的标准菌株；使用后的标准菌株。4.7 记录：实验室应记录标准菌株的配制、复活、传代、确认等工作内容并定期交文档管理员存档。

菌株在半固体培养基中，要如何进行传代，是从原针刺道的菌苔处挑取吗？需要进行增菌、分离吗？需要传代的是金黄色葡萄球菌，如果增菌需要什么增菌液？刚接触菌株不了解，老师们帮忙看看

各位大侠，哪里有卖标准菌株呢？金黄色球菌、志贺氏、沙门氏等，最好是江浙沪一带的，要求有资质的，谢谢了！把联系方式也发一下。

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