事件聚焦

讲座名称：共聚焦光片成像技术——让荧光成像速度更快，光毒性更低，光操作更容易　　主讲老师：易海英　　徕卡显微系统生命科学产品应用专家，2014年毕业于华中科技大学生命科学与技术学院，研究生期间的主要研究方向为力学微环境对肿瘤干细胞及其转移的影响，以及力学信号对胚胎干细胞分化及发育的影响，在激光共聚焦和超高分辨率成像领域积累了丰富经验，参与的文章发表在Nature Communications等杂志期刊上。　　主要内容：2014年，光片荧光显微技术（light-sheet fluorescence microscopy）被《Nature Methods》评选为年度技术（Method of the Year 2014）。光片（light sheet）技术简单来说即使用一薄层光束从侧面激发荧光样品，随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像，快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来。光片荧光显微技术的概念其实早在一百多年前就已经被提出来了，但此后很长时间都没有什么进展，直到近年来才活跃起来，其中徕卡创造性地以其成熟的激光扫描共聚焦系统为平台，直接搭载上光片系统，得到既可以实现光片成像，又可以进行常规单光子成像，还可以将光片与单光子、多光子联合使用以实现和开创更为丰富多样的可能性的系统——Leica TCS SP8 DLS！光片荧光显微技术在细胞生物学、发育生物学、微生物学、植物学等多个领域都有广泛的应用，本次Webinar将着重介绍徕卡共聚焦光片系统DLS在生物学研究领域的应用。 举行时间：2016-11-17 14:00　　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2178http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669464_2507958_3.jpg手机扫描二维码，报名参会http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628

讲座名称：共聚焦光片成像技术——让荧光成像速度更快，光毒性更低，光操作更容易　　主讲老师：易海英　　徕卡显微系统生命科学产品应用专家，2014年毕业于华中科技大学生命科学与技术学院，研究生期间的主要研究方向为力学微环境对肿瘤干细胞及其转移的影响，以及力学信号对胚胎干细胞分化及发育的影响，在激光共聚焦和超高分辨率成像领域积累了丰富经验，参与的文章发表在Nature Communications等杂志期刊上。　　主要内容：2014年，光片荧光显微技术（light-sheet fluorescence microscopy）被《Nature Methods》评选为年度技术（Method of the Year 2014）。光片（light sheet）技术简单来说即使用一薄层光束从侧面激发荧光样品，随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像，快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来。光片荧光显微技术的概念其实早在一百多年前就已经被提出来了，但此后很长时间都没有什么进展，直到近年来才活跃起来，其中徕卡创造性地以其成熟的激光扫描共聚焦系统为平台，直接搭载上光片系统，得到既可以实现光片成像，又可以进行常规单光子成像，还可以将光片与单光子、多光子联合使用以实现和开创更为丰富多样的可能性的系统——Leica TCS SP8 DLS！光片荧光显微技术在细胞生物学、发育生物学、微生物学、植物学等多个领域都有广泛的应用，本次Webinar将着重介绍徕卡共聚焦光片系统DLS在生物学研究领域的应用。 举行时间：2016-11-17 14:00　　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2178http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669468_2507958_3.jpg手机扫描二维码，报名参会http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628

讲座名称：共聚焦光片成像技术——让荧光成像速度更快，光毒性更低，光操作更容易　　主讲老师：易海英　　徕卡显微系统生命科学产品应用专家，2014年毕业于华中科技大学生命科学与技术学院，研究生期间的主要研究方向为力学微环境对肿瘤干细胞及其转移的影响，以及力学信号对胚胎干细胞分化及发育的影响，在激光共聚焦和超高分辨率成像领域积累了丰富经验，参与的文章发表在Nature Communications等杂志期刊上。　　主要内容：2014年，光片荧光显微技术（light-sheet fluorescence microscopy）被《Nature Methods》评选为年度技术（Method of the Year 2014）。光片（light sheet）技术简单来说即使用一薄层光束从侧面激发荧光样品，随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像，快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来。光片荧光显微技术的概念其实早在一百多年前就已经被提出来了，但此后很长时间都没有什么进展，直到近年来才活跃起来，其中徕卡创造性地以其成熟的激光扫描共聚焦系统为平台，直接搭载上光片系统，得到既可以实现光片成像，又可以进行常规单光子成像，还可以将光片与单光子、多光子联合使用以实现和开创更为丰富多样的可能性的系统——Leica TCS SP8 DLS！光片荧光显微技术在细胞生物学、发育生物学、微生物学、植物学等多个领域都有广泛的应用，本次Webinar将着重介绍徕卡共聚焦光片系统DLS在生物学研究领域的应用。 举行时间：2016-11-17 14:00　　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2178http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669462_2507958_3.jpg手机扫描二维码，报名参会http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628

讲座名称：共聚焦光片成像技术——让荧光成像速度更快，光毒性更低，光操作更容易　　主讲老师：易海英　　徕卡显微系统生命科学产品应用专家，2014年毕业于华中科技大学生命科学与技术学院，研究生期间的主要研究方向为力学微环境对肿瘤干细胞及其转移的影响，以及力学信号对胚胎干细胞分化及发育的影响，在激光共聚焦和超高分辨率成像领域积累了丰富经验，参与的文章发表在Nature Communications等杂志期刊上。　　主要内容：2014年，光片荧光显微技术（light-sheet fluorescence microscopy）被《Nature Methods》评选为年度技术（Method of the Year 2014）。光片（light sheet）技术简单来说即使用一薄层光束从侧面激发荧光样品，随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像，快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来。光片荧光显微技术的概念其实早在一百多年前就已经被提出来了，但此后很长时间都没有什么进展，直到近年来才活跃起来，其中徕卡创造性地以其成熟的激光扫描共聚焦系统为平台，直接搭载上光片系统，得到既可以实现光片成像，又可以进行常规单光子成像，还可以将光片与单光子、多光子联合使用以实现和开创更为丰富多样的可能性的系统——Leica TCS SP8 DLS！光片荧光显微技术在细胞生物学、发育生物学、微生物学、植物学等多个领域都有广泛的应用，本次Webinar将着重介绍徕卡共聚焦光片系统DLS在生物学研究领域的应用。 举行时间：2016-11-17 14:00　　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2178http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610281713_615330_0_3.jpg手机扫描二维码，报名参会http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628

[img=,660,349]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003032129567332_1486_2561261_3.jpg!w660x349.jpg[/img]我看很多方法的温度条件，温箱初始温度都比进样口温度低，是否就是在利用这个聚焦？固定相聚焦，我的理解是样品在衬管里汽化后进入毛细柱，由于柱子初始温度略低，汽化的样品移动速度就慢，方便固定相不停的吸附-释放汽化的样品。如此，前头的样品就好像被“阻拦”了速度变更慢，后边的样品“撞”入前边的样品里，相当于被“浓缩"了，最后到达检测器就成为一个尖锐的峰。不知道我的理解是否正确。溶剂聚焦，看不太懂。怎么还冷凝？那不就成液体了吗？

固定相聚焦问题的讨论　　我们大概学过范德蒙特方程，知道样品在色谱柱内运行的时候，存在扩展的因素，造成的结果就是色谱峰展宽。　　其实在普通的分析情况下，样品运行过程中同时存在聚焦（或者浓缩）过程，即色谱峰宽变窄的现象。如图1.1所示。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211262222_407376_1604036_3.jpg　　图 1.1 聚焦现象图示　　　　样品进入色谱柱后，在A点的分布宽度较宽，样品随着载气运行的时候，分布宽度逐渐减小，到达B点时，如图中所示，分布宽度比A点要大为缩短。　　为什么会出现这个现象呢？我们放大一下这个图看看。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211262223_407378_1604036_3.jpg　　图中黄色的样品前沿部分接触到的是固定相，后沿部分接触到的是包含有一定样品的固定相（或者说接触到更少的固定相，那么后沿部分的保留会弱一点），造成后沿部分相对而言运行的更加快速。那么样品在色谱柱中的分布会逐渐变窄。同时，很明显的，样品在不断变窄的分布空间内也逐渐被“浓缩”。（最好也关注一下溶剂的位置。）　　　　尤其是气相色谱使用程序升温的时候，这个现象就会很明显。　　我们看一个液相色谱的例子。在使用制备色谱的时候，一般进样量会比较大，如果样品浓度较高，进样的时候，会伴随着系统压力的上升，而且这个压力会逐渐下降的，显然并非系统发生了永久的堵塞。我们可以用上面的两个图来说明一下。　　　　由于进样后，溶剂很快运行，样品被保留和浓缩，可能会造成样品在短时间内不能完全溶解在流动相中，造成样品析出，致使系统压力上升。　　常见的程序升温分析，一般会设定较低的柱温，是在利用聚焦作用（其实主要是溶剂聚焦，限于篇幅，还是改日讨论吧）。　　我们在进样气体样品的时候，比如顶空、吹扫捕集进样，一般会设定比较低的柱箱起始温度，对于保留时间较短的组分会得到比较好的色谱峰，其实也是在利用聚焦现象。

保留间隙管在溶剂聚焦过程中的作用在使用不分流进样的时候，由于进样口内载气流速较低，样品气化之后进入色谱柱的时间较长，或者说样品起始谱带较宽。较宽的起始谱带不利于获得较窄的组分色谱峰，对分离而言是不利的。所以在不分流进样中，经常需要使用聚焦技术。溶剂聚焦是比较常用的方法，其中经常会用到保留间隙管。下面图示样品中的容易气化组分和不易气化组分在保留间隙管内的聚焦过程。沸点较低的组分聚焦的过程:程序升温分析的时候，起始柱温一般低于溶剂沸点的20-40度，样品进入色谱柱之后，在色谱柱入口（保留间隙管）凝结下来，形成一个较宽的溶剂分布带。由于载气的不断推动，溶剂液膜向前移动，低沸点的组分逐渐重新溶解在液膜之中。在载气的推动之下，随着溶剂的不断气化，溶剂的分布宽度逐渐减小。（这是聚焦的主要原因）同时，如果液膜运行到色谱柱头，液膜由于分配系数的变化，液膜分布宽度变窄。液膜的前沿受固定相作用而运行变慢，后延运行速度不变，那么液膜总体的长度也会变短。（聚焦的次要因素）重新溶解在液膜中的组分也同时得到了聚焦。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212220912_414412_1604036_3.jpg不易气化组分的情况：当保留间隙管中的溶剂带气化，高沸点组分在管中也形成了不太规则的分布带。随着载气的推动，高沸点组分运行进入到色谱柱头，也发生了类似的聚焦现象。分布带的前延部分运行速度降低，后延部分速度不变，于是在色谱柱头，完成聚焦。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212220912_414413_1604036_3.jpg

一般先BF用目镜聚焦，再上电脑软件点预览，这个时候因为光源不同，所以焦平面不同，必须还得再次调整焦距聚焦！ 不知道最近为什么，再次聚焦的时候电脑图片刷新很慢（以前也慢，但还在可忍受的范围之内），导致长时间开激光以至荧光猝灭。 1、用目镜明场观察的时候太亮了，就算灯泡打到最小还是很亮，（很伤眼睛）是不是光路上的减光片少了。我就看见一个D片 ND片 。2、为什么图片刷新比以前慢了。特别是刚开机那会，猜测是不是激光不稳定？机器的cpu 内存都还有很多剩余，电脑的反应也很快，是不是显存不够？应该不会呀，以前还蛮好的。 显微镜是A1:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/02/201402140857_490148_2535415_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/02/201402140857_490149_2535415_3.jpg

[color=#dc143c]转眼间，2009年已经过去了，回首2009年，“重金属污染”、“大型仪器企业并购”、“资本运作上市”、“实验室安全”等方面的事件给我们留下了深刻的印象，也给我们留下了太多的思考。因此，仪器信息网以“特别聚焦”的方式，对2009年中国科学仪器及分析测试行业内发生的或有很大影响的一些大事件进行了回顾、梳理，希望能够“见微知著”，对大家有所启示。也欢迎各位坛友对2009行业内的事件进行点评～[/color][url=http://www.instrument.com.cn/news/subject/index.asp?SubjectID=66][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001081406_195245_1622715_3.jpg[/img][/url]

驰奔扫描电镜操作，最简单，但最重要的操作就是聚焦-Focus. 正确聚焦是调节其他相关参数的基础。很多情况下，不能正确的聚焦，造成图像不清。自动聚焦可以解决不能正确聚焦问题，实际上是错误的理解，有时也被某些人用来引导暗示客户，这往往成为忽悠人的一种策略。扫描电镜自动聚焦很多情况下是粗聚焦。总之手动聚焦不清楚，自动一定不会清楚。下面主要介绍手动聚焦, 当然也是最精细的聚焦。首先，扫描电镜是齐焦系统，即高倍正确聚焦，降低放大倍数，焦点不会改变。因此使用尽可能可识别的高倍聚焦操作是快速的正确聚焦方法。因为，高倍情况下焦深变小，对聚焦的正确与否，反应更灵敏。其次，要消除象散。象散的存在，往往会干扰正确聚焦。判断象散，需要较为丰富的图像细节，而象散现象又不被图像干扰，才是好的聚焦点。如果把象散在拉伸时的位置看做正确聚焦点，再进行象散矫正，图像会更模糊。再次，高倍高分辨成像，往往受限于信噪比差。反差小的细节，将被噪音覆盖，这时候要找到小反差基本等高的大反差部位作为聚焦点。也可以加大束斑尺寸，使用较高的SPOT值，获得比较良好的信噪比，在低分辨条件下对小反差样品进行聚焦消除象散操作，最后获得正确聚焦，然后再把SPOT值降低，获得高分辨的正确聚焦。改变SPOT值，如果无WD补偿机制，图像将不再正确聚焦，最后，在高倍正确聚焦情况下，将放大倍数降低到想要的放大倍数，自然可以看清同一个高斯焦面上下一定景深的所有的形貌。如下图低倍图像。需要说明，扫描电镜成像有多重缺陷，其中荷电严重部位，有边缘效应严重部位，不适合作为正确聚焦调节点。