细胞坏死

细胞凋亡和细胞坏死的本质均为细胞死亡，但我们可以通过其发生机制和病理形态学方面所表现出的特征加以区别。细胞凋亡指的是细胞程序性的死亡，不会发生细胞膜损伤；细胞坏死则被认为是因病理而产生的被动死亡，会伴随发生细胞膜损伤，导致细胞质因子的释放并引起炎症反应。进行抗肿瘤药物筛选过程中，区分引起的是细胞调亡和细胞坏死变得非常重要，因为后者的主要副作用是引起细胞的炎症反应。这里我们介绍了利用SpectraMax Paradigm（Molecular Devices）和 Vybrant 凋亡检测试剂盒（Invitrogen）进行这方面的研究。

细胞凋亡和细胞坏死的本质均为细胞死亡，但我们可以通过其发生机制和病理形态学方面所表现出的特征加以区别。细胞凋亡指的是细胞程序性的死亡，不会发生细胞膜损伤，细胞坏死则被认为是因病理而产生的被动死亡，会伴随发生细胞膜损伤，导致细胞质因子的释放并引起炎症反应。进行抗肿瘤药物筛选过程中，区分引起的是细胞调亡和细胞坏死变得非常重要，因为后者的主要副作用是引起细胞的炎症反应。这里我们介绍了利用SeptraMax Paradigm（MolecularDevices）和 Vybrant 凋亡检测试剂盒（Invitrogen）进行这方面的研究。

细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。

人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)检测试剂盒人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)4)检测试剂盒AIL)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)4)检测试剂盒AIL)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)4)检测试剂盒AIL)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)4)检测试剂盒AIL)抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)4)检测试剂盒AIL)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)4)检测试剂盒AIL)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)检测试剂盒人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)检测试剂盒人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ))))R4)检测试剂盒AIL)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ))))R4)检测试剂盒AIL)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ))))R4)检测试剂盒AIL)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ))))R4)检测试剂盒AIL)抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ))))R4)检测试剂盒AIL)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ))))R4)检测试剂盒AIL)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)检测试剂盒人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)抗原、生物素化的人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)检测试剂盒人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3))R4)检测试剂盒AIL)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3))R4)检测试剂盒AIL)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3))R4)检测试剂盒AIL)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3))R4)检测试剂盒AIL)抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3))R4)检测试剂盒AIL)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3))R4)检测试剂盒AIL)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)检测试剂盒人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)R4)检测试剂盒AIL)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)R4)检测试剂盒AIL)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)R4)检测试剂盒AIL)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)R4)检测试剂盒AIL)抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)R4)检测试剂盒AIL)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)R4)检测试剂盒AIL)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)检测试剂盒人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)))R4)检测试剂盒AIL)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)))R4)检测试剂盒AIL)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)))R4)检测试剂盒AIL)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)))R4)检测试剂盒AIL)抗原、生物素化的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)))R4)检测试剂盒AIL)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)))R4)检测试剂盒AIL)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)ELISA试剂盒试验原理本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被肿瘤坏死因子α诱导蛋白3（TNFAIP3）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α诱导蛋白3（TNFAIP3）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

在悬浮细胞的培养过程中，根据整体细胞生长分裂的状况可以将整个细胞培养周期分为四个时期：潜伏期、对数生长期、稳定期、衰亡期。进入对数生长期的时候是细胞分裂最旺盛的时候，细胞活性也是最高，随着分裂次数的增加，细胞代谢产物增加，细胞密度增大，到了对数生长期后期有一小部分细胞会出现凋亡的迹象。

游离DNA (Cell-Free Circulating DNA，cfDNA)是指来自细胞凋亡或坏死，游离于细胞外的DNA片段，广泛存在于人类的血清、血浆、脑脊液、尿液或唾液当中。

本文介绍了使用PerkinElmer® RamanStation™ 400F拉曼光谱测绘在体外监测干细胞成骨分化的方法。结果表明：拉曼光谱使样品分析变得更为快速，并显著提高研究的可靠性。

在肿瘤免疫学领域，单细胞技术可以帮助科学家们更好地了解肿瘤细胞的生长和扩散机制，以及免疫系统如何识别和攻击肿瘤细胞。然而，组织样本单细胞悬液制备是单细胞测序实验中至关重要的工作，其质量好坏直接影响了后续建库的成败以及测序数据产出质量。因此，单细胞悬液制备除了需要有经验丰富的人员来进行指导/操作，还得依靠靠谱的单细胞悬液制备仪来助力。

心肌梗死后细胞死亡导致的功能性心肌细胞的丧失对于随后的心室重构、心功能障碍和心力衰竭最为关键。大量研究表明，自噬失调可能导致心肌细胞死亡。然而，自噬失调介导的细胞死亡的潜在机制仍不清楚。本文研究表明，在体内和体外对心肌缺血性损伤的反应中，自噬活性迅速增加，但随后是受损的自噬降解过程，这由到心肌梗死后12周的持续较高水平的beclin1 所证明，同时，LC3 和p62 的积累增加。串联mRFP- GFP-LC3 腺病毒和溶酶体抑制剂氯喹的结果都支持缺血损伤诱导的缺陷性自噬。重要的是，我们发现受损的自噬流，不仅由自噬抑制剂绿奎诱导，也由beclin1 敲除遗传学诱导，上调RIP3 的表达，并加重OGD 诱导的心肌细胞凋亡和心功能障碍。同时，心脏特异性beclin1 过表达上调自噬部分改善了心梗后的心功能障碍。此外，通过强制心脏特异性过表达RIP3 引起的坏死性激活加重了坏死性心肌细胞死亡、MI 后心脏重塑和心脏功能障碍，但所有这些都可以通过RIP3 敲除抑制坏死而得到改善。总之，这些结果表明自噬功能障碍介导的神经细胞凋亡在机械上导致心肌梗死后心肌细胞丢失、心室重构不良和进行性心力衰竭。抑制坏死可能是预防梗死后心脏重构和心力衰竭的潜在靶点。

L-半胱氨酸是一种氨基酸类解毒药，它参与细胞的还原过程和肝脏内的磷脂代谢，有保 护肝细胞不受损害，促进肝脏功能恢复和旺盛的药理效应。主要用于放射性药物中毒、重金 属中毒，锑剂中毒，亦可用于肝炎、中毒性肝炎、血清病等，并能预防肝坏死。用旋光度法 测定其含量简单易行、快速准确。

一、介绍L-半胱氨酸是一种氨基酸类解毒药，它参与细胞的还原过程和肝脏内的磷脂代谢，有保护肝细胞不受损害，促进肝脏功能恢复和旺盛的药理效应。主要用于放射性药物中毒、重金属中毒，锑剂中毒，亦可用于肝炎、中毒性肝炎、血清病等，并能预防肝坏死。用旋光度法测定其含量简单易行、快速准确。

xCELLigence RTCA 不仅可以评估针对多种血液瘤的免疫疗法的效价，还可以在生理相关效靶比下检测血液瘤细胞的破坏动力学。与传统检测方法相比，此方案的工作量更少。将血液瘤靶细胞接种并粘附在经预包被的 E-Plate 中，然后加入效应细胞，并在几天内非侵入性地检测癌细胞破坏动力学。自动连续采集数据。阻抗数据的定量和实时特征使得能够轻松比较不同免疫疗法和不同剂量之间的效价。使用这种表面粘附方法，多种效应细胞（PBMC、NK、CAR-T，以及双特异性 T 细胞 (BiTEs) 等生物分子）靶向肿瘤细胞表达的 EpCAM 蛋白，并阻断针对免疫检查点抑制剂 PD-1 的抗体（Cerignoli 等，2018）。xCELLigence 平台非常适合血液瘤的效价评估，能够为开发的免疫肿瘤疗法提供高重现性的定量评估以及简单的工作流程。

一般注射药品中会添加乳化剂，而常用的乳化剂大豆磷脂、蛋黄卵磷脂等中含有溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）和溶血磷脂酰胆碱（LPC）两种物质。这两种物质具有较强的表面活性，其浓度较高时容易引起红细胞膜破裂，从而引起溶血或细胞坏死现象。因此按照新版《中国药典》规定，中/长链脂肪乳注射液、丙泊酚注射液等注射剂均将其作为影响质量的主要杂质进行质控。

一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。

干细胞是异质性非常明显的细胞，对干细胞分析必须进行单细胞层面的分析，才能解析干细胞研究的关键问题。之前技术集中在基因水平，Milo是第一款可以在蛋白水平提供解决方案的系统。

扩展对金属在细胞生物学中的作用的了解是一个新兴的研究领域。许多元素对细胞健康至关重要，元素不平衡、缺乏或过量可能会破坏自然细胞过程。用于测量细胞中金属的传统整体性分析方法依赖于样品溶解、提取或消解，然后利用原子光谱进行分析。这些样品前处理步骤破坏了细胞结构，因此报告的金属浓度结果为数千个细胞的平均值。在单细胞 ICP-MS (scICP-MS) 中，样品溶液中包含的完整细胞被雾化，各个细胞悬浮在气溶胶液滴中。使用与通过 ICP-MS (spICP-MS) 进行单纳米颗粒分析的成熟方法类似的方法将各个细胞引入等离子体中。

通常来说，冻存细胞都会有一部分细胞死亡，所以冻存剩下的活细胞数量才是决定细胞复苏后能否正常养起来的关键。一般冻存不容易死的细胞数量每管在100-200万就够了，一些冻存很容易死的细胞，比如NK92、THP-1、SF9等细胞数量要稍微高点，300-400万左右为宜。冻存液一般1ml左右每管，这个基本每个实验室都差不多。

近几年来，3D（three dimensional）细胞培养系统开始成为生物学研究新的研究方法。使用3D系统培养系统能更好的模拟生物体内的真实生理环境，而2D（传统的贴壁培养）细胞培养系统不能有效的模拟细胞在生物体内的生理环境。3D细胞技术有很多种方法，使用多细胞形成的细胞团是其中主要的研究应用之一。细胞团是微小的细胞聚集簇，可以用来研究3D情况下向外生长的情况（细胞出芽）。

人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)检测试剂盒人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)抗原、生物素化的人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

在存在或不存在免疫球蛋白 G 同种型特异性抗体的情况下，检测肿瘤细胞（作为靶细胞）对自然杀伤 (NK) 细胞活性（作为效应细胞）的反应，以确定能否使用 Agilent xCELLigence 系统研究细胞介导的细胞毒性（依赖于特异性抗体的细胞介导的细胞毒性 (ADCC)）。结果表明，在单层粘附肿瘤细胞上添加 NK 细胞悬液并未导致阻抗或细胞指数 (CI) 产生变化，因为 NK 细胞并不接触底层生物传感器。但是，这些非粘附 NK 细胞分泌的穿孔素和颗粒酶激活了 Caspase，导致肿瘤细胞凋亡。功能异常和垂死的肿瘤细胞脱离生物传感器，从而减少了生物传感器表面上存活和粘附的细胞数量。我们的发现为 Agilent xCELLigence 系统能够用于动态实时检测细胞介导的细胞毒性和特异性抗体的影响提供了令人信服的证据。

有限稀释是一个普遍接受的建立单克隆性的方法，它基于统计概率因此只有很少一部分（ 10-30% ）的微孔能被接种单个细胞。流式细胞分选是另一种传统的克隆方法，它可以高效地接种单个细胞至微孔内，但是液体剪切力会对被分选细胞的活率造成不可忽视的影响1-2 。此外，仪器维护和培训产生的高昂成本对一些资源有限的用户造成障碍。因此，急需高性价比的细胞株开发流程和高效的克隆方法。CloneSelect™ Single-Cell Printer™ f.sight™ （ f.sight ）被开发用于满足这些需求， 它可以柔和地接种单个细胞至微孔，同时记录整个细胞接种过程，提供单克隆性的图像证据以及优异的接种后细胞生长用于细胞株开发。

CloneSelect单细胞分离系统（CloneSelect Single Cell Printer）采用类似喷墨打印的技术，柔和地产生包裹细胞的液滴无接触地直接分配到微孔板中（图1）。同时，该系统借助智能图像分析，确认细胞数目，分析细胞的形态（大小和圆度）及荧光强度，联动的真空装置将不符合要求的液滴（如空液滴或者含多个细胞的液滴）直接吸走，而符合要求的细胞液滴则分配至微孔板，从而实现对单个细胞的分选和接种。单细胞分离系统是一种可比移液器操作的柔和的单细胞分离技术，而流式分选由于高的液体剪切力和电压的影响，会降低敏感细胞和部分受损细胞（如电转后的细胞）的成克隆率，因此单细胞分离系统更适用于基因工程细胞的克隆，维持细胞活力，并提供直接的单克隆性图像证据。