细胞坏死

细胞程序性死亡 概念：细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自-杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。 凋亡细胞的主要特征是(参见表15-2)：①染色质聚集、分块、位于核膜上，胞质凝缩，最后核断裂，细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体 ②凋亡小体内有结构完整的细胞器，还有凝缩的染色体，可被邻近细胞吞噬消化，因始终有膜封闭，没有内溶物释放，故不会引起炎症 ③凋亡细胞中仍需要合成一些蛋白质，但是在坏死细胞中ATP和蛋白质合成受阻或终止 ④核酸内切酶活化，导致染色质DNA在核小体连接部位断裂，形成约200bp整数倍的核酸片段，凝胶电泳图谱呈梯状 ⑤凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。理论意义：程序性细胞死亡在生物发育和维持正常生理活动过程中非常重要.在发育过程中，细胞不但要恰当地诞生，而且也要恰当地死亡。例如，人在胚胎阶段是有尾巴的，正因为组成尾巴的细胞恰当地死亡，才使我们在出生后没有尾巴.如果这些细胞没有恰当地死亡，就会出现长尾巴的新生儿.从胚胎、新生儿、婴儿、儿童到青少年，在这一系列人体发育成熟之前的阶段，总体来说细胞诞生得多，死亡得少，所以身体才能发育.发育成熟后，人体内细胞的诞生和死亡处于一个动态平衡阶段，一个成年人体内每天都有上万亿细胞诞生，同时又有上万亿细胞“程序性死亡”.两者处于一种动态平衡中，使人体器官维持合适的细胞数量得以正常运作的，正是“程序性细胞死亡”机制。(又如蝌蚪尾的消失，骨髓和肠的细生物发育过程中及成体组织中正常的细胞凋亡有助于保证细胞只在需要它们的时候和需要它们活的地方存活。这对于多细胞生物个体发育的正常进行，自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用。)实践意义：如果调节细胞“自-杀”的基因出了问题，该死亡的细胞没有死亡，反而继续分裂繁殖，便会导致有问题或恶性细胞不受控制地增长，比如癌症 如果基因错向不该死的细胞发出“自-杀令”，不让之分裂繁殖，使不该死亡的淋巴细胞大批死亡，便破坏了人体的组织或免疫系统，比如艾滋病。控制“程序性细胞死亡”的基因有两类：一类是抑制细胞死亡的 另一类是启动或促进细胞死亡的。两类基因相互作用控制细胞正常死亡。如果能发现所有的调控基因，分析其功能，研究出能发挥或抑制这些基因功能的药物，那么人类就能够敲响癌症和艾滋病的丧钟。当然，这个过程需经过一番艰苦努力，因为线虫只有959个细胞，而人体则有大约1000万亿个细胞。

近日，中国科学院上海营养与健康研究所研究员章海兵团队在Cell Death and Differentiation上在线发表题为Caspase-8 auto-cleavage regulates programmed cell death and collaborates with RIPK3/MLKL to prevent lymphopenia的研究成果。该研究揭示了细胞凋亡起始蛋白caspase-8的自我剪切抑制细胞程序性坏死并协同坏死关键蛋白RIPK3/MLKL抑制淋巴细胞减少的免疫缺陷性疾病的发生。 　　细胞程序性坏死（Necroptosis）是一种由激酶RIPK1/RIPK3的级联磷酸化调控的促炎细胞死亡形式。细胞程序性坏死通过MLKL蛋白聚合在膜上打孔裂解细胞膜，执行细胞死亡并释放损伤相关分子模式（DAMPs）触发炎症反应。已知细胞程序性坏死参与调控系统性炎症反应综合征（SIRS）、系统性红斑狼疮及自身免疫性的淋巴增生综合征（ALPS）等多种疾病。因此，对于细胞程序性坏死机制及其生物学意义的研究对于相关疾病的防治具有重要意义。　　Caspase-8是天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶，最初被鉴定为细胞凋亡途径的起始蛋白。近几年的研究表明，caspase-8通过剪切RIPK1来抑制细胞程序性坏死。除此之外，caspase-8还参与细胞免疫稳态调控。临床上Caspase-8基因突变的病人会出现免疫缺陷疾病，并伴有免疫系统紊乱，表现为多器官的免疫细胞浸润并出现肉芽肿。研究发现Caspase-8通过其催化活性发挥功能，并且caspase-8的完全激活需要进行自我剪切。因此，探究caspase-8的自我剪切在调控免疫稳态中的作用机制，对于深入了解caspase-8的作用机制及相关临床疾病的治疗具有重要意义。　　该研究中，研究人员首先发现在细胞程序性坏死刺激条件下，caspase-8的自我剪切出现诱导性增强，因此推断caspase-8的自我剪切可能参与程序性坏死的调控。通过构建caspase-8自我剪切突变小鼠（Casp8ΔE385/ΔE385）发现，该小鼠可以抵抗细胞凋亡诱导的急性肝损伤，但高度敏感于程序性坏死诱导的全身炎症反应综合征（SIRS），该结果在动物水平证明caspase-8自我剪切可以促进细胞凋亡并抑制程序性坏死。同时，研究人员进一步通过分离原代细胞实验证明caspase-8自我剪切负调控死亡复合体II的形成和稳定，从而抑制细胞程序性坏死的发生。此外，研究人员发现Casp8ΔE385/ΔE385小鼠患有轻微的脾脏肿大及CD8+T淋巴细胞减少性疾病（T cell lymphopenia）。在Casp8ΔE385/ΔE385小鼠中同时敲除坏死关键蛋白RIPK3/MLKL时，Casp8ΔE385/ΔE385Ripk3-/-和Casp8ΔE385/ΔE385Mlkl-/-小鼠出现更为严重的脾脏肿大及淋巴结肿大，其脾脏、淋巴结、外周血以及骨髓中的B细胞和T细胞及其各亚群均出现明显减少，鉴定为淋巴细胞减少的免疫缺陷性疾病（lymphopenia）。研究人员通过减少Casp8ΔE385/ΔE385Ripk3-/-和Casp8ΔE385/ΔE385Mlkl-/-小鼠中另一坏死调控蛋白RIPK1的表达剂量可以逆转上述表型，证明RIPK1在调控淋巴细胞减少疾病中的剂量调控效应。　　该研究发现caspase-8通过自我剪切破坏死亡复合体II的稳定性，进而抑制细胞程序性坏死的发生。同时证明了caspase-8通过自我剪切协同坏死调控蛋白RIPK1/RIPK3/MLKL抑制淋巴细胞减少的免疫缺陷性疾病的发生，为免疫系统稳态调控的研究及淋巴细胞减少为特征的免疫缺陷性疾病的治疗提供新思路。　　论文链接

科研成果漫画示意图 韩家淮/陈鑫团队供图　　“到细胞膜城下还有条河，怎么办？”MLKL分子们正着急，突然看到河上有拼成的木块。四个以上为一组，踩好四块以上木块组合成的木筏，就能有机会过河，来到细胞膜城下… … 不要以为这是游戏里设置的各种关卡通关，这是厦门大学科学家的一项重要科研成果的漫画示意图。　　近日，中国科学院院士、厦门大学教授韩家淮和厦门大学副教授陈鑫团队在《自然—细胞生物学》上发表了题为《RIP1-RIP3信号枢纽的马赛克组成及其在细胞死亡中的调节作用》的文章。他们借助单分子定位超分辨成像技术“随机光学重建显微镜（STORM）”，首次揭示了“坏死小体”在细胞中的组织结构特征及其对细胞死亡的决定作用，为相关人类疾病治疗干预提供了新思路。　　细胞是生命体基本功能单元，而决定细胞命运的关键一环是细胞的程序性死亡。在细胞程序性死亡中，有一种形式叫“坏死样凋亡”，起决定作用的一个重要信号处理枢纽就是“坏死小体”复合物。　　研究人员找到了一个精准的观察利器——STORM，并且用这一显微镜实现了对“坏死小体”在细胞中如何精准处理复杂信号进而决定细胞死亡命运的观察。他们发现死亡细胞中的“坏死小体”由初始点团样结构演化为规则的棒状结构的组装模式，并且在该规则棒状结构中呈现出明显的由RIP1/RIP3组成的马赛克状分布。当MIKL四个以上成团，找到四块以上RIP3木块，就能越过“坏死小体”河流，进而靶向细胞膜，导致细胞死亡。　　“该结果在细胞原位揭示了关键信号枢纽纳米尺度上的组织特性及其对信号传递/放大/转换的贡献，为发展特异性抑制程序性细胞死亡的干预手段提供了潜在的切入点，希望我们的发现能够对神经退行性疾病、病原菌感染性疾病的临床应对和治疗有所帮助。”韩家淮说。　　此外，该团队通过对STORM成像全流程进行细致优化，在生物样本上实现了优于常规共聚焦显微镜10倍以上的分辨率（13~18nm定位精度）。这些技术提升让许多原本看不见、看不清的研究对象变得清晰明朗，使原来靠推测得到的结论可眼见为实。　　相关论文信息：https://doi.org/10.1038/s41556-022-00854-7

2月8日，国际知名学术刊物Nature Communications在线发表了韩家淮教授课题组的最新研究成果“RIP1 Autophosphorylation Is Promoted by Mitochondrial ROS and Is Essential for RIP3 Recruitment into Necrosome”，揭示了活性氧簇(ROS)通过直接特异地氧化受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶1(RIP1)上的三个关键的半胱氨酸，进而特异地增强RIP1在S161上的自磷酸化，从而促进坏死小体的形成和程序性细胞坏死的发生。　　程序性细胞坏死是一种高度受调控的细胞死亡方式，它参与到机体的多种病理过程中，因而受到学术界的广泛关注，比如细菌和病毒感染，或者动脉粥样硬化等无菌损伤导致的炎性病变。程序性细胞坏死在生理病理上的重要性决定了它在调控上的复杂性。因此，尽管关于它的机制研究被频繁报道，仍然有许多重要的科学问题尚未解决。其中，线粒体ROS在程序性细胞坏死中的作用和分子机制，是近20年内该领域一个长期存在且有争议的问题。另一个长期存在的问题是，RIP1作为程序性坏死通路上的核心蛋白，它的激酶活性是行使功能所必需的，但是RIP1的激酶活性在程序性细胞坏死中起了什么样的作用仍然未知。　　韩家淮教授课题组的这项研究表明，这两个科学问题是相关联的。研究人员利用质谱技术首次证实，RIP1通过其上的三个关键的半胱氨酸(C257，C268和C586)直接接受ROS的氧化调控，进而增强激酶活性，发生第161位丝氨酸(S161)的自磷酸化。他们证实了RIP1的激酶活性在程序性细胞坏死中的主要功能是自磷酸化S161，且S161就是人们长期寻找的RIP1上与坏死相关的功能性磷酸化位点。坏死小体的形成是程序性细胞坏死发生的必要复合物，而S161的磷酸化是RIP1有效募集RIP3形成有功能的坏死小体所必需的。由于ROS的产生依赖于坏死小体里的RIP3的功能，因此ROS介导了程序性坏死通路里的正反馈调控。　　韩家淮教授课题组的研究阐明了ROS促进程序性细胞坏死的分子机制，回答了领域内长期存在的两个科学问题，对全面解析程序性坏死机制并协助疾病治疗具有重要意义。　　张荧荧和苏晟为该论文的共同第一作者。该项研究得到了973计划和国家自然科学基金委员会重点和重大研究计划项目的经费支持。　　论文原文链接：http://www.nature.com/articles/ncomms14329

p style=" text-align: justify " 　　 strong 坏死 /strong 是由细胞外部因素(如缺氧)引起的一种细胞死亡形式，它通常与乳腺、结肠、脑、肺、肾和胰腺中迅速生长的恶性肿瘤有关。有效并快速地鉴别肿瘤坏死区域能够提供早期复发或死亡的预后信息，从而帮助癌症的诊断与治疗。 /p p style=" text-align: justify " 　　质谱作为一种高灵敏分析技术可对分析样品进行快速检测，并提供样品组分的质谱轮廓图信息。 strong 解吸电喷雾电离质谱(DESI-MS)技术 /strong 是目前广泛使用的质谱成像技术之一，其结合了质谱技术与成像技术的优势，可用于获取样本组分在空间的分布情况，有利于肿瘤坏死区域的准确识别。为缩短检测时长，本实验辅助使用旋光测定技术实现了DESI-MS对肿瘤切片的快速空间靶向检测分析，使分析时间缩短至2 min。 /p p style=" text-align: justify " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 实验方法 /strong /span /p p style=" text-align: justify " 　　雌性小鼠的乳腺癌肿瘤组织，液氮冷冻后在冷冻切片机上以10 μm厚度切片，固定于载玻片，于-80 ℃贮存待用。 /p p style=" text-align: justify " 　　对10 μm肿瘤切片采用自制旋光成像系统进行旋光测定，根据旋光图像显示的极化异质性区域对组织切片进行靶向DESI-MS成像分析。 strong 采用DESI源与Waters Xevo G2-XS Q-Tof系统 /strong ，喷雾溶剂采用ACN/DMF(v/v 1:1)+150 pg/μL LE，流速1 μL/min，毛细管电压3.6 kV，雾化气压力100 psi，扫描速度100 μm/s，空间分辨率100 μm，负离子模式采集。 /p p style=" text-align: justify " 　　使用沃特世高清成像软件(HDI)处理质谱成像数据。 /p p style=" text-align: justify " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 结果与讨论 /strong /span /p p style=" text-align: justify " 　　图1所示为坏死性乳腺癌肿瘤的DESI-MS成像结果。根据离子成像图以及质谱图，可以看到，已知生物标记物油酸m/z 281.25以及花生四烯酸m/z 303.2主要存在于坏死组织，而肾上腺素酸m/z 331.26主要存在于非坏死组织，这与已有研究结果相匹配 此外，我们还发现m/z 574.48(暂定为[Cer(d34:1) + Cl]-)仅存在于坏死组织，m/z 391.25仅存在于非坏死组织，利用这两种物质的叠加图可以显示整个肿瘤切片的坏死与非坏死区域轮廓图。以上DESI-MS成像数据与H& amp E、Pan-CK染色图像所示的病理学分析数据一致，进一步证实了DESI-MS检测数据的可信度。 /p p style=" text-align: center " img title=" 11111111111.webp.jpg" alt=" 11111111111.webp.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/e607732f-f6fb-4dcb-b7e7-60a7c082c0e1.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　图1.乳腺癌肿瘤切片的DESI-MS成像。(a)肿瘤标记物的离子成像图以及H& amp E、Pan-CK染色图像 (b)非坏死肿瘤组织的DESI-MS平均质谱图 (c)坏死肿瘤组织的DESI-MS平均质谱图 (d)健康乳腺组织的DESI-MS平均质谱图。 /p p style=" text-align: justify " 　　然而，要得到整个肿瘤切片的DESI-MS成像图需耗费较长时间，本实验条件下所耗时长为5 h，因此该检测方法并不适用于术中肿瘤坏死区域的快速识别。这里，我们采用 strong 旋光测定技术 /strong ，根据坏死区域组织结构的改变，测定组织的光学去极化率，从而使DESI-MS分析靶向化，大大缩短分析时间。图2a为肿瘤切片的H& amp E成像，可以看到图2b显示的极化异质性区域与病理学上的坏死区域有很大的关联性。根据偏振图像中的极化异质性区域进行靶向DESI-MS采集，可以得到包含生物标记物的质谱图(图2c)，从而快速鉴别肿瘤坏死区域，如此可将整个分析时间缩短至2 min以内。 /p p style=" text-align: center " img title=" 22222222222222.webp.jpg" alt=" 22222222222222.webp.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/9c5e7c66-ae6e-4a78-8d63-cc42c9c0e4fd.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　图2.组织极化法辅助的靶向DESI-MS分析。(a)肿瘤切片的H& amp E成像 (b)肿瘤切片的偏振成像 (c)图2b中标记位置的单次扫描质谱图，条形图所示为均匀分布在坏死与非坏死区域的150个采集数据中生物标记物m/z 572.48与m/z 391.25的平均峰强度 (d)m/z 572.48的放大质谱图。 /p p style=" text-align: justify " 　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 　总结 /strong /span /p p style=" text-align: justify " 　　DESI-MS质谱成像技术可用于乳腺癌肿瘤坏死区域的准确识别，辅助使用旋光测定技术可以引导DESI-MS进行靶向性的检测分析，从而大大缩短术中的检测时长。 /p p /p

最近，一条关于“蘑菇富集重金属，吃多了会让重金属在肾小管聚集，导致肾坏死”的微博反复流传。这是真的吗?对此，食用菌专家和肾内科医生认为，这种说法有一定道理，但不至于对蘑菇形成恐慌。 　　昨天上午，记者在广埠屯菜市场看到，售卖的蘑菇品种多为平菇、香菇、金针菇，摊主孙女士介绍，销量最好的是平菇、香菇，一天大概可以卖十多斤。正在买平菇的夏女士说，此前在网上看到关于蘑菇富集重金属的报道，可并不担心，因为“没有长期大量吃”. 　　湖北省食用菌协会会长、华中农业大学博导边银丙说，蘑菇是人们对食用菌的俗称，确实有少量食用菌对个别重金属有富集作用，尤其在野生环境中，很难监控，所以不建议食用野生蘑菇。 　　近两年，边银丙在我省进行了食用菌富集重金属的研究和抽样调查，发现有极少数食用菌样品中有部分重金属超标现象：有的农户养殖的黑木耳靠近马路，受汽车尾气影响，其样品中就发现铅超标 而香菇对镉有富集作用，有的香菇样品检测出镉超标。 　　这是不是意味着吃蘑菇不安全?边银丙说不能绝对化，重金属对蘑菇生长没有益处，不存在人为添加问题，多和培养料、生长环境有关。只要培养料、覆盖土壤重金属不超标，蘑菇就不会大量富集重金属。如金针菇、平菇、杏鲍菇的培养料主要是玉米芯，口蘑的培养料主要为稻草，这些培养料少有重金属污染。在他抽样调查中，平菇、口蘑、金针菇、杏鲍菇就没有发现重金属超标现象。 　　重金属对人体肯定有害，但其主要来源不能认定是蘑菇，武汉普爱医院肾内科医生徐艳梅说，长期少量或短期大量接触重金属，确实会聚集在肾小管，人体排出困难，会造成肾脏的病理性变化。但日常生活中，重金属的摄入难以避免，只要不过量，就不会对人体造成损害。

Propidium iodide (PI)和7-aminoactinomycin D (7-AAD)是最常用的死细胞指示剂，可用于荧光显微镜、激光共聚焦、流式细胞仪检测等实验方法。为答谢广大客户对联科的支持和厚爱，联科生物特推出原装进口(Life Technologies)的死细胞染料优惠大酬宾，超低价现货供应PI和7-AAD 死细胞染料。PI通过嵌入碱基与DNA结合，对序列几乎没有偏好性，每4-5个碱基对可结合一个染料。PI也能与RNA结合，通过核酸酶处理可区分RNA和DNA染色。一旦PI与核酸结合，其荧光可增强20-30倍，最大激发光为535nm，最大发射光为617nm。PI为膜不通透性，无法透过活细胞膜，可用于鉴定死细胞或复染及细胞周期检测等。图1 人Jurkat T细胞经Alexa Fluor 488 annexin V和PI染色。人Jurkat T细胞经1 μM camptothecin处理，早期的凋亡细胞磷脂酰丝氨酸(PS)外翻，与Alexa Fluor 488 annexin V(绿色)结合，晚期凋亡细胞和坏死细胞可被PI染色(红色)。7-AAD可与DNA结合，该复合物由488 nm激光激发，最大发射光为647 nm。7-AAD可被活细胞排斥，但也可用于固定破膜的细胞。7-AAD可用于细胞周期检测、死细胞鉴定等实验。7-AAD与DNA的GC区选择性地结合，在多线染色体和染色质中产生不同的带型，用于染色体带型研究。图2 人Jurkat T细胞经10 μM camptothecin处理4h(右图)或未处理(左图)，用流式细胞仪进行分析。Camptothecin处理的细胞具有更高比例的凋亡细胞(A)。L=活细胞；D=死细胞。名称 货号 规格 目录价(￥) 促销价(￥) Propidium Iodide - FluoroPure Grade P21493 100 mg 2210 1000 7-Aminoactinomycin D (7-AAD) A1310 1 mg 1916 800 阅读原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014070008.html

近日，中国科学院院士、厦门大学教授韩家淮和厦门大学副教授陈鑫团队借助单分子定位超分辨成像技术“随机光学重建显微镜（STORM）”，首次揭示了“坏死小体”在细胞中的组织结构特征及其对细胞死亡的决定作用，为人类相关疾病治疗干预提供了新思路。相关论文已在《自然细胞生物学》上发表。超清成像技术让推论“眼见为实”细胞是生命体的基本功能单元，而决定细胞命运的关键一环是细胞的程序性死亡。在细胞程序性死亡中，有一种形式叫“坏死样凋亡”，其中起决定作用的一个重要信号处理枢纽就是“坏死小体”复合物。“坏死小体”在死亡细胞中的结构究竟如何？“坏死小体”如何精准发力决定细胞死亡命运？这些涉及多个核心分子（RIP1/RIP3/MLKL）的招募激活和信号放大/转变等复杂过程。由于细胞体尺寸非常微小，例如哺乳动物细胞一般在几十微米，要观察到其内部“坏死小体”的精准调控机制难度可想而知。在此前的研究中，科学家曾借助常规共聚焦荧光显微镜，观察到细胞死亡过程会产生大小不等的“坏死小体”点状信号，提示了该信号枢纽很可能存在动态组装过程。但“坏死小体”在细胞中是如何精准处理复杂信号，进而决定细胞死亡的始终是一个未解的谜团。韩家淮院士和陈鑫团队借助于蓬勃发展的超分辨成像技术，尝试了多种目前较成熟的技术流派，最终找到了精准观察“坏死小体”运行机制的利器——单分子定位超分辨成像技术（STORM）。研究人员通过对STORM成像全流程进行细致优化，在生物样本上实现了优于常规共聚焦显微镜10倍以上的分辨率（13—18纳米定位精度）。这些技术的提升使许多原本看不见、看不清的研究对象变得清晰明朗，让原来靠推测得到的结论“眼见为实”。“坏死小体”这样杀死细胞在历时8年的研究中，团队成员成功观察到死亡细胞中的“坏死小体”由初始点团样结构演化为直径约50纳米，长度约200—600纳米的规则棒状结构的组装模式，并且在该规则棒状结构中呈现出明显的由RIP1/RIP3组成的马赛克状分布。进一步的观察研究发现，只有马赛克状分布中的RIP3区域满足一定的尺度要求（如四聚体及以上），才能有效地诱导下游效应分子MLKL发生多聚化，进而靶向细胞膜导致细胞死亡发生。同时，通过抑制关键因子RIP1的激酶活性可以阻碍“坏死小体”的有序马赛克样棒状结构的产生，从而抑制细胞死亡。此外，RIP3激酶活性缺失导致的细胞死亡模式转变也有赖于该结构中的RIP1多聚化程度，这提示了团队发现的“坏死小体”马赛克样组织结构很可能是细胞内控制死亡方式的信号选择模块。“该结果在细胞原位揭示了关键信号枢纽纳米尺度上的组织特性及其对信号传递/放大/转换的贡献，为发展特异性抑制程序性细胞死亡的干预手段提供了潜在的切入点，希望我们的发现能够对帕金森病、多发性硬化症等神经退行性疾病、脓毒症等病原菌感染性疾病的临床应对和治疗有所帮助。”韩家淮介绍。有望解析更多生物大分子复合物细胞内数量众多的生物大分子复合物都是控制生命活动的核心功能枢纽，如DNA复制/转录起始复合物和细胞器膜上的各类转运复合物等。现代生物学的理论基石——细胞学说诞生至今已近两百年，但人类始终无法彻底解析任一细胞在稳态/应激条件下的分子水平精细结构，自然也无法随心所欲地改造/控制细胞，实现保障人类健康和社会进步的宏伟目标。目前单颗粒冷冻电镜技术是解析蛋白质结构的利器，但面对细胞内结构巨大、成分复杂、高度异质的功能复合物，其仍存在较明显局限性。韩家淮院士和陈鑫团队的工作证明纳米尺度光学成像是解析此类大型生物大分子复合物的组织特征和功能模式的可行方案之一。

生物、药物等许多的研究均需要通过观察细胞体积的变化或细胞数目增减的来判断和评估实验的效果。由于细胞所处环境的改变可促使其自身体积做出相应的变化，以便适应改变后的环境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道该种细胞体积变化规律，因此必须检测其体积或细胞数目随条件、时间的变化。 　　细胞的发育与细胞分裂周期级数递增均需要连续不断的细胞增殖。 　　在培养液中正在增殖的细胞在其分裂前其体积将增大至原体积的两倍。然而对细胞发育与分裂的速度作如何调整才能保证细胞体积的不变并不明确。因此，测量细胞的体积的变化对了解与控制细胞的发育和周期非常重要。 　　细胞的死亡 　　细胞的增殖与细胞的死亡之间需要一个精细的平衡以保持足够的细胞数量。该种平衡容许细胞作最佳的状态调节以适应各样机能变化的需求。细胞死亡有两种清晰的机制，坏死与凋亡。坏死是一个病理生理的机制，包括细胞膨胀以及细胞膜破裂而释出内容物。凋亡则是一个程序式死亡的机制。凋亡的特征之一就是细胞收缩。细胞有缺陷的凋亡与过度凋亡，两者同样会导致严重疾病。 　　渗透压的补偿 　　任何种类的细胞都有可能因处于不利环境而死亡。细胞犹如多孔的网筛极易因渗入已溶解于周围环境的化学物而使渗透压受影响。细胞内外环境中该些溶解物颗粒数目的不平衡，将会导致水份透进细胞而使其体积涨大，或者是水份从细胞渗出使其体积收缩。 　　当细胞或微生物遭遇环境的变化，它们都会尝试通过自身调节来适应新的环境。 　　细胞平均体积(MCV)的变化 　　当细胞或微生物遭受环境变化时，它们将通过自身调整以图适应新的环境。一些例子中细胞需要改变自身体积以便达到适合的目标。 　　由贝克曼库尔特公司出品的Multisizer 3 库尔特细胞特性分析仪是目前最权威的细胞体积、细胞计数的分析仪器，应用文献多不胜数。无可逾越的领先技术更使Multisizer 3 成为分辨率最高的仪器。国外的用户统计表明，Multisizer 3 已成为细胞实验室必备的研究工具。 　　自华莱士• 库尔特先生发明 库尔特原理 以来，该原理已广泛应用于材料、生物、医学、制药等众多的领域。目前生物领域的细胞计数标准就是库尔特原理。美国材料实验协会ASTM将库尔特原理定为生物细胞计数的标准(ASTM-F2194)。国际血液学标准化委员会亦指定库尔特原理为计算红细胞与白细胞的标准实验室方法 (Clin. lab. Haemat. 1988. 10, 203-212.)。 　　作为库尔特原理及技术应用的鼻祖，美国贝克曼库尔特公司始终保持着技术领先的优势。† 库尔特计数仪(Coulter Counter)无论在研究还是在质量控制的应用均具有深远的影响力。在权威的研究机构及其发表的学术文献当中，库尔特计数仪均担当着不可或缺的角色。 　　多年来贝克曼库尔特公司在市场上推出了一系列的库尔特计数仪(Coulter Counter)，如：ZM、TA II、Multisizer II等系列型号，为科研与产品控制的实验室颗粒/细胞的检测提供最可靠的分析手段。Multisizer 3 型库尔特颗粒/细胞计数及粒度分析仪为当今所有计数仪、粒度分析仪当中分辨率最高的仪器。 　　库尔特原理(Coulter Principle) 　　又称为电感应区技术。 　　悬浮于弱电解液中的细胞被抽吸而经过一个小孔，因产生外加电压而形成“感应区”。细胞经过小孔时，细胞的体积替代了电解液的相应体积。因相应体积的电解液被替代，小孔感应区产生电压脉冲而导致电阻的改变。脉冲的强度与细胞的体积成比例的关系 。 　　Multisizer 3 先进的DPP 数码脉冲处理器，使测量过程中的数以百万计的脉冲信号无须经压缩而保存。数据因无损失而能实现再分析功能。DPP的功能使得Multisizer 3 能够实时监测样品在分析过程中的原始变化。 　　DPP同样可用于检测细胞体积的改变。在许多的生化过程中细胞体积是一个重要的参考因素。如细胞发育、细胞周期、细胞死亡、渗透压的补偿、致病机理和吞噬作用等。Multisizer 3 可以观测细胞粒径与体积从几秒到几小时内的变化。 　　DPP技术在低温生物学中的应用 　　这是在冷冻过程中受渗透压影响的细胞，其平均体积(MCV)的分布曲线和20秒内连续的脉冲峰值平均值的变化。 　　择任意的脉冲群可以将一个粒度分布“分割”成多重的分布。因此，可获得在分析全程中的某一时段的粒度分布。如图示，可获得细胞的平均直径随时间的变化。 　　使用Beckman Coulter 的Multisizer™ 3 库尔特体积粒度分析仪将能方便而精确地测量细胞平均体积(MCV)的各种变化。

近日研究发现，药理学家已经成功地绘制出心肌细胞的表观基因组。他们希望这一发现引起有关先天性心脏病和慢性心力衰竭的新见解。科学家们在《自然通讯》杂志上发表了相关内容。表观基因组是表观遗传机制的总体，表观遗传机制决定细胞中哪些基因是活跃的，哪些基因是不活跃的。内部或环境条件的变化，如营养、压力、或药物，可以留下表观遗传模式。这样的机制在癌症的发展过程中发挥重要作用，但它对心脏病的意义还不太为人所知。中文名称：人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human mucosae associated epithelia chemokine,MEC ELISAkit中文名称：人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family 中文名称：人血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascuoar endothelial cell growth factor 中文名称：人血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascuoar endothelial cell growth factor 中文名称：人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D 中文名称：人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C 中文名称：人血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor B,VEGF-B 中文名称：人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISAkit 中文名称：人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Vascuolar cell adhesion molecule 1,VCAM-1 中文名称：人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis 中文名称：人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human tumor necrosis factor-related apoptosis-中文名称：人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human tumor necrosis factor-related apoptosis-中文名称：人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human tumor necrosis factor-related apoptosis-中文名称：人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISAkit 中文名称：人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISAkit 中文名称：人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ 中文名称：人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ中文名称：人转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Transforming Growth factor β1,TGF-β1 ELISAkit 中文名称：人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human transforming growth factor α,TGF-α ELISAkit中文名称：人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β 中文名称：人干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISAkit 中文名称：人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Stem cell factor/mast cell growth 中文名称：人可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISAkit 中文名称：人可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISAkit 中文名称：人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human regulated on activation in normal T-cell 中文名称：人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISAkit 中文名称：人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISAkit 中文名称：人神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Neurotrophin 4,NT-4 ELISAkit 中文名称：人的神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：Human Nerve growth factor,NGF ELISAkit 心脏在人出生和发育后起着无可替代的作用。它是胚胎发育形成时的第一个器官，并不断用氧气和营养供应着整个身体所需。心肌细胞的细胞核承担着控制基因表达过程中的中央功能。Ralf Gilsbach博士 和Lutz Hein教授领导的研究小组现在已经开发出一种新颖的方法，他们分离心脏组织中不同类型细胞的心肌细胞的细胞核。科学家们应用下一代DNA测序的方法分离创建高分辨率的DNA甲基化图像的细胞核，该细胞核调整基因活性和所有基因的表观遗传标志一样的最重要的表观遗传机制。这使他们确定在出生过程中打开心脏基因程序的表观遗传开关会引起慢性心脏衰竭。目前研究人员想在微小的组织切片活检中进行表观遗传分析，比如在心导管检查中进行分析

细胞迁移，指的是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。移动过程中，细胞不断重复着向前方伸出突触/伪足，然后牵拉后方胞体的循环过程。细胞骨架和其结合蛋白，还有细胞间质是这个过程的物质基础，另外还有多种物质会对之进行精密调节。细胞的运动有很多种，有生理性运动，如发育过程中的细胞运动，生殖细胞、干细胞的成熟过程中的位置变化。也有病理性变化，如肿瘤的迁移和侵袭。从癌症的产生到转移，血管供给以及分裂增殖都一直是医学和生物学研究的热点。癌症细胞增殖失控，短时间内可以繁殖出大量后代，这样首先会造成生长空间的局促和养分，如氧气的紧张。这样恶性肿瘤内会形成一片坏死区，正如上面在组织损伤里面提到的，机体会尝试“修复”这些损伤。坏死组织会释放出一系列促血管生成因子，如血管内皮生长因子以及各种免疫细胞，如巨噬细胞。巨噬细胞也会释放大量促血管生成细胞因子和生长因子。因此肿瘤的研究伴随着复杂的细胞运动，如肿瘤细胞沿着循环系统的运动，血管内皮细胞和免疫细胞进入肿瘤实体的运动。划痕法是经典的细胞行为学检测方法。在平铺的细胞单层上划出一条痕迹，然后清洗更换培养液后，细胞会从原有位置向划痕处迁移。统计划痕宽度和面积的变化就可以监控细胞迁移的速度和细胞迁移的能力。以前在做划痕实验的时候受到诸多限制：首先微孔板的孔不能太小，孔越小，枪头越难伸进去；其次划出的痕迹边缘歪斜，无法形成一条直线；孔与孔之间的划痕宽度也不均一。这给划痕这个时间梯度的实验带来了很大的困扰。在多次的拍照过程中，由于划痕宽度的差异性对于划痕拍照位置的复位要求甚高。然而随着细胞迁移的发生，细胞的原位的形态和分布也发生的动态变化。所以复位划痕的拍照位置成为就成为了一个力气活：既然无法准确找到，那就全部拍下；既然每个位置宽度不一，那就全部统计。借助MuviCyte™ 长时间活细胞成像系统的划痕套装。轻轻一划，解决全部困扰。借助Scratcher整齐的96针，可以在96孔微孔板底面整齐的划出宽度均一的划痕。借助MuviCyte™ 长时间活细胞成像系统可以盯住一个视野不停的拍。然后生成无抖动的视频。借助专业的划痕分析软件，对划痕宽度、面积、愈合速度进行分析，可以获取的参数包括：划痕面积划痕的覆盖度划痕的宽度划痕的愈合速度相对划痕密度对于原始细胞区域、原始划痕区域、划痕分界线、迁移后细胞的区域进行精准的划分，保证分析结果的精确。轻松的完成整个实验，再也不用熬夜拍划痕了。MuviCyte™ 已于2020年1月1日全新上线，借助它的多荧光通道和多种物镜选择，可以完成多种复杂的复杂细胞模型的拍摄和观察，在肿瘤免疫、干细胞等多个领域都有重要的应用。扫描下方二维码或点击下载链接，即可下载珀金埃尔默MuviCyte™ 活细胞成像系统相关资料。下载链接: http://hyw3rjq7ezkfsnvu.mikecrm.com/naj9QZD

不仅医疗机构，连一些美容机构也打着“干细胞”的旗号进行宣传和治疗。 　　宣称能治疗几十种疾病，实际仍处临床试验阶段 　　当前，大量的医疗机构打着“干细胞治疗”的招牌，宣称可以治疗各种疑难杂症。干细胞治疗真有这么灵吗?有没有风险?干细胞治疗行业的乱象应如何规范?记者进行了深入调查。 　　近日，有读者反映，有五花八门的医疗机构都宣称，用“干细胞疗法”可以治疗多种疾病，包括肿瘤、肾病、小儿脑瘫、糖尿病、股骨头坏死等非常严重的疾病。 　　众多医疗机构宣称，“干细胞疗法”可治几十种疾病 　　5月4日，记者登录了一家名为“山东省红十字会介入医院”的网站。该网站宣称他们是国内唯一一家干细胞移植专科医院，可治多种疾病。 　　记者以治疗小儿自闭症的名义，电话咨询了该医院的刘医生。刘医生说，神经系统干细胞移植是目前最有效、先进的治疗方法，可以保证安全，但并不能保证治好。 　　她介绍说，对于自闭症的干细胞移植共有五种，按一个疗程4次计算大约3—5万元不等，通常需要1—2个疗程 使用的细胞可以从自身取，也可以由医院提供。 　　记者以“干细胞”为关键词在网络上检索，发现有大量的网站和医疗机构以“干细胞治疗”的名义宣称治疗各种疾病。记者粗略统计，他们宣称能够治疗的疾病达到几十种。网站上还提供了大量的实际治疗案例，以佐证其治疗效果。 　　干细胞治疗实际情况到底如何?记者来到北京一家医院的细胞渗透修复中心进行实地探访。在现场，记者看见几名脑瘫患儿正在等待接受检查。一名从河南带孩子来看病的女士说，她听说这里可以用干细胞治病，但效果如何不是很清楚。 　　记者以老年痴呆症患者家属的身份进行咨询，一位冷大夫告诉记者，用注射干细胞的方法治疗，虽然不能完全恢复到发病前的状态，但是可以实现一定程度的恢复，尤其可控制病情发展。但他并未告知该技术是否处于试验阶段。 　　记者又以治疗“股骨头坏死”的名义，来到北京市大兴区的同安骨科医院进行调查了解。一位姓孙的医生说，治疗时需要注射两次干细胞，费用不会超过两万元。至于已经在该院通过注射干细胞的方法治疗过股骨头坏死的患者有多少，最后取得了什么样的效果，孙医生表示没有统计过。 　　对于干细胞的来源，孙医生表示，可能来自人类胚胎细胞，也可能是羊的胚胎细胞，但自己并不清楚具体来源，会由医院向有关机构购买。 　　除用造血干细胞治疗血液病外，实际上其它治疗仍处临床试验阶段 　　干细胞究竟是什么细胞，真的能治疗那么多疾病吗? 　　据专家介绍，干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是机体的起源细胞，是形成人体各个组织器官的“祖宗细胞”，医学界称为“万用细胞” 干细胞治疗技术，是将已通过临床前安全性研究的干细胞，以不同给药方式移植到病人体内，产生一定的治疗效果的技术。 　　中国医学科学院血液病医院淋巴瘤中心主任兼天津脐带血造血干细胞库主任邱录贵教授介绍说，干细胞主要可以分为胚胎干细胞(全能干细胞)和成体干细胞(组织干细胞)两大类。目前，造血干细胞是研究最深入、临床应用最广泛的干细胞，属于成体干细胞。 　　他说，造血干细胞移植是用于治疗血液系统肿瘤、造血功能衰竭等疾病最有效的方法甚至是唯一有效的方法，也是所有干细胞治疗中最成熟的技术。但是，就目前而言，除造血干细胞移植外，其它类型的干细胞治疗目前仍处于早期(Ⅰ—Ⅱ期)临床试验阶段，比如用干细胞治疗糖尿病、心肌梗塞、脑瘫、肝硬化等都仅限于严格设计的Ⅰ—Ⅱ期临床试验阶段，其确切的疗效和安全性有待验证，尚不能在临床上广泛应用。 　　对于干细胞治疗成本，中国医学科学院血液学研究所教授韩忠朝说，如果用脐带血提取的干细胞，每一针的成本大概在1000元左右，如果用已经制备成的干细胞注射液，则成本要提高好几倍。 　　他还说，很多医疗机构会向一些生物技术公司购买干细胞，也有的大医院会自己制备，但是这些机构都没有统一的技术标准，都是按自己的技术标准来进行制备。 　　干细胞治疗有滥用嫌疑，采取实验性疗法应让患者知情同意 　　据了解，今年1月，卫生部发出《关于开展干细胞临床研究和应用自查自纠工作的通知》，停止未经卫生部和国家食药局批准的干细胞临床研究和应用活动。而有关专家表示，目前卫生部并未批准过除造血干细胞治疗血液病以外的干细胞临床治疗。 　　而目前大量医疗机构宣称可以用干细胞治疗各种疾病，邱录贵对此认为，大多是利用这一时髦概念和干细胞广泛应用前景进行牟利的一种炒作。而且，很多医疗机构开展的细胞免疫治疗，也有滥用的趋势。 　　此外，还有很多美容机构也宣称，可为顾客提供干细胞美容服务。记者打电话咨询了一家北京的美容医疗机构，客服人员说，干细胞美容收费为39.2万元，将为顾客注射从德国黑山羊胚胎中提取的鲜活细胞来美容，“其实就是打羊胎素”。 　　对此，韩忠朝认为，“打羊胎素”美容根本不属于干细胞治疗，甚至“注射从德国黑山羊胚胎中提取的鲜活细胞”都是被欧盟禁止的，因为欧盟从未批准过将羊胎素应用于人体。 　　韩忠朝认为，虽然以干细胞疗法治疗一些疾病，从临床上来讲有一定的科学依据。但是，这一技术的有效性和安全性还需要临床实验的支撑。而且，并非所有类型的干细胞用于治疗时都比较安全，比如胚胎干细胞就可能会在体内形成肿瘤。 　　那么记者实地探访的同安骨科医院等是否具干细胞治疗资格?北京大兴区(微博)卫生局一位工作人员表示，同安骨科医院是正规注册的医院，但是区县卫生局没有审批干细胞治疗资质的资格，建议去公立的三甲以上医院治疗，不要随便在这种小医院治疗。 　　北京市公共卫生咨询电话12320的一位工作人员也表示，根据卫生部的规定，干细胞治疗属于“第三类医疗技术”，认为其“涉及重大伦理问题，安全性、有效性尚需经规范的临床试验研究进一步验证”，要求此技术若用于临床治疗须经卫生部审批。 　　但也有专家认为，虽然卫生部没有批准，但不代表医院完全不能采用干细胞疗法。 　　根据《执业医师法》，当医生认为现有的医疗技术很难有效治疗时，可以采用有科学依据的新技术，进行实验性临床医疗。但专家同时强调，这种实验性临床医疗的临床方案要通过医院的伦理委员会审查批准，并且在患者知情同意的情况下进行。 　　新技术发展呼唤监管和保护，专家建议规范细胞来源和质量 　　“从国内外的情况来看，干细胞技术作为一种先进技术正在快速发展，研究应用前景相当可观，患者需求也很旺盛。”韩忠朝说，但目前国内出现的大量干细胞治病宣传，显然有悖于技术发展实际，应加强规范。 　　他还认为，对于新技术发展最好的保护和促进，就是统一和规范管理。为此，他建议，干细胞技术的相关临床实验，应由卫生部门或药监部门牵头组织，并在该领域颁布统一的技术标准，实施严格的资质审核。 　　邱录贵也认为，监管部门责权不明是干细胞治疗失控的原因之一。目前美国干细胞治疗临床应用由食品药品监督管理局(FDA)管理，而我国则没有相关的规定。 　　另外，规范干细胞治疗的一个重要环节是干细胞的来源和制备标准。韩忠朝建议，国家应成立一个细胞产品审批中心，对全国的细胞产品进行统一审批，确保细胞产品的安全与质量。 　　专家还提醒说，要认识到干细胞技术仍处于试验和临床研究阶段，要接受干细胞治疗，应先向有公信力的权威医疗科研机构咨询。

细胞命运决定是生命个体的生死决定，对所有的生命个体都至关重要。神经细胞的过早衰亡导致神经退化性疾病，肿瘤细胞的死亡逃逸奠定了肿瘤的发生发展。研究细胞的生死决定几乎涵盖了所有的重要生命活动和人类重大疾病。珀金埃尔默可提供从无标记到多标细胞组学智能解决方案，以及从2D到3D的飞跃模拟生理微环境方案。更多信息请关注珀金埃尔默市场开发经理张薇的报告。时间：2019年10月13日13:00–13:15地点： 上海交通大学医学院东院懿德楼报告题目： 在细胞表型3.0时代，助您更深入了解细胞命运为进一步凝练科研方向，聚焦国际前沿科学问题，上海交通大学医学院联合上海交通大学医学院联合细胞分化与凋亡教育部重点实验室、癌基因与相关基因国家重点实验室和《NEJM医学前沿》(《新英格兰医学杂志》中文版)，于2019年10月11日-14日，在上海交通大学医学院懿德楼召开“细胞命运决定与人类疾病国际研讨会”。本次研讨会将邀请细胞命运决定国际前沿领域（凋亡，自噬，坏死，衰老及肿瘤代谢）国际顶尖的科学家以及研究人员共聚一堂，旨在探讨细胞命运决定的最前沿、最激动人心的科研方向。会议详情请点击链接：http://www.cfdchina.org关于珀金埃尔默：珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn。

中国细胞生物学学会细胞死亡研究分会2021年第一届学术年会将于2021年6月2-5日在浙江桐庐海博大酒店（二楼桐庐会堂A厅）举办，此次大会由中国细胞生物学学会细胞死亡研究分会主办，浙江大学、上海市细胞生物学学会和细胞学会会展部联合承办。北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次会议，我们将在6号展位恭候您的参观咨询。程序性细胞死亡是生物体最基本的生命活动。越来越多的证据表明程序性细胞死亡的方式具有多样性，以细胞凋亡及程序性细胞坏死为代表的多种细胞死亡方式广泛参与生物体发育和疾病过程，并扮演不同的角色。全面系统的研究多种细胞死亡方式，能够推动对不同细胞死亡方式机制的深入了解，为细胞死亡相关疾病的临床诊治提供重要依据。详情请登录：https://www.cscb.org.cn/meeting/celldeath2021/查看。细胞死亡实时形态学监测全电动化解决方案Revolution正倒置一体电动化智能显微成像系统☑ 电动化智能程序：电动追焦，锁焦，多点样品导航和重访。☑ 高清晰全景图像： 双sCMOS相机，多焦面叠加，多视野整合，多维成像。☑ HYPERSCAN高速：同步无刷直线伺服电机和相机，数秒钟完成全景扫描。☑ 卓越的光学性能：大视野，大景深，多物镜、多荧光立方可选。☑ 一体化机身结构：正倒置一体，全能型显微镜，方便安放和运输。☑ 人性化数据交互：互联网+现场和远程实时共揽、延时摄影和图像分享。细胞死亡信号通路及激活和抑制因子数字PCR解决方案naica® 全自动微滴芯片数字PCR系统数字PCR技术(Digital PCR)无需标准品和标准曲线即可对起始样品中靶标核酸进行绝对定量。深蓝云展台产品展示naica® 下一代数字PCR平台naica® 全自动微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成由25,000-30,000个微滴组成的单层二维阵列，该单层微滴阵列形成后直接进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而对起始核酸浓度进行绝对定量。仅需2.5小时即可获取结果。▲ naica® 微滴芯片数字PCR系统Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；无传统目镜设计，拥有明场，相衬，荧光，偏光等观察方式，可兼容活细胞观察，病理切片，免疫组化，免疫荧光，荧光原位杂交等。▲ Echo正倒置一体显微镜Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。▲ Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统深蓝云生物科技将携带相关产品亮相此次大会，恭候您的参观咨询！与您不见不散——展位：6号

• Inara Aguiar来自生物纳米光子系统实验室（BIOS）、EPFL和日内瓦大学的研究人员开发了一种光学成像方法，可以在空间和时间上提供细胞分泌物的四维视图。通过将单个细胞放入纳米结构镀金芯片的微孔中，并在芯片表面诱导一种称为等离子体共振的现象，他们可以在分泌物产生时绘制分泌物的图谱。这项研究发表在《自然生物医学工程》（Nature Biomedical Engineering ）杂志上，详细介绍了细胞的功能和交流方式，有助于药物开发和基础研究。芯片上的单个单元。（图片来源：BIOS EPFL）细胞分泌物（即蛋白质、抗体和神经递质）在免疫反应、代谢和细胞之间的交流中起着至关重要的作用。了解细胞分泌物的过程对开发疾病治疗至关重要；然而，现有的方法只能量化分泌物，而不能提供其产生机制的任何细节。BIOS负责人Hatice Altug表示：“我们工作的一个关键方面是，它使我们能够以高通量的方式单独筛选细胞。对许多细胞平均反应的集体测量并不能反映它们的异质性……在生物学中，从免疫反应到癌症细胞，一切都是异质性的。这就是为什么癌症如此难以治疗。”筛选细胞分泌物该方法包括一个1cm2的纳米等离子体芯片，由数百万个小孔和数百个用于单个细胞的腔室组成；该芯片由覆盖有薄聚合物网的纳米结构金基底组成。用细胞培养基填充腔室以在测量过程中保持细胞存活。Saeid Ansaryan说：“我们仪器的美妙之处在于，分布在整个表面的纳米孔将每个点都转化为传感元件。这使我们能够观察释放蛋白质的空间模式，而不考虑细胞的位置。”使用这种新方法，可以评估两个重要的细胞过程，细胞分裂和死亡。此外，还对分泌精细抗体的人类供体B细胞进行了研究。研究小组可以看到两种形式的细胞死亡过程中的细胞分泌，细胞凋亡和坏死。在后者中，内容以不对称的方式释放，产生了图像指纹——这是科学家首次能够在单细胞水平上捕捉到细胞特征。由于测量是在营养丰富的细胞培养基中进行的，因此与其他成像技术一样，它不需要有毒的荧光标记，并且所研究的细胞可以很容易地回收。根据作者的说法，“该系统的多功能性和性能及其与粘附细胞和非粘附细胞的兼容性表明，它可以为全面了解单细胞分泌行为铺平道路，应用范围从基础研究到药物发现和个性化细胞治疗。”原始出版物：Ansaryan, S., Liu, YC., Li, X., et al.: High-throughput spatiotemporal monitoring of single-cell secretions via plasmonic microwell arrays. Nat. Biomed. Eng. (2023) DOI: 10.1038/s41551-023-01017-1作者简介Inara AguiarInara是一位拥有无机化学博士学位的科学编辑和作家。在获得计算化学博士后后，她开始在化学、工程、生物工程和生物化学领域担任科学编辑。她一直在几家科学出版商担任技术作家/编辑，最近加入威利分析科学公司，担任自由职业内容创作者。本文来源：Real-time nanoplasmonic imaging of cell secretions——New nanoplasmonic imaging system allows spatiotemporal monitoring of single-cell secretions。Microscopy Light Microscopy ，13 April 2023供稿：符 斌，北京中实国金国际实验室能力验证研究有限公司

T 细胞可以保护人体免受病原体侵害，但一项在小鼠身上进行的研究表明，T 细胞也可能是加速衰老的元凶。而通过阻断细胞引起的炎症或增加关键代谢分子的供应，可以减轻小鼠体内一些与衰老相关的症状，该研究思路可能使老年人受益。该研究是 “把代谢、炎症和衰老直接联系在一起的绝佳结果”。澳大利亚墨尔本皇家理工大学免疫学家凯丽 奎恩表示 “他们做的工作非常彻底”，足以证明小鼠迅速老化是 T 细胞导致的。T 细胞会随年龄增长而表现不佳，人的抵抗力也会因此变得越来越弱，这是老年人更易受感染、对疫苗反应更差的原因。T 细胞表现不佳的原因之一是其内部 “发电厂”——线粒体因年龄渐长而出现故障。但 T 细胞不只是反映衰老，还可能正是衰老的成因。老年人出现的全身慢性炎症就是例子。研究人员指出，炎症会刺激衰老，而 T 细胞会释放炎症因子，触发炎症。为了验证这一假设，西班牙马德里自治大学分子生物学中心的玛利亚 米特尔布伦和同事通过基因编辑方法对小鼠进行处理，使其 T 细胞线粒体中的蛋白质缺失。这一改变会迫使 T 细胞采用效率较低的代谢机制。研究小组发现，出生后 7 个月本应是小鼠的壮年期，但基因编辑小鼠已经比普通小鼠显得更老。它们迟缓、笨拙、肌肉萎缩、虚弱，对感染的抵抗力也更弱。正如许多老年人一般，这些小鼠的心脏都很虚弱，且体内脂肪大量减少。此外，经编辑的小鼠 T 细胞释放出大量炎症因子，这可能是造成动物身体退化的部分原因。其结果表明，免疫系统的确在加快衰老进程中发挥了作用。那么，衰老的时钟有可能往回拨吗？研究者给小鼠服用了一种阻断肿瘤坏死因子 TNF-α（该因子可诱导炎症出现，且由 T 细胞释放）的药物，结果发现小鼠的抓地力有好转，且在迷宫中表现得更敏捷，心脏也更有活力。米特尔布伦等人还提供了另一种化合物，可提升高烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）水平，NAD + 对代谢反应至关重要。通过这一分子，代谢系统可利用细胞从食物中获得能量。通常，随着年龄增长，NAD + 细胞浓度会下降。研究人员发现，采用新方法后，老鼠体内的 NAD + 浓度有所增加，且心脏功能更活跃。面对类风湿关节炎和克罗恩病等，抑制 TNF-α的药物是标准治疗手段。目前，市面上有一些公司出售能提高 NAD + 水平的药物。研究者表示，对这一新方法进行临床试验，可确定靶向 TNF-α或 NAD + 是否能减少衰老带来的负面影响。也有人质疑该研究与正常衰老的相关性。美国西北大学芬伯格医学院生物学家纳夫迪普 钱德尔指出，转基因鼠的线粒体受损程度比老年人更严重，“对大多数人而言，我敢打赌 T 细胞的负面作用没那么大”。但钱德尔也指出，线粒体功能异常的 T 细胞会导致某些人早衰，其在相对年轻时就出现老龄化疾病。巴克老龄化研究所分子细胞生物学家朱迪斯 坎皮西对此表示同意。她说，这项新研究可以帮助人们更好理解免疫系统如何随年龄变化而变化，但 “不知道它在多大程度上模仿了自然衰老”。

自然杀伤细胞（Natural killer cells，NK细胞）是一种固有免疫细胞，通过杀伤靶细胞、诱导靶细胞凋亡或分泌细胞因子来发挥对肿瘤的免疫监视功能。NK细胞不仅在控制血液系统肿瘤及肿瘤转移中发挥关键作用，而且其在实体肿瘤中的浸润水平与患者的预后密切相关。免疫检查点分子（Immune checkpoints）是随着对肿瘤微环境和肿瘤免疫逃逸机制的深入研究，近年发现的一组介导免疫调节的重要分子，对免疫应答的适时中止发挥着重要的作用。　　近日，中国科学院深圳先进技术研究院的研究团队在《Science Advances》杂志发表了题为“TIPE2 is a checkpoint of natural killer cell maturation and antitumor immunity”的论文。研究人员对正常状态下的人和小鼠外周NK细胞进行了单细胞转录组分析，发现NK细胞在功能成熟过程中存在着对应NK细胞从“不成熟”到“成熟”分化过程的几个亚群，并且早前被报道具有介导免疫耐受功能的肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2（tumor necrosis factor-α-induced protein-8-like2，TIPE2）分子伴随着NK细胞的成熟而表达逐渐升高，呈现出与NK细胞成熟相关的表达特征。通过建立NK细胞特异性缺失TIPE2的小鼠模型发现，缺失TIPE2后，NK细胞成熟亚群的水平有提升，且NK细胞在群体水平和单细胞水平均具有更强的效应功能。通过建立小鼠肿瘤模型，进一步发现NK细胞缺失TIPE2之后显著抑制了肿瘤细胞在体内的生长，并伴随着肿瘤浸润NK细胞水平的增加与功能分子表达水平的提高。　　研究表明，TIPE2是负调控NK细胞功能成熟与抗肿瘤免疫应答的检查点分子，靶向TIPE2可能促进基于NK细胞的抗肿瘤免疫治疗策略。　　论文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8443187/pdf/sciadv.abi6515.pdf　　注：此研究成果摘自《Science Advances》杂志，文章内容不代表本网站观点和立场，仅供参考。

Molecular Devices将亮相第十二届国际再生医学和干细胞大会 2018第十二届国际再生医学和干细胞大会（RMSC-2018）将于2018年12月7-9日在中国西安举行，主题为：塑造治愈的新希望。 干细胞和再生医学是近年来方兴未艾的生物医学新领域，具有重大的临床应用价值，其旨在通过干细胞移植、分化与组织再生，促进机体创伤修复、治理疾病。干细胞和再生医学将改变传统对于坏死性和损伤性等疾病的治疗手段，对疾病的机理研究和临床运用带来革的命性变化。近年来，干细胞和再生医学领域国际竞争日趋激烈，已成为衡量一个国家生命科学与医学发展水平的重要指标。 Molecular Devices亮相此次盛会，带来多功能酶标仪SpectraMax iD5，ImageXpress Pico 个人型高内涵成像系统，并有精彩讲座，着重介绍个人型高内涵系统在干细胞研究中的应用。 时间：12月8日 9:15-9:35地点：曲江国际会议中心 311会议室主讲人：杜菡影演讲题目：ImageXpress Pico 个人型高内涵-每个实验室触手可及的自动化成像系统演讲摘要：ImageXpress 平台，具有配置灵活、升级灵活等特点，可应用于各种生物学研究，为不同规模的实验室及平台提供全方位的高速成像及高通量数据分析体验，本次演讲为大家带来MD公司最新推出的ImageXpress Pico 个人型高内涵成像分析系统，它是一款封闭的、桌面级智能化图像采集和分析平台，能够方便地安装于任何实验室中，简单易学的软件中内置 25 种以上分析模块，并且同时支持计算机或平板浏览器，能从任何地方远程浏览、设定分析、并分享实验统计结果，加速您在干细胞增殖分化、利用iPSCs进行肝细胞、心肌细胞和神经细胞毒性筛选等诸多生物学领域的研究进程。 欢迎各位参会人员前来参会听讲座！

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)是一组具有髓系特征的多发性异质性恶性肿瘤。通过化疗、放疗、造血干细胞移植、支持性治疗和靶向治疗等方式，可以提高患者五年总存活率；但是，与其他血液肿瘤相比，AML的治疗效果较差，最常见的表现是缓解后复发。因此，对于复发和化疗耐药的患者来说，迫切需要寻找新的具有有效和可控副作用的治疗药物和技术。溶瘤病毒（Oncolytic Virus, OVS）是一类具有复制能力的肿瘤杀伤型病毒，通过直接溶解感染的肿瘤细胞和间接增强宿主的抗肿瘤免疫力来介导肿瘤细胞的破坏。其种类有：新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）、单纯疱疹病毒-1（Herpes simplex virus-1, HSV-1）、呼肠孤病毒（Reovirus）和溶瘤腺病毒（Oncolytic adenovirus）等。由于OVS优先破坏肿瘤细胞，而对正常细胞无害，同时越来越多的研究证据表明，AML细胞感染溶瘤病毒会显著增加肿瘤细胞的死亡率，这为AML的治疗提供了新的方法和思路，已经在多个临床试验中进行了安全性和可行性的探索。然而，B淋巴细胞会对血液循环中的OVS产生中和抗体(Neutralizing Bntibodies、NAbs)，从而阻止病毒的传播，最终会降低病毒的治疗效果。▲ OVS的双重作用模式，优先靶向并杀死癌细胞，而对正常细胞几乎没有有害的影响间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一类存在于多种组织(如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等)，具有多向分化潜力的多能干细胞。在过去的十年中，MSCs被认为是OVS的理想载体，其原因有：(1)、MSCs为病毒提供了一个复制场所；(2)、MSCs能避免被免疫系统清除；(3)、MSCs确保病毒能到达肿瘤部位；(4)、MSCs会分泌细胞因子，增强抗肿瘤免疫反应。然而，携带溶瘤病毒的人脐带来源的间充质干细胞(Human umbilical cord-derived MSCs, Huc-MSCs)的抗肿瘤效果及其分子机制尚不清楚。▲ 间充质干细胞的分化潜力近日，贵州医科大学成体干细胞转化研究重点实验室赵星和何志旭教授课题组首次报道Huc-MSCs作为呼肠孤病毒的细胞载体，并使用博鹭腾AniView100多模式动物活体成像系统检测携带呼肠孤病毒的Huc-MSCs和MSCs在活体内对AML的治疗效果和抗肿瘤效果。该工作有助于提升研究人员对MSCs携带OVS的抗肿瘤机制的理解，并可能为临床治疗AML提供新的策略。相关成果已在国际著名期刊《International Immunopharmacology》发表。评价携带呼肠孤病毒的Huc-MSCs在体内的治疗效果。根据荧光素酶报告基因可用于体内移植的Huc-MSCs的定量，将呼肠孤病毒(Luc-MSCs-Reo)负载于Huc-MSCs，并静脉注射注射到AML小鼠模型内。通过博鹭腾AniView100多模式动物活体成像系统进行成像，结果显示Huc-MSCs位置同肿瘤THP-1细胞定位相同。小鼠的Kaplan-Meier生存曲线结果表明，接受呼肠孤病毒感染的Huc-MSCs的小鼠的中位存活时间比接受裸鼠呼肠孤病毒的小鼠显著增加。这些数据证实了Huc-MSCs作为呼肠孤病毒载体具有良好的治疗效果。▲ 携带呼肠孤病毒的Huc-MSCs对AML小鼠模型的治疗作用评价携带呼肠孤病毒的MSCs的体内抗肿瘤效果。建立具有免疫活性的小鼠AML模型，通过博鹭腾AniView100多模式动物活体成像系统进行成像，结果显示标记DIR的MSCs和呼肠孤病毒感染的MSCs对C1498肿瘤具有肿瘤归巢能力，提示携带呼肠孤病毒的MSCs维持其固有的向肿瘤细胞迁移的能力。根据各组的肿瘤体积和重量、肿瘤中的病毒RNA定量显示、治疗后小鼠血清干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α水平及免疫组织化学法观察到肿瘤中CD8的表达结果，可得MSCs有效地将呼肠孤病毒运送到肿瘤部位，并触发小鼠的免疫反应，对肿瘤生长有明显的抑制作用。这些结果证实了MSCs载体能够增强呼肠孤病毒的抗肿瘤效果。▲ 携带呼肠孤病毒的MSCs对C57BL/6小鼠C1498肿瘤的治疗作用

博士Eric T. Ahrens表示，起初我们想观察这种技术联合作用对于新型细胞疗法的效果，而我们可以通过反馈细胞活性、改善剂量等途径来改善细胞疗法的效率；当前并没有有效的方法对人类机体中的细胞进行成像，早先可以利用基于金属离子的血管MRI对比制剂和放射性同位素来成像，但是其在体内就不能够对细胞进行有效区分了。hz-E10044 human soluble cluster of differentiation 28,sCD28 ELISAkit 人可溶性CD28(sCD28)检测试剂盒 hz-E10045 Human lymphocyte factor ELISAkit 人淋巴细胞因子检测试剂盒 hz-E10046 Human thymus activation regulated chemokine,TARC ELISAkit 人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)检测试剂盒 hz-E10047 Human Neural cell adhesion molecule ligand 1,NCAM-L1 人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10048 Human Cobra venom neuronal protective factor,CVNPF ELISAkit 人神经保护因子(CVNPF)检测试剂盒 hz-E10049 Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor,sTNFαR 人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10050 Human soluble cytokine receptor,sCKR ELISAkit 人可溶性细胞因子受体(sCKR)检测试剂盒 hz-E10051 Human soluble Factor-related Apoptosis ligand,sFASL/Apo-1 人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10052 Human inhibitor of apoptosis,IAP ELISAkit 人细胞凋亡抑制因子(IAP)检测试剂盒 hz-E10053 Human colony-stimulating factor,CSF ELISAkit 人集落刺激因子(CSF)检测试剂盒 hz-E10054 Human monocyte interferon gamma inducing factor,MIGF 人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIGF/CXCL9)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10055 Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant,I- 人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)检测试剂盒 TAC ELISAkit hz-E10056 Human cluster Of differentiation,CDl4 ELISAkit 人CD14分子(CDl4)检测试剂盒 hz-E10057 Human apoptosis inducing factor,AIF ELISAkit 人凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒 hz-E10058 Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISAkit 人白细胞共同抗原(LCA/CD45)检测试剂盒 hz-E10059 Human cluster Of differentiation,CD4 ELISAkit 人CD4分子(CD4)检测试剂盒 hz-E10060 Human Placenta Cadherin,P-cad ELISAkit 人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)检测试剂盒 hz-E10061 Human Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISAkit 人角化细胞生长因子(KGF)检测试剂盒 hz-E10062 Human Platelet-Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB ELISAkit 人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)检测试剂盒 hz-E10063 Human CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISAkit 人CXC趋化因子配体16(CXCL16)检测试剂盒 研究者表示，这项研究中他们利用全氟碳化合物(PFC)示踪技术和非侵入性磁共振成像成技术进行结合来直接检测标记细胞的氟原子，自然状态下氟原子在机体中的浓度极低，这就可以利用MRI技术对氟标记的细胞进行观察；而本文中研究者首次通过患者的白细胞制备了被修饰和标记的树突细胞，随后研究者将这些细胞注入到4期结直肠癌患者的机体中来刺激机体抗癌T细胞免疫反应。

PD-1抗体作为一种免疫检验点抑制剂 (Immune checkpoint inhibitors, ICIs) 已被FDA批准应用于多种肿瘤的临床治疗，包括肺癌、黑色素瘤、头颈癌等。但在临床推广和应用中还面临着两个严峻问题：一个是部分病人无法对PD-1的治疗产生应答，即出现初始抗性 (Primary Resistant) 的临床问题；另一个是部分病人虽然初始有应答，但随后会对PD-1的治疗产生抗性，即获得性抗性(Acquired Resistant) 问题【1】。这两个问题极大限制了PD-1 的临床应用。2021年11月1日，来自美国维克森林大学医学院的鲁勇课题组（现已任职于Houston Methodist/Weill Cornell Medicine，详情请见本文最后）在Nature Biomedical Engineering上发表了题为 Elimination of acquired resistance to PD-1 blockade via the concurrent depletion of tumour cells and immunosuppressive cells的研究论文，首次从杀伤肿瘤中各种免疫抑制细胞的角度，为克服PD-1抗体治疗过程中出现的抗性问题提出了解决方案。研究人员首先进行大数据分析肿瘤微环境中各种免疫抑制性细胞 (如 Tregs， MDSC， TAM.M2)是否有共有的靶点。该研究中发现肿瘤微环境中各种免疫抑制性细胞相比较非抑制性细胞均高表达CD73这个膜表面蛋白。对此研究人员引入了一种刚刚被日本临床批准的肿瘤治疗新方案即光免疫疗法【2】 (Photoimmunotherapy)，将一种特定光吸收剂与CD73抗体相欧联（下图上），这种光吸收剂在近红外光的照射下可以快速诱导能与CD73抗体结合的细胞坏死（下图下）。研究人员通过这种能同时杀死肿瘤微环境中各种免疫抑制性细胞和表达CD73的肿瘤细胞的方案，在小鼠三阴性乳腺癌中成功克服了PD-1抗体治疗中出现的获得性抗性问题。但是数据也显示任何一种免疫抑制性细胞的残存都可以导致治疗的后期复发问题，这提示同时杀伤全部类型免疫抑制细胞的重要性。最后研究人员也使用了肿瘤表面不表达CD73小鼠胰腺癌肿瘤模型，发现即使肿瘤表面不表达CD73，单纯通过光免疫疗法杀死肿瘤微环境中的免疫抑制性细胞也成功克服了PD-1抗体疗法在胰腺癌中出现的初始抗性问题。这项研究工作为克服PD-1抗体在临床应用中出现的初始抗性问题和获得性抗性问题可供了应用性极强的解决方案，很大程度上扩宽了肿瘤治疗中PD-1抗体的临床应用范围。原文链接：https://doi.org/10.1038/s41551-021-00799-6

昨日，基金委网站发布了5项重大研究计划2023年度项目指南，分别是：免疫力数字解码、组织器官再生修复的信息解码及有序调控、肿瘤演进与诊疗的分子功能可视化、冠状病毒-宿主免疫互作的全景动态机制与干预策略、特提斯地球动力系统。重点支持项目300万/项，拟资助6-8项在免疫力数字解码重大研究计划2023年度项目指南中，2023年度资助研究方向分为培育项目和重点资助项目：【培育项目】2023年度拟资助培育项目20～25项，资助直接费用资助强度约为80万元/项，资助期限为3年，培育项目申请书中研究期限应填写“2024年1月1日- 2026年12月31日”；培育项目具体研究方向5个：1. 健康状态免疫力特征与变化规律。2. 重大疾病状态免疫力动态感知机制。3. 免疫力量化表征及数字化呈现的新理论与新方法。4. 免疫复杂系统的时空动态特征。5. 基于免疫力数字解码的重大疾病预警。【重点支持项目】拟资助重点支持项目6～8项，资助直接费用资助强度约为300万元/项，资助期限为4年，重点支持项目申请书中研究期限应填写“2024年1月1日- 2027年12月31日”。重点支持项目具体研究方向4个：1. 免疫力大数据的标准化获取与深度挖掘。2. 免疫组库等多样性特征的数字化呈现。3. 跨尺度免疫力大数据资源平台及关键技术。4. 跨尺度免疫力大数据耦合与中国人群群体免疫力特征解析。多次提及流式细胞术、多重流式荧光技术在培育项目中的方向5中，提及新组学技术、流式技术及其他可视化技术等免疫检测新技术：在附件的数据标准中，提及质谱流式细胞术CyTOF以及多重荧光流式细胞术：以下为项目指南全文：国家自然科学基金委员会现发布免疫力数字解码重大研究计划2023年度项目指南，请申请人及依托单位按项目指南所述要求和注意事项申请。 国家自然科学基金委员会2023年8月28日　　免疫力数字解码重大研究计划2023年度项目指南　　免疫力是人体抵御病原入侵，清除抗原性异物，监控及维系机体健康稳态的综合能力。免疫系统巨大多样性和复杂性是免疫力的关键基础，而传统研究模式未能系统揭示免疫力生成和演变规律。本重大研究计划旨在多角度阐明免疫力的科学内涵，全景式认知健康及疾病状况下人体免疫系统的运行机制，基于整体观念和复杂系统视角，通过融合数学、信息科学、生命科学和医学等理论与技术，以新研究范式破译免疫力密码，促进精准诊疗，服务于“健康中国”战略。　　一、科学目标　　基于高质量、标准化的免疫力大数据，开展人体免疫力整体性和系统性数字化解析与重构研究，揭示免疫力构成的生物基础、免疫力维持的关键特征和免疫力调控的普适规律，进而阐明免疫力的科学内涵；对免疫力进行定量化表征和数字化呈现，建立人群免疫力特征图谱，分析免疫力与衰老、疾病等重大生命健康事件的关系并阐释其内在机制和规律；开发基于免疫力数据的疾病风险预警、免疫力可视化和免疫力年龄测定等关键技术，建立个体和群体的免疫力档案，开展基于免疫力干预的健康维护及疾病防治新策略，形成未病先防、疾病早诊、预后评估、个性化医疗和健康管理新模式。　　二、核心科学问题　　（一）免疫力复杂系统的物质基础和动态规律。　　针对免疫力复杂系统的高度多样性、时空动态性、多维交互性、自主适应性和模式记忆性等特点，采用动态化、跨尺度、多层次的全景研究新范式，以模型驱动和数据驱动相结合的研究方法，明确免疫力复杂系统的时空动态特征，阐明免疫力的组成要素、内在联系与变化规律等生物学内涵，揭示免疫力本质规律和深层运行机制。　　（二）多模态免疫力定量表征及数字呈现。　　建立不同免疫力表征状态的人群队列，获取并分析免疫分子和细胞的多样性信息，系统解析在分子、细胞、细胞间关联、器官、人群等不同尺度的免疫力数据，形成标准化的多维免疫大数据群，对多源、高维、跨尺度的免疫力数据进行耦合、重构与全景化表征，实现免疫力数字化呈现和量化评估，精准刻画免疫力肖像。　　（三）基于免疫力解码的疾病诊疗与健康评估。　　阐明重大生命健康事件的免疫力特征及其演变规律，获取重大疾病在器质性病变前的免疫力信号，设立基于免疫力解码的疾病分子分型、精准诊疗与预后评估标准，并整合传统医学证候辨识和“治未病”等理念与方法，构建疾病预警系统，及时评估健康状态并发现疾病早期隐患，为关键生命过程的免疫力干预提供理论依据。　　三、2023年度资助研究方向　　本重大研究计划拟聚焦我国高发病/高死亡率恶性肿瘤、自身免疫病等重大疾病以及健康人群，针对不同免疫状态，获取高质量、多维度、时空动态的免疫力大数据，建立相关基础数据设施和关键技术群，旨在阐明免疫复杂系统动态协同模式和时空交互规律。本计划拟设置培育项目和重点支持项目资助相关研究：　　（一）培育项目。　　围绕上述科学问题，以总体科学目标为牵引，立足研究范式创新，对于探索性强、选题新颖、前期研究基础较好的申请项目，将以培育项目的方式予以资助，具体研究方向如下：　　1. 健康状态免疫力特征与变化规律。　　围绕不同年龄阶段（如婴幼儿、青春期、成年、老年等），不同健康状态（如长寿、中医偏颇体质等），或特殊生活环境的人群，鼓励采用高通量多组学技术，采集生理状态下免疫细胞发育与新型细胞亚群、免疫识别与活化、免疫记忆与耗竭、免疫代谢与表观遗传等免疫力数据，丰富免疫系统可测量参数，延展免疫力大数据的覆盖维度，解码免疫行为并揭示深层规律，建立健康个体的免疫力档案。从免疫力维度表征机体的健康状态，实现人体免疫年龄及健康状态的数字判读。　　2. 重大疾病状态免疫力动态感知机制。　　针对我国高发病/高死亡率恶性肿瘤和自身免疫病等重大疾病，从分子、细胞、组织、器官、证候等不同尺度，分析疾病发生发展等关键环节的免疫特征信息，如免疫微环境、免疫调节与耐受、移植免疫排斥、免疫细胞及其亚群、肿瘤新抗原等，揭示免疫力时空变化与疾病演进过程之间的相关性和因果性，建立微观免疫力数值与宏观疾病表征之间的定量映射关系，阐明免疫力在重大疾病时空演变过程中的动态规律和机制。　　3. 免疫力量化表征及数字化呈现的新理论与新方法。　　建立从免疫细胞群和免疫分子等免疫载体数据中捕获用于量化免疫特征信息的新方法，发展诸如可解释机器学习等先进人工智能技术，对多源、高维、跨尺度的免疫力数据进行耦合重构，开发前沿计算模型和大数据解析算法，提取可以表征免疫力的多维信息，实现免疫力的数字化与全景化呈现。　　4. 免疫复杂系统的时空动态特征。　　针对代表性疾病或免疫过程，基于复杂系统的视角，研究免疫力组成元件、关系集合、系统结构等关键要素，融合还原论、控制论、系统论等方法，定量研究免疫力的层次性、涌现性、动态稳定性、自主适应性等复杂系统特点，研究这些特点与免疫分子、细胞行为或证候表征等的映射关系，探究免疫复杂系统运行的主要特征、普适规律及深层机制，定量探索免疫力的科学内涵和生物基础。　　5. 基于免疫力数字解码的重大疾病预警。　　围绕肿瘤、自身免疫病等重大疾病的“未病”状态，比对病变前后及健康人群的免疫力大数据，通过免疫检测新技术（如新组学技术、流式技术及其他可视化技术等）和免疫数据智能化分析新方法，挖掘疾病演进的特异免疫应答模式，鉴定可以表征疾病演进的免疫力信号，构建免疫力维度的疾病预警模型并验证其敏感性和特异性，从免疫力视角发现重大疾病的早期关键特征，实现重大疾病的早期精准诊断。　　（二）重点支持项目。　　围绕核心科学问题，以总体科学目标为牵引，立足研究范式创新，对于前期研究基础积累较好，特别是与本重大研究计划其它申请项目能够形成学科交叉、优势互补且共同对总体科学目标形成重要贡献的申请项目，将以重点支持项目的方式予以资助，具体研究方向如下：　　1. 免疫力大数据的标准化获取与深度挖掘。　　建立不同免疫状态如健康群体、自身免疫病（如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等高发病率类型）、恶性肿瘤（如肺癌、肝癌、结肠癌、胰腺癌等高发病/高致死肿瘤）等中国人群大样本队列，获取疾病不同阶段（如发生、发展、治疗前后等）的标准化数据，完善免疫力多维大数据收集的标准与规范，研发多尺度免疫力数据融合与分析的新方法，发现疾病发生发展等过程中的免疫力特征。　　2. 免疫组库等多样性特征的数字化呈现。　　建立TCR、BCR和MHC等免疫多样性大数据捕获新方法（如重轻链全长获取和功能性配对等），发展免疫组库大数据的编码规律深度挖掘、疾病关键特征提取、高维特征信息数据降维和多样性分子功能聚类等关键核心技术，基于多样性免疫特征量化表征人体免疫力水平，揭示免疫力多样性特征与疾病和健康的内在关联，刻画群体和个体免疫力数字肖像和时空图谱，从免疫组库视角揭示人体免疫力多样性的动态变化规律。　　3. 跨尺度免疫力大数据资源平台及关键技术。　　建立大规模人群队列免疫力数据管理的标准规范和共享机制，研发免疫力跨尺度、多源、多粒度大数据（不少于3种数据类型）汇交存储、审编处理和安全管理的关键技术，构建我国免疫力大数据资源创新平台（具备PB级能力），保障数据分级分类管理和安全共享利用，实现免疫力数字解码项目数据资源基础设施平台的高质量建设。　　4. 跨尺度免疫力大数据耦合与中国人群群体免疫力特征解析。　　系统整合多中心多来源的数据，开展多尺度免疫力大数据耦合、分析等新方法研究，为多中心多来源的数据提供生信分析与验证等支撑；基于免疫系统的复杂多样性和免疫力的科学内涵，构建系统表征免疫力特征和规律的数学模型，实现免疫力的整体量化和全景化展示；提取能够表征群体免疫力的关键微观免疫数据和宏观人群特征，发展机器学习、神经网络等人工智能算法，研究不同种族、年龄、性别和体质等群体的免疫力多样性和差异性，创建中国人群免疫力特征图谱，开展基于免疫力干预的健康维护及疾病防治新策略及新措施研究，实现群体层面免疫力的健康监测与干预。　　四、2023年度资助计划　　2023年度拟资助培育项目20～25项，资助直接费用资助强度约为80万元/项，资助期限为3年，培育项目申请书中研究期限应填写“2024年1月1日- 2026年12月31日”；拟资助重点支持项目6～8项，资助直接费用资助强度约为300万元/项，资助期限为4年，重点支持项目申请书中研究期限应填写“2024年1月1日- 2027年12月31日”。　　五、申请要求及注意事项　　（一）申请条件。　　本重大研究计划项目申请人应当具备以下条件：　　1. 具有承担基础研究课题的经历；　　2. 具有高级专业技术职务（职称）。　　在站博士后研究人员、正在攻读研究生学位以及无工作单位或者所在单位不是依托单位的人员不得作为申请人进行申请。　　（二）限项申请规定。　　执行《2023年度国家自然科学基金项目指南》“申请规定”中限项申请规定的相关要求。　　（三）申请程序。　　1. 申请人应根据本重大研究计划拟解决的核心科学问题和项目指南公布的拟资助研究方向，自行拟定项目名称、科学目标、研究内容、技术路线和直接费用等。　　2. 本重大研究计划项目实行无纸化申请，申请人应当按照科学基金网络信息系统中重大研究计划项目的填报说明与撰写提纲要求在线填写和提交电子申请书及附件材料。申请书提交日期为2023年9月27日- 10月9日16时。　　3. 申请书中的资助类别选择“重大研究计划”，亚类说明选择“培育项目”或“重点支持项目”，附注说明选择“免疫力数字解码”，受理代码选择T03，根据申请的具体研究内容选择不超过5个申请代码。　　培育项目和重点支持项目的合作研究单位不得超过2个。　　4. 申请人在“立项依据与研究内容”部分，首先明确申请对应本项目指南中的资助研究方向，以及对解决本重大研究计划核心科学问题、实现本重大研究计划科学目标的贡献。　　如果申请人已经承担与本重大研究计划相关的其他科技计划项目，应当在申请书正文的“研究基础与工作条件”部分论述申请项目与其他相关项目的区别与联系。　　（四）申请注意事项。　　申请人和依托单位应当认真阅读并执行本项目指南、《2023年度国家自然科学基金项目指南》和《关于2023年度国家自然科学基金项目申请与结题等有关事项的通告》中相关要求。　　1. 依托单位应当按照要求完成依托单位承诺、组织申请以及审核申请材料等工作。在2023年10月9日16时前通过信息系统逐项确认提交本单位电子申请书及附件材料，并于10月10日16时前在线提交本单位项目申请清单。　　2. 为实现重大研究计划总体科学目标和多学科集成，获得资助的项目负责人应当承诺遵守相关数据和资料管理与共享的规定（数据标准详见附件），项目执行过程中应关注与本重大研究计划其他项目之间的相互支撑关系。　　3. 为加强项目的学术交流，促进项目群的形成和多学科交叉与集成，本重大研究计划将每年举办一次资助项目的年度学术交流会，并将不定期地组织相关领域的学术研讨会。获资助项目负责人须参加本重大研究计划指导专家组和管理工作组所组织的上述学术交流活动。　　（五）咨询方式。　　国家自然科学基金委员会交叉科学部三处　　联系电话：010-62327096 附件数据标准 　　所有产生的队列数据须有完备的个体临床信息及匹配的高通量组学数据。个体临床信息包括个体健康体检信息和疾病诊断、治疗、预后和随访等；高通量组学测序数据细分为基础型数据与拓展型数据。项目负责人必须提供所有样本的基础型数据，鼓励项目负责人根据实际情况使用创新免疫特征检测技术产生拓展型数据，进而从更多维度表征免疫力状态。项目申请书须描述样本数量及年度数据产生及提交计划，基础型数据及拓展型数据的样本数量与数据类型覆盖范围将被纳入评审和考核标准。　　一、样本收集要求　　肿瘤样本须有肿瘤组织、癌旁组织和血液样本。样本须有准确的病理信息，包括诊断、治疗、预后和随访等信息，要配备病理切片H&E染色结果，须用新鲜的组织提取细胞进行建库。样本须有冷冻的组织，若有剩余样本，须冷冻保存以供后期实验验证。其他疾病如自身免疫病等疾病样本根据疾病特点和检测手段取样，具体要求可参考肿瘤样本。要求如下：　　1. 样本采集标准　　1.1 组织标本：组织标本应尽量去除坏死组织、血渍污物等可能影响检测结果的成分，根据不同的研究目的进行OCT包埋、福尔马林固定、液氮速冻、组织解离等初步处理，以上步骤应在标本离体60分钟内完成。肿瘤标本应包括无坏死的肿瘤组织和癌旁组织，其他类型组织标本如淋巴结须选取有代表性的病变组织区域，组织标本的质量须至少满足基础型数据的实验需求；　　1.2 外周血样本：按照不同的实验要求抽取相应量的外周静脉血标本，采集量须满足基础型数据实验需求。依据实验需要对样本进行离心、冻存等处理，血浆或血清的提取须在30分钟内完成，-80℃保存。其他相应操作如免疫细胞分选等应在抽取后12小时内完成。　　2. 样本的质量控制　　2.1 肿瘤组织：肿瘤组织质量不低于0.5克，肿瘤样品纯度（肿瘤细胞核占比）不低于60%，肿瘤组织坏死率小于20%。全血样本体积大于5毫升。肿瘤组织须有病理切片以准确判断肿瘤组织和癌旁组织类型和组织学特征。其他组织要求参考肿瘤组织的质量控制标准；　　2.2 血液样本：须无凝血和溶血等情况，如进行免疫细胞分选，每例分离出的PBMC数量应大于8×106，T细胞数量大于3×106，B细胞数量大于1×106，细胞存活率大于95%。　　3. 样本的运输：使用冰袋、干冰或者液氮进行组织样本及外周血标本的运输。　　4. 样品的保存：冻存于-80℃冰箱或者液氮中，须分装保存，不得冻融超过一次。　　5. 样本必须注明详细的临床病理信息，具体要求如下：　　5.1受试者的可追溯唯一ID（如身份证号、住院号等）；　　5.2 受试者的病理诊断、诊断时间、病理类型、病理分期（如TNM分期）、病理切片编号；　　5.3 样本采集时间地点、样本采集方式（活检/手术切除等）、样本保存方式（冷冻组织、冰冻切片、石蜡切片等）、样本量（克、毫升）、样本纯度（肿瘤细胞核占比等）、组织坏死率；　　5.4组织样本及血液样本所作检测名称、检测技术路径、质控报告（如有）。　　二、临床信息数据类型　　1.健康群体：可追溯唯一识别ID、性别、年龄、人种、民族、地区、血型、身高、体重、预防接种史、过敏史、恶性肿瘤家族史、免疫疾病家族史、感染疾病史、手术史、用药史、吸烟史、饮酒史等临床数据。　　2.自身免疫性疾病及恶性肿瘤：除覆盖健康群体应收集的资料外，还应包括但不限于：实验室检查（初次诊断时）、影像学检查、病理检查、病理报告、治疗情况和预后情况等。　　三、高通量组学数据类型　　1.基础型数据　　1.1外周血：　　TCR-Seq、BCR-Seq、单细胞多组学检测技术（scRNA-seq、scATAC-seq、scTCR-seq、scBCR-seq）　　1.2 组织样本：　　TCR-Seq、BCR-Seq、WES（包括组织样本和对应个体外周血）、RNA-Seq、单细胞多组学检测技术（scRNA-seq、scATAC-seq、scTCR-seq、scBCR-seq）　　2. 拓展型数据　　具体包

流式细胞术的核心特点是快速、高通量、精确地同时检测多个细胞或颗粒的参数，并能根据预设的参数值分选特定的细胞或颗粒亚群到指定容器。其检测和分选速度可达每秒数万次，远高于传统设备，确保了可靠的统计量分布而非单一均值，有助于发现细胞亚群。流式细胞术采用稳定的流速控制技术，保证了精准的定量检测，尤其在单细胞水平，其高通量、精确和互不干扰的多参数分析能力为深入探索细胞异质性和参数间关联提供了重要基础，因而在科学研究和医学诊断中广受应用，下面介绍流式抗体应用的领域。 1. 免疫表型分析流式细胞仪在免疫表型分析中广泛应用，能同时分析免疫细胞群体的多个参数。通过荧光染料偶联抗体，标记细胞表面抗原如CD标记（如CD3、CD4、CD8）、细胞功能标记（如CD69、CD25）、记忆标记（如CD45RO）、组织归巢标记和趋化因子受体标记，以及细胞内标志物如FoxP3和细胞因子（如IFN-γ、TNF-α、IL-2）。现代流式仪器能进行多达28种颜色的实验，尽管通常使用12-15种颜色，这些技术支持精确的细胞亚群分析和免疫功能研究，对于理解免疫系统功能和疾病机制具有关键意义。2. DNA检测DNA检测是流式细胞学早期成功应用之一，特别是在揭示细胞周期与癌症发生关系的关键研究中。正常细胞的DNA含量随着细胞周期不同而变化，G1期为二倍体基因组DNA，S期介于二倍体至四倍体之间，而G2和M期则为四倍体。癌细胞常表现出异常的DNA含量，如超过正常倍数的G1期和G2/M期DNA，以及非整倍体DNA。流式细胞学结合高度精确的DNA荧光染料（如PI）能够准确测量这些变化，因此在细胞生物学、癌症研究、药物开发和临床检测中得到广泛应用。这些技术提供了深入理解细胞异常及其相关疾病机制的重要工具。3. 抗原特异性反应抗原特异性反应的测量可以通过刺激细胞使用特定抗原，然后利用MHC（主要组织相容性复合体）多聚体来检测细胞因子的产生、增殖、激活、记忆或抗原识别。MHC多聚体通常由MHC单体（MHC-I或MHC-II）组成，它们经常被生物素化，并与荧光链霉亲和素骨架结合成四聚体、五聚体或十聚体的组合。这些MHC多聚体“装载”了特定的抗原，然后用于结合与该抗原相应的T细胞，以测量对特定抗原的反应水平。这种技术通常在疫苗研究中得到应用。4. 细胞凋亡检测细胞凋亡或程序性细胞死亡是免疫学和其他研究领域中经常检查的一种现象。它用于通过去除细胞而不触发炎症反应（坏死）来维持免疫系统的稳态。它是免疫反应后克隆扩增的 T 细胞、自我靶向 T 细胞、自身反应性 B 细胞和免 疫系统中的多个其他细胞的死亡机制。流式细胞术是检测细胞凋亡的关键工具，通过多种方法定量测量与凋亡相关的事件。例如，Annexin V染色用于检测磷脂酰丝氨酸的外露，结合活力染料（如PI）以确认细胞膜表面结合。TUNEL技术则标记DNA断裂末端，使用荧光标记dUTP或BrdU进行检测。此外，通过测量caspase 3的活性形式来评估其在细胞凋亡信号通路中的角色，使用荧光抗体进行胞内染色。线粒体凋亡的检测方法包括测量线粒体膜电位变化，如使用JC-1染料。这些技术的综合应用有助于深入理解和量化细胞凋亡过程中的多个关键步骤。5. 细胞分选细胞分选在微生物学中的应用正在逐步发展，尤其是在快速检测和分选悬浮液中单个细菌细胞方面，其原理包括样品准备、流体动力学控制、激光激发光学检测、信号数据分析以及选择性细胞分选。相比传统琼脂铺板方法，其速度明显优势显著。然而，细菌细胞的小体积使得与培养基中的细胞碎片或背景颗粒区分开来具有挑战性。此外，由于缺乏针对特定细菌菌株的抗体，细胞分选在微生物学中的广泛应用受到限制。过去流式细胞仪的硬件功能也是限制因素，但随着现代仪器的发展，如具备多激光器和检测器的仪器（例如赛默飞世尔的Bigfoot光谱细胞分选仪、BD FACSAria III、索尼MA900和贝克曼库尔特的MoFlo Astrios EQ），这些限制正在逐步克服。另外，对于一些致病性细菌，需要在BSL2以上的实验条件下进行操作，现代流式细胞仪逐渐配备了相应的安全措施，如BSL 2级别的操作罩，以确保安全和合规性。以上是流式细胞术应用较多的各种领域，菲恩生物基于自身单抗开发平台，推出亲和力高，特异性好的经典克隆细胞株纯化抗体，产品涵盖人、大鼠、小鼠等，指标丰富，可选择性多。同时菲恩生物提供免费的配色，实验指导和数据分析服务，为您提供整体流式解决方案。流式抗体推荐种属细胞群流式抗体搭配货号HumanT/B/NK细胞群检测CD45-PerCPPCP-30039CD3-FITCFITC-30004CD16-PEPE-30061CD56-PEPE-30008CD19-APCAPC-30066HumanTh1/Th2 细胞群检测CD3-PerCP/Cyanine5.5PCP55-30004CD4-FITCFITC-30005IFN-γ-PEPE-30053IL4-APCAPC-30043MouseTh1/Th2 细胞群检测CD3-PerCP/Cyanine5.5PCP55-30002CD4-FITCFITC-30001IFN-γ-PEPE-30074IL4-APCAPC-30026HumanTreg细胞群检测CD4-FITCFITC-30005CD25-PEPE-30035CD127-APCAPC-30033MouseTreg细胞群检测CD4-FITCFITC-30001CD25-PEPE-30017FOXP3-APCAPC-30055

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)导致的新冠肺炎（COVID-19）自2019年至今仍然在全球蔓延，其变异株Omicron由于高传播率目前已取代其它毒株成为全球新冠的主要流行毒株。各国已采取大规模疫苗接种，通过其产生的中和抗体和抗病毒T细胞来缓解和对抗新冠肺炎。有研究报道，病毒特异性T细胞在病毒清除（即SARS-CoV-1感染后17年）和在抗体滴度减弱的COVID-19患者中检测到SARS-CoV-2特异性T细胞会持续很长时间。因此需要充分了解新冠肺炎中T细胞免疫过程，对疫苗开发和免疫治疗具有重要意义。COVID-19患者中的T细胞免疫反应T细胞免疫反应是高度特异性的，在引发有效的抗病毒反应方面具有不可或缺的作用。在SARS-CoV-2感染的早期阶段，树突状细胞(DC)和巨噬细胞可以吞噬病毒感染的细胞，通过抗原呈递启动T细胞反应。随后，CD4+T细胞刺激B细胞产生病毒特异性抗体，细胞毒性CD8+T细胞靶向病毒感染的细胞。有研究报道，SARS-CoV-2特异性CD4+和CD8+T细胞在COVID-19症状发作后的前2周内的外周血中很明显。大多数SARS-CoV-2特异性CD4+T细胞表现出中枢记忆表型，主要产生Th1细胞因子，而CD8+T细胞具有更高水平的穿孔素表达的效应表型。另外有研究报道COVID-19患者T细胞活化的异质性，并提供证据表明CD4+和CD8+T细胞都能够产生有效的免疫反应，并出现受损或过度的T细胞反应。轻度COVID-19患者的T细胞升高，产生强大的抗病毒免疫反应。特别是CD8+T细胞表达更高水平的细胞毒性分子，例如颗粒酶A和FAS配体，它们有利于消除病毒感染的细胞。然而，在严重疾病病例中，CTL（Cytotoxic T cells，细胞毒性T细胞）比例减少，同时幼稚和中枢记忆CD8+T细胞的百分比也均较低。此外，与健康对照组相比，COVID-19患者的终末分化效应CD4+和CD8+T细胞的百分比更高。且重症COVID-19患者的调节性T细胞(Tregs)水平低于轻症患者。总之，T细胞亚群（包括Treg、Th1、幼稚和记忆T细胞）平衡中的这些失调可能导致严重的炎症状况，并可能导致COVID-19复发。尽管由CD4+和CD8+T细胞介导的早期抗病毒反应最有可能具有保护作用，但SARS-CoV-2有效的先天免疫逃避能力使T细胞难以通过限制I型和III型干扰素反应来产生有效的抗病毒反应。COVID-19恢复期患者和健康人中的T细胞免疫反应恢复康复患者的T细胞计数可以为T细胞在抗病毒反应中的作用提供重要参考。有研究报道，超过70%的COVID-19恢复期患者存在SARS-CoV-2特异性T细胞。100% CD4+T细胞和70% CD8+T细胞在康复患者中具有SARS-CoV-2 Spike特异性反应。功能测定证实CD4+T细胞表现为Th1表型并产生大量IFN-γ，和针对S蛋白较低水平的IL-4、IL-13、IL-5或IL-17A。同样，大多数SARS-CoV-2刺突特异性CD8+T细胞产生IFN-γ，绝大多数IFN-γ+CD8+T细胞也共表达颗粒酶B和肿瘤坏死因子α (TNFα)。这些数据表明，康复患者中的大多数CD4+和CD8+T细胞产生了针对S蛋白的大量抗病毒免疫反应，说明功能性T细胞在病毒清除和恢复中的重要性。此外，这些数据也说明利用SARS-CoV-2的S蛋白作为疫苗生产关键候选者的重要性。T细胞反应在无症状和未接触过的个体中观察到的T细胞反应最低。但是即使没有并发的体液反应，无症状/轻度恢复期的COVID-19患者也可以产生强大而持久的记忆T细胞反应来预防复发性感染。有研究报道，与有症状的个体相比，无症状患者的免疫反应较弱，并且相当一部分有症状的患者在恢复期早期表现出中和抗体量减少。COVID-19恢复期患者在出院后2周内也显示出与针对人ACE2的中和抗体滴度和病毒特异性T细胞计数的强相关性。细胞因子风暴细胞因子风暴是指在各种病理条件下检测到的大量促炎细胞因子和趋化因子，是在SARS-CoV-2感染患者中观察到的关键病理特征之一。在重症COVID-19患者中记录到高细胞因子水平。各种免疫细胞类型，包括巨噬细胞、中性粒细胞、DC，以及NK、B和T细胞，可导致COVID-19患者的细胞因子风暴和炎症反应的过度激活状态。由先天免疫细胞释放的TNFα、IL-6和IL-1β可能是SARS-CoV-2感染晚期患者发生细胞因子释放综合征和严重全身炎症反应的主要驱动力之一，其中一些可能是导致这些患者淋巴细胞减少或Th1反应不足的潜在机制之一。另据报道，在COVID-19重症病例中，血清TNFα和IL-6水平升高与总T细胞计数呈负相关，表明这些细胞因子可能参与淋巴细胞减少和T细胞丢失。相反，处于恢复期的患者上述细胞因子的血清水平显著降低，并显示T细胞计数恢复。鉴于这些发现，有人提出IL-6阻滞剂，如sarilumab、siltuximab和tocilizumab，以及IL-1β受体阻滞剂用于治疗重症COVID-19患者以解决过度炎症和控制炎症的传播。趋化因子和细胞因子水平升高，例如CCL2/3/5、CXCL8/9/10和IFN-γ、TNFα、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12 、IL-33、粒细胞/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（G-CSF和GM-CSF）、血管内皮生长因子A（VEGFA）和血小板衍生生长因子亚基B（PDGFB），促进其它白细胞向组织的募集，导致组织损伤。基于T细胞反应的疫苗研究SARS-CoV-2完整基因组的快速可用性可用于开发多种疫苗，使其在刺激幼稚T细胞后产生效应和记忆T细胞，发挥免疫保护。成功的SARS-CoV-2疫苗应该产生对有效免疫反应具有高度特异性的SARS-CoV-2反应性T细胞，而不会产生炎症或疾病开始的不良影响。SARS-CoV-2的蛋白被确定为最适合疫苗开发的靶标，以触发病毒特异性T细胞反应和体液免疫反应。表达S蛋白的腺病毒病毒载体疫苗，即5型腺病毒(Ad5-nCoV)，在健康个体(NCT04313127)中检测其疫苗的安全性和耐受性，观察到2周后成功产生特异性抗病毒T细胞和体液免疫反应。Moderna开发了基于mRNA的疫苗，编码SARS-CoV-2抗原（S蛋白），通过脂质体递送系统给药。因mRNA疫苗可以模拟天然病毒感染，并仅编码抗原蛋白并且不能整合到宿主染色体中。因此，基于mRNA的疫苗更能发挥细胞免疫和体液免疫。T细胞免疫检测---细胞因子释放检测（CRA）疫苗中的抗体测试是常规进行的，但因为特异性病原体的T细胞在血液中存在的总T细胞（通常小于1-3%）中只占很小的一部分，需要在从全血中纯化的细胞中进行。而这些检测都需要复杂的设备和高度专业化的人员，这可能不是每个常规实验室都可以使用的。杜克-新加坡国立大学Antonio Bertoletti教授团队采用了一种快速和简单的替代方法，即基于Ella微流控ELISA技术的全血细胞因子释放测定(Cytokine release assay, CRA)实验：直接将刺激性抗原或肽添加到全血中，导致血浆中细胞因子（通常是IFN-γ）的分泌，然后进行定量。该检测方法通过简单地将Spike肽库添加到全血中，可以轻松快速地检测和相对定量接种疫苗个体中的Spike特异性T细胞反应。此方法检测时间比常规方法缩减了7个小时，总时间缩短了12个小时。总结因T细胞免疫反应在疾病的早期阶段表现出保护作用，也可能导致致命症的发生，因此COVID-19的治疗和预防中需要深入地了解疾病过程中的免疫反应。特别是在症状轻微的患者中阻断促炎细胞因子的早期治疗干预可能会产生有害影响，并导致免疫反应不足和病毒清除受损。在危重COVID-19患者中恢复T细胞耗竭和改善过度炎症反应的晚期治疗干预可能具有更好的临床结果。在疫苗开发中，也要充分考虑其是否可以增强抗病毒免疫和特定T细胞反应从而加强疫苗保护的持久性。参考文献Robust T Cell Immunity in ConvalescentIndividuals with Asymptomatic or Mild COVID‐19.Highly functional virus‐specific cellular immune response in asymptomatic SARS-CoV‐2 infection.T‐cell responses and therapies against SARS‐CoV‐2 infection.Rapid determination of the wide dynamicrange of SARS‐CoV‐2 Spike T cell responses in whole blood of vaccinated andnaturally infected.T cell immunity to SARS-CoV-2 followingnatural infection and vaccination.关于我们ProteinSimple是美国纳斯达克上市公司Bio-Techne集团（NASDAQ:TECH）旗下行业领先的蛋白质分析品牌。我们致力于研发和生产更精准、更快速、更灵敏的创新性蛋白质分析工具，包括蛋白质电荷表征、蛋白质纯度分析、蛋白质翻译后修饰定量检测、蛋白质免疫实验如Western和ELISA定量检测蛋白质表达等技术，帮助疫苗研发、生物制药、细胞治疗、基因治疗、生物医学和生命科学等领域科学家解决蛋白质分析问题，深度解析蛋白质和疾病相互关系。联系我们地址：上海市长宁路1193号来福士广场3幢1901室 电话：021-60276091热线：4000-863-973邮箱：PS-Marketing.CN@bio-techne.com网址：www.bio-techne.com

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中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目招标公告 辽宁省-沈阳市-和平区 状态：公告 更新时间： 2023-03-13 （中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目）招标公告 项目概况 中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目招标项目的潜在供应商应在线上获取招标文件,并于2023年04月07日 13时30分（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目编号：JH22-210000-65101 项目名称：中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目 包组编号：001 预算金额（元）：5,000,000.00 最高限价（元）：5,000,000 采购需求： 查看 品目1：支气管导航系统 1套 进口 一、项目概况： 1.设备名称：支气管导航系统 2.数量：1套 3.用途说明： a) 用于经支气管途径进行肺内组织活检采样。 b) 用于对纵隔淋巴结的定位与活检采样，进行肺癌分期。 c) 用于外科微创手术的病变的标记定位； d) 用于肺外周病变的微创介入治疗。 二、主要技术参数及要求： （一）系统功能： ★1.导航方式：经支气管实时电磁导航。 2.具备虚拟导航功能。 3.导航精度≤3mm。 ★4.可适用直径1cm的肺部病变。 （二）系统技术要求： 1.系统台车 (1) 具备复合视频输入。 (2) 具备S端子视频输入。 (3) 具备DVI-D视频输出。 2.专用计算机系统 （1）配备触摸显示屏，尺寸≥24寸，分辨率≥1900×1200像素。 （2）导航视窗个数≥12个。 （3）具备内窥镜视图。 （4）具备虚拟支气管镜视图。 （5）具备局部视图 （6）具备气道探测器视图和3D CT视图，可实现360度三维CT任意视角查看功能。 （7）具备静态3D支气管视图。 （8）具备动态3D支气管视图。 （9）具备最大密度投影（MIP）视图，可三维重建肺部血管。 （10）具备平行视图。 （11）具备探头视图。 （12）具备CT视图水平位。 （13）具备CT视图冠状位。 （14）具备CT视图矢状位。 （15）最多同时可显示导航视窗个数≥ 6 个。 （16）注册匹配方式：自动/手动。 （17）具备注册5星评分功能，用于评估导航误差。 （18）具备定位子系统。 （19）具备每次活检位置标记功能。 3.导航系统附件： ★(1) 具备独立电磁定位板，占地面积≤500mm×600mm，厚度≤10mm。 (2) 定位板工作频率最少包括以下频率：2.5 kHz, 3.0 kHz, 3.5 kHz。 (3) 定位板最大磁场≤350 mG。 (4) 支持符合使用条件的手术床≥2张。 (5) 具备可重复使用电磁定位贴片。 (6) 具备脚踏开关。 4.定位配件： (1)具备固头式定位导管，导管外径≤2.0 mm，导管末端含电磁感应器，且可感知3D位置。 ★(2)具备可伸缩式预弯延长导管，预弯设计便于远端方向调节，并同时满足导管内径≥2.0 mm，外径≤2.6 mm，长度≤1070 mm，可选预弯角度至少包括180°、90°和45°。 (3)具备内镜适配器，可固定延长导管与支气管镜的相对位置和调节轻紧度，便于实现单人导航操作。 (4)电源要求：输入电压220-240 VAC,50/60Hz；输入功率≤400VA。 (5)运行环境要求：温度范围15°C-35°C (59°F-95°F)，相对湿度30%-75%，大气压范围70.0kPa–106.0kPa。 品目2：射频治疗仪 1套 国产 1.治疗主机： 1.1治疗范围：宫颈糜烂、宫颈息肉、宫颈肥大、尖锐湿疣、前庭大腺囊肿。 1.2工作频率：550KHz±40KHz。 1.3输出功率范围：15～50W可调，步进为1W。 ★1.4阻抗百分比显示为100～999%。 2.无烟保证指标： 2.1烟雾净化高频手术电极：设置在手术刀头的吸风口，吸烟率≥99%。 2.2管径大于5MM的专用操作手柄。 2.3气管防折叠系统：设有防折皱装置的管路。 2.4专用真空系统：140L/MIN抽吸45dB超低静音，可以产生≥-700mmHg的近似真空的压力。 2.5四层烟尘净化系统 ①.防尘：HEPA对直径为0.3微米微粒的过滤效≥99 %； ②.除臭：活性炭专用于吸附甲醛、苯系物、氨、氧、TVOC等有害物质，祛除异味； ③.灭菌：活性炭可杀灭大肠杆菌，金黄色葡萄球菌、霉菌、脓菌等致病菌，抑制流行病原的传播。 ④.杀毒：冷触酶可破坏固化病毒的蛋白质，将有机污染物和部分无机物分解成二氧化碳和水。 ★2.6 手柄：方便拔插手术电极；拥有凝、切双按钮；大于5MM的管径，宫颈自动无烟电切技术，自动旋切病变组织。 2.7 无烟手术电极具有：锥形电极、环形电极、方形电极、适形电极。 3.专用宫颈刀具： 宫颈凝固刀、宫颈肥大刀、宫颈息肉刀、尖锐湿疣刀、前庭大腺囊肿刀。 4.宫颈冷刀自动锥切系统： 4.1锥切范围可控：冷刀切割范围可控制，可根据宫颈坏死组织大小，控制深入的深浅从而控制切割的范围。 ★4.2无热损伤：自动锥切通过电机控制，完全冷锥切。 4.3活组织细胞取检：手动控制切割。 4.4组织结构：送检细胞组织结构完整，保留完整的上皮和足够的间质。 4.5送检组织染色后可见：细胞大小、形态；细胞核大小、颜色、形状、核分裂是否增多、有无病理性核分裂像；异性细胞多少及区域；基底膜是否完整。 5.侧开式专用窥阴器： 方便观察与治疗阴道壁疾病，在治疗过程中可在不抽出刀具的情况下直接置入或取出窥阴器。 6.工作环境温度： 6.1环境温度范围：5℃-40℃ 6.2相对湿度：≤80% 6.3电源：交流220V±22V 50Hz±1 Hz 6.4大气压力70kpa-106kpa 合同履行期限：合同签订后60日内。 需落实的政府采购政策内容：中小微企业（含监狱企业）的规定；对于促进残疾人就业政府采购政策的规定、对于节能产品、环境标志产品的相关规定等。 本项目（是/否）接受联合体投标：否 二、供应商的资格要求 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无。 3.本项目的特定资格要求：设备属于医疗器械的，需提供医疗器械生产许可证（国产产品制造商提供）、医疗器械经营许可证（或对应类别备案凭证）、医疗器械注册证(有效期内)，否则提供设备不属于医疗器械的情况说明。 三、政府采购供应商入库须知 参加辽宁省政府采购活动的供应商未进入辽宁省政府采购供应商库的，请详阅辽宁政府采购网 “首页—政策法规”中公布的“政府采购供应商入库”的相关规定，及时办理入库登记手续。填写单位名称、统一社会信用代码和联系人等简要信息，由系统自动开通账号后，即可参与政府采购活动。具体规定详见《关于进一步优化辽宁省政府采购供应商入库程序的通知》（辽财采函〔2020〕198号）。 四、获取招标文件 时间：2023年03月13日 09时30分至2023年03月20日 17时30分（北京时间，法定节假日除外） 地点：线上获取 方式：线上 售价：免费 五、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 2023年04月07日 13时30分（北京时间） 地点：辽宁承明招投标有限公司（沈阳市皇姑区黄河南大街106号丽阳商务大厦A座16层1602室）。 六、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 七、质疑与投诉 供应商认为自己的权益受到损害的，可以在知道或者应知其权益受到损害之日起七个工作日内，向采购代理机构或采购人提出质疑。 1、接收质疑函方式：线上或书面纸质质疑函 2、质疑函内容、格式：应符合《政府采购质疑和投诉办法》相关规定和财政部制定的《政府采购质疑函范本》格式，详见辽宁政府采购网。 质疑供应商对采购人、采购代理机构的答复不满意，或者采购人、采购代理机构未在规定时间内作出答复的，可以在答复期满后15个工作日内向本级财政部门提起投诉。 八、其他补充事宜 1.本项目采用全流程电子招投标，参与本项目的供应商须自行办理好CA锁，供应商除在电子评审系统上传投标（响应）文件外，应在递交投标（响应）文件截止时间前提交按采购文件规定的介质形式（U盘）存储的可加密备份文件，并承诺备份文件与电子评审系统中上传的投标（响应）文件内容、格式一致，备系统突发故障使用。供应商仅提交备份文件或电子投标文件的，投标（响应）无效。详见辽宁政府采购网《关于完善政府采购电子评审业务流程等有关事项的通知》 辽财采函{2021} 363号。2.供应商自行准备电子设备确保能够自行报价及解密。3.电子投标文件在辽宁政府采购网线上提交，备份文件提交至辽宁承明招投标有限公司。 九、对本次招标提出询问，请按以下方式联系 1.采购人信息 名 称： 中国医科大学附属盛京医院 地 址： 沈阳市和平区三好街36号 联系方式： 廖主任 024-23895213 2.采购代理机构信息： 名 称： 辽宁承明招投标有限公司 地 址： 沈阳市皇姑区黄河南大街106号丽阳商务大厦A座16层1602室 联系方式： 024-86803737 邮箱地址： liaoningshangyu@126.com 开户行： 光大银行沈阳皇姑支行 账户名称： 辽宁承明招投标有限公司 账号： 7581018800024251300007 3.项目联系方式 项目联系人： 孙少伟、郭晓川 电 话： 024-86803737 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 $('.clickModel').click(function() { $('.modelDiv').show() }) $('.closeModel').click(function () { $('.modelDiv').hide() }) 基本信息 关键内容：细胞定量分析 开标时间：2023-04-07 13:30 预算金额：500.00万元 采购单位：中国医科大学附属盛京医院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：辽宁承明招投标有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目招标公告 辽宁省-沈阳市-和平区 状态：公告 更新时间： 2023-03-13 （中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目）招标公告 项目概况 中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目招标项目的潜在供应商应在线上获取招标文件,并于2023年04月07日 13时30分（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目编号：JH22-210000-65101 项目名称：中国医科大学附属盛京医院胸外科支气管导航系统等设备采购项目 包组编号：001 预算金额（元）：5,000,000.00 最高限价（元）：5,000,000 采购需求： 查看 品目1：支气管导航系统 1套 进口 一、项目概况： 1.设备名称：支气管导航系统 2.数量：1套 3.用途说明： a) 用于经支气管途径进行肺内组织活检采样。 b) 用于对纵隔淋巴结的定位与活检采样，进行肺癌分期。 c) 用于外科微创手术的病变的标记定位； d) 用于肺外周病变的微创介入治疗。 二、主要技术参数及要求： （一）系统功能： ★1.导航方式：经支气管实时电磁导航。 2.具备虚拟导航功能。 3.导航精度≤3mm。 ★4.可适用直径1cm的肺部病变。 （二）系统技术要求： 1.系统台车 (1) 具备复合视频输入。 (2) 具备S端子视频输入。 (3) 具备DVI-D视频输出。 2.专用计算机系统 （1）配备触摸显示屏，尺寸≥24寸，分辨率≥1900×1200像素。 （2）导航视窗个数≥12个。（3）具备内窥镜视图。 （4）具备虚拟支气管镜视图。 （5）具备局部视图 （6）具备气道探测器视图和3D CT视图，可实现360度三维CT任意视角查看功能。 （7）具备静态3D支气管视图。 （8）具备动态3D支气管视图。 （9）具备最大密度投影（MIP）视图，可三维重建肺部血管。 （10）具备平行视图。 （11）具备探头视图。 （12）具备CT视图水平位。 （13）具备CT视图冠状位。 （14）具备CT视图矢状位。 （15）最多同时可显示导航视窗个数≥ 6 个。 （16）注册匹配方式：自动/手动。 （17）具备注册5星评分功能，用于评估导航误差。 （18）具备定位子系统。 （19）具备每次活检位置标记功能。 3.导航系统附件： ★(1) 具备独立电磁定位板，占地面积≤500mm×600mm，厚度≤10mm。 (2) 定位板工作频率最少包括以下频率：2.5 kHz, 3.0 kHz, 3.5 kHz。 (3) 定位板最大磁场≤350 mG。 (4) 支持符合使用条件的手术床≥2张。 (5) 具备可重复使用电磁定位贴片。 (6) 具备脚踏开关。 4.定位配件： (1)具备固头式定位导管，导管外径≤2.0 mm，导管末端含电磁感应器，且可感知3D位置。 ★(2)具备可伸缩式预弯延长导管，预弯设计便于远端方向调节，并同时满足导管内径≥2.0 mm，外径≤2.6 mm，长度≤1070 mm，可选预弯角度至少包括180°、90°和45°。 (3)具备内镜适配器，可固定延长导管与支气管镜的相对位置和调节轻紧度，便于实现单人导航操作。 (4)电源要求：输入电压220-240 VAC,50/60Hz；输入功率≤400VA。 (5)运行环境要求：温度范围15°C-35°C (59°F-95°F)，相对湿度30%-75%，大气压范围70.0kPa–106.0kPa。 品目2：射频治疗仪 1套 国产 1.治疗主机： 1.1治疗范围：宫颈糜烂、宫颈息肉、宫颈肥大、尖锐湿疣、前庭大腺囊肿。 1.2工作频率：550KHz±40KHz。 1.3输出功率范围：15～50W可调，步进为1W。 ★1.4阻抗百分比显示为100～999%。 2.无烟保证指标： 2.1烟雾净化高频手术电极：设置在手术刀头的吸风口，吸烟率≥99%。 2.2管径大于5MM的专用操作手柄。 2.3气管防折叠系统：设有防折皱装置的管路。 2.4专用真空系统：140L/MIN抽吸45dB超低静音，可以产生≥-700mmHg的近似真空的压力。 2.5四层烟尘净化系统 ①.防尘：HEPA对直径为0.3微米微粒的过滤效≥99 %； ②.除臭：活性炭专用于吸附甲醛、苯系物、氨、氧、TVOC等有害物质，祛除异味； ③.灭菌：活性炭可杀灭大肠杆菌，金黄色葡萄球菌、霉菌、脓菌等致病菌，抑制流行病原的传播。 ④.杀毒：冷触酶可破坏固化病毒的蛋白质，将有机污染物和部分无机物分解成二氧化碳和水。 ★2.6 手柄：方便拔插手术电极；拥有凝、切双按钮；大于5MM的管径，宫颈自动无烟电切技术，自动旋切病变组织。 2.7 无烟手术电极具有：锥形电极、环形电极、方形电极、适形电极。 3.专用宫颈刀具： 宫颈凝固刀、宫颈肥大刀、宫颈息肉刀、尖锐湿疣刀、前庭大腺囊肿刀。 4.宫颈冷刀自动锥切系统： 4.1锥切范围可控：冷刀切割范围可控制，可根据宫颈坏死组织大小，控制深入的深浅从而控制切割的范围。 ★4.2无热损伤：自动锥切通过电机控制，完全冷锥切。 4.3活组织细胞取检：手动控制切割。 4.4组织结构：送检细胞组织结构完整，保留完整的上皮和足够的间质。 4.5送检组织染色后可见：细胞大小、形态；细胞核大小、颜色、形状、核分裂是否增多、有无病理性核分裂像；异性细胞多少及区域；基底膜是否完整。 5.侧开式专用窥阴器： 方便观察与治疗阴道壁疾病，在治疗过程中可在不抽出刀具的情况下直接置入或取出窥阴器。 6.工作环境温度： 6.1环境温度范围：5℃-40℃ 6.2相对湿度：≤80% 6.3电源：交流220V±22V 50Hz±1 Hz 6.4大气压力70kpa-106kpa 合同履行期限：合同签订后60日内。 需落实的政府采购政策内容：中小微企业（含监狱企业）的规定；对于促进残疾人就业政府采购政策的规定、对于节能产品、环境标志产品的相关规定等。 本项目（是/否）接受联合体投标：否 二、供应商的资格要求 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无。 3.本项目的特定资格要求：设备属于医疗器械的，需提供医疗器械生产许可证（国产产品制造商提供）、医疗器械经营许可证（或对应类别备案凭证）、医疗器械注册证(有效期内)，否则提供设备不属于医疗器械的情况说明。 三、政府采购供应商入库须知 参加辽宁省政府采购活动的供应商未进入辽宁省政府采购供应商库的，请详阅辽宁政府采购网 “首页—政策法规”中公布的“政府采购供应商入库”的相关规定，及时办理入库登记手续。填写单位名称、统一社会信用代码和联系人等简要信息，由系统自动开通账号后，即可参与政府采购活动。具体规定详见《关于进一步优化辽宁省政府采购供应商入库程序的通知》（辽财采函〔2020〕198号）。 四、获取招标文件 时间：2023年03月13日 09时30分至2023年03月20日 17时30分（北京时间，法定节假日除外） 地点：线上获取 方式：线上 售价：免费 五、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 2023年04月07日 13时30分（北京时间） 地点：辽宁承明招投标有限公司（沈阳市皇姑区黄河南大街106号丽阳商务大厦A座16层1602室）。 六、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 七、质疑与投诉 供应商认为自己的权益受到损害的，可以在知道或者应知其权益受到损害之日起七个工作日内，向采购代理机构或采购人提出质疑。 1、接收质疑函方式：线上或书面纸质质疑函 2、质疑函内容、格式：应符合《政府采购质疑和投诉办法》相关规定和财政部制定的《政府采购质疑函范本》格式，详见辽宁政府采购网。 质疑供应商对采购人、采购代理机构的答复不满意，或者采购人、采购代理机构未在规定时间内作出答复的，可以在答复期满后15个工作日内向本级财政部门提起投诉。 八、其他补充事宜 1.本项目采用全流程电子招投标，参与本项目的供应商须自行办理好CA锁，供应商除在电子评审系统上传投标（响应）文件外，应在递交投标（响应）文件截止时间前提交按采购文件规定的介质形式（U盘）存储的可加密备份文件，并承诺备份文件与电子评审系统中上传的投标（响应）文件内容、格式一致，备系统突发故障使用。供应商仅提交备份文件或电子投标文件的，投标（响应）无效。详见辽宁政府采购网《关于完善政府采购电子评审业务流程等有关事项的通知》 辽财采函{2021} 363号。2.供应商自行准备电子设备确保能够自行报价及解密。3.电子投标文件在辽宁政府采购网线上提交，备份文件提交至辽宁承明招投标有限公司。 九、对本次招标提出询问，请按以下方式联系 1.采购人信息 名 称： 中国医科大学附属盛京医院 地 址： 沈阳市和平区三好街36号 联系方式： 廖主任 024-23895213 2.采购代理机构信息： 名 称： 辽宁承明招投标有限公司 地 址： 沈阳市皇姑区黄河南大街106号丽阳商务大厦A座16层1602室 联系方式： 024-86803737 邮箱地址： liaoningshangyu@126.com 开户行： 光大银行沈阳皇姑支行 账户名称： 辽宁承明招投标有限公司 账号： 7581018800024251300007 3.项目联系方式 项目联系人： 孙少伟、郭晓川 电 话： 024-86803737

文章来源：中华检验医学杂志, 2022,45(8) : 790-801作者：中国中西医结合学会检验医学专业委员会摘要嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果。流式细胞术（FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每一个步骤中都起到非常重要的作用，包括靶点筛查、CAR-T细胞产品成分鉴定、毒性预估、微小残留病（MRD）检测、免疫功能评价、免疫微环境研究等。为了深刻认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗这一新兴领域的作用，规范每一项应用中的操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会制定了此专家共识。嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］，尤其是CD19-CAR-T细胞免疫治疗难治复发B细胞急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）获得了90%左右的缓解率［1, 2, 3］，单独使用或者桥接异基因造血干细胞移植均极大程度地提高了患者的完全缓解率和生存率；CAR-T细胞免疫治疗其他类型白血病、淋巴瘤、骨髓瘤以及实体瘤也在不断探索并取得巨大进步［4, 5, 6, 7］。流式细胞术（flow cytometry，FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每个步骤中都起到非常重要的作用 ［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］。作为一项免疫治疗，CAR-T细胞免疫治疗相关检验中涉及的FCM与临床常规不同，体现在靶点评估需要精确设门并且同时关注正常细胞的表达，CAR-T细胞免疫治疗后微小残留病（minimal/measurable residual disease，MRD）需要考虑靶点丢失以及输入的CAR-T细胞影响，而CAR表达细胞比例和数量的检测以及免疫相关检测均缺乏规范化，给临床工作带来不确定性等。为了能使更多相关领域的科研、临床和实验室检测人员认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗中的作用和注意事项，规范在每项检验中的实验方案和技术操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家结合文献学习和多家医疗机构的临床工作实践制定了本专家共识。适用范围、术语和定义一、适用范围各类医疗机构临床实验室、商业化实验室和科研单位在使用FCM进行CAR-T细胞免疫治疗相关临床检验时，均可采用或参照使用本专家共识。鉴于CAR-T细胞生产过程中的创新性和复杂性，并且该步骤极少在临床诊断实验室中进行，本共识不涉及此研发过程。二、术语和定义1.多参数流式细胞术（multiparametric flow cytometry，MFC）：虽然MFC的术语出现于20世纪80年代，当初指代两色以上FCM，后期对此也没有明确定义，但是现在普遍建议采用三激光八色或者以上机型。2.CAR-T细胞免疫治疗：人体免疫细胞（来自自体或异体均可），在体外经过基因修饰后具备了特异性识别和杀伤表达特定抗原的肿瘤细胞的能力，输入患者体内以实现清除肿瘤细胞或者其他病态细胞的免疫治疗方法［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］。CAR-T细胞免疫治疗技术包括几个步骤：（1）从患者或者供者血液中分离出自体或者异体T淋巴细胞；（2）用CAR编码的病毒载体进行体外修饰、培养；（3）最后输入患者体内。近年来为了增强治疗效果降低副作用，已发展到第4代CAR-T细胞免疫治疗技术。3.细胞因子：细胞因子是由多种免疫细胞分泌的一类小分子蛋白质，具有介导和调节免疫过程等作用。目前已经发现的人类细胞因子有200多种。根据结构和功能一般可分为白细胞介素（interleukin，IL）、干扰素（interferon，IFN）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、集落刺激因子、趋化因子和生长因子等。4.细胞因子释放综合征：细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome，CRS）是一种发生在任何免疫治疗后，由于内源性或者输注的T细胞和/或其他免疫效应细胞活化或者聚集导致的超生理反应。症状多样，但是必须包括初发时发热，可能伴有低血压、毛细管渗漏（低氧）和终末器官衰竭。尽管没有将细胞因子检测纳入定义，而CRS分级也主要是根据临床表现，但是鼓励进行C反应蛋白、细胞因子、铁蛋白等相关检测，便于为将来的研究提供依据［8］。5.趋化因子及其配体：趋化因子是能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子，其配体很多是免疫功能检测中区分淋巴细胞亚群的重要标志物，例如半胱氨酸-半胱氨酸基序趋化因子受体（cysteine-cysteine motif chemokine receptor，CCR）系列，半胱氨酸-氨基酸-半胱氨酸基序趋化因子受体（cysteine-X-cysteine motif chemokine receptor，CXCR）系列［9］。6.抗原表达率：精确设门后，特定细胞上抗原表达的百分比。临床工作中由于受到抗体和荧光素选择、抗原抗体结合过程、温度光照和放置时间导致荧光信号改变、仪器设置、设门精确度、个体差异、细胞异质性、对照细胞群、检测目的等多种因素影响，以诊断为目标的临床实验室，一般由流式操作人员排除各种影响因素后，按照表达、部分表达、不表达进行定性描述［10］，以方便临床和实验室对目的细胞群进行简单直观的性质判断。7.抗原表达强度：与某种抗原分子在细胞上表达量的多少有关，FCM的直观体现为荧光强度。根据抗原表达强度将阳性细胞表达分为强表达（bright，bri）、中等强度表达、弱表达（dim）和异质性表达［10］，可能会随着治疗和疾病或者活化状态发生改变。8.单链可变区片段（single-chain variable fragment，scFv）：构建CAR-T细胞需要将CAR基因通过病毒载体或非病毒系统转染并整合到T细胞基因组上。CAR基因正常表达时，形成跨膜的CAR结构，细胞外域的重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸短肽连接而成的部分即为scFv。编码的scFv元件既是CAR-T细胞识别肿瘤抗原的重要成分，也可作为FCM评价CAR表达情况的检测靶点之一。9.同型阴性对照：用于检测抗体与细胞表面可结晶段受体非特异性结合导致背景信号的阴性对照。应该用与检测抗体相同标记、同种属来源、相同亚型、相同浓度的免疫球蛋白进行染色，如果是间接标记抗体，还需要做二抗的荧光素背景对照，其作用是设置仪器条件，消除背景染色。对于正常标本中不存在的未知标志或者与阴性细胞界限不清的标志，或者标本中比例极低需要精确检测的标志，同型阴性对照是普遍采用的对照。CAR-T细胞免疫治疗相关检验中的FCM项目CAR-T细胞的生产研发、临床治疗每个环节都与FCM检测密不可分，包括靶点筛查、患者选择、CAR-T细胞成分鉴定、毒性预估、MRD检测、回输物和患者标本免疫功能评价、免疫微环境和复发机制研究等。鉴于CAR-T细胞治疗这一全新领域集合了肿瘤细胞和正常细胞免疫表型、肿瘤干细胞免疫表型、免疫细胞亚群、细胞因子检测、CAR-T细胞检测、因部分病例靶点丢失甚至系别转变导致需要调整方案的FCM MRD检测、肿瘤异质性和免疫微环境检测等（表1），以及CAR-T细胞治疗设计的多样性和复杂性、临床工作中使用不同靶点或者联合靶点CAR-T细胞治疗、使用其他细胞因子或者信号分子靶向药物控制副作用等，这些都对FCM检测提出更高的要求。因此深入了解每个环节需要使用的标本类型、检测方案以及最低检测要求，将有助于进一步规范检测流程，提高检测水平，保证检测质量。FCM在CAR-T细胞免疫治疗靶点筛查中的应用随着CAR-T细胞治疗技术的不断完善，CAR-T细胞的功能和治疗的安全性都有了很大提升，并有CAR-自然杀伤（natural killer，NK）细胞、双特异性靶点CAR-T细胞等类似靶向细胞免疫治疗产品出现。但是作为特异性免疫治疗，胞外抗原识别区的设计，尤其是有效靶点的选择始终是每一种CAR-T细胞治疗相关产品的关键环节。理想的靶点应该满足下述要求：高覆盖率（某种疾病的群体中，肿瘤细胞表达该抗原的患者比例高）、高表达率（阳性个体中几乎所有肿瘤细胞都表达）、高表达强度（在肿瘤细胞表面抗原分子数量多，表现为同一种荧光标记时，荧光强度高）、高特异性（在正常细胞中不表达或者少表达，对患者不会造成严重影响）［11］。FCM作为一项快速、简便、直观、定性定量的技术，是目前实现这一目的的重要检测手段，而CAR-T细胞治疗靶点的选择虽然都是在免疫分型或者MRD的基础上进行，但是比常规临床诊断有更严格的特殊注意事项［12, 13］。共识2：为了尽可能给CAR-T细胞免疫治疗提供客观评价，建议一项研究或治疗过程中尽量采用相同的方案，至少是关键抗体和组合相似的方案。同一患者的随访监测尽量在同一台仪器上进行，且尽量仪器条件（包括补偿）相同，或者进行仪器间条件比对。推荐强度：建议执行。）专家组成员（按姓名字母顺序排列

1947年，Mandel和Metais首次报道了外周血中存在游离DNA（Cell-free DNA, cfDNA）。正常生理状态下，血液中的cfDNA主要来源于白细胞的坏死和凋亡；在某些疾病和特殊状态下，如组织损伤、癌症和炎症反应等，细胞内的DNA片段也会被释放到各种体液中（血浆、脑脊液、尿液等）成为cfDNA。在癌症早期，当患者还未表现出明显的临床症状时，细胞内DNA状态就已经发生变化，这些DNA被释放到体液中，使得体液cfDNA中包含了与癌症相关的重要信息。通过对这些信息进行提取和处理，可对癌症进行非侵入式诊断，实现癌症的早期诊疗，因此，cfDNA检测是目前市场上最常见的液体活检形式。髓母细胞瘤（Medulloblastoma，MB）是一种恶性的儿童胚胎中枢神经系统肿瘤，具有沿软脑膜转移的倾向。根据基因组特征可分为4个亚群：WNT、SHH、 Group 3和Group 4。手术切除结合放化疗是目前治疗MB的首选治疗方案（可治疗约70%的病人），术后的标本则作为诊断和肿瘤特征分析的证据。MB能够随着时间的推移而发展，约1/3患有MB的儿童最终都是死于该疾病，存活下来的患者也需要长期忍受由于治疗而产生的毒性。目前，除了磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging, MRI）和脑脊液（Cerebrospinal fluid, CSF）细胞学检测，还没有可靠的分子生物标志物来反应MB的进展情况。因此，通过纵向样本开发强大的、微创的、临床可操作的生物标志物是非常必要的。研究显示，在 CNS 恶性肿瘤患者中，CSF来源的cfDNA比从血浆中分离出来的cfDNA具有更大的效用【1-2】。MB基因组几乎没有热点驱动突变，而是以普遍的染色体拷贝数变异（Copy number variations, CNVs）为特征，因此限制了cfDNA 突变分析在MB中的通用性【2-3】。近日，来自美国St. Jude儿童研究医院的Paul A. Northcott团队在Cancer Cell杂志在线发表了题为Serial assessment of measurable residual disease in medulloblastoma liquid biopsies的文章。研究人员利用MB中染色体不稳定性的特点，通过低深度全基因组测序（Low-coverage whole-genome sequencing, Lc-WGS）对来自123名MB患者的476例CSF来源的cfDNA样本进行分析，鉴定了可作为可测量残留病变（Measurable Residual Disease, MRD）标志物的CNVs，阐释了cfDNA检测的疾病预测价值和诊断价值。本研究共收集了来自123名MB患者的共476例CSF样本，提取cfDNA进行低深度全基因组测序（lcWGS），并进行后续分析（图1）。首先，作者评估了cfDNA来源的CNVs作为MRD标志物的效用。数据显示，在67例样本（67/105）中检测到了MRD；相反，7例非肿瘤CSF样本中都没有检测到cfDNA来源的CNVs，即MRD阴性。MRD阳性CSF样本与相应的原发性肿瘤之间的CNVs检测谱高度一致。MRD检测与疾病的转移状态、分子亚群和肿瘤位置显著相关，与年龄、性别、切除范围、细胞学检查结果以及切除和脑脊液取样之间的时间无关。值得注意的是，无论相应的脑脊液细胞学结果如何，MRD在高危疾病患者中的阳性率相似：91例脑脊液细胞学阴性的样本中有56例样本的MRD呈阳性。图1. 样品收集及检测流程图随后，作者探究了连续MRD检测与疾病复发之间的关系。在30/77（39%）例放疗后、21/75（28%）例化疗中及20/68（34%）例治疗结束的患者中检测到MRD。出现疾病复发的患者在治疗期间的MRD持续率明显高于没有复发的患者。在MRI显示病情完全缓解的32例病人中，有16例病人在复发前3个月时就检测到了MRD，此时影像学或细胞学异常还不能检测到。在所有持续接受放化疗或细胞学有差异的12例病人的CSF样本（n=27）中均检测到了MRD。24/25例患者在病情发展的3个月内采集的脑脊液标本中MRD呈阳性；在病情没有进展的患者中，193/209（92%）例CSF样本都是MRD阴性。那么，连续检测MRD在临床上有何价值？作者发现，那些放化疗后、治疗期间或已经结束治疗的病人中，MRD阳性病人的无进展生存期（progression-free survival, PFS）比MRD阴性的病人差很多。与治疗结束时MRI和脑脊液细胞学检查的标准评价进行比较，同时进行的MRD检测对于病人分类更有效，其对残留病变的灵敏度也更高（64% vs. 24%）。在治疗结束的病人中，12/20（60%）MRD-阳性的病人的MRI/细胞学检查正常，但后期其中的10位病人的病情都有所进展；其余两例病人MRI正常其MRD也呈阳性。在高风险患者中，治疗结束时的MRD与PFS有显著关系。作为一个随时间变化的变量，随访期间MRD检测与PFS显著相关。接下来，作者对疾病复发中的肿瘤相关分子图谱进行了分析。为了同时在早期和疾病进展期检测渐进性疾病（Progressive disease, PD）和MRD阳性患者的CSF，作者比较了从患者匹配的CSF样本中提取的CNVs谱，发现了染色体非整倍性，提示12/15（80%）例患者存在克隆选择或进化。cfDNA 分析可以更早地检测出那些在疾病复发时占主导地位的肿瘤克隆。在研究过程中，作者也注意到了原位肿瘤与cfDNA中检测到的CNVs不一致的情况。例如，患者sj024被诊断为Group4髓母细胞瘤，随后又出现转移性骨骼复发。然而与相应的原位肿瘤CNV检测结果相比，患者的cfDNA来源的CNVs谱更符合复发肿瘤特性，提示患者的CSF样本中包含了具有侵略性的亚克隆，可以驱动疾病的进展。最后，作者进一步评估了基于 lcWGS 的 cfDNA 分析在其他儿童脑肿瘤中的适用性。通过对17名非髓母细胞瘤患者进行分析，发现所有患者在其相应的原发肿瘤中都存在染色体和/或局灶性CNVs。基于lcWGS分析CSF来源cfDNA显示，13例（76%）样本呈MRD阳性，包括3例转移样本。此外，作者还观察了与临床过程相呼应的cfDNA样本的分子反应，其与MB中的发现类似。综上所述，该研究利用从MB和其他CNS肿瘤患者收集的脑脊液样本的大型纵向队列，首次有效地、系统地论证了CSF来源的cfDNA谱在儿童CNS癌症中检测MRD的临床效用（图2）。虽然液体活检的种类和方式非常丰富，但作者认为使用lcWGS检测CSF来源的cfDNA中的肿瘤相关CNVs非常适合于MB：（1）MB切除后患者脑脊液或血浆中cfDNA的含量明显低于其他脑肿瘤患者【4-5】，这种低于毫微克的产物，若采用其他检测方法（如表观遗传组和突变分析）是极具挑战的，但对lcWGS已经足够；（2）染色体CNVs在儿童MB中几乎无处不在，捕获CNVs无需使用定制探针来靶向不同的突变驱动基因，适用于缺乏已知驱动基因突变的MB样本。该研究支持将前瞻性cfDNA评估纳入MB临床试验，以进行进一步的研究和技术改进，最终实现根据MRD反应进行个性化治疗。图2. cfDNA检测流程及临床效用原文链接:https://doi.org/10.1016/j.ccell.2021.09.012

隔壁的直男师兄今年喜得千金，最近总在实验室诡异地傻笑，问他为何，说是时常想起女儿的可爱模样。 这种感情，没养育过孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在实验室养育细胞，也一样寄托感情，生怕细胞被养坏了。一个闪失，就前功尽弃。实验结果不可靠，没有一致性和稳定性，还重复不出来，再浓密的头发也经不住这样的考验。所以，有一个稳定、一致的培养环境，那就很重要了。 培养细胞不可能24小时值守，快快请出四大护法相助！ 1. 大护法：二甲基亚砜（DMSO） 成功冻存和复苏细胞是细胞培养研究的常规操作。细胞低温储藏时，防止冰晶形成是维持细胞活力的关键。大护法DMSO作为冷冻保护玻璃化剂，可以让细胞免受冰晶导致的机械损伤。大护法法力无边，能够用于原代、继代培养和重组的异倍体和杂交瘤细胞系、胚胎干细胞 (ESC) 以及造血干细胞的冻存。 下面为大家解密DMSO这个既熟悉又陌生的细胞培养大护法～～l DMSO的摩尔浓度是多少？DMSO的摩尔浓度为14.1 M，依据是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。l DMSO的来源？过去，DMSO是从树皮中分离出来的。现在，它是一种商业合成的溶剂。l 细胞冻存培养基中应使用什么浓度的DMSO？DMSO通常以1-10％的浓度使用，具体取决于细胞系。 l DMSO应该是液体，为什么我收到后却是固体？DMSO的熔点为16-19℃，室温过低就凝固。这并不妨碍使用，可以缓慢加热令其重新液化，不会有任何影响。l 哪种类型的过滤器可用于无菌过滤DMSO？DMSO可以用带0.2 μm PTFE膜的过滤器进行无菌过滤。 每个伺候细胞宝宝的“宝爸宝妈”对棕瓶子白盖子的DMSO应该都不陌生。没错！正是Sigma-Aldrich® 品牌热卖的这款DMSO（货号：D2650）：明星产品，质量过硬，口碑积累，适用性广，久经验证。 2. 二护法：血清 血清里的生长因子能促进细胞的繁殖，附着因子可促进细胞的贴壁，此外矿物质、脂类及激素对细胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清，公认澳洲来源的血清品质更优、更安全。 赶快来了解一下保护细胞宝宝的二护法吧～～l 如何解冻血清？血清应在2-8°C过夜解冻以避免降解，或者在室温条件下，定期轻轻摇动使组分重悬。解冻的血清在加入细胞培养基前应该混合均匀。反复冻存会严重影响血清品质，建议将解冻的血清分装成单次使用量，并冻存于-20°C。如果储存于2-8°C的环境中，应该在2-4周内尽快使用。温度超过37°C时血清会降解，功能遭到破坏。l 如果血清收到时存在部分解冻，还能继续使用吗？血清是干冰包装运输，到达时应该是冷冻状态。运输超期，会部分解冻，但依然可以继续使用。l 培养基中加入血清和所有补充物后可以储存多久？如果正确无菌操作，添加血清的培养基可以在2-8°C最长储存6周。不论储存时间长短，一旦培养基变浑浊，应该使用适当的方法丢弃。l 为什么血清会出现浑浊或絮状物质？原因很多，主要有二：1. 反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊，所以，一定要分装哦～～2. 血清加工中遗留的纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白，过量的纤维蛋白就呈现为絮状物。不要着急，可以离心移除；不推荐过滤哦，因为容易堵。l 什么是γ辐照的血清？γ辐照的血清通过暴露于放射性60Co产生的25-40 kGy剂量的γ射线来灭活病毒和其他外来微生物(比如支原体)。γ辐照处理不影响血清的理化性质或细胞培养性能。l 为什么有些血清是热灭活的？如何热灭活？哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌、从肥大细胞和血小板中释放组胺和激活淋巴细胞和髓细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性，因此免疫学应用，培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟，并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确，可使用一个类似大小的瓶子作为对照，对照瓶内放入同等体积的水，并放置一个温度计，在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制，避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。l 胎牛血清的颜色和之前使用的批次不同，会影响血清使用效果吗？血清的颜色取决于血红蛋白浓度，颜色差异不影响血清性能。 说了这么多，从哪里请到这尊神呢？当然首选默克啦～～澳洲来源的牛血清，满足培养细胞的不同需要！货号产品描述F8318-500ML胎牛血清，澳大利亚来源，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，500mLF8687-500ML胎牛血清，澳大利亚来源，γ辐照，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，500mLB7446-1000ML小牛血清，澳大利亚来源，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，1000mLB7447-1000ML小牛血清，澳大利亚来源，γ辐照，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，1000mL 3. 三护法：胰蛋白酶 在细胞培养中，从组织上解离或从贴壁基质上分离细胞的步骤很关键，一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用于赖氨酸或精氨酸的C末端，在37°C时具有最佳的效率，因此使用期前要预热。当然，高浓度的胰蛋白酶长期孵育会去除细胞表面蛋白而损伤细胞，甚至杀死细胞。看来，这个护法的脾气可不好哦～～ 根据应用和细胞类型的不同，胰蛋白酶的组分和浓度也不同。比如，粘附分子在钙离子存在时决定细胞-细胞和细胞-基质的相互作用，为了削弱折衷联系，通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二价阳离子（Ca, Mg）（点击这里，了解更多：T4049）。 胰蛋白酶的主要来源是猪的胰脏，产品是冻干粉或溶液。为了避免动物或微生物物质，现在也有技术可以在玉米中重组表达牛胰蛋白酶，厉害吧？(点击这里，了解更多：T3449)。 胰蛋白酶的使用浓度也很有讲究。对于强贴壁细胞系，常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果实验需要细胞表面蛋白完整，则应降低使用浓度（0.05%胰蛋白酶）。 4. 四护法：抗生素 细菌宝宝的生存环境这么好，肯定有坏蛋觊觎，这就需要请出四护法——抗生素。 常见的生物污染由细菌、真菌和支原体造成，部分由病毒、化学物和细胞交叉污染造成。抗生素可以控制细胞培养中的生物污染。灵活使用抗生素是控制污染的方法，但千万不要偷懒，还是要注意无菌操作哦～～ 青霉素对大多数革兰氏阳性菌和少数革兰氏阴性菌有效，链霉素对革兰氏阴性菌和少数革兰氏阳性菌有效，联合使用青霉素和链霉素（简称双抗），就能有效控制细胞培养中大多数细菌的污染啦～～ 默克旗下有相当靠谱的抗生素。Sigma-Aldrich® 品牌热卖的青链霉素溶液（货号为V900929）不仅性能稳定，超高性价比；而且还是即用型经典配方（10KU青霉素和10mg链霉素/mL），直接以1:100比例添加到培养基中就全搞定！ 怎么样？这四大护法，是不是各个身手不凡呀！有了他们，细胞宝宝就可以健康无忧啦～～ 友情提醒，11月起我们会推出四大护法优惠组合套装，敬请留意~也欢迎大家在留言区分享自己培养细胞的心得体会～～我们会精选出五个有趣有料的留言，送上默克超可爱的萌娃家族盲盒一个，共有5位幸运儿，快来留言参与吧！ 留言截止时间：2020年10月30日12：00

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在猪场上中，仔猪的多系统衰竭综合征、各种呼吸道疾病和种猪的繁殖与呼吸综合征的发病率极高。虽然免疫程序一步不缺、常规消毒按规定进行，用药也很到位，但是猪的各种疾病依然是层出不穷。其原因主要是猪场上存在着隐形杀手——霉菌毒素。不管过去对霉菌污染下过多大功夫及防患措施，霉菌毒素的产生至今仍是全世界养猪业无时不存在的自然威协，给饲养者*大的危害与损失。本文主要针对各种霉菌毒素对猪只的影响及预防措施作一一的阐述。 霉菌毒素是某些霉菌在基质上生长繁殖过程中产生的有毒二次代谢产物。毒素在谷物的生产过程、饲料制造、贮存及运输过程中都会产生。畜禽食入这些毒素污染的饲料后可导致急性或慢性中毒，称为霉菌毒素中毒。霉菌毒素产生的临床症状会因饲料中毒素的含量、饲喂的时间、其他霉菌毒素的存在与否、动物本身的物种、年龄及健康状况而有所不同。 一、黄***素黄***素主要是黄曲霉和寄生曲霉产生的。其他曲菌、青霉菌、镰孢霉菌和链霉菌属的放线菌也能产生黄***素。所有的动物对黄***素敏感，然而不同动物的敏感性差异较大。在家禽中以雏鸭尤其敏感，在家畜中以仔猪*为敏感。依污染的严重程度，造成的损失包括饲料效率下降、生长延迟、屠体品质不佳、死亡。在20~200ppb的低浓度时，黄***素减少饲料摄入量、降低饲料利用率和免疫抑制。泌乳母猪的饲粮中若出现500ppb以上含量时，则会因乳汁中的黄***素而造成仔猪迟缓和死亡。即使离乳后不再饲喂含黄***素饲粮，但是仔猪生长受阻，饲养效果下降的情况一直至上市。而且低浓度的黄***素还会造成微血管脆弱而容易引起皮下出血及挫伤等。长期饲喂含有黄***素的动物，其肝脏、免疫系统及造血功能都会受损。黄***素通过干扰肝脏中脂肪向其它组织的输送，使脂肪大量堆积在肝脏而产生斑点，同时还会干扰肝脏的合成维生素和解毒的其他功能。 而黄***素对免疫系统所造成的伤害比肝脏要严重，即使是在较低剂量下的黄***素也会伤及免疫系统。黄***素通过与DNA和RNA结合并抑制其合成，引起胸腺发育不良和萎缩，淋巴细胞减少，影响肝脏和巨噬细胞的功能，抑制补体（C4）的产生和T淋巴细胞产生白细胞介素及其他淋巴因子。黄***素还能通过胎盘影响胎儿组织的发育。而且黄***素还能危害通过接种疫苗的获得性免疫，如黄***素B1会干扰猪丹毒免疫所获得的免疫力。 二、呕吐毒素直到最近，呕吐毒素已被作为梭霉菌属的霉菌毒素污染的“标记”，故即使在饲料中发现含量很低的呕吐毒素，但仍会有梭霉菌属霉菌毒素中毒症的出现。对生长肥育猪而言，含有14ppm呕吐毒素的饲料饲喂后10~20分钟内即会出现呕吐、不正常的焦虑和磨牙现象。呕吐现象仅发生*一天（Williams et al.,1988）。持续低剂量饲喂会导致皮肤温度下降、胃食管部增生和血浆中α-球蛋白含量降低（Rotter et al.,1994）。呕吐毒素会强力抑制猪的采食量和生长速度，在呕吐毒素的含量在0~14ppm的试验中，Williams et al（1998）发现饲粮中每增加1ppm呕吐毒素，生长肥育猪的采食量即减少6%，在含毒量10ppm以上即完全拒食。而且呕吐毒素是潜在的蛋白质合成抑制剂，主要对快速生长的组织（如皮肤和粘膜）和免疫器官产生影响，导致对传染病的易感性。 三、玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮也称为F2毒素，是由禾谷镰孢霉菌产生，具有雌激素作用的霉菌毒素，其临床症状随接触剂量和猪年龄不同而异。在所有的圈养动物中，猪对玉米赤霉烯酮*为敏感，而受影响最大的部位主要是其生殖系统。较低浓度会诱发女性化现象，较高浓度会干扰排卵、受孕、植入及胚胎的发育。后备母猪*为敏感，0.5~1.0ppm低含量下即可造成假发情和阴道脱垂或脱肛（Blaney和 Williams，1991）。玉米赤霉烯酮会增加怀孕母猪发生流产及死产的几率、初生仔猪的存活率较差、出现八字腿及外阴*肿胀（Vanyi，1994）。Golhl（1990）指出饲粮中10ppm的F-2毒素会延长母猪自离乳至配种的间隔时间，降低窝仔数和增加畸形猪的数量。F-2毒素使年轻公猪*欲下降、睾丸变小、睾丸生精细胞上皮细胞变性最后形成精子发育不良和不孕、生精细管周围组织的炎症反应等。 四、T-2毒素T-2毒素是由念珠球菌属产生的新月毒素中的一种，新月毒素已超过100种，饲粮中的含量超过0.4ppm的毒素就会对动物产生中毒症状。T-2毒素属于组织刺激因子和致炎物质，直接损伤皮肤和粘膜。表现为厌食，呕吐，瘦弱，生长停滞，皮肤、粘膜坏死，胃肠机能紊乱，繁殖和神经机能障碍，血凝不良，肝功能下降，白细胞减少和免疫机能降低。T-2毒素通过影响DNA和RNA的合成及其通过阻断翻译的启动而影响蛋白质合成，而且T-2毒素还会引起胸腺萎缩，肠道淋巴腺坏死；破坏皮肤粘膜的完整性。抑制白细胞和补体C3的生成，从而影响机体免疫机能。 五、麦角毒素麦角毒素是麦角霉产生的一种毒素，它对所有的猪都会产生危害。其中毒的症状在数天内或数周内出现，包括精神沉郁，采食量减少，脉搏和呼吸加快，全身状况不佳，后腿常发生跛行，严重者尾巴、耳朵和蹄坏死及腐肉脱落，寒冷气候可使病情加重。麦角毒素还会通过引发无乳症而间接影响猪的繁殖。在妊娠期给怀孕青年母猪饲喂含0.3%麦角毒素的饲料，可导致新生仔猪出生体重下降，存活率降低和增重缓慢。日粮中含有0.1%的麦角毒素会使肥育猪生长缓慢。 六、赭曲霉毒素赭曲霉毒素是由赭曲霉（Asp.ochraceus）及鲜绿青霉(P.viridicatum)等所产生的一种霉菌肾毒素，它分为A、B两种类型。赭曲霉毒素A的毒性较大，且在自然污染的饲料中常见。猪摄入1ppm的赭曲霉毒素A可在5~6天致死。饲喂养含1ppm浓度的赭曲霉毒素的日粮，3个月后可引起烦渴、尿频、生长迟缓和饲料利用率降低；对于受霉菌毒素污染的饲料预防很重要，需要借助专业的仪器对以上多种霉菌毒素进行检测筛查，如果发现饲料中含量超标，及时处理预防后续引发的相应疾病的产生，给养猪户少一分危险多一份保障。 深芬仪器生产的霉菌毒素快速检测仪能够快速定量检测粮食、饲料、谷物、食用油、调味品等食品中黄***素、T2毒素、呕吐毒素、赭曲霉毒素、伏马毒素、玉米赤霉烯酮含量。霉菌毒素快速检测仪适用于粮油监测中心、粮油饲料生产加工、食品加工贸易、畜禽养殖户自查、工商质监部门用于市场快速筛查等。