甲醇中伊维菌素溶液标准物

0.9940。河豚鱼中的8种抗生素和鳗鱼中林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉它霉素方法检出限(LOD)为2.0 μg/kg；鳗鱼中螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星方法检出限(LOD)为5.0µg/kg。回收率在75.4%～124.0%之间。八种大环内酯类抗生素重复性相对标准偏差(RSDr)在1.34%～5.79%之间，再现性相对标准偏差(RSDR)在6.20%～15.27%之间。可以用于河豚鱼和鳗鱼中8种大环内酯类抗生素残留检测的高效液相色谱-串联质谱方法的定性和定量。河豚鱼和鳗鱼在中国有着悠久的食用历史，营养丰富。由于目前中国的河豚鱼和鳗鱼主要是养殖的，在养殖过程中不可避免使用抗生素用于保护鱼体正常生长。养殖用药主要是林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星和泰乐菌素等，该类抗生素通过羟基以苷键与去氧氨基糖或二甲氨基糖缩合成碱性苷，作用于细胞核糖体50 S亚单位，阻碍细菌蛋白质合成，有较强的抗菌活性。曾广泛应用于食用动物作为预防和治疗用药，而通过食用途径进入人体,导致中毒，甚至死亡。世界各国对抗生素药物残留均有严格的限量要求，欧盟已限制在供食用动物中的饲料中使用，中国也有相应的要求。近年来，日本、韩国针对河豚鱼以药物残留为借口相继对中国河豚鱼实行贸易技术壁垒，限制和排斥中国河豚鱼出口。因此，为破解该类壁垒、促进出口，一种高灵敏度的测定河豚鱼和鳗鱼中大环内酯类抗生素的多残留方法是十分必要的。林可霉素等抗生素的吸收光谱多在紫外末端区，缺乏可用的特征紫外吸收区位。已见报道的文献中，主要分析方法有微生物法、荧光光度法、紫外分光光度法、气相色谱、薄层谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法(CE)和液质联用技术LC-MSn法法。在近期的文献报道中，测定大环内酯类残留，样品前处理大多采用缓冲溶液提取合固相萃取技术分析技术，采用液相色谱-串联质谱方法检测。这种技术灵敏度高、选择性和特异性好，能够对低浓度的样品进行很好的定性确认，已经成为食品和环境中污染物定性、定量分析的重要手段。文献报道的测定大环内酯类分析方法多应用于食品和动物产品，未见到同时适用于河豚鱼、鳗鱼的相关检测研究。在参考以上文献的基础上，建立用Tris缓冲溶液提取河豚鱼和鳗鱼中8种大环内酯类抗生素残留，Oasis HLB固相萃取柱萃取、净化，罗红霉素为内标，LC-MS-MS检测河豚鱼和鳗鱼中8种大环内酯类抗生素的新方法。该方法经过4年的推广使用，提取操作简单、回收率稳定、灵敏度高、选择性好，未发现不良反应，林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉它霉素检出限达到2.0µg/kg，鳗鱼中的螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星检出限达到5.0µg/kg，低于国际上该类药物残留限量的检测要求。1 实验过程1.1 主要试剂水，符合GB/T 6682，一级。甲醇、乙腈，色谱纯。甲醇溶液(2+3)。定容液：0.01 mol/L乙酸铵溶液+乙腈(17+3)。tris溶液：依次溶解12.0 g三羟甲基氨基甲烷(tris)和7.35 g氯化钙(CaCl2·2H2O)于1000 mL水中，用盐酸调节pH值为9。标准物质：林可霉素(CAS 7179-49-9)、竹桃霉素(CAS 7060-74-4)、红霉素(CAS 59319-72-1)、替米考星(CAS 108050-54-0)、泰乐菌素(CAS 74610-55-2)、螺旋霉素(CAS 8025-81-8)、吉它霉素(CAS 1392-21-8)、交沙霉素(CAS 16846-24-5)和内标物质罗红霉素(CAS 80214-83-1)，纯度≥95%。2.0 μg/mL标准工作溶液：依次准确称取每种标准物质适量，用甲醇溶解至浓度为1.0 mg/mL的标准储备溶液；将标准储备溶液用甲醇逐步稀释为2.0 μg/mL的标准工作溶液。1.0 μg/mL内标标准溶液：准确称取罗红霉素适量，用甲醇溶解为浓度1.0 mg/mL的内标储备溶液；将内标储备溶液用甲醇逐步稀释为1.0 μg/mL内标标准溶液。测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液系列：分别吸取1.0 μL、2.0 μL、5.0 μL、25.0 μL浓度为2.0 μg/mL的标准工作溶液，依次加入到相应的试剂瓶中，再分别加入20.0 μL内标工作溶液，用河豚鱼样品空白提取液定容至1.0 mL。配成内标物浓度均为20 ng/mL，林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素分别为2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL的四个浓度水平的测定河豚鱼用基质标准混合工作溶液系列。测定鳗鱼用基质标准混合工作溶液：分别吸取浓度为2.0 μg/mL的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉它霉素标准工作溶液各1.0 μL、2.0 μL、5.0 μL、25.0 μL和螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星标准工作溶液各2.5 μL、5.0 μL、10.0 μL、25.0 μL，依次加入相应的试剂瓶中，再分别加

[align=center][size=24px]超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱检测农产品中阿维菌素残留方法研究[/size][/align][align=center][size=18px]鹤壁市农产品检验检测中心 张艳丽[font=宋体] 王丽娟[/font][/size][/align][align=left] 阿维菌素是一种新型类广谱性杀虫杀螨剂，由阿维链霉素经液体发酵加工而成，具有高效、广谱、有效期长、不易产生抗药性等特点，已经作为高毒有机磷农药的替代品而广泛应用。目前阿维菌素已广泛用于要水果样品中果树（苹果、梨、桃）、蔬菜（黄瓜、番茄）有害生物的防治，GB 2763-2021《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》中阿维菌素的残留限量(MRL)要求很高，规定其在柑桔、梨和黄瓜中的MRL为0.02mg/kg，叶菜和豆中为0.05mg/kg。目前阿维菌素的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)[sup][1-5][/sup]、酶联免疫法(ELISA)、液质联用仪法(LC-MS)[sup][6-10][/sup]等。近几年液相色谱质谱法应用日益广泛，它可以提高目标物质的灵敏度以及回收率，缩短进样时间，提高检测效率。但在实际工作中，阿维菌素的响应值低、灵敏度低、标准曲线线性差等问题一直存在，本文应用超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS/MS),对阿维菌素的检测条件进行色谱、质谱条件的优化，可以在检测农产品中阿维菌素时，得到快速、准确的检测方法。[/align]1 实验部分1.1 仪器与试剂AB Sciex4500高效液相色谱-串联质谱仪（配有电喷雾电离（ESI）源，美国AB SCIEX公司）；GL-21M高速冷冻离心机(湖南湘仪)；混匀器（德国heidolph公司）；涡旋混匀器（德国IKA公司）。阿维菌素（100ug/mL）甲醇作为溶剂，购于农业部环境保护科研监测所；乙腈（HPLC级，上海安谱公司）；甲醇（HPLC级，美国Merck公司）。甲酸（LCMS，美国Fisher公司）；甲酸铵（LCMS，美国Fisher公司）；十八烷基键合硅胶（C18)、N-丙基乙二胺（PSA)、无水MgSO[sub]4 [/sub][font=calibri]、[/font]NaCL均为分析纯(深圳逗点生物）。1.2 标准溶液的配置精确称取一定量的阿维菌素标液，用甲醇溶解后定容，配制成2.0ug/mL贮备溶液，于-20℃避光储存。1.3前处理方法称取10g(精确至0.01g)试样于50mL塑料离心管中，加人10mL乙腈及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1min.加人4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠二水合物、0.5g柠檬酸二钠盐倍半水合物，剧烈振荡1min后4200r/min离心5min。吸取8mL上清液至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中 对于颜色较深的试样，离心管中另加人GCB,涡旋混匀1min。4200r/min离心5min,吸取上清液过0.22μm有机微孔滤膜后上机测定。1.4 仪器条件条件1.4.1色谱条件色谱柱：Altantis T3柱（150mm×2.1mm，3.0μm）；柱温：40℃；流动相：A相为水（含0.01%甲酸（v/v)和1mM/L甲酸铵），B相为甲醇（含0.005%甲酸（v/v)和2mM/L甲酸铵）。柱流速为0.40mL/min。梯度洗脱程序：0～2.0min，90%A；5.0～12min，5%A；12.1～13min，90%A；流速：0.4mL/min；进样量：1μL。1.4.2质谱条件离子源：ESI；扫描方式：正离子扫描；扫描方式：多反应监测（MRM）模式；电喷雾电压：4500V；雾化气压力：50psi；气帘气压力：30psi；辅助加热气：60psi；离子源温度：300℃；碰撞气压力：9psi。2 结果与讨论2.1样品前处理的优化本实验采用GB23200.121《食品安全国家标准植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法》，以乙腈作为提取溶剂，将目标物质、色素等有机物质提出，然后采用饱和盐进行层析分层，用吸附剂进行净化。2.2色谱条件的优化2.2.1色谱柱选择分别用Shimadzu C18(75mmx2.0m,1.6μm)、Agilent EC-C18(100mmx3.0m，2.7μm)、Altlantis T3(150mm×2.1mm,3μm)等3种液相色谱柱对阿维菌素进行响应值与分离效果的比对，所有色谱柱均能出峰，但采用Altlantis T3和Shimadzu C18色谱柱时峰形对称性好，半峰宽窄、且出峰时间相同，但采用Altlantis T3色谱柱时峰面积明显高于Shimadzu C18色谱柱。因此最终选择Altlantis T3色谱柱进行分离。2.2.2流动相选择流动相条件是影响目标化合物的色谱分离和仪器响应的一个重要方面，根据阿维菌素的性质，比较了甲醇和乙腈两种有机相，结果表明，甲醇是质子性溶剂，更易离子化，[M+NH[sub]4[/sub]][sup]+[/sup]峰的响应值要高于乙腈流动相，所以在本实验中选用甲醇和水作为流动相。在水相中加入甲酸铵和甲酸等试剂，是改善色谱峰形、提高仪器响应值和离子化率的常用手段，通常采用酸性流动相有利于在正离子模式下进行质谱检测，试验考察了不同浓度的甲酸与甲酸铵溶液与甲醇组合，发现随着甲酸铵浓度含量增大，阿维菌素的响应值也在增强，若甲酸铵浓度超过2mmol/L时，响应值开始降低。因此，最终选择0.005%甲酸加2mmol/L甲酸铵作为水相。优化后的液相条件下，可得到标准图谱如图1。[align=center][img=,690,611]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011806214247_4665_1645480_3.png!w690x611.jpg[/img][/align] 图1 阿维菌素标液的MRM总离子及选择离子的离子流色谱图（10μg/L)2.3质谱条件的选择2.3.1检测离子的选择阿维菌素的分子式是C[sub]48[/sub]H[sub]72[/sub]O[sub]14[/sub],理论分子量为872.4921。采用母离子扫描(MS Scan),获得一级质谱图，通过分子质量确定阿维菌素多以加合离子[M+NH[sub]4[/sub]][sup]+[/sup]、[M+Na][sup]+[/sup]、[M+H][sup]+[/sup]形式存在，本实验选择离子丰度极强的[M+NH[sub]4[/sub]][sup]+[/sup](m/z890.5)作为母离子。然后，优化毛细管电压等参数，使母离子强度达到最高。选择母离子后，进行子离子扫描(Daughter Scan),获得二级质谱图，得到305.2、567和145.1。进行MRM多反应监测扫描，再次优化碰撞能量，使其离子化效率达到最佳。最终，本实验选择丰度最强、受干扰小的890.5/567作为定性离子对，而890.5/305.2作为定量离子对。阿维菌素检测的质谱参数见表1。 表1 阿维菌素检测的质谱条件[table][tr][td][align=center][color=black]化合物[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]母离子/[/color][/align][align=center][color=black](m/z)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]保留时间/min[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]产物离子/(m/z)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]碰撞能量/eV[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]去簇电压/V[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]阿维菌素[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]890.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.56[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]305.2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]32[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]65[/color][/align][/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td][align=center][color=black]567[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]19[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]65[/color][/align][/td][/tr][/table]2.3.2离子源温度的选择考察了电喷雾离子源（ESI[sup]+[/sup])对阿维菌素的灵敏度影响，结果表明：ESI[sup]+[/sup]源受离子源温度影响比较明显，阿维菌素用的[M+NH4][sup]+[/sup]峰作母离子，温度过高或过低都会抑制目标物离子化，分别用300℃、350℃、400℃离子源温度作了试验，由表2可知：随着离子源温度的升高，响应值越低，当离子源温度为300℃时，灵敏度最高。表2 不同离子源温度的灵敏度[table][tr][td][align=center][color=black]化合物[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]母离子/[/color][/align][align=center][color=black](m/z)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]保留时间/min[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]产物离子/(m/z)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]离子源温度/℃[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]响应强度/%[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]阿维菌素[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]890.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.56[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]305.2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]300[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]3.1e[/color][sup][color=black]4[/color][/sup][/align][/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td][align=center][color=black]567[/color][/align][/td][td] [/td][td][align=center][color=black]1.1e[/color][sup][color=black]4[/color][/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]阿维菌素[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]890.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.56[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]305.2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]350[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2.1e[/color][sup][color=black]4[/color][/sup][/align][/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td][align=center][color=black]567[/color][/align][/td][td] [/td][td][align=center][color=black]6000[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]阿维菌素[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]890.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.56[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]305.2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]400[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2.0e[/color][sup][color=black]4[/color][/sup][/align][/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td] [/td][td][align=center][color=black]567[/color][/align][/td][td] [/td][td][align=center][color=black]5000[/color][/align][/td][/tr][/table]2.4标准曲线、线性范围及检出限分别用甲醇配制含量分别为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L的阿维菌素标准溶液，在上述实验条件下进样1.0μL，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制线性关系曲线，结果表明阿维菌素标准溶液与相对应峰面积呈现良好的线性关系，其线性回归方程：A=6.82989e6+11635.39890，R=0.99913。按上述样品前处理方法及液相色谱检测条件分析得出阿维菌素在农产品样品中的定量限为0.01mg/kg。2.5方法准确度及精密度选取不同的果蔬、食用菌等农产品，进行添加水平为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.10mg/kg等加标回收试验，添加回收率为80%[font=宋体]~[/font]102.5%，RSD1.5[font=宋体]~[/font]8.5%，见表3，其结果满足农药残留检测回收率和相对标准偏差的分析要求。表3 不同农产品样品中阿维菌素添加回收测定结果（n=3)[table][tr][td=1,2][align=center][color=black]样品名称[/color][/align][/td][td=2,1][align=center][color=black]0.01mg/kg[/color][/align][/td][td=2,1][align=center][color=black]0.05mg/kg[/color][/align][/td][td=2,1][align=center][color=black]0.10mg/kg[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]回收率/（%）[/color][/td][td][align=center][color=black]RSD/（%）[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]回收率/（%）[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD/（%）[/color][/align][/td][td][color=black]回收率/（%）[/color][/td][td][align=center][color=black]RSD/（%）[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]西葫芦[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]85.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]5.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]89.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]6.0[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]91.4[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1.5[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]西红柿[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]92.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]3.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]94.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2.2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]98.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]3.4[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]芹菜[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]90.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]4.3[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]92.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]5.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]102.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.8[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]桔子[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]86.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]6.5[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]90.3[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]92.9[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]5.9[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]苹果[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]82.3[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]5.8[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]87.8[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]4.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]90.1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2.2[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]葡萄[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]95.4[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]3.6[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]95.8[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2.0[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]91.8[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]7.9[/color][/align][/td][/tr][/table]3结论本研究对液相质谱法检测农产品中阿维菌素残留的仪器条件，进行了优化，解决了阿维菌素检出限高、灵敏度低、标准曲线线性差等问题，优化后的仪器条件方法检出限符合标准要求，阿维菌素的灵敏度高，在浓度0.005mg/L[font=宋体]~[/font]0.20mg/L范围内有良好的线性关系；添加回收率和相对标准偏差均符合分析的要求，是比较理想的阿维菌素残留量的分析方法。参考文献：[1]李晶，董丰收，刘新刚.高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]检测梨中阿维菌素残留方法研究[J]. 农药科学与管理,2008,29(2):17-22.[2]谢显传，张少华，王冬生等.柱前行生高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法测定果蔬产品阿维菌素及其有毒代谢物的残留量[J].中国农业科学，2005,38(11):2254-2260.[3]梁振益，李嘉诚，罗盛旭，等.高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测水果中阿维菌素残留量[J].现代农药，2005,4(4):20-22.[4]张儒令，安凤颖，胡德禹，等.高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测菜豆中阿维菌素残留量[J].现代农业科技，2020（06):106-108.[5]刘桂伶，李婷婷.高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测8种果蔬中阿维菌素残留量的分析方法[J].新疆农业科技，2020（01）：38-39.[6]李增梅，邓立刚，赵涉及.超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱法测定苹果和土壤中阿维菌素的残留量[J].分析化学,2010,(10):1505-1509.[7]林涛，邵金良，刘兴勇，等.QuEChERS-超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱测定蔬菜中41种农药残留[J].色谱，2015,33(3):235-241.[8]王连珠，黄小燕，陈游，等.QuEChERS前处理-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱测定果蔬中18种弱酸性农药残留[J].分析测试学报，2014,33(10):1102-1108.[9]李欣，孙素群，张卫锋，等.QuEChERS-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱测定蔬菜中56种农药残留[J].现代食品科技，2017,33(10):245-253,177.[10]李瑞雪，王晶蕾，龚慧.超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱测定蔬菜水果中阿维菌素残留量[J].现代食品，2020,(22):180-182,189.

[align=center][font=方正小标宋简体]菠菜中[/font][font=方正小标宋简体]阿维菌素[/font][font=方正小标宋简体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法探讨[/font][/align][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]【摘要】本文讨论了用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法检测[/back][/font][font=方正仿宋_GBK]菠菜中[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]阿维菌素[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]时的一些问题，这些问题对试验结果的回收率、稳定性、检出限、精密度会产生影响。针对优化过程，对上述问题展开方法与结果研讨，方法改进后，提高了检测方法的准确性和精密度。[/font][align=left][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]关键词：菠[/back][/font][font=方正仿宋_GBK]菜 [/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]阿维菌素[/font][/font][font=方正仿宋_GBK] [/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法[/font][/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK] GB23200.19—2016[/font][font=方正仿宋_GBK]《[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]食品安全国家标准[/font][/font][font=方正仿宋_GBK] [/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定[/font][/font][font=方正仿宋_GBK] [/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]》，前处理复杂，分析时间长，且该方法在实际检测过程中出现一些问题，如回收率低、检出限低、精密度差等问题，本文分析了造成这些问题的原因，并提出了有效解决办法。[/font][/align][b][font=黑体][font=方正仿宋_GBK] [/font]一、[/font][font=黑体]材料与方法[/font][/b][font=楷体][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]（一）仪器[/back][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]电子分析天平、振荡器、[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]旋转蒸发[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]仪、[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]氮吹[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]仪、涡旋混合器、[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]固相萃取柱[/font]SPE C18[/font][font=方正仿宋_GBK]、安捷伦1260高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]配紫外检测器。[/font][font=楷体][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]（二）[/back][/font][font=楷体][back=#ffffff]试剂[/back][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]丙酮（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙酸乙酯（色谱纯）[/font][font=楷体][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]（三）标准品[/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]标准溶液由农业部环境保护科研监测所提供，质量浓度均为100μg/mL[/back][/font][font=方正仿宋_GBK]阿维菌素标准溶液[/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff]。[/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312]阿维菌素标准工作液[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff]用甲醇稀释至10.0μg/mL。[/back][/font][font=楷体][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]（四）仪器工作条件[/back][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]色谱柱：[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]安捷伦[/font][font=方正仿宋_GBK]ODS-C18反相柱，4.6 mm×125 mm；流动相：甲醇：水=（90+10,V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：245 nm；柱温：40[/font][font=汉仪中等线B5][font=汉仪中等线B5]℃[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]；进样量：[/font]20 μL。[/font][b][font=黑体][font=方正仿宋_GBK] [/font]二、结果与分析[/font][/b][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（一）前处理条件优化[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]称取试样[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]20g丙酮提取，浓缩后残渣太多；[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]布氏漏斗抽滤[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]，每个样品需要清洗[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]布氏漏斗[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]，增加清洗工作量且易样品交叉污染；蔬菜、水果含水量比较高，[/font][font=方正仿宋_GBK]40 [/font][font=汉仪中等线B5][font=汉仪中等线B5]℃[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]水浴旋转蒸发至约[/font]2 mL[/font][font=方正仿宋_GBK]，浓缩到后面基本都是水。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]1.样品称样量及提取溶剂、提取方法的选择[/font][/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]采取了[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]称取试样[/font]20[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK].0[/font][/font][font=方正仿宋_GBK] g[/font][font=方正仿宋_GBK]和10.0[/font][font=方正仿宋_GBK]g[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]，[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]分别选择了乙腈、乙酸乙酯和丙酮三种提取溶剂。回收率与称样量没有直接关系，三种提取溶剂回收率分别为 56.9%、89.2%、93.8%，因此可选择[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]称取试样[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]10.0[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]g[/font][font=方正仿宋_GBK]，[/font][font=方正仿宋_GBK]丙酮作为提取剂。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]参考[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]有关阿维菌素的提取方法相关文献报道[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]，分别采用了[/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]离心[/color][/font][font=方正仿宋_GBK]、[/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]高速匀浆、超声[/color][/font][font=方正仿宋_GBK]三种提取方式。根据实验结果最后选择选择了超声提取 30 min后，于 4500r/min 条件下离心 5 min,待净化。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]浓缩方法参考相关资料，分别比较了旋转蒸发和氮吹。根据实验结果，两种浓缩方法回收率分别为79.4%、95.7%，氮吹回收率相对较高。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]2.净化过程中没有具体说明如何完全将[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]浓缩提取液[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]转入[/font][font=方正仿宋_GBK]SPE C18柱[/font][font=方正仿宋_GBK]。如果不润洗，回收率很低。本方法采取了用6[/font][font=方正仿宋_GBK]mL丙酮[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]/乙腈分3次润洗[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]转入[/font]SPE C18柱[/font][font=方正仿宋_GBK]，再用5ml的水[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]淋洗[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]，[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]去掉淋洗液。最后用[/font]5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干。[/font][/align][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（二）样品制备和标样的添加[/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]菠[/back][/font][font=方正仿宋_GBK]菜先切碎,再匀浆处理。在空白的[/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff]菠[/back][/font][font=方正仿宋_GBK]菜中添加阿维菌素标准溶液,分别添加质量浓度至 0.005、0.01、0.1 mg/kg,每个浓度重复 6 次,待其平衡1小时后,进行样品的提取。[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（三）样品的提取、净化[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]准确称取[/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff]菠[/back][/font][font=方正仿宋_GBK]菜样品 10.0g,加入10 mL丙酮溶液超声提取 30 min,4500 r/min条件下离心5 min。取4 mL上清液于[/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]45℃[/color][/font][font=方正仿宋_GBK]条件下氮吹浓缩[/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]至2[/color][/font][font=方正仿宋_GBK]mL[/font][font=方正仿宋_GBK]，用6[/font][font=方正仿宋_GBK]mL[/font][font=方正仿宋_GBK]色谱甲醇分3次润洗[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]转入[/font]SPE C18柱[/font][font=方正仿宋_GBK]，再用5ml的水[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]淋洗[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]，[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]去掉淋洗液。最后用[/font]5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干。准确加入1.0 mL甲醇溶解残渣，[/font][font=方正仿宋_GBK]涡旋振荡1 min后静置30 min,吸取上清液过[/font][font=方正仿宋_GBK]0.[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]22[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]μm滤膜过滤,[/font][font=方正仿宋_GBK]于进样小瓶中保存,[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]测定。[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（四）标准曲线[/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000][font=方正仿宋_GBK] [/font]配制校准曲线：选择[/color][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312]10.0μg/mL[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312]阿维菌素标准工作液[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff]，[/back][/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]用甲醇做溶剂，分别配制[/color][/font][font=方正仿宋_GBK] [font=方正仿宋_GBK]0.005、[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000][font=方正仿宋_GBK]0.01、0.05、0.10 、0.20ug/ml 5个浓度水平的标准工作溶液，配制完成后上机测定峰面积和保留时间。以峰面积为纵坐标，以进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。[/font][/color][/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]标准曲线的相关系数为0.9995以上，符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》(GB/T 27404-2008)标准要求。为加标色谱图农药残留量回收率判定提供了较好的依据。[/color][/font][align=center][img=,499,361]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011904427527_215_2741071_3.png!w499x361.jpg[/img][font=方正仿宋_GBK][color=#000000] [/color][/font][/align][align=center][font=方正仿宋_GBK]图：阿维菌素标准曲线[/font][/align][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（五）方法的准确性、精密度和检出限[/font][font=方正仿宋_GBK] 根据本试验检测方法结果表明,阿维菌素的保留时间为 [/font][font=方正仿宋_GBK]5.3[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]2 min,峰形对称性良好。以外标法定量,阿维菌素峰面积(y)与质量-体积浓度(x)呈良好线性相关,线性回归方程为 y =57663[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]x[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]-14.334 ,相关系数(R2 )为 0.9995。[/font][/font][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]检出限指用某一方法可定性检测到样品中残留物的最小浓度,该水平信噪比一般为3 ,阿维菌素检出限为 0.002 ng/μL ,灵敏度高。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]定量限指可以对基质中目标残留物进行准确定量测定的最低水平,在该水平下得到的回收率和精密度应满足分析的要求,添加标准溶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量浓度得到的信噪比一般为[/font][font=方正仿宋_GBK]10[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK],本试验添加回收率条件下,显示阿维菌素峰形及重现性较好且无杂质干扰,阿维菌素在菠菜中的定量限为 0.005 mg/kg,低于阿维菌素在菠菜中的最大残留限量。[/font][/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]阿维菌素在菠菜中的平均回收率为 93.8%~97.2%,相对标准偏差为 5.5%~8.0%,添加浓度包含定量限,最大残留限量值,添加浓度能覆盖本残留试验中所有样品最高残留量,且不同添加浓度均符合回收率要求,用回收率试验的相对标准偏差衡量检测方法的精密度,不同添加浓度对相对标准偏差均符合要求。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]上述试验结果见表。[/font][/align][font=方正仿宋_GBK] [/font][font=方正仿宋_GBK][/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000] 表：[/color][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]0.01mg/kg添加量[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]称样量、提取、浓缩方法的结果比较[/color][/font][table][tr][td][align=center][font=宋体]方法[/font][/align][/td][td][font=宋体]样品量（[/font][font=宋体]g[/font][font=宋体]）[/font][/td][td][font=宋体]提取方法及时间[/font][/td][td][align=center][font=宋体]浓缩方法[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]浓缩方法[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]测定值w/(mg?kg-1)[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]回收率/%[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][font=宋体]GB 23200.19-2016[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]20[/font][/align][/td][td][font=宋体]丙酮，振荡 0.5 h 提取[/font][/td][td][align=center][font=宋体]40 [/font][font=宋体][font=宋体]℃[/font][/font][font=宋体][font=宋体]水浴旋转蒸发[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]不润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00473[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]47.3[/font][/font][font=宋体][font=宋体]%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,4][align=center][font=宋体]方法[/font][font=宋体][font=宋体]1[/font][/font][/align][/td][td=1,4][align=center][font=宋体]10[/font][/align][/td][td=1,4][font=宋体]丙酮，匀浆2min提取[/font][/td][td=1,2][align=center][font=宋体]40 [/font][font=宋体][font=宋体]℃[/font][/font][font=宋体][font=宋体]水浴旋转蒸发[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00642[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]64.2[/font][/font][font=宋体][font=宋体]%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体]不润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00554[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]55.4[/font][/font][font=宋体][font=宋体]%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center][font=宋体]45℃[/font][font=宋体]氮[/font][font=宋体][font=宋体]吹[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00742[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]74.2[/font][/font][font=宋体][font=宋体]%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体]不润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00621[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]62.1[/font][/font][font=宋体][font=宋体]%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,4][align=center][font=宋体]方法[/font][font=宋体][font=宋体]2[/font][/font][/align][/td][td=1,4][align=center][font=宋体]10[/font][/align][/td][td=1,4][align=left][font=宋体]丙酮，超声30 min，离心 5 min提取[/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font=宋体]40 [/font][font=宋体][font=宋体]℃[/font][/font][font=宋体][font=宋体]水浴旋转蒸发[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00794[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]79.4%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体]不润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00715[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]71.5%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center][font=宋体]45℃[/font][font=宋体]氮[/font][font=宋体][font=宋体]吹[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00957[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]95.7%[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体]不润洗旋蒸瓶[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]0.00884[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体][font=宋体]88.4%[/font][/font][/align][/td][/tr][/table][font=黑体][/font][b][font=黑体][font=方正仿宋_GBK] [/font]三、影响准确度与精密度的原因及解决方法[/font][/b][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（一）色谱柱。当色谱柱污染后，峰面积会随着测定次数的增加而增加，影响测定结果的RSD值。实验过程中要确保色谱柱的干净程度，特别在进行比对时，要用干净的色谱柱。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（二）基质效应。同一种农药在不同蔬菜中有不同程度的基质效应，为了准确定量，理论上每种基质都需要制作对应的基质匹配标准曲线。为减少工作方法的工作量，在不影响结果准确性的前提下，选择一种有代表性的基质作为通用基质。[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]（三）为保证数据准确，在操作过程中还要注意以下几方面：[/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]1.准确移取4mL上清液前，用该液润洗三次移液管，保证吸取刻度准确。[/font][/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]2.氮吹时气流大了容易把液体吹出造成损失，气流太小氮吹时间延长，都会影响回收率。氮吹近干要求小烧杯内壁有潮潮的一层，吹干后回收率小。氮吹过程中要用干净滤纸擦去针头上的水珠，防止水珠落入瓶中氮吹不准确，影响结果。[/font][/font][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]3.SPE C18柱使用前用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化，净化时小柱不能干，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入净化溶液。小柱干了不容易洗脱，影响回收率。[/font][/font][/align][align=left][b][font=黑体][font=方正仿宋_GBK] [/font]四、[/font][font=黑体]结论[/font][/b][/align][align=left][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK] [/font]本方法[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]称取试样[/font][/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]1[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]0 g[/font][font=方正仿宋_GBK]，采用超声提取，净化浓缩处理后,采用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法测定阿维菌素的检出限为 0.002 ng/μL,定量限为 0.005mg/kg。样品添加质量浓度0.005、0.01、0.1 mg/kg,每个浓度重复 6 次,添加回收率为 92.5%~96.7%,相对标准偏差小于7.2%。[/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000]此方法实验步骤操作简单，灵敏度高，经添加回收率实验表明得出的回收率、重复性均满足农药残留分析的要求，适用于水果、蔬菜中阿维菌素的批量检测。[/color][/font][/align][b][font=仿宋][back=#ffffff][font=方正仿宋_GBK] [/font]参考文献：[/back][/font][/b][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][1][/font][/back][/font][font=方正仿宋_GBK]GB23200.19—2016[/font][font=方正仿宋_GBK]《[/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]食品安全国家标准[/font][/font][font=方正仿宋_GBK] [/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK]水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定[/font][/font][font=方正仿宋_GBK] [/font][font=方正仿宋_GBK][font=方正仿宋_GBK][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法[/font][/font][font=方正仿宋_GBK]》[/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][2][/font][/back][/font][font=方正仿宋_GBK][color=#000000][font=方正仿宋_GBK]GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》[/font][/color][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][3]廉慧锋, 宋洁, 张文娟, & 宋欢. (2011). 食品中阿维菌素类药物残留检测方法研究进展. 山西农业科学, 039(008), 918-921.[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][4]罗晓琴. (2009). 阿维菌素类药物残留检测方法的研究进展. 现代农业科技(15), 2.[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][5]凌芬娜. 关于食品中阿维菌素类药物残留检测方法研究进展[J]. 中国科技博览, 2014(33):1.[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][6]冯瑜, 盛旋, 郑屏,等. 阿维菌素类药物残留检测方法研究进展[J]. 安徽化工, 2008, 34(1):4.[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][7]熊巍, 陶晓秋, 张海燕. 环境和食品中阿维菌素类药物残留量检测方法研究进展[J]. 中国农学通报, 2021, 37(30):10.[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][8]何继红. 阿维菌素类药物多残留分析方法的研究. 中国农业大学, 2005.[/font][/back][/font][font=方正仿宋_GB2312][back=#ffffff][font=方正仿宋_GB2312][9]文豪, 周绪正, 李冰,等. 阿维菌素类药物残留检测的研究进展[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2015(11):3. [/font][/back][/font]

兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测 硫酸粘杆菌素由多粘杆菌产生，对革兰氏阴性菌有很强的抗菌作用，治疗革兰氏阴性菌（大肠埃希菌等）引起的肠道疾病效果明显，常用作饲料添加剂。对绿脓杆菌感染（败血症、尿路感染、烧伤或外伤创面感染）也有很好的效果。用于饲料添加剂还有明显促生长作用，和磺胺嘧啶合用效果更好。 本品也有很多副作用，内服很少吸收，本品吸收后，对肾脏和神经系统均有明显毒性。使用时剂量过大或疗程过长，以及注射给药和肾功能不全时均有中毒危险。 所以这种东西对于某些症状疗效较好，但也得谨慎使用。检测某些产品中硫酸粘杆菌素的含量就显得尤为重要。下面我们就重点看看高效液相色谱法检测某饲料中硫酸粘杆菌素吧。实验部分原理 取适量该粉末样品加10%甲醇溶解超声提取，经进样器进入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，峰面积定量计算（外标法）。仪器及试剂1．仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）、分析天平、超声振荡器、溶剂过滤器2．试剂：甲醇、乙腈（均为色谱纯），纯净水，硼砂溶液样品处理 提取方法：取饲料样品适量，充分粉碎后过0.45mm孔径筛后，装入磨口瓶中备用。准确称取上一步处理过的饲料样品5g，加入150ml 10%的甲醇水溶液，超声波提取20min。将提取液全部转移到1000ml鸡心瓶中，70℃旋转蒸发器蒸至近干，用去离子水溶解并定容至1ml，0.45um有机微孔滤膜滤过，待测。色谱条件检测器：紫外检测器色谱柱：C18,4.6 X 250mm，5um检测波长：215nm流动相：乙腈：PH6.0的硼砂缓冲液=70:30（V：V）流速：1.0mL/min进样量：10ul柱温：室温目标物：硫酸粘杆菌素B，硫酸粘杆菌素A标准品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191339_518984_2498430_3.png标准品，三次平行进样交错叠加色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191339_518985_2498430_3.png样品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191340_518986_2498430_3.png样品，三次平行进样交错叠加色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191340_518987_2498430_3.png以下是定性、定量数据：序号保留时间(min)峰面积(μAu*s)标样-1113.5331262989 228.7671306312 标样-21[td=1

10，抽取5个版友）；中奖名单：牛一牛(注册ID：v2700892)玲儿响叮当（注册ID：jshbhh）捌道巴拉巴巴巴（注册ID：v3082413）mengzhaocheng（注册ID：mengzhaocheng）zgx3025（注册ID：v2844608）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608091528_604104_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608091528_604105_1610895_3.png积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================蜂蜜中阿维菌素的测定方法：SPE基质：蜂制品应用编号：101233化合物：阿维菌素固定相：ProElut PLS色谱柱/前处理小柱：ProElut C18 500mg/6mL 30/pkg或ProElut PLS 150mg / 6ml 30/pkg样品前处理：1、提取 5 g 蜂蜜加入25 mL 水，剧烈振荡，使蜂蜜完全溶于水中。2、净化 ProElut C18 500 mg/6 mL (Cat.#63105) 或ProElut PLS 150 mg/6 mL (Cat.#68004) a 活化： 向柱中依次加入6 mL 甲醇、6 mL 水，流出液弃去； b 上样： 将样品加入柱中*，流出液弃去； c 淋洗： 用6 mL 水淋洗小柱，淋洗液弃去，然后抽干小柱； d 洗脱： 用6 mL 乙腈洗脱，收集洗脱液 收集的洗脱液可进行两种不同处理，以便适合两种不同的分析方法； 重新溶解： 50 oC 下将净化液氮气吹干，1 mL 乙腈溶解残渣，微孔滤膜过滤后，LC-MS/MS 分析； 衍生化处理: 50 oC 下将洗脱液氮气吹干，加入100 μL N- 甲基咪唑- 乙腈溶液（1/1），涡旋混合30 s，然后加入150 μL 三氟乙酸酐- 乙腈溶液（1/1），涡旋混合30 s，然后加入750 μL 甲醇，静置15 min，微孔滤膜过滤后HPLC 分析 注： 由于样品量超过柱容量，应分次上样或在SPE 柱上安装60 mL 储液管 (Cat.#4812)，适配器 (Cat.#4803)色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99601) 或者色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm ID, 3 μm (Cat.#99613)。 方法1，HPLC 色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99601) 流动相：甲醇/ 水=92/8 (V/V) 流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：25 oC 检测器：荧光检测器，激发波长：365 nm ；发射波长：475 nm 方法2，LC-MS 色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm ID, 3 μm (Cat. #99613) 流动相：乙腈/ 0.1% 乙酸水溶液=75/25 流速：0.2 mL/min 进样量：10 μL 柱温：30 oC 检测器：串联质谱，APCI 负离子模式文章出处：P074关键字：蜂蜜，阿维菌素，SPE，ProElut C18，ProElut PLS摘要：适用于蜂蜜中阿维菌素的检测。谱图：http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/p10%20copy.png图例：1. 阿维菌素

10，抽取5个版友）；中奖名单：langyabeilei（注册ID：langyabeilei）m3071659（注册ID：m3071659）千层峰（注册ID：jxyan）WUYUWUQIU（注册ID：wulin321）dahua1981（注册ID：dahua1981）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605251514_594763_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605251514_594764_1610895_3.png积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================动物源性食品中阿维菌素的测定方法：SPE基质：动物组织应用编号：101094化合物：阿维菌素固定相：ProElut Al-N色谱柱/前处理小柱：ProElut AL-N 500mg/3ml 50/pkg ProElut NA2SO4 3G/6ML 30/PK样品前处理：1、提取 1.1 5.0 g 样品中加入2 g 氯化钠和15 mL 乙腈，10000 rpm 下均质2 min，6000 rpm 下离心5 min，收集上层的乙腈提取液，15 mL 乙腈重复提取一次，合并乙腈提取液。 1.2乙腈提取液经ProElut Na2SO4 3 g/6 mL(Cat.#65513) 干燥后，35 oC 下减压蒸馏至约3 mL，待净化。 2、净化 a 活化： 向ProElut Al-N 500 mg/3 mL (Cat.#65304) 加入3 mL 乙腈，流出液弃去； b 上样： 将提取液加入柱中，用具塞试管收集流出液； c 淋洗： 用6 mL 乙腈分两次洗涤浓缩瓶，洗涤液加入小柱，流出液并入具塞试管； 收集的净化液可进行两种不同处理，以便适合两种不同分析方法： 重新溶解： 50 oC 下将净化液氮气吹干，1 mL 乙腈溶解残渣，微孔滤膜过滤后，LC-MS/MS 分析； 衍生化处理：50 oC 下用净化液氮气吹干，加入100 μL N- 甲基咪唑- 乙腈溶液（1:1），涡旋混合30 s，然后加入150 μL 三氟乙酸酐- 乙腈溶液（1:1），涡旋混合30 s，然后加入750 μL 甲醇，静置15 min，微孔滤膜过滤后HPLC 分析色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99601) 或者Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm ID, 3 μm (Cat. #99613) 方法1，HPLC 色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99601) 流动相：甲醇/ 水=92/8 (V/V) 流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：25 oC 检测器：荧光检测器，激发波长：365 nm ；发射波长：475 nm 方法2，LC-MS色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm ID, 3 μm (Cat. #99613) 流动相：乙腈/ 0.1% 乙酸水溶液=75/25 流速：0.2 mL/min 进样量：10 μL 柱温：30 oC 检测器：串联质谱，APCI 负离子模式文章出处：P092关键字：动物组织，猪肉，阿维菌素，SPE，ProElut Al-N摘要：适合禽类和畜类的肌肉与内脏中阿维菌素的检测。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605251003_594712_1610895_3.jpg图例：1 阿维菌素

一、背景1.1莫能菌素﹝Monensin﹞是聚醚类离子载体抗生素，是一种[url=http://baike.baidu.com/subview/138504/138504.htm][color=windowtext]反刍动物[/color][/url]中运用较广泛的饲料添加剂；原为[url=http://baike.baidu.com/subview/150635/150635.htm][color=windowtext]链霉菌[/color][/url]所分泌的一种物质，具有控制[url=http://baike.baidu.com/subview/39929/39929.htm][color=windowtext]瘤胃[/color][/url]中[url=http://baike.baidu.com/subview/3852509/3852509.htm][color=windowtext]挥发性脂肪酸[/color][/url]比例，减少瘤胃中蛋白质的降解，降低饲料干物质消耗，改善营养物质利用率和提高动物能量利用率等作用。1.2莫能菌素为百盛客户对肉类原料中兽药残留的监控项目，为了应对客户要求，满足实验室检测要求，对莫能菌素进行新项目技术开发。盐霉素为原有分析项目，此次技术开发对盐霉素前处理及仪器分析条件重新优化，与莫能菌素合并同为聚醚类抗生素检测检测方法。[img=,490,100]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141014_01_3081717_3.png[/img]二、前处理流程2.1提取称取（2.00±0.02）g样品，加入10mL乙腈混匀，再加入3.00g无水硫酸钠，震荡混匀，超声提取10min；离心取上清液于50mL离心管中，残渣加入5mL乙腈重复提取，合并两次上清液，定容至20mL，加入5mL乙腈饱和正己烷，震荡离心。2.2净化取下层（乙腈层）5mL于圆底烧瓶中，旋转蒸发至1mL，氮气吹干。普通肉类基质：圆底烧瓶中加入1mL乙腈超声溶解。内脏类基质：圆底烧瓶中加入3mL甲醇+水（1+1）超声溶解，过Waters HLB柱（waters oasis HLB 6cc/200mg依次用5mL甲醇 5mL水活化），用5mL水淋洗，5mL甲醇洗脱于100mL圆底烧瓶中，40℃减压蒸干，加入1mL乙腈超声溶解。三、仪器分析条件（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]MS8050）3.1质谱参数：离子源ESI源 Nebulizing Gas Flow: 3 L/min HeatingGas Flow: 10 L/min Interface Temperature 300 ℃；DLTemperature 250 ℃；Heating Block Temperature 400℃ Drying Gas Flow: 10 L/min [table=595][tr][td=1,2]化合物名称[/td][td=1,2]Precursor m/z[/td][td]Product[/td][td]Dwell Time[/td][td]Q1 Pre[/td][td=1,2]CE[/td][td]Q3 Pre[/td][/tr][tr][td]m/z[/td][td](msec)[/td][td]Bias(V)[/td][td]Bias(V) 1[/td][/tr][tr][td=1,3]莫能菌素[/td][td]688.6[/td][td]635.50*[/td][td]100[/td][td]-26[/td][td]-18[/td][td]-28[/td][/tr][tr][td]688.6[/td][td]461.35[/td][td]100[/td][td]-26[/td][td]-26[/td][td]-30[/td][/tr][tr][td]688.6[/td][td]617.5[/td][td]100[/td][td]-26[/td][td]-24[/td][td]-28[/td][/tr][tr][td=1,3]盐霉素[/td][td]773.1[/td][td]431.20*[/td][td]100[/td][td]-28[/td][td]-53[/td][td]-28[/td][/tr][tr][td]773.1[/td][td]531.35[/td][td]100[/td][td]-28[/td][td]-46[/td][td]-36[/td][/tr][tr][td]773.1[/td][td]413.2[/td][td]100[/td][td]-28[/td][td]-53[/td][td]-27[/td][/tr][/table]3.2液相参数： 流动相组成：A: 0.1%甲酸 B: 乙腈；流速：0.35Ml/min；A -10% B -90%恒流分析；进样量：2uL；色谱柱型号：ODS-III 1.6μm四、实验结果及分析4.1线性配制盐霉素、莫能菌素混标（稀释溶剂：乙腈），0.1ug/kg、1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg五个浓度点，仪器分析线性如下：[img=,490,157]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141016_02_3081717_3.png[/img][img=,490,173]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141017_01_3081717_3.png[/img]以上实验中，盐霉素、莫能菌素标准曲线R[sup]2[/sup]均大于0.99，各浓度点精密度良好；仪器分析标准品线性、稳定性符合实验要求。4.2选择性选取牛肉样品进行空白、添加回收实验，实验谱图如下：[img=,490,173]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141019_01_3081717_3.png[/img][img=,490,173]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141019_02_3081717_3.png[/img]4.3真度对空白牛肉进行前处理，采用空白样品萃取液与溶剂稀释统一标准品标准品，同一浓度下两者峰面积比值的百分比作为真度评价参数，实验结果及谱图如下： [table=386][tr][td]基质类型[/td][td]化合物名称[/td][td]基质稀释标准品[/td][td]溶剂稀释标准品[/td][td]真度（%）[/td][/tr][tr][td=1,2]牛肉[/td][td]盐霉素[/td][td]116,440[/td][td]107,537[/td][td]106.4%[/td][/tr][tr][td]莫能菌素[/td][td]9,845[/td][td]13,312[/td][td]74.0%[/td][/tr][/table]以上实验中牛肉基质对盐霉素无明显基质效应，对莫能菌素产生一定的基质效应，基质效应在70%左右，在可接受范围之内，日常分析准确定量可以做spiked校正。6实验总结本次试验，从前处理、仪器分析、实验分析的真度、精密度、准确度等多项参数验证了此方法的适用性及准确性，可初步满足试验要求，后续继续多基体验证。

阿维菌素，是一种不错的杀菌、杀虫剂。之所以说它不错，因为它的来源，是从天然的阿维链霉菌发酵制得。虽然作为农药使用，但是在环境和土壤中，很容易被微生物分解，因此无累积作用。再好的东西，也要适量使用。阿维菌素使用过量时，会引起人畜的眼睛刺激、重者昏迷，对于蜜蜂、鱼类、蚕而言，属于高毒。下面看看月旭科技参照国标，采用苹果、菠菜为样品，进行阿维菌素检测的实验过程。1、[b]适用范围[/b]食品中水果及蔬菜中阿维菌素检测测定方法（本实验采用苹果，菠菜）前处理方法参考《GB 29696-2013 牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定》《GB 23200.19-2016 食品安全国家标准 水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定 液相色谱法》2、[b]溶液的配置[/b]阿维菌素标准储备液：精密称取0.010g（精确至±0.0005g）阿维菌素标准品于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度线配置成浓度为1000μg/mL的标准储备液。阿维菌素工作液：移取0.5mL阿维菌素标准储备液于50ml容量瓶中，用乙腈稀释成10μg/mL。洗涤液：乙腈-水-三乙胺（30mL:70mL:20μL）3、[b]提取步骤[/b]样品经组织捣碎机捣碎，称取样品5g±0.05g于50mL离心管中，加入8mL乙腈，涡旋1min，离心10min（4000r/min），吸取上清液于另一50mL离心管中；残渣中加入8mL乙腈，重复提取一次，合并两次上清液，加水20mL，三乙胺50μL,混匀，待净化。4、[b]SPE净化步骤[/b]SPE柱：月旭Welchrom C18E规格：500 mg/6mL。活化：5mL乙腈，5mL洗涤液上样：待净化液全部上样，自然流干，抽干5min淋洗：3mL异辛烷，抽干5min洗脱：5mL乙腈，收集于15mL试管中氮吹至近干，用乙腈定容至1mL,过0.22μm滤膜，上HPLC检测。5、[b]注意事项[/b]1）若上样时流速过慢，可适当加压，使其能滴落；2）氮吹时注意不能过快，近干即可3）流动相和样品提取溶剂选用乙腈，乙腈提取效果好且乙腈为流动相时目标物灵敏度高4）三乙胺对阿维菌素在小柱的保留及回收率影响较大6、[b]色谱条件[/b]色谱柱：月旭Ultimate XB-C18,4.6*150mm,5μm流动相：水:乙腈（10:90）柱温：40℃进样量：20μL检测波长：245nm流速：1.0mL/min7、[b]色谱图或者加标回收率结果[/b][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081311418041_5481_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图1.阿维菌素对照0.1mg/L[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081312008871_1611_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图2.阿维菌素对照5mg/L[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081312148673_7209_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图3.苹果样品图谱[/b][/align][align=center][b][/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081312304771_2173_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图4.菠菜样品图谱[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081313014530_3128_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图5.苹果样加标0.2mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081313180901_4314_932_3.jpg!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图6.菠菜样加标0.2mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081313460964_3442_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图7.苹果样加标1mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081314009742_1936_932_3.jpg!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图8.菠菜样加标1mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,133]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081314269091_947_932_3.png!w690x154.jpg[/img][/align][align=center][b]表1：加标回收率测定结果[/b][/align][align=center][img=,600,408]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081314496641_1527_932_3.jpg!w575x391.jpg[/img][/align]8、[b]相关产品信息[/b]