黄曲霉毒素溶液标准物质

本文使用Essentia黄曲霉毒素分析系统，参考国标GB 23200.112-2018《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》柱后碘衍生法，对辣椒中黄曲霉毒素进行方法建立和测定。以外标法定量，4种黄曲霉毒素在各自浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数r均大于0.999，准确度在93.1~109.9%之间。对标准溶液连续进样5次，重复性结果（RSD%表示）显示，4种黄曲霉毒素的保留时间RSD%在0.17~0.22%之间，峰面积的RSD%在3.31~4.64%之间，加标回收率在72.3 ~84.3%之间。上述结果表明，该方法准确度高，重复性好，可为辣椒中黄曲霉毒素的测定提供参考。

本文按照2020年版《中国药典》四部2351真菌毒素测定法中黄曲霉毒素测定法（第一法），采用岛津Essentia黄曲霉毒素分析系统对莲子中黄曲霉毒素进行方法建立和测定。以外标法定量，4种黄曲霉毒素在各自浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数r均大于0.999，准确度在95.5~102.4%之间。对加标样品溶液连续进样6次，重复性结果（RSD%表示）显示，4种黄曲霉毒素的保留时间RSD%在0.06~0.08%之间，峰面积的RSD%在0.55~1.01%之间，加标回收率在78.7 ~95.0%之间。上述结果表明，该方法准确度高，重复性好，可为莲子中黄曲霉毒素的测定提供参考。

为科学严谨、安全规范地开展茶叶及茶制品中黄曲霉毒素B1的检测，由云南农业大学、吉林省产品质量监督检验院、云南省茶叶流通协会、湖南省茶叶学会、四川省茶叶流通协会等联合制定了团体标准《茶叶及茶制品中黄曲霉毒素 B1的测定》。纳鸥科技积极助力标准的制定，在标准的制定过程中，不断研发和测试各SPE复合小柱，用于去除茶叶中酚类和色素等干扰物。此标准填补了国内外茶叶中黄曲霉毒素检测的空白。

本文使用岛津Essentia黄曲霉毒素分析系统建立一种高效、快捷的黄曲霉毒素测定方法。参照《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》柱后碘衍生法，对样本进行前处理并上机测定。结果表明：AFT G2和AFT B2在0.03~12 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数在0.999以上，AFT G1和AFT B1在0.1~ 40 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数在0.999以上；0.5 ng/mL（以AFT B1浓度计）标准品溶液连续6针进样，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.026~ 0.043 %和0.54~0.92 %；玉米粉不同浓度的加标回收率结果在71.80~114.70%之间；奶粉不同浓度的加标回收率结果在81.33~92.63 %。

中药样品基质不干扰黄曲霉毒素出峰，分别取黄曲霉毒素混合对照品溶液5、10、15、20、25 μ L进样，得到各黄曲霉毒素标准曲线，其线性相关系数均大于0.9999。以S/N=3为检测限，S/N=10为定量限，测定黄曲霉毒素四个组分的检测限和定量限，黄曲霉毒素各峰检测限和定量限均低于药典要求黄曲霉毒素的检测限。

紫外光激发下，黄曲霉毒素B1/B2会被激发出蓝色荧光，黄曲霉毒素G1/G2则会发出绿色荧光。利用这种荧光特性，可以准确定量分析食品中的黄曲霉毒素含量。日立荧光具有的高灵敏度和超高扫描速度，微小含量的黄曲霉毒素也可以快速准确分析。

污染食品的真菌毒素 (霉菌毒素) 中，虽有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇 / 雪腐镰刀菌烯醇、棒曲霉毒素等多种，但黄曲霉毒素为肝脏毒素，被称为最强的天然致癌物质。自然界中可产生黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 等，其中 B1 的致癌性强。现已知黄曲霉毒素 B1 在生物体内经代谢可部分转化为黄曲霉毒素 M1。因此，牛食用被黄曲霉毒素 B1 污染的饲料后，其乳汁中可能含有黄曲霉毒素 M1。 在美国和中国，已将乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定方法确立为国家标准。另一方面，日本也有将其列入官方分析方法的动向，日本的霉菌毒素测定方法评估委员会正在推动相关课题的研讨。 此次，我们参考中华人民共和国国家标准《GB 5413.37-2010 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定方法》的第二法 HPLC-荧光检测法，进行了黄曲霉毒素M1的测定。

方案一、液相色谱荧光检测法方法简介：黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用Welchrom® 免疫亲和柱净化，HPLC-FLD检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，此法适用于谷物、调味品、坚果、茶叶、咖啡、药材等基质。方案二：ELISA检测试剂盒法试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

方案一、液相色谱荧光检测法方法简介：黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用Welchrom® 免疫亲和柱净化，HPLC-FLD检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，此法适用于谷物、调味品、坚果、茶叶、咖啡、药材等基质。方案二：ELISA检测试剂盒法试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

方案一、液相色谱荧光检测法方法简介：黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用Welchrom® 免疫亲和柱净化，HPLC-FLD检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，此法适用于谷物、调味品、坚果、茶叶、咖啡、药材等基质。方案二：ELISA检测试剂盒法试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

试样中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2,用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取,提取液经免疫亲和柱净化和富集,净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离,柱后衍生,经荧光检测器检测,外标法定量。

针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业（眉山）和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素M1超标的问题。蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品（折算为鲜乳汁）不得超过0.5ug/kg 婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素b1。（GB 2761-2005国家标准—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003国家标准—乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量！

黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1 是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，目前已分离鉴定出12 种，其中M1 和M2 主要存在于牛奶中，B1 为毒性及致癌性最强的物质。近年来，国家制定了多个检测黄曲霉毒素的方法标准，并同时出台食品及饲料中黄曲霉毒素的限量要求。

方案一、液相色谱荧光检测法方法简介：黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用Welchrom® 免疫亲和柱净化，HPLC-FLD检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，此法适用于谷物、调味品、坚果、茶叶、咖啡、药材等基质。方案二：ELISA检测试剂盒法试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。 黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。 本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。

黄曲霉毒素作为一种霉菌毒素，被公认为强致肝癌的物质，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)的致癌性最强。长期食用含有低水平黄曲霉毒素食物的人肝脏将受到较大损害。最近，有些第三世界的国家报道了许多会由黄曲霉毒素引起急性中毒的新证据，其综合病症的显著特征为呕吐、腹痛、肺水肿、惊厥、痉挛、昏迷，并且由大脑水肿引起死亡和肝脏、肾形矿脉和心脏的脂肪过多。因此，国家相关部门对食品中的黄曲霉毒素含量进行了严格的规定。

针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业（眉山）和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素M1超标的问题。蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品（折算为鲜乳汁）不得超过0.5ug/kg 婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素b1。（GB 2761-2005国家标准—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003国家标准—乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量！黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4－羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。其危害巨大，人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。目前来讲，Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商， 2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室"，重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提供了两种检测方案，可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的限量检测。高效液相色谱法：符合国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定酶联免疫检测法：方法快，适合大批样品的筛选。检测限符合国家检测限量要求。 另外，我公司为应对饲料粮食中黄曲霉毒素检测，推出PriboFast® KRC 光化学柱后衍生池免费试用活动，详情请来电咨询！

本文采用免疫亲和柱净化结合柱后电化学衍生-HPLC-荧光方法检测了玉米及花生酱中的 4 种黄曲霉毒素 B1、B2、G1 和 G2。样品提取后，先经免疫亲和柱净化、浓缩，再进入 HPLC 系统进行分离、定量。四种黄曲霉毒素在 0.1~10 μ g/L 内线性相关系数 R2 0.99998，检出限（按 S/N = 3 计算）为 0.004 ~ 0.007 μ g/L（相当于 0.008 ~ 0.014 μ g/kg 样品检出限）。以 10 μ g/L 黄曲霉毒素标准溶液为考察对象，连续 6 针进样，得出四种黄曲霉毒素的保留时间相对标准偏差 (RSD) 0.1%，峰面积 RSD 0.3%。实验证明，该方法可有效、准确地用于玉米及花生酱等样品中黄曲霉毒素的测定。

本文采用免疫亲和柱净化结合柱后电化学衍生-HPLC-荧光方法检测了玉米及花生酱中的 4 种黄曲霉毒素 B1、B2、G1 和 G2。样品提取后，先经免疫亲和柱净化、浓缩，再进入 HPLC 系统进行分离、定量。四种黄曲霉毒素在 0.1~10 μ g/L 内线性相关系数 R2 0.99998，检出限（按 S/N = 3 计算）为 0.004 ~ 0.007 μ g/L（相当于 0.008 ~ 0.014 μ g/kg 样品检出限）。以 10 μ g/L 黄曲霉毒素标准溶液为考察对象，连续 6 针进样，得出四种黄曲霉毒素的保留时间相对标准偏差 (RSD) 0.1%，峰面积 RSD 0.3%。实验证明，该方法可有效、准确地用于玉米及花生酱等样品中黄曲霉毒素的测定。

本文采用免疫亲和柱净化结合柱后电化学衍生-HPLC-荧光方法检测了玉米及花生酱中的 4 种黄曲霉毒素 B1、B2、G1 和 G2。样品提取后，先经免疫亲和柱净化、浓缩，再进入 HPLC 系统进行分离、定量。四种黄曲霉毒素在 0.1~10 μ g/L 内线性相关系数 R2 0.99998，检出限（按 S/N = 3 计算）为 0.004 ~ 0.007 μ g/L（相当于 0.008 ~ 0.014 μ g/kg 样品检出限）。以 10 μ g/L 黄曲霉毒素标准溶液为考察对象，连续 6 针进样，得出四种黄曲霉毒素的保留时间相对标准偏差 (RSD) 0.1%，峰面积 RSD 0.3%。实验证明，该方法可有效、准确地用于玉米及花生酱等样品中黄曲霉毒素的测定。

本文采用免疫亲和柱净化结合柱后电化学衍生-HPLC-荧光方法检测了玉米及花生酱中的 4 种黄曲霉毒素 B1、B2、G1 和 G2。样品提取后，先经免疫亲和柱净化、浓缩，再进入 HPLC 系统进行分离、定量。四种黄曲霉毒素在 0.1~10 μ g/L 内线性相关系数 R2 0.99998，检出限（按 S/N = 3 计算）为 0.004 ~ 0.007 μ g/L（相当于 0.008 ~ 0.014 μ g/kg 样品检出限）。以 10 μ g/L 黄曲霉毒素标准溶液为考察对象，连续 6 针进样，得出四种黄曲霉毒素的保留时间相对标准偏差 (RSD) 0.1%，峰面积 RSD 0.3%。实验证明，该方法可有效、准确地用于玉米及花生酱等样品中黄曲霉毒素的测定。

黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用高效液相色谱法测定药材、饮片及制剂等基质中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，以陈皮药材中的检测为例，采用了柱后衍生法测定，灵敏度高，实验人员不需要直接接触更多有害的物质，更加绿色环保安全。

为了确保玉米的安全和品质，黄曲霉毒素检测仪被广泛应用于检测玉米中的黄曲霉毒素含量。

本文建立了采用岛津Essentia LC-16高效液相色谱柱后光化学衍生法检测黄曲霉毒素的方法，并对方法的线性、准确性、重现性进行了考察。结果表明，黄曲霉毒素B1、G1标准工作液线性范围是3~5 pg，B2、G2标准工作液线性范围是10~50 pg，相关系数R均大于0.9997，线性良好。黄曲霉毒素B1、G1、B2、G2定量限和检测限满足药典要求。对标准品连续6次进样，各组分的保留时间RSD%0.3％，峰面积RSD%2.0 %，仪器精密度良好。

本方法适用于出口粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、的定量测定。基本过程是将提取、浓缩后的样液与标准黄曲霉毒素同时连续薄层层析分离后，对标准点和标样点进行荧光强度扫描测定。本法操作步骤简单、准确性高。

作为真菌毒素重要代表的黄曲霉毒素，是至今为止发现的毒性最大的真菌毒素，也是世界公认的 3 大强致癌物质之一，对肝脏具有很强的破坏性，甚至会导致人和动物的死亡。本文采用 HPMS-TQ 仪器，按照 2020 版中国药典 2351 通则黄曲霉毒素测定法第二法（液相色谱 - 串联质谱法），以薏苡仁为基质，建立了完整的黄曲霉毒素测定方案。该方法具有灵敏度满足要求，结果准确，重复性好等特点。

本文依据GB5009.22-2016《食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》的第三法，试样经纯甲醇或者纯乙腈提取，提取液经离心稀释后，使用全自动免疫亲和柱操作仪净化，使用全自动标液配制仪配制标准曲线，进样高效液相色谱检测。结果为常见调味品酱油和醋中黄曲霉毒素B1的加标回收率在89%-100%之间，相对标准偏差小于5%。

黄曲霉毒素经常出现在花生，花生制品，面籽制品，谷物和干辣椒等中，然而霉菌的生长并不一定意味着毒素的出现，因为黄曲霉毒素的产生往往需要一定的生长环境，例如湿度﹑温度和通风等。黄曲霉毒素中的B类霉素要在蓝色荧光下进行检测，而G类霉素要在绿色荧光下进行检测。数字下标显示了相对的色谱流动性。除了毒素经常在蔬菜中被发现（B1,B2,G1和G2），黄曲霉毒素M（牛奶中）也经常在吃了有毒饲料的奶牛的牛奶中被发现。M的高毒性代谢物就是B的4羟化物。 这里所提供的柱后方法最重要的特征就在于可以一次性地在同一荧光发射波长下对所有四种黄曲霉毒素进行检测。在此方法中我们推荐您使用带有1.4mL反应器的Pickering PCX5200。

豆瓣酱中黄曲霉毒素快速定量检测方案，无需检测时再做标准曲线，既节省了成本，也避免了操作人员与霉菌毒素的接触，保护操作人员的安全；