绿皮黄筋竹二聚物对照品

简介： 二甲基黄属于亲脂性偶氮染料，在工业上常用于油漆、鞋油、纺织品等的染色，禁止作为食品添加剂的使用。但是，近年来我国和世界各国不断报道在食品中检出工业色素二甲基黄。 二甲基黄也称甲基黄，化学名称为对二甲氨基偶氮苯，遇高温、明火或与氧化及接触有燃烧的危险。受热分解放出有毒烟气。经呼吸道、消化道、皮肤进入体内，可导致铁血红蛋白症、紫绀，严重时可致死。致癌性甲基黄是可疑人类致癌物，国际癌症研究中心已将其列入动物致癌剂。 因此通过有效的实验技术手段，对食品中的有关色素残留进行监控，以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义。前处理方法：样品提取 称取已均质好的样品1.0 g(精确到0.01 g)试料，置于50 mL离心管中，加入15 mL甲醇，混匀后超声提取10 min，4000 r/min离心10 min，将上样液转移至另一50 mL离心管中，残渣用5 mL甲醇再次提取，离心后合并上清液，作为待净化液。样品净化 取Cleanert Sudan专用柱 (500 mg/6 mL)，依次用5 mL二氯甲烷，10 mL甲醇活化小柱；将上述待净化液以1.0 ml/min流速通过小柱，再用5 mL甲醇淋洗小柱，抽干；最后用10 mL二氯甲烷洗脱，收集；40℃氮气吹干洗脱液，用1 mL甲醇溶解定容，过0.45 μm针式过滤器尼龙滤膜后，进行HPLC检测。检测条件 色谱柱：Venusil XBP C18（L），5 μm，150 Å，4.6 × 150 mm； 流动相：0.1%甲酸水溶液:甲醇= 25:75； 柱 温：30℃；波长：390 nm；进样量：20 μL；实验结果 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508210918_561816_2960317_3.png实验谱图 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508210919_561817_2960317_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508210920_561818_2960317_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508210921_561819_2960317_3.png实验结论 本实验建立了豆干中二甲基黄的检测方法，使用Cleaner Sudan专用柱对豆干样品进行前处理，当加标量为0.5 mg/kg时，平均回收率为87.4%，RSD为3.36%，说明本方法可以用于豆干中二甲基黄的检测。

检测蒲黄药材快速、准确出结果 蒲黄药材具有止血，化瘀，通淋等药物功效。常用于治疗吐血，衄血，咯血，崩漏，外伤出血，经闭痛经，跌伤肿痛，血淋涩痛等疾病效果较好，属于名贵药材。 蒲黄里的药物成分很多，主要有异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、香蒲新苷。下面我们就针对这两种成分进行实验部分原理 取适量蒲黄药材，加纯甲醇溶解，超声波提取，经进样器进样，色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，峰面积定量计算。仪器及试剂仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+柱温箱），超声波清洗仪，溶剂过滤器，针筒式过滤器，电子天平试剂：甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），磷酸溶液（分析纯），超纯水样品制备 对照品溶液的制备：准确称取异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、香蒲新苷对照品各2.5mg于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，配制成浓度均为50μg/ml的对照品溶液，备用。 供试品溶液的制备：准确称取本品约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇后，称定重量并记录，冷浸12小时后超声波超声30min，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，待测。色谱条件检测器：紫外检测器色谱柱：普通C18,4.6 X 250mm，50μm流动相：乙腈：0.05%磷酸溶液=15：85（V:V）检测波长：254nm进样量20μl柱温：室温对照品色谱图： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507301828_558136_2536753_3.png供试品色谱图： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507301828_558137_2536753_3.png 从以上色谱图我们可以看出样品出峰时间较晚，峰形也较差。下面我们换用一根天津博纳艾杰尔科技有限公司生产的耐酸性色谱柱，效果我们请看色谱图。对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507301828_558138_2536753_3.png 供试品色谱图： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507301829_558139_2536753_3.png 换了这根色谱柱，色谱图的峰形好了很多，保留时间也明显有所提前，但保留时间还是有点晚。下面我们把流动相比例调整了下，调整为乙腈：0.05%磷酸溶液=22：78（V:V），效果接着往下看。对照品色谱图： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507301829_558140_2536753_3.png供试品色谱图： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507301829_558141_2536753_3.png 当然保留时间还可以再缩短些（通过提高色谱柱温度，或提高高压泵流速，或换用更高效更短的色谱柱），但供试品中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的附近有干扰物，为了保证分离度，这个分析应该时间比较合理（一定要根据样品情况而定，如果样品很纯净，对被测物没有干扰，保留时间当然是越短越好），尽量不要再缩短了，保证分离度是第一位的。 检测蒲黄药材的这个方法到现在已经比较完美。但有几点事项还需注意。1. 样

摘要： 目的 建立茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱：Kromasil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%甲酸（10：90）；流速1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：238nm、325nm。结果：对茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸进行含量测定。 栀子苷在10.43～52.15μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=123721821.7x-6951.8(r=0.9999)。平均加样回收率为97.21% RSD为1.62% （n=6） 绿原酸在10.74～53.70μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=29447356x-25436(r=0.9999)。平均加样回收率为96.61% RSD为1.35% （n=6）结论 该方法操作简便，结果可靠，可用于茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸的含量测定。 清茵栀黄颗粒，清热解毒，利湿退黄。有退黄疸和降低谷丙转氨酶的作用。用于湿热毒邪内蕴所致急性、慢性肝炎和重症肝炎（I型）。也可用于其他型重症肝炎的综合治疗。由陈提取物、栀子提取物、黄芩苷、金银花提取物组成。为了进一步控制药品质量，我们对其中的进行了栀子苷和绿原酸含量测定，以期为后续进一步研究奠定基础！关键词：HPLC；DAD；茵栀黄颗粒；栀子苷 ；绿原酸1 仪器与试药1.1 仪器 岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器， LCsolution色谱工作站， Metteler AB265S（0.01mg）；Sartorius BS124S（0.1mg）)，必能信超声波清洗器(必能信超声有限公司)1.2 试药 绿原酸对照品（批号110753-201314）、栀子苷对照品（批号：110749-201115），均购自中国食品药品检定研究院；乙腈(色谱纯)；其它试剂均为国产分析纯，蒸馏水自制。2 实验方法与结果2.1 色谱条件与图谱 色谱柱: Kromasil C18柱（4.6mmx250mm，5um）； 检测波长：238nm；325nm 流速：1.0ml.min-1； 流动相：乙腈-0.1%甲酸（10：90）； 柱温：35℃。2.2 溶液制备2.2.1对照品溶液 取栀子苷和绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 分别含0.1043mg和0.1074mg 的混合溶液，即得。2.2.2供试品溶液 取本品，研细，取约0.5g，精密称定置50ml量瓶中，精密加入甲醇40ml,称定重量，超声处理30min ,再称定重量，用甲醇补足减失的重量，定容至50ml,摇匀，滤过，即得。2.3 线性关系考察 精密量取各对照品溶液，制得5个系列不同浓度的对照品溶液，各取10微升依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积Y为纵坐标，浓度X(mg·mL )为横坐标，绘制标准曲线，结果栀子苷在10.43～52.15μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=123721821.7x-6951.8(r=0.9999)。绿原酸在10.74～53.70μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=58134683.4x-7988.3(r=0.9999) http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/10/201510020006_569010_1839779_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100200003568_01_1839779_3.png2.4精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，重复进样6次，计算栀子苷和绿原酸对照品 峰面积的RSD分别为0.4％ 和1．4％ 。2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，16，24 h测定，结果表明：栀子苷和绿原酸对照品在24 h内稳定，RSD分别为1．1％ 和1.5％ 。2.6 重复性实验 取同一批次的茵栀黄颗粒平行6份，制成供试品溶液，在上述色谱条件下分别进行HPLC分析，计算栀子苷和绿原酸对照品峰面积的RSD分别为1.2％和1.4％ 。2.7 回收试验 取同一批茵栀黄颗粒，约取0.25g，共计6份，精密称定，按上述色谱条件进样测定，用回归方程计算回收率。2.8 样品含量测定 取3个批号的茵栀黄颗粒，配制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，栀子苷和绿原酸对照品的含量，结果见表。样品编号栀子苷（mg/g)20150729 2.54201410032.61201502162.65样品编号绿原酸（mg/g)20150729 1.04201410031.16201502161.12http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111035245_01_1839779_3.bmp 图1 茵栀黄颗粒的HPLC图谱（238nm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111125995_01_1839779_3.bmp 图2 栀子苷的HPLC图谱（238nm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111105517_01_1839779_3.png 图3 茵栀黄颗粒的HPLC图谱（325nm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111150072_01_1839779_3.bmp 图4 绿原酸的HPLC图谱（325

[b]问题：[b][b]对照品、标准品、内标物的区别[/b]？[/b]答案：[b]对照品和标准品，内标物的区别是什么?[/b] 工作中，一般做液相要用到对照品，标准品可以购买，但有的物质是没有标准品的，大家就常说那是对照品，纯度都可以达到98%，但是到底对照品和标准品有一个严格的界定呢?还有，做内标法，说用的是内标物，这个内标物和对照品和标准品又有什么不同呢?[b]内标物：[/b] 将一个已知质量，样品中不含有杂质的纯物质，加入至待测样品溶液中，以此纯物质的量为标准，对比测定待测组分的含量，该纯物质称为内标物。 内标物需满足下列要求：能完全溶解于样品中，且不与待测组分发生化学作用 峰位尽可能与待测组分的峰位靠近，但能与待测组分完全分开(分离度R≥1.5)的纯物质。若得不到纯品，必须预先测定其准确含量，且杂质峰不得干扰待测组分峰。内标物有时不易寻找是内标法的缺点。此外，还应满足以下条件：1.内标物应是该试样中不存在的纯物质 2.它必须完全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完全分离 3.加入内标物的量应接近于被测组分 4.色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。[b]对照品：[/b] 对照品是指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，采用化学方法来测定，即是一般仪器的都叫做对照品。 对照品分为官方标准品和工作对照品，试剂公司买的不能作为正常的对照品使用，必须经过标定之后才可使用。[b]举例说明：[/b] 举个例子，药典规定若是血液制品，用来对照的叫标准品，若是药材，用作对照的叫对照品，内标物一般是在用内标法测挥发性成分时加入的物质。这样会不会好理解一点? 对于内标法定量分析来说，内标物的选择是极其重要的。它必须满足如下的条件：⑴内标物与被分析物质的物理化学性质要相似(如：沸点、极性、化学结构等) ⑵内标物应能完全溶解于被测样品(或溶剂)中，且不与被测样品起化学反应 ⑶内标物的出峰位置应该与被分析物质的出峰位置相近，且又不共溢出，目的是为了避免GC的不稳定性所造成的灵敏度的差异 ⑷选择合适的内标物加入量，使得内标物和被分析物质二者峰面积的匹配性大于75%，以免由于它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度偏差。 标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质。标准品与对照品(不包括色谱用的内标物质)均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。标准品系指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位(或μg)计, 以国际标准品进行标定 对照品除另有规定外,均按干燥品(或无水物)进行计算后使用。 标准品与对照品的建立或变更其原有活性成分和含量，应与原标准品、对照品或国际标准品进行对比，并经过协作标定和一定的工作程序进行技术审定。 标准品与对照品均应附有使用说明书，标明批号、用途、使用方法、贮藏条件和装量等。[/b][align=center]=======================================================================[/align]【[b]活动内容[/b]】1、每个工作日上午10：00左右发布一个色谱问答题，版友根据题目给出自己理解的答案。2、每个工作日下午15：10公布参考答案。【[b]活动奖励[/b]】[b]幸运奖：[/b]抽奖软件，当天随机抽取3个或5个回答正确的版友ID号（最后一个ID号，截止至下午15：00），每人奖励[b][color=#ff0000]2钻石币[/color][/b]（抽奖人数≤10，抽取3个版友；抽奖人数＞10，抽取5个版友）；[b]中奖名单：zimeng3211(注册ID：zimeng3211）莫名其妙(注册ID：moyueqiu)千层峰（注册ID：jxyan）mengzhaocheng（注册ID：mengzhaocheng）大川之子,纵横四海(注册ID：chuangu120)[img=,690,388]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707101523_01_1610895_3.jpg[/img][img=,690,388]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707101523_02_1610895_3.jpg[/img]积分奖励：[/b]所有回答正确的版友奖励[b][color=#ff0000]10个积分[/color][/b]（幸运奖获得者除外）。【[b]注意事项[/b]】同样的答案，每人只能发一次[align=left][color=#ff0000][b]PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。[/b][/color][/align][align=left][color=#ff0000][b] 下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。[/b][/color][/align]

[size=4][b] 小卢推荐：一种标定二级对照品的方法[/b][/size]对照品作为实验室（制药行业）一种常用的、重要的试剂，根据其类型，可分为：一级对照品，即为从中国药品生物制品检定所（简称：中检所）购买后直接使用的对照品；二级对照品，由一级对照品标定原料药得到的对照品。由于一级对照品的规格小、价格高、购买周期长的缺点，对于实验室对照品用量大的企业来说，使用二级对照品成了实验室的首选。现在，我就介绍一种标定二级对照品的方法，供大家参考一下。[b]第一，选定样品[/b]一般来说，选择自己生产的原料药价格便宜，不需要外购，且取用方便，是我们的首选。如果我们的生产工艺不好、稳定相差，最好选择外购知名企业的原料药。但要注意，要选择作为对照品的原料药一定是相对其他批次各检验项目都比较好的同一批原料药。[b]第二，标定方法[/b]现以高效液相测定法检测含量为例，来表述其测定方法。由于要严格保证所标定原料药的含量，因此采用3人、3份样品的方法进行测定，即：每个人称取2份对照品、3份样品进行测定；共有3人进行测定。如果有条件，3个人可以选择3台不同的液相色谱仪进行实验。在这里要求2份对照品共进样5针，计算校正因子，并求RSD应小于0.5%，3份样品各进1针，求平均值。方法和要求如下表：[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911090939_182733_1622024_3.jpg[/img]按照表格内容，由3人得到的3个不同的含量，最后求得均值，即得样品（二级对照品）的含量，并要求3者的RSD≤1%。[b]第三，分装[/b]使用抗生素瓶分装，装量按照每次使用量（如60mg，则装入80-100mg即可）为标准，即使每个抗生素瓶中的对照品只使用一次。这样既能避免对照品被污染，又能使其少吸潮。如果为了节省抗生素瓶，采用大装量，即一瓶中的对照品可以使用多次，那么，建议在使用3-6次后就报废本瓶对照品。因为每次打开瓶口称取对照品都是对该瓶对照品的一次污染，尤其是空气中水分对它的影响，这样会是对照品的含量发生变化，原来的标定也就失去了意义。分装环境：建议在层流罩下进行，严格控制温湿度（建议温湿度：18-24℃，45-65%）。封口步骤：分装后，用橡胶盖盖紧，再用封口膜封好后，用铝盖压实即可。[b]第四，制定有效期[/b]一般比较稳定的样品制定2年，不是很稳定的样品制定1年。但是这个有效期不能超过该样品本身法定的有效期。[b]第五，贴签[/b]制定好了有效期就可以把样品（二级对照品）的标签贴上去了，标签格式如下：[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911090939_182734_1622024_3.jpg[/img][b]第六，储存[/b]不管原来样品法定的存储温度是多少，都建议保存的温度最好在2-10°，即冰箱中的冷藏温度。根据资料研究，2°是药品的最佳保存温度，因为这个温度下药品的降解速度最慢。[b]第七，复核[/b]我们制定了有效期后，并不是就完成了所有的工作。我们要在有效期的一半时，对二级对照品进行复核，检验方法同本法中第二步骤，所取样品则是从原标定的二级对照品中抽取。如果复核结果没有变化，则继续使用；如果复核结果发生了变化，那就按照复核的含量，从新贴签标示。通过以上7步就完成了对照品的标定工作，大家有什么看法可以回帖说明，我们共同讨论！[em09505][em09505]（全文完！）

食品中二甲基黄的测定解决方案二甲基黄属于亲脂性偶氮染料，用作显色剂可测定硒、钌、碘、砷、铜和溴酸根等。工业上常用于油漆、鞋油和纺织品等的染色。因具神经及生殖毒性，长期摄取二甲基黄会增加罹患肝癌、肺癌、膀胱癌风险，国际癌症研究署（IARC）已将其列为2B等级的致癌物，禁止作为食品添加剂使用。但是，我国台湾地区不断报道出在豆干中检出了二甲基黄。目前二甲基黄的测定方法主要有气相色谱串联质谱法，固相萃取-超高效液相串联质谱。我们采用的是固相萃取-超高效液相串联质谱。方法优势：迪马科技开发的《食品中二甲基黄的测定》采用固相萃取-超高效液相串联质谱测定食品中的二甲基黄，以乙酸乙酯和水为提取液，采用ProElutDMY固相萃取柱净化样品，通过UPLC检测；本方案前处理步骤简便、操作简单、净化效果好，重现性好，回收率高。以下为详细解决方案，敬请参考！食品中二甲基黄的测定1、适用范围 适用于豆干、糕点和饼干中二甲基黄的检测，方法检出限是0.03μg/kg，定量限是0.1 μg/kg。2、提取取1.0 g样品（易乳化的样品需加1.0 g氯化钠），加入2 mL水，涡旋混匀，加入5 mL乙酸乙酯，振荡5 min，6000 rpm下离心2 min，精密量取2.5 mL上清液待净化。3、净化——ProElut DMY 3 mL（Cat.#65914） a活 化：3 mL乙酸乙酯活化；b上 样：c 淋 洗：加入待净化液，弃去流出液；加入3 mL乙酸乙酯，弃去流出液(推干小柱)；d洗 脱：加入4 mL10%氨水甲醇，收集流出液；e重新溶解：将流出液在50 ℃下氮吹至干，用流动相定容至1 mL，过0.22 μm微孔滤膜，供LC-MS分析。4、色谱条件4.1UPLC 条件：色谱柱：Endeavosil C18，100× 2.1 mm，1.8 μm (Cat#：87003)流 速：0.2 mL/min进样量：5 μL柱 温：35 ℃流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈 A：B=20：804.2质谱条件：电离模式：ESI 扫描方式：正离子扫描检测方式：多反应监测 电喷雾电压：5500 V雾化气压力：50 psi 辅助气压力：50 psi气帘气压力：20 psi 离子源温度：500 ℃定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 目标物 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/eV 去簇电压/ V （m/z） （m/z） (母离子/子离子) (母离子/子离子) 二甲基黄 226.3/77.2 226.2/77.2 30 74 226.3/134.1 30 5、添加回收结果食品中二甲基黄的LC-MS检测添加回收结果 基质 添加水平(μg/kg) 回收率(%) 豆干 1.0 100.08 糕点 1.0 90.75 饼干 1.0 108.63 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/02/201602021751_584170_708_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/02/201602021752_584171_708_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/02/201602021752_584172_708_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/02/201602021752_584173_708_3.png食品中二甲基黄的测定相关产品信息： 货号 名称 规格 样品前处理 65914 ProElut DMY 3 mL, 50/pk 244358 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 12位 4803 1,3,6mL柱管通用连接器 15/pk 4806 考克(控制流量) [/

根据《中华人民共和国药品管理法》，《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》，2015年版）经第十届药典委员会执委会全体会议审议通过，现予发布，自2015年12月1日起实施。　　迪马科技严格按照2015版《中国药典》公示的“银黄口服液中的绿原酸的检测”方法，率先进行了此项目的检测。　　该方法使用Leapsil C18、Diamonsil C18、Platisil ODS三款色谱柱，在同等条件下进行银黄口服液中的绿原酸的检测，均可以达到药典要求。下面以Leapsil C18检测方案为例，大家快来分享吧！商品名称：银黄口服液组成：金银花提取物，黄芩提取物。功能主治：清热解毒，消炎。样品前处理：对照品：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1 mL含40μg的溶液，即得。 供试品溶液：取装量差异项下的银黄颗粒，研细，取10 g，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，加50％甲醇50 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30分钟，放冷，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件：色谱柱： Leapsil C18 100*4.6 mm，2.7 μm (Cat#：86002) 流动相： A：乙腈 B： 0.4％磷酸溶液 流速： 1 mL/min 柱温： 30 ℃ 检测器： UV 327 nm 进样量： 10 μLhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604051527_589041_2452211_3.png2015药典要求理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000，而Leapsil C18检测的理论塔板数为54008.959，远远高出药典要求。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604051527_589042_2452211_3.png2015药典要求理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000，而Leapsil C18检测的理论塔板数为51183.057，远远高出药典要求。

好药材不怕检，蒲黄药材接着检 蒲黄药材为香蒲科植物狭叶香蒲、宽叶香蒲、东方香蒲和长苞香的花粉，具有止血，化瘀，通淋功效。用于吐血，衄血，咯血，崩漏，外伤出血，经闭痛经，脘腹刺痛，跌扑肿痛，血淋涩痛效果较好。实验部分原理 取适量该药材，加甲醇溶解，加热回流或超声波提取，经进样系统进样，色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，峰面积定量计算。仪器及试剂 仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器），柱温箱，超声波清洗仪，溶剂过滤器，针筒式过滤器，加热回流装置，电子天平 试剂：甲醇（色谱纯），超纯水样品制备 对照品溶液的制备:精密称取异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、香蒲新苷对照品适量，加甲醇配制成浓度均为50μg/ml的对照品溶液，备用。 供试品溶液的制备:精密称取本品约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇后，称定重量并记录，冷浸12小时后加热回流1小时（或超声波超声30min），放冷，再次称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，待测。色谱条件检测器：紫外检测器色谱柱：C18,4.6 X 250mm，5μm流动相：乙腈：0.05%磷酸溶液=15：85（V:V）检测波长：254nm进样量20μl柱温：室温对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410192152_519002_2498430_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410192153_519003_2498430_3.png 从以上色谱图我们可以看出样品出峰时间很晚，峰形也较差。下面我们换用一根耐酸性色谱柱，效果我们请看色谱图。对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410192153_519004_2498430_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410192153_519005_2498430_3.png 换了这根色谱柱，色谱图的峰形好了很多，出峰时间也明显有所提前，但保留时间还是有点晚。下面我们又把色谱柱温度调整了一下，调到了40℃，效果接着往下看。对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410192153_519006_2498430_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410231859_519702_2498430_3.png 当然保留时间还可以再缩短缩短（通过增加流动相中甲醇含量，或提高高压泵流速，或换用更高效更短的色谱柱），但供试品中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的附近有一个干扰物，为了保证分离度，这个分析时间已经比较合理，不要再缩短了。 检测蒲黄药材的这个方法到现在已经很完美了。但有几点事项需要注意。1.样品若采用超声波超声提取，为了保证提取效果有时得增加超声时间或超声波水域温度。2.检测这个样品最好要选择一款效果好的色谱柱，如耐酸性的色谱柱。3.为了缩短检测时间我们可以升高色谱柱的温度，对于这个样品效果就挺好。当然适当增加流动相中甲醇含量或增加高压泵流速，或换用更高效更短的色谱柱也能达到比较理想的效果。

2014年底台湾惊爆二甲基黄食品安全事件，不法商贩将非食用色素二甲基黄添加到豆制品中着色牟利。二甲基黄及其同系物二乙基黄属于亲脂偶氮性染料，这种偶氮类物质多含有R-N=N-R键和其他芳香环或其衍生物的结构，被人体食用后易在肠道还原或分解为易致癌的芳香胺类，在此次台湾食品安全事件发生之前，偶氮染料如苏丹红、甲苯胺红、对位红等早已被禁止添加到食品中。除了豆制品外，粮食、油脂、油炸食品及饼干糕点都有可能为了追求色泽和降低成本而在生产过程中非法添加这两种偶氮染料。因此，如何在各类食品中有效、准确地检出这类非食用色素也成为当前的食品安全热点之一。本文尝试建立气相色谱质谱联用法对大米、豆腐、油条、饼干以及油脂中的二甲基黄和二乙基黄进行检测，在实现化合物有效分离的基础上，提高检测效率，为食品安全风险监测提供有效技术支撑。1 材料与方法1.1材料与试剂二甲基黄（≥98.5%，Dr.EhrenstorferGmbH）、二乙基黄（≥98.5%，Dr.EhrenstorferGmbH）、乙腈(色谱纯，Merck公司)、氯化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、实验用水超纯水1.2 仪器与设备气相色谱-质谱联用仪：GCMS-QP2010， 日本岛津公司离心机：Centrifuge 5804R，德国Eppendorf公司超声波清洗器：KQ-500B型，昆山市超声仪器有限公司旋转蒸发仪：RE-2000A，上海亚荣生化仪器厂分析天平：BS224s，北京赛多利斯仪器系统有限公司涡混振荡仪：CM-1000，东京理化器械株式会社有油基质玻璃萃取管：上海安谱科学仪器有限公司1.3 方法1.3.1 色谱条件色谱柱：HP-5 MS，色谱条件：柱温: 40 ℃用于1分钟，30 ℃ /min升至180 ℃ (保持 3min),5 ℃ /min升至250 ℃，保持6min进样口：220 ℃分流方式：不分流1.3.2 质谱条件离子源为电子轰击离子（EI）源，电子轰击能量为70eV，离子源温度为230℃，四极杆温度为150℃，分别采用全扫描SCAN和选择离子SIM模式，溶剂延迟时间为5min。二甲基黄选择离子：77，105，120，225，二乙基黄选择离子：253，238，148，133。1.3.3 样品前处理大米、豆腐：称取4g，视含水量酌情加入少量去离子水后静置10min，加入2-3g NaCl后以10mL1%醋酸的乙腈提取并超声20min。振荡10min后以2500r/min离心5min。提取上清液，重复一次提取过程后收集上清液于45℃下浓缩至近干，并以1mL乙腈定容后上机。植物油：称取0.5g油脂，将其放入有油基质玻璃萃取管中，加入2mL 1%醋酸的乙腈涡混振荡2min后离心，将上清液上机。油条、饼干：称取4g样品，视含水量酌情加入少量去离子水后静置10min，加入少量NaCl后以10mL1%醋酸的乙腈提取并超声20min。振荡10min后以2500r/min离心5min。提取上清液，重复一次提取过程后收集上清液于45℃下浓缩至近干，以乙腈定容至2mL,转移至有油基质玻璃萃取管中，涡混2min后离心取上清液上机。2 结果与分析2.1 样品提取溶剂的选择在提取过程中，提取溶剂的选择对二甲基黄、二乙基黄的回收率有很大影响。根据二甲基黄的油溶性，分别选择丙酮、乙酸乙酯和乙腈为提取溶剂，通过比较回收率考察提取溶剂的合适程度。由下图可得，在样品含水的情况下，通常不使用与水混溶的提取溶剂，提取液中会含有大量水分，而影响浓缩效果。乙酸乙酯和丙酮的提取效率较好，但其易提取样品中的大分子物质，提取出的杂质较多，且丙酮不易与水分开，不易用盐析出其中的水分。乙酸乙酯在提取油性样品时，将一些非极性亲脂性干扰物质同时提取出来，杂质较多。乙腈不溶于油，能沉淀蛋白质，且提取的脂肪少，与样品混合匀浆后，虽然提取液中可能有水分，但较易用盐析出。而加入1%醋酸的乙腈其回收率高，且稳定。这可能是由于二甲基黄、二乙基黄是酸性化合物，低pH的环境可使得它不会发生离解和溶剂化作用，保持其稳定性。故本实验采用1%醋酸的乙腈作为提取溶剂。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281034_01_2238288_3.png2.2 净化方法的选择二甲基黄和二乙基黄为阴离子酸性化合物，宜用反相SPE小柱对其进行萃取。当样品为大米及豆腐时，其基质简单，由于在前处理过程中每多增一步骤即有可能伴随目标物损失，故应在保证回收率的前提下尽量简化净化步骤。实验中加入少量去离子水后可活化分子状态，便于溶剂与微细试样反复接触萃取。加入NaCl促进两相分配，有效降低待测物对水相的亲和力。对于含油量较多的饼干、油条及油脂，净化的重点集中在油脂的去除。我们分别对低温冷冻法、PSA基质分散固相萃取以及氨基小柱固相萃取三种净化模式进行考察。结果表明，经过氨基小柱的净化效果略差，低温冷冻法和PSA基质分散固相萃取的净化效果相似，但耗时长，不利于风险监测时效性的提高。因此净化方式选择PSA基质分散固相萃取，在实验中我们选用上海安谱科学仪器有限公司的有油基质玻璃萃取管。这种萃取管最初用于邻苯二甲酸酯类的检测，除油效果较好。2.3 色谱分离条件选择根据文献，采用HP-5MS作为分离色谱柱。由于二甲基黄出峰较晚，优化仪器条件时将前面的升温速率提高，并放缓第二段升温速率。进行样品测定时，如满足以下条件则判断样品为阳性结果：1、色谱峰的保留时间与标准样品色谱峰的保留时间一致，且偏差在±2.5%之内，2、所选择的监测离子均出现，3、离子丰度比符合下表要求。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281036_01_2238288_3.png在提取过程中，提取溶剂的选择对二甲基黄、二乙基黄的回收率有很大影响。根据二甲基黄的油溶性，分别选择丙酮、乙酸乙酯和乙腈为提取溶剂，通过比较回收率考察提取溶剂的合适程度。由下图可得，在样品含水的情况下，通常不使用与水混溶的提取溶剂，提取液中会含有大量水分，而影响浓缩效果。乙酸乙酯和丙酮的提取效率较好，但其易提取样品中的大分子物质，提取出的杂质较多，且丙酮不易与水分开，不易用盐析出其中的水分。乙酸乙酯在提取油性样品时，将一些非极性亲脂性干扰物质同时提取出来，杂质较多。乙腈不溶于油，能沉淀蛋白质，且提取的脂肪少，与样品混合匀浆后，虽然提取液中可能有水分，但较易用盐析出。而加入1%醋酸的乙腈其回收率高，且稳定。这可能是由于二甲基黄、二乙基黄是酸性化合物，低pH的环境可使得它不会发生离解和溶剂化作用，保持其稳定性。故本实验采用1%醋酸的乙腈作为提取溶剂。得到的标准物质及加标样品的TIC图及SIM图如下所示：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281042_01_2238288_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281042_02_2238288_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281042_03_2238288_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281042_04_2238288_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281042_05_2238288_3.png2.4 线性范围和检出限以2种色素的质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，二甲基黄的线性方程为y=1.257*105-5.579*104,二乙基黄的线性方程为y=1.444*105-5.651*104。结果表明在0.125-25ug/mL范围内，标准曲线线性关系良好，相关系数均大于0.99。以3倍信噪比计算检出限，二甲基黄的检出限为0.002mg/kg，二乙基黄的检出限为0.001mg/kg。2.5 回收率和精密度由于二甲基黄及二乙基黄浓度低于1ug/mL时即接近无色，实验中称样量为2-5g,故将加标浓度设为25mg/kg,10mg/kg和1mg/kg。加标方式：由于二甲基黄与二乙基黄是脂溶性物质，采用乙醇为油性模拟介质。将二甲基黄与二乙基黄分别溶于乙醇后，将已知浓度的溶液浸泡于大米和豆腐制品，超声并过夜。油脂类则直接称量一定质量的标准物质并超声溶于油脂。由下表可见，各组分测定结果的相对标准偏差在2.8%-10.1%，平均空白加标回收率为74%-93%，满足GB/T 27404-2008的相关要求。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612281044_01_2238288_3.pnghttp://ng

[b][/b][align=center][b]银黄颗粒质量标志物评价研究[/b][/align][b] 摘要[/b]目的：以黄芩药材、金银花药材、黄芩提取物、金银花提取物、银黄制剂为研究对象，考察并优化了样本在前处理环节的回流提取溶剂的体积、回流提取时间和提取溶剂的温度等。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Venusil MP C[sub]18[/sub]（4.6mm × 250 mm，5μm）， Venusil MP C[sub]18[/sub]（4.6mm × 250 mm，3μm）和 Agela MP S/N。以乙腈一0.3% 磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为0.7 mLmin[sup]-1[/sup]，检测波长为235 nm。结果和结论：通过各方面的考察，确定了银黄颗粒、黄芩药材和金银花药材在样品前处理环节的工艺优化参数，为银黄颗粒质量标志物研究提供借鉴指导。结论: 建立的提取方法稳定、可靠，有效成分达到最大提取效率，可用于银黄颗粒溯源检测的质量控制和综合评价。[b] 关键词：[/b]银黄颗粒；质量标志物；高效液相；黄芩；金银花[b] [/b][align=center][b][color=#333333]Evaluation of Quality Markers of Yinhuang Granules[/color][/b][/align]Objective: To investigate and optimize the volume ofreflux solvent, reflux extraction time and temperature of extraction solvent inthe pretreatment of samples, taking Scutellaria baicalensis, honeysuckle,Scutellaria baicalensis extract, honeysuckle extract and Yinhuang preparationas research objects. METHODS: High performance liquid chromatography was usedwith Venusil MP C18 (4.6 mm *250 mm, 5 micron), Venusil MP C18 (4.6 mm *250 mm,3 micron) and Agela MP S/N as chromatographic columns. The gradient elution was carried out with acetonitrile-0.3% phosphoric acid solution as mobile phase.The flow rate was 0.7 mL/min and the detection wavelength was 235nm. RESULTS AND CONCLUSION: The process optimization parameters of Yinhuanggranules, Radix Scutellariae baicalensis and Flos Lonicerae in samplepretreatment were determined through various aspects of investigation, whichcould provide reference and guidance for the study of quality markers ofYinhuang granules. CONCLUSION: The established extraction method is stable andreliable, and the effective ingredients can reach the maximum extractionefficiency. It can be used for quality control and comprehensive evaluation oftraceability detection of Yinhuang granules.Keywords: Yinhuang granules quality markers high performance liquidchromatography Scutellaria baicalensis honeysuckle[b]一、前言[/b] 银黄颗粒组方由金银花和黄芩构成，具有清热疏风、利咽解毒的功效，用于外感风热、肺胃热盛所致的咽干、咽痛、喉核肿大、口渴、发热急慢性扁桃体炎、急慢性咽炎、上呼吸道感染等症。该复方原料金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花，主产于山东、河南和河北等地。该复方原料黄芩为唇形科[url=https://baike.baidu.com/item/%E9%BB%84%E8%8A%A9%E5%B1%9E][color=windowtext]黄芩属[/color][/url]多年生草本植物，产于河北，河南，陕西，山西，山东等地。黄芩提取物的主要活性成分为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素，金银花提取物是从金银花中提取的有机酸类活性成分。该制剂及其原料药成分复杂，生产厂家及产地众多，样品存在差异。中药质量标志物（Q-marker）已广泛应用于中成药的质量评价与控制。近年来越来越多的研究使用不同种类的分析仪器，密切联系中药有效性-物质基础- Q-marker研究，建立了丰富的中成药系统质量控制方法，为探讨建立中药全过程质量控制及质量溯源体系奠定了基础。[b]二、材料与方法1仪器与试剂、试药1.1仪器[/b] Waters e2695高效液相色谱仪（美国Waters公司），Waters 2998紫外检测器（美国Waters公司），Waters Empower色谱工作站（美国Waters公司）；AGBP210S电子天平（Sartorius公司）；MILLIPORE纯水机（MILLIPORE公司）；高速万能粉碎机（北京市永光明医疗仪器有限公司，FW-80型）；SB4200DTS超声波双频清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；KDM-A控温电热套（金坛市医疗仪器厂）；Venusil MP C[sub]18[/sub]（4.6 mm × 250 mm，5 μm）和Venusil MP C[sub]18[/sub]（4.6 mm × 250 mm，3 μm）。[b]1.2 试剂与试药[/b] 乙腈（上海星可高纯溶剂有限公司，色谱纯）；甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。对照品来源：葛根素（批号:110752-200912）购自中国食品药品检定研究院。2样品的收集与前处理[b]2.1样品的收集[/b] 本研究从全国范围内收集黄芩、金银花药材各50批，分别制备相应的黄芩提取物和金银花提取物各50批，并制备银黄颗粒样品至少50批。（共计不少于250批样品）。[b]2.2黄芩、金银花药材的处理[/b] 对收集到的各批样品，均按照《中国药典》2015年版（第四部）药材取样法，四分法取样，1/4留样，剩余药材粉碎，使粉末分别过60目和20目筛，并按比例称重。所有黄芩、金银花药材样品均装袋密封，保存于冰柜（-20℃）中，备用。[b]2.3黄芩提取物的制备[/b] 取黄芩约100 g，置于1000 ml容量瓶中，加热回流两次，每次2 h，将滤液置于烧杯中浓缩至200 ml，用2 mol/L的盐酸调PH至1.0-2.0，80 ℃保温1 h，静置24 h.减压抽滤，沉淀加一倍量水混匀，用40 %氢氧化钠调节PH至7.0，加等量乙醇，搅拌溶解，滤过，滤液用2 mol/L的盐酸调PH 1.0-2.0， 60 ℃保温1 h，静置24 h，滤过，沉淀物加水洗至PH 5.0，95%乙醇洗至中性，挥尽乙醇，干燥，即得。[align=center]表1 黄芩提取物的提取[/align][align=center][img=,579,348]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091021374879_6392_3255306_3.png!w579x348.jpg[/img][/align][b]2.4金银花提取物的制备[/b] 称取金银花50.05 g置于圆底烧瓶中，加纯水回流提取三次，第一次8倍量水400 ml回流提取1 h，滤过，残渣加8 倍量水400 ml二次回流提取1 h，滤过，合并煎液，残渣加6倍量水300 ml，合并煎液，浓缩成浸膏，加浸膏量50%的淀粉混匀，置于烘箱中，60 ℃干燥，粉碎成粉，即得。[align=center]表2 金银花提取物的提取[/align][align=center] [img=,552,347]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091021550706_5584_3255306_3.png!w552x347.jpg[/img][/align][b]3供试品溶液方法考察的制备3.1供试品溶液制备方法考察3.1.1提取溶剂的选择[/b] 根据银黄颗粒的服用说明，该样品采用水为溶媒制备供试品溶液，由于临床应用中黄芩，金银花多采用水煎内服的用法，因此研究中以水作为提取溶媒，制备样品溶液。[b]3.1.2内标物溶液的制备[/b] 经查阅大量文献，本实验适用的内标物为葛根素。取葛根素对照品适量精密称定，以水超声溶解并定容制成浓度为30 μg*mL[sup]-1[/sup]的内标溶液[b]3.2银黄颗粒供试液制备方法考察3.2.1银黄颗粒不同料液比的考察[/b] 银黄颗粒研细后精密称取细粉1.0 g，称四份，置于100 ml或250 ml的圆底烧瓶中，分别精密加入煮沸的蒸馏水25 ml、50 ml、100 ml、150 ml于圆底烧瓶中，称重，加热回流30 min，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后0.5 ml等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表3、图1。[align=center]表3 银黄颗粒不同料液比单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center] [img=,289,425]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091023281381_1955_3255306_3.png!w289x425.jpg[/img][/align][align=center]图1 银黄颗粒不同料液比单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,289,123]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091023402582_6283_3255306_3.png!w289x123.jpg[/img][/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取体积为100 ml时值最大，最终选择回流提取体积为100 ml。[b]3.2.2银黄颗粒不同提取时间的考察[/b] 银黄颗粒研细后精密称取细粉1.0 g，称四份分别置于100 ml 的圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水25 ml于圆底烧瓶中，称重，分别加热回流20 min、30 min、40 min、60 min，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后0.5 ml等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表4、图2。[align=center]表4 银黄颗粒不同提取时间单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center] [img=,292,421]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091024007921_8570_3255306_3.png!w292x421.jpg[/img][/align][align=center][img=,577,251]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091024513811_6890_3255306_3.png!w577x251.jpg[/img][/align][align=center]图2 银黄颗粒不同提取时间单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取时间为30 min时值最大，最终选择回流提取时间为30 min。[b]3.2.3银黄颗粒冷热水的考察[/b] 银黄颗粒研细后精密称取细粉1.0 g，称两份分别置于250 ml的圆底烧瓶中，第一份精密加入煮沸的蒸馏水100 ml于圆底烧瓶中，第二份精密加入100 ml常温蒸馏水，称重，加热回流30 min，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表5、图3。[align=center]表5 银黄颗粒冷热水单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,287,427]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091025490101_4911_3255306_3.png!w287x427.jpg[/img][/align][align=center][img=,574,270]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091026003331_9248_3255306_3.png!w574x270.jpg[/img][/align][align=center]图3 银黄颗粒冷热水单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取溶剂为热水时值最大，最终选择提取溶剂为热水。[b]3.3黄芩药材供试液制备方法考察 3.3.1黄芩药材不同料液比的考察[/b] 按比例称取2 0～60目和过60目筛的黄芩药材粉末，共0.57 g，称取三份，置于100 ml或250 ml的圆底烧瓶中，分别精密加入煮沸的蒸馏水25 ml、50 ml、100 ml于圆底烧瓶中，称重，加热回流30 min ，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表6、图4。[align=center]表6 黄芩药材不同料液比单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,291,425]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091026251557_1424_3255306_3.png!w291x425.jpg[/img][/align][align=center][img=,567,260]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091026352391_8450_3255306_3.png!w567x260.jpg[/img][/align][align=center]图4 黄芩药材不同料液比单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取体积为50ml时值最大，最终选择50ml为最佳提取容积。[b]3.3.2黄芩药材不同提取时间的考察[/b] 按比例称取2 0～60目和过60目筛的黄芩药材粉末，共0.57 g，称取四份，分别置于100 ml 的圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水25 ml于圆底烧瓶中，称重，分别加热回流20 min、30 min、40 min、60 min ，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表7、图5。[align=center]表7 黄芩药材不同提取时间单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,289,424]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091027053867_9448_3255306_3.png!w289x424.jpg[/img][/align][align=center][img=,605,240]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091027125561_9333_3255306_3.png!w605x240.jpg[/img][/align][align=center]图5 黄芩药材不同提取时间单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取时间为40 min时值最大，最终选择40 min为最佳提取时间。[b]3.3.3黄芩药材冷热水提取的考察[/b] 按比例称取2 0～60目和过60目筛的黄芩药材粉末，共0.57 g，称取二份，置于100 ml的圆底烧瓶中，第一份精密加入煮沸的蒸馏水50 ml于圆底烧瓶中，第二份精密加入50 ml常温蒸馏水，分别称重，加热回流40 min，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表8、图6.[align=center]表8 黄芩药材冷热水单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,287,424]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091027401011_8981_3255306_3.png!w287x424.jpg[/img][/align][align=center][img=,619,293]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091027478961_1794_3255306_3.png!w619x293.jpg[/img][/align][align=center][/align][align=center]图6 黄芩药材冷热水单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取溶剂为热水时值最大，最终选择热水提取是最佳的。[b]3.4金银花药材供试液制备方法考察3.4.1金银花药材不同料液比的考察[/b] 按比例称取2 0～60目和过60目筛的金银花药材粉末，共0.5 g，称取三份，置于100 ml或250 ml的圆底烧瓶中，分别精密加入煮沸的蒸馏水50 ml、100 ml、200 ml于圆底烧瓶中，称重，加热回流30 min，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表9、图7。[align=center]表9 金银花药材不同料液比单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,358,511]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091031346401_7706_3255306_3.png!w358x511.jpg[/img][/align][align=center][img=,636,256]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091031349941_1562_3255306_3.png!w636x256.jpg[/img][/align][align=center]图7 金银花药材不同料液比单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取容积为100 ml，200 ml时值较大，100 ml与200 ml比较，两者的成分含量差别不大，所以选择100 ml提取较好。[b]3.4.2金银花药材不同提取时间的考察[/b] 按比例称取2 0～60目和过60目筛的黄芩药材粉末，共0.5 g，称取四份，分别置于250 ml 的圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水100 ml于圆底烧瓶中，称重，分别加热回流20 min、30 min、40 min、60 min ，回流后放冷，补重，过滤，取续滤液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照既定方法采集色谱指纹图谱，计算各共有峰的单位质量的峰面积值，比较其差异，结果见表10、图8。[align=center]表10 金银花药材不同提取时间单位质量色谱峰面积比较[/align][align=center][img=,290,424]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091030005792_6136_3255306_3.png!w290x424.jpg[/img][/align][align=center][img=,555,215]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091030053727_8053_3255306_3.png!w555x215.jpg[/img][/align][align=center][/align][align=center]图 9 金银花药材冷热水提取单位质量色谱峰面积比较[/align] 由上述表图分析：各主要共有峰的单位质量峰面积在提取溶剂为热水时值最大，最终选择热水提取最佳。[b]3.5 黄芩提取物，金银花提取物供试液制备方法考察[/b] 通过实验得知黄芩提取物，金银花提取物供试液制备方法考察同银黄颗粒供试液制备方法考察一致。[b]3.6 含葛根素内标的银黄颗粒、黄芩药材、金银花药材、黄芩提取物、金银花提取物供试液配制方法的确定3.6.1含葛根素内标银黄颗粒供试品溶液的配制[/b] 银黄颗粒研细后精密称取细粉1.0 g，置于250 ml圆底烧瓶内，精密加入煮沸的蒸馏水100 ml，称重，加热回流30 min（提前打开电热套预热），放冷，补重，过滤，取续滤液。另取葛根素对照品适量精密称定，以水超声溶解并定容制成浓度为30μg• mL-1的内标溶液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液。[b]3.6.2含葛根素内标黄芩药材供试品溶液的配制[/b] 从冰柜中取出黄芩药材粉末，放置室温。采用四分法取样，按比例称取2 0～60目和过60目筛的黄芩药材粉末，共0.57 g，置于100 ml圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水50 ml，称重，加热回流40 min（提前打开电热套预热），放冷，补重，过滤，取续滤液。另取葛根素对照品适量精密称定，以水超声溶解并定容制成浓度为30 μg• mL-1的内标溶液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液。[b]3.6.3含葛根素内标金银花药材供试品溶液的配制[/b] 从冰柜中取出金银花药材粉末，放置室温。采用四分法取样，按比例称取2 0～60目和过60目筛的黄芩药材粉末，共0.25 g，置于100 ml圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水50 ml，称重，加热回流30 min（提前打开电热套预热），放冷，补重，过滤，取续滤液。另取葛根素对照品适量精密称定，以水超声溶解并定容制成浓度为30 μg• mL-1的内标溶液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液。[b]3.6.4含葛根素内标金银花提取物供试品溶液的配制[/b] 从冰柜中取出金银花提取物粉末，按比例精密称取0.2 g，置于250 ml圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水100 ml，称重，加热回流30min（提前打开电热套预热），放冷，补重，过滤，取续滤液。另取葛根素对照品适量精密称定，以水超声溶解并定容制成浓度为30 μg• mL-1的内标溶液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液。[b]3.6.5含葛根素内标黄芩提取物供试品溶液的配制[/b] 从冰柜中取出黄芩提取物粉末，按精密称取0.04 g，置于250 ml圆底烧瓶中，精密加入煮沸的蒸馏水100 ml，称重，加热回流30 min（提前打开电热套预热），放冷，补重，过滤，取续滤液。另取葛根素对照品适量精密称定，以水超声溶解并定容制成浓度为30 μg• mL-1的内标溶液。将样品溶液与内标溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过后等体积混匀，作为供试品溶液。[b]三、结论[/b] 实验考察了银黄颗粒在样本处理环节的回流提取溶剂的体积、回流提取时间和提取溶剂的温度等。最终选择回流提取体积为100 ml，选择回流提取时间为30 min，选择提取溶剂为热水。考察了黄芩药材在样本处理环节的回流提取溶剂的体积、回流提取时间和提取溶剂的温度等。最终选择50ml为最佳提取容积，选择40 min为最佳提取时间，选择热水提取是最佳的。考察了金银花药材在样本处理环节的回流提取溶剂的体积、回流提取时间和提取溶剂的温度等。最终选择100 ml体积提取溶剂，选择30 min提取是最佳的，选择热水提取最佳。本实验还确定了含葛根素内标的银黄颗粒、黄芩药材、金银花药材、黄芩提取物、金银花提取物供试液配制方法。[align=left][b]参考文献[/b][/align] 王亚丹，杨建波，戴忠，等.中药金银花的研究进展.药物分析杂志，2014，34(11):1928-1935 中国药典.一部.2015:1498 王彩芳，张楠，黄龙，等. 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问题：银黄口服液中的绿原酸的检测对照品分析中绿原酸的理论塔板数是多少？答案：54008.959【活动奖励】幸运奖（2钻石币）：抽奖软件，当天随机抽取3个回答正确的版友ID号（最后一个ID号，截止至下午3：00），每人奖励2个钻石币中奖名单：莫名其妙(注册ID：moyueqiu)捌道巴拉巴巴巴（注册ID：v3082413）大川之子,纵横四海(注册ID：chuangu120) http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603291519_588535_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603291519_588536_1610895_3.png 积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================银黄口服液中的绿原酸的检测样品制备制备方法1. 对照品：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。2. 供试品：精密量取银黄口服液1 mL，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分析条件色谱柱Leapsil C18 100 x 4.6 mm，2.7 μm (Cat#：86002)流动相A：乙腈 B： 0.4%磷酸溶液 梯度流速1 mL/min柱温30 ℃检测器UV 327 nm 进样量10 μL 色谱图对照品 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191700_667769_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 10.562 1087809 173359 54008.959 1.002 -- *药典要求理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000供试品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016032910081422_01_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 7.573 1251455 176279 22456.189 0.961 -- 2 10.512 1518511 233095 51183.057 0.974 15.154 3 11.407 1150311 192094 68290.122 0.994 4.962 4 19.980 405526 63980