大豆异黄酮是从植物中提取,与雌激素有相似结构,因此又称植物雌激素,大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性,是天然的癌症化学预防剂。主要成分:大豆甙(Daidzin),大豆甙元(Daidzein),染料木甙(Genistin),染料木素(Genistein),黄豆甙(Glycitin),黄豆甙元(Glycitein)。迪马科技用户采用Endeavorsil C18超高效液相色谱柱成功实现8分钟内6种大豆异黄酮的良好分离,对于大豆异黄酮的分离和检测具有实际意义。UPLC色谱分析条件*:色谱柱:Endeavorsil C18 50 × 2.1 mm, 1.8 μm(Cat.#.:87002)流动相:A:0.2%的磷酸水溶液,B:乙腈时间(min)02467A(%)9085706090B(%)[align=cente
[align=center][b]超高效液相色谱-串联质谱法测定大豆中大豆异黄酮的含量[/b][/align][align=center]户江涛[/align][align=center](农业农村部豆类产品质量安全风险评估实验室(佳木斯),黑龙江省农垦科学院测试化验中心,黑龙江佳木斯 154007 )[/align]摘要:采用超高效液相色谱-串联质谱法建立了检测大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。试样经90%甲醇水提取后,6种大豆异黄酮在C[sub]18[/sub]色谱柱上以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,进行液相色谱分离;质谱检测采用电喷雾正离子化模式和多反应监测模式(MRM)。结果表明,6种大豆异黄酮分别在0.01~0.5 mg/L(D、GL、G)和0.002~0.1 mg/L(De、GLe、Ge)范围内线性关系良好,相关系数(R)为0.9993~0.9998,定量限(LOQ)为0.0001 g/kg。在大豆空白样品添加浓度分别为0.01、0.05、0.2 g/kg(De、GLe、Ge)和0.2、1、2 g/kg(D、GL、G),6种大豆异黄酮的平均回收率为86.6%~96.2%,相对标准偏差(RSD)为1.07%~5.93%(n=6)。本方法简便、灵敏、抗干扰,适用于大豆中大豆异黄酮含量检测。关键词:超高效液相色谱-串联质谱;大豆;大豆异黄酮[align=center]Determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry[/align][align=center]HU Jiangtao[/align][align=center]([i]Laboratory of Qualityand Safety Risk Assessment for Soybean products, Ministry of Agriculture andRural Affairs, Testing and Analysis Center of Heilongjiang Academy of LandReclamation Sciences, Jiamusi 154007,China[/i])[/align][b]Abstract:[/b]A methodwasdeveloped for the determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS). The samples were extracted by 90% methanol-water, then 6 soybean isoflavones were separated on aWaters BEH C[sub]18[/sub] column with gradient elution with the mobile phase of0.1% formic acid and acetonitrile, and finally detected by positive eletrosprayionization-mass spectrometry(ESI[sup]+[/sup]-MS/MS) in multiple reactionmonitoring(MRM) mode. The results showed the linearities of 6 soybean isoflavones were good in the concentrationrange of 0.01~0.5 mg/L(D、GL、G)and 0.002~0.1 mg/L(De、GLe、Ge), the correlation coefficients were 0.9993~0.9998. The limitof quantification(LOQ) of soybean isoflavone was 0.0001 g/kg. At the spiked levels of 0.01、0.05、0.2 g/kg(De、GLe、Ge)and 0.2、1、2 g/kg(D、GL、G) in the blank soybean samples, the mean recovery of soybeanisoflavone was 86.6%~96.2%, andthe relative standard deviation(RSD) was 1.07%~5.93%(n=6).This method is simple,sensitive, anti-jamming and suitable for simultaneous determination of soybean isoflavone in soybean.[b]Key words: [/b]ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry (UPLC-MS/MS) soybean soybean isoflavone大豆异黄酮(soybean isoflavone)是一族化合物的统称,是大豆植物体内的一种次生代谢产物,是大豆主要活性成分之一,其母核为3-苯并吡喃酮,主要包括大豆苷、大豆黄苷、染料木苷及其相应苷元[sup][/sup]。研究表明,大豆异黄酮除具有天然抗氧化作用外[sup][/sup],还具有降低胆固醇含量、预防多种癌症及改善妇女更年期综合征等多方面生物功效[sup][/sup]。大豆异黄酮主要存在于大豆籽实中,其总含量约为0.4~5 g/kg,其中大豆苷、大豆黄苷和染料木苷这三种含量约占总量的97%~98%,而其对应的苷元含量仅占2%~3%左右[sup][/sup]。目前,大豆异黄酮的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)[sup][/sup]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]、紫外分光光度法[sup] [/sup]、质谱法(HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[sup][/sup])等。紫外分光光度法[sup] [/sup]只能测定大豆异黄酮总量,且灵敏度不高;[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]需要对异黄酮进行衍生,前处理复杂;目前,大豆异黄酮检测现有的国家标准GB/T 26625-2011[sup] [/sup]采用的是高效液相色谱法(HPLC),在实际检测过程中发现,由于紫外检测器灵敏度不高,存在个别样品中异黄酮相应苷元检测不到的情况;同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质影响色谱柱柱效,以至于不能满足分离度要求,严重干扰低含量组分峰面积积分定量。而[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法质谱检测器灵敏度高,通过选定大豆异黄酮的特征离子,能有效去除上述杂质干扰,定量更加准确可靠。目前,国内外采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法检测大豆中大豆异黄酮含量的文献很少[sup][/sup]。本文对大豆中大豆异黄酮检测的前处理方法借鉴GB/T 26625-2011[sup][/sup],提取液改用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS测定。该方法前处理过程简便、灵敏度高、分析时间短、抗干扰能力强,适用于大批量大豆样品中大豆异黄酮含量的检测。[b]1 实验部分[/b]1.1 材料与试剂大豆苷(daidzin,记为D,以下同)、大豆黄苷(glycitin,GL)、染料木苷(genistin, G)、大豆素(daidzein,De)、大豆黄素(glycitein, GLe)、染料木素(genistein,Ge)(纯度≥99%,Dr.Ehrenstorfer公司);甲醇、乙腈、甲酸(色谱纯,Fisher公司);实验用水为Millipore纯水仪制备。1.2 仪器与设备Acquity UPLC型超高效液相色谱仪(Waters公司);XEVO TQ-S三重四级杆质谱仪(Waters公司);KQ-500DE型超声波仪(昆山市超声仪器有限公司);涡旋混合器(IKA公司);CR21GⅢ型高速离心机(HITACHI公司)。1.3 大豆异黄酮标准储备液的配置分别称取适量的D、GL、G、De、GLe、Ge标准品,用甲醇配置成质量浓度为1mg/mL标准储备液,于-18℃冰箱保存(有效期6个月),待用;使用时用10%甲醇水逐级稀释成所需浓度的混合标准工作液,现用现配。1.4 样品前处理提取:称取粉碎均与后的试样1.0g(精确到0.01g)于50mL聚乙烯离心管中,加入10.0 mL90%甲醇水,涡旋混合30 s后置于60℃超声波清洗器中提取30 min,在离心机中以15000 r/min离心5 min,将上清液转移至100 mL容量瓶中,残渣再加入10.0 mL90%甲醇水溶液按上述步骤提取后,合并两次上清液于100 mL容量瓶中,用10%甲醇水溶液定容至刻度,摇匀。a)De、GLe、Ge的测定:取1 mL过0.22um有机系微孔滤膜,供UPLC/MS/MS分析测定;b)D、GL、G的测定:由于D、GL、G含量较高,需要将a)中过完滤膜的待测液用10%甲醇水稀释50倍后,供UPLC/MS/MS分析测定。1.5 液相色谱及质谱条件液相色谱:色谱柱:Waters BEH C[sub]18[/sub](1.7 μm,50mm×2.1mm);柱温:30℃;流速:0.5 mL/min;进样量:1μL;流动相A:乙腈;流动相B:0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脱程序:0~0.5min,10% A;0.5~3. 0 min,10%~100% A;3. 0 ~4. 0 min,100%A,4 ~4.1.1min,100% A~10% A,4.1 ~5.0min 10% A。质谱:离子源:电喷雾离子源( ESI [sup]+[/sup] ) ;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测( MRM);毛细管电压:3.2 kv;离子源温度:150℃;去溶剂气温度:500℃;去溶剂气流量:1000 L /h;定性、定量离子对及碰撞能量见表1。[align=center]表1大豆异黄酮的质谱参数[/align][align=center]Table 1 MRM parameters of soybean isoflavone[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Cone/V[/align] [/td][td] [align=center]Parent ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Daughter ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Collision energy/V[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]417[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]255﹡[/align] 137[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]18[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]G[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]433[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]271﹡[/align] 153[/td][td] [align=center]21[/align] [align=center]50[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GL[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]447[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]285﹡[/align] 270[/td][td] [align=center]25[/align] [align=center]46[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]De[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]255[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]137﹡[/align] 181[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]26[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Ge[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]271[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]153﹡[/align] 215[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]25[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GLe[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]285[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]242﹡[/align] 168[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]35[/align] [/td][/tr][/table]﹡quantitativeion[b]2 结果与讨论[/b]2.1 色谱及质谱条件的优化流动相的选择:对比了酸性体系(0.1%甲酸水溶液)与非酸性体系(纯水、乙酸铵溶液)分别与甲醇、乙腈的流动相体系组合,结果发现目标物在酸性体系中比非酸性体系响应更高、峰形更好;同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质可能会残留在色谱柱上,影响色谱柱的使用寿命,而乙腈比甲醇体系洗脱能力更强,可以有效去这些杂质。综合考虑目标物信号强度、色谱分离效果以及除杂等因素,本研究采用0.1%甲酸水溶液+乙腈流动相体系。质谱的选择:根据6种大豆异黄酮的分子量,用10%甲醇水配置1.0 mg/L 大豆异黄酮标准溶液直接注射到质谱中,在正离子模式下分别对各种组分进行母离子及对应子离子全扫描,最终确定的质谱条件见表1。2.2 质谱法(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)与色谱法(HPLC)的比较国家标准《GB/T 26625-2011粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》[sup][/sup]中规定的大豆异黄酮检测方法为HPLC法。对同一大豆样品分别采用本文UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法(MRM色谱图见图1、2)和GB/T 26625 HPLC法检测,结果表明这两种方法测定的大豆异黄酮总含量值基本一致。由于De、GLe、Ge这三种苷元在大豆中含量很低,用HPLC法检测时,紫外检测器灵敏度不高,存在个别样品中上述三种组分检测缺失的情况;同时在实际大批量样品检测中发现,随着进样次数的增加,色谱柱柱效下降,大豆提取液中存在的蛋白、脂肪等杂质对含量低的目标物峰干扰越来越大,定量困难。研究发现,同浓度的大豆异黄酮在质谱检测器上的响应值要远远超过紫外检测器,同时质谱法可以通过选定大豆异黄酮的特征离子,有效地去除杂质的干扰,其目标物分离度不受色谱柱进样次数增加的影响,定量更加准确可靠。[align=center][img=,690,651]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050912587968_4111_3299836_3.jpg!w690x651.jpg[/img][/align][align=center]图1 大豆异黄酮标准溶液(0.01mg/L)MRM色谱图[/align][align=center]Fig.1 MRM chromatograms of soybean isoflavone standard solution at 0.01 mg/L[/align][align=center][/align][align=center][img=,690,653]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050913342201_5843_3299836_3.jpg!w690x653.jpg[/img][/align][align=center]图2 大豆样品中大豆异黄酮MRM色谱图[/align][align=center]Fig.2 MRM chromatograms of soybean isoflavone in soybean[/align]2.3线性范围和定量限吸取不同体积的大豆异黄酮标准储备液(1.3),用10%甲醇水分别配置0.002、0.005、0.01、0.05、0.1(De、GLe、Ge)和0.01、0.05、0.1、0.2、0.5(D、GL、G)的大豆异黄酮上机混合标准溶液,以各自定量离子的峰面积为Y对应质量浓度X(mg/L)做标准曲线,得到的线性方程和相关系数见表2。结果表明,大豆异黄酮标准溶液在各自浓度范围内线性良好,相关系数R为0.9993~0.9999。以10倍信噪比(S/N)计算,大豆异黄酮上机液最低定量浓度为0.001 mg/L,通过公式(1)计算得到大豆中大豆异黄酮含量,最终确定本方法大豆异黄酮的定量限(LOQ)为0.0001 g/kg。糠氨酸质量分数计算公式:[align=center][img=,207,87]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050915166414_5621_3299836_3.jpg!w207x87.jpg[/img] ………………(1)[/align] 式中:X为试样中大豆异黄酮含量,以g/kg计;C为大豆异黄酮上机浓度(mg/L);V为定容体积(V=100)。表2 大豆异黄酮标准溶液的线性方程和相关系数[align=center]Table 2 Linear equation and correlation of soybean isoflavone in 10% methanol-water standard solutions[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Linear range/(mg/L)[/align] [/td][td] [align=center]Linear equation[/align] [/td][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center]GL[/align] [align=center]G[/align] [align=center]De[/align] [align=center]GLe[/align] [align=center]Ge[/align] [/td][td] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [/td][td] [align=center]Y=2393.6x+479.38[/align] Y=1885x+139.66 [align=center]Y=1470.9x+187.97[/align] [align=center]Y=4287.9x+442.79[/align] [align=center]Y=3521.7x-103.62[/align] [align=center]Y=1993x+122.79[/align] [/td][td] [align=center]0.9995[/align] [align=center]0.9999[/align] [align=center]0.9993[/align] [align=center]0.9998[/align] [align=center]0.9997[/align] [align=center]0.9998[/align] [/td][td] [/td][/tr][/table]2.4回收率和精密度大豆中De、GLe、Ge含量较低,而D、GL、G含量较高,故本方法准确度实验分为高低浓度梯度组进行加标。称取大豆试样1.00 g,分别添加0.01、0.05、0.2 g/kg(De、GLe、Ge)和0.2、1、2 g/kg(D、GL、G),每个水平重复6次,同时做该大豆的空白本底实验。按照1.4前处理方法处理后上机检测,计算回收率(扣除空白),结果表明:不同添加浓度下,De、GLe、Ge的平均回收率为91.7%~96.2%,相对标准偏差(RSD,n=6)为2.78%~5.93%;D、GL、G的平均回收率为86.6%~93.8%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.07%~3.77%。[b]3 结语[/b]本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)测定大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。该方法灵敏度高,线性范围宽,能同时覆盖大豆中多梯度浓度大豆异黄酮组分含量的测定。同时该方法具有较高的准确度和精密度,前处理步骤简单,分析速度快,可有效避免由于色谱柱柱效下降对最终检测结果的影响,特别适合大批量样品的检测。田娟娟, 宋宏哲, 张飞, 等. 水剂法纯化大豆异黄酮的研究. 大豆通报, 2005, 6:19-22. Hagen M K, Ludke A, Araujo A S, et al.Antioxidant characterization of soy derived products in vitro and the effect ofa soy diet on peripheral markers of oxidative stress in a heart disease model .Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 2012,90(8):1095-1103. 徐春华, 张治广, 谢明杰, 等. 大豆异黄酮的抗氧化和抗肿瘤活性研究研究 . 大豆科学, 2010, 29(5): 870-873. 李俏俏, 王清路, 薛金艳, 等. 大豆异黄酮对绝经女性血清中脂类物质的影响的研究 . 大豆科学, 2009, 28(1):172-174. 胡润芳, 张玉梅, 陈宇华, 等. 大豆异黄酮含量的初步研究. 东南园艺, 2017, 6:9-11. 刘琴, 朱媛媛, 白兴梁. 不同种类大豆中大豆异黄酮含量及抗氧化性比较. 北京工商大学学报(自然科学版), 2012, 30(6): 45-51. 袁凤杰, 姜莹, 董德坤, 等. 中国大豆核心种质异黄酮含量分析.中国粮油学报, 2011, 26(2):5-8. Tepavcevic V, Atanackovic M,Miladinovic J,et al. Isoflavone composition,total polyphenolic content,and antioxidant activity in soybeans of different origin. MedFood,2010,13(3):657-664 GB/T 26625-2011《粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》. Liggins J,Bluck J C. Deidzein and genistein content of fruits and nuts. Journal ofNutritional Biochemistry,2000,11(6):326-331. 鞠兴荣, 袁建, 汪海峰. 三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量的研究. 食品科学, 2001, 22(5):46-48.
寒冷的冬天,整个人都是懒洋洋的,尽管有很多试验经历、色谱柱使用体会、很多的原创素材,都懒的起笔。2013年马上来临,趁着2012年的第五届原创大赛,赶快记录一篇原创,分享自己更多的使用体会与试验经历给大家探讨。这次检测的是大豆异黄酮,说起这个,估计很少人接触,而我已经跟它已经认识了好几年。异黄酮是一类物质,有苷和苷元之分,可是接触了很久都不知道苷和苷元有什么区别,为什么这个叫苷,另外一个就叫苷元。而且保健品中有很多叫甙,我也搞不清楚甙和苷有什么区别。大豆异黄酮的测定,目前存在的标准方法:GB/T 23788-2009保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法NY/T 1252-2006大豆异黄酮http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281607_416709_1608710_3.jpg实验过程:色谱柱:Topsil 液相色谱柱(C18,5um,4.6*250mm)检测波长:260nm流动相:乙腈+0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱流速:1.0mL/min进样量:20ul先晒晒标准上的图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281611_416712_1608710_3.jpg以下是我测定的色谱图,根据出峰顺序依次是大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素。标准色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281614_416716_1608710_3.jpg保健食品样品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281615_416718_1608710_3.jpg总结:1、总体来说,4个组分的保留时间和色谱峰都能与标准对应重现2、色谱峰的理论塔板数都很好,这根柱子已经用了一段时间,具体测了多少样品就不清楚了3、以前检测测的是大豆素和染料木素,同时测定4个还是第一次,效果还算满意你测试过大豆异黄酮吗?有经验赶快讨论吧
谁知道对异黄酮展开效果好点的展层剂和比较专一的显色剂 请高手指点一下 或者谁有更好的异黄酮定性的方法 请指点一下 最近提取到新的物质 初步怀疑是这个异黄酮 想确定一下 谢谢高手指点
[color=#3e3e3e]异黄酮的功能与人体自然分泌的雌激素相似,能缓解更年期症状,大豆和豆制品是最佳来源,如豆粉、豆浆、豆豉、豆腐、豆皮等。[/color]
[align=center][b]HPLC法测定黄芪水提物中的毛蕊异黄酮苷含量[/b][/align][b]黄芪中的主要有效成分除皂苷外就是异黄酮类化合物。异黄酮类成分具有调节免疫、抗肿瘤、抗突变、抗氧化、抗炎、抗突变抗辐射、抗心肌缺血、抗心律失常、抗病毒、抗细胞凋亡、保肝、防止动脉粥样硬化等作用[sup][/sup],其代表成分就是毛蕊异黄酮 7-O-β-D 吡喃葡萄糖苷(即毛蕊异黄酮苷)。2010版药典才开始将毛蕊异黄酮苷收录为黄芪中有效成分含量测定项。本章实验借鉴药典中的测定方法,对不同工艺条件下获得的黄芪水提物中的毛蕊异黄酮苷含量进行考察,以期为优化芪龙胶囊和黄芪配方颗粒中黄芪的提取工艺参数提供科学基础和理论依据。[b]1 材料和仪器1.1 样品 [/b] 收集9组黄芪水提取物样品,黄芪饮片为济南济成堂中药饮片有限公司提供(批号18033101)。[b]1.2 试剂 [/b]毛蕊异黄酮苷对照品(成都瑞芬思生物科技有限公司批号M-020-170926),乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司);甲酸(天津市科密欧化学试剂有限公司);超纯水。[b]1.3 仪器 [/b]液相色谱系统,包括日本岛津公司LC-20AT型液相色谱仪,LC-20AT岛津输液泵,CTO-20A柱温箱,SIL-20A自动进样器,SPD-20A紫外-可见光检测器;超声波清洗机KS-300E(宁波科生仪器厂);电子天平MS205DU(梅特勒/瑞士)。[b]2 方法学考察2.1 色谱条件及系统适应性试验[/b]DiamonsiL(钻石)C18柱(250*4.6 mm,5 mm)。以乙腈为流动相A,0.2%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱,A相:0→20 min A为20→40%;20→30 min A保持40%;30→40 min A保持20%。检测波长260 nm;流速为1 mL/min;柱温35 ℃进样量为10 μL。毛蕊异黄酮苷对照品溶液以及黄芪水提物样品色谱图见图4-1与图4-2。[/b][align=center][img=,690,365]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908131706005051_4964_3237657_3.png!w690x365.jpg[/img][/align][align=center]图4-1 毛蕊异黄酮苷对照品色谱图[/align][align=center][img=,690,384]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908131706118782_6652_3237657_3.png!w690x384.jpg[/img][/align][align=center]图4-2 黄芪水提物样品色谱图[/align][b]2.2 供试品溶液的制备[/b]精密称定1/50重量的黄芪水提物样品(折合黄芪药材2 g)置于锥形瓶中,精密加入50 mL甲醇,超声30 min,过滤,将滤液放至水浴锅上蒸干,残渣用甲醇溶解,并定容至25 mL,用0.22 μm的微孔滤膜过滤,即得。[b]2.3 对照品储备溶液的制备[/b]精密称取黄芪甲苷标品5.10mg至10 mL容量瓶中,用甲醇溶解后定容,摇匀,即得浓度为0.51 mg/mL的对照品储备溶液。[b]3 结果3.1 线性关系考察[/b]精密吸取 2. 3 项下对照品储备溶液 4,2,1,0.5,0.25 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇定容,得到浓度为204.00,102.00,51.00,25.50,12.75 μg/mL的对照品溶液。按“2.3”项下色谱条件分别进样10 μL,利用自动积分功能测定峰面积积分值,并以峰面积积分值与浓度进行线性回归。如图3,得回归方程为:Y =25445X + 44225(r[sup]2[/sup]= 0.9994)提示毛蕊异黄酮苷在12.75~204.00 μg/mL范围内线性关系良好。毛蕊异黄酮苷对照品标准曲线如图4-3所示。[align=center][img=,690,406]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908131706302801_395_3237657_3.png!w690x406.jpg[/img][/align][align=center]图4-3 毛蕊异黄酮苷标准曲线[/align][b]3.2 精密度实验[/b]按2. 2 项下方法制备供试品溶液,精密吸取供试品溶液10 μL,重复进样 6 次,记录色谱图峰面积,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算得相对标准偏差RSD为1.6% ,提示该方法精密度良好。[b]3.3 重复性实验[/b]取同一黄芪样品 6份,按“2. 2”项下方法制备供试品溶液,在拟定分析条件下,精密吸取供试品溶液10 μL,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算得RSD为1.1%,提示该方法重复性良好。[b]3.4 稳定性实验 [/b]按2. 2 项下方法制备供试品溶液,分别在0 h、3 h、6 h、9 h、24 h、48 h后,准确吸取 10 μL 进样分析,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算得 RSD 为 0.6%,提示黄芪供试品溶液在48h内稳定性良好。[b]3.5 加样回收率实验[/b]精密称取 6 份毛蕊异黄酮苷含量已知的黄芪水提物样品,每份折合黄芪药材 0. 5 g,分别准确加入样品中毛蕊异黄酮苷含量的50%,50%,100%,100%,150%,150%重量的毛蕊异黄酮苷标品,按2. 2 项下方法制备供试品溶液,准确吸取 10 μL 进样分析,测定毛蕊异黄酮苷含量,计算回收率,结果见表4-1。方法平均回收率为108.48%,表明该方法具有较好的回收率。[align=center]表4-1 毛蕊异黄酮苷加样回收率测定结果[/align] [table][tr][td] [align=center]样号[/align] [/td][td] [align=center]样品中的量/mg[/align] [/td][td] [align=center]加入量[/align] [align=center]/mg[/align] [/td][td] [align=center]测得量/mg[/align] [/td][td] [align=center]回收率[/align] [align=center]/%[/align] [/td][td] [align=center]平均值/%[/align] [/td][td] [align=center]RSD[/align] [align=center]/%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]0.52 [/align] [/td][td] [align=center]1.64 [/align] [/td][td] [align=center]111.54 [/align] [/td][td=1,6] [align=center]108.85 [/align] [/td][td=1,6] [align=center]2.9 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]0.52 [/align] [/td][td] [align=center]1.64 [/align] [/td][td] [align=center]112.08 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]2.22 [/align] [/td][td] [align=center]109.20 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]2.24 [/align] [/td][td] [align=center]111.02 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.59 [/align] [/td][td] [align=center]2.72 [/align] [/td][td] [align=center]104.57 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]1.06 [/align] [/td][td] [align=center]1.59 [/align] [/td][td] [align=center]2.72 [/align] [/td][td] [align=center]104.67 [/align] [/td][/tr][/table][b]3.6 毛蕊异黄酮苷的含量测定结果[/b]取9组黄芪水提物按照“2.2”项下操作,制备供试品溶液,准确吸取 10 μL 进样分析,测定毛蕊异黄酮苷的含量。结果见表2。[align=center]表4-2 9组黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷含量测定结果[/align] [table][tr][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]峰面积[/align] [/td][td] [align=center]含量(mg/g)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1123989.50 [/align] [/td][td] [align=center]0.53 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2707047.50 [/align] [/td][td] [align=center]1.31 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1947171.50 [/align] [/td][td] [align=center]0.93 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]3573103.75 [/align] [/td][td] [align=center]1.73 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]1824562.00 [/align] [/td][td] [align=center]0.87 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]2767419.00 [/align] [/td][td] [align=center]1.34 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]2077551.50 [/align] [/td][td] [align=center]1.00 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]1677225.50 [/align] [/td][td] [align=center]0.80 [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]1725416.00 [/align] [/td][td] [align=center]0.83 [/align] [/td][/tr][/table][b]3.7 毛蕊异黄酮苷转移率测定正交试验结果[/b]水提的毛蕊异黄酮苷转移率考察正交试验与水提的出膏率考察正交试验设计相同,即以水作为提取溶剂,把影响药材提取效果的用水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)确定为考察因素,以上三个考查因素各分3个水平考察,见表4-3。[align=center]表4-3水提实验因素水平表[/align] [table][tr][td=1,2] [align=center]水平[/align] [/td][td=3,1] [align=center]因素[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A(用水量/倍)[/align] [/td][td] [align=center]B(提取时间/h)[/align] [/td][td] [align=center]C(提取次数/次)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][/tr][/table][b] [/b]毛蕊异黄酮苷转移率=各实验组黄芪提取物中毛蕊异黄酮苷含量/原黄芪药材中毛蕊异黄酮苷含量×100%。原药材中毛蕊异黄酮苷的含量按照药典的方法测得的结果为0.1425mg/g。跟据实验数据,得到水提实验中设定的不同工艺条件下的毛蕊异黄酮苷的转移率,其中因素D为误差项,作直观分析表和方差分析表,见表4-4,4-5。[align=center]表4-4 毛蕊异黄酮苷转移率考察L[sub]9[/sub](3[sup]4[/sup])正交试验表[/align] [table][tr][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]D[/align] [/td][td] [align=center]毛蕊异黄酮苷[/align] [align=center]转移率/%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]37.21[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]91.77[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]65.58[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]121.62[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]61.36[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]93.85[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]70.08[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]56.28[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]57.94[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]K1[/align] [/td][td] [align=center]194.56[/align] [/td][td] [align=center]228.91[/align] [/td][td] [align=center]187.34[/align] [/td][td] [align=center]156.51[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]K2[/align] [/td][td] [align=center]276.83[/align] [/td][td] [align=center]209.41[/align] [/td][td] [align=center]271.33[/align] [/td][td] [align=center]255.70[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]K3[/align] [/td][td] [align=center]184.30[/align] [/td][td] [align=center]217.37[/align] [/td][td] [align=center]197.02[/align] [/td][td] [align=center]243.48[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]优水平[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center]92.53[/align] [/td][td] [align=center]19.50[/align] [/td][td] [align=center]83.99[/align] [/td][td] [align=center]99.19[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][b] [/b][align=center]表4-5 毛蕊异黄酮苷转移率考察方差分析表[/align] [table][tr][td] [align=center]方差来源[/align] [/td][td] [align=center]离差平方和[/align] [/td][td] [align=center]自由度[/align] [/td][td] [align=center]F[/align] [/td][td] [align=center]显著性[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]1715.05[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.50[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]64.09[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]0.04[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]C[/align] [/td][td] [align=center]1407.78[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]1.13[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]方差来源[/align] [/td][td] [align=center]离差平方和[/align] [/td][td] [align=center]自由度[/align] [/td][td] [align=center]F[/align] [/td][td] [align=center]显著性[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D [/align] [/td][td] [align=center]1950.20[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][td] [align=center]-[/align] [/td][/tr][/table]注:F[sub]0.1[/sub](2,2)=9,F[sub]0.05[/sub](2,2)=19,*为有显著性,-为无显著性。从正交试验结果可知:水提实验中,各因素对毛蕊异黄酮苷转移率的影响大小顺序为:A(用水量)C(提取次数)B(提取时间);每个因素3水平之间的趋势为A[sub]2[/sub]A[sub]1[/sub]A[sub]3[/sub],B[sub]1[/sub]B[sub]3[/sub]B[sub]2[/sub],C[sub]2[/sub]C[sub]3[/sub]C[sub]1[/sub],直观分析得提取工艺为A[sub]2[/sub]B[sub]1[/sub]C[sub]2[/sub],即加水8倍量,提取2次,每次1h。表4-5的方差分析结果表明: A、B、C三因素的对毛蕊异黄酮的转移率影响都无统计学差异(PC(提取次数)B(提取时间);每个因素3水平之间的趋势为A[sub]2[/sub]A[sub]3[/sub]A[sub]1[/sub],B[sub]1[/sub]B[sub]3[/sub]B[sub]2[/sub],C[sub]2[/sub]C[sub]3[/sub]C[sub]1[/sub],直观分析得提取工艺为A[sub]2[/sub]B[sub]1[/sub]C2,即加水8倍量,提取2次,每次1h。表4-7的方差分析结果表明:A、B、C三因素对综合评分的影响都无统计学差异(P0.05)。[b]4 讨论[/b]本章实验借鉴药典中测定黄芪药材中毛蕊异黄酮苷含量的方法,利用紫外-可见光检测器的高效液相色谱仪测定黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷的含量。与药典中方法测得的结果相比,本实验测得的结果除色谱峰分离度稍差外,其他方法学考察指标显示良好。从毛蕊异黄酮苷转移率测定正交试验结果来看,第4组实验毛蕊异黄酮苷转移率最高,这也是正交结果分析中最佳提取工艺,即加水8倍量,提取2次,每次1小时。本结果与上一章实验中第四组黄芪水提物中黄芪甲苷的转移率最高结果一致,但其他组别毛蕊异黄酮苷的转移率高低顺序与上一章黄芪甲苷的转移率高低顺序并不一致,这说明毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷对提取工艺的要求并不完全一致。同一种原药材,加工成不同功效的药物,那么发挥药效的物质也有可能不同,因此相应的提取工艺也是需要根据药效物质适时调整的。另外,用水量在设置的三个因素中对毛蕊异黄酮苷的转移率影响最大,但仍无统计学差异(P0.05),说明用水量、提取次数、提取时间三种工艺的改变对黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷的含量无显著性影响。从综合评分计算正交试验结果来看,第4组实验综合评分最高,这也是正交结果分析中最佳提取工艺,即加水8倍量,提取2次,每次1小时。用水量在设置的三个因素中对综合评分影响最大,但仍无统计学差异(P0.05),说明用水量、提取次数、提取时间三种工艺的改变对黄芪水提工艺的综合评分无显著性影响。综合出膏率、黄芪甲苷和毛蕊异黄酮苷的含量得出综合评分来优选黄芪水提的最佳提取工艺,能够从化学成分的角度来客观全面地评价和研究黄芪水提的关键环节,这也为芪龙胶囊和黄芪配方颗粒水提环节工艺的优化提供借鉴和指导。[align=center] [/align][align=center]参考文献[/align] 陈建真,吕圭源, 叶磊, 等.黄芪黄酮的化学成分与药理作用研究进展. 医药导报, 2009, 28(10): 1314-1316. 赵四清,周日宝, 陈胜璜, 等.不同的产地加工方法对中药材金樱子质量的影响. 湖南中医学院学报, 2005, 25(3): 21-22.
化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法1 适用范围 本方法规定了用高效液相色谱法定性检测化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的方法。 本方法适用于化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的定性测定。2 方法提要 样品在经过提取后,经高效液相色谱仪分离,二极管阵列检测器检测,经与平行操作的补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮对照品及补骨脂对照药材比较,以保留时间和紫外光谱图定性,鉴别补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的存在。本方法对补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检出限和取样品0.5 g时的检出浓度见表1。 表1 4种补骨脂特征成分的检出限和检出浓度化合物检出限(ng)检出浓度(μg/g)补骨脂素0.30.6异补骨脂素0.30.6新补骨脂异黄酮0.30.6补骨脂二氢黄酮0.30.63 试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为实验室用一级水。3.1 乙腈,色谱纯。3.2 补骨脂素,纯度≥99%。3.3 异补骨脂素,纯度≥99%。3.4 新补骨脂异黄酮,纯度≥98%。3.5 补骨脂二氢黄酮,纯度≥99%。3.6 补骨脂,中国食品药品检定研究院,供鉴别用。3.7 补骨脂特征性成分混合标准溶液(=0.1 μg/mL):分别称取补骨脂素(3.2)、异补骨脂素(3.3)、新补骨脂异黄酮(3.4)、补骨脂二氢黄酮(3.5)对照品各5 mg(精确到0.1 mg),置500 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成质量浓度各为10 μg/mL的标准溶液。精密量取各标准溶液0.1 mL置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.1 μg/mL的混合标准溶液。3.8 补骨脂标准储备溶液:取补骨脂对照药材0.2 g,置50 mL三角瓶中,加30 mL 70%乙醇回流提取1h,滤过,滤液置100 mL量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。4 仪器4.1 高效液相色谱仪:具二极管阵列检测器。4.2 分析天平:感量为0.1 mg。4.3 移液器。4.4 涡旋振荡器。4.5 超声波清洗仪(功率不低于200W)。4.6 高速离心机:转速不小于10000 r/min。
准确称取干燥后至恒重的异黄酮标准品0.0096g溶于95%的乙醇溶液中,定容100 mL,摇匀。再分别取0、2、4、6、8、10、12 mL用95%乙醇定容于100 mL容量瓶中,然后于260nm处分别测定其吸光度值,并绘制标准曲线。1.3提取后样品含量的测定准确量取一定量样品于容量瓶中,加入95%乙醇定容,摇匀。用紫外可见分光光度计测其吸光度。根据标准曲线和稀释倍数计算出样品中总异黄酮的质量我想请问一下!测吸光度的是用光度测定还是定量测定?校零用的是95%的乙醇么?如果我借用别人测的标准曲线,又该如何测,可以直接跳过标准品的测定直接测待测样品的么?
各位老师好,我的分离的四个化合物都是已经化合物,而且已经通过核磁共振解出了结构,求助一下这四个化合物的质谱图,谢谢
【作者】 王晓辉; 刘涛; 李清; 陈晓辉; 毕开顺;【Author】 WANG Xiaohui,LIU Tao,LI Qing,CHEN Xiaohui,BI Kaishun(School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)【机构】 沈阳药科大学药学院; 沈阳药科大学药学院 辽宁沈阳110016; 辽宁沈阳110016;【摘要】 对蒙古黄芪中5种异黄酮类成分的含量进行了反相高效液相色谱法测定。色谱柱为D iam ons il C18柱,流动相为乙腈-水系统,梯度洗脱,检测波长230nm,柱温35℃。毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷在20.12~201.2m g/L、芒丙花素-7-O-β-D-葡萄糖苷在4.62~46.2m g/L、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷在4.86~48.6m g/L、毛蕊异黄酮在9.24~92.4m g/L、芒丙花素在6.92~69.2m g/L时峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 2,0.999 7,0.999 7,0.999 5和0.999 5。5种成分的加样回收率均高于94%,相对标准偏差(RSD)小于3.2%(n=9)。该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于黄芪药材中5种主要异黄酮类成分的含量测定。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301613_380608_2379123_3.jpg
我准备用紫外来测定我的样品中总异黄酮的含量,但由于我是用乙醇对原料进行提取的,得到的样品液中不仅含有异黄酮,随之色素、醇溶性蛋白也被提取出来,那么我在测量的时候怎么把这些杂质的干扰扣除?急寻帮助!
http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120709366764733493.jpg药用化合物白桦酯酸、熊果酸与齐墩果酸的生物合成途径 药用化合物白桦酯酸、熊果酸以及齐墩果酸具有抗肿瘤、HIV病毒以及抵抗多种微生物病菌的功效,尤其是白桦酯酸,被认为是继紫杉醇之后又一最具潜力的抗癌药。 中国科学院武汉植物园天然药物生物合成学科组的博士研究生黄莉莉在章焰生研究员的指导下,从药用植物长春花中首次分离了熊果酸与齐墩果酸合成途径中的两个关键基因(这两基因分别被命名为CrAS与CrAO),将这两个基因转入微生物酵母细胞,构建的转基因酵母系具备合成熊果酸与齐墩果酸的能力。 更为重要的是,CrAO能够催化羽扇豆醇合成白桦酯酸,利用组合生物技术,研究人员将来源于模式植物拟南芥中的羽扇豆醇合酶(AtLUP1)基因与长春花中的CrAO基因进行组合并转入酵母细胞,形成的转基因酵母细胞系利用培养基即能合成抗癌化合物白桦酯酸。此举可以改善通过白桦树的树皮提取白桦酯酸而产生的生产成本较高且不利于可持续发展的问题。 该研究的成功开展为白桦酯酸、熊果酸以及齐墩果酸的合成提供了一条新的途径,将具有广泛的应用前景。相关的研究结果已经被国际植物学杂志Planta接受发表。
大豆异黄酮是一种植物性雌激素,又称为植物动情激素,是一种天然荷尔蒙,被认为有防癌丰胸之效,目前几乎没有明显副作用的报告。这个东西可防治一些和雌激素水平下降有关的疾病,延缓女性衰老、改善更年期症状、骨质疏松、血脂升高、乳腺癌、前列腺癌、心脏病、疏松症、心血管疾病等。对于高雌激素水平者,表现为抗激素活性,可防治乳腺、子宫内膜、结肠、前列腺、肺、皮肤等癌细胞的生长和白血病,及其它心血管疾病。其性状为:浅黄色粉末,气味微苦,略有涩味。来源于大豆类植物的胚芽,主要成分有:大豆甙(Daidzin),大豆甙元(Daidzein),染料木甙(Genistin),染料木素(Genistein),黄豆黄素(Glycitin),黄豆黄素甙元(Glycitein)。1 材料与方法1. 1 仪器与试剂1. 1. 1 仪器Waters2695高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器和Empower 色谱工作站; 脱气泵( 美国Millipore 公司) ; 超纯水系统( 美国Millipore公司) ; CW - 2000 超声波萃取仪(上海) 。1. 1. 2 试剂大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素对照品由美国Sigma 公司生产; 甲醇为色谱纯( 美国Fisher 公司) ; 乙醇、丙酮均为分析纯( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ,磷酸为优级纯( 天津市化学试剂三厂) ; 实验用水为超纯水。1. 2 方法1. 2. 1 色谱条件色谱柱:Ultimate XB-C18 4.60×250mm,5 um .PartNumber 00201-31043Serial Number 211302350.检测器: 二极管阵列。检测波长: 254 nm。流动相: 1% 磷酸水溶液和甲醇采用梯度洗脱,洗脱程序如下: 0 ~ 4 min,70% 磷酸水溶液+30%甲醇; 14 ~ 24 min, 45% 磷酸水溶液+55% 甲醇; 25~ 30 min,70% 磷酸水溶液+ 30% 甲醇。柱流速: 1. 0 ml /min。柱温: 30℃。进样量: 10μl。1. 2. 2 标准曲线制作1. 2. 2. 1 标准溶液配制 单标标准储备液配制: 准确称取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素对照品各0. 0500 g,分别置于小烧杯中,加70%乙醇溶解,如果不好溶解,可以在超声波中超声加速溶解,或者加入少量丙酮也可以加速溶解,待溶解完全后,移入50 ml 容量瓶中,加70% 乙醇定容至刻度,混匀,此溶液作为单标储备液,浓度各为1. 0 mg /ml。混合标准储备液配制: 准确吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素单标储备液各5. 0 ml 于50 ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,此混标溶液6 种成分浓度各为100 μg /ml。1. 2. 2. 2 标准工作曲线制备 准确吸取混合标准储备液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 ml 分别于100ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,6种成分的浓度各为2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 μg /ml,按1. 2.1 色谱条件进行测定; 以各组分浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线,得回归方程。1. 2. 3 样品测定1. 2. 3. 1 样品前处理 固体样品: 准确称取2. 0 g样品于100ml 容量瓶中,加入50 ml 70% 乙醇超声波提取30min,加70%乙醇定容至刻度,混匀, 0. 45μm 滤膜过滤后,供高效液相色谱测定用。液体样品: 准确吸取5. 0 ml 样品于100 ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,0.45 μm滤膜过滤后,供高效液相色谱测定用。1. 2. 3. 2 样品测定 吸取样品处理液及标准溶液各10 μl,按1. 2. 1 色谱条件进行测定,以标准保留时间定性,峰面积外标法与标准系列比较定量。
各位老师好,我的分离的四个化合物都是已经化合物,而且已经通过核磁共振解出了结构,求助一下这四个化合物的质谱图,谢谢。
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=87706]薄层色谱法分离鱼藤中异黄酮类化合物 [/url]
黄芪净药材—毛蕊异黄酮葡萄糖苷梯度设置请教一下怎么设置的 为什么我的不出峰 有没有做过的 请教请教[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106032032470096_8789_4180826_3.png[/img]
各位老师,帮忙想个办法能从黄芪蜜中分离出来毛蕊异黄酮葡萄糖苷
化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法
[align=center][img=,540,405]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003031550482493_1325_676_3.jpg!w540x405.jpg[/img][/align]1.补充营养青豆含有蛋白质和纤维素,也含有人体所需的维生素A、维生素C和维生素K,以及维生素B。青豆还能提供少量钙,磷,钾,铁,锌、硫胺素和核黄素。能为人体生长发育提供营养。2.防治心血管疾病青豆富含B族维生素、铜、锌、镁、钾、纤维、杂多糖类。青豆不含胆固醇,可预防心血管疾病,并减少癌症发生。每天吃两盘青豆,可降低血液中的胆固醇。青豆含有丰富的蛋白质、叶酸、膳食纤维和人体必需的多种氨基酸,尤以赖氨酸含量为高。青豆富含不饱和脂肪酸和大豆磷脂,有保持血管弹性、健脑和防止脂肪肝形成的作用。3.抗癌青豆中含有皂角苷、蛋白酶抑制剂、异黄酮、钼、硒等抗癌成分,对前列腺癌、皮肤癌、肠癌、食道癌等几乎所有的癌症都有抑制作用。4.抗衰老青豆含有儿茶素以及表儿茶素两种类黄酮抗氧化剂,可抵御自由基对人体的侵害,延缓身体衰老速度,还有消炎、广谱抗菌的作用。青豆的营养价值1.青豆富含B族维生素、铜、锌、镁、钾、纤维、杂多糖类。2.青豆含有丰富的蛋白质、叶酸、膳食纤维和人体必需的多种氨基酸,尤以赖氨酸含量为高。3.青豆富含不饱和脂肪酸和大豆磷脂,有保持血管弹性、健脑和防止脂肪肝形成的作用。4.青豆中富含皂角苷、蛋白酶抑制剂、异黄酮、钼、硒等抗癌成分,对前列腺癌、皮肤癌、肠癌、食道癌等几乎所有的癌症都有抑制作用。
“激素”豆浆与早熟?谣言:小孩喝豆浆会早熟 大家都知道大豆中含有大豆异黄酮,被称为“植物雌激素”,一提到“激素”这个字眼,大家往往都很敏感,尤其担心孩子喝了豆浆,会不会性早熟?解答:不会。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511281917_575405_1751239_3.png因为植物雌激素在人体内的作用微乎其微,大约只有雌激素的千分之一,至今极少有儿童因为喝豆浆引起性早熟。而且豆浆中大豆异黄酮的含量极低,大约为100ug/100ml,每天一杯200毫升,也就200微克。而目前婴幼儿、儿童大豆异黄酮的推荐量为每日25毫克。所以说适量进食豆浆,是绝对不会引起孩子性早熟的。很多性早熟的孩子,深究起来,大部分孩子是饮食不合理、营养过剩、能量过剩、乱吃补品有关。 所以要真的担心孩子性早熟,还不如来点实际的: 1.避免孩子在生活中接触超越其心理年龄的内容; 2.尽量不给孩子吃营养保健品(包括牛初乳); 3.不要让孩子吃过多油炸、膨化食品,尽量不喝饮料,避免能量摄入过多; 4.减少塑料制品使用; 5.避免让孩子接触到含性激素的药物、化妆品。讨论:这些谣言您是怎么理解的?请结合您的专业知识和检测技能,谈谈您的观点,发挥您的想象力,参与互动,赢取积分奖励
豆浆、豆腐、豆腐干等豆制品营养价值很高。不仅是优质蛋白、磷脂、钙、锌、B族维生素、维生素E、膳食纤维、大豆异黄酮、大豆低聚糖、大豆甾醇、大豆皂甙等营养物质的重要来源,而且低脂肪、无胆固醇。
据澳新食品标准局(FSANZ)官方网站消息,FSANZ已对澳大利亚与新西兰两国境内食物过敏原的法规管理进行了审查。食物过敏问题影响着大约4%-6%的儿童以及1%-2%的成人,有时它甚至会表现的非常严重。由于即使少量的过敏原也可能会引发过敏反应,因此严格要求在食品包装上标注过敏原是进行过敏原风险管理最有力的方法。早在2002年澳大利亚便强制要求含过敏原的食品需将其中的过敏原成分标出,并且欧盟、美国以及加拿大也纷纷做出了类似的决定。此次公布的食物过敏原审查文件包括六大发现,它包括:l 标识信息l 新过敏原l 未包装的食品据悉,下一步澳大利亚还会考虑是否将羽扇豆过敏原纳入食品标准法典。该审查内容文件请见:http://www.foodstandards.gov.au/scienceandeducation/publications/allergenreview.cfm。
由德国慕尼黑国际博览集团、中国环境科学学会、全联环境服务业商会、中贸慕尼黑展览(上海)有限公司等单位联袂举办的IE expo 2016第十七届中国环博会(原IFAT CHINA+EPTEE+CWS)将于2016年5月5-7日在上海新国际博览中心N1、N2、N3、N4、N5、E7馆举行。 秉承全球环保第一展德国IFAT母展48年的优秀品质,作为亚洲最具影响力、最高品质的环境技术交流盛会,IE expo2016中国环博会将荟集全球顶级污水处理、给水排水、固体废弃物处理、资源回收利用、大气污染治理、室内空气污染治理、场地修复、环境监测、环境服务业等环境污染治理领域的前沿技术与最新解决方案。禹山作为专业的水质传感器厂商,本次将携最新推出的多合一水质传感器、荧光法溶解氧传感器、四电极电导率传感器、光纤式浊度传感器及叶绿素传感器等参展。本次展出的多合一水质传感器已在市场上出货有一段时间了,客户反馈都很好,目前此产品的市场需求非常大,有大量的客户意向下单采购。多合一水质传感器专为环境监测开发,集成了禹山的荧光法溶解氧探头、四电极电导率探头、光纤式浊度探头、数字pH探头。RS485输出,所有校准参数存储在传感器内,每支探头带有防水接头,可方便插拔替换。配备自动清洁装置,可以有效的清除传感器表面沾污,防止微生物的生长,更准确,更低维护。多合一一体化设计,可以同时接四个探头,测量五个参数。目前市面上HACH或YSI此类产品都在8-10万以上,禹山在同等技术和性能情况下定价仅对方的1/2-1/3,国内目前暂无同类产品,非常具有竞争力。诚邀新老客户前来参观,相信您一定会不虚此行的。展会时间:2016年5月5-7日展会地址:上海新国际博览中心N1-N5馆(上海市浦东新区龙阳路2345号)禹山展位: N2馆 2136展台
近日,澳新食品标准局(FSANZ)开展了一项针对澳大利亚和新西兰两国食物过敏原的法规管理的审查,并对外公布了审查结果。据悉,在澳大利亚与新西兰,食物过敏问题影响了大约4%至6%的儿童以及1%至2%的成人,食物过敏现象较为严重。少量的过敏原即可引发过敏反应,因此,严格要求在食品包装上标注过敏原成分是食物过敏原风险管理最有效的方法。澳大利亚和新西兰在2002年引入在食品及其产品上标注强制性声明的法规。欧盟、美国、加拿大也于近期做出了类似的规定。此次食物过敏原审查文件中包括了六大发现,其中包括:•标识信息•新的过敏原•未包装食品同时,FSANZ还对今后的工作提出了几点建议:•通过建立科学委员会对FSANZ关于食物过敏原问题提出可行性建议;•拟议对食品标准法典做出修改,包括是否添加羽扇豆(lupin)为过敏原;•建立一项标签监测项目,跟踪并改进过敏原标签,同时重点关注“来源”和警示标签;•在澳新食品标准局协助下,法规标准实施分委员会(ISC)负责就法规义务与食品行业开展交流。ISC为澳新食品管理常务委员会下设的分委员会,负责监督和协调食品法规标准实施的一致性,并制定实施指南。
豆类食品是一种高蛋白、低脂肪食品,它含有丰富的植物蛋白,其蛋白质含量高达30%-50%,其生理价值几乎与肉相当。且富含人体需要的8种必需氨基酸,大豆食品几乎不含胆固醇,却含有丰富的磷脂和豆固醇,有助于降低血清胆固醇。大豆软磷脂有促进肝中脂肪代谢,防止脂肪肝形成的作用。大豆中含有丰富的矿物质和B族维生素,大豆异黄酮具有一定的抗氧化作用。 豆类食物中还含有植物雌激素,可以减轻妇女更年期症状,使骨质疏松得到预防。 我们常吃的豆类有:红豆 白豆 绿豆 黄豆 黑豆
食物过敏并非是一个罕见的现象;在儿童和成人中都可能普遍存在。食物过敏也并不是单一类型的疾病,它可以分为「IgE介导的食物过敏」、「混合型的食物过敏」和「非IgE介导的食物过敏」,而不同的食物过敏类型也对应着不同的病症。SUMMER.TIME.过敏的症状是非常多样的,而能引起过敏的食物更是数不胜数。从理论上来看,所有食物都能造成过敏——不管这种食物中的蛋白质是好消化的还是难消化的。这就涉及到造成过敏的两大类食物了。一类是含有难消化的蛋白质的食物。另一类食物不含难消化的蛋白质,但含有和花粉类似的蛋白质。先来看第一类。牛奶中的酪蛋白、鸡蛋中的卵清蛋白、小麦中的麸质蛋白、坚果中的储存蛋白都是难以消化的蛋白质。它们能在肠道中长时间的逗留,这就让它们有了产生过敏的可能。至于第二类食物,它们往往是水果和蔬菜。它们之中并不存在难以消化的蛋白质,但它们所含的蛋白质和花粉中的蛋白质是类似的。这些食物包括苹果、柚子、胡萝卜和芹菜。所以,如果你对花粉过敏,你也有可能会对这些食物产生过敏。SUMMER.TIME.几乎所有已知的食物过敏原都是蛋白质,它们可大量生存,通常在食品加工中可以存活。虽然几乎任何食品蛋白质都可以是过敏原,但欧盟的过敏原标签法律声明,最有可能引起过敏反应的是:芹菜麸质谷物(如大麦、燕麦、黑麦、小麦)蛋类鱼类羽扇豆奶和奶制品 软体动物(如蛤、贻贝、牡蛎、扇贝)芥末坚果(如杏仁、巴西坚果、腰果、榛子、澳大利亚坚果、花生、山核桃、开心果、核桃)甲壳类海产品(如蟹、龙虾、虾)芝麻大豆二氧化硫和亚硫酸盐(高于 10mg/kg 或 10mg/L 的水平)食品过敏原检测服务帮您满足食品标签要求并维护公共利益。作为食品过敏原控制程序的一部分,我们可检测出是否有食品过敏原。
吃毛豆的好处较多,主要有以下几点。1.毛豆里面含有的膳食纤维较多,嫩毛豆的膳食纤维含量高达4%,是当之无愧的第一名,适当食用毛豆能够促进胃肠道蠕动,帮助消化,避免便秘症状产生,同时还可以调节肠道菌群平衡,避免消化功能紊乱。2.毛豆里面的维生素含量较多,同时也含有丰富的微量元素,它里面丰富的钙质能够预防骨质疏松等疾病,同时还可以增加骨密度,提高身体抵抗力。3.毛豆里面的植物性蛋白质较多,蛋白质含量达到40%,同时也含有大豆异黄酮等天然植物雌激素,能促进身体新陈代谢,保护心脑血管,也可以达到健脾养胃的功效。吃毛豆虽然有一定的好处,但也有危害,若长期过量吃毛豆可能会导致腹胀、腹痛、消化不良等症状产生,同时吃毛豆时如果毛豆没有煮熟,也可能会出现胃肠道不适症状,严重时还有可能会导致中毒。
2011年3月16日,加拿大卫生部将丙硫菌唑在甜菜根中的最大残留限量修订为0.25mg/kg;将氟啶胺在干制小豆、豌豆、蚕豆、豇豆、四季豆、鹰嘴豆、瓜尔豆、花腰豆、羽扇豆等产品中的最大残留限量标准修改为0.02mg/kg;将噻苯咪唑在白蘑菇中的最大残留限量标准修改为55 mg/kg;将异丙甲草胺在甜菜根和甜菜叶中的最大残留限量标准分别修改为0.3mg/kg和0.08 mg/kg. 内容详见:http://www.hc-sc.gc.ca/cps-spc/pubs/pest/_decisions/emrl2011-10/index-eng.php
任务号文献名称发布时间任务领取人完成情况任务二二一HPLC测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯 dahua1981 HPLC测定野菊花中两种黄酮类药效组分的含量HPLC测定野老鹳草中没食子酸和鞣花酸的总量HPLC测定薏苡中薏苡素的含量HPLC测定茵栀黄注射液中栀子苷的含量HPLC测定元宝枫中游离和水解没食子酸的含量HPLC测定元胡药材中脱氢延胡索碱的含量HPLC测定脂清颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量HPLC测定止痛透骨膏中欧前胡素的含量 HPLC测定注射用13种维生素中维生素B_6、烟酰胺、D-泛醇的含量任务二二二HPLC测定注射用尼莫地平的含量及有关物质 dahua1981 HPLC测定注射用氢溴酸高乌甲素含量HPLC对广西不同时期喜树果中喜树碱动态积累的研究HPLC法测定“网脱Ⅰ号”口服液中阿魏酸的含量HPLC法测定14个地区山楂中羽扇豆醇的含量HPLC法测定2,3-二氢苯并呋喃-5-甲醛的含量及其有关物质HPLC法测定5-氟尿嘧啶磁性碳微球的药物含量及包封率HPLC法测定β-榄香烯亚微乳注射液的含量及包封率HPLC法测定β-榄香烯脂质体药物含量及包封率HPLC法测定阿尼西坦分散片的含量任务二二三HPLC法测定阿托伐他汀钙片的含量 dahua1981 HPLC法测定奥扎格雷钠注射液的含量HPLC法测定白癜风片中补骨脂素和异补骨脂素含量HPLC法测定白花蛇舌草中反式6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯的含量HPLC法测定板蓝根药材中靛蓝和靛玉红的含量HPLC法测定板栗种仁中原儿茶酸的含量HPLC法测定蒡芩慢咽滴丸中酯蟾毒配基及华蟾酥毒基的含量HPLC法测定比力洼-3中盐酸麻黄碱的含量HPLC法测定博落回药材不同器官白屈菜红碱含量HPLC法测定补肾斑龙片中松果菊苷的含量任务二二四HPLC法测定不同产地白花蛇舌草中2种蒽醌化合物的含量 dyn1985 HPLC法测定不同产地川芎中阿魏酸的含量HPLC法测定不同产地蜂胶中白杨素的含量HPLC法测定不同产地鬼臼类药材中鬼臼毒素的含量HPLC法测定不同产地及品种木豆叶中牡荆苷的含量HPLC法测定不同产地降香中橙花叔醇的含量HPLC法测定不同产地天麻中天麻素的含量HPLC法测定不同来源红花中对香豆酸的含量HPLC法测定不同来源款冬
日本通报江苏天然食品有限公司干燥葱中联苯菊酯0.02ppm 。 联苯菊酯品名:联苯菊酯(bifenthrin):天王星、虫螨灵、脱螨达。 剂型 2.5%、10%乳油。 毒性中等毒。作用特点天王星是一种高效合成除虫菊酯杀虫、杀螨剂。具有触杀、胃毒作用,无内吸、熏蒸作用。杀虫谱广,对螨也有较好防效。作用迅速。在土壤中不移动,对环境较为安全,残效期长。适用作物香蕉、大麦、棉花、莴苣、茶、苹果、小麦、番茄、豌豆、豆荚、白羽扇豆、苜蓿、青豆、梨、甘蔗、干辣椒、甜瓜、马铃薯、青葱、白菜、红辣椒、芒果、茄子、花椰菜、葡萄、花生、西瓜、烟草、玉米、可可、芦笋、大葱。 防治对象各种鳞翅目幼虫、粉虱、蚜虫、植食性叶螨。 使用方法(1)粉虱 在粉虱发生初期,虫口密度低时(2头左右/株)施药。用2.5%天王星乳油2 000-2 500倍液,喷雾。虫情严重时可选用2.5%天王星乳油4 000倍液与25%扑虱灵可湿性粉剂1 500倍液混用。(2)蚜虫 于发生初期用2.5%天王星乳油2 500-3 000倍液,喷雾,残效期15天左右。相同剂量也可防治多种食叶害虫。(3)红蜘蛛 于成、若螨发生期施药。用2.5%天王星乳油2000倍液,喷雾,可10天内有效控制其为害。