全氟辛酸离子对试剂用于

最近用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]法做全氟辛酸的检测，在测标线时，发现随着浓度越高，峰面积不变，甚至变低，特来请教大家。标准溶液是用甲醇稀释的，浓度为0.01ppb，0.1ppb，1ppb，10ppb。有人测过全氟辛酸吗，可以帮我指出我的问题吗？谢谢大家了，十万火急。[img=,269,181]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905100914169734_142_3906267_3.png!w690x466.jpg[/img][img=,269,256]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905100914302811_2637_3906267_3.png!w653x622.jpg[/img][img=,269,343]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905100914392359_1275_3906267_3.png!w595x760.jpg[/img]

[align=center]高效液相色谱质谱法测定涂料中的全氟辛酸和[color=#333333]全氟辛基磺酸化合物的含量[/color][/align]1.摘要： PFOA全氟辛酸（Perfluorooctanoic Acid 缩写为PFOA)，国内最常见的含氟聚合物是应用之一是聚四氟乙烯涂层，亦称作“不粘炊具”。为提供光滑非粘的特性，不粘涂层已广泛地应用于以健康的目的不含脂肪和低脂肪的煎炒烹调中。此不粘涂层是有机树脂通过在水中或者有机溶剂中均匀分布形成厚度不超过60 μm 的表面层。此涂层同样被应用于金属基材，如铝、铝化钢和镀锌钢，用作仓库、发电站、纪念碑建筑和其他商业建筑的外部表面。当PFOA 分解后会在环境或人体中释放出来。[color=#333333]2003 年起，美国环境保护局(USEPA)定期更新和提供科学知识引导人们更好地理解PFOA。USEPA 提出PFOA 及其主盐的暴露会导致人体健康的发展和其他方面产生不利影响。PFOA 会残留于人体短至四年长达半生的时间。因此根据“美国有毒物质控制法(US TSCA)”， 此类成分被禁止并将其列入化学品目录清单中。事实上，毒性水平是每天每千克人体重量不能超过3 毫克。[/color][color=#333333]PFOS是全氟辛基磺酸化合物( Perfluorooctane Sulfonate)的英文缩写，即C8F17SO2Y，Y=OH、金属盐、卤化物、氨基化合物和包括聚合物在内的其他衍生物；PFOA是全氟辛酸类化合物( Perfluorooctanoic Acid) 的英文缩写，即C7F15COOH 及其衍生物。欧盟关于PFOS的禁令对我国纺织、服装、皮革等传统优势产业造成较大的影响。而随后的PFOA及直链全氟辛基(C8)衍生物的禁令，会给我国氟化工及含氟材料加工、纺织、皮革、油墨、消防、以及汽车、半导体等产业等带来巨大影响。PFOA 和PFOS具有于其他持久性污染物不同的特性。首先是它们的Kow不能被测定，其次它们是富集在血液里，另外它们不是芳香族的化合物，没有苯环。这类物质有极性的官能团，可以较好的溶于水。但同时它们还具有一个长长的全氟烷基的碳链，碳链上的氢原子都被氟原子所取代。由于氟原子的吸电子作用，其碳链的氟原子对（水）环境是呈负电(partial charge)。所以在水中PFOA和PFOS的呈现的是一个大负电的结构，这不仅来源于其极性官能团水中的离解，还来自于其(partial)负电的全氟烷基碳链。[color=#333333]PFOS是目前已知最难降解的有机污染物之一，具有很高的生物蓄积性和多种毒性，不仅会造成人体呼吸系统问题，还可能导致新生婴儿死亡，其导致的全球性污染正日渐受到人们关注。2002年12月，经合组织（OECD）召开的第34次化学品委员会联合会议上将PFOS定义为持久存在于环境、具有生物储蓄性并对人类有害的物质。基于PFOA和PFOS对环境和人类的有害性，有必要对产品中的PFOA和PFOS进行定量分析，已确定是否含有或者残留量是否满足限值要求。本文通过用水超声提取，离心分离，经固相萃取柱纯化，洗脱液定容后用液相色谱-质谱分析仪，外标法测定涂料样品中的PFOA和PFOS的含量。[/color][/color]关键词：全氟辛酸，[color=#333333]全氟辛基磺酸化合物，高效液相色谱-串联质谱[/color]2.实验部分：2.1 试剂 、设备及耗材超纯水、乙酸铵（分析纯）、色谱纯乙腈、固相萃取柱、离心机、超声波、液相色谱-质谱仪（岛津[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]8040）[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907020940116449_8470_1657564_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907020940131412_3907_1657564_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907020940136072_8926_1657564_3.jpg!w690x920.jpg[/img]2.2. 测试过程称取1g涂料试样，加100mL水超声提取20分钟，离心后取1m L上清液到HLB固相萃取柱净化，最后用乙腈定容到10mL，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]分析。2.3 仪器条件按照标准上的参考仪器条件，结合实验室实际情况，确定仪器条件如下：[img=,542,388]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011732360949_5078_1657564_3.png!w542x388.jpg[/img] [table][tr][td]色谱柱[/td][td]C18柱，100mm×2mm×2.2μm[/td][/tr][tr][td]进样量[/td][td]1μL[/td][/tr][tr][td]流速[/td][td]0.2mL/min[/td][/tr][tr][td]流动相[/td][td]A:0.01mol/L乙酸铵溶液B:乙腈A:B=45:55[/td][/tr][tr][td]柱温箱[/td][td]30°C[/td][/tr][tr][td]采集时间[/td][td]5min[/td][/tr][tr][td]监测方式[/td][td]MRM[/td][/tr][tr][td]离子化方式[/td][td]负离子扫描[/td][/tr][tr][td]监测离子及条件[/td][td] [table=510][tr][td] [align=center]前体离子[/align] [align=center]M/Z[/align] [/td][td] [align=center]产物离子M/Z[/align] [/td][td] [align=center]驻留时间ms[/align] [/td][td] [align=center]Q1 Pre[/align] [align=center]偏差(V)[/align] [/td][td] [align=center]CE[/align] [align=center](V)[/align] [/td][td] [align=center]Q3Pre[/align] [align=center]偏差(V)[/align] [/td][/tr][tr][td=1,3] [align=center]PFOA[/align] [/td][td] [align=center]413.00[/align] [/td][td] [align=center]369.00[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]413.00[/align] [/td][td] [align=center]168.95[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]17[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]413.00[/align] [/td][td] [align=center]219.00[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]15[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][/tr][tr][td=1,3] [align=center]PFOS[/align] [/td][td] [align=center]499.00[/align] [/td][td] [align=center]80.05[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]499.00[/align] [/td][td] [align=center]99.05[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]42[/align] [/td][td] [align=center]18[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]499.00[/align] [/td][td] [align=center]230.00[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]13[/align] [/td][td] [align=center]39[/align] [/td][td] [align=center]22[/align] [/td][/tr][/table] [/td][/tr][/table]此仪器条件下，标准溶液(10μg/L)总离子流色谱图如下：由图上可知，此仪器条件下各组分分离良好，基线稳定，适合分析。2.4 线性范围按标准要求，使用购买的PFOA和PFOS标准物质配制成100mg/l混合储备液，再通过逐级稀释用乙腈配制成2,5,10, 20, 50及100μg/l的标准曲线工作溶液，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]上进行分析，得到数据如下： [table=576][tr][td] [align=center] [/align] [/td][td=6,1] [align=center]各浓度峰面积[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=right] 浓度μg/L[/align] 目标物[/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]20[/align] [/td][td] [align=center]50[/align] [/td][td] [align=center]100[/align] [/td][td] [align=center]相关系数(R)[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOA[/td][td] [align=center]33570[/align] [/td][td] [align=center]85660[/align] [/td][td] [align=center]155159[/align] [/td][td] [align=center]288979[/align] [/td][td] [align=center]611110[/align] [/td][td]1161960[/td][td] [align=center]0.9991 [/align] [/td][/tr][tr][td]PFOS[/td][td] [align=center]3991[/align] [/td][td] [align=center]9726[/align] [/td][td] [align=center]20884[/align] [/td][td] [align=center]38606[/align] [/td][td] [align=center]88718[/align] [/td][td] [align=center]172447[/align] [/td][td] [align=center]0.9997 [/align] [/td][/tr][/table]从上表可以看出，曲线线性良好，相关系数R＞0.995，满足标准要求。2.5 精密度取10μg/L的混合标准溶液，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]上进行7次测试，计算精密度。 [table=576][tr][td] [align=right]浓度mg/L[/align] 目标物[/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]RSD[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOA[/td][td] [align=center]11.20 [/align] [/td][td] [align=center]11.47 [/align] [/td][td] [align=center]10.59 [/align] [/td][td] [align=center]10.68 [/align] [/td][td] [align=center]11.47 [/align] [/td][td] [align=center]11.24 [/align] [/td][td] [align=center]11.04 [/align] [/td][td] [align=center]3.2%[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOS[/td][td] [align=center]10.54 [/align] [/td][td] [align=center]10.85 [/align] [/td][td] [align=center]10.30 [/align] [/td][td] [align=center]10.85 [/align] [/td][td] [align=center]10.81 [/align] [/td][td] [align=center]11.41 [/align] [/td][td] [align=center]11.03 [/align] [/td][td] [align=center]3.2%[/align] [/td][/tr][/table]7次测试相对标准偏差RSD均小于5%，精密度良好。2.6 样品加标回收率选取涂料“环氧底漆”样品，添加0.5mL的10mg/L的PFOA/PFOS混合标准溶液，样品中理论加标浓度为5μg/L，按样品测试过程进行操作，重复7次，考察样品加标回收率。 [table=621][tr][td]油漆加标[/td][td=8,1] [align=center]测得浓度μg/L[/align] [/td][/tr][tr][td] [/td][td] [align=center]样品[/align] [/td][td] [align=center]加标-1[/align] [/td][td] [align=center]加标-2[/align] [/td][td] [align=center]加标-3[/align] [/td][td] [align=center]加标-4[/align] [/td][td] [align=center]加标-5[/align] [/td][td] [align=center]加标-6[/align] [/td][td] [align=center]加标-7[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOA[/td][td] [align=center]ND[/align] [/td][td] [align=center]4.34 [/align] [/td][td] [align=center]4.37 [/align] [/td][td] [align=center]4.42 [/align] [/td][td] [align=center]4.37 [/align] [/td][td] [align=center]4.29 [/align] [/td][td] [align=center]4.35 [/align] [/td][td] [align=center]4.66 [/align] [/td][/tr][tr][td]PFOS[/td][td] [align=center]ND[/align] [/td][td] [align=center]4.57 [/align] [/td][td] [align=center]4.37 [/align] [/td][td] [align=center]4.70 [/align] [/td][td] [align=center]4.62 [/align] [/td][td] [align=center]4.47 [/align] [/td][td] [align=center]4.26 [/align] [/td][td] [align=center]4.47 [/align] [/td][/tr][/table] [table=555][tr][td]油漆加标[/td][td=7,1] [align=center]加标回收率[/align] [/td][/tr][tr][td] [/td][td] [align=center]加标-1[/align] [/td][td] [align=center]加标-2[/align] [/td][td] [align=center]加标-3[/align] [/td][td] [align=center]加标-4[/align] [/td][td] [align=center]加标-5[/align] [/td][td] [align=center]加标-6[/align] [/td][td] [align=center]加标-7[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOA[/td][td] [align=center]86.8%[/align] [/td][td] [align=center]87.4%[/align] [/td][td] [align=center]88.4%[/align] [/td][td] [align=center]87.4%[/align] [/td][td] [align=center]85.8%[/align] [/td][td] [align=center]87.0%[/align] [/td][td] [align=center]93.2%[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOS[/td][td] [align=center]91.4%[/align] [/td][td] [align=center]87.4%[/align] [/td][td] [align=center]94.0%[/align] [/td][td] [align=center]92.4%[/align] [/td][td] [align=center]89.4%[/align] [/td][td] [align=center]85.2%[/align] [/td][td] [align=center]89.4%[/align] [/td][/tr][/table]进行7次测试，回收率都在85%~94%之间，满足测试要求。2.7 方法检出限(MDL)和定量检出限(LOQ)选取环氧底漆样品添加0.5mL的10mg/L的PFOA/PFOS混合标准溶液，样品中理论加标浓度为5μg/L，按样品测试过程进行操作，重复7次，通过标准偏差来计算检出限。 [table=658][tr][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]SD[/align] [/td][td] [align=center]MDL (μg/L)[/align] [/td][td] [align=center]LOQ (μg/L)[/align] [/td][td] [align=center]LOQ (mg/kg)[/align] [/td][/tr][tr][td]PFOA[/td][td] [align=center]4.34 [/align] [/td][td] [align=center]4.37 [/align] [/td][td] [align=center]4.42 [/align] [/td][td] [align=center]4.37 [/align] [/td][td] [align=center]4.29 [/align] [/td][td] [align=center]4.35 [/align] [/td][td] [align=center]4.66 [/align] [/td][td] [align=center]0.12 [/align] [/td][td] [align=center]0.36 [/align] [/td][td] [align=center]1.21 [/align] [/td][td] [align=center]1.2 [/align] [/td][/tr][tr][td]PFOS[/td][td] [align=center]4.57 [/align] [/td][td] [align=center]4.37 [/align] [/td][td] [align=center]4.70 [/align] [/td][td] [align=center]4.62 [/align] [/td][td] [align=center]4.47 [/align] [/td][td] [align=center]4.26 [/align] [/td][td] [align=center]4.47 [/align] [/td][td] [align=center]0.15 [/align] [/td][td] [align=center]0.45 [/align] [/td][td] [align=center]1.50 [/align] [/td][td] [align=center]1.5 [/align] [/td][/tr][/table]以7次加标测试值相对偏差的3倍作为方法检出限，10倍作为定量检出限，按称样量1g，最终定容体积100mL，再净化稀释10倍，计算得到的定量检出限为1.2和1.5mg/kg，能达到检测方法0.0002%的检出下限的要求。实际测试中可将报告检出限统一定为2mg/kg。2.8 结论通过试验验证，方法线性相关系数好，达0.999以上、精密度高＜3.5%、回收率在85%~94%，检出限低达2mg/kg，结果均满足测试要求，方法简单实用，实验室可以据此开展涂料中PFOA和PFOS含量的测定工作。3.参考文献：【1】 GB/T28606-2012 涂料中全氟辛酸及其盐的测定高效液相色谱－串联质谱法【2】 GB/T24169-2009 氟化工产品和消费品中全氟辛烷磺酰基化合物（PFOS）的测定高效液相色谱-串联质谱法【3】 GB/T27417-2017 合格评定化学分析方法确认和验证指南【4】 CNAS-CL01-A002:2018检测和校准实验室能力认可准则在化学检测领域的应用说明

我刚接触这方面知识，我想利用液相色谱串联质谱仪测试PFOA的浓度，在制定标线时，发现浓度越高，峰面积不变，甚至变低，这是什么原因呢？有人测过全氟辛酸吗？或者大神指出我的问题。我的标样是用甲醇稀释至0.01ppb，0.1ppb，1ppb，10ppb[img=,265,178]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905092157479702_2966_3906267_3.png!w690x466.jpg[/img]设置参数[img=,265,252]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905092158218310_805_3906267_3.png!w653x622.jpg[/img][img=,265,338]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905092200121140_2910_3906267_3.png!w595x760.jpg[/img]

离子对试剂与HPLC[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=95568]离子对试剂与HPLC[/url][size=5][b][font=黑体]离子对试剂介绍[/font][/b][/size][b][size=3][font=楷体_GB2312]离子对试剂的优点[/font][/size][size=3][/size][/b][size=3][font=楷体_GB2312]在过去，带电荷分析物的色谱分离通过离子抑制（小心调节流动相[/font][font=Times New Roman]PH[/font][font=楷体_GB2312]值以使分析物非离子化）来达到。然而，要确定离子抑制状态下的最佳流动相[/font][font=Times New Roman]PH[/font][font=楷体_GB2312]值，却往往需要额外的摸索过程。含有一个以上的可离子化成分的样品，通常是不稳定的。离子抑制的局限性导致了一种新的、更普遍适用的方法进行可离子化物质色谱分离的方法：离子对色谱。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]离子对色谱由[/font][font=Times New Roman]Gordon Schill[/font][font=楷体_GB2312]博士于[/font][font=Times New Roman]1973[/font][font=楷体_GB2312]年建立，其方法是将离子性化合物添加到流动相中以促使离子与带电荷分析物形成配对离子。这些试剂由带有可离子化终端的烷基链组成。当在反相条件下用于常见的憎水性[/font][font=Times New Roman]HPLC[/font][font=楷体_GB2312]固定相时，离子对试剂可选择性的增加带电荷分析物的保留时间。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][font=楷体_GB2312][size=3]尽管离子交换色谱已经成为常见的分离模式，它并非在所有情况下都起作用。较离子交换色谱，离子对色谱的优点在于：[/size][/font][font=Wingdings][size=3]ü[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]缓冲液制备简单；[/size][/font][font=Wingdings][size=3]ü[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]碳链长度选择众多，可用于增加保留时间、改善分离性质；[/size][/font][font=Wingdings][size=3]ü[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]显著缩短分离时间；[/size][/font][font=Wingdings][size=3]ü[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]同时分离离子化和非离子化分析物；[/size][/font][font=Wingdings][size=3]ü[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]分析结果重现性极好；[/size][/font][font=Wingdings][size=3]ü[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]改善峰形。[/size][/font][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][b][size=3][font=Times New Roman]Regis[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]提供的离子对试剂[/font][/size][size=3][/size][/b][size=3][font=Times New Roman]Regis[/font][font=楷体_GB2312]生产超纯的阴离子磺酸盐（[/font][font=Times New Roman]S-[/font][font=楷体_GB2312]系列）和阳离子季胺（[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]系列）离子对浓缩液，碳链长度有：戊、己、庚、辛和月桂[/font][font=Times New Roman]([/font][font=楷体_GB2312]十二[/font][font=Times New Roman])[/font][font=楷体_GB2312]。在我们的产品命名中，碳链长度以红色数字标出，如：[/font][font=Times New Roman]5[/font][font=楷体_GB2312]，[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=楷体_GB2312]，[/font][font=Times New Roman]7[/font][font=楷体_GB2312]，[/font][font=Times New Roman]8[/font][font=楷体_GB2312]和[/font][font=Times New Roman]12[/font][font=楷体_GB2312]。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][b][size=3][font=楷体_GB2312]纯度是关键因素[/font][/size][size=3][/size][/b][size=3][font=楷体_GB2312]在我们生产离子对试剂的过程中，纯度是非常重要的质量标准。[/font][font=Times New Roman]Regis S-[/font][font=楷体_GB2312]和[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]系列离子对试剂根据工业最高质量标准进行合成，从而得到超乎寻常的纯度。这一点可参见表[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=楷体_GB2312]：在波长低至[/font][font=Times New Roman]200nm[/font][font=楷体_GB2312]时对于[/font][font=Times New Roman]Regis S-[/font][font=楷体_GB2312]和[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]系列离子对试剂均可达到紫外透过性。在大部分情况下，这些紫外吸收值要低于用于[/font][font=Times New Roman]HPLC[/font][font=楷体_GB2312]梯度洗脱的乙腈和甲醇的紫外吸收值。尽管[/font][font=Times New Roman]S-[/font][font=楷体_GB2312]和[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]系列离子对试剂能在低于[/font][font=Times New Roman]210nm[/font][/size][font=楷体_GB2312][size=3]的波长下使用，决定使用什么波长的关键因素还是在于检测器镜片和有机该性剂（如甲醇等）的综合情况。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012171604_267672_1638724_3.jpg[/img][/size][/font][size=3][font=Times New Roman]Regis[/font][font=楷体_GB2312]还提供批量磺酸盐和几种补充批量离子对试剂以及[/font][font=Times New Roman]Rivier[/font][font=楷体_GB2312]缓冲剂以补充磺酸盐[/font][font=Times New Roman]S-[/font][font=楷体_GB2312]系列和季胺[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]系列的分离能力。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][b][size=3][font=楷体_GB2312]如何为分析方法的建立选择合适的[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]Regis[/font][/size][size=3][font=楷体_GB2312]离子对试剂[/font][/size][size=3][/size][/b][size=3][font=楷体_GB2312]要选择合适的试剂，必须考虑烷烃长度。不同的烷烃链长度使得能够选择性分离分析物。链越长，离子对的憎水性越强，从而，保留时间也就越长。当链长度由戊基[/font][font=Times New Roman](Q5)[/font][font=楷体_GB2312]增加到月桂基[/font][font=Times New Roman](Q12)[/font][font=楷体_GB2312]时，保留因子几乎增长了[/font][font=Times New Roman]20[/font][font=楷体_GB2312]倍，如表[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=楷体_GB2312]和表[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=楷体_GB2312]所示。表[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=楷体_GB2312]和表[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=楷体_GB2312]中的数据显示出[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]试剂链长度决定了苯甲酸的保留时间，但不会影响到苯甲醇的保留时间。对于[/font][font=Times New Roman]S-[/font][font=楷体_GB2312]系列试剂也可以观察到类似的选择性。[/font][/size][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012171605_267673_1638724_3.jpg[/img][size=3][font=楷体_GB2312]以下是使用[/font][font=Times New Roman]Regis[/font][font=楷体_GB2312]离子对试剂来成功建立分析方法的指导：[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]1.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]选择一根色谱柱，常为[/font][font=Times New Roman]C18[/font][font=楷体_GB2312]柱；[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]2.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]准备流动相时仅使用[/font][font=Times New Roman]HPLC[/font][font=楷体_GB2312]级别的水和色谱级试剂；[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]3.[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]选择能给出最佳分离度的流动相成分和浓度；[/size][/font][font=Times New Roman][size=3]4.[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]如果样品中有非离子化物质，在尝试离子化分离之前首先优化分离情况；[/size][/font][font=Times New Roman][size=3]5.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]选择合适的离子对系列试剂以提供相应的离子配对：对于酸性分析物使用[/font][font=Times New Roman]Q-[/font][font=楷体_GB2312]系列离子对试剂；对于碱性分析物使用[/font][font=Times New Roman]S-[/font][font=楷体_GB2312]系列离子对试剂；[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]6.[/size] [/font][font=楷体_GB2312][size=3]通过比较选择所得分离度最好的离子对试剂；[/size][/font][font=Times New Roman][size=3]7.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]一旦离子对试剂已经确定，调节流动相的[/font][font=Times New Roman]pH[/font][font=楷体_GB2312]值将分离度最大化；因为微小的[/font][font=Times New Roman]pH[/font][font=楷体_GB2312]值改变对保留性质和选择性都有较大的影响，所以仔细小心的小幅度调节[/font][font=Times New Roman]pH[/font][font=楷体_GB2312]值（参见表[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=楷体_GB2312]）；[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]8.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]理想状况下，流动相中的离子对试剂浓度应为[/font][font=Times New Roman]0.005M[/font][font=楷体_GB2312]，但是稍微增加离子对试剂可能会稍微增加保留性质并因此优化分离情况。[/font][/size][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012171605_267674_1638724_3.jpg[/img][b][font=宋体]2.2 [/font][font=宋体]高效液相色谱分离[/font][/b][font=宋体] HPLC-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/yp][color=#3333ff]ICP-MS[/color][/url][/font][font=宋体]联用技术在元素化学形态分析中的应用，已有文献总结；该技术的优点是应用范围广。以下是几种常用于形态分析的HPLC技术。[/font][b][font=宋体]2.2.1[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]体积排阻色谱(SEC)[/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体] SEC[/font][font=宋体]是按溶质的分子大小来分离的。其优点是：未知分子质量的样品在末端时间或在此之前淋出，因而可以预测色谱运行的终点；未知物的分子质量可以用校正的色谱系统来表征。SEC通常不会引起元素形态的丢失，适用于不稳定或与金属络合较弱的生物大分子。缺点是容量有限，不能分辨多组分样品，仅能分离分子大小不同且不能吸附在柱上的分析物。此外，有些化合物的保留时间会迁移至淋洗体积的末端以外，有时还会产生吸附效应和憎水效应，这些现象均会导致化学形态的转变和破坏。[/font][b][font=宋体]2.2.2[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换色谱(IEC)[/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]与SEC相比，IEC最主要的优点是分离效率高，应用范围广。分离过程基于带电溶质离子与固定相的反电荷表面的交换平衡。溶质离子与流动相中的等电荷离子竞争固定相上的反离子。这种竞争决定了离子的相对保留时间，它依赖于流动相的pH值、离子强度和离子交换剂的性质。淋洗液中如含有高浓度的盐类，将会影响与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/yp][color=#3333ff]ICP-MS[/color][/url]的接口。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外不稳定的金属-蛋白的络合物中的金属会被缓冲液中的金属所代替。所以，IEC经常应用于以共价键结合的硒氨基酸或砷化合物。[/font][b][font=宋体]2.2.3[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]反相高效液相色谱(RP-HPLC)[/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体] RP-HPLC[/font][font=宋体]利用极性较流动相弱的固定相来分离分析物。保留机制是基于分析物的憎水性。该方法的应用范围广，对不同形态的分辨率高，重复性好。但是，固定相有离子交换性质，在pH4时碱性分析物在柱上的吸附力很强。一般应用两种不同的淋洗液，其中至少有一种含有相当量的有机改进剂。淋洗生物分子需要用有机溶剂，还经常需要用酸。有机溶剂和酸很容易改变形态如蛋白-金属络合物。蛋白质被打开后，释放的金属即与其它络合剂结合导致形态改变。所以，RP-HPLC适用于分离以共价键结合的金属络合物而不适用于不稳定的金属络合物。[/font][b][font=宋体]2.2.4[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子对色谱(IP-RPLC)[/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体] RP-HPLC[/font][font=宋体]仅能分离非极性不带电的分析物。在分离带电的极性分析物时需要用离子对试剂。固定相是标准硅烷化的硅胶填料(如C[sub]8[/sub]或C[sub]18[/sub]。)，流动相是由如磷酸盐或醋酸盐、有机改进剂(甲醇或乙腈)和离子对试剂组成的水溶液缓冲体系。离子对试剂与分析物生成离子对保留在反相柱上。离子对试剂参与流动相中分析物与非极性固定相之间的平衡。在考虑离子对试剂时应尽量用溶于流动相的去质子的一价反离子，并对色谱柱和分析物不造成损害。用缓冲溶液控制水相的pH值和反离子的浓度以避免峰拖尾和出现多峰至关重要。与RP-HPLC相比，IR-RPLC的优点是方法的灵活性和多样性增加了。可以为一种特定的要求来设计分离条件。但是，方法所用的有机溶剂和酸也会影响元素的形态。离子对试剂更加重了这些问题，于是对分析物的稳定性的要求比单独使用RP-HPLC更高。[/font]

做液相分析的版友们，相信对离子对试剂都不陌生。离子对试剂最大的优点就是：当样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留，这时要加入相应的离子对试剂，将分析物上的离子进行结合，形成在柱子上有保留的分子；另外，还有就是改善峰形以及使分析结果的重现性更好…………可是，凡事都有两面，离子对试剂最大滴缺点就是：对色谱柱造成不可逆的伤害，离子对试剂和固定相结合产生不可逆吸附，进而影响固定相活性位点。而且离子对试剂很难从色谱柱上冲洗干净，会大大缩短色谱柱的使用寿命。另外，离子对试剂对pH值比较敏感，配制流动相时要求精确度较高。否则直接影响实验的重复性和重现性当然鉴于离子对试剂的一些优点，还是大有人在使用离子对试剂达到较好的分离效果，只要不考虑米米。下面讲讲离子对试剂的选择：怎样选择离子对试剂在选择离子对试剂时，烷基链的长度是必须考虑的因素，因为碳链的长度决定了对样品的分离。碳链越长，对离子的疏水性越强，如表1 和图1 中所示，Q12 的保留时间是Q5 的20 倍。表1 和图1 同时也表明，Q 系列试剂的链长明显影响了苯甲酸的保留时间，而对苯甲醇的保留时间没有影响。S 系列试剂也具有同样的保留特性。表1. 碳链长度对保留值的影响http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503191558_538861_2452211_3.png表2. pH 值对保留值的影响苯甲酸/ 苯甲醇的保留比，流动相：水/ 甲醇（60/40）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503191559_538862_2452211_3.png下面是选择离子对试剂的步骤• 选择一支柱子，通常是端基封尾的C18 柱（Diamonsil、Spursil、Inspire等色谱柱均可）• 使用色谱纯的水和试剂• 选择获得最佳分离效果的流动相的配比• 如果样品中含有非离子组分，在进样前需最优化样品溶液• 选择合适的对离子，酸性化合物选用Q 系列试剂，碱性化合物选用S 系列试剂• 选择合适的碳链长度，使分离度达到最大• 一旦选定离子对试剂，可以通过调整pH 值来获得最佳分离。由于pH 值能够显著影响保留时间，所以在调整时，应该微调，不可调整幅度太大。离子对试剂在流动相中的理想浓度通常是0.005 M，但是也可以通过调整其浓度的大小来优化分离效果

[b][font='Times New Roman'][font=宋体]问题描述：流动相中加入离子对的目的、效果、分离原理[/font][/font][font=宋体]分别[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]是什么？怎么选择离子对试剂，加入量如何选择？[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]解答：[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）流动相中[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]加入离子对试剂的目的是为了在流动相或是固定相中产生一种[/font]([font=宋体]或多种[/font][font=Times New Roman])[/font][font=宋体]与溶质分子电荷相反的离子的物质，产生的离子能够与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而达到使目标物在色谱柱上有效保留的目的，最终实现分离。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]在选择离子对试剂的时候，首先需要考虑目标物的理化性质[/font][/font][font=宋体]。[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]通常在用于分离酸性化合物时，一般选用四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵等离子对试剂[/font][/font][font=宋体]；[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]在分离碱性化合物时，一般选用戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠等离子对试剂。同时，选用离子对试剂时，一般尽可能优先选用碳链短的离子对试剂，浓度尽量的低，这样可以有效避免离子对试剂强保留对色谱柱产生的不可逆影响。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]离子对试剂的加入量要尽量的少，在一定范围内，离子对加入量跟目标物保留正相关，由于跟固[/font][/font][font=宋体]定[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]相存在作用，所以一旦超过浓度，不仅不会增加目标物保留，反而会减少[/font][/font][font=宋体]保留[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]。一般长链离子对试剂加入浓度在[/font]0.5mmol/L[font=宋体]左右，短链离子对试剂加入浓度在[/font][font=Times New Roman]5mmol/L[/font][font=宋体]左右，根据情况可适当增加，原则上不超过推荐浓度的[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]倍。[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体][img=,256,256]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/03/202103172147361204_7262_3389662_3.jpg!w256x256.jpg[/img][/font][/font]