渗透直径测定用灰黄霉素

[color=#fe2419][b]整理新版药典知识的时候写的一个东西，很多内容都是一个字一个字照抄新版药典打出来的，与大家共享下。[/b][/color][color=#000000][size=4][b] 渗透压摩尔浓度测定仪简介[/b][/size][/color][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005311912_221584_1645752_3.jpg[/img][color=#000000]仪器[font=Calibri] [/font][size=4][font=宋体]通常采用测量溶液的冰点下降来测定其渗透压摩[/font][/size][size=4][font=Calibri] [/font][/size][size=4][font=宋体]尔浓度。在理想的稀溶液中，冰点下降符合[i]△[/i][/font][/size][i][size=4][font=Calibri]T[sub]f[/sub]=K[sub]f [/sub] m[/font][/size][/i][size=4][font=宋体]的关系，式中，[i]△[/i][/font][/size][i][size=4][font=Calibri]T[sub]f[/sub][/font][/size][/i][size=4][font=宋体]为冰点下降，[/font][/size][i][size=4][font=Calibri]K[sub]f[/sub][/font][/size][/i][size=4][font=宋体]为冰点下降常数（当水为溶剂时为[/font][/size][size=4][font=Calibri]1.86[/font][/size][size=4][font=宋体]），[/font][/size][i][size=4][font=Calibri]m[/font][/size][/i][size=4][font=宋体]为重量摩尔浓度。而渗透压符合[/font][/size][font=Calibri][i][size=4]P[/size][/i][sub][size=4]o[/size][/sub][i][size=4]=K[/size][/i][sub][size=4]o[/size][/sub][i][size=4] m[/size][/i][/font][size=4][font=宋体]的关系，式中，[/font][/size][font=Calibri][i][size=4]P[/size][/i][sub][size=4]o[/size][/sub][/font][size=4][font=宋体]为渗透压，[/font][/size][font=Calibri][i][size=4]K[/size][/i][sub][size=4]o[/size][/sub][/font][size=4][font=宋体]为渗透压常数，[/font][/size][i][size=4][font=Calibri]m[/font][/size][/i][size=4][font=宋体]为溶液的重量摩尔浓度。由于两式中的浓度等同，故可以用冰点下降法测定溶液的渗透压摩尔浓度。[/font][/size][size=4][font=Calibri] [/font][/size][/color][color=#000000][size=4][font=宋体]采用冰点下降的原理涉及的渗透压摩尔浓度测定仪通常由制冷系统、用来测定电流或电位差的热敏探头和振荡器（或金属探针）组成。测定时将探头浸入供试溶液的中心，并降至仪器的冷却槽中，启动冷却装置，当供试溶液的温度降至凝固点以下时，仪器采用振荡器（或金属探针）诱导溶液结冰，自动记录冰点下降的温度。仪器显示的测定值可以是冰点下降的温度，也可以是渗透压摩尔浓度。[/font][/size][size=4][/size][/color][color=#000000]标准溶液的制备[font=Calibri] [/font][size=4][font=宋体]取基准氯化钠试剂，于[/font][/size][size=4][font=Calibri]500[/font][/size][size=4][font=宋体]～[/font][/size][size=4][font=Calibri]650[/font][/size][size=4][font=宋体]℃干燥[/font][/size][size=4][font=Calibri]40[/font][/size][size=4][font=宋体]～[/font][/size][size=4][font=Calibri]50[/font][/size][size=4][font=宋体]分钟，置干燥器[/font][/size][size=4][font=Calibri]([/font][/size][size=4][font=宋体]硅胶[/font][/size][size=4][font=Calibri])[/font][/size][size=4][font=宋体]中放冷至室温。根据需要，按表中所列数据精密称取适量，溶于[/font][/size][size=4][font=Calibri]1kg[/font][/size][size=4][font=宋体]谁中，摇匀，即得。[/font][/size][size=4][/size][/color][color=#000000][size=4][font=Calibri] [/font][/size][size=4][font=宋体]表[/font][/size][size=4][font=Calibri] [/font][/size][size=4][font=宋体]渗透压摩尔浓度测定仪校正用标准溶液[/font][/size][size=4][/size][/color][table][tr][td=1,1,189][size=4][font=宋体]每[/font][/size][size=4][font=Calibri]1kg[/font][/size][size=4][font=宋体]水中氧化钠的重量[/font][/size][size=4][font=Calibri]/g[/font][/size][/td][td=1,1,189][size=4][font=宋体]毫渗透压摩尔浓度[/font][/size][size=4][font=Calibri]/mOsmolkg[sup]-1[/sup][/font][/size][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=宋体]冰点下降温度[/font][/size][size=4][/size][/align][align=center][i][size=4][font=宋体]△[/font][/size][size=4][font=Calibri]T/[/font][/size][size=4][font=宋体]℃[/font][/size][/i][size=4][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]3.087[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]100[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]0.186[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]6.260[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]200[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]0.372[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]9.463[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]300[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]0.558[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]12.684[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]400[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]0.744[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]15.916[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]500[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]0.930[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]19.147[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]600[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]1.116[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]22.380[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]700[/font][/size][/align][/td][td=1,1,189][align=center][size=4][font=Calibri]1.302[/font][/size][/align][/td][/tr][/table][color=#000000]供试品溶液[font=Calibri] [/font][size=4][font=宋体]供试品如为液体，通常可直接测定；如其渗透压摩尔浓度大于[/font][/size][size=4][font=Calibri]700 mOsmol/kg[/font][/size][size=4][font=宋体]或为浓溶液，可用适宜的溶剂（通常为注射用水）稀释至表中测定范围内；如为固体（如注射用无菌粉末），可采用药品标签或说明书中的规定溶剂溶解并稀释至表中测定范围内。需特别注意的是，溶液经稀释后，粒子间的相互作用与原溶液有所不同，一般不能简单地将稀释后的测定值乘以稀释倍数来计算原溶液的渗透压摩尔浓度。例如，甘露醇注射液、氨基酸注射液等高渗溶液和注射用无菌粉末可用适宜的溶剂（如注射用水）溶解、稀释后测定，并在各品种项下规定具体的溶解或稀释方法。[/font][/size][size=4][/size][/color][color=#000000]测定法[font=Calibri] [/font][size=4][font=宋体]按仪器说明书操作，首先取适量新沸放冷的水调节仪器零点，然后由表中选择两种标准溶液（供试品溶液的渗透压摩尔浓度应介于两者之间）校正仪器，再测定供试品溶液的渗透压摩尔浓度或冰点下降值。[/font][/size][/color][size=4][/size]

产品渗透压与人体生理健康密切相关，溶液的渗透压，依赖于溶液中溶质粒子的数量，高渗透压内让细胞造成萎缩,低渗透压则会使细胞胀破, 所以等渗透压产品才能让细胞维持正常，然后被吸收利用。正常人体血浆的渗透压摩尔浓度范围为(300±20) mOsm/kg。渗透压的测定分为冰点法和露点法。 冰点渗透压仪根据拉乌尔冰点原理，以溶液冰点下降值与其摩尔浓度成比例关系为基础，采用高灵敏的感温元件—热敏电阻测量不同溶液的结冰点。冰点渗透压仪由于测试结果精确、重复性好、线性好等优点应用最广泛。下图为德国罗泽公司的CM815冰点渗透压仪。[img=,690,902]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/03/202203181412348095_7590_4079281_3.png!w690x902.jpg[/img]露点是固定气压下，空气中所含的气态水达到饱和而凝结成液态水所需要降至的温度。此时凝结的水漂浮在空中成为雾，沾在固体表面上时成为露。露点渗透压仪应用沸点升高原理，将溶液加热使之蒸发，密封样品腔内的热电偶通过佩尔蒂尔效应冷却到露点以下，使样品中的水蒸气在其上凝结，利用热电偶凝结样品溶液蒸气感应测量。下图为美国Wescor5520露点渗透压仪。[img=,508,676]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/03/202203181413129263_9518_4079281_3.jpg!w508x676.jpg[/img] 工作过程中遇到了一个奇怪的现象，同样的样品和浓度，冰点渗透压仪测定值为2500mOsm/kg（不合格），露点渗透压仪测定值为1760mmoL/kg（合格），直接让我们在各个环节产生了怀疑。 通过与厂家技术人员，校准液供应技术人员沟通，几经周转，总结出来一个经验供相关检测人员参考：冰点渗透压仪采用半导体制冷测试，可检测挥发性的样品，尤其是受热易分解的样品，但只适用于分析稀溶液，线性范围较窄，因为浓溶液在测量过程中温度下降可能析出溶质。露点渗透压仪用电热丝加热，理论上适用于整个浓度范围，但溶液浓度过高也会导致相对湿度较低，在冷却过程中，热电偶上凝结的水不足，影响检测准确性，但测量范围较冰点渗透压仪宽。因此较大的渗透压值建议使用露点渗透仪检测。

根据国标CB/T5009.116-2003做猪肉中土霉素、四环素、金霉素的测定液相条件：柱子：安捷伦Poroshell 120 EC-C18.，没有ODS-C18柱 流动相：乙腈（35%）：0.01M NaH2PO3,用磷酸调pH=2.5（65%）标品走的峰形如图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610311045_615391_0_3.jpg，峰形不好，柱子是新柱子，请问各位老师是怎么回事，大家都用什么液相条件

先和大家唠唠青霉素酶的主要来源：奶牛每到换季容易发作乳腺炎等疾病，往往通过注射抗生素进行治疗。凡经治疗过的乳牛，其牛奶在一定时期内残存着青霉素，而在原奶收购检测时，抗生素超标会拒收，奶户为了私利会人为添加青霉素分解酶。别小看这东东，个人认为危害大着呢：1.青霉素酶的安全性以及是否可以在食品中添加尚未有定论。2.在分解青霉素后，可能引进其他有害物质。3.这种做法纵容了奶牛饲养过程中抗生素的滥用。（这三条都个人主义的看法仅供参考）一.杯碟法检测原理：采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株，利用舒巴坦特性抑制β-内酰胺酶的活性，并加入青霉素作对照，通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加抑制剂的样品所产生的抑菌圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物。二.实验试剂与材料1 菌种：藤黄微球菌，对青霉素较敏感，有青霉素存在时藤黄微球菌不会生长繁殖（如图）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405231328_500247_2227357_3.jpg2 试剂及药品1）磷酸盐缓冲液（配药)：取8g磷酸二氢钾和2g磷酸氢二钾，用1000ml溶解，121℃高压灭菌15min。2）舒巴坦标准储备溶液：将舒巴坦标准品用磷酸盐缓冲液溶解并定容为10mg/ml。4℃保存，可使用一周。3）舒巴坦标准工作溶液：吸取100ul舒巴坦标准储备溶液到1ml

用二剂量方法检测抗生素的效价，根据“抑菌圈直径的大小与抗生素对数浓度的量成正比”，如果一批样品的效价偏低，那么其T1（低浓度样品直径）、T2（高浓度样品直径）应该都比S1、S2的直径小，但是在制霉素效价检测中，培养后扫描出来的直径往往是一边偏高，一边偏低。如：S1T1，S2T2，而不是S1T1，S2T2或者S10.05。.为什么会出现这种反差的？如何避免？（其他品种如红霉素、土霉素等等极少出现偏离平行）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312315_343439_1778120_3.jpg

水，是生命之源。随着人们生活水平的提高，老百姓对饮水安全的关注度越来越高，越来越多的人选择在家中装上净水器。在市面上的各类净水器产品中，一款叫做RO净水器的产品受到了越来越多人的关注。据说，经过这种净水器过滤后，水里面的一切杂质，不管是重金属、有机物，还是细菌、病毒，统统都会被一扫而光，普通的自来水就可以变成纯净水直接饮用。是不是很神奇？当然，带RO膜的净水器的价格也是挺贵的。　　其实，这款RO纯水机的神奇之处，是其里面安装的一张膜。什么膜那么神奇，可以过滤一切有害物质？除了净水器，它还在哪里有用武之地？来，让我们一起围观一下这一净水神器——反渗透膜。　　[b]反渗透膜是何方神圣？[/b]　　超纯水机，其实就是使用反渗透和离子交换原理进行水过滤的净水器。所谓RO，也就是Reverse Osmosis的缩写，意为反渗透。一般来说，一台RO净水器由以下5级过滤装置组成：第1级为5微米PP棉，用于阻垢和去除铁锈杂质等；第2级为颗粒活性炭，用于吸附化学物质；第3级为1微米PP棉或压缩活性炭；第4级为RO膜，是整个过滤系统的关键；第5级为离子交换树脂组成的超纯化柱，用于进一步清除水中的阴、阳离子，制取电阻率18-18MΩ的UP超纯水。[align=center]今天我们不讲超纯化，只讲讲这个RO膜[/align]　　在RO净水器中，最关键的部件就是反渗透膜，也就是所谓的RO膜。那么，何为反渗透呢？在中学时代，我们接触过半透膜的概念，即只能透过小分子量溶剂而不能透过大分子量溶质的膜。我们知道，如果半透膜两侧溶液存在浓度差，低浓度溶液中的溶剂会向高浓度溶液转移，直到达到渗透平衡状态。这种状态只与溶液性质有关，与半透膜无关。　　而在反渗透膜应用的场合，在浓溶液一侧存在外界压力作用，此时高浓度溶液的溶剂会向低浓度溶液转移，这就是反渗透膜。而RO净水器除了关键的半透膜——反渗透膜以外，还有一个关键部件，就是压力泵。RO净水器的工作压力约为0.5兆帕。　　不过，不是什么半透膜都能够达到反渗透膜的应用标准的。要作为反渗透膜，需要具备几大特征：一是在高流速下应具有高效脱盐率；二是具有较高机械强度和使用寿命；三是能在较低操作压力下发挥功能；四是能耐受化学或生化作用的影响；五是受pH、温度等因素影响较小；六是制膜原料来源广泛，加工简便，成本低廉。这样一来，只有很少的材料可以满足反渗透膜应用要求。　　目前能够满足这样苛刻条件的，只有几种高分子材料，如醋酸纤维素、芳香聚酰肼和芳香聚酰胺等具有较强强度的亲水树脂，其中芳香聚酰胺最为常见，脱盐率最高。这些材料的表面微孔直径一般在0.5～10纳米之间。当然，为保证反渗透膜的强度，净水用反渗透膜上还要添加增强材料，如陶氏的反渗透膜就由约120微米厚的聚酯增强无纺布、40微米厚的聚砜多孔中间支撑层(孔径15纳米)以及作为核心部分的0.2微米厚的芳香聚酰胺超薄分离层组成，并根据实际的功能需求进行优化设计与制造。如果用于其他用途，增强层和支撑层的用料也会相应作出改变。[img=,395,198]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905111203314320_6035_2206495_3.gif!w395x198.jpg[/img][img=,400,298]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905111414205835_779_2206495_3.jpg!w400x298.jpg[/img][img=,690,291]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905111414212507_4464_2206495_3.jpg!w690x291.jpg[/img]　从结构和技术要求，我们就能一窥反渗透膜的技术含量，这毫无疑问是尖端科技的产物。　　[b]家用净水只是小case[/b]　　其实，家用净水对于反渗透膜来说，只是个小领域罢了。反渗透膜最厉害最主要的应用，是海水淡化。　　我们知道，海水中含有大量的无机盐以及其他杂质，其杂质含量远比处理过的自来水要高。在水资源匮乏的今天，海水受到了科学家们的关注，如何快速处理海水得到纯净的水资源，一直是研究者们的研究重点。反渗透膜的出现，正好解决了这一问题。　　通过反渗透膜处理海水，得到的淡水非常洁净，可以直接饮用，免除了其他的处理步骤，方便快捷。反渗透后得到的高浓度海水，还可以用于其他物质的提取生产。因此，不少国家和地区都建立或正在筹划建立反渗透膜海水淡化工厂。[img=,600,400]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905111204163230_1599_2206495_3.jpg!w600x400.jpg[/img]　不过，由于海水淡化用的反渗透膜造价昂贵，还需要其他装置过滤海水中的浮游生物，而且压力要求也很高，因此反渗透法并不是目前海水淡化应用最多的方法。但随着反渗透膜反渗透效率的不断提高、生产成本的逐渐降低，反渗透法的应用比例也将不断提高。　　反渗透膜的另一大应用是超纯水制备。在实验室中，为尽量减小杂质对实验结果的影响，实验室人员会选择使用超纯水进行实验。超纯水的制备完全依赖于超纯水机，它实际上就是一种更高端的反渗透膜净水器，其工作压力和RO膜的质量都要高于家用净水设备。　　反渗透膜还在浓缩饮料生产上有广泛应用。这个原理也很类似于净水器，不过，此时取用的是浓缩液部分。比起其他浓缩方法，反渗透法更加简便迅速，正成为饮料生产企业生产浓缩饮料的首选方案。　　反渗透膜还可以用于军事行动中，方便军队在特殊环境下，利用本来不能使用的污水提取饮用水，保证行军过程中的水供应。这也是反渗透膜最早的用途之一。　　同样，反渗透膜在国际空间站也有一席之地。由于宇航员需要长期居住在空间站，而空间站上又不可能保存太多淡水，因此，反渗透膜被用于将各种废水转化为饮用水。　　在核电站等核设施中，反渗透膜也用于提纯废水，防止核反应堆的放射性物质流出，造成污染。　　现在，一些较高端的水族馆和观赏鱼缸也会使用反渗透膜来保持鱼缸里的盐分。随着反渗透膜技术的不断发展、价格的不断降低，反渗透膜将会更加广泛地走入我们的生活。　　[b]美日技术领先[/b]　　目前，在世界市场范围内，美国和日本在反渗透膜产能和市场份额中具有领先地位。其中，陶氏化学和日东电工两家企业的市场份额就占据了世界总产量的一半以上。随着韩国、中国、印度和巴西等国企业的加入，全球反渗透膜市场正在不断增长。目前，反渗透膜全球市场总值约为14亿美元，到2020年这一数字可能将达到17.5亿美元。　　目前，我国膜材料产量和销量也居世界前列，部分品种正在打入国际市场。不过，在高端反渗透膜领域，国外企业仍是市场主力，占据市场份额的85%。随着我国时代沃顿、杭州华滤和碧水源等企业在科研和技术方面的进步，相信这一情况可以有所改观。　　在全球范围内，海水淡化仍是反渗透膜的最大应用方向，在电力、冶金、石油石化、医药、食品、市政工程、污水回用等领域，反渗透膜也都得到较为广泛的应用。　　在我国，由于经济与地理等因素的影响，反渗透工程项目在山东省以及辽宁大连地区较为集中。随着我国北方地区干旱化的加剧，以及工业、民用对水量和水质要求的不断提高，膜法海水淡化必然从现在的船用、岛用为主，向工业、市政领域发展，市场潜力巨大。　　■[i][b]相关链接[/b][/i]　　[b]反渗透技术诞生的故事[/b]　　1950年美国科学家索里拉金博士（DR.S.Sourirajan）在观察海鸥时发现，海鸥首先会吸一大口海水，然后过一段时间，再吐出一部分。他感到非常好奇，因为海鸥这种使用肺呼吸的陆生动物是绝对不可能直接摄入高含盐量的海水来补充水分的。　　出于这种好奇，索里拉金博士和他的团队对海鸥进行了解剖，发现海鸥并没有直接把海水喝下，而是把海水存在喉管里，海水经由海鸥吸入体内后加压，再经由压力作用将水分子贯穿渗透过粘膜转化为淡水,海鸥把淡水吸收到身体内部，然后把剩下的高浓度海水再吐出来。海鸥喉管中的这层粘膜组织，就是反渗透膜的原型。　　索里拉金博士认为此项重大发现很可能是人类获取饮水的方法的一个重大突破，随即就投入了该原理工业化的研究，美国政府得知此事，投入了4亿美元（约合现在31.6亿美元）的资金，资助美国U.C.L.A大学医学院教授西德尼洛德博士（Dr.S.SidneyLode）配合索里拉金博士博士着手研究反渗透膜。在巨大的资金支持和众多科学家的努力之下，反渗透膜的最初模型诞生。　　1968年，美国阿波罗登月的各项技术准备都紧锣密鼓地开展着，其中最让人头痛的难关竟是最普通的水。当年阿波罗登月计划的人员和设备的总需水量，竟达到6吨之多。航天是一项对重量要求很高的工作。毕竟宇航员多一斤肥肉，发射成本可能就要多上百万美元，更别说以吨计的水了……　　如何回收提纯工业废水、洗漱用水和尿液成为最大的攻关课题。于是反渗透膜这一技术很快被引用到宇航领域。　　采用反渗透技术将使用过的污水，包括尿液等排泻物，净化处理，成为达到饮用标准的再生水，使太空船不用运载大量的饮用水升空，为阿波罗登月计划做出了巨大贡献。　　几十亿美元的投入终结硕果，就是反渗透膜制水技术。在当时此项技术被美国宇航局列为绝密等级专利。[img=,600,380]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905111204399377_5083_2206495_3.jpg!w600x380.jpg[/img]　　反渗透技术在航天领域成功应用之后，又转移到军工领域，自70年起开始装备美国潜艇、航母和作战舰艇，用于海水直接制成饮水，在美国人们把反渗透形象的比喻为“体外肾脏”。　　我国在90年代初开始引进此项技术，装备军舰和潜艇。1992年，中南海建立了一座反渗透水厂，保证国家领导人饮水安全，同时为外宾提供饮水，从此反渗透技术走进了新华门，如今，反渗透技术被应用于净水器的生产中，从此也走进了千家万户。

先和大家唠唠青霉素酶的主要来源：奶牛每到换季容易发作乳腺炎等疾病，往往通过注射抗生素进行治疗。凡经治疗过的乳牛，其牛奶在一定时期内残存着青霉素，而在原奶收购检测时，抗生素超标会拒收，奶户为了私利会人为添加青霉素分解酶。别小看这东东，个人认为危害大着呢：1.青霉素酶的安全性以及是否可以在食品中添加尚未有定论。2.在分解青霉素后，可能引进其他有害物质。3.这种做法纵容了奶牛饲养过程中抗生素的滥用。（这三条都个人主义的看法 仅供参考）一.杯碟法检测原理：采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株，利用舒巴坦特性抑制β-内酰胺酶的活性，并加入青霉素作对照，通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加抑制剂的样品所产生的抑菌圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物。二.实验试剂与材料1 菌种：藤黄微球菌，对青霉素较敏感，有青霉素存在时藤黄微球菌不会生长繁殖（如图）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081621_492377_2227357_3.jpg2 试剂及药品1）磷酸盐缓冲液（配药)：取8g磷酸二氢钾和2g磷酸氢二钾，用1000ml溶解，121℃高压灭菌15min。2）舒巴坦标准储备溶液：将舒巴坦标准品用磷酸盐缓冲液溶解并定容为10mg/ml。4℃保存，可使用一周。3）舒巴坦标准工作溶液：吸取100ul舒巴坦标准储备溶液到1ml离心管中，用磷酸盐缓冲液定容，配置成浓度为1mg/ml。4）青霉素标准储备溶液：用磷酸盐缓冲液将青霉素溶解并定容为10mg/ml， 4℃棕色瓶中保存。使用时间根据实验情况而定。5）青霉素标准工作溶液：吸取10ul青霉素标准储备溶液于1ml离心管中，用磷酸盐缓冲液稀释，配置成浓度为0.1mg/ml ，4℃保存，可使用一周。6）生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中， 121 ℃高压灭菌15min。7）B-内酰胺酶标准储备溶液和工作溶液：方法要求16000U/ML（依据实际检验情况定浓度），目前用的是8千单位。如购买的青霉素酶的单位有IU/L,U/L,单位/ML,它们的换算关系是：1IU/L=609U/L=0.609单位/ML.8）无菌水：121℃高压灭菌15min。9）抗生素1号培养基，营养培养基。注：于配制药品的容器如不能高压灭菌，需用75%的酒精进行2-3次的消毒，再用所使用的无菌溶剂（生理盐水和磷酸盐缓冲液）进行2-3次的润洗后再进行药品的配制.3 主要实验器材http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081629_492378_2227357_3.jpg三.实验步骤1.试样处理：把离心管放入微孔中，标记为A、B、C、D，取试样1000ul分别放入A、B、C、D四个1.5ml离心管中，每个样品做三个平行，共12管。同时每次检验应取纯水1ml加入到1.5ml离心管中做对照。如样品为乳粉，则将乳粉按1:10的比例稀释，如样品是酸性乳制品，应调节PH值至6-7后，按顺序加入以下药品后混匀。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081633_492379_2227357_3.jpgA: 5ul青霉素标准工作溶液。B: 25ul舒巴坦标准工作液+ 5ul青霉素标准工作溶液。 C: 25ul β-内酰胺酶标准工作液+ 5ul青霉素标准工作溶液 。D: 25ul β-内酰胺酶标准工作液+ 5ul青霉素标准工作溶液+25ul舒巴坦标准工作液。2.菌悬液的制备1）菌种的制备：将营养琼脂培养基分装到试管中做成斜面，用接种环挑取适量藤黄微球菌在斜面上划线，36 ℃培养22-24h。2）菌悬液的制备：用2ml生理盐水将经过斜面培养的藤黄微球菌洗下，混合均匀，然后将菌悬液以大约2%的比例加入到营养琼脂培养基中。3.检定用平板的制备1） 在无菌培养皿中注入抗生素1号培养基10ml，作为基层培养基，水平静置，待其自然凝固后将皿盖盖好备用.2）2.将灭菌的营养琼脂培养基溶化后在水浴锅中冷却至55℃左右，加入适量的菌悬液,混匀,移取5ml含有浓度为1*108CFU/ml注入铺有基层培养基的培养皿中，均匀摊开，凝固。加入菌悬液的量以能产生17-27mm的抑菌圈为宜。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081639_492380_2227357_3.jpg3）.凝固后将皿倒置，用笔在皿上画十字线，将皿平分四份，并标记样品的序列号，与原始记录对应。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081641_492381_2227357_3.jpg4）.然后再把皿反转，在每个培养基表面均匀对称放置4个牛津杯。检定平板应为同一批次。放置牛津杯时，必须均匀对称的放置，以免各自产生的抑菌圈有交叉现象。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081642_492382_2227357_3.jpg4. 试样测定 1）. 取ABCD四个离心管中的试液各200ul，分别加入到检定平板的四个牛津杯中，每组试验做3 -4个平行样。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081644_492383_2227357_3.jpg2）培养结束后去除牛津杯用游标卡尺精确测量ABCD四个试液的抑菌圈直径。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403081646_492384_2227357_3.jpg四.结果判定取ABCD抑菌圈直径的平均值，纯水空白结果应为A、B、D、均产生抑菌圈；A的抑菌圈与B的抑菌圈相比，差异在3mm以内（含3mm),C的抑菌圈小于D的抑菌圈差异在3mm以上（含3mm),且重复性良好。如此结果则系统成立，可对结果进行如下判定。样品结果B和D均产生抑菌圈，且D-C抑菌圈在以上3mm(含3mm)时，可以判定样品中A和B的抑菌圈差异小于3mm ，且重复性良好的青霉素酶结果为阴性；样品中A和B的抑菌圈差异大于3mm (含3mm) ，且重复性良好的青霉素酶结果为阳性；纯水空白对照品系统成立的情况下，为判定样品结果的前提条件。如果A和B均不产生抑菌圈，

动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考（氟甲砜霉素）的测定色谱柱：菲罗门 kinetex C18柱（100×2.1mm 2.6um）试剂溶液: 甲醇水（3+7）：300 mL甲醇与700 mL去离子水混匀；乙腈饱和正己烷：乙腈与正己烷等比例混合，取上层；[b]说明：下列所述标准工作液A、B为氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素混合标液[/b]标准中间液：氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素1.0 μg/mL内标中间液：D-CAP 1.0 μg/mL标准工作液[b]A[/b]（25 ng/mL）：吸取1.0 μg/mL标准中间液0.25 mL用30%甲醇水定容至10 mL，混匀(该溶液临用现配)；内标工作液[b]A[/b]（25 ng/mL）：吸取1.0 μg/mL内标中间液0.25 mL用30%甲醇水定容至10 mL，混匀(该溶液临用现配)；标准工作液[b]B[/b](1 ng/mL)：吸取标准工作液[b]A [/b]0.4 mL用30%甲醇水定容至10 mL，混匀 (临用现配)。上机标准曲线:分别移取0、0.1、0.2、0.4、1.0mL标准工作液[b]A[/b]（25 ng/mL），1.0mL内标工作液[b]A[/b]（25 ng/mL）于5个10mL容量瓶中，30%甲醇水定容至刻度，得标液浓度为0、0.25、0.5、1.0、2.5 ng/mL，内标溶度为2.5ng/mL。附：标准曲线配制： 外标中间液：氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素1.0 μg/mL[img=,690,237]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310617262550_9107_2166779_3.png!w690x237.jpg[/img]样品前处理：准确称样5.00 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，添加氯霉素内标[sup][/sup]，加入0.5mL氨水，加入5 g 无水Na[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub][sup][/sup]和20 mL乙酸乙酯，用均质器以10000 r/min的速度均质1 min，15 mL乙酸乙酯[color=#ff0000]清洗均质头[/color]，加盖振摇[sup][/sup]，3500 r/min离心5 min，上清液转移至150 mL的棕色梨形瓶中，在40 ℃减压旋转蒸发至干，加入2 mL甲醇水（3+7）和2 mL 乙腈饱和正己烷溶解洗脱，高速离心分层，取下清液，用0.2 μm微孔[color=#ff0000]有机[/color]滤膜过滤，上机测试。[img=,690,393]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310619102674_6914_2166779_3.png!w690x393.jpg[/img]氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考（氟甲砜霉素）的测定涉及标准汇总、比较见表1：[img=,690,247]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310621041150_5153_2166779_3.png!w690x247.jpg[/img][b]线性范围、线性方程[/b]分别对氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准系列工作溶液进行测定，以标准溶液的浓度(ng/mL)与氘代氯霉素浓度的比值为横坐标，以标准溶液中被测组分峰面积与氘代氯霉素峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线或计算回归方程，具体结果见表2。[img=,673,185]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310636522800_5170_2166779_3.png!w673x185.jpg[/img]氯霉素（0.25ng/mL）、甲砜霉素(2.5ng/mL)、氟苯尼考（氟甲砜霉素）(2.5ng/mL)MRM图：[img=,690,399]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310626212579_611_2166779_3.png!w690x399.jpg[/img][img=,690,434]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310626315649_9067_2166779_3.png!w690x434.jpg[/img][img=,657,417]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310626401955_677_2166779_3.png!w657x417.jpg[/img]鸡肉样品测定MRM图：[img=,689,363]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310629369622_5025_2166779_3.png!w689x363.jpg[/img][img=,666,443]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310629457983_2475_2166779_3.png!w666x443.jpg[/img][img=,655,416]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310629536961_3288_2166779_3.png!w655x416.jpg[/img]鸡肉样品加标氯霉素（0.25ng/mL）、甲砜霉素(2.5ng/mL)、氟苯尼考（氟甲砜霉素）(2.5ng/mL)MRM图：[img=,690,361]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310633092540_6864_2166779_3.png!w690x361.jpg[/img][img=,682,443]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310633202300_3044_2166779_3.png!w682x443.jpg[/img][img=,671,425]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310633330468_2212_2166779_3.png!w671x425.jpg[/img][img=,673,185]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310638525567_679_2166779_3.png!w673x185.jpg[/img][img=,690,437]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310639003515_512_2166779_3.png!w690x437.jpg[/img][img=,690,455]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310639089904_8264_2166779_3.png!w690x455.jpg[/img][img=,690,455]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310639089904_8264_2166779_3.png!w690x455.jpg[/img][img=,658,289]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310641135748_6268_2166779_3.png!w658x289.jpg[/img]鸡肉样品加标0.1ug/kg氯霉素提取定量子离子151.9的信噪比：[img=,690,290]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310644563180_387_2166779_3.png!w690x290.jpg[/img]鸡肉样品加标1.0ug/kg甲砜霉素提取定量子离子184.9的信噪比：[img=,685,303]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310646330148_451_2166779_3.png!w685x303.jpg[/img]鸡肉样品加标1.0ug/kg氟苯尼考提取定量子离子336.0的信噪比：[img=,690,294]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810310648135100_953_2166779_3.png!w690x294.jpg[/img]注意事项：1、[color=#ff0000]每批样品检测应包含：[/color]标液曲线、试剂空白、样品空白、样品加标、样品。2、加标回收：分别添加1 ng/mL标准工作液[b]B [/b]0.5 mL于空白样品中，氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素相当于0.1 μg/kg水平；3、负离子模式，上机前如响应不够需清洗离子源[color=#ff0000]或增加仪器平衡时间[/color]；4、初测选适用基质的任一样品加标，如遇特殊基质（如饲料、血粉等粉末样品）称1.0 g，其余步骤同肉制品，定量下限与加标水平同时提高为氯霉素1.0 μg/kg，特殊基质应选用该样品做加标回收，复测时做平行样品，如初测浓度过高，复测时应加大曲线范围或者将样品稀释后上机，保证样品浓度在曲线范围内。