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乳过氧化物酶来源于牛奶

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  • 蛋白质标记:乳过氧化物酶法(LPO

    本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。  1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。  2.方法以标记蛋白质抗原为例。  (1)反应液组成:蛋白质2~5μg溶于磷酸缓冲液10~25μl中,加入Na125i 1m Ci(10μl)、乳过氧化物酶溶液25ng(10μl)、H2O2200ng(10μl);  (2)在室温保温7min;  (3)加入H2O2200ng(10μl);  (4)过7min再加入H2O2(3μl);  (5)保温7min后,加入0.5ml、10mmol/L巯基乙醇以停止反应;  (6)10min后加入NaI载体溶液1ml ;  (7)按常规方法分离纯化。  3.注意事项  (1)LPO质量好坏,可直接影响标记率,LPO应在使用前新鲜配制,以防酶活性降低。  (2)LPO用量应小于总蛋白质用量的1%,以减少酶自身碘化而带入的放化杂质。  (3)碘化反应速率分析表明,酶的催化速度很快。  (4)碘化反应在pH4.0~8.5较宽范围内均可进行,最适pH值应依据蛋白质本身性质而定。  (5)H2O2应保持低浓度,如高于0.1mmol/L,对酶的活性将有抑制作用。

  • 【资料】大球盖菇过氧化物酶及超氧化物歧化酶的研究

    大球盖菇过氧化物酶及超氧化物歧化酶的研究 张琪林1,王红2(1运城学院生命科学系,山西运城044000 2运城学院生化实验中心,山西运城044000) 摘 要:采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法测定大球盖菇过氧化物酶和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶活 性,结果表明大球盖菇过氧化物酶有4种同工酶,比移分别是:0.13、0.18、0.25、0.32,其活性大小接近. SOD三种都有,比移分别为0.20、0.21、0.25,以CuZn-SOD活性最大,Mn-SOD活性较小.CuZn-SOD 及Mn-SOD辅因子易于丢失,应用时应予以注意.关键词:大球盖菇 过氧化物酶 超氧化物歧化酶 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳中图分类号:Q935 文献标识码:A大球盖菇(Strophariarugoso-annulate)栽培广 泛,食药两用,深受菇农与消费者青睐,栽培研究颇 多,生理研究也日渐深入.已有液体培养氮碳营养 源[1]、与pH关系[2]、胞外酶特性[3]等研究报道,而 胞内酶研究报道尚未见到.过氧化物酶、超氧化物 歧化酶是机体清除H2O2、超氧离子(O-2)等活性氧 的氧化还原酶.[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903260925_140607_1614854_3.gif[/img]对生物抗氧化、防辐射、抗衰老等方面都有重要作 用,尤其是SOD.本文采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电 用方法鉴定大球盖菇上述两种酶的活性及种类,以 期为大球盖菇的生理生化研究和大球盖菇的应用 提供理论依据.1 材料与方法1.1 材料供试菌株引自河南省清丰县食用菌技术推广 中心.所用化学试剂均为分析纯.1.2 方法1.2.1 菌丝培养 20%土豆浸汁1000mL,蔗糖 20g,蛋白胨2g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1.5g,pH值 自然.分装于300mL锥形瓶,每瓶50mL,高压灭菌.接种后25~28℃恒温摇床培养21天,振荡频 率为120r/min.1.2.2 酶液制备 菌丝冲洗干净后,于-4℃冷冻 12h.按菌丝∶0.1MpH7.4磷酸缓冲液(冷藏)∶石 英砂=1∶2∶0.2比例混合.冰浴磨成匀浆.在 10℃以下环境离心(4000r/min,15min).取上清液 5份与40%蔗糖(冷藏)、0.01%溴酚蓝各1份混 合,置冰箱备用.1.2.3 电泳 方法为聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳. 样品分离胶浓度为7%,pH8.9.浓缩胶浓度为2. 5%,pH6.7.电极缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液, pH8.3.点样量为30μL/管.以溴酚蓝为指示剂.电 流开始为10mA,电泳两分钟后加大至50mA.待溴 酚蓝移至凝胶柱下端附近时停止电泳.电泳环境温 度为10℃,时间1.2h.1.2.4 染色1.2.4.1 过氧化物酶染色 A液:0.4g联苯胺加 入3mL冰醋酸于80℃溶解,加入17mL蒸馏水,随 用随配.B液:4%氯化铵.C液:5%EDTA.D液:0. 3%H2O2.按等体积加8倍水混合,量以淹没胶柱 为度.剥胶后立即放入染液,等到有蓝色谱带出现 后,取出用水冲洗干净,再用7%醋酸脱色漂洗后 观察.1.2.4.2 SOD染色 (1)对照a、在2.45×10-2M 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)液中黑暗下浸泡1h,温 度37℃.b、在2.8×10-2M四甲基乙二胺、2.8× 10-5M核黄素和在3.6×10-2MpH7.8磷酸缓冲 液中黑暗下浸泡1h,温度37℃.c、在1×10-4M EDTA,5×10-2MpH7.8磷酸缓冲液中,距40W日 光灯20cm光照20min.(2)添加辅基处理.在(1 中分别添加5mMNa2SO4 FeSO4 MnSO4 CuSO4+ ZnSO4 FeSO4+MnSO4+CuSO4+ZnSO4.(3)添加 抑制剂处理.在酶液中分别添加10mMKCN或 30%氯仿-乙醇,其他同上.2 结果与讨论2.1 过氧化物酶谱及分析[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903260926_140608_1614854_3.gif[/img]结果如图1.从图1可见,大球盖菇菌丝体过 氧化物酶有4条带.比移分别为0.13,0.18,0.25, 0.32.其活性大小接近.2.2 超氧化物歧化酶谱及分析(1)添加SOD辅因子试验结果见图2.从中可 见共有三条带.比移分别为A:0.20,B:0.21,C:0. 25.都有B带,但加铁处理(3、6)的较亮,说明B带 是Fe-SOD,铁离子对该SOD活性有明显的增强作 用.没有加铁的处理(1,2,4,5)SOD也有活性,说 明铁与酶蛋白的结合较牢固,不易丢失.1,2,3,5 无A带,4,6有,说明A带是Mn-SOD.同理,C带为 CuZn-SOD.未加锰、铜、锌盐的没有相应的带,说 明锰、铜、锌与酶蛋白的结合较为松散,易于丢失. 比较三种SOD,以Mn-SOD活力最小,CuZn-SOD 活性最大.(2)添加抑制剂试验结果为:加KCN后,显色 结果无C带 加氯仿-乙醇后,无A带.已知10mM KCN抑制CuZn-SOD,30%氯仿-乙醇抑制Mn- SOD[4].说明2.2.1结论是正确的.综上所述,大球盖菇菌丝体抗氧化酶比较丰 富,过氧化物同工酶有4种 超氧化物歧化酶有3 种,以CuZn-SOD活性较高,Mn-SOD、Fe-SOD活 性较低,但CuZn-SOD、Mn-SOD辅因子易于丢 失,应用时应予以注意.参考文献:[1]张琪林,王红.大球盖菇液体培养碳氮营养源研究[J].食用 菌.2002,24(1):6.[2]王红,张琪林.大球盖菇液体培养与pH值关系研究[J].山西 师范大学学报(自然科学版).2003,17(增1期):108~109. [3]王红,张琪林.大球盖菇液体培养胞外酶特性研究[J].食用 菌.2003,25(2):8~9.[4]李中振,田廷亮.灵芝超氧化物歧化酶同工酶研究[J].中国食 用菌.1997,16(4):32~34.

  • 牛奶中的2项重要质量指标--过氧化物(双氧水)和硝酸盐残留测试

    过氧化物和硝酸盐这2项都是很重要的牛奶质量品控指标,直接关系到牛奶的安全与健康。主要用于牛奶生产企业的原料奶,成品检测,生产消毒控制等各个环节。我们可以提供简便快速的测试条:双氧水测试条(货号:1.10011.0001)与硝酸盐测试条(货号:1.10020.0001)。

  • 生物标记三部曲:绿色荧光蛋白、辣根过氧化物酶和小型单线态氧制造者

    第一篇来自Sowmya Swaminathan, Nature Cell Biology, "GFP: the green revolution", doi:10.1038/ncb1953, October 1, 2009;第二篇来自Andy, brainslab.wordpress.com,"Horseradish peroxidase as marker for anatomical em", April 3, 2011;第三篇来自Andy, brainslab.wordpress.com, "MiniSOG, a light and electron microscopy fusable marker", April 16, 2011第一篇:绿色荧光蛋白: 绿色革命http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131175417948693.jpg来自秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的两个触觉感受器神经元的细胞体(cell body)用编码β-微管蛋白的基因表达的绿色荧光蛋白标记,图片来自doi:10.1126/science.8303295.1994年,Chalfie等人在Science杂志发表一篇报道,表明来自维多利亚水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP),在没有任何A. Victoria的辅助因子存在下,能在活着的细菌和线虫细胞中用作蛋白定位和表达的标记。这种显示GFP作为体内研究蛋白的工具基本上改变了细胞生物学家能够解决的问题的性质和范围。1962年,Shimomura和他的同事们在A. victoria生物发光蛋白水母素(aequorin)的纯化过程中偶然间第一次发现了GFP。1974年,Morise和他的同事们在随后的纯化、晶体形成和从水母素到GFP能量转移的体外重建过程中,为GFP的荧光性质提供启迪,而且证实GFP接受来自水母素的能量转移后发射绿光。在此之后许多年,在外源系统中GFP是否需要水母素和可能来自水母的其他因子发出荧光,这仍然是一个公开的问题。1992年,也就是在GFP发现后的30年,Prasher等人克隆了编码GFP的基因,就为实验上评估它用作蛋白质的体内标记铺平道路。而在两年后,Chalfie等人证实当GFP在细菌和线虫细胞中表达时,它能够发出荧光。在线虫中,GFP是在一个表达β-微管蛋白的基因启动子的控制下表达的。它在线虫特异性神经元中的时空表达模拟了内源性β-微管蛋白基因的表达,因而证明GFP能够作为一种可靠的标记以便监控基因表达模式。此后不久,Roger Tsien的实验室对天然GFP进行改造使之变得更加明亮和耐光,以及在一个与常规显微镜过滤器装置相匹配的波长下激发,因而增加了它的实际适应性。GFP技术的下一个突破便是开发GFP变异体产生蓝色、青色和黄色荧光蛋白,因而能够使得影像实验在细胞和有机体中采用多种标记的蛋白。绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色荧光。而EGFP是增强型的GFP (enhanced GFP),发生了双氨基酸取代,亮氨酸(Leu)取代GFP上第64位苯丙氨酸(Phe),苏氨酸(Thr)取代了GFP上的第65位丝氨酸(Ser),与GFP相比,具有更强更稳定的绿色荧光。黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)其序列与GFP基本相同,不同之处就是把第203位Thr以Tyr取代,这样的GFP不发出绿色荧光,而发出较长波长的黄色荧光。青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)与此类似,也是GFP第66位Tyr(酪氨酸)被Thr(色氨酸)所取代的结果,发青色荧光。由此可见,GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似,只有1-2个氨基酸残基的变化。在GFP发现后的将近半个世纪以来,因为发现和开发绿色荧光蛋白,2008年诺贝尔化学奖被授予给Osamu Shimomura, Martin Chalfie和Roger Tsien,来表彰这次发现给后世带来的巨大影响。参考文献:Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. W. & Prasher, D. C. Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science 263, 802–805 (1994).Shimomura, O., Johnson, F. H. & Saiga, Y., Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan Aequorea. J. Cell. Comp. Physiol. 59, 223–239 (1962).Morise, H., Shimomura, O., Johnson, F. H. & Winant, J. Intermolecular energy transfer in the bioluminescent system of Aequorea. Biochemistry 13, 2656–2662 (1974).Prasher, D. C., Eckenrode, V. K., Ward, W. W., Prendergast, F. G. & Cormier, M. J. Primary structure of the Aequorea victoria green-fluorescent protein. Gene 111, 229–233 (1992).Tsien, R. Y. The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67, 509–544 (1998).第二篇:辣根过氧化物酶作为解剖学电子显微镜(anatomical electron microscopy)的标记要绘制诸如视网膜的大容量组织中的突触联系(synaptic connection) James R. Anderson等人于2009年就已经主张应当将分子表达谱(molecular profiling)与电子显微镜图片相关联。如今,这里给出一个例子来说明分子表达谱仪(molecular profiler)如何得到很好的利用。Jianli Li等人采用电穿孔技术产生将携带有靶向到细胞膜的辣根过氧化物酶(membrane-targeted horseradish peroxidase, mHRP)基因的表达构建物导入神经元。辣根过氧化物酶发射可放大的波长为428nm的荧光。这些研究人员就使用它作为解剖学上的标记,与蝌蚪神经元的连续切片电子显微镜图片(serial section electron microscopy, SCEM)在空间上相互关联。辣根过氧化物酶的优势之一在于它在包括线粒体/小泡(vesicle)在内的细胞膜上均匀分布。它也有助于鉴定长轴突(axon)/小直径的树突(dendrite)。但是另一方面,不同于其他的标记,它不得不在动物仍然活着的时候通过电穿孔技术导入细胞才有效果。下面是一系列电子显微镜图片,其中远侧树突分支(distal dendritic branch),蓝色显示;带有轴突末端(axon terminal, 用粉红色显示)的突触,用白色箭头符号指示:http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131175420478195.jpg比例尺=1微米当从向右观看这一系列图片时,你能够看到树突如何缩减,而研究人员能够在他们的微回路(microcircuit)模型中重构这些图片。

  • 牛奶中的活性物质!

    从科学角度来看,人类喝牛奶绝不仅仅是简单地为了温饱,获取牛奶中的生物活性物质才是更重要的目的。乳汁是哺乳动物为哺育后代“量身订制”的“完美食物”,含有酪蛋白、乳清蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白等数百种生物活性物质。中国奶业协会乳品工业委员会副主任顾佳升老师表示,牛奶中有很多组分,除了我们了解的基本营养素以外,还有很多具有生物活性的营养物质,包括多种活性乳清乳蛋白,如免疫球蛋白、乳过氧化物酶等;还有许多肽类,如糖巨肽、磷酸肽等;另有与乳蛋白质结合而获得生理活性的微量元素、促生长因子、维生素和核苷酸等等。因为这些活性物质的存在,使牛奶可以抗菌、生物稳定、降血压、抗黏附、抗糖尿病、抗胆固醇、抗癌、免疫调节、防龋齿、减肥等等,这是牛奶与其它食物相比的独特优点。这些生物活性物质是乳汁中的精华成分,让牛奶具有了抵抗入侵的细菌病毒等致病原、激活体内免疫反应、维护机体健康等重要作用。

  • 【转帖】方舟子:四揭蒙牛关于OMP牛奶的谎言-兼说应该如何处罚蒙牛

    四揭蒙牛关于OMP牛奶的谎言-兼说应该如何处罚蒙牛 (2009-02-14 18:15:16) 标签:健康 分类:保健骗局   《蒙牛关于OMP牛奶的回应》中称:“OMP是以牛乳为原料,经脱脂、膜过滤等工艺制成的牛奶碱性蛋白混合物,主要成分为乳铁蛋白、乳过氧化物酶等。是蒙牛与新西兰乳品研发机构 TATUA公司共用引进和研究的,在美国、欧洲、日本、韩国、台湾等国家和地区使用多年的碱性牛奶蛋白,在日本和美国被称之为MBP(英文全称为Milk Basic Protein)。”  我们先来看看新西兰TATUA公司对乳铁蛋白、乳过氧化物酶这两种主要成分是怎么说的:  乳铁蛋白的功能包括“抑制细菌和杀灭细菌,抗真菌和抗寄生虫,自然抗氧化剂和免疫调节功能”,乳过氧化物酶的功能则为具有“抗李斯特氏菌和大肠杆菌的活性”(http://www.tatua.com/dairy/Specialty-Nutritionals)。均没有提到具有如蒙牛所说的“造骨功能”,显然这两种蛋白质不属于蒙牛所说的“造骨牛奶蛋白OMP”。而且这两种蛋白质早就被用于食品行业,无需蒙牛来“研发”。  那么新西兰TATUA公司提供给蒙牛的这一原料中还有什么成分呢?蒙牛公司近日向媒体出示了一张“新西兰农业及林业局食品安全认证”,这是新西兰TATUA公司于2007年2月将原料出口到中国时出具的,但是在这份文件中,该公司出口到中国的原料写的并非MBP,而是“Lactoferrin Co-Isolate”(乳铁蛋白共分离物)。这个原料都有什么成分呢?据新西兰TATUA公司网站的介绍,乳铁蛋白共分离物的成分包括“乳铁蛋白、乳过氧化物酶、生长因子、免疫球蛋白和溶菌酶。”(Co-isolate is composed of minor milk proteins including lactoferrin, lactoperoxidase, growth factors, immunoglobulins and lysozyme. http://web.archive.org/web/20040618222839/http://www.tatua.com/nutritionals/110.html)这些成分中,乳铁蛋白、乳过氧化物酶、免疫球蛋白和溶菌酶都与造骨无关,与造骨可能有关的只有生长因子,包括IGF-1。日本雪印牛奶公司在试图解释为何牛奶碱性蛋白MBP能促进骨代谢时,列举的理由之一也是因为MBP含有多种生长因子(Toba Y et al, Biosci Biotechnol Biochem. 2001 Jun 65(6):1353-7.),并举了一篇论文为证,该论文指出,牛奶乳清蛋白的碱性馏分之所以能刺激细胞生长,与乳铁蛋白、乳过氧化物酶、免疫蛋白等无关,而是因为含有包括IGF-1在内的生长因子(Francis GL et al, J Dairy Sci. 1995 Jun 78(6):1209-18.)。所以绕了这么大一圈子,蒙牛的“造骨牛奶蛋白”OMP还是没法摆脱和IGF-1的关系。  日本雪印牛奶公司就MBP安全性问题上报给美国FDA的材料中,列举MBP的成分时没有提到含有生长因子:要么雪印牛奶公司向FDA隐瞒,要么雪印牛奶公司的MBP和蒙牛使用的新西兰“乳铁蛋白共分离物”不是一回事。  新西兰TATUA公司出口到中国的乳铁蛋白在去年9月被检出含有三聚氰胺。这些出口到中国的乳铁蛋白的每吨售价为50万纽元(约34万美元)(http://finance.fivip.com/consumable/200810/01-286792.html),折算成人民币约每公斤2400元。乳铁蛋白是对“乳铁蛋白共分离物”的进一步纯化,是新西兰出口的最昂贵奶制品之一,“乳铁蛋白共分离物”的价格不会比它高。蒙牛特仑苏牛奶据其包装上的标注,每100克牛奶添加了不少于8毫克的OMP,按10毫克算,假如OMP就是“乳铁蛋白共分离物”,那么一盒240毫升特仑苏牛奶加了约24毫克的“乳铁蛋白共分离物”,成本不到6分钱,特仑苏牛奶却因此多卖了两块多钱。  在今天的新闻发布会上,蒙牛技术总监母智深居然在那里大谈“OMP就是MBP”,“OMP和IGF-1是截然不同的两回事”,忘了自己在一年前才发表论文声称OMP的主要成分就是IGF-1?蒙牛总裁杨文俊声称“OMP牛奶的同类产品在美国、日本等地已经热销多年”,而他们说的OMP同类产品就是MBP。MBP是在2006年3月为了进入美国市场才由日本雪印牛奶公司的代理人上报给美国FDA,FDA于2006年9月做了答复,那之前肯定还没有在美国上市,怎么可能在美国已经热销多年?我在美国也从未见过这类产品,美国市场上很少见这些乱七八糟的“高端”牛奶,基本上都是鲜牛奶。蒙牛真是蒙人不打草稿。  我曾经指出,要么蒙牛现在在蒙人,要么以前在蒙人。如果是现在在蒙人,那么OMP牛奶就有健康风险;如果是以前在蒙人,那么OMP牛奶以前就是在做虚假广告。现在由卫生部等6个部门(不是蒙牛新闻发布会说的“公安部等6个部门”,没有公安部什么事,蒙牛别吓唬人好不好?)的专家认为是蒙牛以前在蒙人,“蒙牛公司进口并使用OMP没有事先申请批准,并擅自夸大宣传产品功能,违反了《食品卫生法》的有关规定。”“有关执法监管部门将进一步对该企业的违法行为作出处理。”查《中华人民共和国食品卫生法》第四十五条:  “违反本法规定,未经国务院卫生行政部门审查批准而生产经营表明具有特定保健功能的食品的,或者该食品的产品说明书内容虚假的,责令停止生产经营,没收违法所得,并处以违法所得一倍以上五倍以下的罚款;没有违法所得的,处以一千元以上五万元以下的罚款。情节严重的吊销卫生许可证。”  蒙牛的违法所得有多少呢?蒙牛2007年特仑苏的销售额在30亿-40亿元左右,2008年的销售额还未公布。特仑苏大部分是所谓OMP牛奶。估计一下,蒙牛的非法所得起码也有几十亿,再加上处以违法所得一倍以上五倍以下的罚款,蒙牛应该被处罚的金额至少应该上百亿元,“有关执法监管部门”敢这么处理吗?[em0912]还是喝“纯牛奶”好!不给商家玩花样的机会![em0906]

  • 【转帖】专家认为饮用添加OMP的牛奶不会产生健康危害

    专家认为饮用添加OMP的牛奶不会产生健康危害针对近一个时期社会关注饮用内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司(以下简称蒙牛公司)生产的添加OMP的“特仑苏”牛奶是否存在安全性问题,卫生部会同工业和信息化部、农业部、商务部、工商总局、质检总局组织卫生、营养、毒理、食品、农业等方面的专家对蒙牛公司使用的OMP食用安全性进行了研讨。据称,OMP是蒙牛公司命名的商品名称,由上海统园食品技术有限公司代理从新西兰进口,作为乳品原料使用。OMP是牛奶经脱脂、膜过滤等方法获得的牛奶蛋白组分,主要成分为乳铁蛋白、乳过氧化物酶,产品具备新西兰食品安全署出具的安全证明。专家根据对OMP的来源、生产工艺、添加量、检验报告以及国际同类产品政府许可和国外使用情况,认为消费者饮用目前市场上该产品没有健康危害。OMP不是我国现行国家卫生标准允许使用的食品原料。依据《食品卫生法》的规定,进口没有国家卫生标准的产品应当经过卫生部的批准。蒙牛公司进口并使用OMP没有事先申请批准,并擅自夸大宣传产品功能,违反了《食品卫生法》的有关规定。对此,蒙牛公司已经按照有关执法部门的意见停止在产品中添加OMP,并表示将按照法律规定提出申请。有关执法监管部门将进一步对该企业的违法行为作出处理。

  • 人类为什么要喝牛奶?

    [color=#191919]是为了解决温饱吗?不是。如果为了解决温饱,那应该养牛然后宰了吃肉,肉里含有大量的脂肪蛋白,而养牛吃肉,牛只要足够大就行了。可是如果我们要获得牛奶,还需要让奶牛交配、生小牛,随后才能获得牛奶,可是牛奶中88%是水,含有的脂肪和蛋白跟吃肉是没法儿比的,但是为什么只有牛奶才称为最接近完美的食物呢?因为人们很早就认识到,只有乳才能把我们养大,让我们发育、健康成长,除了它什么都不行。随着科学研究的发展,尤其是生命科学的发展,人们发现牛奶中除了基本营养物以外,还有很多含量极低但有生物功效的活性物质,如[/color][color=red]生物活性乳蛋白、β-乳球蛋白、α-乳球蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白、溶菌酶、乳过氧化物酶、、糖巨肽、磷酸肽、低聚糖、共轭亚油酸、极性脂类、神经节苷脂、鞘脂类、中链甘油三酯、反式脂肪酸、乳矿物质、生长因子、乳中的约16种激素、维生素和核苷酸[/color][color=#191919],已被证明具有有利于人体健康的特性和功能。这些已被证实的有益作用包括抗菌、生物稳定、降血压、抗黏附、抗糖尿病、抗胆固醇、抗癌、免疫调节、防龋齿、减肥、益生菌和益生元。[/color]

  • 【原创】专家认为饮用添加OMP的牛奶不会产生健康危害

    针对近一个时期社会关注饮用内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司(以下简称蒙牛公司)生产的添加OMP的“特仑苏”牛奶是否存在安全性问题,卫生部会同工业和信息化部、农业部、商务部、工商总局、质检总局组织卫生、营养、毒理、食品、农业等方面的专家对蒙牛公司使用的OMP食用安全性进行了研讨。据称,OMP是蒙牛公司命名的商品名称,由上海统园食品技术有限公司代理从新西兰进口,作为乳品原料使用。OMP是牛奶经脱脂、膜过滤等方法获得的牛奶蛋白组分,主要成分为乳铁蛋白、乳过氧化物酶,产品具备新西兰食品安全署出具的安全证明。专家根据对OMP的来源、生产工艺、添加量、检验报告以及国际同类产品政府许可和国外使用情况,认为消费者饮用目前市场上该产品没有健康危害。 OMP不是我国现行国家卫生标准允许使用的食品原料。依据《食品卫生法》的规定,进口没有国家卫生标准的产品应当经过卫生部的批准。蒙牛公司进口并使用OMP没有事先申请批准,并擅自夸大宣传产品功能,违反了《食品卫生法》的有关规定。对此,蒙牛公司已经按照有关执法部门的意见停止在产品中添加OMP,并表示将按照法律规定提出申请。有关执法监管部门将进一步对该企业的违法行为作出处理。

  • 【讨论】请教乙醚中的过氧化物问题

    新购乙醚或放置一段时间的乙醚里面会含有过氧化物,一般蒸馏除去。请教大家:1. 会是那些过氧化物,有人做过GCMS吗?2.过氧化物会对柱子,特别是极性柱子有影响吗?3.在用乙醚做溶剂处理样品时,过氧化物对某些易氧化物质,例如醛类有无氧化作用?

  • 生物标记三部曲:绿色荧光蛋白、辣根过氧化物酶和小型单线态氧制造者

    生物标记三部曲:绿色荧光蛋白(GFP)、辣根过氧化物酶(HRP)和小型单线态氧制造者(MiniSOG)【towersimper注:本文为译文,每篇都有部分改动,仅用作研究之用,不得用作商业开发,转载请标明翻译者towersimper,第一篇来自Sowmya Swaminathan, Nature Cell Biology, "GFP: the green revolution", doi:10.1038/ncb1953, October 1, 2009;第二篇来自Andy, brainslab.wordpress.com,"Horseradish peroxidase as marker for anatomical em", April 3, 2011; 第三篇来自Andy, brainslab.wordpress.com, "MiniSOG, a light and electron microscopy fusable marker", April 16, 2011】 第一篇:绿色荧光蛋白: 绿色革命http://bbs.bioon.net/bbs/data/attachment/album/201107/23/1829154rjsutzjgu2tw4hf.jpg来自秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的两个触觉感受器神经元的细胞体(cell body)用编码β-微管蛋白的基因表达的绿色荧光蛋白标记,图片来自doi:10.1126/science.8303295.1994年,Chalfie等人在Science杂志发表一篇报道,表明来自维多利亚水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP),在没有任何A. Victoria的辅助因子存在下,能在活着的细菌和线虫细胞中用作蛋白定位和表达的标记。这种显示GFP作为体内研究蛋白的工具基本上改变了细胞生物学家能够解决的问题的性质和范围。1962年,Shimomura和他的同事们在A. victoria生物发光蛋白水母素(aequorin)的纯化过程中偶然间第一次发现了GFP。1974年,Morise和他的同事们在随后的纯化、晶体形成和从水母素到GFP能量转移的体外重建过程中,为GFP的荧光性质提供启迪,而且证实GFP接受来自水母素的能量转移后发射绿光。在此之后许多年,在外源系统中GFP是否需要水母素和可能来自水母的其他因子发出荧光,这仍然是一个公开的问题。1992年,也就是在GFP发现后的30年,Prasher等人克隆了编码GFP的基因,就为实验上评估它用作蛋白质的体内标记铺平道路。而在两年后,Chalfie等人证实当GFP在细菌和线虫细胞中表达时,它能够发出荧光。在线虫中,GFP是在一个表达β-微管蛋白的基因启动子的控制下表达的。它在线虫特异性神经元中的时空表达模拟了内源性β-微管蛋白基因的表达,因而证明GFP能够作为一种可靠的标记以便监控基因表达模式。此后不久,Roger Tsien的实验室对天然GFP进行改造使之变得更加明亮和耐光,以及在一个与常规显微镜过滤器装置相匹配的波长下激发,因而增加了它的实际适应性。GFP技术的下一个突破便是开发GFP变异体产生蓝色、青色和黄色荧光蛋白,因而能够使得影像实验在细胞和有机体中采用多种标记的蛋白。绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色荧光。而EGFP是增强型的GFP (enhanced GFP),发生了双氨基酸取代,亮氨酸(Leu)取代GFP上第64位苯丙氨酸(Phe),苏氨酸(Thr)取代了GFP上的第65位丝氨酸(Ser),与GFP相比,具有更强更稳定的绿色荧光。黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)其序列与GFP基本相同,不同之处就是把第203位Thr以Tyr取代,这样的GFP不发出绿色荧光,而发出较长波长的黄色荧光。青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)与此类似,也是GFP第66位Tyr(酪氨酸)被Thr(色氨酸)所取代的结果,发青色荧光。由此可见,GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似,只有1-2个氨基酸残基的变化。

  • 异丙醚中过氧化物的检测方法

    异丙醚中过氧化物的检测方法

    [align=left] 我也不知道把这个放在哪个分类,勉强放这里把~~[/align][align=left] 这是第一次原创,关于异丙醚中过氧化物的检测,最近有时间进行了一次试验,可以用比色法简单的定量(仅定出范围)。[/align][align=left] 主要是在反应过程中用来简单的中控,此方法相对快捷简便,但并非精密检测,如果有什么问题欢迎指点。[/align][align=left][font='微软雅黑','sans-serif'][size=18px][b] [size=16px] 异丙醚中过氧化物的检测方法(硫氰化铁)[/size][/b][/size][/font][/align][align=left][b]提出的检测要求:[/b]快捷简单,能够直接判断过氧化物的大致量。[/align][align=left][b]方法查询:[/b][/align][align=left] 1、淀粉碘化钾试纸:[font='Microsoft YaHei',Arial,Helvetica][color=#000000]最常用的是用淀粉碘化钾试纸来检测过氧化物,但是经测试,低浓度的过氧化物无法显色,因此试纸无法用来检测溶剂中的过氧化物。[/color][/font][/align][align=left][font='Microsoft YaHei',Arial,Helvetica][color=#000000] 2、淀粉碘化钾溶液:不同浓度的过氧化物,使用淀粉碘化钾溶液显色后,颜色非常接近,难以肉眼判断深浅,只能用来定性。[/color][/font][/align][align=left][font='Microsoft YaHei',Arial,Helvetica][color=#000000] 3、硫氰化钾与氯化铁溶液:未有关于这方面的详细介绍,自己进行测试。[/color][/font][/align][align=left][b]方法原理:硫氰化钾和氯化铁被氧化形成硫氰化铁,呈红色。[/b][/align][align=left] Fe2+过氧化物→Fe3+[/align][align=left] Fe3+硫氰化钾→Fe(SCN)3(血红色)[/align][align=left][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][b]异丙醚中过氧化物的质量分数限度要求(以H2O2计)%[/b][/color][/font][/align][align=left][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][b] [img=,501,173]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003181233226782_8146_3116636_3.jpg!w501x173.jpg[/img][/b][/color][/font][/align][align=left][color=black][b][font='微软雅黑','sans-serif'][back=white]试剂[/back][/font][/b][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black] 30%[/color][/font][font=&][back=white]过氧化氢 分析纯[/back][/font][color=black][back=white] 硫氰化钾 化学纯[/back][/color][color=black] 氯化亚铁 [back=white]化学纯[/back][/color][back=white] 亚硫酸氢钠 化学纯[/back][/color][back=white] 纯化水 /[/back][b][back=white]溶液配制(此处以30%的过氧化氢作为标准液测试)[/back][/b][font='微软雅黑','sans-serif'][back=&] 0.003%[/back][/font][font='微软雅黑','sans-serif']过氧化氢溶液:用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸取1ml30%过氧化氢于100ml容量瓶,用纯化水稀释定容,再用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸取稀释后过氧化氢溶液1ml至100ml容量瓶,用纯化水稀释定容,混匀备用,所得过氧化氢质量分数为0.003%。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][back=&] 0.005%[/back][/font][font='微软雅黑','sans-serif']过氧化氢溶液:用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸取0.167ml30%过氧化氢于10ml容量瓶,用纯化水稀释定容,再用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸取稀释后过氧化氢溶液1ml至100ml容量瓶,用纯化水稀释定容,混匀备用,所得过氧化氢质量分数约为0.005%。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][back=&] 0.01%[/back][/font][font='微软雅黑','sans-serif']过氧化氢溶液:用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸取0.333ml30%过氧化氢于10ml容量瓶,用纯化水稀释定容,再用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸取稀释后过氧化氢溶液1ml至100ml容量瓶,用纯化水稀释定容,混匀备用,所得过氧化氢质量分数约为0.001%。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][back=&] 0.5%[/back][/font][font='微软雅黑','sans-serif']氯化亚铁溶液:称取0.5g氯化亚铁固体于100ml容量瓶中,用水溶解并定容,混匀,所得氯化亚铁溶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量分数为0.5%。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][back=&] 0.5%[/back][/font][font='微软雅黑','sans-serif']硫氰化钾溶液:称取0.5g硫氰化钾固体于100ml容量瓶中,用水溶解并定容,混匀,所得硫氰化钾溶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量分数为0.5%。[/font][back=white] 显色溶液:量取适量0.5%氯化亚铁溶液与0.5%硫氰化钾溶液,按1:1混匀备用。[/back][back=white] 亚硫酸氢钠溶液(100g/L): 取适量亚硫酸氢钠,配制成100g/L备用。[/back][b][back=white]测定方法[/back][/b] 空白对照:取异丙醚4ml,加入2ml亚硫酸氢钠溶液,振摇2min,加水4ml振摇,静置分层后取异丙醚层1ml,加入1ml显色溶液,摇晃混匀后倒入比色管,放置5min。 标准比对溶液:分别取不同质量分数的过氧化氢溶液1ml,加入1ml显色溶液,摇晃混匀后倒入比色管,放置5min。 样品溶液:取待测异丙醚1ml,加入1ml显色溶液,摇晃混匀后倒入比色管,放置五分钟。[font='微软雅黑','sans-serif'] 沿比色管轴线方向观测所得血红色不得深于标准比对溶液的颜色。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=#990000] (注:此处为了更加精准因而用比色管,且加入的量相对精准,但是经测试,无需非常精准,也无需比色管,用简单的冷冻管,试管等透明的容器都可以,在本实验本身误差下,由容器,量取方面带来的误差结果不明显,只需要对照溶液相互之间加入的量一致就可以。)[/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][b][font='微软雅黑','sans-serif']结果分析[/font][/b][color=black] 分析纯异丙醚:样品溶液不得深于0.003%质量分数的标准比对溶液。[/color][color=black] 化学纯异丙醚:样品溶液不得深于0.005%质量分数的标准比对溶液。[/color][color=#000000] 工业级异丙醚:样品溶液不得深于0.01%质量分数的标准比对溶液。[/color][/font][b]此方法中,不同浓度的颜色相差很明显,肉眼即可辨别。以下为用冷冻管作为容器的图:[/b][img=,364,397]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003181241397051_3470_3116636_3.jpg!w364x397.jpg[/img][img=,143,405]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003181243017681_4750_3116636_3.jpg!w143x405.jpg[/img][b]上图可以清晰的辨别不同浓度之间的颜色,可以简单的定量0.003—0.001mol/L之间的过氧化物范围,如果需要更精准,则可以配制浓度差异更小的过氧化物进行测试,但此处未曾测试过,因为以上几种颜色已足够我们实验使用。以下附图为用淀粉碘化钾进行测试的颜色图一使用的冷冻管,颜色非常不明显,基本无法辨别。[img=,252,199]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003181248434297_5877_3116636_3.jpg!w252x199.jpg[/img]图二更换为了比色管,稀释了一下,颜色相对更为清晰,虽然图内能够勉强辨认,但是其实现实中肉眼是难以看出色差的。[img=,311,286]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003181249241813_8832_3116636_3.jpg!w311x286.jpg[/img]以上便是我自己的测试方法,如果大家有更好的也可以提出来,进行改进。不过我自己做完了倒是有几个疑问:1、为什么基本检测过氧化物的方法都是用淀粉碘化钾,滴定定量时也是用此试药来判断终点。淀粉碘化钾最大的优势是在哪里?2、我看过很多方法写的都是淀粉碘化钾溶液变蓝色即为有过氧化物,而我做的都是偏紫色,最蓝的一次也不过是蓝紫色,是做错了什么步骤?3、洗脱过氧化物的方法,主要以亚硫酸钠为主,但是我做了实验,亚硫酸钠的洗脱效果还不如亚硫酸氢钠,而亚硫酸氢钠更是远不如硫酸亚铁,那么为什么更多方法中使用的是亚硫酸钠呢?[/b][/align][align=left][/align]

  • 【转帖】蒙牛关于OMP牛奶的回应

    【转帖】蒙牛关于OMP牛奶的回应

    (转自新浪)蒙牛关于OMP牛奶的回应(声明全文)  蒙牛关于OMP牛奶的回应  1.OMP与IGF-1是两种完全不一样的物质。  • OMP是以牛乳为原料,经脱脂、膜过滤等工艺制成的牛奶碱性蛋白混合物,主要成分为乳铁蛋白、乳过氧化物酶等。是蒙牛与新西兰乳品研发机构TATUA公司共用引进和研究的,在美国、欧洲、日本、韩国、台湾等国家和地区使用多年的碱性牛奶蛋白,在日本和美国被称之为MBP(英文全称为Milk Basic Protein)。  • 经检测,特仑苏OMP牛奶中IGF-1的含量,与普通牛奶一样。IGF-1自然存在于所有牛奶中。  2.OMP就是国际上研究和使用多年的牛奶碱性蛋白MBP,其安全性受到了FDA等国际权威机构的认可。  • MBP获得了包括美国FDA(Food and Drug Administration:美国食品医药品局)的GRAS(Generally Recognized As Safe)认证、新西兰农业及林业局食品安全认证等多项权威认证。在FDA的“安全物质表”中(截至2007年6月29日)的认证号为GRN No196。FDA规定:MBP可以使用在食品中,并且对其用量不做任何限制。  • 蒙牛的OMP原料均从新西兰TATUA公司进口,所有原料均经过了海关和进出口检验检疫部门严格检查。TATUA公司提交的文件证明:OMP就是牛奶碱性蛋白MBP。TATUA公司从牛奶中提取、并在全世界销售这些基础蛋白质也已有20多年历史,专家认为,这些基础牛奶蛋白质的安全性是有保障的。  • 内蒙古质监局实地考察后的报告明确指出,“能够证明OMP牛奶产品质量安全性和未添加IGF-1”。  内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902112129_132521_1614451_3.jpg[/img]

  • 过氧化物的液相色谱分析

    [color=#444444]请问过氧化物用液相色谱可以分析吗,这个物质没有标样,是中间产物,请问有谁做过过氧化物色谱分析的,请教一下,具体的液相柱子,及条件等,[/color][color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]因为热分解所以不能用。滴定法也不想考虑啊[/color]

  • 过氧化物的液相色谱分析

    [color=#444444]请问过氧化物用液相色谱可以分析吗,这个物质没有标样,是中间产物,请问有谁做过过氧化物色谱分析的,请教一下,具体的液相柱子,及条件等,[/color][color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]因为热分解所以不能用。滴定法也不想考虑啊[/color]

  • 测定过氧化物含量时加入钼酸铵的作用?

    食品的过氧化物含量测定利用样品中加入硫酸,碘化钾,可溶性淀粉、硫酸锰,用硫代硫酸钠溶液滴定.食品中有过氧化物则可以使碘化钾中的碘游离出来而使淀粉显蓝色.而硫代硫酸钠的还原性可以把碘单质还原,而使蓝色消失.但是标准上还要求加入钼酸铵,不知道是什么原因?求助各位同仁!可以用钼酸钠代替吗?非常谢谢了!

  • 【求助】用DSC做有机过氧化物引发剂的半衰期

    请问用DSC做有机过氧化物的活化能、频率因子、分解速率常数并计算半衰期是不是要用专用的密封干锅呀比如过氧化甲乙酮、叔丁基过氧化-2-乙基碳酸脂。做成一氯代苯的稀溶液。加热到200℃左右。小弟没做过 如果有人懂的话指点我一下呀qq 57315240wangamada@163.com

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