核黄素维生素纯度标准物

[align=center][b]注射用水溶性维生素的分析（1）[/b][/align][align=center][b]——维生素C钠、烟酰胺、泛酸钠、盐酸吡哆辛、硝酸硫胺、核黄素磷酸钠[/b][/align][align=center][b][/b][/align][align=left]客户提供了注射用水溶性维生素粉针剂及对照品（维生素C钠、烟酰胺、泛酸钠、盐酸吡哆辛、硝酸硫胺、核黄素磷酸钠），要求本实验室依据客户所提供方法筛选合适色谱柱，实现粉针剂中各组分物质的良好分离，同时满足方法中对分离度及理论塔板数的要求。[/align][align=left][/align][align=left]首先，依据客户提供的色谱条件，对对照品溶液进行分析。尝试使用不同填料类型的色谱柱，包括CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII，AQ S5，AQ S3，SUPERIOREX ODS，CAPCELL PAK ADME及PFP色谱柱。[/align][align=left][/align][align=left]由于不同色谱柱的分离选择性不同，最终发现CAPCELL PAK C[sub]18 [/sub]MGII色谱柱在完全按照客户提供方法的前提下能够得到最佳分离结果，对照品溶液中各组分均能够得到良好分离（如图1），分离度均在3.0以上，满足客户1.5要求；理论塔板数按核黄素计为103983，满足客户大于15000的要求（见表1）。[/align][align=left][/align][align=center][img=,690,443]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041022_5661_2222981_3.jpg!w690x443.jpg[/img][/align][align=center]图1 CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII分析对照品溶液结果[/align][align=center] 1. 维生素C钠 2. 烟酰胺 3. 泛酸钠 4. 盐酸吡哆辛 5. 硝酸硫胺 6, 6-1, 6-2 核黄素磷酸钠[/align][align=left][img=,690,270]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041022_1444_2222981_3.jpg!w690x270.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center]表1 CAPCELL PAK C[sub]18 [/sub]MGII分析对照品溶液结果详表[/align][align=center][img=,458,316]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041022_2894_2222981_3.jpg!w458x316.jpg[/img][/align][align=center][/align][align=center]在上述色谱条件下，继续使用CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII色谱柱对粉针剂供试品溶液进行分析，各待测组分及相邻杂质均能够得到良好分离，结果见图2、图3及表2。[/align][align=center][/align][align=center][img=,682,427]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041023_7282_2222981_3.jpg!w682x427.jpg[/img][/align][align=center]图2 CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII分析供试品及空白溶液结果[/align][align=center]1. 维生素C钠 2. 烟酰胺 3. 泛酸钠 4. 盐酸吡哆辛 5. 硝酸硫胺 6, 6-1, 6-2 核黄素磷酸钠[/align][align=center][/align][align=left][img=,690,200]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041023_5300_2222981_3.jpg!w690x200.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=center][img=,690,455]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041024_9636_2222981_3.jpg!w690x455.jpg[/img][/align][align=center]图3 CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII分析供试品溶液结果放大图[/align][align=center] [/align][align=center]表2 MGII分析供试品溶液结果详表[/align][align=center][img=,487,538]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801041024_7687_2222981_3.jpg!w487x538.jpg[/img][/align][align=center][/align]

何莉萍CNS_08.148_核黄素[align=center][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]目录[/color][/size][/font][/align][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素的物理性质[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]1[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]2[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素的光物理和光化学性质[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]第二章核黄素的生理功能[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]2[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]1[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]4[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素与铁代谢[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]2[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]5[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素与心血管疾病[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]第三章 核黄素的应用[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]1[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]5[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]7[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]微生物法[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]参考文献[/size][/font][/url] [font='等线'][size=14px]9[/size][/font][align=center][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第一章 核黄素的理化性质[/color][/size][/font][/align][size=16px]核黄素是一种水溶性[/size][font='times new roman'][size=16px]B[/size][/font][size=16px]族维生素[/size][size=16px]。[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]920[/size][/font][size=16px]年第[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px]次发现[/size][size=16px]，[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]933[/size][/font][size=16px]年第[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px]次从卵蛋白中分离出来[/size][size=16px]，[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]935[/size][/font][size=16px]年核黄素的化学结构被鉴定[/size][size=16px]。[/size][size=16px]核黄素是人体新陈代谢酶系统的一个组成部分[/size][size=16px]，[/size][size=16px]也是生物生命活动中不可缺少的维生素之一[/size][size=16px]，[/size][size=16px]与人体内碳水化合物[/size][size=16px]、[/size][size=16px]脂肪及氨基酸代谢有着密切的关系[/size][size=16px]，[/size][size=16px]核黄素缺乏可以引起体内多种代谢障碍。[/size][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素的物理性质[/color][/size][/font][size=16px]水溶性维生素，但微溶于水，在[/size][font='times new roman'][size=16px]27.5℃[/size][/font][size=16px]下，溶解度为[/size][font='times new roman'][size=16px]12mg/100mL[/size][/font][size=16px]。可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液，在碱性溶液中容易[/size][size=16px]分[/size][size=16px]解，在强酸溶液中稳定。耐热、耐氧化。光照及紫外照射引起不可逆的分解。[/size][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素的化学性质[/color][/size][/font][size=16px]分子式为[/size][font='times new roman'][size=16px]C[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]17[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]N[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][size=16px]，化学结构式见图[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，具有一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物。橙黄色晶体，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]280℃即熔化分解。在平常的湿度下稳定，而且不受空气中氧的影响。微溶于水，溶液呈现出强的黄绿色荧光。不溶于有机溶剂，在强酸溶液中稳定；在碱性条件下或者暴露于可见光或紫外线中时不稳定。食物中的核黄素很容易吸收，但单独服用，则只有15%的吸收率。核黄素在生物体储存量不多，多余的在尿液中排出，使尿液呈鲜黄色。核黄素在生物界分布极广，各种组织中均含有核黄素，广泛地分布在所有的叶菜，温血动物和鱼的肉中，但各种食物的含量相差很大，每[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]一[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]百[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]克[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]食物含量低的只有0.01mg，高的可[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3.5mg，以肝脏含量最高，浅色蔬菜和薯类含量最低。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251438050080_5202_1608728_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][font='times new roman'][size=13px]1[/size][/font][size=13px]核黄素的化学结构[/size][/align][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素的光物理和光化学性质[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]在生物学上，核黄素具有重要作用，如：向光性，趋光性和光治疗，其本身又是一类重要的光敏化剂[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]，研究表明这些重要的光生物学过程大多与核黄素的激发态有关。由于核黄素的吸收波段很宽（从紫外到可见光）且系间窜越的量子产额较高（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Φ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ISC[/size][/font][font='arial'][size=16px]=[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]67[/size][/font][font='arial'][size=16px])[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]，故无论在生物体内还是体外的组织和器官，只要能透过光，就能激发产生激发态，并与细胞内的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]或其他组分发生反应，导致细胞死亡或加速衰老[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]研究发现，核黄素在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]337nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]激光作用下，可产生激发三重态；而在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]248nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]激光作用下，既可产生激发三重态，又可生成氧化性自由基，核黄素氧化性自由基比激发三重态具有更强的氧化性[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第二章核黄素的生理功能[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与生长发育[/color][/size][/font][size=16px]核黄素为机体健康和正常生长所必需，其形成的辅酶是许多氧化酶系统不可缺少的组成部分，在生物氧化过程中参与氢的传递，促进碳水化合物，蛋白质，脂肪，核酸的代谢。其缺乏可产生一些重要的影响，其中最主要的是生长障碍。杨焕民等人以[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px]日龄大鼠作实验时发现，低温下补充适量核黄素有利于生长激素和胰岛素的分泌，从而有利于生长；且通过增加肾上腺皮质束状带宽度及束状带和髓质细胞数，降低血清[/size][font='times new roman'][size=16px]T3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]T4[/size][/font][size=16px]皮质醇水平，促进机体冷适应[/size][size=16px]，[/size][font='arial'][size=16px]提高机体耐寒力。因此耐寒环境下适量补加核黄素有利于动物的生长[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。人体研究也得出相应的结论[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]：孕期核黄素摄入量与新生儿出生体重呈正相关，强化核黄素的食品能有效地改善小学生营养状况和促进其生长发育。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与铁代谢[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素的缺乏将导致人和动物铁吸收、储存、利用降低，其机制可能通过影响体内[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NAD[/size][/font][font='arial'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FMN[/size][/font][font='arial'][size=16px]氧化还原酶而起作用，核黄素缺乏时引起人和动物生长停滞，因而铁缺乏的同时，核黄素的严重缺乏将抑制儿童和幼龄动物对铁的需求，从而掩盖肌体铁的缺乏。因此，无论治疗核黄素缺乏病还是缺铁性贫血，同时补充铁和核黄素都是有益的[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]国内外大量的动物实验表明，核黄素缺乏可能通过影响小肠中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NADH[/size][/font][font='arial'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FMN[/size][/font][font='arial'][size=16px]氧化还原酶（即铁蛋白还原酶）活力而参与铁代谢[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][6][/size][/font][font='arial'][size=16px]，即核黄素缺乏可能影响到体内铁的吸收，从而导致缺铁性贫血[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（IDA）[/size][/font][font='arial'][size=16px]发生率的增多。人群调查证实，核黄素缺乏者的平均血红蛋白量[/size][/font][font='times new roman'][size=16px](Hb)[/size][/font][font='arial'][size=16px]与血清铁蛋白（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SF[/size][/font][font='arial'][size=16px]）浓度均低于正常者，且其贫血率及缺铁率高于核黄素营养状况正常者，全血谷胱甘肽还原酶活性系数与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Hb[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SF[/size][/font][font='arial'][size=16px]均呈负相关[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]在核黄素与铁同时缺乏的研究中,动物实验表明,核黄素缺乏对缺铁大鼠的铁状况不但不进一步协同加速恶化,相反起一定程度的缓解作用[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]其[/size][/font][font='arial'][size=16px]原因可能是核黄素与铁同时缺乏时,核黄素缺乏因明显地抑制了大鼠的生长,使体重增长缓慢、血容量扩充不明显,使机体对铁的需求相对降低,即核黄素缺乏对铁状况有“节约效应”。而单纯缺铁时,体重增长抑制远不如核黄素和铁同时缺乏时明显,血容量仍大量扩充,机体对铁的需求大,饲料又缺铁,就易出现铁营养状况的恶化。因此,二者同时缺乏时,核黄素缺乏通过其对生长的抑制作用而掩盖铁状况的恶化。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与癌[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]大量的流行病学和动物实验资料表明,核黄素等微量营养素具有防癌和抗癌作用。据调查发现[/size][/font][font='arial'][size=16px]：[/size][/font][font='arial'][size=16px]伊朗[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='arial'][size=16px]中国等地居民因核黄素缺乏或严重摄入不足导致慢性食道炎普遍存在或食管癌区域高发[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font][font='arial'][size=16px]。林英等研究也证实:补充核黄素组的食管癌前病人的食管上皮细胞增生转换的好转率和稳定率明显高于安慰剂组。可见核黄素可抑制食管上皮增生或促进其向正常转化[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。除影响上皮组织完整性外,核黄素还有抗突变作用,经[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Ames[/size][/font][font='arial'][size=16px]试验检测,核黄素是黄曲霉毒素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B1[/size][/font][font='arial'][size=16px]突变剂的很有效的拮抗物[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px] 周纯先[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]指出:小鼠腹腔注射核黄素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]kg[/size][/font][font='arial'][size=16px]以上及饮水含核黄素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]时,可显著降低[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HgCl2[/size][/font][font='arial'][size=16px]致小鼠微核作用 随后李建端等以大鼠作实验时发现,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RPMI1640[/size][/font][font='arial'][size=16px]培养基中添加核黄素([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]26[/size][/font][font='arial'][size=16px]～[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]130μmol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px])可显著抑制甲基苄基亚硝胺([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MBNA[/size][/font][font='arial'][size=16px])的致细胞突变作用[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与心血管疾病[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素通过黄素辅酶参与机体的生物氧化还原反应，抑制脂质过氧化，减少自由基的生成，保护心血管系统免受氧化损伤。而核黄素缺乏会激发细胞凋亡，造成正常细胞损伤，削弱了机体的抗氧化能力。研究表明，氧化应激的过度和机体抗氧化能力的不足是心血管疾病和其他疾病的发病机制之一[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。单细胞凝胶电泳实验显示，冠状动脉疾病患者与正常健康者对照比较[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]损伤程度显著升高，而且损伤程度与总抗氧化能力呈负相关。冠心病患者总抗氧化能力下降，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]损伤增加，而且[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]损伤增加与年龄相关的抗氧化酶减少和修复能力的下降有关。核黄素作为抗氧化剂，可能有助于保护[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]免于受损。刘秀玲等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][16][/size][/font][font='arial'][size=16px]报道，适宜浓度的核黄素能降低过氧化氢诱导的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]氧化损伤。殷慧群[/size][/font][font='arial'][size=16px]等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][17][/size][/font][font='arial'][size=16px]研究证明，[/size][/font][font='arial'][size=16px]通过核黄素干预后[/size][/font][font='arial'][size=16px],有助于保护冠状动脉血管内皮,维持内皮功能的完整性[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]综上所述，核黄素是机体必需微量营养素之一，具有广泛的生理功能，世界卫生组织（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]WTO[/size][/font][font='arial'][size=16px]）将其列为评价人体生长发育和营养状况六大指标之一。但我国人均每日摄取入核黄素（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]VB2[/size][/font][font='arial'][size=16px]）不足[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='arial'][size=16px]尤见于儿童、青少年、孕妇，。因此，正确引导儿童的食物消费，优化膳食模式，增加富含核黄素等一些微量营养素食物的摄入，如：动物内脏，奶类，蛋类，豆制品及蔬菜，并对缺乏者采用适宜的干预措施和核黄素药物治疗，仍是当前营养工作中的一个重要环节。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第三章 核黄素的应用[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6] 核黄素与放射性黏膜炎[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6] [/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]肿瘤患者在放疗、化疗过程中容易出现口腔黏膜炎、肠黏膜炎、胃溃疡等，严重时可导致全身性感染，危及生命。对于中晚期鼻咽癌，同期放化疗已经成为标准的治疗模式。然而同期放化疗在杀伤肿瘤细胞的同时也造成对正常组织的损伤，尤其是黏膜炎加重，降低了部分患者的耐受性，增加了患者的痛苦。在实际临床工作中也可能因为耐受性的问题而调整治疗强度，中断、甚至停止治疗。因此在治疗期间防治黏膜炎已成为鼻咽癌同期放化疗过程中面临的主要问题之一。[/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄[/size][/font][font='arial'][size=16px]素类药物对治疗黏膜炎和口腔溃疡有较好的疗效[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]18[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。蒋秀美等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20][/size][/font][font='arial'][size=16px]报道，核黄素可用于预防造血干细胞移植后口腔黏膜炎，使黏膜炎损伤程度减轻，恢复时间比较快。[/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素缺乏间接地削弱了机体的抗氧化功能，而补充核黄素则可能增加机体的抗氧化功能，从而可以很好地预防黏膜炎和口腔溃疡，提高了放疗、化疗患者的耐受力[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3.2 核黄素与秋季腹泻[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]秋季腹泻是儿科最常见的疾病之一，估计我国[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]岁以下小儿中腹泻病平均 每年[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]．[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]次/人，而秋季腹泻占[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]87%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='arial'][size=16px]主要病原是轮状病毒。临床应用核黄素治疗小儿腹泻，增加了机体的抗氧化功能，使肠黏膜细胞得到快速修复，从而使其吸收和分泌功能恢复正常[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3.3 核黄素与烧伤[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素是一种可用于中小面积烧伤创面的安全、有效的外用药。大面积烧伤的患者长时间大剂量应用抗生素[/size][/font][font='arial'][size=16px], 可诱发核黄素缺乏, 最终导致真菌感染加重, 辅以核黄素治疗有利于防止真菌感染[/size][/font][font='arial'][size=16px]。其机制可能是核黄素参与了生物氧化作用和机体三大代谢过程[/size][/font][font='arial'][size=16px], 足量的核黄素使体内酸性物质减少, 不利于真菌生长, 从而使患者不易发生真菌感染[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3.4 [/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与心血管疾病[/color][/size][/font][font='arial'][size=18px] [/size][/font][font='arial'][size=18px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素类药物对患者心脏功能有一定的改善作用[/size][/font][font='arial'][size=16px], 核黄素通过黄素辅酶参与机体的生物氧化还原反应, 抑制脂质过氧化, 减少自由基的生成, 保护心血管系统免受氧化损伤。[/size][/font][font='arial'][size=16px]而核黄素缺乏会激发细胞凋亡[/size][/font][font='arial'][size=16px], 造成正常细胞损伤, 削弱了机体的抗氧化能力[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][align=center][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第四章核黄素的检测[/color][/size][/font][/align][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].1.[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]高效液相色谱法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]原理[/size][/font][font='arial'][size=16px]试样在稀盐酸环境中恒温水解,调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='arial'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px],用木瓜蛋白酶和高峰淀粉酶酶解,定容过滤后,滤液经反相色谱柱分离,高效液相色谱荧光检测器检测,外标法定量。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][size=16px].[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px].[/size][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][size=16px]分析步骤[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样制备[/size][/font][font='arial'][size=16px]取样品约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500g[/size][/font][font='arial'][size=16px],用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用。称取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2g[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10g[/size][/font][font='arial'][size=16px](精确至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]01g[/size][/font][font='arial'][size=16px])均质后的试样(试样中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的含量大于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5μg[/size][/font][font='arial'][size=16px])于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]具塞锥形瓶中,加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]121[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]下保持[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30min[/size][/font][font='arial'][size=16px],冷却至室温后取出。用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]氢氧化钠溶液调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='arial'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px],加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]混合酶溶液,摇匀后,置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解。将酶解液转移至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]容量瓶中,加水定容至刻度,用滤纸过滤或离心,取滤液或上清液,过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]45μm[/size][/font][font='arial'][size=16px]水相滤膜作为待测液。（注:操作过程应避免强光照射）[/size][/font][font='arial'][size=16px]不加试样,按同一操作方法做空白试验。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].仪器条件[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]a[/size][/font][font='arial'][size=16px])色谱柱:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]C18[/size][/font][font='arial'][size=16px]柱,柱长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]150mm[/size][/font][font='arial'][size=16px],内径[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6mm[/size][/font][font='arial'][size=16px],填料粒径[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5μm[/size][/font][font='arial'][size=16px],或相当者[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]b[/size][/font][font='arial'][size=16px])流动相:乙酸钠溶液([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]05mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px])-甲醇([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]65[/size][/font][font='宋体'][size=16px]∶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]35[/size][/font][font='arial'][size=16px]) [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]c[/size][/font][font='arial'][size=16px])流速:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]min[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]d[/size][/font][font='arial'][size=16px])柱温:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]e[/size][/font][font='arial'][size=16px])检测波长:激发波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]462nm[/size][/font][font='arial'][size=16px],发射波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]522nm[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]f[/size][/font][font='arial'][size=16px])进样体积:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20μL[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].标准曲线的制作[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样溶液的测定[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到相应的峰面积,根据标准曲线得到待测液中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的浓度。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].空白试验[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]要求空白试验溶液色谱图中应不含待测组分峰或其他干扰峰。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='arial'][size=16px]精密度[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px]%。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][font='arial'][size=16px].其他[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]当取样量为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]00g[/size][/font][font='arial'][size=16px]时,方法检出限为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]02mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px],定量限为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]05mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]荧光分光光度法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]原理[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]440nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的浓度成正比。在波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]525nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]下测定其荧光强度。试液再加入连二亚硫酸钠,将维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为试样中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]所产生的荧光强度。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]分析步骤[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样制备[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]试样的水解取样品约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500g[/size][/font][font='arial'][size=16px],用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用。称取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2g[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10g[/size][/font][font='arial'][size=16px](精确至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]01g[/size][/font][font='arial'][size=16px],约含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]200μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px])均质后的试样于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]具塞锥形瓶中,加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60mL0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]的盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]121[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]下保持[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30min[/size][/font][font='arial'][size=16px],冷却至室温后取出。用氢氧化钠溶液调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='arial'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]试样的酶解加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]混合酶溶液,摇匀后,置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]过滤将上述酶解液转移至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]容量瓶中,加水定容至刻度,用干滤纸过滤备用。此提取液在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]冰箱中可保存一周。注:操作过程应避免强光照射。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].氧化去杂质[/size][/font][font='arial'][size=16px]视试样中核黄素的含量取一定体积的试样提取液(约含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px])及维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]标准使用溶液分别置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]的带盖刻度试管中,加水至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]。各管加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]冰乙酸,混匀。加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL30g[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]高锰酸钾溶液,摇匀,放置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2min[/size][/font][font='arial'][size=16px],使氧化去杂质。滴加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]%过氧化氢溶液数滴,直至高锰酸钾的颜色褪去。剧烈振摇试管,使多余的氧气逸出。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的吸附和洗脱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]吸附柱硅镁吸附剂约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1g[/size][/font][font='arial'][size=16px]用湿法装入柱,占柱长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px](约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5cm[/size][/font][font='arial'][size=16px])为宜(吸附柱下端用一小团脱脂棉垫上),勿使柱内产生气泡,调节流速约为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60[/size][/font][font='arial'][size=16px]滴/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]min[/size][/font][font='arial'][size=16px]。（注:可使用等效商品柱）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]过柱与洗脱将全部氧化后的样液及标准液通过吸附柱后,用约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]热水淋洗样液中的杂质。然后用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]洗脱液将试样中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]洗脱至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]容量瓶中,再用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]水洗吸附柱,洗出液合并至容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀后待测定。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].标准曲线的制备[/size][/font][font='arial'][size=16px]分别精确吸取维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]标准使用液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]25mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mL[/size][/font][font='arial'][size=16px](相当于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]25μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px])或取与试样含量相近的单点标准按[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]操作。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样溶液的测定[/size][/font][font='arial'][size=16px]于激发光波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]440nm[/size][/font][font='arial'][size=16px],发射光波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]525nm[/size][/font][font='arial'][size=16px],测量试样管及标准管的荧光值。待试样管及标准管的荧光值测量后,在各管的剩余液(约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7mL[/size][/font][font='arial'][size=16px])中加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mL20[/size][/font][font='arial'][size=16px]%连二亚硫酸钠溶液,立即混匀,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20s[/size][/font][font='arial'][size=16px]内测出各管的荧光值,作各自的空白值。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].精密度[/size][/font][font='arial'][size=16px]在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px]%。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][font='arial'][size=16px].其他[/size][/font][font='arial'][size=16px]当取样量为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]00g[/size][/font][font='arial'][size=16px]时,方法检出限[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]006mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px],定量限：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]02mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]微生物法[/color][/size][/font][size=16px]某一种微生物的生长繁殖必需某一种维生素，；例如干酪乳酸杆菌的生长需要核黄素，培养基中若缺乏这种维生素该细菌则不能生长。在一定条件下，该细菌生长情况，以及它的代谢物乳酸的浓度与培养基中该维生素含量成正比，因此可以用浑浊度的测定法来测试试样中核黄素的含量。[/size][size=16px]微生物法测定食物中核黄[/size][size=16px]素[/size][size=16px]是经典方[/size][size=16px]法，[/size][size=16px]特异性和灵敏度均高[/size][size=16px]，[/size][size=16px]但方法费时[/size][size=16px]，[/size][size=16px]周期较长[/size][size=16px]，已从国家标准中删除。[/size][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]参考文献[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][1]Bensasson R V,Land E J,Truscott T G.Flash Photolysis and Pulse Radiolysis in Biologyand Medicine [J],Oxford:Pergamon Press,1993:140-147[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][2]Ito K,Inous Yamamoto K,etal.8-Hydroxyguanosine formation at the5-GG3 sequences in double-stranded DNA by UV radiation with riboflavin[J].Journal Biological Chemistry.1993:268:13220-13227[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][3]Frier C Fontecave M,Mouscadet J,et al. Flavin-oligonucleotide conjugates sequence specific photocleavage of DNA [J].Chemical Communication,1998:2457-2458[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]4[/size][/font][font='arial'][size=12px]]陆长元,韩镇辉,蔡喜臣,陈雨玲,姚思德.核黄素(维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]B2[/size][/font][font='arial'][size=12px])的光物理和光化学性质[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].中国科学([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]B[/size][/font][font='arial'][size=12px]辑化学),[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2000[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]05[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]428[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]435[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][5]Delane AA,Powers HJ.The influence of riboflavin deficiency on absorption and liver storage of iron in the growth rat[J].Br J Nutr,1986,8(1):41.[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][6]Delane AA,Powers HJ.Efeccts of combined riboflavin and iron deficicncy on the hematological status and iron concert ration of the rat[J].JNutr,1986,116:1257.[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]7[/size][/font][font='arial'][size=12px]]柳启沛,陈文根,张琪,翁聪颖,朱朝勇,邓春勤,朱元桢,张亚非,沈镇平,徐达道.铁、核黄素与贫血关系研究及其防治应用[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].医学研究通讯,[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]1994[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]10[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]29[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]30[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]8[/size][/font][font='arial'][size=12px]]项昭保,戴传云,朱蠡庆.核黄素生理生化特征及其功能[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].食品研究与开发,[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2004[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]06[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]90[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]92[/size][/font][font='arial'][size=12px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]95[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]9[/size][/font][font='arial'][size=12px]][/size][/font][size=12px]陈文[/size][size=12px]根.核黄素缺乏对铁代谢的影响[/size][size=12px][[/size][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][size=12px]]国外医学+卫生学分册[/size][size=12px]，[/size][font='times new roman'][size=12px]1990[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]) [/size][/font][font='times new roman'][size=12px]283[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][10][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff]Mu?ozN.,GrassiA.,QiongShen,etal.PRECURSORLESIONSOFOESOPHAGEALCANCERINHIGH-RISKPOPULATIONSINIRANANDCHINA[J].TheLancet,1982,319(8277):876-879.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff][11]林英,王旗,朱明君,陈萍萍.核黄素营养水平对食管上皮增生转化的影响[J].河南预防医学杂志,1995(04):192-193.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff][12]郭志成.维生素对突变的抑制作用[J].解放军预防医学杂志,1993(05):396-400.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff][13]周纯先,肖棣,王帮霞,王允滋.维生素B2拮抗HgCl2致小鼠微核作用的研究[J].癌变.畸变.突变,1995(04):220-221.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff][14]李建端,赵勤,李红娅,苗健,关链,陈本懋.核黄素等抗甲基苄基亚硝胺的致细胞突变作用[J].河南医科大学学报,1995(03):227-230.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]15[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='times new roman'][size=12px]DemirhagR，YilmazR，KocyigitA．RelationshipbetweenDNAdamage，totalantioxidantcapacityandcoronaryarterydisease［J］．MutatRes，2005，570(2):197-20[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]16]刘秀玲，王俐，姜春花，等．硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响［J[/size][/font][font='times new roman'][size=12px].[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]上海交通大学学报:医学版[/size][/font][font='times new roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2009[/size][/font][font='times new roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]29(9):1049-1052．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]17[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='times new roman'][size=12px]殷慧群，陈冬云，周云泳[/size][/font][font='times new roman'][size=12px].[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]核黄素对心肌缺血再灌注损伤时一氧化氮及其合酶的影响［J[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]］[/size][/font][font='times new roman'][size=12px].皖南医学院学报[/size][/font][font='times new roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2005[/size][/font][font='times new roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]24(3):179-181．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]18[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='arial'][size=12px]符起亚，邓芳成，张治汉．长效核黄素治疗复发性口腔溃疡患者疗效观察及对血清[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]IL[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2[/size][/font][font='arial'][size=12px]水平的影响［[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]］．海南医学院学报，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2009[/size][/font][font='arial'][size=12px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]15[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]10[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]1303[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]1304[/size][/font][font='arial'][size=12px]．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]19[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='arial'][size=12px]史建国．核黄素磷酸钠防治放射性口腔咽炎的临床研究［[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]］．中国肿瘤临床与康复，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2007[/size][/font][font='arial'][size=12px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]14[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]3[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]272[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]273[/size][/font][font='arial'][size=12px]．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]20[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='arial'][size=12px]蒋秀美，芮雪芹，濮益琴，等．长效核黄素预防血液病造血干细胞移植后口腔黏膜炎［[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]］．江苏医药，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2009[/size][/font][font='arial'][size=12px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]35[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]6[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]727[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]728[/size][/font][font='arial'][size=12px]．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][21][/size][/font][font='arial'][size=12px]李娜,杨建云,肖炳坤,黄荣清.核黄素临床应用研究进展[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].解放军医药杂志,[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2012[/size][/font][font='arial'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]24[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]04[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]52[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]54[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]22[/size][/font][font='arial'][size=12px]] [/size][/font][font='times new roman'][size=12px]GB5009[/size][/font][size=12px].[/size][font='times new roman'][size=12px]85[/size][/font][size=12px]—[/size][font='times new roman'][size=12px]2016[/size][/font][size=12px]食品安全国家标准 食品中维生素[/size][font='times new roman'][size=12px]B2[/size][/font][size=12px]的测定[/size]

10，抽取5个版友）；中奖名单：sixingxing（注册ID：v2889187）捌道巴拉巴巴巴（注册ID：v3082413）qgp（注册ID：qgp）千层峰（注册ID：jxyan）牛一牛(注册ID：v2700892)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607041638_599103_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607041638_599104_1610895_3.png积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================维生素B2方法：HPLC基质：药品应用编号：101169化合物：杂质a；杂质b；核黄素磷酸钠固定相：Diamonsil C18(2)色谱柱/前处理小柱：Diamonsil 5μm C18(2), 250 x 4.6mm色谱条件：流动相：甲醇/缓冲盐 流速：1.0 mL/min 温度：30 ℃ 检测器：UV 267 nm文章出处：AN: D1125关键字：维生素B2，HPLC，Diamonsil C18(2)，钻石二代，核黄素磷酸钠谱图：http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/D1125%20copy.png图例：1. 杂质a；2. 杂质b；3. 核黄素磷酸钠

http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1009.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1009.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1009.gif婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定；http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1003.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1003.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1003.gif维生素B2（核黄素）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112042054_335483_2206832_3.jpg中文名称：维生素B2，核黄素英文名称：Vitamin B2，riboflavin其它名称：乳黄素；卵黄素；7,8-二甲基-10-(1'-D-核糖基)-异咯嗪定义： 在自然界分布广泛的一种维生素。是哺乳动物必需的营养物，其辅酶形式是黄素单核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸。维生素B2是机体中许多酶系统的重要辅基的组成成分，参与物质和能量代谢。物理性质 熔点： 290℃ 溶解性： 微溶于水，在乙醇中的溶解性比在水中差。不溶于乙醚和三氯甲烷，可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液。 比旋光度： -135°（c=5, 0.05 M NaOH）化学性质 CAS号： 83-88-5 分子式： C17H20N4O6 分子量： 376.37核黄素水溶性较低，但在碱性溶液中容易溶解，在强酸溶液中稳定，光照及紫外照射引起不可逆的分解。核黄素在机体中有递氢的作用，并是机体中一些重要的氧化还原酶的辅酶。肝脏是最丰富的来源之一，肾脏、心脏亦含有相当可观的含量。样品前处理1、称取5g~10g（精确至0.01g）试样于150mL三角瓶中，加入60mL 0.1mol/L盐酸，充分摇匀；2、用棉塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却至40℃下取出，轻摇数次；3、用2.0mol/L乙酸钠溶液调PH值至4.0左右，加入2.0ml混合酶溶液，摇匀后，置于37℃培养箱中过夜；

高效液相色谱法测定大鼠血浆和全血中核黄素的含量韦京豫， 郭长江， 杨继军， 蒋与刚， 李云峰， 徐琪寿（军事医学科学院卫生学环境医学研究所，天津）摘要：为了直接反映核黄素营养状况对血中核黄素水平的影响，建立了高效液相色谱测定大鼠血浆及全血中核黄素含量的方法。采用Diamonsil C18色谱柱250mmx4.6mm i.d.5um）分离，以甲醇5mol/l乙酸铵（体积比为1.2ml/min）为流动相，流速1.2ml/min，荧光检测器检测（激发波长450nm，发射波长：520nm）。样品经乙腈、三氯甲烷处理后进样分析。核黄素测定的线性范围5-200nmol/l，最低检测限为2.5nmol/l(s/n=2),日内测定的峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.2%,日间测定的RSD=4.3%。核黄素在血浆样品中的加标回收率为97.0%-104%，在全血样品中的加标回收率为97.4%-104.4%.关键词：高效液相色谱法；核黄素；血浆；全血；大鼠http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207241234_379356_2355529_3.jpg

蛋鸡产蛋期复合鸡饲料中维生素B2的测定简介 维生素B2又叫核黄素，微溶于水，在中性或酸性溶液中加热是稳定的。为体内黄酶类辅基的重要组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用），当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为嘴、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。体内维生素B2的储存是很有限的，因此每天都要由饮食提供。 鸡蛋中含有多种营养物质，功效很多，其中由于鸡蛋中含有较多的维生素B2具有保健功能，维生素B2可以分解和氧化人体内多种致癌物质从而达到预防癌症的功效。 鸡蛋中维生素B2的主要来源是产蛋母鸡通过鸡饲料所得，因此鸡饲料中维生素B2的合理含量非常重要，鸡饲料中维生素B2的检测理所当然也就非常的重要，也非常的必要。尤其是喂产蛋期产蛋母鸡的饲料，一定得严格把关。 维生素B2的分子式：C17H20O6N4 维生素B2的分子量：376.37 维生素B2的结构式：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308311219_461293_2369266_3.jpg维生素B2的显微照片http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308311219_461294_2369266_3.png实验部分色谱条件色谱柱：Pgrandsil STC 色谱柱 C18 250*4.6mm，5um检测波长：267nm 流动相：在已经装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mg乙二胺四乙酸二钠，1.1g庚烷磺酸钠，待全部溶解后，加入25ml乙酸5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度，摇匀。用乙酸或三乙胺调节该溶液的pH值为3.4，滤膜过滤后，取该溶液860ml与140ml甲醇混合，脫气，待用。流速：1mL/min柱温：室温进样量：10.0uL5 结果 采用上述方法测定饲料中的维生素A乙酸酯的含量两次平行测定所得结果的相对偏差不大于1%，结果准确。6 结论 以上检测蛋鸡产蛋期复合鸡饲料中维生素B2的方法操作简单，检出限低，结果准确、可靠。该方法适用检测蛋鸡产蛋期复合鸡饲料中维生素B2。

前段时间拿到一个饲料样品，要检测饲料中维生素A和维生素K3，看标准两者用的流动相都是甲醇-水，第一反映就是不是可以梯度洗脱同时测定两个成分，采用定时变换检测波长的方法实现检测。结果很失败，在此分享一下分析过程。 先看标准方法： GB/T 17817-2010 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法[img=,682,136]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292030_01_1638724_3.png[/img][img=,690,336]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292030_02_1638724_3.png[/img] GB/T 7294-2009 饲料添加剂亚硫酸氢钠甲萘醌（维生素K3）[img=,690,506]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292024_01_1638724_3.png[/img] GB/T 18872-2002 饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法 维生素K3的检测原理是在碱性条件下，水溶性的亚硫酸氢钠甲萘醌脱去亚硫酸氢钠生成脂溶性的甲萘醌，用三氯甲烷萃取，吸取适量经甲醇稀释后上机检测。[img=,680,508]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292025_01_1638724_3.png[/img]一、第一次实验：按标准维生素K3的提取过程太麻烦了，且三氯甲烷并不是随便可以买到，那能不能像维生素A一样直接甲醇提取后检测？1、查维生素K3（亚硫酸氢钠甲萘醌）理化特性:易溶于水和热乙醇，难溶于冰乙醇，不溶于苯和乙醚，水溶液PH4.7-7.常温下稳定，遇光易分解。看下面的结构式：[img=,247,199]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292009_01_1638724_3.png[/img]看性质肯定可以溶解在90%甲醇-水里，取亚硫酸氢钠甲萘醌适量，在棕色容量瓶中90%甲醇溶解后上机检测。2、结果出峰极快，受亚硫酸根强极性基团的影响，维生素K3在反相色谱上完全不保留且峰形很差，说明不能直接提取后上机检测，第一次以失败告终。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709081927_01_1638724_3.jpg[/img]二、第二次实验：老实的按标准方法（GB/T 18872-2002 饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法）？显然不好，还是不能同时测定维生素A和维生素K3，能不能碱性条件下脱亚硫酸氢钠后纯甲醇提取后上机检测呢？1、由于维生素A的提取方法是65度纯甲醇超声提取30分钟，那么就先取适量维生素A和维生素K3置100mL棕色容量瓶中，由于手上没有氢氧化铵，所以加入5mL碳酸钠溶液代替，加入后超声振摇1min，即有白色沉淀析出（可能是碳酸钠与甲萘醌的混合物），立即加入80mL甲醇，65度超声提取30分钟，过滤取，取滤液稀释至合适浓度上机检测。2、结果几乎无甲萘醌峰出现，观察提取液的颜色，基本可以确定是甲萘醌都氧化成了[color=#cc0000]羟基苯醌[/color]。如下呈褐色的滤液。第二次失败。[img=,602,337]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292059_01_1638724_3.png[/img] 还有一个原因是用甲醇提取与用三氯甲烷提取有明显的区别，是甲醇与碳酸钠溶液是有一定互溶性的，而三氯甲烷与碳酸钠溶液不互溶。甲醇的碳酸钠溶液可能也会促进甲萘醌的破坏。三、第三次实验1、实验方法：维生素A与维生素K3分别按标准方法提取，再吸取甲萘醌的三氯甲烷溶液适量置提取好的维生素A提取液中，混匀，上机检测，梯度洗脱程序如下：[img=,509,384]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709292142_01_1638724_3.png[/img]2、结果甲萘醌与维生素A可以实现分离与同时检测，但每针的分析时间太长，与分别单独检测维生素A与维生素K3，每针分析时间只要10分钟相比，没有优势，如果还要同时分析维生素D与维生素E的话，分析时间就会更长，另外也有可能存在提取维生素A时有少量甲萘醌生成，造成结果偏高的误差。其它实验证明维生素A、D、E可能在98%甲醇下同时分析。至此，第三次实验也算失败。[img=,620,512]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709300842_01_1638724_3.jpg[/img]　　　　　　　　　　　　　维生素Ｋ3（7.1min）与维生素Ａ(21.4min)同时检测图谱[img=,581,500]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709300842_02_1638724_3.jpg[/img]　　　　　　　　　　　　　　　　维生素Ａ样品图谱（98%甲醇等度洗脱）[img=,588,492]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709300842_03_1638724_3.jpg[/img]　　　　　　　　　　　　　　　维生素Ｋ3样品图谱（80%甲醇等度洗脱） 综上，本次最终还是选择按标准方法分别检测维生素A与维生素K3，在检测维生素K3由标准方法的旋转振荡器改为普通摇床振荡。这次的经验告诉我，要改进方法真的不容易，进行方法开发前一定要充分了解待测组分的理化性质，充分理解参考文献的检测原理与注意事项。看到亚硫酸根有没有人会考虑使用离子对试剂四丁基氢氧化铵和四丁基溴化铵的，估计也是不行的，碱性条件下会水解。