枯草芽胞杆菌枯草亚种

有了解枯草芽孢杆菌的么 3610和168trpc2两种菌株有什么不同吗

枯草芽孢杆菌芽孢的制备，可以直接用固体培养基培养芽孢后离心获取吗

枯草芽孢杆菌检测鉴定方法有哪些？是否有相应标准？谢谢

枯草芽孢杆菌有没有什么选择性培养基，或显色培养基呢？ 在营养琼脂上培养呈褶皱菌斑，加上革兰氏镜检，是否能初步鉴定为枯草呢？ 有没有什么检测方法是被认可的，或有资料支持的呢？

我正在做用微生物处理鱼塘污水，有可以提供枯草芽孢杆菌菌种的朋友吗？谢谢！我的邮箱： zhouyunzhi22@163.com

“王老吉”凉茶据说是广东鹤山人王泽邦(乳名王吉)于1828年开始销售的产品。目前作为植物饮料销售，其标明的成分为“水、白砂糖、仙草、蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草、甘草”，后面的7种都是中草药(“蛋花”不是指鸡蛋，而是夹竹桃科有毒植物缅栀的花)。　　和其他广东凉茶一样，“王老吉”自称具有“清热去火”的保健功能，“怕上火就喝王老吉”的广告早已喊遍全国。　　夏枯草的明确毒性　　王老吉以及许多广东凉茶之所以使用夏枯草，是由于夏枯草据说在夏至后逐渐枯萎，中医理论因此认为它生来有“纯阳之气”，一遇阴气即枯，就可以用它来“补厥阴血脉”。但是，迄今没有任何严格的临床试验证明夏枯草对人体有什么有益功效。　　用自身的经历难以确定某种疾病与饮用某种饮料之间存在因果关系，因此，叶征潮认为自己的胃溃疡是由于饮用了王老吉所导致并没有循证依据。然而，王老吉所含的夏枯草成分具有毒副作用，却是有科学证据的。主要的证据来自动物实验。有些人对此很不以为然，认为中草药已用了几百上千年，经验已足以证明它们很安全，不比动物实验更有说服力吗？　　这种说法虽然在中国人中很流行，却经不起推敲。一种药物被使用了几百几千年，并不能证明其无毒。如果一种药物的毒性很强很急，吃了以后很快就出现严重反应乃至致命，那是有可能通过经验发现的。但是有的药物，毒性较慢、中毒症状不那么明显，例如要经过几年、十几年才会出现症状的慢性毒，以及能导致癌症、畸胎、肝肾损伤的药物毒性，是很难通过经验摸索出来的。　　因此用动物做毒理学实验是必不可少的。我们可以让动物服用大剂量的药物，以此推测长期或大量服用药物所造成的后果。也可以解剖动物的身体、器官，发现药物对器官造成的伤害。这些都是经验不可能发现、也没法拿人体来做实验的。　　实际上中医典籍对夏枯草是否有毒，有相互冲突的说法。《神农本草经》将夏枯草归为有毒、不可久服的“下品”药，而《本草纲目》则称其“无毒”。　　科学的证据则是明确的。有多项动物实验表明夏枯草能导致不良反应。夏枯草的乙醇提取液能抑制小鼠的细胞和体液免疫反应。皮下注射可使动物胸腺、脾脏明显萎缩，肾上腺明显增大；腹腔注射可使血浆皮质醇水平明显升高，外周血淋巴细胞数量明显减少。这些都表明夏枯草可能是一种免疫抑制剂，长期或大量服用能使机体的免疫功能受到抑制(以上研究见于《山西医药杂志》《甘肃医药》等刊物)。　　另外，服用夏枯草水提物能使小鼠的血清丙氨酸基移换酶和血清天门冬氨基移换酶的值都明显升高，说明夏枯草还有肝脏毒性作用。临床上，有幼儿因服用含苍耳子、夏枯草和鸡内金的中草药3个月导致急性重症肝炎而死亡的报道(台湾“张景岳中医药研究中心”2003年通报)。也有报道因服用夏枯草导致过敏，表现为皮肤瘙痒、丘疹，甚至因过敏性休克而昏倒(从1983年开始有多起事故通报，见于《上海中医药杂志》《四川中医》等期刊)。　　没有必要的凉茶　　有的人承认喝凉茶有可能会让身体出问题，但把这归咎为不懂乱喝。比如，一种说法是“胃寒”的人不宜喝凉茶。“胃寒”是中医术语，是很模糊的描述，大概相当于胃酸分泌过少导致的消化不良。但是夏枯草的不良反应主要发生在免疫系统和肝脏，与消化系统并无关联，所以不管是“胃寒”还是“胃热”的人都有可能出现不良反应。　　当然，药物都难免会有不良反应，有时为了治病只好忍受其不良反应，但是前提是不良反应不是特别严重，而且该药物确实是有疗效的。如果一种药物并没有被证明对身体有何益处，却已知会有毒副作用，那么还去服用它，显然是很不明智的。　　所以，接下来的问题就是，喝凉茶对身体会有什么特别的益处吗？许多人认为有，“怕上火就喝王老吉”嘛。“上火”也是中医对许多症状的一个笼统、模糊的说法，因素很多，在现代医学中没有对应的称呼。口腔“上火”症状，有的可能是因为缺乏维生素B2导致的唇炎、口角炎，有的可能是缺乏维生素C导致的牙龈、粘膜出血，更常见的可能是细菌、病毒感染引起的炎症(例如口腔炎、口腔溃疡、急性牙周炎、牙龈炎等)。天气炎热、干燥引起的脱水，也会让人觉得“上火”。　　针对不同的病因要做不同的治疗。缺维生素引起的要适量补充维生素，细菌感染引起的要使用抗菌、消炎药。病毒感染引起的无特效药，通常几天内会自愈，但是病毒仍然在体内潜伏，在某些情况下(例如精神压力大)会被再次激活，所以这类“上火”不能断根。至于脱水，当然要补充水分。　　那么凉茶对上述种种“上火”会有什么疗效吗？没有证据能够证明。你喝了凉茶觉得“火”降下去了，可能是身体的自我康复，也可能是心理作用，还可能是因为凉茶补充了身体欠缺的水分或某种维生素——在这种情况下喝水、茶或果汁显然更为安全。　　有人认为广东天气潮湿、气候炎热，所以必须喝凉茶。但世界上生活在“天气潮湿、气候炎热”地方的人多得是，他们不喝凉茶身体也不比广东人差。除非广东人的身体有必须喝凉茶的特殊构造，否则没有任何必须喝凉茶的道理。　　因此喝这类可能含有有毒成分的凉茶是一种对身体有害无益的生活习惯。不良的生活习惯很难改变，没有必要也不可能去禁止。但是对于企业为迎合乃至于推广不良生活习惯而生产的产品，却应该加强管理。既然王老吉含有具有毒副作用的草药成分，就不应该作为普通饮料或保健饮料销售——作为食品和保健品的基本要求是必须没有毒副作用，有毒副作用的产品应该作为药品加以管理

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

遭遇“夏枯草”门 王老吉掏出“免死牌”2009年05月14日07:53 来源：《中国青年报》随着卫生部“王老吉违规添加夏枯草”的一段声明，号称能降火的王老吉，自己火烧火燎起来。近日各方面的质疑不断升温。　　昨天（5月13日），生产商加多宝集团在回应时掏出了“免死牌”：2005年4月25日，卫生部以卫监督发〔2005〕169号文《关于普通食品添加夏枯草有关问题的请示》，同意将王老吉凉茶在卫生部备案。　　夏枯草不在许可大名单之列　　5月11日，卫生部召开违法滥用食品添加剂专项整治工作情况发布会，中国疾控中心营养与食品安全所常务副所长严卫星在回答记者提问时表示，因为食品安全法已经规定，既是食品又是药品的名单由卫生部公布，卫生部也发布过名单，王老吉凉茶中有些成分和原料的确不包括在内。　　此一表述立刻引起了轩然大波。严卫星还作了以下解释：目前，卫生部正在组织清理食品中的添加物质，例如OMP等许多原料。下一步卫生部会组织专家认真研究，论证哪些东西将来可以在食品中添加，哪些东西不可以在食品中添加；哪些属于保健食品管理的原料，需要加以归类、清除。　　有中医专家表示，寒凉的中药制剂，一般用来主治外感风热兼胃肠湿热症。如果长期服用药性苦寒的凉茶，尤其是那些体质虚弱者，易损伤人体阳气和脾胃，导致神疲体倦、面色光白、多汗易感冒、纳差便溏等脾肺气虚等状态。青少年尤其不宜长期饮用凉茶，否则会影响健康成长。　　广东食品协会力挺王老吉　　王老吉是中国广东著名凉茶，于清朝道光年间(约1830年)由广东鹤山人王泽邦(乳名阿吉)所创。在卫生部声明的次日，曾为凉茶“申遗”的广东省食品行业协会为此专门召开新闻发布会，称“王老吉凉茶饮料是严格按照国家有关规定组织生产与经营的，根本不存在添加物违规问题”。　　该协会会长张俊修说，夏枯草是1991年国家公布的食物成分表中的野菜食物，“凉茶是国家级非物质文化遗产。广东省食品行业协会没能下大气力向社会传播凉茶文化的社会历史价值与养生健康价值，带来了一些不理解。但对于极个别不对非物质文化遗产实施保护的行为，我们将保留法律追索的权利。”　　卫生部备案文件是不是“免死牌”　　今天，经记者多方联系，生产商加多宝集团终于明确回应各方质疑。该集团表示，2005年4月25日，卫生部以卫监督发〔2005〕169号文《关于普通食品添加夏枯草有关问题的请示》，批复同意将王老吉凉茶在卫生部备案。红色罐装王老吉凉茶饮料已在罐体上明确了产品的属性为“植物饮料”，并获得了卫生行政部门颁发的卫生许可证。“我公司的罐装王老吉凉茶饮料是经卫生行政部门许可生产的普通食品。因此我公司生产的王老吉凉茶是受国家法律保护的。”　　加多宝还再次为夏枯草正名说，夏枯草早在千余年前就已被人们当做食物广泛食用了。直到现在我国的许多地方，民间依然有用夏枯草当蔬菜的习惯。在广东夏枯草作为许多凉茶的主料之一，已被广东人民食用了数百年。　　目前，王老吉的市场规模100亿元左右，是唯一能和“两乐”抗衡的国内企业。它曾成功地借助非典后中药配方流行潮，以“东方功能饮料”的定位，大打预防上火的招牌。

物由心造，枯草为花。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/01/202201281554161959_1574_1642069_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/01/202201281554162852_6831_1642069_3.png[/img]

Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 . Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 ：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌

常用的有琼脂斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、甘油冷冻管保藏法、低温冷冻保藏法等，方法很多。 我选用液体石蜡保存方法，该方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌（如芽孢杆菌属、乙酸杆菌属等）和某些丝状真菌（如：青霉属、曲霉属等），而某些细菌（如：固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌等）和一些真菌（如：卷霉菌、小克银汉霉、毛霉等）不宜采用此法进行保存。微生物检验常用以下菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌药典也没有要求怎样保存，只说选用适宜的保存方法需要验证。但是肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌这些菌种用液体石蜡保存方法适合不？

一、目的要求 学习并掌握芽孢染色法。 二、基本原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。三、器材 枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）； 孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。 四、操作步骤 方法1、 （1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。 （4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。 （6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 方法2、 （1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。 （2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。 （3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。 （4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。 （5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。

[size=18px][font=宋体] 在大肠菌群测定过程中，革兰氏染色（Gram Stain）又是一步很重要的鉴定阶段，革兰氏染色的正确性直接关系到能否正确判断该菌落是不是大肠菌群，而革兰氏染色正是一门难以掌握的最基本的细菌学实验技术，许多分析人员因缺少这方面熟练技术而显得对革兰氏染色结果没有把握，有的只好通过多次反复试验以求得一个仍不很肯定的判断结果，既浪费时间又不能保证染色结果是否正确，很可能还导致大肠菌群测定错误或失败，我们在多年的大肠菌群测定分析的实践基础上，通过纯培养一株大肠杆菌（Escherchiacoli ）和一株枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis）并进行多种条件下的革兰氏染色实验比较，以观察革兰氏染色易受哪些因素影响，从而进一步研究这项技术的最佳操作方法。[/font][/size][font=宋体][size=18px][font=宋体]1 [/font][/size][size=18px][font=宋体]实验材料1.1 大肠杆菌 大肠杆菌是大肠菌群中很重要也很有代表性的一种．在某次大肠菌群测定过程中，选取伊红美兰琼脂培养基上不同的典型菌落，按《应用微生物学实验法户〕 中大肠菌群细菌分离法得到甲基红试验阳性、VP 试验阴性、发酵柠檬酸盐阴性、利用脉酸试验阴性等特征的一株大肠杆菌．[/font][/size][font=宋体][size=18px]2 [/size][size=18px]实验结果与分析 2.1菌龄的影响 16h 和24h的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌革兰氏染色均能得到正确结果，但32h以上的枯草芽抱杆菌有13.3％出现阴性结果。出现阴性反应的枯草芽抱杆菌同时发现很多菌体已经不呈典型杆状，显然由于培养时间过长，枯草芽抱杆菌（阳性菌）或已死亡或部分菌自行溶解了，造成细胞壁通透性增大而呈假阴性。因此在大肠菌群测定时，细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h，以免阳性菌呈假阴性干扰革兰氏染色的正确性．2.2细菌堆积密度影响 涂片时生理盐水中细菌浓厚时，菌体明显堆积在一起，从而影响酒精脱色效果，甚至在细菌堆中仍残留结晶紫，因而无论大肠杆菌还是枯草芽抱杆菌，凡密集成堆的常常呈阳性反应，而均匀分散的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌都能得到正确结果，因此测定时应以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准． 我们认为在大肠菌群革兰氏染色时菌龄、细菌密集程度、媒染时间、酒精脱色程度这几方面因素会对染色的正确性产生影响．在大肠菌群测定时，革兰氏染色的最佳条件应该是：细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h ，涂片时应以分散开的细菌染色为准，碘媒染时间以1 min为宜，酒精脱色程度是革兰氏染色的关键，脱色时间应严格控制在2S 一30S之间。为进一步确证革兰氏染色操作正确，应把未知菌伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落（cdony）与已知的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌的混合菌同片染色，如果混合菌能分辨出阳性菌和阴性菌，则也能肯定未知菌革兰氏染色结果是正确的．[/size][/font][/font]

一、 分类单元及其等级　　分类单元（taxon,复数taxa)是指具体的分类群，如原核生物界(Procaryotae)、肠杆菌科（Enterobacteriaceae)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)等都分别代表一个分类单元。　　和其他生物分类一样，细菌的分类单元也分为七个基本的分类等级（rank或category)或分类阶元，由上而下依次是：界、门、纲、目、科、属、种。在分类中，若这些分类单元的等级不足以反映某些分类单元之间的差异时也可以增加亚等级，即亚界、亚门……亚种，在细菌分类中还可以在科（或亚科）和属之间增加族和亚族等级。细菌分类单元的等级系统见表12-4。值得强调的是，分类单元的的等级（阶元）只是分类单元水平的概括，它并不代表具体的分类单元。除上述国际公认的分类单元的等级外，在细菌分类中，还常常使用非正式的类群术语。如亚种以下常用培养物、菌株、居群和型；种以上常用群、组、系等类群名称；近年伍斯还在界上使用域（domain)（他把全部生物分为古生菌域、细菌域和真核生物域，域下面再分界）把域作为分类单元的最高级。下面简要介绍一些常用的类群术语。　　培养物（culture),是指一定时间一定空间内微生物的细胞群或生长物。如微生物的斜面培养物、摇瓶培养物等。如果某一培养物是由单一微生物细胞繁殖产生的，就称之为该微生物的纯培养物（pure culture)。　　菌株（strain)，从自然界分离得到的任何一种微生物的纯培养物都可以称为微生物的一个菌株；用实验方法（如通过诱变）所获得的某一菌株的变异型，也可以称为一个新的菌株，以便与原来的菌株相区别。菌株是微生物分类和研究工作中最基础的操作实体。由于同种或同一亚种的不同菌株之间，某些生物学特征可能存在一定差异，就某些非鉴别性特征（不是定种或界定亚种的特征）而言，不同菌株可能存在重要差别。因此在实际工作中，除了注意菌株的种名外，还要注意菌株的名称。菌株名称常用数字编号、字母、人名、地名等表示。如枯草杆菌ASI.398(Bacillus subtilisASI.398)和枯草杆菌BF7658(Bacillus subtilisBF7658)分别代表枯草杆菌的两个菌株（ASI.398和BF7658分别为菌株的编号），这两个菌株，前者可用于生产蛋白酶，后者则可用于生产?-淀粉酶。

培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 ：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O　　 0.1ｇ 　　　Ｎa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml :Boil the mixture in autoclave at 121℃ for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃ for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基 I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose

请教一下，LB培养基是不是可以培养一般的细菌，如枯草芽孢杆菌、李斯特菌和苏云金等？

我想请问2010版的药典上的无菌中的灵敏度的检查，说到了金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 、枯草芽孢杆菌 、生孢梭菌 、白色念珠菌 、 黑曲霉这5种菌，在实际操作中难道都要做吗？还是选择一个革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌就可以了呢？ 我公司的产品是无菌。

关于小袋包装酱油频繁的涨袋，仅这一款产品，其他产品同样的操作方法（配方不同）并未出现涨袋，查了好多文献目前收集到的产生涨袋的主要原因是以下这几个菌：解淀粉芽孢杆菌、芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌（这3个是查到说的最多的），丁酸梭菌、肠杆菌、乳酸菌、酵母菌。酱油涨袋的原因很多，我们也在逐一排查，但一直未找到根源。求助各位前辈，有知道这些菌：解淀粉芽孢杆菌、芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌这几个菌的结果判定标准吗？我们送检的结果只有数值，没给除判定标注合格与否，查了好多标准也没找到。也想问问同行业的你们在操作酱油的杀菌设备时是怎么清洗杀菌管道的？

序号试验名称菌种中文名称菌种拉丁文名称菌株编号 51抗微生物效力测试大肠埃希菌Escherichia coliATCC 8739 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 黑曲霉Aspergillus nigerATCC 16404161非无菌产品的计数测试金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisATCC 6633 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 黑曲霉Aspergillus nigerATCC 16404 62非无菌产品的控制菌测试金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 大肠埃希菌Escherichia coliATCC 8739 肠道沙门氏菌Salmonella entericaATCC 14028 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 71无菌测试金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisATCC 6633 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 生孢梭菌Clostridium sporogenesATCC 19404 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 黑曲霉Aspergillus nigerATCC 16404

各位专家，有没有人可以提供实验室整体配套方案，生物农药厂的微生物实验室，做枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌的培养与检测，菌种的活化、扩大培养，检测，包括实验台、仪器、器皿和耗材，请问都需要什么仪器。谢谢！

培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃ for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃ for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基 I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ (乳酸菌培养基 Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌） 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY （蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基） Peptone（蛋白胨） 10g Yeast extract （酵母膏） 5g Glucose （葡萄糖） 1g Distilled water （蒸馏水） 1L 8. Glycerol Agar （甘油琼脂） Peptone （蛋白胨） 5g Beef extract （酵母膏） 3g Glycerol （甘油） 20g Top water （自来水） 1000ml Agar （琼脂） 15g pH 7.0-7.2 9. Rhizobium medium （根瘤菌培养基）AS 9 Yeast eztract （酵母膏） 1g Soil eztract （土壤浸提液） 200ml Mannitol （甘露醇） 10g Agar （琼脂） 15g Distilled water （蒸馏水） 800ml pH 7.2 [Note]：Soil extract：Suspend 50g finely and dried gardon soil in 200ml of tap water. Autoclave at 121℃ for 1 hr. Decant through cotton-cloth, filler though paper, make up volume to 200ml. Resterilize for 20 minutes at 121℃ , then mixed with othringredients and distributed. (土壤浸提液的制法：取土壤50克，加水200毫升，15磅蒸煮1小时，经滤纸过滤后加水补足到200毫升。) 适用范围：大豆根瘤菌（慢生型）、豇豆慢生根瘤菌、花生根瘤菌、紫云英根瘤菌、 大豆根瘤菌（快生型）、大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、田菁根瘤菌 10. Mannitol Agar (甘露醇琼脂) Yeast extract (酵母膏) 5g Peptone (蛋白胨) 3g Mannitol (甘露醇) 25g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml

-内酰胺类化合物除外。对于这些抗生素，为防止假阳性反命的发生，通常不检测其抑 制特性,而检测其中的13 -内酰胺酶.因为菌株的抑制剂除抗牛素外还有i污剂或消毒 剂等其他物质。噬菌休或其他热敏性抑制剂可能产生假阳件结果，在确认试验前对样品 进行热处理便可以排除：这类试验通常有对比结果，所以必须按要求规范实验操作。is 法中测试的灵敏度和痕贵抗生素的检出限取决丁特定测试条件下选用菌株的敏感性。常 用的对奶中抗生素的常规分析方法是纸片分析法和染色剂还原法二本书对这些方法举例 迸行r描述。另外，也可使用快速现场测试法,这些方法町用于农场或平台放行检测。检 测芦-内酰胺抗生素的SNAP测试(美国缅因州IDEXX实验室)就是其屮的一个例子，它 可在lOmin内得到检测结果：Bell等人也证明该方法是一种可靠的现场检测方法。 (1)片碟法将敏感菌株接种于琼脂培养基后倾倒平板,并使之凝固，然后将浸泡在 样品中的小圆形滤纸片放在琼脂忐面。将平板智于适当的温度下培养，直至长出菌落。 若有抗生素或其他抑制物渗人培养基，则在纸片周围会出现清晰的抑菌圏。通过与巳知 对照平板抑制圈直径的比较（条件是严格的标准状态），可得到牛奶中抗生素的含量 所有敏感菌株均可用于此项试验，如藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌 改进的方法使用了嗜热的嗜热脂肪芽孢杆菌作为敏感阐株，其优点为平板可在55℃培养，能较快 地得到检测结果。AOAC官方规定片碟法检测内酰胺抗生素时所使用的敏感菌株为 嗜热脂肪芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌(AOAC, 1995)

-内酰胺类化合物除外。对于这些抗生素，为防止假阳性反命的发生，通常不检测其抑 制特性,而检测其中的13 -内酰胺酶.因为菌株的抑制剂除抗牛素外还有i污剂或消毒 剂等其他物质。噬菌休或其他热敏性抑制剂可能产生假阳件结果，在确认试验前对样品 进行热处理便可以排除：这类试验通常有对比结果，所以必须按要求规范实验操作。is 法中测试的灵敏度和痕贵抗生素的检出限取决丁特定测试条件下选用菌株的敏感性。常 用的对奶中抗生素的常规分析方法是纸片分析法和染色剂还原法二本书对这些方法举例 迸行r描述。另外，也可使用快速现场测试法,这些方法町用于农场或平台放行检测。检 测芦-内酰胺抗生素的SNAP测试(美国缅因州IDEXX实验室)就是其屮的一个例子，它 可在lOmin内得到检测结果：Bell等人也证明该方法是一种可靠的现场检测方法。 (1)片碟法将敏感菌株接种于琼脂培养基后倾倒平板,并使之凝固，然后将浸泡在 样品中的小圆形滤纸片放在琼脂忐面。将平板智于适当的温度下培养，直至长出菌落。 若有抗生素或其他抑制物渗人培养基，则在纸片周围会出现清晰的抑菌圏。通过与巳知 对照平板抑制圈直径的比较（条件是严格的标准状态），可得到牛奶中抗生素的含量 所有敏感菌株均可用于此项试验，如藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌 改进的方法使用了嗜热的嗜热脂肪芽孢杆菌作为敏感阐株，其优点为平板可在55℃培养，能较快 地得到检测结果。AOAC官方规定片碟法检测内酰胺抗生素时所使用的敏感菌株为 嗜热脂肪芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌(AOAC, 1995)

【序号】：1【作者】：石怀兴【题名】：枯草芽孢杆菌g8发酵条件的优化、抗菌物质的部分特性分析及分离纯化【期刊】：学位论文【年、卷、期、起止页码】：学位论文【全文链接】：http://ipub.cqvip.com/Shop/ProductDetail.aspx?id=660816【序号】：2【作者】：秦艳 李卫芬 黄琴 【题名】：枯草芽孢杆菌发酵条件的优化【期刊】：饲料研究 【年、卷、期、起止页码】：2007年12期【全文链接】：http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SLYJ200712024.htm【序号】：3【作者】：王剑 王楠 高观朋 尹丹韩 王伟 【题名】：黄瓜黑星病拮抗菌抑菌谱及产芽孢培养工艺研究【期刊】：《江苏农业科学》【年、卷、期、起止页码】：2011年 第2期【全文链接】：http://www.cqvip.com/QK/93934X/201102/37754460.html【序号】：4【作者】：王剑 王楠 高观朋 尹丹韩 王伟 【题名】：200亿芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的研制【期刊】：《农药》【年、卷、期、起止页码】：2010年 第7期【全文链接】：http://www.cqvip.com/QK/92314X/201007/1001305414.html【序号】：5【作者】：暂无【题名】：两株细菌分离物对镰刀菌的拮抗作用【期刊】：无【年、卷、期、起止页码】：无【全文链接】：http://ipub.cqvip.com/Shop/ProductDetail.aspx?id=3543963

问：常用菌种及培养基英文对照答：Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 Bacillus pumilus 短小芽胞杆菌 Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 Micrococcus luteus藤黄微球菌 Escherichia coli 大肠埃希杆菌 Saccharomyces cerevisiae啤酒酵母菌 Candida albicans 白色念珠菌 Aspergillus niger黑曲霉 Salmonella paratyphi B 乙型副伤寒沙门(氏)菌 Pseudomonas aeruginosa铜绿假单胞菌 Coliform 大肠菌群 Clostridium 梭菌 Nutrient agar 营养琼脂培养基 Rose Bengal agar Sodium 玫瑰红钠琼脂培养基 Nutrient broth medium营养肉汤培养基 Thioglycollate medium 硫乙醇酸盐流体培养基 Martin medium modified 改良马丁培养基 Bile salt lactose enrichment 胆盐乳糖培养基 0.1％ peptone water medium 0.1% 蛋白胨水 pH 7.0 sodium chloride peptone buffer pH 7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液 Lactose bile salt fermentation medium 乳糖胆盐发酵培养基[

请问有专门做这些生化鉴定培养基的厂家吗？例如其中有一个pH5.7生长 这个生化鉴定项目，标准没有该鉴定培养基的配方，请问有人做过吗？