热葡糖苷酶土芽胞杆菌

本人对酶这种物质不甚了解http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1010.gif，特求助各位大侠？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif应用搜索引擎没有找到β-葡糖醛酸糖苷酶，想知道这种酶是否还有别的名字？目前有β-葡糖苷酶（cas：9001-22-3），是否同一种酶？

请问葡萄糖苷酶（EC3.2.1.21）和葡萄糖苷酸酶（EC3.2.1.31）有什么区别？分别的用途是什么？谢谢！

请问在哪能买到烷基葡糖苷：例如十二烷基葡糖苷？

请问十二烷氧基葡糖苷、十二烷基葡糖苷、聚乙二醇葡糖苷性能有什么不同？

在做体外α-葡萄糖苷酶抑制活性。具体的实验操作如下，110μLpbs（Ph6.8），各样品梯度100-200-400-800-1600-3200μg/mL各20μL，还原型谷胱甘肽（1mg/mL）10μL，20μL酶溶液，37℃反应15min后，加20μLPnpg（2.5mmol/L），继续37℃反应15min，80μL碳酸钠（0.2moL/L）终止反应。每次加完试剂后，谷胱甘肽、酶、pnpg保存在-4°的冰箱。样品组：样品+pbs+酶+底物+碳酸钠+谷胱甘肽 样品空白：不加底物 对照组：无样品 空白对照：无样品无底物。最终实验结果：大多数100-200-400分子比分母大，1减去后是一个负数，没抑制率。后面做了阿卡波糖阳性药物，在100-200-400也很难有抑制率，目前已经做了30次。认为操作没问题，是浓度太低没活性吗？

有人做过β－呋喃果糖苷酶活性HPLC方法检测的吗？

GB/T5009。88-2008酶重量法测膳食纤维用的淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶的活性怎么测？

总大肠菌群（Total Coliforms) 大肠菌群系指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指标菌的一般特征故以此作为粪便污染指标评价饮水的卫生质量。耐热大肠菌群(Thermotolerant Coliforms) ，原名：粪大肠菌群（Fecal Coliforms ) 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为粪大肠菌群。是水体受人畜粪便污染的比较直接指标。大肠埃希氏菌（大肠杆菌，E.Coli.) 大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈黄色，能产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的细菌。大肠埃希氏菌是粪大肠菌群的组成部分，是水体受人畜粪便污染的最直接指标，水中含有大肠埃希氏菌提示有粪便污染。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

嗜热芽胞杆菌怎么检测，有谁有相关的国标或者检测方法，谢谢

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

食品的膳食纤维检测中，两种酶（淀粉酶和葡萄糖苷酶各多加了50ul）多加了，会怎样？

糖酶的新近发展摘要：简要介绍了糖酶中淀粉酶、乳糖酶、纤维素酶作用机理和应用前景；详细介绍了α-葡萄糖苷酶的理化性质、作用机理、研究现状以及展望了其应用前景。关键词：糖酶；α-葡萄糖苷酶；研究现状；应用前景酶制剂作为一类绿色食品添加剂，用于改善食品品质和食品制造工艺，其应用已越来越普遍，品种也不断增多。其中，糖酶（carbohydrases）是一种应用相当广泛的酶类。它通过裂解多糖中将单糖结合在一起的化学键，使多糖降解成较小的分子；也能催化糖单位结构重排，形成新的糖类化合物，这类反应被称为转糖苷作用；此外，一些酯酶能作用于酯化的糖类，这类反应在改变果胶物质的功能性质上是很重要的。 本文大致介绍了糖酶中淀粉酶（amylase）、乳糖酶(lactase)、纤维素酶(cellulose)。主要介绍了α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)，一种新型的糖苷酶。1.淀粉酶淀粉是由葡萄糖通过α-1 ,4糖苷键和α-1,6糖苷键连接而成的高分子化合物，而糖酶广泛分布于自然界，能裂解多糖中将单糖结合在一起的化学键，使多糖降解成为较小的分子，两者具体作用方式如下图所示。 淀粉工业中常用的糖酶有以下四类:（1）α-淀粉酶(液化酶，α-Amylase，α-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，EC3.2.1.1)，主要来自芽胞杆菌和曲霉，它是一种内切型淀粉酶，作用于淀粉是从淀粉分子的内部任意切开α-1,4-糖苷键，使淀粉分子迅速降解，失去粘性和碘的呈色反应，同时使降解物的还原力增强。(2)β-淀粉酶(β-Amylase，α-1,4-葡聚糖麦芽糖水解酶，EC3.2.1.2)，在工业上应用的酶制剂主要来自植物(如大麦)和微生物(芽孢杆菌)。作为外切型淀粉酶，它作用于淀粉时从还原端以麦芽糖为单位切断α-1,4-糖苷键，但产物不是α型的麦芽糖，而是[font

蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的鉴别 是怎么整的啊，国标里面的那种方法 靠谱吗？不好整吧，你是怎么 鉴别的啊，

昆虫病原细菌广泛存在自然界，在不同的环境条件下，对昆虫数量的调节起着重要的作用。其中特别是某些芽孢杆菌已发展成为微生物杀虫剂，具有控制农林害虫的巨大潜力，是一种很有发展前途的防治害虫的新途径，在综合防治中越来越引起人们的重视。 自从19世纪末期开始研究家蚕、蜜蜂细菌病害的近一百年间，发现并被描述的昆虫病原细菌约有90多个种和亚种，它们大多属于真细菌纲（Eubacteria）的芽孢杆菌科（Bacilliacene）、假单孢菌科（Pseudomonadacea）和肠杆菌科（Enterobacteriaceae）。从防治害虫的角度来说，在这三科中以芽孢杆菌科最为重要。此科包括有两个属：芽孢杆菌属（Bacillus）和芽孢梭菌属（Clostridium）。在芽孢杆菌属中的乳状病芽孢杆菌（Bac.popillia）、缓死芽孢杆菌（Bac.lentimorbus）、苏云金芽孢杆菌（Bac.thuringiensis）的某些亚种以及球形芽孢杆菌（Bac.spuericus）,目前在国内外均已发展成为防治农林害虫及卫生害虫的微生物杀虫剂。而且，迄今为止，昆虫病原细菌的主要研究力量也仍然集中在这些细菌上。 但是在这些众多的病原细菌中，真正能够开发成为一种具有实际应用价值杀虫剂的却并不多，目前应用最广泛的主要是形成芽孢的病原细菌。如乳状病芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌.[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=64035]苏云金芽孢杆菌[/url]

国标上说该菌在MYP上呈粉红色菌落，周围有沉淀环，产生卵磷脂酶。我们按照SN标准做了试验，肉汤中培养48h有浑浊，但MYP上培养48h是黄色菌落培养基也成了黄色，没有典型的粉红色菌落，也没有沉淀环。可是室温放置一段时间后，（已超过了规定的培养时间）又出现了粉红色菌落，周围有沉淀环，我们又进一步做了生化试验，生化结果很可疑，也基本符合蜡样芽孢杆菌的特征，请问各位大侠，结果怎么报呀？ 是阴性还是报阳性？

做灭菌效果用的嗜热芽孢杆菌的变色培养基是什么？紫色变黄色的那个培养基。

求助，我不太懂酶单位活性计算，我们需要30U/ml的溶液，之前买了2ml装的b-葡糖酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶，使用时要不要稀释？

各位：请问芽孢杆菌的分类！！！！！！！！！

枯草芽孢杆菌芽孢的制备，可以直接用固体培养基培养芽孢后离心获取吗

新西兰乳制品巨头恒天然8月3日发布消息称，在三批次浓缩乳清蛋白粉中检出肉毒杆菌。多美滋、娃哈哈、可口可乐等多家企业涉案，并启动召回工作。　　肉毒杆菌的毒素被用来开发成生化武器，是世界上最毒的物质之一。此次婴儿配方奶粉和运动饮料使用了受肉毒杆菌污染的乳清蛋白粉，会有哪些风险？肉毒杆菌真的有这么恐怖吗？　　艺康(中国)食品安全经理陆有开告诉《第一财经日报》记者，肉毒杆菌(也叫肉毒梭菌)是一种产芽孢的革兰氏阳性杆菌，主要来源于土壤、水、水底沉积物及动物粪便等。　　“肉毒杆菌生长到一定数量时会产生神经毒素，这种神经毒素是世界上最毒的物质之一，可以抑制人体神经信号的传递，让人出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状，因此，有些国家把它开发成生化武器。”陆有开称。　　不过，肉毒杆菌对生长条件要求“苛刻”。陆有开说，肉毒杆菌需要在ph值4.6以上的非酸性食品和无氧气或很少氧气的环境下才能生长。肉毒杆菌生长体本身耐热性并不强，通常100℃烹煮过程就能将肉毒杆菌生长体杀死，但其在不良环境下芽孢的抵抗力更强，芽孢是细菌的休眠体，对干燥、热处理和消毒剂等具有很强的抵抗力，121℃热杀菌10秒左右才能杀死90%的肉毒杆菌芽孢。芽孢本身不能进行生长繁殖，也不能导致食品的腐败，但是，一旦碰到合适的条件，芽孢会发芽变成生长体而进行繁殖。肉毒杆菌最适合的生长温度范围为30℃~37℃，大部分菌株在10℃以下不能生长，但有的菌株在3℃以上就能生长。　　肉毒杆菌能在奶粉中生长吗？陆有开说，奶粉中的水分活度较低，因此肉毒杆菌在奶粉中不能生长。但这并不意味着奶粉中就完全不存在肉毒杆菌的芽孢。“在奶粉上检出的应该是肉毒杆菌的芽孢，它的来源估计是由杀菌工艺失效和杀菌后污染引起。”　　肉毒杆菌的中毒路径有两种，一种是对一岁以下的婴儿来说，吞食了含有肉毒杆菌毒素芽孢的食物，由于婴儿肠道内的正常肠道细菌群落还没有建立，肉毒杆菌毒素芽孢发芽生长产生毒素，导致婴儿中毒；另一种是对一岁以上的人群来说，由于他们的肠道菌群已经建立，肉毒杆菌毒素芽孢不可能发芽生长，因此，其致病性就是由于肉毒杆菌先行在食物中生长产生了毒素而使人致病。　　陆有开称，在西方，肉毒杆菌中毒案例主要发生在家庭自制罐头上。　　他说，目前的奶粉没有检测肉毒杆菌的项目和要求，根据风险评估的结果，在婴儿奶粉中，肉毒杆菌的风险要比其他致病菌风险小得多，如沙门氏菌和阪崎肠杆菌，也不可能将所有的致病菌都进行检测，这主要靠良好的操作规范和卫生保持来控制。

大神做过肉制品中芽孢杆菌的检测吗，刚查了查看到国标《GB 4789.14-2014》有，如果有做过的能给个实验流程参考吗

谁知道蜡样芽孢杆菌？在SN上，它的证实实验很多！是否需要都做！

有了解枯草芽孢杆菌的么 3610和168trpc2两种菌株有什么不同吗

我正在做用微生物处理鱼塘污水，有可以提供枯草芽孢杆菌菌种的朋友吗？谢谢！我的邮箱： zhouyunzhi22@163.com

我有个问题想让大家帮忙解决解决，如何测定食品中芽孢杆菌（益生菌）的数量？同时请microbiologyy给指点指点！谢谢！

感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性]培养基[/url]中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp[sup]r[/sup]等)得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性[://]培养基[/url]上。重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其编码α肽链的DNA序列，此结构称为[i]lac[/i]Z'基因。[i]lac[/i]Z'基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段(146个氨基酸)。任何携带着[i]lac[/i]Z'基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后，便会产生出有功能活性的半乳糖苷酶，在IPTG(异丙基β—D—硫代半乳糖苷)诱导后，在含有Xgal(5-溴-4-氯-3-吲哚-6-D-半乳糖苷)的培养基平板上形成蓝色菌落（半乳糖苷酶能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝）。而当有外源DNA片段插入到位于[i]lac[/i]Z'中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，也就不能分解Xgal而显蓝色，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料 超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、恒温水浴、离心管、试管、培养皿、锥形瓶、接种针、玻璃涂棒、酒精灯、镊子、牙签、大肠杆菌DH5a 、质粒(二) 试剂0.1mol／L CaCl2溶液 LB液体培养基 LB固体培养基 氨苄青霉素(Amp)：用无菌水配制成100mg／mL溶液，置—20℃冰箱保存。Xgal：将Xgal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg／mL，不需过滤灭菌，分装小包装，避光贮存于-20℃。IPTG：取2g IPTG溶于8mL双蒸水中，再用双蒸水补至10mL，用0.22um滤膜过滤除菌，每份1mL，贮存于-20℃。[实验步骤](一) 制备感受态细胞1、吸取15µl E.coil菌液，接种于20ml LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜，待OD600=0.5左右将该菌悬液以1：50接种量转于50ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20-30min测一次OD600，至OD600=0.6左右，停止培养。2、培养液转入离心管中，在冰浴10min，4℃下5000rpm离心10min。3、弃上清液，用4ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置30min。4、4℃下5000rpm离心6min。5、弃上清液，用2ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置片刻后即制成感受态细胞悬液。6、以上制好的感受态细胞悬液可在冰上放置，24小时内直接用于转化实验，也可加入15%高压灭菌过的甘油，混匀后，分装于1.5ml离心管中，每管100µ l感受态细胞悬液，置-70℃条件下保存。.(二) 质粒DNA转化大肠杆菌1、取100µl摇匀后的感受态细胞悬浮液（如是冷冻保存液，则需化冻后马上进行下面的操作），加入5µl连接产物，轻轻摇匀，冰上放置30min后，于42 IPTG水浴中保温90s，然后迅速在冰上冷却2min。2、加入900µl LB液体培养基，则总体积约1ml，混匀于37℃振荡培养90分钟使受体菌恢复正常生长状态并使转化体产生抗药性Amp[sup]r[/sup]。3、在预制的LB琼脂平板上，加40uL 20mg／mL的Xgal和4uL 200mg／mL的IPTG溶液，并用灭菌玻璃推子(酒精灯上烧后冷却)，均匀涂布于琼脂凝胶表面，37℃倒置吸收。4、将恢复培养的菌体4000rpm离心5min，移去上层900µl LB培养基，用余下的100µl重悬菌体至均匀。(四) α互补现象的检查将重悬菌体均匀涂布于含X-gal+IPTG+氨苄青霉素的LB平板上，37℃倒置培养12—24h，出现菌落。其中白色菌落从理论上讲为重组克隆。如果进一步验证，可挑取多个白色菌落分别接种到1ml含有氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养6-8h，然后提取质粒酶切验证，或进行菌落PCR扩增鉴定。