黄曲霉毒素混合对照品

黄曲霉毒素各组分在中国药典要求的色谱条件下分析检测常会遇到分离度不好的问题。因此，月旭科技针对中国药典色谱条件进行优化，在中国药典规定的调整范围内，使得被测黄曲霉毒素各组分之间有更好的分离度和更好的峰型。我们一起来看一下整个的检测流程。[b]难点：分离度达不到测试要求[/b]测定方法来源于：中国药典2015年版四部 2351黄曲霉毒素测定法 第一法[b]测试过程[/b]1、色谱条件：[align=center][img=,600,314]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910091413381088_1249_932_3.png!w536x281.jpg[/img][/align]2、样品配置：混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1,黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml，0.3ug/ml，1.0ug/ml，0.3ug/ml）0.25ml，置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度 ；3、测试图谱：25ul进样体积图谱[align=center][img=,600,242]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910091413491235_9214_932_3.png!w605x245.jpg[/img][/align][align=center][color=#333333][img=,600,66]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910091413554305_7671_932_3.png!w690x77.jpg[/img][/color][/align][color=#333333]药典规定分别进样体积是：5ul、10ul、15ul、20ul、25ul叠加效果图[/color][align=center][img=,600,145]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910091414022452_7130_932_3.png!w690x167.jpg[/img][/align][color=#333333][b]结果[/b]黄曲霉毒素B1,黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2分离良好，线性可以达到测试要求（G2，R2=0.9984；G1，R2=0.9985；B2，R2=0.9993；B1，R2=0.9974）[/color]

[align=center][img=,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809141547242123_8351_932_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align]黄曲霉毒素各组分在中国药典要求的色谱条件下分析检测常会遇到分离度不好的问题。因此，月旭科技针对中国药典色谱条件进行优化，在中国药典规定的调整范围内，使得被测黄曲霉毒素各组分之间有更好的分离度和更好的峰型。我们一起来看一下整个的检测流程。[b]01 难点：分离度达不到测试要求[/b]测定方法来源于：中国药典2015年版四部 2351黄曲霉毒素测定法 第一法[b]02 测试过程[/b]1、色谱条件：[align=center][img=,600,312]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809141640523245_9962_932_3.jpg!w690x359.jpg[/img][/align]2、样品配置：混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1,黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml，0.3ug/ml，1.0ug/ml，0.3ug/ml）0.25ml，置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度 ；3、测试图谱：[align=center]25ul进样体积图谱[/align][align=center][img=,690,349]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809141641253342_6715_932_3.jpg!w690x349.jpg[/img][/align][color=#333333][/color][align=center][color=#333333]药典规定分别进样体积是：5ul、10ul、15ul、20ul、25ul叠加效果图[/color][/align][align=center][img=,690,193]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809141641586206_8976_932_3.jpg!w690x193.jpg[/img][/align][b]03 结果[/b]黄曲霉毒素B1,黄曲霉毒素B2，黄曲霉毒素G1，黄曲霉毒素G2分离良好，线性可以达到测试要求（G2，R2=0.9984；G1，R2=0.9985；B2，R2=0.9993；B1，R2=0.9974）

中药材中黄曲霉毒素检测方案 黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、花生、瓜子、棉籽以及动物饲料等相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药毒性，其中以B1毒性最大。人摄入含有该类毒素物品时，摄入量在身体内是要累积的，不管量大量小对身体都有较大伤害。 近年来，各级食品药品等监管部门不断加大生产流通监管力度，努力保持食药多环节总体质量。现在对乳制品、玉米等食品及食品原料都有相关检测标准，2015版药典也重点明确该项目的检测。 下面我们就一起分享一下高效液相色谱法柱后光化学衍生荧光检测器检测中药材中黄曲霉毒素方法等重要内容。实验原理 样品经甲醇-水溶解，搅拌、离心及免疫亲和柱层析净化提取，进入高效液相色谱系统，亲水性C18色谱柱分离，经光化学衍生器柱后衍生，紫外检测器检测，外标法计算，即得。仪器与试剂 仪器：高效液相色谱仪（荧光检测器+等度泵+亲水性C18色谱柱+光化学衍生器等），气控操作架（含气泵），固相萃取装置，黄曲霉毒素免疫亲和柱，高速搅拌仪（搅拌速度大于11000转／分钟），离心机（离心速度4000转／分钟），氮吹仪，超声波清洗器，溶剂过滤器，电子天平等。 试剂：黄曲霉毒素对照品（均为SIGMA标准品），甲醇（色谱纯），氯化钠（分析纯），超纯水等。样品制备 混合对照品溶液制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2，标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制备为标准品储备液。精密量取储备液1ml，置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，备用。 供试品溶液制备：取适量被测某药材（或药品）充分粉碎，过二号筛（药典筛），精密称取过筛粉朱15g，加入氯化钠3g，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速搅拌仪搅拌2分钟，离心机离心5分钟，精密量取上清液15ml，置50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，微膜（0.45μm）滤过，精密量取续滤液20.0ml，通过固相萃取装置萃取（免疫亲合柱），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用5ml甲醇洗脱，收集洗脱液，氮吹仪吹至近干，用甲醇定容1ml，摇匀，微膜（0.45μm）滤过，待测。色谱

乳制品中黄曲霉毒素M1检测 黄曲霉毒素是一种强致癌物，它广泛存在于食品、药品、饲料、乳制品等中，尤其是发霉或变质了的产品。严重的影响着我们消费者的身体健康和生活质量。现在社会各个阶层都非常重视这个问题，很多行业也都在研究和制定着本行业的方法和标准。限量检测要求也越来越高，越来越严。下面我们先来介绍下高效液相色谱法，荧光检测器检测乳制品中黄曲霉毒素M1含量的检测吧。实验部分1.适应性：该方法适用于牛奶、奶粉、乳酪等乳制品中黄曲霉毒素M1的检测。2.检测原理样品经溶解、振动、离心、固相萃取等提取后，由进样器进入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，荧光检测器检测，保留时间定性，峰面积定量（外标法）计算。3.设备及试剂设备：高效液相色谱仪（等度泵+荧光检测器+进样器+C18色谱柱+柱温箱等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，涡旋振动仪，离心机（大于等于4000rpm），分析天平，固相萃取装置（包括专业的净化柱），氮吹仪等。试剂：乙腈（色谱纯），无水乙醇（分析纯），超纯水等。4.样品提取及制备牛奶、原料乳等液态奶制备：准确称取5g样品置于具塞离心管中，加入5mL乙腈，涡旋混合1min； 再加入10mL乙腈，涡旋混合1 min，4000rpm离心机离心5min； 取上清液5mL，作为上样液待净化。 奶粉、乳酪等固体奶制备：准确称取2g样品置于具塞离心管中，加入5mL水，涡旋混合2min，使样品与水充分混匀； 加入5mL乙腈，涡旋混合1 min； 再加入10mL乙腈，涡旋混合1min，4000rpm离心机离心5min； 取上清液5mL，[/

各位老师，我这几天在实验室按照2010版药典标准做了黄曲霉毒素的检测。对照品是进口的黄曲霉毒素混标，没有明确各个成分的含量和先后出顺序。下图是对照品色谱图和包装盒色谱条件： 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水(10：18：42)为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测。衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加人甲醇100ml使溶解，用谁稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每挣钟0.3ml衍生化温度70℃；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm(或365nm），发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410111454_517797_2856959_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410111454_517798_2856959_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410111454_517799_2856959_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410111454_517801_2856959_3.jpg

花生中黄曲霉毒素的检测黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本文采用高效液相色谱法测定花生中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，采用了柱后衍生法测定，灵敏度高，结果理想。检测依据：GB/T18979-2003 ；液相色谱仪：LC-10AVP色谱条件：色谱柱：色谱柱：Welchrom-C18 ( 250 mm ×4.6 mm 5μ ); Serial Number：W13212257；流动相：水：甲醇=55：45；流速：1mL/min。荧光检测器：激发光波长：360nm 发射光波长：450nm 增益：17；柱温：30℃；衍生方式：柱后光化学衍生（254nm）进样量：10uL混合对照品溶液的配置： 精密量取黄曲霉毒素混合标准品溶液0.5ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容，为储备液，精密量取该储备液适量，分别制成不同浓度的混标溶液；供试品溶液的配置：称取粉碎花生试样约15g ，加人氯化钠3g ，置于均质瓶中，用70%甲醇溶液定容至125ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11 000转/分钟），离心5 分钟（ 离心速度2500 转/ 分钟） ， 精密量取上清液15ml，用水定容至50mL，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取此滤液10.0ml,通过免疫亲合柱（Welchrom®Aflatoxin G1 G2 B1 B2 货号：01140-00031 ），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml容量瓶中，甲醇定容，过滤后进液相色谱分析。定容体积为：125mL； 稀释用样品滤液体积：15mL；定容至50mL；过免疫亲合柱滤液体积：10mL，甲醇洗脱液体积；2mL。工作曲线系列B1、B2、G1、G2混标使用液浓度：0、2、4、8。5、10、21ng/mL。2ng/mL混标分离色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647236_2166779_3.png20ng/mL混标液分离色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040622_498285_2166779_3.pngG2、G1、B1、B2工作曲线线性：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040626_498286_2166779_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040626_498287_2166779_3.png花生样品的检测色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040630_498290_2166779_3.png平行试验：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040630_498291_2166779_3.png表1 加标回收率测定结果

固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1摘要：建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。样品经乙腈提取，ProElut AFT固相萃取柱净化，以正己烷和三氟乙酸衍生后，通过DiamonsilC18(2)色谱柱分离，流动相为水、乙腈和异丙醇，梯度洗脱，流速1 mL/min，荧光检测器检测，激发波长365nm，发射波长435 nm，外标法定量。结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5μg/L范围内线性关系良好。样品加标回收率在80%~100%之间，相对标准偏差1.58%~4.21%，方法检出限为牛奶：0.02~0.06μg/kg，奶粉：0.04~0.12 μg/kg。 黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物，是现在发现的毒性和致癌性最强的天然污染物，其毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1是最为常见且最重要的五种衍生物，可存在于土壤、坚果、谷物、食用油、及乳制品中。由于新生儿童免疫系统不完善，抵抗力较弱，所以婴幼儿食品尤其是奶粉、牛奶中黄曲霉毒素的检测尤为重要。 目前，黄曲霉毒素的检测方法有薄层色谱法(TLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)；高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)。TLC法对人和环境的污染系数大，操作繁琐，灵敏度不高，很难普及。ELISA方法虽然操作简单，但定量不精确，易出现假阳性结果。HPLC-MS法仪器昂贵，检测成本较高，而HPLC-FLD操作简单，选择性好，灵敏度高，定量准确，同时仪器价格适中，适宜推广。另外，乳制品成分复杂、蛋白含量高、含有多种维生素及微量元素，所以样品净化在检测过程中占有重要的地位，目前的净化方法主要采用免疫亲和柱(IAC)净化和其它固相萃取柱净化，如石墨化碳黑柱；CN柱；HLB柱等。IAC虽然选择性好但是价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短，其它固相萃取柱净化过程中涉及步骤较多，且净化效果一般。故本文选择ProElutAFT固相萃取柱结合高效液相色谱荧光检测器测定乳品中黄曲霉毒素，方法灵敏度高，步骤简单，净化效果好，成本较低，适合推广。1 实验部分1.1仪器与试剂岛津LC-20A高效液相色谱仪，RF-20A荧光检测器，柱温箱，涡旋混合器(予华仪器)，高速离心机(予华仪器)，旋转蒸发仪(予华仪器)，12孔固相萃取装置(迪马公司)，Diamonsil C18(2)，250 mm×4.6 mm，5 μm色谱柱(迪马公司)，ProElut AFT固相萃取柱(迪马公司)。乙腈、甲醇、异丙醇均为色谱纯(迪马公司)，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1标准品浓度10 μg/mL(Sigma)。分别取标准品各10 μL于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配置成10ng/mL中间液，0-4 ℃避光保存。1.2色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(2)，250 mm×4.6 mm，5 μm；流速：1 mL/min；检测器：FLD，Ex: 365 nm，Em: 435nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL；流动相：A-水；B-异丙醇 : 乙腈=3 : 2；梯度程序：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171533_556047_2452211_3.png1.3样品提取1.3.1牛奶、原料乳等液态奶制品称取2 g样品，加入2mL乙腈，涡旋混合1 min，再加入4 mL乙腈，涡旋混合1 min，4000 rpm，离心5 min，取上清液4 mL，作为上样液待净化。1.3.2奶粉等固体奶制品称取2 g样品，加入5mL水，涡旋混合2 min，样品与水充分混匀，加入5 mL乙腈，涡旋混合1 min，再加入10 mL乙腈，涡旋混合1 min，4000 rpm，离心5 min，取上清液5 mL，作为上样液待净化。1.4样品净化用10mL乙腈活化ProElut AFT固相萃取柱，将上样液加入柱中(流速控制每滴/两秒)，接收流出液，采用10 mL乙腈洗脱样品(流速控制每滴/两秒)，收集流出液，合并流出液，在40 ℃下减压蒸馏浓缩至大约2 mL，向旋蒸瓶中加入5 mL无水乙醇，继续减压蒸馏至完全干燥，依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸，旋好玻璃塞充分混匀衍生液，45 ℃静置10 min，然后挥干衍生液，用10%乙腈水溶液定容至0.5 mL，待检测。2结果与讨论2.1色谱条件的选择分别考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水、乙腈-异丙醇-水为流动相对五种黄曲霉毒素分离的影响，结果表明，在A相为水，B相为异丙醇: 乙腈=3 : 2条件下进行梯度洗脱，可使五种黄曲霉毒素达到很好的分离效果(图1)。原因为乙腈中加入异丙醇可降低流动相极性，增加样品与色谱填料间的吸附-脱附次数，从而增加分离度。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171534_556048_2452211_3.png2.2提取溶剂的选择比较了正己烷、甲醇、乙腈对黄曲霉毒素的提取效果，结果表明用正己烷提取时会产生乳化现象，且会提取出大量脂肪，影响净化效果；甲醇提取同时可除掉部分蛋白，但是也会有少量脂肪溶解；乙腈作为提取溶剂既可除掉绝大多数蛋白质，同时对油脂的溶解度大大降低，因此本实验采用乙腈作为提取溶剂。2.3固相萃取柱的选择对于乳及乳制品类样品，采用固相萃取柱进行样品进化是必不可少的步骤。本文采用了硅胶、氨基、PSA、C18、CARB、AFT填料的固相萃取柱，发现采用硅胶柱时黄曲霉毒素回收率极低，应该是样品与硅羟基形成了部分死吸附导致；采用氨基柱、PSA柱净化，可吸附少量的油脂及酸性杂质；采用C18柱可吸附弱极性和中等极性的维生素、脂肪等杂质，但这些固相萃取柱都不能达到同时吸附样品中多种干扰物的效果。AFT萃取柱为黄曲霉毒素检测专用多功能净化柱，可在保证高回收率的前提下同时吸附蛋白、脂肪、维生素、微量元素等干扰物，达到很好的净化效果(图2、图3)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171536_556049_2452211_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171536_556050_2452211_3.png2.4回收率结果分别对牛奶、奶粉进行加标回收试验，每个样品平行测定6次，计算回收率及RSD值(表1、表2)。结果表明，牛奶中添加的黄曲霉毒素回收率为83%-93%、RSD为1.5%-2.8%；奶粉中添加黄曲霉毒素回收率为75%-96%、RSD为1.7%-4.2%，结果满意。3.结论黄曲霉毒素毒性强，若存在于食品中尤其是婴幼儿食品中会对人类造成极大的伤害。本文建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法，本方法通用性强、灵敏度高、重现性好、结果准确，符合现代技术的发展趋势。 参考文献1、 GB\T5009.24-2010 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定2、GB\T17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定-酶联免疫吸附法3、 AzizA. Fallah. Food and Chemical Toxicology，2009，47:1872-18754、 SN/T1664-2005 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定5、 王娜，潘治利等. 花生中黄曲霉毒素检测方法的研究，安徽农业科学，2008，36(2

黄曲霉毒素M1是黄曲霉产生的毒素，物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。黄曲霉毒素B1的简介：黄曲霉毒素是多种霉菌产生的有毒代谢物，主要包括四种呀型（黄曲霉 毒素B1、B2、G1、G2，其中B1毒性最强，是主要的检测类型，但若其 他类型的浓度高，同样具有很大危害性）。它存在于谷物、坚果、棉花 籽及其他食品或饲料中，具有致癌性 ，可导致人罹患肝癌、黄曲霉毒素 中毒、瑞氏综合征和其他慢性疾病；动物可通过进食被污染 的饲料接触 到黄曲霉毒素。因此，大多数国家都限制食品或饲料中黄曲霉素B1的 含量检测原理：黄曲霉毒素B1检测试剂盒采用固相直接竞争性酶联免疫原理。微孔中包被有对黄曲 霉毒素B1具有高亲和力的抗体。黄曲霉毒素B1酶标物与标准品或样品的黄曲霉毒素 B1竞争结合微孔中包被的抗体。孵育一定时间后，倾倒微孔中的内容物，洗涤非特 异性反应物。随后加入底物试剂，溶液变为蓝色。颜色强度与黄曲霉毒素B1酶标物 的量成正比，与样品或标准品中黄曲霉 毒素B1的 浓度成反比。最后加入酸性终止 液，终止反应并将微孔中溶液颜色变为 黄色，使用酶标仪在450nm下测微孔中溶液 的OD值。比较样品OD值与试剂盒提供的标准品的OD值,即可获得检测结果。下面带大家检测饲料中黄曲霉毒素B1的含量：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312224_347084_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312233_347085_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312243_347088_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312234_347087_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312245_347089_2366837_3.jpg样品处理：1.稀释孔中+200ul酶标物+100ul标准品/样品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312248_347091_2366837_3.jpg2.混匀吸打，只少3次http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312249_347092_2366837_3.jpg3.从每个稀释孔中吸取100ul混合液，转移至相应抗体包被微孔中http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312251_347093_2366837_3.jpg4.室温孵育15minhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312252_347094_2366837_3.jpg5.孵育完成后，用洗板机洗涤4次http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312254_347095_2366837_3.jpg6.根据样品标准品个数计算所需底物体积，将所需底物体积置于单独容器中 然后移取100ul底物至每个微孔中http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312257_347096_2366837_3.jpg7.室温下孵育5min（下图是孵育5min后的颜色变化图,颜色由之前刚加入的浅蓝变为深蓝）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312259_347097_2366837_3.jpg8.计算样品和标准品所需终止液的体积，将所需终止液体积置于单独容器中，然后按照与底物 相同的添加顺序和速度，向每个孔中加入100ul终止液http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312301_347098_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312301_347099_2366837_3.jpg9.用酶标仪在450nm下读取并记录每个微孔的OD值http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312303_347103_2366837_3.jpg10.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312304_347104_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/01/201201312305_347105_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.c

[size=16px]　　食品领域中如何使用黄曲霉毒素检测仪　　在食品领域中，黄曲霉毒素检测仪主要用于检测食品中的黄曲霉毒素含量，以确保食品安全。以下是使用黄曲霉毒素检测仪的步骤：　　准备样品：选取需要检测的食品样品，按照仪器说明书的要求，将样品进行处理，通常需要将样品粉碎、研磨或溶解等。　　设定仪器参数：根据样品类型和仪器说明书的要求，设定相应的检测参数，例如激发波长、发射波长、扫描范围等。　　制备标准曲线：使用标准品制备标准曲线，以确定样品中黄曲霉毒素的含量。　　检测样品：将制备好的样品放入仪器中进行检测，等待结果。　　分析结果：根据仪器显示的结果，分析样品中黄曲霉毒素的含量是否符合安全标准。　　需要注意的是，使用黄曲霉毒素检测仪时，需要注意仪器的校准和维护，以保证检测结果的准确性和可靠性。同时，对于不同的食品样品，需要采用不同的前处理方法，以适应不同的检测需求。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/12/202312041009316044_2648_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

10，抽取5个版友）；中奖名单：sunpengwjh（注册ID：sunpengwjh）ZHAOGUANGXI（注册ID：ZHAOGUANGXI）langyabeilei（注册ID：langyabeilei）牛一牛(注册ID：v2700892)馨语（注册ID：huangdm）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607261512_601820_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607261506_601819_1610895_3.png积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================谷物、坚果及其制品中黄曲霉毒素的测定方法：SPE基质：；粮谷应用编号：101200化合物：黄曲霉毒素G2； 黄曲霉毒素G1； 黄曲霉毒素B2；黄曲霉毒素B1固定相：ProElut Silica色谱柱/前处理小柱：ProElut Silica 500mg/3ml 50/pkg样品前处理：1、提取 50 g 粉碎样品与200 mL 甲醇水溶液（85%）混合，超声提取20 min，过滤；取40 mL 滤液，加入40 mL 氯化钠溶液（0.1%），用50 mL 正己烷分两次萃取，正己烷弃去；然后用50 mL 三氯甲烷分两次萃取，收集三氯甲烷萃取液，减压浓缩至约2 mL。 2、净化 a 活化： 依次将3 mL 甲醇、3 mL 三氯甲烷加入ProElut Silica 500 mg/3 mL (Cat.#63004) 中，流出液弃去； b 上样： 将处理浓缩液加入小柱中，用2 mL 三氯甲烷洗涤浓缩瓶，也加入柱中，流出液弃去； c 淋洗： 用3 mL 正己烷、3 mL 乙醚、3 mL 三氯甲烷淋洗，流出液弃去； d 洗脱： 用6 mL 三氯甲烷+ 丙酮（9+1）洗脱样品，收集洗脱液； e 重新溶解：室温下将洗脱液用氮气吹干，然后用50% 甲醇水溶液溶解，微孔滤膜过滤，HPLC 分析色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18(2) 250 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99603) 流动相：甲醇/ 水=50/50 流速：1 mL/min 进样量：20 μL 柱温：40 oC 检测器：UV 365 nm文章出处：P078关键字：谷物，坚果，黄曲霉素，SPE，ProElut Silica摘要：适用于谷物、坚果及其制品中黄曲霉毒素的检测。谱图：http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/p47%20copy.png图例：.1 黄曲霉毒素G2； 2. 黄曲霉毒素G1； 3. 黄曲霉毒素B2； 4. 黄曲霉毒素B1

2月，深圳检验检疫局食检中心两批马来西亚进口膨化食品样品中检出黄曲霉毒素B1不合格，检出含量分别为国家标准的3.6倍和3倍。 黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，其毒性作用主要是对肝脏的损害。黄曲霉毒素B1的毒性要比呕吐毒素的毒性强30倍，比玉米赤霉烯酮的毒性强20倍。其急性毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，慢性毒性可诱发癌变。主要污染的食物是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。 此次检出黄曲霉毒素B1不合格的样品是以玉米为主要原料的膨化食品，2013年深圳检验检疫局就曾从马来西亚进口的膨化食品中检出黄曲霉毒素B1超标。Duang~~,看我迪马如何检测粮谷中黄曲霉毒素...............粮谷中黄曲霉毒素检测1 适用范围适用于花生等粮谷中黄曲霉毒素的检测。2 样品准备(1)称取2 g样品，加入5 mL水混匀，静置10 min；(2)加入20 mL乙腈，涡旋混合2 min，超声10 min；(3)加入5 g NaCl，涡旋混合2 min，6000 rpm离心2 min，取出上清液；(4)向残渣中加入20 mL乙腈，涡旋混合2 min，超声10 min，6000rpm离心2 min，取出上清液；(5)合并步骤(3) 、(4)上清液，40℃下减压蒸至低于2 mL，待净化。 3 SPE柱净化——ProElut AFT 1500 mg/12 mL（Cat.#: 65904） (1)活 化：10 mL乙腈水活化；(2)上 样：将待净化液加入小柱，并用10mL乙腈分三次清洗旋蒸瓶，加入柱中（流速控制在1 mL/min），收集流出液；(3)洗 脱：加入10 mL乙腈（流速控制在1 mL/min），收集流出液，合并步骤(2)、(3)流出液；(4)衍 生：将流出液在40℃下减压蒸至完全干燥，依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸，旋好玻璃塞充分混匀衍生液，45℃静置10 min，吹干衍生液，用10%乙腈水定容至1 mL。4 分析条件色谱柱：Diamonsil C18（2），250 mm × 4.6 mm，5 μm（Cat# 99603）流 速：1.0 mL/min 检测器：*荧光检测器，Ex：365 nm；Em：435 nm柱 温：30℃进样量：20 μL流动相：A：水 B：异丙醇+乙腈=3+2梯度http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281618_536799_1610895_3.jpg5添加回收结果5.1 花生的添加回收结果http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281618_536800_1610895_3.jpg5.2花生样品黄曲霉毒素B1（添加水平7.5ug/kg）检测HPLC图 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281619_536801_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281619_536802_1610895_3.jpg 5.3花生样品黄曲霉毒素B1（添加水平0.5 ug/kg）检测HPLC图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281620_536803_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281620_536804_1610895_3.jpg5.4花生样品黄曲霉毒素B1（添加水平0.1ug/kg）检测HPLC图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281620_536805_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502281620_536806_1610895_3.jpg

黄曲霉毒素检测现场直播： 历史（网上搜索的）： 20世纪60年代在英国发生的十万只火鸡突发性死亡事件被确认与从巴西进口的花生粕有关.进一步的黄曲霉毒素B1调研证明，这些花生粕被一种来自真菌的有毒物质污染这些研究工作最终使人们发现了黄曲霉（Aspergillus.flavus）产生的有毒代谢物质。黄曲霉毒素（Aflatoxins）.是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物。特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少.产生的黄曲霉毒素主要有B1,B2,G1,G2 以及另外两种代谢产物M1,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2,G1,G2,M1 和 M2 在分子结构上十分接近.。1960年，英国发现有10万只火鸡死于一种以前没见过的病，被称为“火鸡X病”，再后来鸭子也被波及。追根溯源，最大的嫌疑是饲料。这些可怜的火鸡和鸭子吃的是花生饼。花生饼是花生榨油之后剩下的残渣，富含蛋白质，是很好的禽畜饲料。科学家们很快从花生饼中找到了罪魁祸首，一种真菌产生的毒素。它被命名为“aflatoxin ”。自那以后，黄曲霉毒素就获得了科学家们的特别关照，对它的研究可能是所有的真菌毒素中最深入最广泛的。发现的黄曲霉素有十几种。蒙牛介绍给公众的“黄曲霉毒素M1”主要出现在各种奶中。M就是“奶”的意思。它还有一个兄弟M2。其实M1和M2并不是黄曲霉菌产生的，毒性也并不是最强。毒性最强的排行“B1”，B表示蓝色，因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外，它还有堂兄弟G1和G2，因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。B1 、B2和G1、G2，就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表。B1和B2被奶牛吃了之后，分别有一小部分会转化为M1和M2进入奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源。黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免，不想饿死的人类也只好无奈地吃下一些。世界各国，都只能设定一个“限量标准”。不超过那个标准，危害就小到可以忽略了。花生和玉米是最容易被黄曲霉污染的粮食。这也就是那10万只可怜的火鸡被害的原因。或许会有敏感的读者想到：既然那些花生被污染了，那么它们榨的油呢？1966年，就有一篇科学论文探索过这个问题。研究者找了一批严重发霉的花生，其中的黄曲霉毒素B1已经超标到不可思议的地步。食物中的黄曲霉毒素用ppb为单位，1ppb相当于1吨粮食中含有1毫克。中国的现行标准是花生中不超过20ppb，而那批花生中的含量是5500ppb，无异于毒药了。作者用有机溶剂浸取的方法来得到油，发现油中的B1含量是120ppb，虽然比原料中要低得多，但仍然大大高于安全标准。花生饼中的含量则高达11000ppb，如果拿去喂动物，动物就只能追随那批可怜的火鸡了。按照工业加工的流程，浸取出来的“粗油”要经过几步精炼。经过了第一步精炼，B1含量降到了10ppb，已经达到食用标准。再经过第二步精炼，含量就低于1ppb，可以忽略了。在中国还有很多榨油作坊。压榨出来的油又如何呢？那位研究者也用这批花生进行了压榨，结果是油中的B1超过了800ppb。这么高的原因在于，压榨出的油中会带入一些残渣，而残渣中的黄曲霉毒素含量非常高。同样地，经过两步精炼，油中的黄曲霉毒素基本上会被除去。通常的花生当然不可能发霉到这种地步。不过在粮食发生肉眼可见的霉变之前，其中的黄曲霉毒素也可能达到危险的含量。从安全的角度，经过精炼的油是要更加优越的。如果实在喜欢“自己榨”的粗油，应该尽量使用收割之后及时干燥、而且保存良好的花生或者其他油料作物。否则，油中含有的黄曲霉毒素B1，无论是毒性还是含量，都比蒙牛超标牛奶中的M1要高得多了。 许多人都知道粮食收割之后受潮长霉会产生黄曲霉毒素。其实，黄曲霉毒素在农作物正常的生长期中就可以形成。比如玉米，土壤中的黄曲霉“种子”会在玉米棒中“萌发”。如果那段时间干燥而且高温，黄曲霉毒素的含量就会明显升高。此外，种植太密、野草太多、氮肥不足、虫等因素，也有利于黄曲霉毒素的形成。美国曾经连续几年跟踪过中部一些州的玉米。发现1988年，那些州的玉米中黄曲霉毒素普遍很高。在有些农场的抽检样品中，超过食用标准20ppb的比例甚至高达36%。农业生产中，黄曲霉毒素超标的玉米并不少见。如果全部销毁，将会是很大的损失。科学家们也找到了一些使用它们的合理方式。比如可以与不超标的混合，把总的含量降到比较低。这样的做法不能用于人的食物，但对于禽畜饲料是可以接受的。如果超标不是很多，也可以喂给成年的猪、牛、鸡等，黄曲霉素很难残留在肉中。此外，酿酒也是一种出路。经过蒸馏，黄曲霉毒素无法进入酒中。只是，剩下的酒糟中含有很多毒素，也就不能用来做饲料了。 1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强.B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。在紫外线下黄曲霉毒素B1,B2发蓝色荧光黄曲霉毒素G1,G2黄曲霉毒素G2发绿色荧光.黄曲霉毒素的相对分子量为312-346.难溶于水易溶于油，甲醇丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定，但在强酸性溶液中稍有分解在pH9-10的强碱溶液中分解迅速.其纯品为无色结晶，耐高温黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.对健康的危害黄曲霉毒素进入体内后，主要在肝细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系的作用下进行代谢。黄曲霉毒素没有经过代谢活化是无致癌性的，因曲昔曲霍毒素袖称为前致癌物 ．远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。对健康的危害黄曲霉毒素进入体内后，主要在肝细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系的作用下进行代谢。黄曲霉毒素没有经过代谢活化是无致癌性的，因曲昔曲霍毒素袖称为前致癌物 ．远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。检测操作步骤： 我们还是先请出权威的标准：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_668832_1641969_3.jpg按照权威说的是液相色谱加上衍生技术，其中衍生有两种方案可选，我们选的是方案2，新到的一号主角闪亮登场：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071210403939_01_1641969_3.jpg还不错的，前面的960我先以为是仪器的型号，后来查说明书才知道是光强显示，这一点还做的比较科学哦！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1007.gif仔细阅读了说明书后就开始动手搞哦！架上仪器后是这样的：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071210464305_01_1641969_3.jpg怎样？有点高富帅的感觉吧！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em51.gif

[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310270939374387_6060_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　黄曲霉毒素检测仪是一种用于检测食品中黄曲霉毒素含量的仪器。在食品生产、加工和储存过程中，黄曲霉毒素是一种常见的污染物，对人体健康具有极大的危害。因此，对食品中黄曲霉毒素的检测非常重要。　　黄曲霉毒素检测仪的工作原理是利用免疫学方法对黄曲霉毒素进行特异性识别，从而实现对食品中黄曲霉毒素的定量检测。该仪器可以检测多种食品中的黄曲霉毒素含量，如粮食、油料、坚果、肉类等。此外，该仪器还具有快速、准确、可靠等优点，可以满足食品生产和监管部门对黄曲霉毒素检测的需求。　　黄曲霉毒素检测仪的使用方法非常简单。首先，将需要检测的食品样品进行前处理，提取出其中的黄曲霉毒素，并将其与抗体进行特异性结合。然后，将结合了抗体的样品放入检测仪中进行反应，测量光信号强度并计算出黄曲霉毒素的浓度。最后，根据仪器提供的操作手册进行数据分析和解读。　　黄曲霉毒素检测仪在食品生产和监管部门中具有广泛的应用。它可以有效地检测出食品中的黄曲霉毒素含量，保障消费者的健康和安全。同时，黄曲霉毒素检测仪还可以帮助食品生产企业提高产品质量和安全性，减少损失和风险。　　总之，黄曲霉毒素检测仪是一种非常实用的仪器，可以有效地检测食品中的黄曲霉毒素含量。在食品生产和监管部门中，该仪器具有广泛的应用前景和市场潜力。　　?