[color=#444444]大家好，我最近做盐酸四环素的标准曲线，标品溶于甲醇中，用液相色谱分析，流动相为甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸水溶液，配比有待优化。我参考相关文献对配比调试了多次，但是10mg/L浓度的盐酸四环素甲醇溶液的响应值最高峰高才11.5！很多配比下都是4或者5的响应值。按道理响应值应该是几十几百才对！根本问题出在哪？急！！！！[/color]
各位大侠，国标GB/T 5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定中所用的标品是：土霉素CAS:79-57-2; 四环素CAS:60-54-8； 金霉素CAS:57-62-5还是盐酸土霉素CAS:2058-46-0；盐酸四环素CAS:64-75-5；盐酸金霉素：64-72-2？
各位大侠，国标GB/T 5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定中所用的标品是：土霉素CAS:79-57-2; 四环素CAS:60-54-8； 金霉素CAS:57-62-5还是盐酸土霉素CAS:2058-46-0；盐酸四环素CAS:64-75-5；盐酸金霉素：64-72-2？
[color=#444444]想测量一下盐酸四环素催化臭氧化的反应机理，只有反应之后的溶液，怎么知道反应生成了什么物质。我送去检测[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]，人家和我说要流动相比例，停留时间什么什么类的还不能有无机盐。求各位大神帮忙指点应该怎么测定啊？我听说可以用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]或者是紫外可见光度计全扫，这都是怎么回事啊？[/color]
本人是质谱新手。仪器 AB 5500。最近在优化四环素类质谱参数，在第一步找母离子的时候目标质量数的响应值只有3e5，而且还不是响应值最高的，有其他的质量数跟目标质量数的响应值一样。按照工程师的培训的要求母离子响应值应该在1-3e6。 最近一次调谐是在两个星期前。各位老师帮忙分析一下是哪的问题？浓度是100ng/ML,溶剂是1:1甲醇水 标注品是固体 盐酸金霉素、盐酸土霉素、盐酸强力霉素、盐酸四环素。
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法测四环素类，盐酸金霉素和金霉素、盐酸土霉素和土霉素，有什么区别呢？保留时间一样吗？
土霉素、金霉素和四环素的检测方法 1. 分析目标化合物土霉素，金霉素，四环素2. 仪器设备带荧光检测器的高效液相色谱仪。3．试剂除下列试剂外，使用附录2所列试剂。咪唑：特级咪唑缓冲溶液：将68.08g咪唑、0.37g EDTA 和10.72g乙酸镁溶解在800mL水中，用乙酸调节pH7.2后，加水至1,000mL。含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液：第1液：将21.0g柠檬酸溶解在水中至1,000mL。第2液：将71.6g磷酸氢二钠溶解在水中至1,000mL。在1.86g乙二胺四乙酸中加入307mL第1液和193mL第2液混合的溶液溶解。苯乙烯二乙烯苯共聚物小柱 (265mg)：在内径8～9mm 聚乙烯管中填充265mg柱色谱用苯乙烯二乙烯苯共聚物或具有同等分离特性的物质。4．标准品盐酸土霉素：本品1.000mg 含有土霉素0.850mg以上效价，分解点为190℃～194℃。盐酸金霉素：本品1.000mg含有盐酸金霉素0.900mg以上效价，分解点为210℃以上。盐酸四环素：本品1.000mg 含有盐酸四环素0.900mg以上效力，分解点为214℃以上。5．试验溶液的制备a 提取方法①肌肉、肝脏和肾脏
用液相色谱做四环素的标液时，出现了土霉素的峰。本人同时做土霉素、四环素、金霉素和强力霉素。单标进样只有四环素中有土霉素的峰，而且土霉素峰还比四环素的高，其他标物单标均十分干净，包括土霉素单标，也未见杂峰。不是进样针头污染问题，也不是进样瓶污染的问题。难道是标物的问题？我同时做了盐酸四环素和液体四环素标物两种，均有土霉素的峰。请问到底是怎么回事？请大家给个意见。
如题，对于DMF我在百度上查了它的基本知识，但没有用过，没有了解我想配置四环素类抗生素，盐酸土霉素、盐酸金霉素、盐酸四环素和盐酸多西环素，想模拟制药废水，浓度比较高，但溶解不了，不知道加入DMF效果如何？不知道应用起来有什么注意的吗用过的朋友我想问下，加入这个溶剂是否可以加大溶解呢？急迫得到您的意见与指导谢谢啦。十分感谢
想用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]测四环素，但是手头没有EDTA，无法按照国标做前处理。请问各位小伙伴有没有其他的前处理方法，现在实验室有盐酸，硫酸，偏磷酸，乙酸，还有HLB的小柱。
[B]动物源性食品中四环素、沙星类[/B] 残留量的快速测定方法1 范围本方法规定了动物源性食品中四环素类、沙星类高效液相色谱的快速测定方法。本方法适用于动物源性食品中四环素类、沙星类高效液相色谱的快速测定。2.1 原理试样中的残留物经四环素类、沙星类快速检测前处理试剂盒处理，样液经四环素类专用层析柱净化、浓缩用高效液相色谱检测，外标法定量。2.2 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。2.2.1 乙腈：色谱纯。2.2.2 甲醇：色谱纯。2.2.3 三乙胺（分析纯）2.2.4 磷酸（85%）（分析纯）2.2.5 磷酸氢二钠:优级纯。2.2.6 乙二胺四乙酸二钠。2.2.7 柠檬酸：分析纯。2.2.8 磷酸氢二钠溶液:0.2mol/L。称取28.41g磷酸氢二钠,用水溶解,定容至1000mL。2.2.9 柠檬酸溶液:0.1mol/L。称取21.01g柠檬酸,用水溶解,定溶至1000mL。2.2.10 Mcllvaine缓冲溶液:将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液与625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液混合。2.2.11 Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液:0.1mol/L。称取60.5g乙二胺四乙酸二钠放入1625mLMclllvaine缓冲溶液中,使其溶解,摇匀。2.2.12 标准品: 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星纯度大于98 %。2.2.13 标准贮备溶液:分别称取土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星各10mg，用甲醇溶解并定溶于100 mL棕色容量瓶中，配制成100 µ g/mL的标准贮备液，置于-20℃保存，有效期三个月。2.2.14 混合标准工作溶液:用流动相稀释标准贮备溶液，配制成土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星均为10 µ g/mL的混合标准溶液。0～4℃避光保存。2.2.15 四环素、沙星类快速检测前处理试剂盒*。2.3 仪器和设备2.3.1 高效液相色谱仪：配紫外-可见光波长检测器。2.3.2 匀浆机。2.3.3 固相萃取机2.3.4 离心机：4000 r/min。2.3.5 调速多用振荡器。2.3.6 聚四氟乙烯离心管: 2.5 mL，50 mL，具塞。2.4 样品制备准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中,先加入四环素、沙星类快速检测前处理试剂盒中的提取剂 (液体20mL)，用调速多用振荡器150 rpm振荡3 min,，4000 r/min离心5 min，收集上清液10mL加入四环素专用层析柱中(使用前依次用5mL甲醇、5mL提取剂、5mL水激活)挤干，用2mL提取剂洗涤，用0.80mL甲醇洗脱,收集洗脱液,用0.2mL流动相定容至1.0mL。供仪器测定。2.5 测定2.5.1 液相色谱条件a) 色谱柱: C18柱，250 mm×4 mm(i.d.),粒度5µ m b) 流动相: 0.05 mol/L磷酸/三乙胺缓冲液（pH2.4）+乙腈(80+20,V/V) c) 流速: 1.0mL/min d) 柱温: 室温 e) 检测波长: 四环素类紫外检测器350 nm。沙星类 紫外检测器310nm；荧光检测器激发波长280nm，发射波长450nm。f) 进样量：50 uL。3.5.2 标准工作曲线绘制移取各移取四环素类、沙星类混和标准液，用流动相稀释成20 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL标准工作溶液。按液相色谱条件（3.5.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线，标准工作曲线范围：20.0~500 ng/mL。 3.5.3 试样测定 用微量进样器准确吸取试样溶液（3.4），按液相色谱条件（3.5.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积。3.6 结果计算按式（1）分别计算供试样品中的四环素类、沙星类残留量。 2×ci×Vω= …… (1)mω－水产品中四环素、沙星类残留量，μg/kg；ci －标准曲线上查出试样溶液中四环素、沙星类标准工作溶液的浓度，（μg/L）；V－最终定容体积数，mL；2－换算常数；m－供试试料样品重量，g。本方法分别计算四环素类、沙星类结果。3.7 检测限本方法土霉素、四环素检测限为20µ g/kg；金霉素、强力霉素的检测限为50µ g/kg，沙星类为：5µ g/kg3.8 回收率 本方法土霉素、四环素、金霉素、强力霉素回收率为:75%～85%；沙星类回收率为：75%～85%相关谱图附件可见联 系 人：王 伦 手 机：13810239506 EMAIL：wwj613@sina.com
1.实验目的 据标准GB/T 14931.1-94测定畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量。最低检出浓度为：0.15，0.20，0.65mg/kg。 2.试验原理 样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。 3.试剂 3.1乙腈(分析纯)。 3.20.01 mol/L磷酸二氢钠溶液：称取1.56 g(±0.01g)磷酸二氢钠(NaH2PH4.2H2O)溶于蒸馏水中，定容到100 mL，经过滤器过滤（选用微孔滤膜为0.45 μm），备用。 3.3土霉素(OTC)标准溶液：称取土霉素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素1mg。 3.4四环素(TC)标准溶液：称取四环素0.0100g(±0.001g)，用0.01 mol/L盐酸溶液溶解并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四环素1mg。 3.5金霉素(CTC)标准溶液：称取金霉素0.0100g(±0.0001g)，溶于蒸馏水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。以上标准品均按1000单位/mg折算。3.3～3.5溶液应于4℃以下保存，可使用1周。 3.6混合标准溶液：取3.3、3.4标准溶液各1.00 mL，取3.5标准溶液2.00 mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配。 3.75％高氯酸溶液。 4.仪器 4.1 高效液相色谱仪(HPLC)：具紫外检测器。 4.2 振荡器：郑州中谱仪器设备有限公司 4.3 过滤器：郑州中谱仪器设备有限公司 4.4 超声波：郑州中谱仪器设备有限公司 5.色谱条件 5.1柱：ODS-C18 (5 μm) 6.2mm×15 cm。 5.2检测波长：355 nm。 5.3灵敏度：0.002 AUFS。 5.4柱温：室温。 5.5流速：1.0mL/min。 5.6进样量：10 μL。 5.7流动相：乙腈/0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液(用30％(V/V)硝酸溶液调节pH2.5)，35：65(V/V)，使用前用超声波脱气10 min。 6.操作方法 6.1样品测定：称取5.00 g(±0.01 g)切碎的肉样(＜5 mm)，置于50 mL锥形烧瓶中，加入5％高氯酸25.0mL，于振荡器上振荡提取10 min，移入到离心管中，以2000 r/min离心3min，取上清液经0.45μm滤膜过滤，取溶液10μL进样，记录峰高，从工作曲线上查得含量。 6.2工作曲线：分别称取7份切碎的肉样，每份5.00 g(±0.01 g)，分别加入混合标准溶液0、25、50、100、150、200、250 μL(含土霉素、四环素各为0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μg， 含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg)， 按6.1方法操作，以峰高为纵坐标，以抗生素含量为横坐标，绘制工作曲线。
最近在做蜂王浆中四环素类的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]（GB/T 23409-2009），做的我那个累啊。刚开始按照前面的那个标准方法做，死活回收率上不去，其中土霉素、四环素甚至都不到1%，后来直接把标准品加在提取剂（1%三氯乙酸）里摇匀了直接上固相萃取小柱（安谱的HLB小柱），收集个洗脱部分直接进样，发现土霉素、四环素20%甲醇洗脱部分就能冲下来，难怪土霉素、四环素回收率上不去，都被我扔了。但是奇怪我把各洗脱部分粗略换算下加起来回收率也还是不行。后来我又换了个方法，土霉素、四环素倒是回收率上去了，金霉素、强力霉素还是不行。于是又换方法，这次用的进出口的那个方法（sn/t 2800-2011），就是只过了一个小柱，没过离子交换柱，回收率还是不行。请教各位老师，做蜂王浆中的四环素，怎么把回收率提上去呢，是我哪个细节没注意到吗
大家知道脱水四环素、差向脱水四环素的cas号，结构式？谢谢
[color=#444444]在分离盐酸四环素的时候发现在色谱柱残留太大，冲不下来，有经验的大神能否给个建议。[/color][color=#444444] 溶剂A: water+5mM Ammonium Formate 溶剂B: MeOH[/color][color=#444444] 流动相梯度:[/color][color=#444444] Time(min) Flow Rate(mL/min) %A %B[/color][color=#444444] 0 0.3 95 5[/color][color=#444444] 10 0.3 0 100[/color][color=#444444] 15 0.3 0 100[/color][color=#444444] 18 0.3 95 5[/color][color=#444444]出峰时间在6.09min.[/color]
四环素检测标准是？
你们实验室用的四环素类标准品是固体的还是液体的呢
最近在做四环素类药物，开始液相做的，磷酸盐缓冲液流动相不行，某一个国标的，后来换草酸，出峰和响应均能达到要求，不过实际样品处理的时候回收率不好，前处理是1%高氯酸提取，重复，过C18小柱，也是国标处理方法，纯标准品过柱回收率还可以。液质目前问题是响应不好，仪器是安的6410，只能到50ppb，流动相是0.3%甲酸水和0.3%甲酸甲醇。做的好的达人请指点，多谢
我现在要配制盐酸土霉素，盐酸金霉素，盐酸四环素，盐酸多西环素，这四种物质除了盐酸金霉素是微溶于水的，其他三种都是溶解于水，可是我配制1000mg/L，发现还是有没有溶解的，在配制的过程中感觉盐酸多西环素还是比较容易溶解于水的，但那三种配的过程中就有悬浮的放置一个晚上后好多沉淀有没有哪位大侠做过这方面研究啊，指点一下，十分感谢，十分感谢我用的液相色谱测峰，之前配过盐酸四环素，盐酸金霉素，土霉素，多西环素，也是溶解的不好，所以才改全是盐酸盐，但溶解的还是不好做标线用甲醇配的，溶解的还可以，出峰也不错，但在水里我是怎么也溶解不了
如题，对于DMF我在百度上查了它的基本知识，但没有用过，没有了解我想配置四环素类抗生素，盐酸土霉素、盐酸金霉素、盐酸四环素和盐酸多西环素，想模拟制药废水，浓度比较高，但溶解不了，不知道加入DMF效果如何？不知道应用起来有什么注意的吗用过的朋友我想问下，加入这个溶剂是否可以加大溶解呢？急迫得到您的意见与指导谢谢啦。十分感谢
0.0M草酸和乙腈作为流动相，含20%乙酸的甲醇做溶剂，紫外检测器，做液相，分不开乙酸甲醇和四环素的峰。尝试过降低流速和调整草酸乙腈比例。结果都不行，请问有做过四环素液相检测的朋友，帮忙给些建议。谢谢！
最近在用高液做四环素类；我参考文献用乙腈：甲醇：0.01mol/l的草酸水溶液=2:1:7 等度洗脱，金霉素和多西环素出峰响应值很低而且不成一个尖锐的峰型，拖尾。我加的标准品是4ug/ml的浓度。想参考一下你们使用的条件
四环素类兽药残留检测重点、难点解读摘要：本文从四环素类化合物的结构式讲述了其在pH＜2时，以脱水四环素类的形式存在于溶液中，在2＜pH＜6时，以差向四环素类的形式存在于溶液中，在pH＞9时，四环素类化合物会发生内酯化的现象，因此检测时要注意控制溶液的pH值；并以几个具体的标准方法标准(GB/T 21317-2007、GB 31658.6-2021、GB/T 18932.23-2003、GB/T 22961-2008、SC/T 3015-2002、GB/T 31656.11-2021)为例分别从适用范围、提取、净化、仪器设备、定量方式、检测限与定量限进行讲述；总结了检测四环素类化合物时须注意的事项。关键词：[font=calibri]四环素类；[/font]相关标准；提取溶剂；净化方法1四环素类药物结构解析[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709317213_9799_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709320700_4239_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709322018_9804_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709327335_7158_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709331085_5576_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709332521_7603_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709333957_9631_2166779_3.png[/img] [font=宋体][size=16px]以上从pH值的变化对四环素类化合物的存在形式影响，与金属离子的螯合方面进行了结构的解析。[/size][/font]1四环素类化合物检测相关标准解读[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709335314_8942_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709334069_4747_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709335035_1376_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709336012_5471_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709337037_331_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709338043_5929_2166779_3.png[/img]备注： 艾杰尔的pep小柱等效于沃特世的HLB小柱。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709339283_4003_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709342824_553_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709344299_6326_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709342701_7969_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709343971_2771_2166779_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210011709345221_3087_2166779_3.png[/img]1四环素类化合物检测注意事项提取：四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定，其含有许多羟基、烯醇羟基及羰基，在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物，由于生物基质中富含有钙元素、镁元素等，所以在检测四环素类药物时，通常会用含有EDTA的提取溶剂，用来克服因痕量金属离子存在而引起的重现性差的问题。因此提取剂要采用含有EDTA络合剂的柠檬酸-磷酸盐组成的缓冲液体系（pH=4.0）。样品前处理：四环素类化合物易降解，做实验前要合理安排实验的流程及准备好实验的材料，检测的时间要控制再2个小时内完成。净化：建议使用常规的HLB、C18柱，使用阴离子交换柱及阳离子交换柱要特别注意，不建议使用。四环素类化合物：母液浓度建议配成10ug/mL,避光，高浓度的母液在保存过程中会出现结晶析出的现象。堵柱子的问题：建议大家再前处理时多下功夫，低温高速离心，多离心几次。总结：本文从四环素类化合物的结构式讲述了其在pH＜2时，以脱水四环素类的形式存在于溶液中，在2＜pH＜6时，以差向四环素类的形式存在于溶液中，在pH＞9时，四环素类化合物会发生内酯化的现象，因此检测时要注意控制溶液的pH值；并以几个具体的标准方法标准为例分别从适用范围、提取、净化、仪器设备、定量方式、检测限与定量限进行讲述；总结了检测四环素类化合物时须注意的事项。
今天发现了2个 差向四环素 虽然都这么叫 但是结构式 分子式 完全不一样，有没有做过这个物质的老师，高手指点下，2者的区别，怎么选？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/04/201404031821_495334_2378824_3.jpg
最近在做兽药残留的液质方法，四环素类的做了四环素，土霉素，金霉素和强力霉素，四环素经基质加标后处理上机，四环素有40%左右已转化为差向四环素，不知大家有没遇到此类情况？我在提取时有超声10分钟/次×3次，感觉是因为超声的关系。有过相关经验的请麻烦指教
[align=center][color=#595959][img=,600,425]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121032448329_66_932_3.jpg!w640x454.jpg[/img][/color][/align][color=#595959][/color][color=#595959]牛奶中为什么会出现四环素呢？原来，四环素类抗生素，因为用于奶牛的消炎治疗，然后会有残留，在牛奶中有少量药物的存在。因此，牛奶中的四环素类抗生素的检测显得尤为重要！[/color][color=#595959][color=#5a6272]月旭科技参照国家标准，对牛奶中的四环素类抗生素进行检测，现将详细操作步骤分享给大家。[/color][/color][color=#595959][color=#5a6272][/color][/color][b][color=#b7a3a3]1、适用范围:[/color][/b][color=#595959]适用于牛奶中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。[/color][color=#595959][/color][color=#595959][color=#5a6272][color=#595959][b]参考标准[/b][/color][/color][/color]《GBT 22990-2008 牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法》[color=#5a6272][color=#595959][b]3、原理:[/b]试 样 中 四 环 素 类 抗 生 素 残 留 用 0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液 (pH=4.0±0.05)：甲醇 (9:1) 提取，经涡旋和离心后，取上层清液，用月旭公司 BRP 固相萃取柱净化，然后用 HPLC-UV 测定，外标法进行定量。[b]4、试剂:[/b][color=#595959]试剂1：磷酸氢二钠 0.2mol/L：称取十二水合磷酸氢二钠 71.63g，加水溶解，稀释到 1000mL。[/color][color=#595959]试剂2：柠檬酸 0.1mol/L：称取柠檬酸单水合物 21.04g，加水溶解，稀释到 1000mL。[/color][color=#595959]试剂3：移取 625mL 试剂1 与 1000mL 试剂2，混匀。[/color][color=#595959]试剂4：[/color][color=#595959]0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine：称取 60.5g 乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐，用试剂3 溶解并混匀。用 0.1mol/L 的 HCl 或 NaOH，调节 pH 至 4.0±0.05，4℃ 保存。[/color][color=#595959]提取液： Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液：甲醇=(9:1)。[/color][b][color=#b7a3a3]5、提取步骤:[/color][/b][color=#595959]称取 5g 牛奶样品，加入 20mL 提取液，涡旋混合 1min，常温超声 10min，4000r/min 离心 10min，将上清液转移到 50mL 的容量瓶中，再分别用 15mL、10mL 提取液重复上述提取操作，合并上清液，并用提取液定容到 50mL，转移到离心管中，待净化。[/color][color=#b7a3a3][b][b]6[/b]、SPE净化步骤:[/b][/color][b]SPE柱：月旭 Welchrom BRP，规格：200mg/6mL。[/b]a) 活化：5mL 甲醇，5mL 水，弃去。b) 上样：移取待净化液 5mL，弃去。c) 淋洗：用 5mL 水淋洗小柱，弃去淋洗液，并抽干小柱。d) 洗脱：用 2mL 甲醇，稍用负压将小柱湿润，再用 20mL 乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，抽干小柱。e) 浓缩：将收集的洗脱液在 40℃ 加热条件下氮吹吹干，然后用甲醇复溶并定容到 1mL，并过 0.22μm PTFE 滤膜，上高效液相色谱仪检测。[b]7、注意事项:[/b][/color][/color][color=#595959](1) [/color][color=#595959]标准是用 0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 进行提取的，但实验效果不佳，后改成 Na2EDTA-Mc[/color][color=#595959][/color][color=#595959]llvaine 缓冲液：甲醇=(9:1)。[/color][color=#595959](2) 在过 SPE 小柱的过程中，“活化”和“上样”这两个步骤要注意不要使得小柱干涸，这样会影响小柱的回收率。而在“淋洗”步骤一定要抽干，因为乙酸乙酯和水是不互溶的。[/color][color=#595959](3) 加标过程：样品的加标量分别为 2mg/kg，1mg/kg，往 5g 牛奶加入 1mL 10μg/mL 和 0.5mL 10μg/mL 混标溶液，然后用提取液提取，最后用 Na2EDTA-Mallvaine 缓冲液定容至 50mL，准确移取 5mL 上固相萃取柱净化，最终定容到 1mL。[/color][color=#b7a3a3][b]8、色谱条件:[/b][/color][b]色谱柱：[/b]月旭UltimatePlus-C18（4.6 x 250 mm, 5 μm）流动相：A:0.01 mol/L 草酸溶液 B:乙腈：甲醇=18:5洗脱梯度：[align=center][img=,600,213]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121033113472_5868_932_3.jpg!w640x228.jpg[/img][/align][color=#5a6272][color=#595959][color=#595959]流速：1.0mL/min[/color][color=#595959]进样量：10μL[/color][color=#595959]柱温：30oC[/color][color=#595959]检测波长：350nm[/color][/color][/color][color=#5a6272][color=#595959][color=#595959][b]9、色谱图或者加标回收率结果：[/b][/color][/color][/color][align=center][color=#595959][color=#595959][b][color=#595959][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121033208655_3173_932_3.jpg!w640x359.jpg[/img][/color][/b][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][b][color=#595959]图1：牛奶样品色谱图[/color][/b][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][b][color=#595959][/color][/b][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][b][color=#595959][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121033317842_5854_932_3.jpg!w690x387.jpg[/img][/color][/b][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][b][color=#595959][color=#595959]图2：[/color][color=#595959]对照品 0.5 μg/mL 色谱图[/color][/color][/b][/color][/align][align=center][color=#595959][b][color=#595959][color=#595959][/color][/color][/b][/color][/align][align=center][color=#595959][b][color=#595959][color=#595959][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121033441272_2512_932_3.jpg!w640x359.jpg[/img][/color][/color][/b][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959]图3：牛奶样品加标 1mg/kg 图谱[/color][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121035590124_5069_932_3.jpg!w640x359.jpg[/img][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959]图4：对照品 1[/color][color=#595959] μ[/color][color=#595959]g/mL 色谱图[/color][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121036101812_3608_932_3.jpg!w640x359.jpg[/img][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959]图5：牛奶样品加标 2mg/kg 图谱[/color][/color][/color][/align][align=center][/align][color=#595959][color=#595959][color=#595959][/color][/color][/color][align=center][color=#595959][color=#595959][color=#595959][img=,600,434]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910121039533358_304_932_3.png!w573x415.jpg[/img][/color][/color][/color][/align][color=#595959][color=#595959][color=#595959][/color][/color][/color]由表1 可知，采用固相萃取结合高效液相色谱检测四种四环素类药物，加标量为 1.0mg/kg、2.0mg/kg，回收率为 82%~111%，能够满足检测要求。由图1-5 可看出经 Welchrom BRP 固相萃取柱净化，采用 UltimatePlus-C18 色谱柱检测能够使四种四环素药物得到良好的分离，且各种物质峰形良好，保留时间稳定。[b]10、相关产品信息：[/b] [table=813][tr][td=1,1,126]货号[/td][td=1,1,182]名称[/td][td=1,1,505]规格[/td][/tr][tr][td]00522-20014[/td][td]WelchromBRP[/td][td]200mg/6mL，30pk[/td][/tr][tr][td]00000-30013[/td][td]15mL螺口尖底离心管[/td][td]100支/包[/td][/tr][tr][td]00000-30016[/td][td]50mL螺口尖底离心管[/td][td]50支/包[/td][/tr][tr][td]00824-31001[/td][td]Welch 固相萃取装置[/td][td]12位方缸[/td][/tr][tr][td]00802-02201[/td][td]针头式过滤器 Nylon[/td][td]13*0.22 100pk[/td][/tr][tr][td]00824-11101[/td][td]一次性注射器[/td][td]200pk/盒 带针头 橡胶头 1ml[/td][/tr][tr][td]00821-32291[/td][td]盖子+垫片[/td][td]预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm [/td][/tr][tr][td]00821-40927[/td][td]样品瓶[/td][td]2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处11.6*32mm 一级水解玻璃[/td][/tr][tr][td]00260-31043[/td][td=1,1,182]UltimatePlus-C18[/td][td]4.6 x 250 mm, 5 μm[/td][/tr][tr][td]00826-T156P250[/td][td]盐酸四环素标准品[/td][td]CAS No.:64-75-5, 250mg[/td][/tr][tr][td]00826-C162P250[/td][td]盐酸金霉素标准品[/td][td]CAS No.:64-72-2, 250mg[/td][/tr][tr][td]00826-O024P250[/td][td]盐酸土霉素标准品[/td][td]CAS No.:2058-46-0, 250mg[/td][/tr][tr][td]00826-D428P100[/td][td]盐酸强力霉素(盐酸多西环素)标准品[/td][td]CAS No.:24390-14-5, 100mg[/td][/tr][/table][b][/b]
帮同事做下四环素的方法学。在优化质谱条件时，发现质谱上的响应不是那么高，但还说得过去。但上了柱子后，发现几乎没什么响应，只能看到貌似像峰的峰形。也参考了文献，加千分之一的甲酸和10mmol的乙酸铵，但还是不行。我用的柱子是Atlantis C18 2.1mm*150mm 3μm。流动相是乙腈和水，以及上述的添加物。感觉蛮奇怪的，不知道问题出在哪边，请做过的版友指点下！多谢下面是两张图，第一张图是四环素的MS2 scan图谱（10mg/L）。下图是四环素的MRM图谱，从液相正常进样分析（100μg/L）。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/03/201003181526_206731_1644952_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/03/201003181527_206735_1644952_3.jpg[/img]
按照21317的方法做土霉素和四环素，为什么土霉素的回收率能达到90左右，而四环素的回收率只有70左右？操作完全按照标准做的，如果哪一步有问题，应该土霉素的回收率也低才对吧？
[img=,690,2132]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/01/201901091446105996_1884_3101087_3.png!w690x2132.jpg[/img][img=,690,2132]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/01/201901091446105996_1884_3101087_3.png!w690x2132.jpg[/img]这是用AB4000刚走的四环素类4项物质的MRM及各自提取离子图，进的是流动相配制的纯标200ng/mL,四环素和金霉素的储备母液是刚配制的（但并不是刚刚购买的）四环素和金霉素的峰前一直有奇怪的杂峰，强力霉素和四环素好像也没有完全分开[img]https://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif[/img]，就土霉素的峰还能看，流动相A:5mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸水溶液；B:0.1%甲酸乙腈溶液。有老师能帮忙解释下四环素和金霉素峰形怪异的原因吗，对检测定量有什么影响吗？
[color=#444444]做了三个月的光催化实验，目标污染物是盐酸四环素，休假后回实验室用高效液相色谱测四环素测的时候出很小的峰，倒是清洗的时候会出现分裂的峰。[/color][color=#444444]我是做光催化的，所以只是等梯度洗脱四环素一种物质，条件如下：[/color][color=#444444]1 流动相：甲醇/水=70：30，不调pH.样品的pH在5.0左右[/color][color=#444444]2 普通的C18柱，安捷伦的[/color][color=#444444]3 测试波长是356nm[/color][color=#444444]出现的情况是：前段时间测还是正常的，结果换了流动相之后就有问题了。先是不出峰，超出检测时间（5min）后才出现很宽的峰（大概2.5min） 后来是所幸不出峰了，但是用纯甲醇（也是过滤超声过的）清洗3min左右的时候会出峰，两天前是很对称的峰，今天就是分裂的峰了。[/color][color=#444444]在此期间我重新配了两次流动相，情况并没有好转（因为之前也没有调过pH，加上和其他人共用，清洗会比较麻烦所以就没调，但是前后pH值是一致的）；[/color][color=#444444]样品也确定没有问题；[/color][color=#444444]样品池参比池的能量也和以前一样；[/color][color=#444444]期间柱压正常，自检正常，基线也挺稳的；[/color][color=#444444]别人用这个色谱柱测其他样都挺好的，所以色谱柱应该没什么问题。[/color][color=#444444]还请各位大神不吝相助。[/color]
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