天青用于生物染色实验

染色方法　　微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色，但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料，有协助鉴别微生物的作用。故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有鉴别细胞各部分结构的（如芽胞、鞭毛、细胞核等）特殊染色法。食品微生物检验中常用的是单染色法和革兰氏染色法。1、单染色法　　用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。在一般情况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时，必须降低染液的PH值，使其呈现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。　　单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。　　染色结果依染料不同而不同：　　石碳酸复红染色液：着色快，时间短，菌体呈红色。　　　　美兰染色液：着色慢，时间长，效果清晰，菌体呈兰色。　　草酸铵结晶染色液：染色迅速，着色深，菌体呈紫色。2、革兰氏染色法　　革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。　　细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。　　革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。　　另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。本文来自检验地带网　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：　　１）涂片固定。　　２）草酸铵结晶紫染1分钟。　　３）自来水冲洗。　　４）加碘液覆盖涂面染1分钟。　　５）水洗，用吸水纸吸去水分。　　６）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。　　７）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。　　染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

生物体内的染色，例如某个进入生物体的颗粒能染色吗？想看一下这个颗粒进入生物体后会结合在什么部位。所以，想对颗粒进行染色处理，或者标记把，标记的话受限于仪器，最好能在TEM、SEM等显微镜下能用的。。。因为同位素世宗搞不到。。。

有时候要采购买指示剂，买来的是生物染色剂。请问各位版友：生物染色剂与指示剂有什么区别？

现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用日益广泛， 这些技术要求一定的实验条件和试剂，如市面上使用广泛的徕卡染色机及其配套的徕卡透明试剂。相对而言，组织化学技术则具有无需复杂的实验条件和试剂、操作又比较简单的优势，在临床病理学诊断中具有重要的应用价值。 组织化学染色的方法很多，这里仅介绍几种常用的组织化学染色在病理诊断中的应用。一、胶原纤维的染色凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维，也可产生胶原纤维，纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维，是结缔组织中起支持作用的重要部分，具有一定的韧性和坚固性，能抵抗一定的牵[fo

来源：生物秀染色剂的分类一、按来源可以分为 1.天然染色剂：主要是苏木素，胭脂红，地衣红，番红花。 2.合成染色剂：是从煤焦油中提取的苯衍生物。在生物染色中还使用一些无机化合物，如硝酸银，氯化金，磺，锇酸，高锰酸钾等。 二、按主要用途分为 1.胞核染色剂：苏木素，胭脂红，甲苯胺蓝，美蓝，孔雀绿等。 2.胞浆染色剂：伊红，淡绿，橘黄G,酸性品红,苦味酸等。 3.脂质染色剂：苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑，硫酸尼罗蓝及油红等。 三、按染色剂分子中的发色团可分为九类 1.亚硝基类：发色团为亚硝基（-NO)如萘酚缘-B。 2.硝基染料：发色团是硝基（-NO2）如苦味酸。 3.偶氮类：发色团为偶氮基（-N=N-）属于这一类的染色剂的橘黄G,刚果红,俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。 4.醌亚胺类：这类染料含有两个发色团，一个是印胺基（-N=），一个是醌型苯环，如硫堇，美蓝，甲苯胺蓝O,硫酸尼罗蓝,中性红,碱性藏红花O，焦油紫等。 5.苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘，浅绿，碱性品红，酸性品红，结晶紫，甲基缘等。 6.山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁，伊红Y等。 7.蒽醌染料：此类染色剂含有色原蒽醌，如茜素和胭脂虫酸。 8.噻唑类。 9.喹啉类。 8，9类染色剂使用极少。 四、按染色剂的化学性质分类 染色剂的干粉是稳定的盐类，它们在溶液中则电离成酸性或碱性染色剂。如酸性染色剂，能够产生氢离子（H+)或其它阳离子(Na+),而其本身成为带负电荷的阴离子者。这类染色剂一般用于染细胞浆，如伊红Y，苦味酸，橘黄G等。碱性染色剂，能产生氢氧根离子（OH -)或其它负离子(如Cl-),而本身成为带正电荷的阳离子者。这类染色剂常用于染细胞核,如碱性品红等。 1.酸性染色剂：色原——助色团——Na→[色原-助色团]+Na+。常用的如伊红，酸性品红，苦味酸，橘黄G，刚果红，水溶性苯胺蓝，淡绿等酸性染料常用以染细胞浆等碱性成份。 2.碱性染色剂：色原——助色团——Cl→[色原-助色团]++Cl。常用的如苏木素,卡红,次甲基蓝,甲苯胺蓝,硫堇,美蓝等碱性染料常用以染细胞核等酸性成份。 严格地说，酸性染色剂的溶液并不一定呈酸性。同样，碱性染色剂的溶液也未必呈碱性。所谓酸性和碱性染色剂仅指它们电离后其分子的主要染色部分是阳离子还是阴离子。因此称为阳离子型染色剂或阴离子型染色剂更为适当。 常规H.E染色中苏木素染液的PH值约为7，此时胞核的化学成份电离产生H+，而其本身成为带电荷的阴离子，所以被阳离子型的碱性染料剂所着色。伊红染液为弱酸性。细胞的化学成份从溶液中获取H+而成为带正电荷的阳离子，因此与阴离子型的酸性染色剂（伊红）相结合，染作红色，这就是H.E染色分别显示核和胞浆的机制。 3.中性染色剂：这是酸性染色剂和碱性染色剂的复合物，又可称为复合染料。是由碱性染料（色碱的盐）和酸性染料（色酸的盐）配制而成。其中染色剂的分子很大，所以往往水中溶解度较低，需用酒精做溶剂。血液学中的血液涂片经常使用的瑞氏染色剂及姬姆萨染色剂就是这种混合染色剂。其中的各种不同成分可分剔使核、胞浆和颗粒着色。

各位大神！小弟做的透射电镜生物样品，利用leica AC20型的自动染色仪来进行染色，效果相当不理想啊。图片本底不清晰，对比不高。请大神指教·！拜谢！！

为一种生物染色剂，必须同时满足两个要求：具有鲜艳透明的颜色，而且能与组织细胞相结合。染色剂分子能够显示颜色的基因，称为发色团。主要的发色团有：亚硝基和偶氮基显示的颜色较强，在染色剂中有一个这样的发色团，就可染出颜色。其他的发色团则不是这样，必须有几个发色团，有醌的分子中就有四个发色团，（2个羰基2个烯基）。 大量的合成染料都是由煤焦油蒸馏得到的，它们都是苯的衍生物，所以苯环是合成染料的基础。苯本身是无色的，但其氢原子为某发色团取代后就带有了颜色。含有发色团的苯环化合物，称为色原。 苯+发色团=色原 色原还不能很好地与组织细胞相结合，即使着了色也很容易脱去。因此仅仅具有色原还不能成为染色剂，染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合的基因，这样基国在称为助色团。如—NH2 —COOH —OH —SO3H 氨基 羧基 羟基 磺酸基 氨基在溶液中形成阳离子（+），为碱性；其它羟基，羧基和磺酸基皆带阴离子（-）故为酸性。如三硝基甲苯是个色原，它虽有发色团—硝基，但因缺乏助色团，所以没有染色作用，不能称为染料。假如三硝基苯分子中的一个氢原子被羟基置换，则所生成的化合物既具有发色团而又得到了助色团—羟基，这就成了常用的酸性染料苦味酸。 这就可以看出，助色团的作用在于使色原形成盐类，可以在溶液中电离成为带电的离子，这样才能与相应的组织细胞的成份相结合。

染色技术由于微生物细胞含有大量水分（一般在80-90%以上），对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大，与周围背景没有明显的明暗差。所以，除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外，绝大多数情况下都必须经过染色后，才能在显微镜下进行观察。但是，任何一项技术都不是完美无缺的。染色后的微生物标本是死的，在染色过程中微生物的形态与结构均会发生一些变化，不能完全代表其生活细胞的真实情况，染色观察时必须注意。　　本节包括四部分：　　一、染色的基本原理　　二、染料的种类和选择　　三、制片和染色的基本程序 　　四、染色方法

热处理奶这里的热处理娃指在60~65℃下加热约15s。新迸的生奶经过热处理后，能够延长 保存期，使生奶在被进-步加工之前能够延长冷藏储存的时间。这种处理方法能有效减 少假单胞菌等热敏性嗜热菌的数量。但假单胞菌能在生奶冷藏期间生 长，产生胞外酶(如蛋白酶和脂肪酶），这类酶不受随后的热处理的影响，能继续保留在奶 液中，产生类似UHT奶或奶酪样的腐败现象。染色剂还原试验该方法将氯化二苯基四氮唑(TTC)作为染色剂，嗜热链球菌作为分析菌株。当 将TTC染色剂加人事先接种了嗜热链球菌的无抗生素的奶中时,样品中的TTC快速还 原为红色的偶氮化合物。此还原过程是不可逆的，红色的偶氮染色剂不能被氧分子重新 氧化，这点与用亚甲基蓝作为染色剂时不同：当细菌的活性被残留抗生素或其他抑制物 质完全抑制时，则TTC染色剂不能转化为偶氮化合物，此时，奶液仍呈白色。表明部分待 测微生物受到抑制（当介于中间的红色阴影产生时）。 因此，测试的敏感度受菌株的菌龄、加人量的多少以及加人TTC之前菌体培养时间的影响。 结果的比较必须在标准状态下进行。

常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。 一、苏木素-伊红染色的基本原理 苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。 苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。常配制一大瓶，备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。它的优点是配制后即可使用。 成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。 常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。 苏木素-伊红染色，在组织病理学中，是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色。 二、染液的配制 在实验室内常用的苏木素染液有以下几种，不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点，不过各有优劣。 （一）苏木素染液的配制方法如下 1.Harris氏苏木素液 甲液：苏木素 1g 无水酒精 10ml 乙液：硫酸铝钾 20g 蒸馏水 200ml 丙液：一氧化汞 0.5g 经典的配制方法是，先将甲液加热溶解后，密封待用，再将乙液加热溶解至沸，去火，待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中，全部混合后，再使溶液在短时间内加热至沸腾，去火，最后，将氧化汞缓慢倾入溶液中（氧化汞一定要慢慢少量分次加入，切忌急躁。因氧化汞倒入后，溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。）此时液体变为深紫色，待氧化汞全部放入后，再将溶液加温至沸腾片刻，立即将溶液放入流动的冷水中，并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。隔夜后过滤，加入冰醋酸（按5%比例）混匀，再过滤后保存于冰箱内备用。 我们在实验工作中摸索了一种Harris氏苏木素的配制方法，染色效果很好，特介绍如下。 配方：（配制2000ml） 苏木素 9g 硫酸铝胺（铵明矾） 200g 氧化汞 7g（5—10g） 冰醋酸 100ml 蒸馏水 2000ml 器具： 3000毫升三角烧瓶 1个 200毫升量筒 1个 1000毫升量筒 1个 漏斗 1个（大） 滤纸 1大张 另备脱脂棉、电炉、湿抹布、大称量纸、流水槽等。 （器具要求达到化学洁净） 配法： 1．将苏木素溶于100毫升无水乙醇中，密封备用。 2．将200克铵明矾溶于2000毫升蒸馏水中，加热至沸。 3．去火。加入苏木素酒精搅拌，加热至沸。 4．去火。缓缓加入氧化汞。 5．微火煮至有金属膜产生。 6．去火。以湿抹布包住三角烧瓶的颈部。迅速放置于冷水浴中冷却，缓缓摇动烧瓶至液体完全冷却为止。 7．静置避光过夜。棉花过滤。滤液中加入冰醋酸（按5%的比例加入），混匀，滤纸过滤，备用。 注意事项： 1．配制好的苏木素液，未经使用的可长期置冰箱（冷藏）内保存。 2．盛液体的烧瓶要质优并且容积要大，防止忽速冷却对破裂和煮沸时液体溢出。 2.Hansen氏苏木素液 甲液：苏木素　　　　　　　　　　　1g 　　　无水酒精　　　　　　　　　　10ml 乙液：硫酸铝钾（钾明矾） 　　　　20g 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　200ml 丙液：高锰酸钾　　　　　　　　　　1g 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　16ml 　　先将甲液加热溶解，然后将乙液加热溶解，将甲、乙两液混合。再将丙液溶解后缓缓滴入，待全部混合后，再次煮沸一分钟，冷却后过滤，即可使用。 3.Heidenhain氏铁苏木素液 甲液：硫酸铁铵（紫色结晶）　　　　5g 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　100ml 乙液：苏木素　　　　　　　　　　　0.5g 　　　无水酒精　　　　　　　　　　10ml 　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　90ml 　　此液要求硫酸铁铵只有紫色的透明结晶才能使用；苏木素是溶于洒精中然后加水。苏木素液需放置4-5周才能成熟。临用时将甲、乙两液等量混合后使用。（也可先将苏木素用无水酒精配成5%的贮备成熟，用时取10毫升加蒸馏水至100毫升使成乙液） 　　此苏木素液能染许多结构，但只能用于退行性染色法，需要熟练的分化，初学者宜用减半浓度的铁明矾分色，熟悉后再用原浓度分色。 　　此液与其它的苏木素染色技术有两个不同a.媒染剂与苏木素分开使用。b.所用的媒染剂亦用作为分色剂。 4．Ehrilich氏酸性苏木素液 主要应用一般染色和粘液，骨组织的染色 配方： 苏木素 2g 纯酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 冰醋酸 10ml 钾明矾 15g 将苏木素溶于纯酒精，再将钾明矾溶于蒸馏水中，溶解后将甘油倾人混合，然后加入苏木素酒精混合，最后加人冰醋酸，溶液全部混合后，应暴露在日光下使其自然成熟，时间约要三个月。（若加人300毫克碘酸钠，使苏木素迅速氧化则可立即使用。）此液贮存愈久染色力愈强。（可保持数年之久）染色时间5——20分钟，结果甚佳。 5．Delafreld氏苏木素液 主要应用于一般染色，弹力纤维的染色。 甲液： 苏木素 4g 纯酒精 25ml 乙液： 饱和铵明矾水溶液（约 10％）40毫升 丙液： 甘 油 100ml 甲 醇 100ml 先将苏木素溶于酒精，再将甲液混合在乙液中，置于白色瓶中并暴露在阳光下约一周，然后过滤，将丙液加人滤液中，待溶液呈暗灰色时再过滤，滤液密封保存。 6．Mayer氏明矾苏木素液 主要应用于一般染色，骨组织染色，及免疫组化染色。 配方： 苏木素 0.1g 钾明矾 5g 碘酸钠 0.02g 拘椽酸 0.1g 水合氯醛 5g 蒸馏水 100ml 先将苏木素及水煮沸溶解，加人钾明矾与碘酸钠，搅动直到全部溶解为止。再加人水合氯醛和拘椽酸，完全溶解后染液呈蓝紫色。加热煮沸五分钟，冷却后过滤即成。 此染液染切片5——15分钟，不需分化，充分水洗后，可使细胞核显蓝色并且非常细致清晰，通常用于对比染色。 7．Weigert氏铁苏木素液 甲液 苏木素 1g 无水酒精（或 95％酒精） 100ml 乙液 29％三氯化铁水溶液 4ml 蒸馏水 95ml 盐酸 1ml 临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。 由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。 8．Mallory氏磷钨酸苏木素

GS-Smart小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中的应用对比台式水平脱色摇床是生物学实验室常见的仪器设备，常用于普通凝胶电泳条带固定、考马斯亮蓝（CBB）染色脱色、硝酸银染色、蛋白质免疫印迹（Western Blot）、细胞培养和放射自显影等实验中。一般的台式水平脱色摇床主要是通过调节定幅载具的摆动频率，从而控制样品在溶液中的摆动快慢，这既是该仪器的基本工作原理，也是她在以上实验中主要发挥的作用。在普通考马斯亮蓝染色、脱色实验中，台式水平脱色摇床就是科研工作者们经常会用到的设备。一般是设定工作池的摇摆频率后，先后加入CBB染色液、脱色液，使摇床工作池持续摇摆，再置入蛋白凝胶使其在摇摆的液体中充分浸润洗涤，从而实现染色脱色。但一般的台式水平脱色摇床除了工作池的摆动频率可调外，没有其他参数能设置，虽然某些型号摇床还增加了定时功能，但也无法设置自动完成复杂的步骤。因此，前期进液、换液和排液都需要实验人员手动操作，另外，染色、脱色时间也只能靠实验人员自己把握。再者，台式水平脱色摇床的工作池一般裸露在外，摇摆过程中，有可能溅出溢出CBB染色液、脱色液，还有可能挥发出有毒化合物。这样不仅容易造成污染，甚至可能产生安全隐患，进而危害实验人员的健康。相比之下，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色仪无论在功能上、设计上还是外观上均领先台式水平脱色摇床，例如：1.智能编程功能：GS-Smart内置3种标准的染色程序，可编程存储47个自定义程序，可以轻松实现进液、换液、出液、定时摇动和废液回收等步骤，无人值守，让实验全程自动完成，这将为那些还在使用传统台式水平脱色摇床做CBB染色脱色实验的科研工作者们节省大量时间精力。2.可封闭可定制的染色池：GS-Smart染色池可封闭，既能防止液体溅出溢出、阻隔挥发物质，还可选择并定制各种尺寸。有些科研工作者为实现“快速”CBB染色脱色，习惯将CBB染色液或脱色液加热至沸腾然后进行染色脱色处理，而高温状态的液体会加速挥发甲醇乙酸等化合物，如果此时使用台式水平脱色摇床，无疑具有一定的安全隐患。3.机身与储液瓶一体化设计：该设计属于国际首创，与市场同类产品相比，减少了分散在外的瓶瓶罐罐，从而整机占地面积与普通台式水平脱色摇床相当。不仅节省了实验室空间，同时也美化了整体外观。综上，在CBB染色脱色实验应用方面，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色仪无论在功能上、设计上还是外观上均全面领先于台式水平脱色摇床。事实上，GS-Smart从2013年春季发布之初，就定位成了一款为考马斯亮蓝染色脱色实验而生的仪器，她的最终使命是全面取代CBB染色脱色实验中的台式水平脱色摇床，从而让所有CBB染色脱色自动进行！本文关键词：摇床,脱色摇床,水平脱色摇床

[font=宋体]和大家分享几个微生物检验操作[/font][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片，请用暴风影音打开。[/font][font=Arial][/font][font=宋体]之二荚膜染色[/font]

一、染色方法1863年由waldeyer率先倡导用苏木素染液染细胞核，后来Mallory、Mayer等也阐述过苏木素的应用。近年来特殊染色和组织化学方法也屡有创新。Shikata(1973)，Tanka等(1981年)分别介绍了用地依红和维多利亚蓝混合液显示乙型肝炎表面抗原的方法；1987年Crocker J等推出了核仁组成区嗜银蛋白染色的技术方法以及1991年进行的乳腺肿瘤核仁组成区的研究方法等。特殊染色的分类：特殊染色方法按照所染目的物进行分类，有结缔组织、肌肉组织、神经组织、脂类物质、糖类、色素、病理的内源性沉着物、病原微生物、内分泌物质、单种细胞和性染色质、骨、血液及造血组织、核酸、酶类等。特殊染色的命名：对于特染的命名至今尚无统一的规定，多数均按发明者的姓名命名，如van Geison染色等；有的则按所用染色液命名，如甲基绿一派若宁染色、苏丹Ⅲ染色等；有的按目的物命名，如网织纤维染色；还有的采用混合命名，如试剂十人名等。二、染色目的未加染色的任何组织切片在镜下只能辨认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任何结构。染色的目的就是将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，将组织或细胞及其他异常成分染上不同深浅的颜色，便于在光学显微镜下进行观察。三、染色原理 染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其机理尚未完全清楚。 1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解度大于在洒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸收或沉淀到组织、细肋的小孔中去而着色的‘这种机制的染色是很少的。2、另有学者认为染色是染色剂相组织、细胞之间的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反应是最典型的例子。但是，大量染色的化学反应并不象铁反应那样明确。大多数染色的原理至今仍未搞清楚，有些可能是物理性的，有些可能是化学性的，有些则可能2种机制都起作用。正因为人们对染色的原理还没有完全掌握，所以还不能很好地运用原理来控制它，在相当程度上需凭工作经验。四、染色的分类(一)普通染色最广泛应用于常规制片的苏木素和伊红染色，又称为常规染色。(二)特殊染色1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色方法称为“特殊染色”，它又可以理解为“选择性染色”。特殊染色对目的物的选择性是相对的。有些方法具有相对的特异性，加油红O等脂质染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是哪一种具体成分。所谓特殊染色的相对性，就是一种方法可以显示多种目的物，一种目的物可以用多种方法显示，其中有些方法可能呈阳性，而有些方法则呈阴性，这就需要我们拿捏多种方法，因为有时只有依靠多种方法才能确定所要确认的目标。2．特殊染色的意义1)可以显示在常规HE染色切片中不明显的目的物,例如当病变中霉菌数量较少时，应用Gridley染色就容易发现。2)可以区别胶原纤维和平滑肌，苏丹染色可区别脑浆内的脂肪变和水池变。3)可以显示某些HE染色中不能看到的目的物。如网织纤维、星形细胞的突起、结核杆菌、螺旋茵等，都可用相应的特殊染色法显示。因此，特殊染色是常规染色的必要补允，也是染色技术中不可缺少的组成部分。它在病理诊断中起着辅助作用。

亚甲基蓝 分析纯与生物染色剂 两个种类，除了含量不同外，还有什么区别？做膨润土吸蓝量测试，可以用染色剂代替分析纯吗？意思是用分析纯亚甲基蓝需要2.2280g，可不可以多用一些染色剂，使两者含量相同？

[size=18px][font=宋体] 在大肠菌群测定过程中，革兰氏染色（Gram Stain）又是一步很重要的鉴定阶段，革兰氏染色的正确性直接关系到能否正确判断该菌落是不是大肠菌群，而革兰氏染色正是一门难以掌握的最基本的细菌学实验技术，许多分析人员因缺少这方面熟练技术而显得对革兰氏染色结果没有把握，有的只好通过多次反复试验以求得一个仍不很肯定的判断结果，既浪费时间又不能保证染色结果是否正确，很可能还导致大肠菌群测定错误或失败，我们在多年的大肠菌群测定分析的实践基础上，通过纯培养一株大肠杆菌（Escherchiacoli ）和一株枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis）并进行多种条件下的革兰氏染色实验比较，以观察革兰氏染色易受哪些因素影响，从而进一步研究这项技术的最佳操作方法。[/font][/size][font=宋体][size=18px][font=宋体]1 [/font][/size][size=18px][font=宋体]实验材料1.1 大肠杆菌 大肠杆菌是大肠菌群中很重要也很有代表性的一种．在某次大肠菌群测定过程中，选取伊红美兰琼脂培养基上不同的典型菌落，按《应用微生物学实验法户〕 中大肠菌群细菌分离法得到甲基红试验阳性、VP 试验阴性、发酵柠檬酸盐阴性、利用脉酸试验阴性等特征的一株大肠杆菌．[/font][/size][font=宋体][size=18px]2 [/size][size=18px]实验结果与分析 2.1菌龄的影响 16h 和24h的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌革兰氏染色均能得到正确结果，但32h以上的枯草芽抱杆菌有13.3％出现阴性结果。出现阴性反应的枯草芽抱杆菌同时发现很多菌体已经不呈典型杆状，显然由于培养时间过长，枯草芽抱杆菌（阳性菌）或已死亡或部分菌自行溶解了，造成细胞壁通透性增大而呈假阴性。因此在大肠菌群测定时，细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h，以免阳性菌呈假阴性干扰革兰氏染色的正确性．2.2细菌堆积密度影响 涂片时生理盐水中细菌浓厚时，菌体明显堆积在一起，从而影响酒精脱色效果，甚至在细菌堆中仍残留结晶紫，因而无论大肠杆菌还是枯草芽抱杆菌，凡密集成堆的常常呈阳性反应，而均匀分散的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌都能得到正确结果，因此测定时应以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准． 我们认为在大肠菌群革兰氏染色时菌龄、细菌密集程度、媒染时间、酒精脱色程度这几方面因素会对染色的正确性产生影响．在大肠菌群测定时，革兰氏染色的最佳条件应该是：细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h ，涂片时应以分散开的细菌染色为准，碘媒染时间以1 min为宜，酒精脱色程度是革兰氏染色的关键，脱色时间应严格控制在2S 一30S之间。为进一步确证革兰氏染色操作正确，应把未知菌伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落（cdony）与已知的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌的混合菌同片染色，如果混合菌能分辨出阳性菌和阴性菌，则也能肯定未知菌革兰氏染色结果是正确的．[/size][/font][/font]

有没有做生活饮用水中滤膜法的总大肠菌群，革兰氏染色这一步能否省掉，谢谢

[font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/special-staining-services][b]HE[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/special-staining-services][b]染色[/b][/url]，全称为苏木精[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]伊红染色法 [/font][font=Calibri](hematoxylin-eosin staining)[/font][font=宋体]，是最基本的病理学染色技术，能够对正常组织和病理组织进行形态结构的观察。特殊染色是常规[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色的必要补充，能够有针对性地对组织成分进行染色，使组织病理学评价更加完善精确，在临床病理学诊断和病理组织学研究具有重要的应用价值。除常规的[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色外，义翘神州还提供[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]种特殊染色服务，包括[/font][font=Calibri]masson[/font][font=宋体]三色染色、 [/font][font=Calibri]PAS[/font][font=宋体]染色、尼氏染色、[/font][font=Calibri]VG[/font][font=宋体]染色、苏丹黑染色、普鲁士蓝染色、油红[/font][font=Calibri]O[/font][font=宋体]染色和β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶衰老染色等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括[/font][font=Calibri]: [/font][font=宋体]胶原纤维 染色[/font][font=Calibri](Masson[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]磷钨酸 苏木素 [/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、脂肪染色[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]苏丹[/font][font=Calibri]III)[/font][font=宋体]、糖原染色[/font][font=Calibri](PAS)[/font][font=宋体]、粘液染色[/font][font=Calibri](PAS)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特殊染色：[/font][font=宋体]病理组织切片染色技术作为病理实验室基本方法之一，具有较高的使用价值，也是目前临床外科病理最基本、最常见的形态学检验技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]实验原理：[/font][font=宋体][font=宋体]组织切片染色就是利用染料在组织切片上给予不同颜色，使其与组织或者细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。最常见的组织染色是[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色，另外巴菲尔生物还可开展其他特殊染色项目，如[/font][font=Calibri]masson[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]PAS[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]AB-PAS[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]EVG[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]VG[/font][font=宋体]染色、维多利亚蓝染色、番红[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]固绿染色、甲苯胺蓝染色、油红[/font][font=Calibri]O[/font][font=宋体]染色、阿利新蓝染色、碱性磷酸酶染色、瑞氏姬姆萨染色、普鲁士蓝染色、[/font][font=Calibri]TTC[/font][font=宋体]染色及髓鞘染色等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特殊染色的应用价值[/font][font=宋体]现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用日益广泛，但由于这些技术要求一定的实验条件以及所需的试剂价格较为昂贵，对于一部分病人以及某一些基层医院是比较难以接受的。而组织化学技术则具有无需复杂的实验条件以及较为昂贵的试剂操作又比较简单的优势，在临床病理学诊断中具有重要的应用价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]比如，当细胞中出现色素，是黑色素还是含铁血黄素以及当组织中出现均一化学物质是否为淀粉样变性等，用组织化学技术区别起来很简单，所以组织化学技术，虽然已有几十年到几百年的历史，仍是一个很有实用价值的技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]常见的特殊染色方法及应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Mallory[/font][font=宋体]磷钨酸苏木素染色[/font][/font][font=宋体]原理：成熟的苏木素通过钨的结合成蓝色色淀，这种色淀与所选择的组织成份能牢固地结合而呈蓝色，显示棕红色的成份是由于磷钨酸而着色。[/font][font=宋体]方法应用：[/font][font=宋体][font=宋体]临床上应用该方法对横纹肌肉瘤进行诊断，横纹肌肉瘤的组织学形态变化多样，与未分化的间胚叶肿瘤很难鉴别，采用磷钨酸苏木素染色，在瘤细胞质内发现蓝色横纹，则可以证明该肿瘤是呈横纹肌分化。该染色液也可以对炎症渗出的纤维素，[/font][font=Calibri]DIC[/font][font=宋体]的毛细血管中的纤维素、以及神经病理等方面进行染色[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PAS[/font][font=宋体]染色 [/font][/font][font=宋体]原理：高碘酸是一种氧化剂，它能破坏多糖结构的碳键。组织切片首先用高碘酸溶液氧化，使存在于组织多糖分子的乙二醇基或氨羟基的碳键打开，生成醛基化合物。暴露出来的游离醛基与无色品红溶液作用，生成新的红至紫红色复合物而得到定位。[/font][font=宋体]应用：[/font][font=宋体][font=宋体]在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。随着医学实验技术的发展，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质，心肌病变及其他心血管疾病的诊断，糖原累积病诊断和研究[/font] [font=宋体]，糖尿病的诊断和研究，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。为临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于特殊染色服务详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/special-staining-services[/font][/font][font=Calibri] [/font]

GS-Smart小型自动凝胶染色摇床在考马斯亮蓝染色实验中的应用考马斯亮蓝染色法（CBB染色法）是目前蛋白质染色实验中相当常用的方法，它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，号称目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一，而又比硝酸银染色等其他方法更简便且更加容易操作，因而得到了广泛应用。考马斯亮蓝染色法的全实验过程有两个关键且耗时较长的步骤，分别是染色和脱色。通常，为了让蛋白凝胶能够充分的染色和脱色，一般会先后将CBB染色液、脱色液加入持续摇摆的脱色摇床工作池，再置入凝胶使其充分浸润洗涤，从而实现染色脱色。普通的脱色摇床除了工作池的摆动频率可以调节外，并没有其他参数可以设置，进液、换液和排液等步骤都必须由实验人员手动完成。而且启动后，由于工作池一般是持续不停的摆动，因而染色、脱色时间也只能靠实验人员自己把握。所以，普通考马斯亮蓝染色脱色实验一般都需要有实验人员值守。此外，为固定蛋白质和维持CBB在染色前的酸性环境，同时也为了去除前期电泳残留物质对染色的干扰，通常配置的CBB染色液或脱色液中有时会加入具有神经毒性的甲醇和强刺激性的乙酸，且配好的CBB染色液一般总体呈棕黑色（CBB R-250）。而普通脱色摇床的工作池完全敞开暴露，所以摆动过程中有可能溅出溢出CBB染色液、脱色液，还有可能挥发出有毒化合物。这样不仅容易造成污染，甚至可能产生安全隐患，进而危害实验人员的健康。鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床（又名自动凝胶染色仪）可以很好地解决以上普通考马斯亮蓝染色脱色实验所面临的问题，同时也能带来更多便利。首先，她的智能编程功能可以实现进液、换液、出液、定时摇动、废液回收的自动运行，全过程无需人员值守，从而真正全自动完成CBB染色脱色实验。其次，她配备了可封闭的染色池，能有效防止CBB染色液、脱色液溅出溢出，阻隔挥发物质，从而大大降低污染风险，保护实验人员的健康。染色池还有多款尺寸可选，甚至可以定制，从而尽可能多地满足不同科研工作者对考马斯亮蓝染色脱色实验的不同需求。第三，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床操作起来也十分简单方便，只需“加入溶液、置入凝胶、设置管路程序、点击运行”四个简单的步骤，便可轻松搞定考马斯亮蓝染色、脱色的全过程，省时省力省心。另外，再值得一提的是，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色摇床还拥有国际外首创的机身与储液瓶一体化设计，与市场同类产品相比，减少了分散在外的瓶瓶罐罐，节省了实验室空间，同时也美化了整体外观。本文关键词：染色摇床,自动凝胶染色摇床,考马斯亮蓝染色,CBB染色

和大家分享几个微生物检验操作Flash短片，请用暴风影音打开。之一革兰氏染色

[font=宋体][size=3]和大家分享几个微生物检验操作[/size][/font][size=3][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片，请用暴风影音打开。[/font][/size][font=Arial][/font][font=宋体][size=3]之六内生孢子染色[/size][/font][font=Arial][/font]

进行革兰氏染色验证试验时，载玻片先用脱脂棉沾酒精擦拭干净，再在酒精灯火焰上来回烤热杀菌下，然后用滴头加入什么液体一~二滴，再用灭菌过的接种针接种一环将培养物涂布再液滴表面，以将培养物涂片开来，我看革兰氏染色操作视频是这样的，但是标准的操作方法并没有提到用滴头加入什么液体一~二滴，而是直接接种涂布啊。

[b]铅柠檬酸盐，三水合物（简称：染色剂）[/b]Pb（C [sub]6[/sub] H [sub]5[/sub] O [sub]7[/sub]）[sub]2[/sub] 3H [sub]2[/sub] O FW 1053.82 CAS＃512-26-5 最小测定法99.％超薄切片中使用最广泛的金属着色剂。用于电子显微镜的简化铅柠檬酸盐染色剂。电子显微镜的即时铅柠檬酸盐货号：17800 （进口） 25g /1瓶有需要联系qq：3193945161邮箱：yuanyali330@163.com

中科院昆明动物所在张亚平院士带领下，该所彭旻晟、贺军栋、樊隆等人开发出针对DNA芯片数据中Y染色体单核苷酸多态性位点的分析策略。相关研究11月27日在线发表于《欧洲人类遗传学》。 随着全基因组关联分析广泛应用于人类遗传学工作之中，相关的DNA芯片（微阵列）也不断得到发展。许多Y染色体单核苷酸多态性位点（Y-SNPs）已被整合在DNA芯片中。然而，这些Y-SNPs数据在全基因组关联分析中都被弃之不顾，没有进行任何评估分析。　　为此，研究人员运用开发的分析策略对来自114个缅甸人和3个尼日利亚人共117份男性样本DNA芯片数据中的2041个Y-SNPs进行了评估分析。基于数据过滤后提取出的369个Y-SNPs，研究人员构建了Y染色体单倍型类群树，解析出缅甸人群的父系遗传结构。　　该结果得到基因分型实验和Y染色体重测序数据的支持，表明该策略切实可行。研究人员对分析中的数据格式转换、过滤和注释处理后发现，DNA芯片对Y-SNPs的检测灵敏度和准确性依旧有待提高，例如：芯片厂商可依据Y染色体重测序数据重新选择合适的Y-SNPs并设计相关探针。

人工染色体指人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体系统。包括酵母人工染色体（YAC）、细菌人工染色体（BAC）以及后来的人类人工染色体（HAC）和植物人工染色体（PAC）等多种类型。人工染色体的出现，为基因组图谱制作，基因图位克隆，动物的基因治疗，植物的多基因转化提供了有用的工具。酵母人工染色体（Yeast artificial chromosome, YAC）1983年，Murray和Szostak1]在大肠杆菌质粒pBR322中插入酵母的着丝粒、自主复制序列、选择性标记及四膜虫核糖体RNA基因rDNA（Tr）末端序列，并转化酵母菌，构建成了酵母人工染色体。YAC载体一般能够容纳500 kb，甚至1 Mb大小的染色体片段[[url=http://bbs.instrument.com.cn/post.asp?forumid=487&threadid=&postid=&title=&action=&FTTID=1&hasReadRelease=yes#_ENREF_2]2, [url=http://bbs.instrument.com.cn/post.asp?forumid=487&threadid=&postid=&title=&action=&FTTID=1&hasReadRelease=yes#_ENREF_3]3]。目前，在多种高等生物中均构建了高质量的YAC文库。YAC可用于大规模基因组测序和物理图谱构建。例如，美国科学家利用YAC完成了人Y染色体及21q的物理图谱并进行了相应的测序工作[[url=http://bbs.instrument.com.cn/post.asp?forumid=487&threadid=&postid=&title=&action=&FTTID=1&hasReadRelease=yes#_ENREF_4]4]。然而，YAC具有一些缺陷，克隆外源基因易出现嵌合体；部分克隆不稳定，在传代培养中可能会发生缺失或重排；YAC与酵母染色体具有相似的结构，因此难与酵母染色体区分开[[url=http://bbs.instrument.com.cn/post.asp?forumid=487&threadid=&postid=&title=&action=&FTTID=1&hasReadRelease=yes#_ENREF_2]2, [url=http://bbs.instrument.com.cn/post.asp?forumid=487&threadid=&postid=&title=&action=&FTTID=1&hasReadRelease=yes#_ENREF_3]3]。细菌人工染色体（Bacterial artificial chromosome, BAC）[/si