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荧光假单胞菌生物型

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荧光假单胞菌生物型相关的论坛

  • “荧光假单胞菌”是“发光猪肉”的元凶

    猪肉为何会在黑夜里发出荧荧蓝光?昨天下午,北京市工商局对外揭晓“谜底”:通过抽检发现,这是一种叫荧光假单胞菌的细菌在“作祟”,与猪肉安全无关。  专家介绍称,该细菌并不可怕,对正常人群不具有致病性。  抽检未发现荧光增白物  近期,有几位消费者反映在建欣苑菜市场、八里桥市场等处购买的猪肉,夜晚会发出荧光,担心吃了可能对身体有害。而这些肉都是从正规屠宰场批发,且肉身上有检验检疫章(本报12月12日曾报道)。  近日,北京工商部门组织了抽检,由北京市食品安全监控中心对送检样本进行荧光增白物质和荧光假单胞菌检测,结果显示,送检样本均未检出荧光增白物质,不过都检出了荧光假单胞菌。  猪肉煮熟可杀灭该细菌  “荧光假单胞菌能产生黄绿色荧光色素而使猪肉发光”,中国农业大学微生物系教授王贺祥介绍,这种细菌在肉及肉制品、禽蛋类等蛋白质丰富的食品中,易生长繁殖。  王贺祥说,荧光假单胞菌属于革兰氏阴性嗜冷菌,广泛存在于土壤、水、植物、动物活动环境中,也是存在于人类肠道的正常细菌,对正常人群不具有致病性,不必对其恐慌。  如何杀灭猪肉上的细菌呢?王贺祥介绍,该菌在42℃就会停止生长,超过70℃,只需数秒即可杀死。  市工商局也表示,消费者购买到的“发光猪肉”,可能在屠宰、储存、运输、销售等过程中污染了荧光假单胞菌,只要猪肉本身没有腐败变质,可以通过焯、炒、煮等方式将猪肉熟制后食用,不会对人体健康产生影响。

  • 包装饮用水铜绿假单胞菌的检查方法

    包装饮用水铜绿假单胞菌的检查方法

    该资料就国家最新发布的GB 19298-2014 GB 《食品安全国家标准包装饮用水》中,对大肠菌群和铜绿假单胞菌的采样方案和微生物限量要求做了详细的图示。特别是铜绿假单胞菌滤膜法的检测,资料上演示了C6水中微生物膜过滤系统上的滤膜法正确操作过程,供检验人员参考。[img=,690,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811291101391320_3276_2443641_3.png!w690x336.jpg[/img][img=,690,333]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811291101383267_4896_2443641_3.png!w690x333.jpg[/img][color=#ff0000][b]详细资料请见附件。[/b][/color]

  • 【分享】求助 缺陷假单胞菌ATCC19146方面的资料

    [em09512][em09507]求助一下缺陷假单胞菌ATCC19146方面的资料,主要是其生物学特性的资料。因为做过滤验证,虽然知道用这个菌,但是它的好多相关信息都查不到,各位网友,谁有这这个菌的资料,谢谢共享一下。

  • 假单孢菌的问题

    有没有大佬知道真空包装牛肉贮藏40d后假单胞菌还会不会生长?望老师不吝赐教

  • 【原创大赛】包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测和鉴定

    【原创大赛】包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测和鉴定

    包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测和鉴定[img=,690,513]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111925505308_7597_2166779_3.png!w690x513.jpg[/img][img=,690,443]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111926022842_4589_2166779_3.png!w690x443.jpg[/img][color=#404040]致病性[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]主要致病物质是[/color][color=red]内毒素[/color][color=#404040],此外尚有菌毛、荚膜、胞外[/color][color=#404040]酶和外毒素等多种致病因子。可引起局部化脓性炎症[/color][color=#404040],也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内[/color][color=#404040]膜炎 、脓胸,还可引起菌血症、败血症及引起婴儿严[/color][color=#404040]重的流行性腹泻。[/color][color=#404040][color=#404040] [/color][color=#404040]国内外污染情况[/color][color=#404040]- [/color][color=#404040]参考文献[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]国内污染情况:[/color][color=#404040] -[/color][color=#404040]瓶装天然矿泉水铜绿假单胞菌的检出率[/color][color=#404040]1.2[/color][color=#404040]%~[/color][color=#404040]23.6[/color][color=#404040]%;[/color][color=#404040] -[/color][color=#404040]瓶装饮用纯净水铜绿假单胞菌的检出率[/color][color=#404040]11.6[/color][color=#404040]%。[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]国外污染情况:[/color][color=#404040] -Richards[/color][color=#404040]等在[/color][color=#404040]104[/color][color=#404040]件检品中的[/color][color=#404040]4[/color][color=#404040]件分离到铜绿假单胞菌;[/color][color=#404040] -Rosenberg[/color][color=#404040]报告德国[/color][color=#404040]1.2[/color][color=#404040]%~[/color][color=#404040]10.2[/color][color=#404040]%的瓶装矿泉水检出铜[/color][color=#404040] 绿假单胞菌。[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]刚出厂的产品中铜绿假单胞菌数量较少,但有文献报[/color][color=#404040] 道[/color][color=#404040]5[/color][color=#404040]加仑桶装产品([/color][color=#404040]15[/color][color=#404040]~[/color][color=#404040]31[/color][color=#404040]天的保存期),铜绿假单胞[/color][color=#404040] 菌可生长繁殖达到 [/color][color=#404040]10^4 CFU/ml[/color][color=#404040]。[/color][/color][color=#404040][color=#404040]• [/color][color=#404040]国内卫生标准:[/color][color=#404040]0 CFU/250ml[/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#262626]二、实验室检验[/color][/color][/color][color=#404040][color=#262626][color=#404040] [/color][color=red]GB 8538-2016 [/color][color=#404040]铜绿假单胞菌检测(滤膜法)[/color][/color][/color][color=#404040][color=#262626][color=#404040]原 理 将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤,并将滤膜移至CN琼脂培养基上,于36℃士1℃恒温箱中培养48h,能够在CN琼脂上生长并产生绿脓菌素,或者能够在CN琼脂上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光(360±20nm)照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌,经证实为铜绿假单胞菌,则其检测结果为阳性。[/color][/color][/color][color=#404040][color=#262626][color=#404040][img=,690,513]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111930447074_3628_2166779_3.png!w690x513.jpg[/img][img=,690,496]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111930529842_4361_2166779_3.png!w690x496.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#404040][color=#262626][color=#404040]操作步骤-水样过滤 在100级的洁净工作台进行过滤操作。首先用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,将250mL水样或稀释液通过孔径0.45μm的滤膜过滤,然后将过滤后的滤膜贴在已制备好的CN琼脂平板上,平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。[/color][/color][/color][color=#404040][color=#262626][color=#404040][img=,690,518]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111939198094_2367_2166779_3.jpg!w690x518.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#404040][color=#262626][color=#404040][img=,690,504]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111941176488_2216_2166779_3.png!w690x504.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#262626][color=#404040][color=#404040]可疑菌落计数情况[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]计数所有显[/color][color=red]蓝色或绿色(绿脓色素)[/color][color=#404040]的菌落,初步判定为铜绿假单胞菌。(需要做绿脓菌素的测定)[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]计数滤膜上所有[/color][color=red]发荧光不产绿脓色素[/color][color=#404040]疑似铜绿假单胞菌菌落,并进行乙酰胺肉汤确定试验。[/color][color=#404040](在紫外线下检查滤膜时,应避免长时间在紫外光下照射,否则可能会将平板上的菌落杀灭,而导致无法在证实培养基上生长。)[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]将其它所有[/color][color=red]红褐色不发荧光[/color][color=#404040]的菌落进行氧化酶试验、乙酰胺肉汤、金氏[/color][color=#404040]B[/color][color=#404040]培养基确证实验。[/color][/color][/color][color=#262626][color=#404040][color=#404040][img=,690,520]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111942538578_905_2166779_3.png!w690x520.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#262626][color=#404040][color=#404040][img=,690,518]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111945093378_4789_2166779_3.png!w690x518.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#262626][color=#404040][color=#404040]纯 化• 营养琼脂:将需验证的可疑菌落划线接种营养琼脂培养基,于36℃±1℃培养 20h~24h,对可疑菌进行纯化[/color][/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040] 将最初显红褐色的菌落进行[/color][color=red]氧化酶试验[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]氧化酶试验 :[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]原理:氧化酶(细胞色素氧化酶)是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌,首先使细胞色素[/color][color=#404040]C[/color][color=#404040]氧化,再由氧化型细胞色素[/color][color=#404040]C[/color][color=#404040]使对苯二胺氧化,生成有色的醌类化合物。[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]操作:取[/color][color=#404040]2[/color][color=#404040]~[/color][color=#404040]3[/color][color=#404040]滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。用铂金丝接种环或玻璃棒,将适量的纯种培养物涂布在预备好的滤纸上。在[/color][color=#404040]10[/color][color=#404040]秒内显深蓝紫色的视为阳性反应。也可以按照商品化氧化酶测试产品的说明书进行该项测试。[/color][/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040]产氨实验([/color][color=red]乙酰胺肉汤[/color][color=#404040])[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]原理:铜绿假单胞菌产生一种脱酰胺酶,可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨,滴加[/color][color=#404040]钠氏试剂(碘化汞钾),氨在碱性条件下与碘化汞钾作用,生成红色的络合物。[/color][color=#404040]• 操作:将纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中,在36℃±1℃下培养20h~24h。然后向每支试管培养物加入1~2滴钠氏试剂,检查各试管的产氨情况,如表现出从[/color][color=red]深黄色到砖红色[/color][color=#404040]的颜色变化,则为阳性结果,否则为阴性。[/color][/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040][img=,690,504]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810111959063912_4540_2166779_3.png!w690x504.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040]产荧光素实验([/color][color=red]金氏[/color][color=red]B[/color][color=#404040]培养基)[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]原理:蛋白胨提供氮源,磷酸盐促进荧光素的产生并抑制绿脓色素的产生,硫酸镁为荧光素的产生提供必须的阳离子,琼脂是培养基的凝固。[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]操作:将上述呈红褐色的且氧化酶反应呈阳性的培养物接种于金氏[/color][color=#404040]B[/color][color=#404040]培养基上,于[/color][color=#404040]36℃±1℃[/color][color=#404040]恒温箱培养[/color][color=#404040]24h[/color][color=#404040]~[/color][color=#404040]5d[/color][color=#404040]。 每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光性,将[/color][color=#404040]5d[/color][color=#404040]内产生荧光的菌落记录为阳性。[/color][/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040][img=,690,515]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810112001313728_3277_2166779_3.png!w690x515.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040]计数结果说明[/color][color=#404040]• [/color][color=#404040]菌落计数公式:[/color][/color][/color][color=#404040]N[/color][color=#404040]=[/color][color=#404040]P[/color][color=#404040]+[/color][color=#404040]F([/color][color=#404040]cF/nF[/color][color=#404040])[/color][color=#404040]+[/color][color=#404040]R([/color][color=#404040]cR/nR[/color][color=#404040])[/color][color=#404040][color=#404040][color=#404040][/color][color=#404040]- P[/color][color=#404040]是呈蓝[/color][color=#404040]/[/color][color=#404040]绿色的菌落数(所有证实为铜绿假单胞菌的菌落)。[/color][color=#404040]- F[/color][color=#404040]是没有绿脓色素但显荧光的菌落数。[/color][color=#404040]- R[/color][color=#404040]是呈红褐色的菌落数。[/color][color=#404040]- [/color][color=#404040]nF[/color][color=#404040]是进行产氨测试的显荧光菌落数。[/color][color=#404040]- [/color][color=#404040]cF[/color][color=#404040]是产氨阳性的显荧光菌落数。[/color][color=#404040]- [/color][color=#404040]nR[/color][color=#404040]是进行产氨、氧化酶、金氏[/color][color=#404040]B[/color][color=#404040]培养基上显荧光测试的红褐色菌落数。[/color][color=#404040]- [/color][color=#404040]cR[/color][color=#404040]是产氨、氧化酶、金氏[/color][color=#404040]B[/color][color=#404040]培养基上显荧光测试均呈阳性的红褐色菌落数。[/color][/color][/color][color=#262626][color=#404040][color=#A53010]′[/color][color=#404040]样品稀释:[/color][color=#404040] [/color][color=#404040]若样品污染严重,建议对样品进行稀[/color][color=#404040] 释,如[/color][color=#404040]10[/color][color=#404040]倍递增稀释:取[/color][color=#404040]30ml[/color][color=#404040]样液加入[/color][color=#404040] 至[/color][color=#404040]270ml[/color][color=#404040]无菌生理盐水中,混匀,以此类[/color][color=#404040] 推,进行系列稀释。[/color][color=#A53010]′[/color][color=#404040]报 告:[/color][color=#404040] 结果以 [/color][color=red]CFU/250ml[/color][color=#404040]计。[/color][/color][/color]

  • 【原创大赛】夏季包装饮用水铜绿假单胞菌浅析

    【原创大赛】夏季包装饮用水铜绿假单胞菌浅析

    最近地摊经济引起热议,大家各种有才点子,其中榜上有名的是“去篮球场卖水”。随着夏天到来,包装饮用水市场也“火热火热”的。出门在外,运动的、逛街的、户外工作的朋友们已经习惯了去路边的小店买水,瓶装水刚需又便捷;在室内有桶装饮用水,“吨吨吨……”喝个满足,喝个痛快,就很棒。[align=center][img=,690,468]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006081106021719_7752_3169908_3.png!w690x468.jpg[/img][/align][align=center][i][size=10px](图片来源:unsplash)[/size][/i][/align]但是,注意了,包装饮用水频上市场监督管理局抽查通报名单。五月至今,全国各地市场监督管理局发布的不合格食品通报中,出现多批次包装饮用水(密封于符合食品安全标准和相关规定的包装容器中,可供直接饮用的水[1])铜绿假单胞菌项目不合格,包括福建省2批次、深圳市3批次、内蒙古2批次、江西省9批次。[b][size=18px]█ 什么是铜绿假单胞菌?[/size][/b]铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa,PA) 别名绿脓杆菌,需氧菌属,是一种条件致病菌, 广泛分布于各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等,易在潮湿的环境存活,对消毒剂、紫外线等具有较强的抵抗力。常以生物膜的形式附着在物体表面,即使在最低营养环境下,细菌总体数量仍然非常高[2]。铜绿假单胞菌最适生长温度为25-30℃,炎炎夏日,正是铜绿假单胞菌生长繁殖的高峰期。[b]对人体危害:[/b]对抵抗力较弱的人群,容易引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。[b]标准要求:[/b]根据GB 19298-2014《食品安全国家标准 包装饮用水》规定,铜绿假单胞菌在包装饮用水中不得检出。[size=18px][b]█ 可能造成包装饮用水铜绿假单胞菌不合格的原因?[/b][/size]1. 原料蓄水池周边环境差,水源污染严重;2. 原料水污染严重,杀菌过程未执行到位;3. 包装材料被污染,清洗消毒过程不彻底;4. 生产设备清洗消毒不彻底;5. 产品贮存、流通运输、销售环节卫生环境差;6. 产品贮存环境无通风,温度过高[b][size=18px]█ 应如何应对?[/size][/b][color=#ff0000][b]一、生产企业应对五到位,人机料法环,一步不能少。[/b][/color]1、人员管理关到位做好员工卫生管理,生产过程中避免人为带入的污染。2、机械设备洗消到位注意回收容器及设备管道等清洗消毒到位。回收容器配备自动刷洗消毒设备,保证内壁的清洗消毒彻底到位。3、原材料验收到位(1)以来自公共供水系统的水为生产用源水的,应定期监测pH值、电导率、余氯等水源水质情况;以来自非公共供水系统的地表水或地下水为生产用源水的,应监测水质波动情况(如水温等),判定水源是否受到外界影响产生异常[3]。(2)保证原材料质量达标;原材料贮存环境干净、卫生,离墙离地存放,保持通风干燥。(3)做好水源管控,水源选址远离污染源、蓄水池定时清洗消毒、水塔安装呼吸器。4、工艺、方法到位(1)严格要求每一个生产消毒工艺,不放松标准要求。(2)原料、产品检验方法依照相关国家标准执行。5、生产环境安全到位(1)清洁作业区对空气进行过滤净化处理,加装空气过滤装置并定期清洁,清洁作业区空气洁净度(悬浮粒子、沉降菌)静态时应达到10000级且灌装局部达到100级,或整体洁净度达到1000级[3]。(2)准清洁作业区及清洁作业区应相对密闭,清洁作业区应安装初效和中效空气净化设备,保证空气循环次数10次/h以上[3]。[b][color=#ff0000]二、经营企业应注意:[/color][/b]卸货注意要离地;存放注意保持干燥通风、干净卫生。贮存注意温度不宜过高。[color=#ff0000][b]三、运输过程应注意:[/b][/color]车辆保持干净卫生,温度不宜过高。[i][size=12px]参考资料[1] GB19298-2014 食品安全国家标准 包装饮用水.[2]王辉,马筱玲,钱渊,等.临床微生物学手册[M]. 第11版.北京:中华医学电子音像出版社,2017:1010-1013.[3]饮料生产许可审查细则(2017版)[/size][/i]

  • 【求助】铜绿假单胞菌的计数

    请教各位有谁检测过铜绿假单胞菌,检测时做了几个稀释液应该怎样计数,例如下面的表格内容: 稀释度 原液 lO-1 lO-2 lO-3 lO-4 lO-5 lO-6 lO-7 lO-8 菌落数(CFU) 多不可计 多不可计多不可计多不可计 多不可计 16330 0 0

  • 关于铜绿假单胞菌培养基的问题

    按国标要求,配好的培养基导入平板里面,置于黑暗处,于2度到8度保存,应该放在哪里好,是不是可以放在冰箱的。因为要防止干燥,在一个月内使用,那么培养不是凝固了,又不能煮溶,那么下次拿出来用的时候培养基不就是凝固的状态了,在凝固的状态下可以放滤膜上去,能培养铜绿假单胞菌吗?会不会有影响,正确的方法是怎么样的?有做过这个的吗?

  • 乳中嗜冷菌及对乳品品质的影响

    在生乳中的大部分嗜冷菌属于假单胞菌科,包括革兰氏阴性无芽孢的非发酵假单胞菌属。荧光假单胞菌是乳中最长分离的假单胞菌。草莓假单胞菌和恶臭假单胞菌重要性稍差。动物、种植物、水、土壤是乳中发现假单胞菌的主要来源。被污染的设备和空气提供了另外一个的污染来源。特别是在加工后,乳中只需要很少的菌量就能使冷藏设备中的乳在5天内腐败变质。这些微生物在乳中的生长繁殖导致的缺陷包括苦味和水果异味。虽然革兰氏阴性嗜冷菌对热没有抵抗力,但他们产生的热稳定的胞外蛋白水解酶和脂肪水解酶,能破坏热处理后的乳制品。其他的腐败革兰氏阴性杆菌包括不动杆菌、黄杆菌、嗜冷杆菌、产碱杆菌和腐败希瓦氏菌。1. 莫拉氏菌家族莫拉氏菌属于革兰氏阴性嗜冷菌,不能运动,无色素,为需氧球杆菌。他们有三类,不动杆菌属氧化酶阴性菌,莫拉氏菌属于氧化酶阳性菌,第三种为嗜冷杆菌。莫拉氏菌很少破坏乳,主要是因为它们缺乏充足的生化活性,不能发生蛋白水解和脂肪水解以产生异味。此外,它们在冷藏过程中会被假单胞菌的繁殖而超越。2. 产碱杆菌属产碱杆菌属于革兰氏阴性需氧短杆菌,不能代谢乳糖,可在水、土壤和乳中被发现。粪产碱菌可产生胞外多糖,是乳制品潜在的污染。产碱杆菌能够在冰箱温度下生长,产生不愉快的气味并降低乳制品的货架期。3. 腐败希瓦氏菌腐败希瓦氏菌属于革兰氏阴性杆菌,先前被认为是腐败假单胞菌属或腐败互生单胞菌。可在水、土壤和被污染的乳与乳制品中被发现,是导致污染奶油表面污斑的原因。4. 黄杆菌属黄杆菌是在水、土壤和乳中发现的革兰氏阴性微生物。它们可以水解酪蛋白并导致冷藏期中乳与乳制品的腐败变质。

  • 【资料】生物农药--苏云金芽孢杆菌

    昆虫病原细菌广泛存在自然界,在不同的环境条件下,对昆虫数量的调节起着重要的作用。其中特别是某些芽孢杆菌已发展成为微生物杀虫剂,具有控制农林害虫的巨大潜力,是一种很有发展前途的防治害虫的新途径,在综合防治中越来越引起人们的重视。 自从19世纪末期开始研究家蚕、蜜蜂细菌病害的近一百年间,发现并被描述的昆虫病原细菌约有90多个种和亚种,它们大多属于真细菌纲(Eubacteria)的芽孢杆菌科(Bacilliacene)、假单孢菌科(Pseudomonadacea)和肠杆菌科(Enterobacteriaceae)。从防治害虫的角度来说,在这三科中以芽孢杆菌科最为重要。此科包括有两个属:芽孢杆菌属(Bacillus)和芽孢梭菌属(Clostridium)。在芽孢杆菌属中的乳状病芽孢杆菌(Bac.popillia)、缓死芽孢杆菌(Bac.lentimorbus)、苏云金芽孢杆菌(Bac.thuringiensis)的某些亚种以及球形芽孢杆菌(Bac.spuericus),目前在国内外均已发展成为防治农林害虫及卫生害虫的微生物杀虫剂。而且,迄今为止,昆虫病原细菌的主要研究力量也仍然集中在这些细菌上。 但是在这些众多的病原细菌中,真正能够开发成为一种具有实际应用价值杀虫剂的却并不多,目前应用最广泛的主要是形成芽孢的病原细菌。如乳状病芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌.[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=64035]苏云金芽孢杆菌[/url]

  • 【求助】请问大家测定水质中的AOC的菌种!

    大家好,现在想做水质中的AOC(生物可同化有机碳),由于做这个试验要有荧光假单胞菌P17和螺旋菌NOX,请问大家,谁知道在那个单位可以买到这两个菌种?谢谢!急,请知道的告诉我下,不胜感激!

  • 57.10 光合细菌生物转化槲寄生转化机理及其抗肿瘤作用物质基础初步研究

    作者:牛红军(山西医科大学)摘要: 目的:初步研究光合细菌生物转化槲寄生的转化机理,并且对光合细菌生物转化槲寄生培养液中具有细胞毒活性的蛋白质和总三萜类物质进行研究。 方法: 实验一:(1)采用pH计测定光合细菌转化槲寄生过程中培养液pH的变化趋势;(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳法获得光合细菌(PSB)蛋白质、酯酶、过氧化物酶及超氧化物歧化酶的电泳图谱;(3)槲寄生提取液中添加吲哚,以PSB进行生物转化,通过HPLC法测定靛蓝的生成量来反映PSB加氧酶活性。 实验二:将光合细菌转化槲寄生培养液(PSBT)离心,得到PSBT上清液和菌体沉淀。菌体沉淀用超声波辅助冻融法破碎,离心,上清液即为PSBT菌体沉淀提取液。取PSBT上清液及PSBT菌体沉淀提取液,进行硫酸铵沉淀和透析,分别得PSBT上清液总蛋白提取液和菌体沉淀总蛋白提取液。取不同浓度的总蛋白质提取液,用MTT法测定细胞毒活性。 利用AKTA purifier 10层析系统,Hitrap Desalting和CM Fast Flow等层析柱,采用不同缓冲液体系对PSBT上清液总蛋白提取液进行蛋白质纯化。 实验三:采用紫外分光光度法对槲寄生提取物和PSBT中三萜类化合物进行比较研究;分别采用薄层色谱法和高效液相色谱法(HPLC)对齐墩果酸进行定性分析和含量测定,HPLC色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18 (200mm×4.6mm, i.d.5μm),流动相为甲醇-0.18%的磷酸水(86:14),检测波长210nm,柱温25℃,流速1ml/min。结果: 实验一:(1)接种PSB后,纯PSB培养液pH缓慢上升,PSBT的pH迅速下降;(2)PSBT中菌体蛋白质、酯酶、过氧化物酶及超氧化物歧化酶的电泳图谱与纯PSB培养液中菌体的电泳图谱不同;(3)未得到PSBT和纯PSB培养液中菌体的超氧化物歧化酶(SOD)电泳图谱;(4)加入吲哚后,PSBT中有靛蓝类物质生成,而纯PSB培养液中无靛蓝产生。 实验二:各蛋白质样品的细胞毒活性: (1)上清液总蛋白对HO-8910细胞的半数抑制浓度(IC50,mg/mL,按照槲寄生提取液中原药材含量计算,下同):①IC50200mg/mL:沼泽红假单胞菌转化槲寄生水浸提培养液(浸沼,JZ)是0.18,槲寄生水浸提培养基(浸对,JD)是20,球形红细菌转化槲寄生水浸提培养液(浸球,JQ)是60:②200mg/mLIC502000mg/mL:槲寄生水提培养基(水对,SD)、沼泽红假单胞菌转化槲寄生水提培养液(水沼,SZ)和球形红细菌转化槲寄生水提培养液(水球,SQ);③IC502000mg/mL:球形红细菌转化槲寄生醇提培养液(醇球,CQ)、沼泽红假单胞菌转化槲寄生醇提培养液(醇沼,CZ)和槲寄生醇提培养基(醇对,CD)。 (2)上清液总蛋白对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:JD是8,JZ是20,JQ是78,CQ是150;②200mg/mLIC502000mg/mL:SQ。 (3)菌体沉淀总蛋白对HO-8910细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:SZ是84,CZ是122;②200mg/mLIC502000mg/mL:JQ和JZ;③IC502000mg/mL:纯球形红细菌培养液(球,Q)、纯沼泽红假单胞菌培养液(沼,Z)、SQ和CQ。 (4)菌体沉淀总蛋白对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50. mg/mL):①IC50 200mg/mL:JZ是14,JQ是18;②200mg/mLIC502000mg/mL:CZ、CQ和SZ。 (5)其它蛋白样品对肿瘤细胞几乎没有抑制作用。 SZ上清液总蛋白、SQ上清液总蛋白和SD总蛋白在CM Fast Flow层析柱的各种层析条件下都至少得到一个穿透峰和一个洗脱峰,另外,SQ上清液总蛋白在pH5.0的缓冲液体系中还额外分离得到的一个洗脱峰;SZ上清液总蛋白和SQ上清液总蛋白都在pH6.5的缓冲液体系中多分离得到一个小穿透峰。 实验三:CQ和CZ的总三萜含量与CD相比分别增加36%、14.7%;CQ和CZ的齐墩果酸含量与CD相比分别增加925%、281%;SQ、SZ及SD的总三萜和齐墩果酸含量均很低。 结论: (1)培养液中加入槲寄生后,光合细菌参与槲寄生的生物转化反应的某些酶被抑制或激活;(2)各种蛋白质提取液中,PSB转化槲寄生水浸提培养液上清液总蛋白的抑瘤活性最大。各种浓度JZ上清液总蛋白、JQ上清液总蛋白和JD总蛋白的细胞毒活性随作用时间变化的规律不同,但都具有时间-剂量依赖性。由此可知:PSB生物转化后,蛋白质的抑瘤活性规律发生了变化,抑瘤活性的蛋白质组分发生了改变。(3)PSBT中有新的蛋白质组分生成,说明光合细菌可以转化槲寄生成分生成新的蛋白质;(4)槲寄生醇提培养基经过光合细菌生物转化后,总三萜和齐墩果酸含量均增加,球形红细菌转化生成总三萜和齐墩果酸的能力比沼泽红假单胞菌强。三萜类化合物含量的增加可能是PSBT抗肿瘤作用增强的部分物质基础。

  • 【分享】工业微生物产生菌的分离筛选

    原生动物(103),其中放线菌和霉菌指其孢子数。但各种微生物由于生理特性不同,在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。因此,在分离菌株前要根据分离筛选的目的,到相应的环境和地区去采集样品。(一)根据土壤特点1. 土壤有机质含量和通气状况一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富,营养充足,且土壤成团粒结构,通气饱水性能好,因而,微生物生长旺盛,数量多,尤其适合于细菌、放线菌生长。山坡上的森林土,植被厚,枯枝落叶多,有机质丰富,且阴暗潮湿,适合霉菌、酵母菌生长繁殖,微生物数量相应也比较少。从土层的纵剖面看,1~5cm的表层土由于阳光照射,蒸发量大,水分少,且有紫外线的杀菌作用,因而微生物数量比5~25cm土层少;25cm以下土层则因土质紧密,空气量不足,养分与水分缺乏,含菌量也逐步减少。因此,采土样最好的土层是5~25cm。一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个,并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。如好气芽孢杆菌、假单胞菌、短杆菌、大肠杆菌、某些嫌气菌等。但总的说来酵母菌分布土层最浅,约5~10cm,霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。2. 土壤酸碱度和植被状况土壤酸碱度会影响微生物种类的分布。偏碱的土壤(pH7.0~7.5)环境,适合于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤(pH7.0以下)环境下,霉菌、酵母菌生长旺盛。由于植物根部的分泌物有所不同,因此,植被对微生物分布也有一定的影响。如番茄地或腐烂番茄堆积处有较多维生素C生产菌。葡萄或其他果树在果实成熟时,其根部附近土壤中酵母菌数量增多。豆科植物的植被下,根瘤菌数量比其他植被下占优势。3. 地理条件南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多,特别是热带和亚热带地区的土壤。许多工业微生物菌种,如抗生素产生菌,尤其是霉菌、酵母菌,大多从南方土壤中筛选出来。原因是南方温度高,温暖季节长,雨水多,相对湿度高,植物种类多,植被覆盖面大,土壤有机质丰富,造成得天独厚的微生物生长环境。4. 季节条件不同季节微生物数量有明显的变化,冬季温度低,气候干燥,微生物生长缓慢,数量最少。到了春天随着气温的升高,微生物生长旺盛,数量逐渐增加。但就南方来说,春季往往雨水多,土壤含水量高,通气不良,即使有微生物所需的温度、湿度,也不利于其生长繁殖。随后经过夏季到秋季,约有7~10个月处在较高的温度和丰富的植被下,土壤中微生物数量比任何时候都多,因此,秋季采土样最为理想。(二)采样方法用取样铲,将表层5cm左右的浮土除去,取5~25处的土样10~25,装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥,可在10~30处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离,以免微生物死亡。但有时样品较多,或到外地取样,路途遥远,难以做到及时分离,则可事先用选择性培养基做好试管斜面,随身带走。到一处将取好的土样混匀,取3~4撒到试管斜面上,这样可避免菌株因不能及时分离而死亡。

  • 【讨论】工业微生物产生菌的分离筛选(一)

    原生动物(103),其中放线菌和霉菌指其孢子数。但各种微生物由于生理特性不同,在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。因此,在分离菌株前要根据分离筛选的目的,到相应的环境和地区去采集样品。(一)根据土壤特点1. 土壤有机质含量和通气状况一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富,营养充足,且土壤成团粒结构,通气饱水性能好,因而,微生物生长旺盛,数量多,尤其适合于细菌、放线菌生长。山坡上的森林土,植被厚,枯枝落叶多,有机质丰富,且阴暗潮湿,适合霉菌、酵母菌生长繁殖,微生物数量相应也比较少。从土层的纵剖面看,1~5cm的表层土由于阳光照射,蒸发量大,水分少,且有紫外线的杀菌作用,因而微生物数量比5~25cm土层少;25cm以下土层则因土质紧密,空气量不足,养分与水分缺乏,含菌量也逐步减少。因此,采土样最好的土层是5~25cm。一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个,并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。如好气芽孢杆菌、假单胞菌、短杆菌、大肠杆菌、某些嫌气菌等。但总的说来酵母菌分布土层最浅,约5~10cm,霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。2. 土壤酸碱度和植被状况土壤酸碱度会影响微生物种类的分布。偏碱的土壤(pH7.0~7.5)环境,适合于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤(pH7.0以下)环境下,霉菌、酵母菌生长旺盛。由于植物根部的分泌物有所不同,因此,植被对微生物分布也有一定的影响。如番茄地或腐烂番茄堆积处有较多维生素C生产菌。葡萄或其他果树在果实成熟时,其根部附近土壤中酵母菌数量增多。豆科植物的植被下,根瘤菌数量比其他植被下占优势。3. 地理条件南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多,特别是热带和亚热带地区的土壤。许多工业微生物菌种,如抗生素产生菌,尤其是霉菌、酵母菌,大多从南方土壤中筛选出来。原因是南方温度高,温暖季节长,雨水多,相对湿度高,植物种类多,植被覆盖面大,土壤有机质丰富,造成得天独厚的微生物生长环境。4. 季节条件不同季节微生物数量有明显的变化,冬季温度低,气候干燥,微生物生长缓慢,数量最少。到了春天随着气温的升高,微生物生长旺盛,数量逐渐增加。但就南方来说,春季往往雨水多,土壤含水量高,通气不良,即使有微生物所需的温度、湿度,也不利于其生长繁殖。随后经过夏季到秋季,约有7~10个月处在较高的温度和丰富的植被下,土壤中微生物数量比任何时候都多,因此,秋季采土样最为理想。(二)采样方法用取样铲,将表层5cm左右的浮土除去,取5~25处的土样10~25,装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥,可在10~30处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离,以免微生物死亡。但有时样品较多,或到外地取样,路途遥远,难以做到及时分离,则可事先用选择性培养基做好试管斜面,随身带走。到一处将取好的土样混匀,取3~4撒到试管斜面上,这样可避免菌株因不能及时分离而死亡。

  • 细菌培养基

    Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种 . Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 :When cultivation of Bacillus,5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌

  • 菌种的保存

    常用的有琼脂斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、甘油冷冻管保藏法、低温冷冻保藏法等,方法很多。 我选用液体石蜡保存方法,该方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌(如芽孢杆菌属、乙酸杆菌属等)和某些丝状真菌(如:青霉属、曲霉属等),而某些细菌(如:固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌等)和一些真菌(如:卷霉菌、小克银汉霉、毛霉等)不宜采用此法进行保存。微生物检验常用以下菌种:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌药典也没有要求怎样保存,只说选用适宜的保存方法需要验证。但是肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌这些菌种用液体石蜡保存方法适合不?

  • 【分享】美国药典 USP-32-NF 27在微生物检测试验中规定使用的ATCC菌种

    序号试验名称菌种中文名称菌种拉丁文名称菌株编号 51抗微生物效力测试大肠埃希菌Escherichia coliATCC 8739 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 黑曲霉Aspergillus nigerATCC 16404161非无菌产品的计数测试金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisATCC 6633 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 黑曲霉Aspergillus nigerATCC 16404 62非无菌产品的控制菌测试金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 大肠埃希菌Escherichia coliATCC 8739 肠道沙门氏菌Salmonella entericaATCC 14028 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 71无菌测试金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusATCC 6538 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisATCC 6633 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 生孢梭菌Clostridium sporogenesATCC 19404 白色念珠菌Candida albicansATCC 10231 黑曲霉Aspergillus nigerATCC 16404

  • 讲解微生物细菌检测仪作用和用途

    微生物细菌检测仪是一种专门用于检测生物体、环境水样、食品、化妆品和医药产品表面ATP(三磷酸腺苷)含量的装置。ATP是所有活细胞和一些非细胞生物(如病毒、霉菌和酵母菌等)所含的核苷酸之一,因此微生物细菌检测仪可以通过检测表面ATP含量来检测这些生物的存在。  微生物细菌检测仪的工作原理是通过荧光素酶作用的ATP检测试剂将样品表面的ATP转化为荧光素,然后利用荧光素酶催化的发光特性来测定样品表面的ATP含量。这种测量方法快速、准确、简单,一般检测时间不超过30秒。  微生物细菌检测仪的作用和用途非常广泛,它可以用于以下领域:  食品生产和加工:检测食品生产和加工过程中的卫生情况,确保食品质量和安全。  医疗设备和药品检测:用于检测医疗设备、药品和患者样本中的微生物,确保患者的安全和健康。  环境监测:检测水源和空气中的微生物污染,评估环境质量。  化妆品和医药产品检测:确保这些产品的生产和储存过程中的卫生条件符合标准。  此外,微生物细菌检测仪的使用方法通常包括打开机器、放入试子、采集样品、挤压拭子头、将拭子插入仪器中检测等步骤。在操作过程中,需要遵循相关操作规范,以确保检测结果的准确性和可靠性。  总之,微生物细菌检测仪是一种重要的检测工具,它可以帮助我们快速、准确地检测生物体、环境水样、食品、化妆品和医药产品表面的微生物含量,为食品安全、医疗、环境监测等领域提供有力的技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405091048555937_3652_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 【原创】用先进微生物监测方法研究深圳空气环境细菌总数和遗传多样性

    [font=宋体]深圳市是华南地区新兴的大都市,人口稠密,工商业、电子制造业发达,交通繁忙,从近年气象要素和污染指数的变化情况看,空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量总体有呈下降的趋势;深圳处于亚热带海洋季风气候带内,空气温湿,有利于空气微生物的生长繁殖,地面上人群呼吸带的微生物已经直接影响到人体健康。因此,监测深圳市区的空气微生物含量,对于提高深圳市区的大气环境质量和保障人体健康是十分必要的。[/font][font=宋体]随着深圳市经济的发展和车辆的增多,城市空气污染也越来越严重。通过对空气微生物含量指标进行监测可以反映出空气的污染程度以及对人群健康造成的威胁。深圳市生态监测中,关于空气微生物的常规监测主要采用传统的平皿沉降法,此方法存在较多误差;我们将先进的荧光显微镜法和变性梯度凝胶电泳法([/font][font=Times New Roman]DGGE[/font][font=宋体])引入监测工作中,作为深圳市生态监测体系中空气微生物监测方法的改进和补充。[/font][font=宋体][/font][size=3][b][font=宋体]变性梯度凝胶电泳法[/font][font=宋体][/font][/b][/size][font=宋体]分子生物技术克服了传统微生物培养技术的限制[/font][font=Times New Roman],[/font][font=宋体]可以更精确地揭示环境中微生物种群结构及其遗传的多样性,从而可以更加清楚的了解环境的变化及其与微生物的关系。其中,[/font][font=Times New Roman]PCR-DGGE[/font][font=宋体]技术在遗传多样性等研究方面的应用较为广泛。[/font][font=Times New Roman]DGGE[/font][font=宋体]技术是[/font][font=Times New Roman]rRNA[/font][font=宋体]基因测序中经常用到的一项[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=宋体]分离技术。由于不同种个体的[/font][font=Times New Roman]rRNA[/font][font=宋体]基因的长度较稳定,[/font][font=Times New Roman]DGGE[/font][font=宋体]能够将大小相似的不同序列[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=宋体]区分开,得到纯化的单一[/font][font=Times New Roman] rDNA[/font][font=宋体],以便进行测序,从而可以获得更多有关微生物群落遗传学上的信息,即群落遗传多样性等信息。应用变性梯度凝胶电泳技术,对不同环境样品中的细菌微生物群落的遗传信息进行对比分析,结合环境的理化等指标,可以得到受不同程度污染的环境样品中的微生物遗传多样性的异同、微生物种类的变化等方面的信息,从而通过微生物指标来反映环境受污染的程度。[/font][size=3][b][font=宋体]荧光显微镜法[/font][/b][/size][font=宋体]利用微生物指标监测环境污染与清洁度是一种快速灵敏的生物学检测方法,通过对微生物[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=宋体]的染色所采用的荧光显微镜方法,能够检测到环境中绝大部分不能够被培养微生物类群,可以较好的降低常规培养皿培养所造成的微生物总量的损失或者过低估计等误差。此外,荧光显微镜检测方法还具有直观,快捷等特点。[/font][font=宋体]目前,国内外将荧光显微镜方法应用于空气和海水中微生物的研究较为成熟可靠,并且得到了很好的研究结果;在土壤和沉积物中的微生物总数的研究上多采用培养皿的方法,我们希望通过前期的实验探索,可以将荧光显微镜的方法应用到土壤微生物总数监测工作中,并且与常规方法进行对比,检测该方法的可行性。[font=Arial]深圳空气环境微生物监测研究的区域为整个深圳市,测点集中在东部和西部区域,有杨梅坑、田心山、莲花山、羊台山和南山生态测站5个站点。[/font][/font][size=3][font=宋体][b]荧光显微镜分析[/b][/font][/size]使用Syber Green I 染色剂染色土壤环境的细菌DNA,蓝光激发后,发亮绿色荧光; 使用Olympus BX41显微镜,在油镜条件下随机选择10-20个视野计数被染色的细菌个体(细菌个数=平均视野中的细菌数量×滤膜的有效过滤面积/视野面积),进行荧光显微镜计数(10×目镜,100×物镜,1000×倍数)亮绿色荧光的细菌细胞。[b][font=宋体][size=3]分子生物学分析[/size][/font][/b][font=宋体]采用常规[/font][font=''''Times New Roman'''']DNA[/font][font=宋体]提取方法对深圳空气环境细菌样品总[/font][font=''''Times New Roman'''']DNA[/font][font=宋体]进行提取,得到的总[/font][font=''''Times New Roman'''']DNA[/font][font=宋体]电泳结果图谱;[/font][font=宋体]对测站的空气环境细菌样品[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=宋体]进行降落[/font][font=Times New Roman]PCR[/font][font=宋体]扩增,得到[/font][font=Times New Roman]PCR[/font][font=宋体]产物,作为[/font][font=Times New Roman]DGGE[/font][font=宋体]的上样样品。[font=宋体]对降落[/font][font=''''Times New Roman'''']PCR[/font][font=宋体]扩增获得的产物进行琼脂糖电泳,[font=宋体]进行[/font][font=''''Times New Roman'''']DGGE[/font][font=宋体]实验([/font][font=''''Times New Roman'''']Touch Down [/font][font=''''Times New Roman'''']PCR[/font][font=宋体]产物)。[/font][/font][/font]

  • 牛乳中微生物的种类

    牛乳从乳腺分泌以至被挤出时为无菌状态,但挤乳过程中可能有细菌侵入,挤乳后的处理、器械接触及运输过程亦可能使牛乳中混人微生物,如若处理不当,可以引起牛乳的风味、色泽、形态都发生变化。(一)细菌牛乳中存在的微生物有细菌、酵母和霉菌,其中以细菌在牛乳贮藏与加工中的意义为最重要。细菌大小平均约为牛乳脂肪球的1/125,直径约为O.6um。1、乳酸菌乳酸菌可利用碳水化合物产生乳酸,即进行乳酸发酵。从牛乳中很容易分离得到乳酸菌,其在分类学上属于乳酸菌科。乳酸菌一般为无孢子球菌或杆菌,属厌氧型或兼性厌氧型细菌。进行乳酸发酵时,其有时产生挥发性酸或气体。 2、丙酸菌此为产生丙酸发酵的菌群,可将乳糖及其他碳水化合物分解为丙酸、醋酸与二氧化碳。此种菌为革兰氏阳性短杆菌,为制造瑞士干酪的发酵剂,其制出的干酪上有孔。3、肠细菌肠细菌寄生于肠中,为革兰氏阴性短杆菌。肠细菌为兼性厌氧性细菌,以大肠菌群、病原菌、沙门氏菌为主要菌群。大肠菌群可将碳水化合物发酵,产生酸及二氧化碳、氢等气体。因大肠菌群来自于粪便,所以被规定为牛乳污染的指标菌。4、孢子杆菌孢子杆菌为形成内孢子的革兰氏阳性杆菌,可分为好氧性芽孢杆菌属与厌氧性梭状芽孢杆菌属。5、小球菌属 小球菌属为好气性产生色素的革兰氏阳性球菌。在牛乳中常出现的有小球菌属与葡萄球菌属。葡萄球菌的菌体如葡萄串般排列,其多为乳房炎乳或食物中毒的原因菌。6、假单胞菌 假单胞菌是利用鞭毛运动的需氧性菌,荧光假单胞菌和腐败假单胞菌为其代表菌。这种菌可将乳蛋白质分解成蛋白胨或将乳脂肪分解产生脂肪分解臭。这种菌能在低温下生长繁殖。7、产碱杆菌属 产碱杆菌可使牛乳中所含的有机盐(柠檬酸盐)分解而形成碳酸盐,从而使牛乳转变为碱性。粪产碱杆菌为革兰氏阴性需氧性菌,这种菌在人及动物肠道内存在,它随着粪便而使牛乳污染。这种菌的适宜生长温度在25-37℃。稠乳产碱杆菌常在水中存在,为革兰氏阴性菌,是需氧性的。这种菌的适宜生长温度在10-26℃,它除能产碱外,并能使牛乳粘质化。8、病原菌牛乳中有时混有病原菌,会在人群中传染疾病,因此必须严格控制牛乳的杀菌、灭菌,使病原菌不存在。混入牛乳中的主要病原菌有:沙门氏菌属的伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、肠类沙门氏菌,志贺氏菌属的志贺氏痢疾杆菌,弧菌属的霍乱弧菌,白喉棒状杆菌,人形结核菌,牛形结核菌,牛传染性流产布鲁氏杆菌,炭疽菌,大肠菌,葡萄球菌,溶血性链球菌,无乳链球菌,病原性肉毒杆菌。(二)真菌新鲜牛乳中的酵母主要为酵母属、毕赤氏酵母属、球拟酵母属、假丝酵母属等菌属,常见的有脆壁酵母菌、洪氏球拟酵母、高加索乳酒球拟酵母、球拟酵母等。其中,脆壁酵母与假丝酵母可使乳糖发酵而且用以制造发酵乳制品。但使用酵母制成的乳制品往往带有酵母臭,有风味上的缺陷。 牛乳中常见的霉菌有乳粉胞霉、乳酪粉胞霉、黑念珠霉、变异念珠霉、腊叶芽枝霉、乳酪青霉、灰绿青霉、灰绿曲霉和黑曲霉,其中的乳酪青霉可制干酪,其余的大部分霉菌会使干酪、乳酪等污染腐败。(三)噬茵体 侵害细菌的滤过性病毒统称为噬菌体,亦称为细菌病毒。目前已发现大肠杆菌、乳酸菌、赤痢菌、沙门氏杆菌、霍乱菌、葡萄球菌、结核菌、放线菌等多数细菌的噬菌体。噬菌体长度多为50-80nm,可分为头部和尾部。噬菌体头部含有脱氧核糖核酸(DNA),可以支配遗传物质,使其对宿主菌株有选择特异性;尾部由蛋白质组成。噬菌体先附着宿主细菌,然后再侵入该菌体内增殖,当其成熟生成多数新噬菌体后,即将新噬菌体放出,并产生溶菌作用。 对牛乳、乳制品的微生物而言,最重要的噬菌体为乳酸菌噬菌体。作为干酪或酸乳菌种的乳酸菌有被其噬菌体侵袭的情形发生,以致造成乳品加工中的损失。

  • 【云唐】ATP生物荧光检测仪用途有哪些

    [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404290925260750_5451_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]  ATP生物荧光检测仪是一种高效、快速、灵敏度高的仪器,广泛应用于食品工业、水处理、医疗保健、生物研究等领域。其用途多种多样,下面将详细介绍ATP生物荧光检测仪的主要用途。  一、环境监测  ATP生物荧光检测仪可以用于监测水体、空气、土壤等环境中的微生物污染情况。通过检测样品中ATP的含量,可以快速判断出环境中微生物的污染程度,为环境治理提供科学依据。例如,在水处理领域,ATP生物荧光检测仪可以快速检测水体中的细菌、病毒等微生物含量,从而评估水质的卫生状况,为水质的改善和保障提供有力支持。  二、食品安全  ATP生物荧光检测仪在食品安全领域的应用也十分广泛。它可以用于检测食品中的细菌、霉菌等微生物污染情况,以及食品新鲜度。在肉类、鱼类、乳制品等食品的加工、储存、运输等环节中,ATP生物荧光检测仪可以快速检测食品是否受到污染,确保食品的安全性。此外,ATP生物荧光检测仪还可以用于检测食品表面的清洁度,评估食品加工场所的卫生状况,为食品安全提供有力保障。  三、医疗保健  ATP生物荧光检测仪在医疗保健领域也有重要应用。它可以用于检测医疗器械、手术用具等物品的清洁度,以及医院环境的卫生状况。通过快速检测ATP含量,可以及时发现微生物污染,避免交叉感染的发生,保障患者的安全。此外,ATP生物荧光检测仪还可以用于评估手术伤口的愈合情况,为医疗护理提供科学依据。  四、生物研究  在生物研究领域,ATP生物荧光检测仪同样发挥着重要作用。它可以用于检测细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡等生物学过程,从而评估细胞的健康状况。此外,ATP生物荧光检测仪还可以用于检测其他有机物,如蛋白质、核酸、糖类等,为深入研究细胞的生物学过程提供有力支持。  五、其他领域  除了以上几个领域,ATP生物荧光检测仪在其他领域也有一定应用。例如,在公共卫生领域,它可以用于检测公共设施如公共厕所、游泳池等的卫生状况 在农业领域,它可以用于检测农产品如水果、蔬菜等的新鲜度和微生物污染情况 在化妆品领域,它可以用于检测化妆品的卫生状况等。  总之,ATP生物荧光检测仪具有广泛的应用范围,可以在环境监测、食品安全、医疗保健、生物研究等多个领域发挥重要作用。其快速、准确、灵敏的特点使得它在保障人们生产和生活安全方面具有重要意义。随着科学技术的不断发展,ATP生物荧光检测仪将会在更多领域得到应用和发展。

  • 动物所发现皮肤真菌防御素是一种新型抗感染药物

    耐药性金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌是两种严重影响人类健康的传染性病原微生物。传统抗生素的滥用导致了这些细菌耐药性的增强,从而增加了治疗成本和健康风险。因此,发展新型特效的抗生素药物已迫在眉睫。作为天然免疫效应分子的抗微生物肽为这一挑战带来了新的契机。与传统抗生素相比,抗微生物防御素具有独特的抗菌机理,能够有效延缓细菌耐药性的产生。 中科院动物所研究员朱顺义领导的动物天然免疫研究组以皮肤真菌犬小孢子菌为对象,利用生物信息学和实验生物学方法鉴定了一个新型的真菌来源的防御素(命名为孢子霉素),具有广阔的临床应用前景。 研究发现,合成的孢子霉素具有典型的半胱氨酸稳定的alpha-螺旋和beta-片层空间结构。在微摩尔浓度下能够有效抑制铜绿假单胞菌和多种耐药性金黄色葡萄球菌临床分离株的生长。杀菌动力学试验表明,孢子霉素比万古霉素具有更快的杀菌速率。细胞膜透化测定和电子显微镜观察发现孢子霉素对细菌细胞膜没有影响,但是能够导致菌体内蛋白质样颗粒的沉积。孢子霉素对哺乳动物缺乏毒性且具有极高的血清稳定性。小鼠腹膜炎模型证实该肽能够有效治愈耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离株以及铜绿假单孢菌造成的致死性腹腔感染。 研究首次表明皮肤真菌为一种新的抗感染药物资源,为治疗耐药性细菌引起的感染带来了新的希望。这项成果已在PNAS上发表。 文章链接

  • 【原创大赛】妇科止痒洗剂微生物限度检查方法适用性试验

    【原创大赛】妇科止痒洗剂微生物限度检查方法适用性试验

    妇科止痒洗剂微生物限度检查方法适用性试验一、检验依据:《中国药典》2015年版四部1105、1106二、仪器与实验材料1、仪器 高压锅 型号:G154DW 致微(厦门)仪器有限公司生物安全柜 型号:AC2-4S1 新加坡艺思高公司生化培养箱 型号:SHP-350 上海精宏实验设备有限公司生化培养箱 型号:LRH-250 上海一恒科学仪器有限公司天平 型号:LD3102 沈阳龙腾电子有限公司恒温水温箱 型号:S.HH.W21.600S 上海跃进医疗器械有限公司2、样品 品名:妇科止痒Ⅰ号洗剂 批号:20190221;20190315;20181211 规格: 250ml/瓶 生产单位:南平市人民医院3、培养基胰酪大豆胨液体培养基(TSB)(批号:1901222)沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)(批号:180925)胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)(批号:1901162)沙氏葡蔔糖琼脂培养基(SDA)(批号:190116)梭菌增菌培养基(批号:181213)哥伦比亚琼脂培养基(批号:170914)以上培养基均由北京三药科技有限公司提供;溴化十六烷基三甲铵培养基(批号:20180403)由海博生物技术有限公司提供;甘露醇氯化钠琼脂培养基(批号:3104327)由广东环凯微生物科技有限公司提供。4、菌种枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】(第4代)金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】(第4代)铜绿假单胞菌【CMCC(B)10 104】(第4代)白色念珠菌【CMCC(F)98001】(第3代)黑曲霉【CMCC(F)98 003】(第3代)大肠埃希菌【CMCC(B)44 102】(第5代)生孢梭菌【CMCC(B)64 941】(第3代)以上菌种均来源于广东环凯微生物科技有限公司。三、菌液制备1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌至胰酪大豆胨液体培养基中,经30~35℃培养18~24小时后,分别取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌的胰酪大豆胨液体培养基培养物1ml,用0.9%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-5~10-7,做活菌计数备用,选择适宜梯度使细菌数不大于100cfu/ml。2、将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30~35℃培养24~48小时,用0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液或者孢子悬液,10倍稀释至10-3~10-5做活菌计数备用,选择适宜梯度使菌数不大于100cfu/ml。3、接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中,经20~25℃培养48~72小时取白色念珠菌液体培养物1ml,用0.9%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-4~10-6做活菌计数备用,选择适宜梯度使菌数不大于100cfu/ml。4、接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂培养基中,经20~25℃培养7天,取黑曲霉新鲜培养物,加入5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,吸出孢子悬液用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍稀释至10-4~10-6,做活菌计数备用,选择适宜梯度使菌数不大于100 cfu/ml。四、计数方法适用性试验1、供试液制备 取10mL供试品,用胰酪大豆胨液体培养基稀释制成1:10的供试液,备用。2、供试品中微生物的回收试验组:取上述制备好的供试液,加入金黄色葡萄球菌菌悬液,混匀,使每1ml供试液中含菌量不大于100 cfu,取该混合液2ml(lml/皿),分别置直径为90mm的无菌平皿中,注入15~20ml温度不超过45℃相应的琼脂培养基。置规定温度、时间培养,观察计数结果。铜绿假单胞、桔草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉均依法操作。供试品对照组:取制备好的供试液,以稀释液代替菌液同试验组操作。菌液组:取相应的稀释液代替供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。3.结果判断计数方法适用性试验中,采用平皿法时,试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5~2范围内,若各试验菌的回收试验均符合要求,照所用的供试液制备法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。试验结果详见表1。[img=,609,570]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152300475214_6517_2232106_3.png!w609x570.jpg[/img]表1结果表明:按此方法进行适用性检查,所有试验菌的回收比值均小于0.5,试验菌的回收比值均不在0.5~2范围内,因此采用1:10的供试液重新进行适用性试验。[img=,432,585]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152302434224_4507_2232106_3.png!w432x585.jpg[/img]表2结果表明:按此方法进行适用性检查,所有试验菌的回收比值均在0.5~2范围内,故可采用制备1:10供试液按平皿法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。五、控制菌1、铜绿假单胞菌试验组:取1:10供试液10ml接种至100ml的胰酪大豆胨液体培养基中,加入54cfu/ml的铜绿假单胞菌菌悬液1ml,混匀,30~35℃培养18~24小时,取上述培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,30~35℃培养18~72小时,观察并记录。阴性对照组:以稀释液代替供试液,不加试验菌,其他同试验组的控制菌检查。阳性对照组:不加供试液,其他同试验组的控制菌检查。供试品对照组:不加试验菌,其他同试验组的控制菌检查。[img=,650,235]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152303530254_4222_2232106_3.png!w650x235.jpg[/img]2、金黄色葡萄球菌试验组:取1:10供试液10ml接种至100ml的胰酪大豆胨液体培养基中,加入72 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌悬液1ml,混匀,30~35℃培养18~24小时,取上述培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上,30~35℃培养18~72小时,观察并记录。阴性对照组:以稀释液代替供试液,不加试验菌,其他同试验组的控制菌检查。阳性对照组:不加供试液,其他同试验组的控制菌检查。供试品对照组:不加试验菌,其他同试验组的控制菌检查。[img=,658,530]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152305306414_5621_2232106_3.png!w658x530.jpg[/img][img=,602,169]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152305386274_4226_2232106_3.png!w602x169.jpg[/img]注:+代表沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上有典型菌落生长,-代表沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上无典型菌落生长。4、梭菌试验组:取1:10供试液10ml,另取一份1:10供试液10ml置80℃保温10min后迅速冷却分别接种至100ml的梭菌增菌培养基中,分别加入71cfu/ml生孢梭菌菌悬液1ml,混匀,置厌氧条件下30~35℃培养48小时。取上述培养物划线接种于哥伦比亚琼脂培养基平板上,置厌氧条件下30~35℃培养48~72小时。阴性对照组:以稀释液代替供试液,不加试验菌,其他同试验组的控制菌检查。阳性对照组:不加供试液,其他同试验组的控制菌检查。供试品对照组:不加试验菌,其他同试验组的控制菌检查。[img=,674,615]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909152307107304_5206_2232106_3.png!w674x615.jpg[/img]

  • 水中微生物检测方法-细菌总数检测-ATP??

    在BCEIA展会上,看到大的仪器厂家开始向小型化仪器方面发展,其中有一款便携式ATP,主要检测细菌总数,非常快速,我联想到我们水质菌落总数是需要培养的,时间很长。那我们是不是菌落总数也可以采用这样的方法??ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理,利用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺苷(ATP)。由于所有生物活细胞中含有恒量的ATP,所以ATP含量可以清晰地表明样品中微生物与其他生物残余的多少。

  • 生物发光技术在细胞学检测中的应用

    生物发光技术在细胞学检测中的应用摘要:本文就生物发光技术的种类、机理、及其技术特点进行了综述,并就其在细胞学检测中的应用与研究进展展开了讨论。关键词:生物发光; ATP;荧光素酶;细胞凋亡;细胞内游离Ca2+自从20多年前,Marlene A DeLuca’s第一个成功的获得表达萤火虫荧光素酶基因(luc基因)的转基因烟草以来,生物发光(Bioluminescenc,BL)作为一个古老而又年轻的技术, 近年来得到了很大的发展和广泛的应用。而近几年来,随着分子生物学的进展以及一些新生物技术工具的出现,尤其在某些关键技术如生物传感器、基因序列分析、活体细胞ATP 测定]等方面取得了一些突破,使生物发光的应用进入了一个新时代,极大提高了生物发光的检测和快速应用,其应用范围更进一步扩大[1]。1 生物发光的种类和特点尽管自然界中的生物体普遍存在发光现象,它们的发光机理、强度和光谱范围存在着很大差异。目前,国际上根据发光的机理不同将生物发光分为:受激荧光,发光生物发光,化学发光和生物的超微弱发光[3,4]。1.1 受激荧光受激荧光是指生物体在受到外界光辐射的作用时,体内固有的荧光物质或吸收的荧光标记物发光的现象。在生物学领域中,由于分析物质荧光的方法敏感性极高,而且几乎所有的有机分子都能够直接或经过适当的化学处理后发生荧光,故很早就受到重视,并逐渐发展成为生物学和医学中的荧光分析。在生物医学领域应用荧光分析最多的是荧光显微技术,基本工具为荧光显微镜。但一般的荧光显微镜某些情况下荧光的亮度不足,使观察困难随着光电技术和计算机技术的进步,已经发展出的激光共聚焦显微镜,操作更加方便,实验可重复性提高,使受激荧光的应用更加广泛[5]。1.2 发光生物发光在生物发光领域中最容易被人们所接受的发光现象就是以萤火虫的闪光为代表的发光生物发光[3]。现在,已了解各种发光生物发光的基本反应,在这个领域中也取得了一些新的进展,例如在体外重组虫荧光素酶,用基因工程技术在大肠杆菌中表达;人工合成荧光素;体外模拟细菌发光体系已获成功;细菌的发光基因已被提出,同样也已用基因工程方法在大肠杆菌中表达。水母发光蛋白已经分离纯化,一级结构已经清楚。由于生物发光的量子效率极高,所以研究生物发光能量的转化具有重要的理论与实际意义。近年来被广泛应用的发光蛋白,如GFP、YFP、CFP 等,其发光原理就是源自动物的自发发光,从而为生物医学研究提供了新的手段[6]。1.3 化学发光化学发光是在化学反应过程中(主要为氧化还原反应)发出可见光的现象[6]。化学发光反应是由两个关键步骤组成:激发和发射。许多化学反应进行时能释放足够的自由能而把参加反应的物质之一激发到能发射光的电子激发态,生成一种激发态产物,在它回到基态时,剩余能量转变成光子能量产生发光现象。随着化学发光物质合成技术的进步,化学发光在生物医学及其它领域的应用越来越广泛[7,8],将化学发光与免疫反应结合起来建立的化学发光免疫测定法和化学发光标记是继荧光标记,放射性核素标记,酶标记三大标记技术之后,发展起来的最新检测技术[8]。1.4 生物超微弱发光 随着生物发光研究的进一步深入,发现人体的器官、组织、细胞、乃至大分子都在发光,不过发光强度更弱。这些有关生物超微弱发光(ultra-weak bioluminescence)的研究课题,构成了当前生命科学发展前沿中的一个极其重要的研究领域——生命系统的超微弱光子辐射(ultra-weak photon emission from living system) [8]。20世纪60~70 年代以来,各国先后出现了一些研究小组专门进行这方面的探讨,如日本的稻场文男小组(1991)研究了鼠肝核的超微弱天然光子发射;德国F.A. Popp小组提出了“生物光子”概念和一系列的相干理论[9]。目前研究已涉及到细胞、亚细胞乃至生物大分子的层次[ 9,10]。越来越多的实验表明,DNA 是生物超微弱发光的一个辐射源。1.5 生物发光特点研究发现生物发光有以下几个特点:① 生物发光的颜色范围很宽,可从红光到深蓝光;② 氧是几乎所有生物发光系统中必须的因素;③ 生物发光是由“荧光素酶”与“荧光素”的化学反应所引起的;④ 所有的生物发光反应似乎都是酶-底物类型的反应,但复杂程度不同,某些生物发光反应涉及3 种或4种底物,而另一些生物发光反应甚至需要3个或4个酶的体系[8]。[/size]

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