大肠埃希氏菌噬菌体

开学季又到了实验汪又要去“搬砖”了如何优雅的搬砖还不用求助师兄师姐当然是关注“小奥课堂”栏目啦今天小奥为各位介绍的 是一篇干货满满的 噬菌体展示方法实践手册 “噬菌体的扩增与定量” 这是一份难得的学霸笔记 请收好（收藏）！ Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、全人源转基因小鼠发现平台进行有效对接，能够广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。本文将针对噬菌体展示技术的噬菌体增殖和扩增实验细节进行探讨、分享具体实验过程的经验，以其原理为根本来指导实验过程，以精益求精的实验过程，增加噬菌体展示技术在抗体发现过程中的成功率。Part 2 ——噬菌体文库 扩增及展示的基本原理 | 现在普遍应用的噬菌体展示抗体片段的体系称之为“3+3体系”（3为噬菌体的p3衣壳蛋白）；3+3代表着p3衣壳蛋白有两个来源：噬菌粒（phagemid）M13KO7辅助噬菌体(Helper Phage）菌粒（phagemid）上的p3蛋白融合了抗体片段的基因，是文库多样性的关键；辅助噬菌体(Helper Phage)上的p3蛋白为噬菌体天然的p3蛋白。*噬菌粒是一种比较小的质粒载体，在大肠杆菌感受态中有较高的转化效率，并且能够在大肠杆菌中扩增。 含有噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体(Helper Phage)感染后，会利用大肠杆菌的酶系统、原料和能量进行扩增,最终包含噬菌粒的噬菌体从大肠杆菌释放出来，该子代噬菌体的p3衣壳蛋白会展示抗体片段。Part 3 ——在噬菌体扩增过程中 遇到的难题和对应的解决方案 | 噬菌体的建库过程实际上是抗体片段基因多样性的传递过程： 从血样中抗体基因的多样性传递到噬菌粒的过程，是噬菌粒文库构建的内容； 从噬菌粒的多样性传递到含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性，是噬菌粒质粒电转大肠杆菌的内容； 从含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性传递到噬菌体的多样性则是噬菌体扩增的内容，也是本文实验经验关注的问题。噬菌体的扩增最终目的是将噬菌粒中单一拷贝的抗体片段基因通过噬菌体的扩增过程变成10-100个拷贝，且这些拷贝基因能够在噬菌体表面的p3蛋白上展示出抗体蛋白片段。在噬菌体的扩增过程要使得文库的多样性得以保持和传递，需根据文库的初始大小确定在扩增过程中含有噬菌粒的大肠杆菌的数目和体积，对应加入的辅助噬菌体的多少进行有效感染，以及扩增后加入多少含有噬菌粒的噬菌体进行淘选等需要一一计算评估的问题，不同文库大小的噬菌体库在扩增过程中需要的扩增体积是不一样的。一份固化的实验方案很有可能会导致文库多样性的丢失。 要弄清楚这些问题，首先要具备以下几点基础的前置知识：（??以下内容全部划重点！！！）1. TG1大肠杆菌在OD600的读数：1OD代表的菌浓度为1e9个/ml。2. 噬菌体/辅助噬菌体在TG1处于对数生长期时有比较好的感染效率，TG1处于对数生长期的OD600值在0.4-0.8。3. TG1在对数生长期的生长速度是20分钟一代，需要密切关注TG1的生长，及时取菌进行实验。4. 辅助噬菌体和TG1的比值MOI在20：1时能够保证所有TG1被感染上。5. 含有噬菌粒的噬菌体能够感染正常的TG1大肠杆菌，并将噬菌粒留在TG1中并随着TG1的扩增进行扩增，在无辅助噬菌体的情况下无噬菌体的扩增。6. 噬菌粒质粒含有青霉素抗性，辅助噬菌体含有卡那霉素抗性。7. 含有噬菌粒的噬菌体可以通过感染正常的TG1，梯度稀释涂青霉素抗性的琼脂板进行滴度测定。8. 3+3模式下含有噬菌粒的噬菌体展示出p3融合抗体片段蛋白的效率比较低，只有5%-10%,在进行淘选时，加入的噬菌体的滴度应是文库多样性的100倍以上。 还有一个比较关键的问题是噬菌体作为一种病毒，很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境，从而感染F因子阳性的大肠杆菌。 （心疼一下生物汪，冒着生命危险搬砖啊！） 在噬菌体展示的相关实验需要在相对封闭的实验室进行以避免噬菌体对于大肠杆菌的污染，特别是在培养正常的TG1大肠杆菌时。噬菌体的灭活方式通常是紫外照射半小时以上。（合格的生物汪，是个莫得感情的病毒杀手！） Part 4 ——噬菌体扩增和定量 具体实验过程的分享 | 以下是以一个文库大小为1E9的噬菌体文库进行扩增的实验方案。*如果文库过大或者过小，可依比例增减扩增体积。 Day 1（搬砖秃头的第一天）1. 取含有噬菌粒的TG1菌种1ml (菌数目为1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培养基250ml摇瓶中，使用奥豪斯摇床37度220rpm摇菌摇床至OD600为约0.5。2. 取OD600为约0.5的菌液20ml (菌数目为1E10),按照MOI为20：1加入pfu为2E11的辅助噬菌体M13 K07，37度220rpm振荡半小时进行感染。3. 取感染后菌液到50ml离心管使用奥豪斯离心机5816R 3200g离心10分钟，去除培养基，以除去培养基中的葡萄糖对噬菌粒中p3蛋白融合了抗体片段蛋白表达的抑制。4. 用2xYT-AK培养基重悬菌团，将培养基加至400ml，用1L摇瓶在30度220rpm过夜摇菌。 Day 2（搬砖秃头的第二天）5. 将400ml菌液均分至大的离心瓶中，使用奥豪斯离心机5816R 10000g离心10分钟，取上清，10000g再次离心10分钟，去除残留的菌体碎片。6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中，在4℃孵育1小时并伴随着柔和的振荡，然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃10000g离心1小时。7. 去上清，用10mlPBS重悬噬菌体后，加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.8. 冰上孵育20分钟，然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃ 10000g离心半小时。9. 去上清液，用吸水纸吸干残留的PEG溶液，加入1-2ml的PBS重悬噬菌体，进行滴度测定。滴度测定：1. 在分隔的实验室，取正常的TG1大肠杆菌加入2xYT的培养基中，使用奥豪斯摇床摇菌至OD600值为0.5，如未能及时使用，可放入4℃ 2小时以备用。2. 将步骤9中扩增噬菌体原液用PBS稀释1E5-1E7倍。3. 取10ul噬菌体稀释液加入490ul OD600为0.5的TG1大肠杆菌中，使用奥豪斯摇床 37℃ 220rpm振荡半小时进行感染。4. 取感染液50ul均匀涂抹在含有2xYT-GA的琼脂板中，晾干后放入37℃培养箱过夜。并将未感染TG1大肠杆菌涂抹琼脂板作为阴性对照。 Day 3（搬砖秃头的第三天）5. 数2xYT-GA的琼脂板中的克隆数，根据稀释倍数计算扩增噬菌体的滴度 噬菌体滴度(pfu/ml)=（克隆数*10*50/10ul）*稀释倍数6. 取1E11-1E12的噬菌体用于淘选。试剂配方：2xYT培养基：Yeast Extract 10.0 g/L+Tryptone 16.0 g/L+NaCl 5.0 g/L2xYT-GA培养基: 2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+ 1% （W/V）葡萄糖2xYT-AK培养基：2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+50 μg/ml卡那霉素PEG溶液：20% (w/v) PEG 6000, 2.5 M NaCl Part 5仪器推荐：（做科研民工的每一天都不孤单，因为有小奥陪伴）噬菌体作为一种病毒，很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境，需要封闭的实验室，实验室所有的仪器需单独使用。奥豪斯恒温轻负载培养摇床转速范围为100-12—rpm,体积集约，功能强大，可为您的样品提供优异的摇荡效果：此外，噬菌体展示实验的过程中会有不同体积、不同转速和需要4℃条件的离心步骤，如果以多 台离心机满足实验的需求会造成实验设备资产的空置，造成极大的浪费！！！奥豪斯5816R多功能离心机和可选转子为噬菌体相关实验提供便利，一台离心机满足所有实验需求！接下来，小奥带你乘坐“帮你省科研经费”这辆车教你正确薅奥豪斯的羊毛 德国原装进口功能强大、离心效果优异的奥豪斯Frontier™ 离心机家族 推出“买一赠一”促销活动促销型号如下微量高速离心机FC5515R（冷冻型号）微量高速离心机FC5515（非冷冻型号）全新紧凑型微量离心机FC5513现在上车，还来得及哦！详情请联系奥豪斯哦！ 想了解更多关于奥豪斯Starter™ 系列产品信息？请进入「阅读全文」留下信息，我们的专业工程师将火速赶来，为您服务！ ▼

p　　近日，中国科学院深圳先进技术研究院的研究团队在国际权威学术期刊Microbiome(《微生物组》)上发表最新研究，首次证实了人体肠道噬菌体组和糖尿病的关联性，为应用噬菌体干预肠道菌群，以及预防和治疗某些疾病提供了依据。/pp　　噬菌体是一类专一感染细菌的病毒，作为细菌的天敌，2014年被美国国立卫生研究院列为对抗耐药菌武器之一，同时也是人体肠道微生物组的重要组成部分。肠道噬菌体种类丰富、数量巨大，通过塑造肠道菌群结构，进而影响人体健康。但是，人们目前对于噬菌体的认识还非常匮乏。/pp　　论文作者首次利用已有的人体肠道微生物大数据，开发了一系列生物信息学方法，挖掘其中的噬菌体基因组序列，鉴定了大量的全新肠道噬菌体，揭示了肠道噬菌体组的多样性和新颖性。通过对这些噬菌体基因组序列的分析，科研人员发现这些噬菌体携带大量的功能基因，这些基因和宿主细菌在肠道环境中的生存适应性相关。/pp　　研究显示糖尿病患者的肠道细菌菌群组成变化和糖尿病有着显著的相关性。由于噬菌体—细菌之间是捕食者—被捕食者的关系，通常认为糖尿病人肠道菌群的变化会影响噬菌体的组成差异。但是，科研人员首次发现了肠道噬菌体的数量在糖尿病患者肠道中的数量显著高于对照组，经过进一步分析发现肠道细菌和噬菌体之间存在复杂的关系网络，细菌与噬菌体之间不是简单的“此消彼长”的关系。/pp　　据介绍，这个工作成果连同近期其他实验室发在《细胞》上的工作成果，都暗示着噬菌体—细菌—宿主两两之间存在着相互作用，这种关系有可能影响着人体的健康。未来，解析这些关系将是该领域的研究热点。/p

蒙大拿大学的研究人员在《Science》发表了关于细菌如何引起感染的新见解，可能有助于未来的抗感染治疗。 研究对象不是细菌，而是感染病毒的噬菌体，作为国家卫生研究院资助项目的一部分，帮助开发细菌感染疫苗。“噬菌体通常被视为细菌寄生虫，”该论文的合着者助理教授Patrick Secor说。由于耐抗生素的细菌流行率越来越高，利用噬菌体（噬菌体疗法）替代抗生素杀死致病细菌的研究逐渐升温。噬菌体多种多样，被认为是地球上最普遍的生物实体。“当我们寻找感染致病菌铜绿假单胞菌的噬菌体时，我们发现大多数菌株都感染了一种名为Pf的噬菌体，但这种噬菌体不会杀死它们的细菌宿主，”Secor说。当Secor和斯坦福大学的研究人员在人体伤口中寻找Pf噬菌体时，他们惊讶地发现了大量丝状噬菌体——平均每个拭子上有100万个Pf噬菌体。Secor课题组以前研究过噬菌体是如何影响细菌毒性的。“因此，我们问，这些Pf噬菌体是否可能直接与人体免疫系统相互作用？”他们与斯坦福大学的合作者一起发现，Pf噬菌体被免疫细胞识别为了病毒，识别冷病毒的细胞表面受体同样也可以识别噬菌体。“这是一个关键的发现，”Secor说。“这些噬菌体诱导了抗病毒反应，但是面对细菌感染，这是一种不适当的免疫反应。”研究人员认为，这种不适当的免疫反应使细菌在伤口或肺内获得“掩护”，从而建立感染。研究人员希望，他们的发现可以刺激新研究，通过靶向感染细菌的噬菌体发展控制感染的有效策略。

噬菌体展示应用相关载体设计的关键：1 相互结合位点的选择在蛋白酶底物噬菌体展示中，一个关键的组分是亲和性结构域，它使我们可以将底物序列和非底物序列区分开。这其中包括蛋白—蛋白相互作用、蛋白—肽段相互作用以及多组氨酸与镍螯合基质的结合。整合这几种不同的系统的要素在于，展示系统是基于高亲和性相互作用而设计的。通常，相互结合的两个物质之间的解离常数（Kd）应该至少在一个较低的nmol/L的数量级上，这样在实验中复合物的解离速度就可以比蛋白酶解的速度慢得多。例如，我们以往在这个领域中的工作中，利用的是一个hGH的高亲和性变异体，此变异体与其受体的Kd值约13pmol/L。然而，对于蛋白酶底物噬菌体展示库，挑选在适当的缓冲液条件下（例如低pH或高pH）能够被破坏的这种相互作用，将有助于选择性地富集非底物序列（被捕获而结合于固体支持物上）和最佳的底物序列（被蛋白酶解而释放）。另外一个必须考虑的是靶蛋白酶（或者其他的一些噬菌粒形成中可能碰到的蛋白酶）必须不会酶切亲和性结构域。由于这个原因，亲和性结构域一般都是一个稳定的球蛋白或者一个短的肽段。2 底物卡匣（cassette）的设计和构建底物噬菌体展示要成功，一个关键在于切割仅仅发生在亲和性（捕获）结构域和噬菌粒之间。幸运的是，丝状噬菌体对蛋白酶解有极强的抗性：在所有已知的蛋白酶中，只有枯草杆菌蛋白酶能够引起噬菌体外膜蛋白的显著降解。为使底物序列更易与蛋白酶作用，在附近的连接序列中引入一定部分柔韧性（segmental flexibility）的设计要谨慎。例如，底物序列GPGG（X）。GGPG位于亲和性结构域和pⅢ基因之间，柔韧的甘氨酸—脯氨酸接头分布于随机序列的两端。在我们的实验中，已经证实截短形式的pⅢ蛋白是有效的，但另外也有报道使用全长pⅢ蛋白也能取得成功。在多价底物噬菌体展示中，一个全长pⅢ蛋白对于感染是必需的。一些其他的重要因素也主导着文库卡匣的设计，包括随机化的密码子、密码子的选择以及文库的大小，这些在第2章中有详细的描述。在许多情况下，我们不可能穷尽含有8个或8个以上的残基的整个底物序列所有可能的排列。然而，在文库仅展示了一部分可得到的序列的情况下，我们也有可能得到关于底物特异性的相关信息。例如，要构建一个包含5个密码子的随机文库，可以先列举其中2个密码子的序列，以此作为参照序列；从中得到的信息可用于第二次的文库构建，即将此两个密码子固定，再列举另外3个密码子和（或）其他的扩展的底物序列。作为替代，可以通过整合已知的特异性决定因素并查明那些现在还较不清楚的因素，从头设计一个更集中的文库。

双十一结束小奥的购物车都清空了没法儿给你抄了我借ELISA实践笔记给你抄快到期末/年底了实验汪们可要抓紧搬砖咯前面三份笔记拉到文末看哦以下，可都是尖货儿哟！??Part 1 —— 前 言 | ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点：1.待测样本极具多样性，且单一样品通常也是混合物，有很大的可能存在非特异吸附；2.不同的待测样品之间可能存在较大的浓度差异，浓度的大小和亲和力的大小均会对检测结果产生影响。在进行杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发时，需要选择合适的条件使信号值主要能够表征亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响。本文是ELISA定量测定方法开发和亲和力测定方法开发的进阶版本，配体受体反应的基本原理解析，和两种应用的差异性区分是进行ELISA筛选方法的开发的基础。 Part 2 - 原理解析 - ELISA信号值和亲和力大小的关系 无论是进行杂交瘤的筛选还是噬菌体展示的筛选，其化学原理的实质是抗体和抗原可逆的相互作用，John McCafferty在Phage Display of Peptides and Proteins A Laboratory Manual一书的第七章节Phage Display：Factors Affecting Panning Efficiency中对可逆反应的数学原理有过理论的推导和实验的验证，简而概之可以用下面的公式进行描述：Abinput代表可逆反应中抗体的加入量，Aginput 代表可逆反应中抗原的加入量，Kd代表Ab和Ag的亲和力大小。由公式可知，当反应完成时，形成的抗原抗体偶联物占抗体的加入量的比值（proportion bound），是一个与抗原的加入量和亲和力大小这两个参数相关的特征函数。具体在ELISA测定过程中当抗体的加入量是恒定值时，proportion bound可以用检测的信号值来等价表示，在ELISA反应中抗原的加入量和Kd将决定信号的大小。相同浓度的抗体，因为亲和力不一样，在同一抗原浓度下其proportion bound的比例也不一样，用具体的图形演示如下图：红色实线是亲和力为1nM的抗体Ab1随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线，蓝色实线是亲和力为10nM的抗体Ab2随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线，绿色虚线为在相同抗原浓度下，Ab1/ Ab2 proportion bound的比值。在抗原浓度为10nM的条件下，90%的Ab1(Kd=1nM)和50%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物，作为ELISA检测的信号值，Ab1，Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上1.8倍的信号差异；在抗原浓度为1nM的条件下，50%的Ab1(Kd=1nM)和9.1%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物，作为ELISA检测的信号值，Ab1，Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上5.5倍的信号差异；在加入的抗体浓度是相同的情况下，加入反应的抗原的浓度越少，ELISA信号比值的差异和抗体亲和力比值的差异更具相关性。抗原的浓度决定了ELISA筛选方法的选择性！以上是关于杂交瘤和噬菌体展示筛选理论状态的推导，也是ELISA筛选结果出来了做出客观解读的理论依据，在实际的筛选应用过程中由于不同的待测抗体样品之间可能存在较大的浓度差异。在抗原浓度较高的情况下ELISA信号差异很多情况下由于抗体样品的浓度差异导致的，ELISA信号值对于亲和力大小不具有选择性；只有在抗原浓度较低时，信号值主要能够表征抗体亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响，而在ELISA方法开发时当抗原浓度较低时，相对于抗原浓度较高时，其ELISA信号值要弱很多，提升ELISA方法信号的灵敏度，如何通过优化酶联抗体的浓度，挑选显色液和选择显色时间以增强ELISA检测的信号值是一个有区分度的ELISA筛选方法的关键。当ELISA检测的信号值得到提升时，由于筛选样品复杂性，往往其背景信号也会极大的提升，如何通过封闭液，酶标板材等降低背景信号值，得到好的信噪比是一个高质量的ELISA筛选方法的另一个关键。Part 3 - 实例分享 - ELISA用于噬菌体展示筛选布 局——————(Note 1)一 般 操 作 流 程1.酶标板的制备取浓度为100 ug/ml抗原，室温溶解，混匀用包被液按如下步骤稀释至0.2ug/ml，0.5ug/ml，1ug/ml，按加样布局表加入100ml/孔，分别加入酶标板条中 (Note 2)，其中加入包被液做包被抗体的空白对照，2-8℃过夜。2.用洗涤液洗板3次，拍干，加入300ml/孔封闭液(Note 3)室温封闭1小时；洗涤液洗板3次，拍干待用；3.取出包含有阴性对照和阳性对照过夜孵育制备含有噬菌体的深孔96孔板，在奥豪斯高速离心机中2000g离心15min，取上清，稀释10倍，一一对应加入包被好酶标板中。(Note 4)4.放入奥豪斯微孔板振荡器内 (如ISLDMPHDG- 30391935)，设置37℃、600rpm振荡1小时； 5.用洗涤液洗板3次，拍干；6.抗M13 p8酶联抗体稀释到合适的浓度（Note 5），在漩涡混合器上（如VXMNFS-30392112）混匀，100ul/孔。7.放入微孔板振荡器内，设置37℃、600rpm振荡1小时； 8.用洗涤液洗板4次，拍干；9.取酶联抗体对应的TMB显色液，临用前20分钟拿出平衡到室温，在漩涡混合器上混匀；（Note 6）10.使用8道排枪以100 ml/孔加入TMB显色液；11.显色液室温避光放置10-30分钟 （Note 7）；12.使用8道排枪以100ml/孔加入终止液终止反应；13.用酶标仪测定信号值；14.结果分析（Note 8）。Note1：由于不同的噬菌体样品有不同的亲疏水性，其对酶标板材的非特异吸附强度不一样，做一块没有抗原包被的阴性对照板是十分有必要的。Positive和Negtive是和样品有同样噬菌体制备过程，Positive Stock为早已经制备好的分装保存的阳性噬菌体，前者目的是监控在不同时间内噬菌体样品制备过程的差异，后者是监控在不同时间内ELISA检测操作的差异。Note2：在包被过程中，建议选择疏水性酶标板材（polysorp）,这样可以极大的减少背景信号值，提高整个方法的信噪比。在实验初期包被的抗原浓度需要少量0.2-1ug/ml，然后根据不同包被条件下同一样品信号大小来进行判断优化。一个已知亲和力的展示阳性抗体的噬菌体是十分有必要的，根据该阳性展示噬菌体样品的信号值来确定最终筛选过程中抗原的包被浓度。抗原直接包被酶标板材上会屏蔽部分结合位点，造成部分假阴性的结果，如果条件允许可采用生物素化抗原，首先5ug/ml的链霉亲和素包板，然后加入0.05-0.2 ug/ml不等的生物素化抗原。抗原直接包被和间接包被其效率不太一样，采用间接包被可适当降低生物素化抗原的包被浓度。Note3：在有生物素化抗原参与的ELISA实验中，不要加入含脱脂奶粉的封闭剂，脱脂奶粉含有微量生物素，会干扰整个检测体系。Note4：噬菌体上清液的稀释比例，可提前根据阳性噬菌体样品做好稀释预实验进行确定。Note5：应选择抗噬菌体的P8蛋白的酶联抗体，噬菌体有2000个以上的P8蛋白，适当的增加酶联抗体的浓度可以提高方法的灵敏程度，笔者曾增加5倍的酶联浓度得到了3倍的信号提升。Note 6：市面上TMB底物最低和最高有10倍的显色差异，建议选择市面上最强的TMB显色底物。需要提前确认检测仪器的信号线性范围，比如一般的酶标仪吸光度值的信号线性范围在0-3，吸光度值在3-4之间为非线性的，信号值超过3时，信号和亲和力的相关性变差。Note 7：显色时间可适当的延长，一般来说在30分中内显色的信号值和显色的时间成线性。Note 8：条件的选择最终是通过阳性噬菌体的信号值决定的，阳性噬菌体的亲和力大小是一个非常重要的选择参数。如阳性噬菌体的亲和力为1nM时，筛选的目的是得到高亲和力的抗体，可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为0.5时的条件作为最终的筛选条件，这样很多OD值很小的低亲和力的抗体均被过滤掉；筛选的目的是尽可能得到多的亲和力抗体，可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为2-3时的条件作为最终的筛选条件，低亲和力的抗体在OD值上也不会太小，可以得到体现。不论如何抗原的浓度大小决定了选择性，选择较小的抗原浓度进行反应是信号和亲和力大小匹配的关键和趋势性选择，信号大小的调节可以通过酶联抗体浓度，高显色能力的显色液和显色时间进行调节。如果在一块板的检测中未知样品的信号值大小呈合理的分布是ELISA条件较好的表现。Part 4 - 总结 - ELISA用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是ELISA用于亲和力测定方法的一种变种，想要得到好的信号和亲和力大小的相关性，低抗原浓度条件下进行方法学开发是必须的。低抗原浓度条件下会有低的信号值，通过增加酶联抗体浓度，选择高显色能力的显色液和延长显色时间，增加ELISA灵敏程度是ELISA优化的技术方向。由于检测样品的多样性和复杂性，高灵敏的ELISA检测体系必然会导致背景信号的增加，无法得到很好的信噪比，疏水性的酶标板条，尽可能低的样品的稀释倍数是解决这个问题的关键。一个稳健的能用于杂交瘤和噬菌体展示筛选方法是ELISA各种耗材，试剂和实验条件的完美组合，需要对试剂耗材的多种可能进行探索，也是平台经验的系统汇总，以下是用于筛选方法的优化方向的汇总。 以上，就是小奥带给大家的第四篇ELISA方法学开发的干货内容！我们下期再见哦！

令人意外！噬菌体携带抗生素耐药性基因根据一项新的研究，来自多种环境的病毒组携带着抗生素耐药性基因。这一结果提示着噬菌体---感染细菌的病毒---可能在转移让细菌产生耐药性的基因中发挥着作用。相关研究结果将发表在2017年1月那期Environmental Pollution期刊上，论文标题为“Exploring the contribution of bacteriophages to antibiotic resistance”。来自西班牙赫罗纳大学的研究人员扫描了来自未经净化的污水、人粪便、猪粪便、淡水环境和海洋环境的病毒组，以便寻找抗生素耐药性存在的证据。他们发现这样的基因存在于所有分析的病毒组中，尽管它们的丰度存在差异。在人类相关的病毒组中，研究人员发现相对较少的耐药性基因，它们中的大多数与四环素耐药性相关联。他们在其他的样品中观察到更加丰富的抗生素耐药性基因。在猪粪便病毒组中发现的绝大多数耐药性基因是编码β-内酰胺酶的基因，而未经净化的污水、淡水和海洋样品携带许多各种不同的耐药性基因，包括那些赋予对至少三种不同的抗生素产生多药耐药性的基因。论文通信作者、赫罗纳大学加泰罗尼亚水研究所科学家José Balcázar写道，“我们的研究表明环境是一个巨大的噬菌体库，它们中的大多数携带着抗生素耐药性基因。”因存在细菌DNA污染，Balcázar和同事们排除了他们的病毒组数据中的一些数据。Balcázar也强调应更加深入地研究他的团队在人类相关的病毒组中发现的较低数量的耐药性基因。他写道，“还需更多数量的样品来证实这一观察结果。”Balcázar说，噬菌体在细菌之间转移耐药性基因的机制和噬菌体在基因转移中发挥多大重要的作用还需在未来的研究中加以阐明。

中国科学院南海海洋研究所研究员王晓雪团队建立了一种不依赖于噬菌体基因序列相似性的原噬菌体de novo预测新算法，集成分析流程的工具名为Prophage Tracer。9月22日，相关研究成果在线发表在《核酸研究》上。　　烈性噬菌体侵染细菌宿主后，大量繁殖，裂解宿主细胞释放子代噬菌体粒子。温和噬菌体则是进入宿主细胞内，将自身的DNA整合在宿主的基因组中，随着宿主细胞的复制而复制。这一过程称噬菌体的“溶原化”，整合在宿主基因组中的噬菌体DNA称“原噬菌体”（prophage）。特定条件能重新激活原噬菌体使其裂解宿主。研究发现在人、小鼠肠道以及珊瑚微生物组中溶原化的温和噬菌体比裂解状态更普遍。温和噬菌体的溶原-裂解转换是微生物生态领域的重要科学问题之一。　　温和噬菌体能和宿主形成长期共生关系，其整合切离等可以破坏或恢复宿主的基因正常功能，是宿主基因表达调控的重要途径。研究团队前期发现，希瓦氏菌的原噬菌体CP4So可以在低温诱导条件下发生切离，是细菌一种重要的适冷机制，且CP4So的切离受到宿主温度依赖性的H-NS磷酸化调控。因此，精确鉴定细菌中的原噬菌体及其插入位点对于研究温和噬菌体与宿主的共生关系至关重要。当前，鉴定原噬菌体的方法依赖于利用已知的噬菌体进行序列相似性检索。然而，噬菌体的基因组变异快，基于序列相似性检索方法较难发现未知类型噬菌体。此外，对噬菌体插入位点的预测不准确，较难区分原噬菌体携带的“cargo基因”和宿主基因的边界。　　为了解决上述问题，汤开浩等建立了一种从头预测原噬菌体的方法（如图）。该方法利用原噬菌体整合切离过程中会产生基因组结构变异基因组序列。这些序列隐藏在细菌基因组、转录组测序数据的reads中。研究建立重叠的序列比对方法，追踪和挖掘埋藏于测序原始数据中reads。只需甄别到1-2条reads便能精确定位原噬菌体（精确到单个碱基）。该方法不依赖于序列相似性，可预测未知的噬菌体。研究在珊瑚共附生细菌中鉴定到九个温和噬菌体，两个为新颖的温和噬菌体。　　研究工作得到国家杰出青年科学基金、国家自然科学基金水圈微生物重大研究计划、国家自然科学基金面上项目、国家重点研发计划等的资助。Prophage Tracer流程

p style="text-align: justify text-indent: 2em "12月24日，中国仪器仪表行业协会官网发布关于成立《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》团体标准起草工作组的通知。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202012/uepic/e78d99c1-dbec-4bcb-8492-91f5fba8d214.jpg" title="企业微信截图_20201225104600.jpg" alt="企业微信截图_20201225104600.jpg"//pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202012/uepic/18138437-6b45-4d90-87a8-ec28a2cba009.jpg" title="通知.jpg" alt="通知.jpg"//pp style="text-align: justify text-indent: 2em "各有关单位：/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "根据《关于 菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪 团体标准项目建议书的批复》（中仪协[2019] 017号），《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》项目已经列入中国仪器仪表行业协会的团体标准制定计划。该团体标准由中国仪器仪表行业协会归口管理，青岛佳明测控科技股份有限公司牵头起草。主要参与单位有吉林市光大分析技术有限责任公司等。现征集参与标准起草单位并成立标准起草工作组，请有关单位指派熟悉相关标准内容的技术人员参加，报名表（见附件）签字盖章后于2020年12月30日前扫描电子版发送至中国仪器仪表行业协会。!--菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪--/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "联系人：马雅娟/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "电话：13611013933/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "地址：北京市西城区百万庄大街16号1号楼6层/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "电子邮箱：mayj@cima.org.cn/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "附件：/pp style="line-height: 16px "img style="vertical-align: middle margin-right: 2px " src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_doc.gif"/a style="font-size:12px color:#0066cc " href="https://img1.17img.cn/17img/files/202012/attachment/ce9bdb3e-7cf9-4497-a3c3-3a4140fe9054.doc" title="《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》起草工作组报名表.doc.doc"《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》起草工作组报名表.doc.doc/a/pp style="line-height: 16px "img style="vertical-align: middle margin-right: 2px " src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a style="font-size:12px color:#0066cc " href="https://img1.17img.cn/17img/files/202012/attachment/d365221d-896f-4078-b98f-c6d531851c2a.pdf" title="关于成立团体标准起草工作组的通知.pdf.pdf"关于成立团体标准起草工作组的通知.pdf.pdf/a/p

GB29921-2021《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》于2021年9月7日发布，2021年11月22日实施。“致泻大肠埃希氏菌”突然就成了焦点！在2013版本中，原检测项目为大肠埃希氏菌O157:H7/NM。然而随着对致泻大肠埃希氏菌检验、鉴定能力的提升，越来越多的由其引起的暴发和病例被识别出来，其导致的疾病负担以往也可能被低估。我国食源性疾病监测结果显示，近几年细菌性食源性疾病暴发事件中，致泻大肠埃希氏菌引起的事件数已经上升到第五位，高危食品主要为肉制品、蔬菜、水果等。2021版标准修订将“大肠埃希氏菌O157:H7”修改为“致泻大肠埃希氏菌”，并对肉制品中的牛肉制品、即食生肉制品、发酵肉制品类，即食果蔬制品中的去皮或预切的水果、去皮或预切的蔬菜及上述类别混合食品规定了限量要求n=5，c=0，m=0/25g。（来源：食品安全国家标准数据检索平台）致泻大肠埃希氏菌是什么？致泻大肠埃希氏菌是一类能引起人体以腹泻为主的大肠埃希氏菌，可经过污染食物引起人类发病。常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括：肠道致病性大肠埃希氏菌EPEC肠道侵袭性大肠埃希氏菌EIEC产肠毒素大肠埃希氏菌ETEC产志贺毒素大肠埃希氏菌STEC（包括肠道出血性大肠埃希氏菌EHEC）肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC致泻大肠埃希氏菌如何检测？GB4789.6-2016致泻大肠埃希氏菌检验流程：目前国标PCR确认试验方法为普通PCR法。接下来带大家了解一下美正的两种PCR检测方案1. 普通PCR检测流程及产品介绍2. 荧光定量PCR检测流程及产品介绍致泻大肠埃希氏菌检测注意事项及常见问题 操作注意事项 （1）PCR鉴定前需将菌纯化于非选择性的固体培养基上；（2）所有PCR操作需严格分区，不同区域内仪器物品不可混用；（3）所有冷冻试剂使用前需融化混匀短暂离心后开盖使用；（4）试剂避免反复冻融，大体积试剂可配置后小体积分装冷冻；（5）操作需要带手套，不可使用带荧光物质或者是带粉末的手套；（6）提核酸加热后需冷却到室温后在开盖操作，避免气溶胶污染；（7）PCR管及管盖上不可使用记号笔标记；（8）不同批次试剂盒试剂不可混用；（9）严格按照试剂盒说明书设定反应参数和荧光通道。 用荧光定量PCR符合标准要求吗？ 答：这个不好说，一般按照不同的评审员的理解来要求。多数评审员应该会算是一种方法偏离吧。但是荧光定量PCR在技术上肯定是更先进的，至少明显降低了污染风险和生物安全风险，是今后食品微生物学检验技术的发展方向。GB 4789.6－2016的6.5.8条款：如用商品化PCR试剂盒或多重聚合酶链反应（MPCR）试剂盒，应按照试剂盒说明书进行操作和结果判定。这时候，我使用商品化荧光定量PCR试剂盒，是不是就可以按照试剂盒说明书进行了？大家可以探讨一下。 现在的食品实验室是否可以通过改装成分子实验室？食品检测的BSL-II室可以和PCR实验室共用吗？ 答：食品实验室本来就可以包括分子实验部分。所以，常规食品微生物检测的生物安全二级实验室可以和PCR实验室共用。但是，因为生物安全二级实验室必须是负压或者常压，而PCR实验室是相对正压，还有人流物流的多次进进出出，在防止交叉污染方面比较辛苦。最好还是不要合并使用。美正可提供“致泻大肠埃希氏菌”从前处理及增菌培养到PCR确认试验整体解决方案，并提供全程技术支持培训服务。产品名称产品货号产品规格备注/用途致泻大肠埃希氏菌（DEC）核酸检测试剂盒DZ10015-224T普通PCRDZ10015-348T致泻大肠埃希氏菌（DEC）核酸检测试剂盒（PCR-探针法）LR707F224T荧光定量PCR，含等效基因eae/ipaHLR707F348TQgen480实时荧光定量PCR仪Qen4801台／箱用于PCR反应扩增、检测及判读金属浴ose-db-011台／箱用于核酸提取过程加热48孔加热模块LR4801块用于配套预分装裂解液使用，如果购买美正金属浴，可赠送一块迷你离心机HM1台／箱用于PCR操作过程短暂离心

大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）和志贺菌（Shigella Castellani）都是具有高度传染性、危害严重的革兰阴性肠道致病菌, 病人感染后的临床表现相似，如发热、水样腹泻、剧烈腹痛等，严重可致死亡。临床上大肠埃希菌和志贺菌的正确鉴定对临床治疗非常关键，因为不同的菌株间有毒力和耐药性的差异，感染不同的致病菌，需要采用不同的治疗方案。从全基因组角度上，大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）和志贺菌（Shigella Castellani）的平均核苷酸一致率＞95% ，保守DNA＞69%，符合同一个种的定义，它们在菌落形态及生物学特性方面都非常相似，因此在临床实验室的常规工作中很容易被混淆，影响疾病的准确治疗。即使是通过16S rRNA 测序也只能鉴定到志贺菌-大肠埃希菌，并不能将其准确区分，进一步的鉴定需要依赖生化反应及血清学试验，但是这两种鉴定手段的实验步骤复杂、耗时很长，根本无法满足临床上对时效性的要求。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( matrixassistedlaser desorption / ionization time of flight massspectrometry，MALDI-TOF MS) 是近年发展起来的一种新型软电离质谱技术，具有快速、准确、操作简便、高通量、低成本等优势，已经被广泛应用于微生物的分型鉴定。由于大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）和志贺菌（Shigella Castellani）基因水平上同属于一个种，特征性质谱图高度相似，如果仅仅使用目前常用的微生物分型算法进行数据库检索，仍然会有错误鉴定的情况存在。我公司基于自主知识产权的Ebio ReaderTM 3700M飞行时间质谱系统平台，开发出了一套功能强大的人工智能算法，准确区分基因型相近的难辨菌的解决方案，如大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）和志贺菌（Shigella Castellani），准确度达到95%以上。我们利用Ebio ReaderTM 3700M 分别对福氏志贺菌(Sh.flexneri)、大肠埃希菌（E.coli）以及两种菌株的混合菌进行质谱鉴定以及蛋白质谱图比较分析。激光频率20 Hz，每个样本进行200次激光采集，采集相对分子质量 2000Da～15000Da的蛋白质图谱，通过数据分析软件对采集到的3个样品图谱进行比对分析。3种样品均在 2691、3737、4869、5381、6255、7274、9067、9743、10300 m /z 处出现相似的特征峰，其蛋白质谱图极为相似（图1），如果单纯通过数据库检索的话，极大可能会造成错误鉴定。 图1：大肠埃希菌、福氏志贺菌以及混合菌的质谱图之后，我们分别选取福氏志贺菌51例，大肠埃希菌56例，利用Ebio ReaderTM 3700M飞行时间质谱系统进行质谱分析，通过神经网络软件比对观察两组细菌蛋白峰的差异，并运用强大的人工智能算法将采集到的谱图数据建立分类模型，然后利用此模型进行了盲样鉴定。结果可以将大肠埃希菌和福氏志贺菌完美地区分开，分离度分别达到99.5%和95.4%，混合菌的分类结果显示大肠埃希菌和福氏志贺菌分别为76.2%和23.8%，也说明了此样品为混合样本，且有一定的定量效果（如下表）。 通过软件的聚类分析功能，更加直观地显示我们建立的这套方案可以将大肠埃希菌和福氏志贺菌以及二者的混合菌有效的分离（图2）。 图2：大肠埃希菌、福氏志贺菌以及混合菌的聚类分析在此MALDI-TOF微生物自动鉴定检测系统中，公司使用了自主研发、具有深度学习分析功能的神经网络人工智能软件。通过上述案例证明此套人工智能算法可实现对大肠埃希菌和志贺菌的准确区分鉴定，弥补了质谱技术在鉴定亲缘关系相近菌种能力的不足，达到了精准医疗的目的，对临床诊断及治疗方面具有重要意义。

据国外食品类网站报道，英国利兹海德食品研究所食品安全与危机管理主任托尼.海因斯表示，在大肠杆菌疫情期间，德国卫生当局失去了对食品行业的控制力，然而有效的追溯体系对于避免大肠杆菌疫情再次上演至关重要。　　据了解，大肠杆菌疫情共造成德国48人死亡，法国15人死亡，最终疫情源头被追溯至从埃及进口的葫芦巴种子，后来这些种子被运至德国下萨克森州用以培植芽菜，培植出的芽菜最终导致疫情的爆发。　　近日欧盟食品安全局执行理事在柏林会议上称，欧盟的食品安全体系非常脆弱。对此海因斯专家做出了回应认为，欧盟是全球最大的食品贸易市场，市场的完全开放使得食品安全体系面临很多威胁，一种食品会含有来自世界各地的多种配料，然而很多配料并未按照欧盟标准进行生产，对食品的配料成分进行追溯对于危机管理来讲至关重要，了解食品原料的来源、原料加工制成的食品类型、成品的销售地不仅是一项法律要求，对于危机管理的追溯来讲也很有帮助。

Gasdermin蛋白是人类细胞中在细胞膜上打孔，释放免疫因子并诱导细胞死亡的关键因子。Gasdermin打孔的机制是由caspase介导的，在炎性小体信号传导过程中触发，对防御病原体和癌症至关重要【1】。人类中Gasdermins家族由六个成员组成，GSDMA–GSDME以及pejvakin。但是各种各样的Gasdermin蛋白在进化上的起源以及生物学作用仍然不甚清楚。为此，美国哈佛大学医学院Philip J. Kranzusch研究组与以色列魏茨曼研究所Rotem Sorek研究组合作在Science发文题为Bacterial gasdermins reveal an ancient mechanism of cell death，揭开了细胞焦亡作为细菌以及动物中共有的一种古老的、调节细胞程序性死亡的方式。通过序列分析，作者们发现与哺乳动物Gasdermin蛋白相似不同50个细菌来源的蛋白，其中作者们测定了来自慢生根瘤菌嗜热菌（Bradyrhizobium tropiciagri）和Vitiosangium sp的bGSDMs的晶体结构，结果显示bGSDMs的总体结构都是共享的，与哺乳动物Gasdermin N末端结构具有显著的同源性（图1）。晶体结构分析同时也显示在哺乳动物Gasdermin蛋白中C末端结构，会维持该蛋白处于一种自我抑制的状态；虽然bGSDMs中没有与哺乳动物中Gasdermin蛋白C末端结构相似结构，但是仍然具有自我抑制结构特征（图1）。图1 对细菌来源的Gasdermin蛋白进化保守型以及结构分析随后，作者们想知道bGSDMs在细菌系统中是否有抗噬菌体的功能，作者们发现bGSDMs对大肠杆菌噬菌体具有显著的抵抗性。因此，bGSDMs是细菌“防御工事”中的关键组分。另外，作者们发现bGSDM的激活会诱导细菌细胞膜的破坏，而且在其激活过程中需要蛋白酶的参与，因为引入蛋白酶靶向位点的突变会废除bGSDM的细胞毒性（图2）。图2 蛋白酶参与bGSDM的激活进一步的，作者们对bGSDM的切割过程进行探究。作者们发现bGSDM的切割需要蛋白酶的催化，但是并不需要棕榈酰化修饰。另外，通过质谱分析作者们鉴定到了古字状菌属的Runella中bGSDM的具体切割位点以及处于自我抑制状态的结构生物学基础。通过构建绿色荧光蛋白的融合蛋白，作者们对bGSDM激活的动态过程进行的监测。作者们发现在激活过程中会由弥散分布的形式变成与膜结构存在联系的点状结构，通过透射电镜的检测可以观测到bGSDM切割后会导致细胞膜完整性的破坏，并导致细胞内容物的快速释放。图3 工作模型总的来说，该工作的建立了细菌与哺乳动物中Gasdermin蛋白打孔从而导致的细胞程序性死亡的具体模型（图3），证明了细菌中bGSDM系统可以发挥防御作用，并且该作用依赖于蛋白酶的参与，该工作将有助于深入了解细胞焦亡的具体作用机制以及在进化上的起源。原文链接：https://www.science.org/doi/10.1126/science.abj8432

绝味铁道学院店，店员表示，销售并未受影响绝味鸭脖被爆大肠菌群超标16倍　　一边啃鸭脖，一边看电视，是很多长沙吃货很喜欢的休闲方式。近日，央视财经频道《是真的吗》节目曝光了北京几家大型超市和鸭脖店所出售的熟食中大肠杆菌数量超标的消息，其中在长沙遍地开花的绝味鸭脖的熟食鸭脖和鸭肠大肠杆菌数量比标准高出16倍和30倍。　　“是在吃鸭脖还是在吃细菌?!”、细菌鸭’以后再也不敢吃了”、“难怪我一吃鸭脖就拉肚子”……绝味被爆出大肠菌群严重超标后，一时间让热衷吃鸭脖的长沙吃货们很受伤。　　事件：绝味鸭脖大肠菌群超标16倍，鸭肠超标30倍　　9月7日，央视财经《是真的吗》栏目报道了对卤制品的抽检全过程。湖南绝味食品有限公司的绝味鸭脖，以及知名品牌久久丫均在抽检行列。抽检结果显示，这两家连锁企业的食品大肠菌群严重超标：绝味鸭脖大肠菌群数量为2400mpn/100g，绝味鸭脖的鸭肠大肠菌群数量为4600mpn/100g。　　该报道中还提到，此次抽检结果如果参照熟肉制品卫生标准GB2726-2005大肠菌群150mpn/100g的标准，绝味鸭脖超标16倍，绝味鸭脖的鸭肠超标30倍。　　相关食品专家表示，大肠杆菌容易引起很多种疾病，最常见的就是拉肚子。另外，还能引起呕吐、中枢神经系统的头痛等等一系列问题。某些严重感染者有可能造成溶血性贫血，红细胞、血小板减少 肾脏受到波及时，还会发生急性肾功能衰竭甚至死亡。因此，对付此类病菌感染的最佳手段还是预防：不吃不熟的肉类食品如生鱼、生牛肉等，食用生鲜瓜果前要彻底清洗，遇有腹泻尽早去医院。　　调查：长沙门店销售未受影响　　记者前往长沙铁道学院附近的一家绝味鸭脖店探访。店员表示，央视报道对湖南的影响不大，“很多消费者都还不知道这件事，销量也没有受到影响。一天的销售额比较好的店铺近万元，差的也有好几千。”　　她还表示，这家店是加盟店，商品是由公司每天统一配送，工厂在暮云。“外地销售的商品应该不在长沙生产，因为口味不一样，每个地方都有工厂，长沙的工厂设在暮云。”并强调，长沙的鸭脖应该没问题的。　　如果没卖完怎么办呢?店员并没有正面回应。她只说，“不会进太多货啦，每天都有配送的，进太多没必要”。　　绝味长沙回应：散装鸭脖比对包装食品标准，这是个失实报道　　今天下午，记者致电绝味鸭脖长沙公司，其负责人潘小姐回应说：“央视是购买散装鸭脖等食品进行检测的，但比对的是真空包装食品的标准，可以说，这是一个失实的报道”。　　她表示，对于散装食品目前国家并没有明确的标准。目前卤制熟食中的大肠菌群指标是参考GB2726-2005熟肉制品卫生标准中对酱卤肉相关产品的规定，即小于等于150MPN每100克。但这个标准主要针对预包装食品，现制现售的食品由于没有包装作为食品与外界的阻隔，是难以达到的。　　同时，她表示，“各地的绝味鸭脖配方和做法差不多，只会针对各地区饮食习惯在口味上做一些调整，比如微辣或者不辣，但都在当地有厂生产”。　　吃货回应：吃绝味容易闹肚子，以后不敢吃了　　长沙食客对鸭脖的感情，可谓又爱又恨。网友“黑骏马”表示，以前很喜欢吃绝味鸭脖，尤其是黑鸭架，但有时候吃了会腹泻，“感觉很辣，吃一两个还没事，但是吃多了，就闹肚子了”。　　网友“菲菲”也表示，前几年吃绝味鸭脖挺多的，但自从前年有一次吃了绝味鸭脖得了肠胃炎，就再也不敢吃了。网友“半半歌”也表示，“难怪我一吃绝味鸭脖就拉肚子”。　　网友“小云”也说，以前听传言说绝味鸭脖不能吃，没想到细菌超标这么厉害，吃鸭脖变成吃细菌了，太可怕了，以后尽量少吃，绝对不能再跟孩子吃了。

综合韩媒报道，韩国京畿道安山市一家幼儿园近日发生大规模食物中毒事件，截至27日，出现腹痛、呕吐、腹泻等食物中毒症状的孩子、家人和老师共111人，部分学生还出现了溶血性尿毒综合征症状。 溶血性尿毒症综合征，俗称“汉堡病”，因1982年美国儿童食用未熟的汉堡集体食物中毒而得名。致病原因主要为食用被污染或者没熟透的食物，免疫力较低的孩子和老人容易感染。若病情恶化至损伤肾脏，只能靠透析维持生命，1950年代，病死率一度高达40%～50%，近年来由于改进了对急性肾衰竭的治疗，病死率已下降至5~15%左右。 肠出血性大肠杆菌(EHEC)是可引起较严重的健康危害的致病菌，肠出血性肠杆菌感染是一种人畜共患病。大肠杆菌O157:H7是EHEC中最常见影响最广泛的致病性大肠菌，它除引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌STEC是肠出血性大肠杆菌的一类，能产生志贺毒素的非O157：H7大肠杆菌，包括了在日本出现的E.coli O111以及2011年在德国及欧洲其他国家出现的E.coli O104。这类大肠杆菌感染后，可引起自限性腹泻、出血性结肠炎和溶血性尿毒综合症（HUS）。一般寄生在牛、羊等家畜和其他反刍动物体内，人类主要是通过未经烹调烹调不彻底的肉类和奶制品等被感染。 食安科技针对于肠出血性大肠杆菌检测国内早期已推出大肠杆菌O157检测板、大肠杆菌O157测试片和大肠杆菌STEC测试片，适合于餐饮配餐企业、食品生产企业、校园食品安全、疾控中心、动物饲料质量安全等单位的使用。 大肠杆菌O157检测板 大肠杆菌O157测试片 大肠杆菌STEC测试片

各相关单位：根据《宁夏质量技术协会团体标准管理办法》的相关规定，宁夏质量技术协会经专家研究审核，决定对《食品接触用PET瓶盖中大肠菌群检验-滤膜法》《食品接触用PET瓶盖中菌落总数和霉菌检验-滤膜法》《食品接触用PET瓶盖中金黄色葡萄球菌检验》《一次性卫生用品中大肠埃希氏菌O157:H7快速检测方法-实时荧光PCR法》《一次性卫生用品中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌检验-多重实时荧光PCR法》《产可得然胶土壤杆菌菌株诱变筛选技术规程》《可得然胶含量快速检测方法-微孔板法》《产可得然胶土壤杆菌菌株冻干保存技术规程》团体标准批准立项，现予以公示。请参与起草单位严格按照《宁夏质量技术协会团体标准管理办法》团体标准制定工作要求，严把质量关，加强组织协调，增强本标准的适用性和有效性，确保标准高质量，按期完成标准编制工作。标准制定过程中如有问题，请联系宁夏质量技术协会秘书处。联系人：杨老师电 话：0951-8762976地 址：宁夏银川市兴庆区玉皇阁南街292号

信息时报讯 大肠菌群超标现象在食品中屡见不鲜，在广州市质监局发布的食品质量抽查第十批公告中，又有3批次产品因此登上了不合格产品榜单。记者昨日了解到，本次抽查涉及到水果制品、蔬菜制品、薯类食品和冷冻饮品、湿河粉、湿米粉等五类食品，其中有3批次产品被判定为不合格，不合格项目均为大肠菌群超标。　　在湿河粉、湿米粉产品方面，本次抽检36批次样品，经检验合格34批次，有2批次不合格，合格率为94.4%。不合格项目为大肠菌群，分别为广州鑫明食品有限公司生产的一批次湿米粉、广州市番禺成峰粉厂生产的一批次湿米粉(河粉)。据悉，大肠菌群作为食品污染的常用指示菌之一,食品出现大肠菌群超标最常见的原因有两个：一是生产环境卫生状况不佳 二是操作人员不注意个人卫生。　　另外在冷冻饮品产品方面，共计抽查了10家企业生产的14批次产品，经检验合格13批次，有1批次不合格，合格率为92.9%。不合格项目同样也为大肠菌群，为广州佳纯食品有限责任公司生产的一批次“佳纯”绿豆冰雪泥。　　专家提醒，湿河粉、湿米粉是一种保质期较短的产品，建议最好购买有包装的产品，且不要一味追求颜色过分白，因为这样的产品可能会添加含二氧化硫的漂白剂。而对于冷冻饮品，发现有变型或已解冻现象建议最好不要购买。　　大肠菌群超标企业和产品　　广州鑫明食品有限公司 湿米粉　　广州市番禺成峰粉厂 湿米粉　　广州佳纯食品有限责任公司 “佳纯”绿豆冰雪泥

天津市工商行政管理局近日在流通环节对47家生产企业生产的30个批次饼干进行了食品质量抽样检验。经检测，9个批次饼干质量不合格，主要问题是产品菌落总数或大肠菌群超标。　　据悉，此次依据国家食品安全标准，重点检验了甜蜜素、糖精钠、菌落总数、大肠菌群等4项指标。检测结果显示，7个批次产品菌落总数超标，涉及“上好佳”等市场知名品牌。业内人士称，菌落总数或大肠菌群超标的食品可能致食用者出现腹泻等身体不适。　　据介绍，此次检测出的菌落总数超标的食品有：　　1.标称驻马店市驿城区三威食品厂“立威”红豆味夹心饼干 　　2.标称河北省沧县乐宝食品有限公司“沧宝”乳酪夹心饼干 　　3.标称郑州上好佳食品工业有限公司“上好佳”谷维精华绿茶饼干 　　4.标称东莞市石龙爱士宝饼业食品厂“爱士宝”果子曲奇饼干(椰子奶油味) 　　5.标称上海小帅才食品漯河有限公司“小帅才”香葱味酥性饼干 　　6.标称河北博通饼业有限公司“博通”博通薄脆饼饼干(麦香口味) 　　7.标称东莞市溢东食品有限公司“溢东”溢东蛋烧薄饼干(薯仔味)。　　此外，存在其他问题的食品有：　　1.标称广州真巧食品有限公司“真巧”巧克力酱心饼干(代可可脂牛奶味夹心)，大肠菌群超标 　　2.标称临沂港仁食品有限公司港仁饼干，甜蜜素超标。　　据了解，对此次抽样检验发现的质量不合格食品，天津市工商局已责令受检经销单位全部下架、停止销售，并将依照食品安全法律、法规实施处罚。

各有关单位：按照《青岛市标准化协会团体标准管理办法》的规定，青岛市标准化协会于2023年12月19日至25日进行了《水质 耐热大肠菌群的测定 高效微生物生长分析仪法》团体标准专家评审，并经研究讨论达成一致，将原标准名称《水体中耐热大肠菌群的测定 高效微生物生长分析仪法》更名为《水质 耐热大肠菌群的测定 高效微生物生长分析仪法》，已通过专家审核，现予以发布。标准实施后，各有关单位可自愿采用。青岛市标准化协会2023年12月29日附件：青标协字〔2023〕68号.pdf

美国政府7日宣布一系列食品安全新规。这是贝拉克奥巴马政府为全面改革食品安全监管体系采取的第一个行动。一段时间以来，美国发生多起食品安全事故，现有食品安全制度饱受诟病。　　三大重点　　新规由奥巴马总统今年3月下令成立的一个食品安全工作协调小组提出。　　美国《华盛顿邮报》8日报道，新规重点是做好预防、加大执法力度以及改善监管部门对食品安全事件的反应。　　美国副总统约瑟夫拜登7日在新闻发布会上就食品安全新规说：“几乎没有什么比确保食品安全更应该成为一项基本而重要的政府责任。”　　“如今，让美国家庭烦恼的事已经够多。他们不应该再为(食品安全)担忧，”拜登说。　　勤检多查　　美国近期数起食品安全事故涉及沙门氏菌感染。《华盛顿邮报》报道，每年有大约14.2万美国人因食用受沙门氏菌感染鸡蛋患病，其中大约30人死亡。这样的鸡蛋一般来自受沙门氏菌感染的母鸡。　　新规要求鸡蛋生产商定期检测鸡蛋受沙门氏菌感染情况，要求他们从采取同样严格措施的供应商处购买蛋鸡。此外，鸡蛋除了要在批发和零售环节冷藏，还要在农场和运输过程中冷藏。　　美国食品和药物管理局(FDA)局长玛格丽特汉伯格说，新规将使每12个鸡蛋的成本增加1美分，生产商将因此额外支出8100万美元。但是，这样做可以将沙门氏菌感染患病人数减少约7.9万，使美国每年省下14亿美元医疗开支。　　食品和药物管理局还将联手农业部下属的食品安全及检验局(FSIS)，采取措施减少大肠杆菌感染。　　根据要求，食品安全及检验局将在肉类食品加工厂增加抽样检测次数，特别是增加对牛肉馅的检测。食品和药物管理局则定于7月底前发布一份指南，说明如何防止番茄、瓜和绿叶蔬菜在生产和销售过程受大肠杆菌污染。　　专人协调　　美国食品安全监管工作由15个联邦机构承担。《华盛顿邮报》说，这样分工过于复杂、甚至“荒谬”。比如，食品和药物管理局负责监管农产品，农业部负责肉类食品。根据这一分工，奶酪比萨饼归前者管，而意大利辣香肠比萨饼要归农业部管。　　新规提出，这些食品安全监管机构派专人负责协调。食品和药物管理局将增设专门负责食品安全工作的副局长。食品安全及检验局将聘用一名首席医务官负责协调事宜。　　美国消费者联盟负责食品安全干事让哈洛兰对此举措表示满意。他说，消费者第一次在食品安全事务上有个“可找的人”。　　消费者欢迎　　美国政府早就提出要改革食品卫生监管体系。前总统比尔克林顿1999年就曾提出过要加强食品卫生监管，但始终不见具体行动。　　此次推出的新规受到消费者肯定。比尔马尔勒是长期代理有关食品安全诉讼的律师。他在博客中写道，在美国现行食品卫生监管体系下，总是要等有人因食品卫生问题生病或死亡才会引起关注。新规“将重点放在防范，而不是等病菌蔓延后再去数有多少人因病菌感染而丧生。”　　美国食品杂货商协会的斯科特法贝尔也称赞新规重在防范的特色，认为新规“给食品安全制度打下新的基础。”

Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔)旗下全球知名的微生物培养与诊断产品Oxoid最新推出了优化的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基，不仅能够对食品和水样中的大肠杆菌与大肠群菌快速分离、区分和计数，而且能够快速对大肠杆菌进行确认鉴定。 大肠杆菌和大肠菌群直接或间接来自人与温血动物的肠道，它们在食品中的出现预示某些肠道病原菌的存在，因此在国内外的检测标准中大肠杆菌和大肠菌群的数量都是评价食品卫生质量的重要指标之一。Oxoid的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基中的显色剂用来检测大肠杆菌的ß -葡萄糖苷酸酶活性和大肠菌群的ß -半乳糖苷酶活性(包括大肠杆菌)，因此平板上紫色的大肠杆菌菌落与粉色的大肠菌群菌落非常清晰地区分开来，可以快速、方便地对食品和水样中的这两种菌群进行分离、区分和计数。　　现在，Oxoid对这款培养基的蛋白胨成分进行了优化，初步鉴定的紫色大肠杆菌菌落可以在平板上直接通过吲哚试验确认。向平板加入Kovac’s溶液，紫色的大肠杆菌菌落立刻呈现明显的樱桃红色，即确认为阳性的大肠杆菌，而无需额外的确认实验。　　对于食品微生物常规检测项目，Oxiod还有其它的显色培养基：BrillianceTM沙门氏菌显色培养基，BrillianceTM李斯特菌显色培养基、BrillianceTM阪崎肠杆菌显色培养基、BrillianceTM蜡样芽孢杆菌显色培养基等。同时，Oxoid还在不断的研究开发新的产品，努力为食品行业微生物检测提供更简便、更快速的解决方案。　　关于Oxoid　　Oxoid 是 Thermo Fisher Scientific 旗下的知名微生物产品品牌,其产品涵盖整个微生物科学领域，为临床检验、工业生产领域和基础学术研究的微生物诊断提供优质的解决方案。Oxoid最初起源于欧洲，其历史可以追溯到十九世纪微生物科学开始的年代。Oxoid总部位于英国Basingstoke，并在全球设有多家生产厂，如加拿大、德国、澳大利亚等等。2006年Oxoid在中国北京设立了一条新的微生物制成培养基生产线，它的运营使中国的微生物工作者在微生物培养基产品上可以与世界标准接轨，并大幅度减少了微生物实验室操作的工作量，有效地提高了微生物实验室检验的标准化程度。2006年Oxoid正式成为全球科学服务领域的领导者Thermo Fisher Scientific旗下的品牌之一，与另一微生物品牌Remel组成微生物产品部，资源整合优化后，为全球的微生物工作者提供更全面的产品与更专业的服务!欲了解更多信息，请浏览网站：www.oxoid.com。

各相关单位：按照《青岛市标准化协会团体标准管理办法》的规定，青岛市标准化协会团体标准《水体中耐热大肠菌群的测定 高效微生物生长分析仪法》已通过立项论证，同意立项。请各有关单位尽快组织起草并完成标准的制定工作。青岛市标准化协会2023年9月28日附件：青标协字〔2023〕55号.pdf

大肠菌群平板计数法的常见问题有哪些？1、VRBA培养相关问题（1）所用器皿是否需要灭菌？答：不需要。配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留。煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般常用的卫生纸（软纸）覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。（2）如何保持“煮沸2min”？答：可以用电磁炉或电热板进行加热煮沸，在该培养基即将煮沸时调低温度。实际操作时，不需要严格按照此要求进行，加热煮沸数秒即可。原因：本培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。（3）若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？答：不可以。4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌（即培养基未完全熔融就会发生喷涌现象）。（4）倾注完成后是否需要“覆盖一层”？如何覆盖？答：一般情况下不需要覆盖。在实际操作过程中，若检验员初次接触该食品（或食品品类），则有必要在倾注培养基后再覆盖一层（原因是不清楚该样品是否会发生蔓延）。而如此往复测试几次后，若该样品或食品品类均不存在蔓延现象，则以后的实验中都不需要进行覆盖。若重复多次测试后都有蔓延现象，则以后的检验中zuihao都进行覆盖，zuihao是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（“一层”是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。 2、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？答：建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验简单易操作，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心。3、两个梯度都长了菌，如何选取？答：选取15-150CFU之间的平板（指的是VRBA平板上所有菌落数在此范围），挑取可疑菌落进行证实试验。详细举例说明：若有两个连续梯度的4个平板上菌落数均在15-150之间，则4个平板上的菌落都要挑取进行证实试验，实际操作时，可灵活操作，如：1:10的两个平板上的菌落数分别为120、123，1:100的两个平板的菌落数分别为16、18，严格来讲必须至少在每个平板上分别挑取5个可疑菌落、5个典型菌落进行证实试验，如此需要40根GBLB肉汤管。建议使用镍合金接种环（即传统的接种环，而不是一次性塑料接种环），因为VRBA上生长的菌落（无论典型或可疑）大部分长在底层、且菌落一般较大，被培养基覆盖，传统的接种环较细，用以刮去上层培养基较方便，挑取菌落也较方便。 4、如何进行证实试验？菌落选取数量？答：同上所述，建议新手们VRBA上的所有不同形态的菌落都进行证实试验。每种不同形态都挑取5-10个进行证实试验（若BGLB管足够，建议多挑取几个进行试验）。注意：A.每种可疑菌落挑取5个，每个菌落放入1管GBLB管中；B.“产气者，记为大肠菌群阳性管”，就要求在实验前须认真筛选BGLB管，凡产气的GBLB管应弃去不用。 5、结果如何计算？答：首先，在VRBA培养24h后进行计数，分别计数可疑大肠菌群和典型大肠菌群（何为可疑、何为典型？同“2”，检验员多进行几次实验后自然很清楚典型的大肠菌群是何种形态）的数量。假如在1:10的平板上可疑大肠菌群有10个，典型大肠菌群有6个；其次，进行证实试验，挑取上述可疑和典型大肠菌群各5个（或者全部挑取），假如10个可疑大肠菌群中有3个证实为阳性，6个典型大肠菌群中有5个证实为阳性，则计算方法如下：最终大肠菌群数=经证实的大肠菌群数=可疑大肠菌群经证实的数量+典型大肠菌群经证实的数量=10×（6/10）×10+6×（5/6）×10=110。 6、若平板上很多菌落，最终证实全部为阴性，结果如何计算？答：根据第3条,选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验，若证实全部为阴性，则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落（建议可疑和典型菌落分别挑取10个）进行证实试验，若第二次证实试验均呈阴性，以＜1乘以zuidi稀释度进行计算，如：1:10的平板菌落数分别为120、123，1:100的平板上菌落数分别为16、18，首先挑取1:100的两个平板上的菌落进行证实试验，若全部为阴性，再挑取1:10的两个平板上的菌落进行证实试验，若1:10的平板上的菌落数证实为阴性，则最终计算过程为＜1x10，最终结果为＜10；若1:10的的平板上的菌落有阳性管，则按照第5条进行计算。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

这一业内领先的产品提供高通量分析能力，可为食品加工企业快速提供最常见大肠杆菌菌株的检测结果致力于以创新技术打造更健康世界的全球技术领导者，珀金埃尔默日前推出适用于生牛肉糜和生牛碎肉的Solus One大肠杆菌O157病原体检测试剂盒。该系统专为每天都会收到大量食品样品并且需要高灵敏度、高性价比试剂盒的客户而设计，可兼容Dynex DS2自动读取器，实现行业领先的检测通量。大肠杆菌（简称为“E. coli”）是人类和动物正常肠道菌群中常见的一种细菌，大多数均无害，但某些菌株（包括最常见的大肠杆菌O157）可产生导致孕妇、免疫力低下人员和老年人等高危人群肠道疾病的毒素。拥有稳健可靠且精确的大肠杆菌检测能力，食品供应商即可在检出病原体后，第一时间采取应对措施。珀金埃尔默的Solus One大肠杆菌O157系统采用单次10小时富集、一步式样品制备和自动化工作流程，每次运行可完成高达192份检测。与传统方法相比，其操作便捷的仪器、试剂和方法对培训要求较低，这使得实验室技术人员得以在长达两小时的检测过程中解放双手，从而腾出时间从事其它实验室工作（例如，执行另一项自动化方案），尽可能地提高样品处理量。珀金埃尔默食品事业部副总裁兼总经理Greg Sears表示：“大肠杆菌O157检测非常重要，需要专业科学知识才能为食品加工企业及实验室提供值得信赖的解决方案。凭借我们全新的高通量解决方案，我们能够帮助简化食品加工企业的检测工作流程并提高生产效率，同时保护全球食物链内消费者的安全。”珀金埃尔默的肉类检测与分析创新成果是公司针对食品（包括谷物、乳品、肉类、农产品、食用油和海鲜）开发的各种安全与质量解决方案的一部分。欲了解更多详情，敬请访问：https://www.perkinelmer.com/category/pathogens-in-food。关于珀金埃尔默珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞察。在全球，我们拥有约13000名专业技术人员，服务于190个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2019年，珀金埃尔默年营收达到约29亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn

点击此处可了解更多详情→【水中大肠杆菌检测仪】 水中大肠杆菌检测仪是一种用于封装容器的设备，它可以实现自动化的封口过程，并具有程控功能。在水中大肠杆菌检测中，程控定量 封口机具有以下几方面的作用： 1.提高封口效率：水中大肠杆菌检测仪可以实现自动化的封口过程，大大提高了封口效率。相比于手动封口，它能够更快速地完成封口任务，并且能够保持封口的一致性和稳定性，减少人为因素对结果的影响。 2.保障封口质量：水中大肠杆菌检测仪通过程控功能，可以准确控制封口的时间、温度和压力等参数，确保封口质量的稳定性和一致性。这对于水中大肠杆菌检测来说非常重要，因为一个良好的封口可以有效地防止样品的污染和外部细菌的进入，保证检测结果的准确性和可靠性。 3.减少操作风险：水中大肠杆菌检测仪的自动化操作减少了人为操作的风险。在水中大肠杆菌检测中，人为操作可能会引入外部细菌污染，影响检测结果的准确性。而程控定量封口机的使用可以避免这种风险，确保样品的纯净性和可靠性。 4.提高工作效率：程控定量封口机的自动化操作和高效率封口能够提高工作效率。这对于大批量的水中大肠杆菌检测来说非常重要，可以节省人力和时间成本，提高检测的效率和生产力。 综上所述，水中大肠杆菌检测仪在水中大肠杆菌检测中具有重要的作用。它能够提高封口效率、保障封口质量、减少操作风险和提高工作效率，为水中大肠杆菌检测提供了可靠的封口保障。

p　　2月1日，国家生态环境部办公厅印发了《关于做好新型冠状病毒感染的肺炎疫情医疗污水和城镇污水监管工作的通知》，指出要进一步加强医疗污水和城镇污水监管工作，strong防止新型冠状病毒通过污水传播扩散。/strong/pp　　《通知》明确要求，地方生态环境部门要督促医院和城镇污水处理厂切实加强消毒工作，确保strong出水粪大肠菌群数指标/strong达到《医疗机构水污染物排放标准》(GB 18466-2005)和《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB 18918-2002)的要求。/pp　　目前粪大肠菌群的检测方法包括多管发酵法、滤膜法、快速检测法(纸片法)、酶底物法、分子生物学，其中环保标准的方法包括HJ 347.1-2018水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法、HJ 347.2-2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法、HJ 1001-2018 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法。而所有这些方法均为实验室方法。/pp　　山东省生态环境厅近日发布了《a href="https://www.instrument.com.cn/download/shtml/948243.shtml" target="_blank"DB37/T3787-2019水质 粪大肠菌群测定 光度法/a》，规定了测定strong水中粪大肠菌群的分光光度法和荧光法/strong，strong适用于地表水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的应急现场快速测定/strong。/pp　　标准全文如下：/pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 819px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/01a0fee4-29b5-4242-bc88-376975fe85f4.jpg" title="11.jpg" alt="11.jpg" width="600" vspace="0" height="819" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 292px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/8dff5740-e56f-45d0-89ff-41e56d06a0e5.jpg" title="22.jpg" alt="22.jpg" width="600" vspace="0" height="292" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 269px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/b155f093-9136-4e93-b7e4-26ccb1ea1f6b.jpg" title="33.jpg" alt="33.jpg" width="600" vspace="0" height="269" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 779px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/9e6c8f16-617e-43f6-89c2-056702f2840f.jpg" title="44.jpg" alt="44.jpg" width="600" vspace="0" height="779" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 754px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/98ae507b-c43b-4ae3-8d6f-24478b9fde2a.jpg" title="55.jpg" alt="55.jpg" width="600" vspace="0" height="754" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 758px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/08e71d55-ec40-4576-85b5-1c9592b08164.jpg" title="66.jpg" alt="66.jpg" width="600" vspace="0" height="758" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 747px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/64abab04-f333-4dc6-a272-a8e5a300f461.jpg" title="77.jpg" alt="77.jpg" width="600" vspace="0" height="747" border="0"//pp style="text-align: center"img style="width: 600px height: 754px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/180667ac-77aa-4a69-af32-204eb067aa5d.jpg" title="88.jpg" alt="88.jpg" width="600" vspace="0" height="754" border="0"//ppimg style="width: 600px height: 800px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/9fb79fd0-fa42-4d32-bd70-877d1c0ac64e.jpg" title="99.jpg" alt="99.jpg" width="600" vspace="0" height="800" border="0"/br//pp附件：a href="https://www.instrument.com.cn/download/shtml/948243.shtml" target="_blank"DB37/T3787-2019水质 粪大肠菌群测定 光度法/a/p

手机中的新应用正逐渐改变着用户的消费世界，” v-Fluence Interactive 网络市场研究与支撑中心总裁Jay Byrne在最近的评论文章中列数了几款时新的手机应用：“比如，一款名为CellScope的手机技术使得手机的摄像头可被用作发光的显微镜——这意味着拥有这种摄像技术的手机，比如iPhone，可被用来收集和传输照片，用于疾病的诊断。”　　“通过升级软件或者摄像头来实现诸如此类的应用已经为期不远了，在不远的将来，在任何iPhone或者其它的手持设备上都能实现这些功能，包括大肠杆菌或者食物中其它细菌的检测。假设你发现你的细纹牛排味道有些不对，只需用你的手机咔一下，就可以看看这个来自麦当劳的巨无霸有没有受到污染。还有H1N1、打喷嚏等，也只需咔一声，诊断结论和一些相关的信息就可以实时的被呈现出来了。”　　这种类型的手机新应用是数不胜数的，它们可以改变消费者的抉择过程和行为倾向。Byrne这样说道：“我们在食品质量和疾病诊上做好了大量进入和控制的准备了吗?问题不在于我们是否做好准备，该来的都要来。并且，这也只是手机众多应用中最细微最新鲜的’一颗螺丝钉’而也，手机的应用到底有多惊人，超乎任何人的想象!”

大肠杆菌O157:H7是食源性致病菌的主要类型，可引起急性肠炎、肠出血性结肠炎、溶血性尿毒症综合征。近日，中国工程院院士、广东省科学院微生物研究所研究员吴清平与该所客座研究员丁郁团队合作开发出高灵敏检测大肠杆菌O157:H7的新方法。相关研究发表于《生物传感器和生物电子学》（Biosensors and Bioelectronics）。 据悉，传统的基于胶体金纳米颗粒的比色免疫层析试纸条存在灵敏度不足的固有缺陷，阻碍了低丰度目标物的检测应用。具有信号放大潜力的金属生长策略能够极大地提高试纸条的检测灵敏度，其原理和方法是通过将显色试纸条浸泡于增强液中，金属离子在还原剂作用下以胶体金为核心，聚集于胶体金表面还原成金属单质，从而沉积于胶体金探针表面形成纳米壳层，显著增强胶体金探针信号强度。 金、银和铜生长是扩大金纳米颗粒尺寸最常用的策略。其中铜作为一种廉价的金属，因其在催化领域的优势受到广泛关注。但是金和铜的晶格常数相差很大，引起晶格失配。具有大晶格失配的金属纳米壳层的生长过程和形状控制合成不可控。此外，基于试纸条浸泡的金属生长策略中，铜可以沉积到现有的金纳米颗粒或基底表面，特别是硝酸纤维素膜特有的处理工艺使额外添加的铜离子在孵育时易吸附，导致假阳性结果或者出现明显背景。这种模式容易受到环境和操作者的影响，需要精确把握操作流程，大大限制了该方法在实践中的推广应用。 该研究引入聚丙烯胺盐酸盐介导的铜生长可控模型，消除了铜离子在硝酸纤维素膜上的非特异性吸附，从而提供了最大化且有效的信噪比，实现了对强致病性大肠杆菌O157：H7的高灵敏检测。此外，新开发的检测方法具有良好的重现性（变异系数小于13%）、显着的稳定性和实用性。 据了解，聚丙烯胺盐酸盐介导的信号增强系统为实现稳定金属生长方法铺平了道路，并广泛适用于金纳米颗粒免疫层析检测平台。

据《北京晚报》报道，国家质检总局昨天公布入境不合格化妆品、食品信息，共有422种产品上黑榜。法国依云矿泉水亚硝酸盐超标，农心牌辛辣方便面检出大肠菌群超标。　　上黑榜的产品中，北京盛世唯嘉商贸有限公司从法国进口的依云、富维克天然矿泉水，亚硝酸盐超标。北京同仁堂健康药业股份有限公司从马来西亚有限公司进口的一批燕窝，检出亚硝酸盐。天津智傲物流有限公司在进口的农心牌辛辣方便面中，检出大肠菌群超标。　　漯河双汇进出口贸易有限责任公司从丹麦进口的27吨多冻半猪头，检出沙门氏菌。上海昌琦绿忠国际贸易有限公司从法国进口的家乐福牌尖三角必奶酪和法国之光牌列福士奶酪，大肠菌群超标。生产金龙鱼食用油的益海嘉里(青岛)贸易有限公司从埃塞俄比亚进口的380吨芝麻，发生霉变。中轻日用百货进出口公司从印度尼西亚进口的48吨可可粉，菌落总数和霉菌超标。　　广州安婕妤生物科技有限公司从意大利艾婕芙专业美容化妆品集团购买的RVB活力修颜面膜，菌落总数超标。汉的盟贸易(上海)有限公司从德国进口的碧丽娜丽致美白平衡保湿液，细菌总数超标。　　美国奇士美飞丝公司从美国进口的天然蔓越莓无氟儿童牙膏，PH值超标。杭州宾博贸易有限公司从意大利进口的婴儿健康洗手液，甲醛超标。　　这些食品、化妆品都是入境口岸检验检疫机构实施检验检疫时发现的，都已依法做退货、销毁或改作他用处理，未在国内市场销售。

昨日，记者从广州市工商局获悉，近期广州市工商局委托检验机构对市场上销售的方便食品(不含方便面)进行了抽检，共抽检样品106批次，实物质量合格88批次，总体合格率为83.02%，其中芝麻糊4成不合格。其中，皇室核桃营养麦片与周氏牛奶加钙即溶燕麦片齐登不合格“黑榜”。　　据悉，本次共抽检样品106批次，其中，麦片96批次，芝麻糊10批次，经检验，实物质量合格88批次，合格率为83.02%，检验项目包括标签、水分、总糖、蛋白质、脂肪、酸价、安赛蜜等。　　值得注意的是，在抽检的10批次芝麻糊中有4批次产品不合格，不合格率在本类食品中占了4成，不合格项目主要表现为菌落总数、大肠菌群、真菌、酸价等超标。其中汕头市金妹健康食品有限公司生产的“人人欢喜”牌黑芝麻糊(高钙低脂)(720g/包，2012-3-15)以及桂林阜康食品工业有限公司生产的核桃黑芝麻糊(240克/包，2012.01.08)等2批次产品表现为酸价超标。酸价是衡量含油脂食品氧化酸败程度的重要卫生指标，酸价不合格产品具有一定的毒性，会影响人体健康。　　抽检结果还显示，有14批次不合格产品表现为菌落总数、真菌和大肠菌群等微生物指标超标。其中由汕头市百宜食品有限公司生产的皇室核桃营养麦片(600g/包，2011-10-23)以及由桂林周氏顺发食品有限公司生产的“周氏”牌牛奶加钙即溶燕麦片(700g/包，2011-10-27)被检测出大肠菌群超标。　　据相关专家介绍，菌落总数和真菌可用以判定食品被细菌污染的程度，大肠菌群可用以判定食品是否被肠道致病菌所污染，三者均是衡量食品卫生状况的重要微生物指标。

近十年来，肠道微生物组已成为生命科学研究领域的热点，但目前大部分研究都集中在使用二代测序技术进行物种和功能的解析，宏基因组的拼接质量不高并且很难实现菌株水平的功能差异分析。有鉴于此，中科院微生物研究所王军课题组和动物研究所宋默识课题组合作，建立了ONT三代测序和Illumina二代测序数据混合组装和后续分析流程。在mock community上的验证表明，三代和二代测序数据的混合组装从完整度、准确程度以及编码密度方面均比单纯二代或者三代测序组装更有优势。图1本研究的技术路线（a）,利用三代测序进行SV的深度解析，以及横断面/时间序列中SV的组成、动态分析，最终进行SV对代谢功能的影响判定。(b)混合组装能够有效提高N50，并组装出大量的基因组（c），其中发现更多的insertion、deletion和inversion。图2肠道微生物中与SVs相关的功能研究结果。(a,b,c) SV影响基因富集结果 (d-i) SV影响单菌种内不同菌株与代谢产物以及血糖的关联。图3肠道菌群汇中与病毒和CRISPR相关的研究结果该研究基于三代ONT序列，提高了宏基因组装的质量、SV的发现能力，发现了大量包括插入突变和基因倒位在内的结构变异对于菌株水平上基因功能的影响，以及噬菌体、CRISPR-spacer等系统的深度挖掘。这项研究是课题组利用三代Nanopore测序技术解析肠道病毒组（Cao et al., Medicine in Microecology, 2020, 4:100012 Cao et al. Gut Microbes, 2021, 13），近期发表的真菌组分析方法（Lu et al, Molecular Ecology, doi:10.1111/mec.16534）和靶向RNA检测病原微生物（Zhao et al., Advanced Science, 2021, 8, 2102593）之后，在利用三代Nanopore测序技术探索肠道微生物研究领域的新进展。这一发现，对未来更精细的精准医学领域的发展提供了理论启发。中国科学院微生物研究所王军研究员、中科院动物研究所宋默识研究员为本文的共同通讯作者。中国微生物研究所助理研究员陈亮、赵娜、博士生曹佳宝、硕士研究生刘小林、助理研究员徐嘉悦为该论文的共同第一作者。该研究得到了国家重点研发计划项目、国家自然科学基金项目、中国科学院战略性先导科技专项、北京市自然科学基金项目等多项资金的资助。文章链接：https://www.nature.com/articles/s41467-022-30857-9