当前位置: 仪器信息网 > 行业主题 > >

硫酸粘杆菌素标准品

仪器信息网硫酸粘杆菌素标准品专题为您提供2024年最新硫酸粘杆菌素标准品价格报价、厂家品牌的相关信息, 包括硫酸粘杆菌素标准品参数、型号等,不管是国产,还是进口品牌的硫酸粘杆菌素标准品您都可以在这里找到。 除此之外,仪器信息网还免费为您整合硫酸粘杆菌素标准品相关的耗材配件、试剂标物,还有硫酸粘杆菌素标准品相关的最新资讯、资料,以及硫酸粘杆菌素标准品相关的解决方案。

硫酸粘杆菌素标准品相关的论坛

  • 【原创大赛】硫酸粘杆菌素方法开发纪要

    【原创大赛】硫酸粘杆菌素方法开发纪要

    话说为了应对市场需求,需要进行硫酸粘杆菌素的检测方法的开发,查找标准方法,大致浏览下用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]进行检测,基本资源有满足,开始工作。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1007.gif[/img]1.化合物性质及结构先介绍下硫酸粘杆菌素,分子结构图如下:[img=,200,197]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030927_01_3246897_3.gif[/img]分子式:2(C[sub]52[/sub]H[sub]98[/sub]N[sub]16[/sub]O[sub]13[/sub]).5(H[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub]),分子量:2801.27,纯度80.1%,PH3-7.5范围内稳定,为硫酸粘杆菌素A和硫酸粘杆菌素B的混合物。2. 配制标样。用十万分之一的天平,称取硫酸粘杆菌素10.20mg至10mL容量瓶中,用换算成硫酸粘杆菌素浓度C=2=1347.98mg/L,用体积比V[sub]1[/sub]+V[sub]2[/sub]=1+4的0.1甲酸乙腈溶液溶解,并配置成10mg/L工作液。3. 仪器方法建立。3.1质谱条件3.1.1寻找母离子硫酸粘杆菌素是由氨基酸缩合而成的碱性多肽类抗生素,在一级质谱中易与多个H +结合成多电荷正离子,初步选定流动相A1+B2=3+7,接双通,流速0.2mL/min,进浓度为5.0mg/L的标准品1μL,初始Fragment为100,用MS2 SCAN正模式扫描,得到ESI正离子模式全扫描质谱图如图所示,硫酸粘杆菌素的三电荷离子[sup]3 +[/sup]响应最高,,进而确定它们的母离子(m /z) 分别为390. 5、385. 8。[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030929_01_3246897_3.png[/img]3.1.2优化Fragment电压将扫描模式该为MS2 SIM模式,将得到的Precursor Ion输入,驻留时间Dwell设为20,Fragment从1v-200V范围设置,在其他仪器条件不变的情况下进样,得到不同Fragment下的响应强度图,初步选定其Fragment在100V左右,进一步在100左右细化Fragment,最终选定硫酸粘杆菌素A和B的Fragment为110V。[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030930_02_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030931_01_3246897_3.png[/img]3.1.3 ProductIon和CE优化将扫描模式选为Product Ion模式,将390.5和385.8作为Precursor Ion,MS2 From 100,MS2 To 400(包含母离子),Fragment选定优化好的110V,碰撞能按照CE=左右寻找,得到子离子,选定包含国标的离子,并得到大致CE范围,将扫描模式选为MRM模式,在得到的初步CE左右,进一步优化得到最佳的CE值。[align=center][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030932_01_3246897_3.png[/img][/align]综上,得到硫酸粘杆菌素的质谱条件,如下表: [b]表 1 目标化合物的质谱分析条件[/b][table=745][tr][td=1,2]No.[/td][td=1,2]中文名称[/td][td=1,2]英文名称[/td][td=1,2]CAS[/td][td]前体[/td][td]产物[/td][td]去簇电压[/td][td=1,2]碰撞能[/td][td]加速电压[/td][/tr][tr][td]离子[/td][td]离子[/td][td](V)[/td][td](V)[/td][/tr][tr][td=1,3]1[/td][td=1,3]硫酸粘杆菌素A[/td][td=1,3]Ceftriaxone Sodium[/td][td=1,3]1264-72-8[/td][td=1,3]390.5[/td][td] 384.7*[/td][td]110[/td][td]5[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]378.8[/td][td]110[/td][td]8[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]100.9[/td][td]110[/td][td]20[/td][td]4[/td][/tr][tr][td=1,3]2[/td][td=1,3]硫酸粘杆菌素B[/td][td=1,3]Ceftriaxone Sodium[/td][td=1,3]1264-72-8[/td][td=1,3]385.8[/td][td] 380.0*[/td][td]110[/td][td]5[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]373.9[/td][td]110[/td][td]5[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]100.9[/td][td]110[/td][td]20[/td][td]4[/td][/tr][/table][color=#231F20]注:[/color][color=#231F20]* [/color][color=#231F20]为定量离子。[/color][color=#231f20]3.2 流动相条件液相条件的寻找,首先确定流动相,在双通的用乙腈+0.1%甲酸水=7+3、乙腈+0.1%甲酸水=5+5、乙腈+0.1%甲酸水=3+7 3种比例条件下看峰型和响应的大小,选定乙腈+0.1%甲酸水=7+3时出峰最好,然后乙腈+0.1%甲酸水=7+3、乙腈+0.1%甲酸水5mmol/L乙酸铵=7+3、0.1%甲酸乙腈+0.1%甲酸水=7+3,出峰强度和峰型与乙腈+0.1%甲酸水=7+3基本一样,确定硫酸粘杆菌素在流动相比例乙腈+0.1%甲酸水=7+3时出峰最佳,先接色谱柱,笔者试验Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm2.1*100mm,Waters HSS T3 1.8μm,Agilent XDB-C18 1.8μm,最终发现Agilent XDB-C18 1.8μm,对目标化合物分离效果及峰型最好。[/color][color=#231f20][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030935_01_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030935_03_3246897_3.png[/img][/color][color=#231f20]4.用建立好的仪器方法配置标曲硫酸粘杆菌素 St50μg/L, 100μg/L,200μg/L,400μg/L,600μg/L.[/color][color=#231f20][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030937_01_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030937_02_3246897_3.png[/img][/color][color=#231f20]4.前处理条件 4.1.化合物分析粘杆菌素为多肽类抗生素,含有多个氨基,极性很强,易溶于水,微溶于甲醇等有机溶液,PH3-7.5范围内稳定,可用HLB和阳离子交换柱进行净化。[/color][color=#231f20]4.2试验方法[/color][color=#231f20]4.2.1 前期试验[/color][color=#231f20] 通过国标方法及文献资料,选择4%三氯乙酸+4%乙酸铅, 10%三氯乙酸:乙腈=3:7溶液作为提取溶剂, 提取离心后 ,用正己烷净化 ,过500mgHLB ,3mL水淋洗,3mL5%甲醇/水淋洗,6mL甲醇洗脱 35℃旋转蒸干或者N[sub]2[/sub]吹干上机分析,加标小瓶中理论值100μg/L,全程试剂空白,猪肉未知样品,及加标回收,均一样大,sp100μg/L有明显的基质干扰,单纯的标准品35℃旋转蒸干或者N[sub]2[/sub]吹干上机分析,无回收。4.2.2前期试验分析与总结:a.最终进样不能吹干或旋干,选择N[sub]2[/sub](35℃以下)吹至1mL以下;b.HLB洗脱接受后,溶液较浑浊,说明HLB净化效果不佳;c.提取液4%三氯乙酸+4%乙酸铅较其他两种浑浊;d.分析化合物有多个氨基可选择离子交换柱, WCX柱。[/color][color=#231f20]4.2.2 再次试验[/color][color=#231f20]称样5.0g--- 添加标准品1mg/L×100μL[/color][color=#231f20]---加入10%三氯乙酸:乙腈=3:7 15mL----充分混匀,超声20min,离心 [color=#231f20]----[/color]上清液倒入新离心管[/color][color=#231f20][color=#231f20]----[/color] 残渣继续用10%三氯乙酸:乙腈=3:7 10mL提取一遍[/color][color=#231f20][color=#231f20]----[/color]合并上清液,用氨水调PH=7[color=#231f20]----[/color] 加入10mL乙腈饱和的正己烷,充分混匀,离心 [color=#231f20]----[/color]弃去正己烷层,下层过WCX(200mg,6cc),甲醇水平衡[/color][color=#231f20] ----5mL水淋洗 ----5mL甲醇淋洗----6mL甲酸:甲醇=1:4洗脱,接收[color=#231f20]----[/color]用N2在40℃下吹至1mL左右,用水定容至2mL,过0.22μm滤膜。[/color][color=#231f20]线性范围:25μg/L,50μg/L,100μg/L,150μg/L,200μg/L基质标曲。得到如下谱图:[/color][color=#231f20][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030947_02_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030947_03_3246897_3.png[/img][/color][color=#231f20]回收率在70%左右。[/color][color=#231f20]综上:对于硫酸粘杆菌素,提取试剂用酸性,选用离子交换柱比HLB柱净化干净,定容之前溶液勿吹干(多次失败得出)。以上,是本人做硫酸粘杆菌素仪器方法开发时的一些经验和体会,希望能给大家带来帮助,也希望大家能多提提意见,共同进步,谢谢大家。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif[/img][/color][color=#231f20][/color][color=#231f20][/color][align=center][/align]

  • 【原创大赛】兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测

    【原创大赛】兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测

    兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测 硫酸粘杆菌素由多粘杆菌产生,对革兰氏阴性菌有很强的抗菌作用,治疗革兰氏阴性菌(大肠埃希菌等)引起的肠道疾病效果明显,常用作饲料添加剂。对绿脓杆菌感染(败血症、尿路感染、烧伤或外伤创面感染)也有很好的效果。用于饲料添加剂还有明显促生长作用,和磺胺嘧啶合用效果更好。 本品也有很多副作用,内服很少吸收,本品吸收后,对肾脏和神经系统均有明显毒性。使用时剂量过大或疗程过长,以及注射给药和肾功能不全时均有中毒危险。 所以这种东西对于某些症状疗效较好,但也得谨慎使用。检测某些产品中硫酸粘杆菌素的含量就显得尤为重要。下面我们就重点看看高效液相色谱法检测某饲料中硫酸粘杆菌素吧。实验部分原理 取适量该粉末样品加10%甲醇溶解超声提取,经进样器进入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量计算(外标法)。仪器及试剂1.仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器)、分析天平、超声振荡器、溶剂过滤器2.试剂:甲醇、乙腈(均为色谱纯),纯净水,硼砂溶液样品处理 提取方法:取饲料样品适量,充分粉碎后过0.45mm孔径筛后,装入磨口瓶中备用。准确称取上一步处理过的饲料样品5g,加入150ml 10%的甲醇水溶液,超声波提取20min。将提取液全部转移到1000ml鸡心瓶中,70℃旋转蒸发器蒸至近干,用去离子水溶解并定容至1ml,0.45um有机微孔滤膜滤过,待测。色谱条件检测器:紫外检测器色谱柱:C18,4.6 X 250mm,5um检测波长:215nm流动相:乙腈:PH6.0的硼砂缓冲液=70:30(V:V)流速:1.0mL/min进样量:10ul柱温:室温目标物:硫酸粘杆菌素B,硫酸粘杆菌素A标准品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191339_518984_2498430_3.png标准品,三次平行进样交错叠加色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191339_518985_2498430_3.png样品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191340_518986_2498430_3.png样品,三次平行进样交错叠加色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191340_518987_2498430_3.png以下是定性、定量数据:序号保留时间(min)峰面积(μAu*s)标样-1113.5331262989 228.7671306312 标样-21[td=1

  • 【每日一贴】硫酸粘杆霉素

    【每日一贴】硫酸粘杆霉素

    【中文名称】硫酸多粘霉素E;硫酸抗敌素;硫酸粘菌素;硫酸粘杆霉素【英文名称】colistin sulfate;colimycin;polymyxine Multimycine【结构或分子式】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203161918_355269_1855403_3.jpg【毒性LD50(mg/kg)】 饲料添加时常用粗制品,它对大鼠和小鼠的口服LD50均大于12g/kg。【性状】 白色粉末,有吸湿性。【溶解情况】 易溶于水。【用途】 硫酸多粘菌素E对革兰氏阴性菌有强大的抑菌作用。它可治疗志贺氏痢疾杆菌、大肠杆菌、绿浓杆菌、沙门氏杆菌和普通变形杆菌引起的感染。在动物体内不会产生耐药菌株,与其他抗生素不产生交叉耐药。一般都制成预混剂使用。【制备或来源】 本品系1950年小山康夫在日本福岛县分离出的多粘芽孢杆菌变种粘菌素(Bacilluspolmyxa var. cotistinus),在其培养液中提取的多粘菌素E,通常制成硫酸盐使用,它是由A、B、C三组分组成的。【生产单位】略

  • 吉他霉素、硫酸粘菌素兽药典标准

    (1)求助吉他霉素、硫酸粘菌素兽药典2010版标准,手上有的版友,能不能麻烦把这两个扫描一下或者传真一下也行,需要传真操作的版友麻烦站短联系,我告知传真号码。(2)吉他霉素对照品进液相色谱是只有一个A5峰,还是有多个色谱峰, 对照品的纯度是多少?

  • 急!征集动物源性食品中粘杆菌素的检测方法

    鄙人最近接到一个比较棘手的检测项目,做动物源性食品中的粘杆菌素,但相关的标准或是文献很是少,我是用了博纳艾杰尔的固相萃取柱处理,然后LC/MS进行检测,结果回收率还可以接受,但谱图不是很好。浓度低时谱图容易出现分叉或是肩峰,而且做一些样品后,峰形变的更不好。所以恳请哪位高手可以赐教,如何解决此类问题,是前处理的问题还是色谱柱的原因?不胜感激!

  • 阿维菌素的测定时标准品的问题

    阿维菌素测定时,标准品要求阿维菌素B1a大于87%,那在配制储备液时,需不需要折算纯度?还有的标准只要求阿维菌素纯度大于99%,没有折算。但疑惑的是阿维菌素的残留物是阿维菌素B1a,而测定结果是阿维菌素。应该不是同一物质吧。

  • CNS_17.019_乳酸链球菌素

    [align=left][font='仿宋'][color=#000000]曾盈盈[/color][/font][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='宋体'][size=13px]目录[/size][/font][/align][url=#_Toc10970][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]III[/size][/font][url=#_Toc12352][font='times new roman'][size=16px]第1章 前言[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][url=#_Toc1794][font='times new roman'][size=16px]第2章 乳酸链球菌素的性质及标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc2961][font='times new roman'][size=16px]2.1 Nisin的结构特点[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc27220][font='times new roman'][size=16px]2.2Nisin特性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc13288][font='times new roman'][size=16px]2.2.1溶解度[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][url=#_Toc25604][font='times new roman'][size=16px]2.2.2[/size][/font][/url][url=#_Toc25604][font='times new roman'][size=16px]稳定性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc12757][font='times new roman'][size=16px]2.2.3抑菌性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][url=#_Toc24549][font='times new roman'][size=16px]2.2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc24549][font='times new roman'][size=16px]安全性[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc14679][font='times new roman'][size=16px]2.3 Nisin作用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc17293][font='times new roman'][size=16px]2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc17293][font='times new roman'][size=16px]使用方法[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][url=#_Toc23803][font='times new roman'][size=16px]2.5 Nisin的使用标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc13684][font='times new roman'][size=16px]2.5.1 Nisin的使用标准和限量标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][url=#_Toc5867][font='times new roman'][size=16px]2.5.3 Nisin的检测标准[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc26192][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.1 交叉反应率[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc16246][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.2 回收率[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][url=#_Toc13812][font='times new roman'][size=16px]第3章 乳酸链球菌素在食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]3.1 [/size][/font][/url][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]Nisin[/size][/font][/url][url=#_Toc1242][font='times new roman'][size=16px]在乳和乳制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc6265][font='times new roman'][size=16px]3.1.1在原料奶保鲜中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc22101][font='times new roman'][size=16px]3.1.2[/size][/font][/url][url=#_Toc22101][font='times new roman'][size=16px]在巴氏杀菌乳中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1416][font='times new roman'][size=16px]3.1.3在酸奶中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][url=#_Toc1225][font='times new roman'][size=16px]3.1.4在干酪保藏中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc19182][font='times new roman'][size=16px]3.1.5在长货架期软雪糕奶浆中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][url=#_Toc11638][font='times new roman'][size=16px]3.2 Nisin在肉制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc9450][font='times new roman'][size=16px]3.2.1牛肉冷却肉保鲜[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc26522][font='times new roman'][size=16px]3.2.2在香肠中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc20948][font='times new roman'][size=16px]3.2.3在西式切片火腿中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc13302][font='times new roman'][size=16px]3.2.4[/size][/font][/url][url=#_Toc13302][font='times new roman'][size=16px]在即食腊肉制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][url=#_Toc17421][font='times new roman'][size=16px]3.2.6[/size][/font][/url][url=#_Toc17421][font='times new roman'][size=16px]在泡凤爪制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc25989][font='times new roman'][size=16px]3.3 Nisin在罐藏食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc27734][font='times new roman'][size=16px]3.3.1在罐头食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc13547][font='times new roman'][size=16px]3.3.2在低盐酱菜中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][url=#_Toc10241][font='times new roman'][size=16px]3.4 Nisin在啤酒酿造中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc31850][font='times new roman'][size=16px]3.5 Nisin在焙烤食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc31137][font='times new roman'][size=16px]3.6 Nisin在果汁饮料中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][url=#_Toc18518][font='times new roman'][size=16px]3.7 Nisin在方便食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px]3.8[/size][/font][/url][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px] Nisin[/size][/font][/url][url=#_Toc10264][font='times new roman'][size=16px]在热处理密封包装食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc2149][font='times new roman'][size=16px]3.9 Nisin在植物蛋白食品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][url=#_Toc32563][font='times new roman'][size=16px]3.10 Nisin在鱼贝类等海产制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc20563][font='times new roman'][size=16px]3.11 Nisin 在酱类制品中的应用[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc1607][font='times new roman'][size=16px]3.12 其他[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][url=#_Toc19108][font='times new roman'][size=16px]第4章 结论[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]15[/size][/font][url=#_Toc25686][font='times new roman'][size=16px]参考文献[/size][/font][/url][font='times new roman'][size=16px]16[/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]第1章 前言[/size][/font][/align]食品在贮存中,极易受到微生物侵袭导致食物腐败变质,据统计,全世界大约有10%~20%的食品损失源于各种腐败变质,要使食品有一定的保藏期,就必须采用一定的措施防止微生物的感染和繁殖,采取防腐剂延缓视频腐败是一种最有效、最简捷、最经济的贮存食品手段。目前,我国食品行业所用防腐剂品种较少,人们追求对人体无害的防腐剂,于是无毒、高效的天然食品防腐剂乳酸链球菌素便引起人们的重视。乳酸链球菌素又称乳酸链球菌肽或音译为尼辛,是乳酸链球菌产生的一种多肽物质,由34个[url=/item/%E6%B0%A8%E5%9F%BA%E9%85%B8]氨基酸[/url]残基组成,[url=/item/%E5%88%86%E5%AD%90%E9%87%8F/6281359]分子量[/url]约为3500 Da。由于乳酸链球菌素可抑制大多数[url=/item/%E9%9D%A9%E5%85%B0%E6%B0%8F%E9%98%B3%E6%80%A7%E7%BB%86%E8%8F%8C/14130412]革兰氏阳性细菌[/url],并对[url=/item/%E8%8A%BD%E5%AD%A2%E6%9D%86%E8%8F%8C/765328]芽孢杆菌[/url]的孢子有强烈的抑制作用,因此被作为[url=/item/%E9%A3%9F%E5%93%81%E9%98%B2%E8%85%90%E5%89%82/6199223]食品防腐剂[/url]广泛应用于食品行业。食用后在人体的生理pH条件和α—胰凝乳蛋白酶作用下很快[url=/item/%E6%B0%B4%E8%A7%A3/378219]水解[/url]成氨基酸,不会改变人体肠道内正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题,更不会与其它抗菌素出现交叉抗性,是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品[url=/item/%E9%98%B2%E8%85%90%E5%89%82/2532023]防腐剂[/url]。1969年,联合国粮食及农业组织/[url=/item/%E4%B8%96%E7%95%8C%E5%8D%AB%E7%94%9F%E7%BB%84%E7%BB%87]世界卫生组织[/url](FAL/WHO)食品添加剂联合专家委员会确认[url=/item/%E4%B9%B3%E9%85%B8]乳酸[/url]链球菌素可作为食品防腐剂。1992年3月中国卫生部批准实施的文件指出:“可以科学地认为乳酸链球菌作为食品保藏剂是安全的”。迄今为止,已有英美法等五十多个国家和地区批准Nisin作为食品防腐剂使用,最近,中国也制定了Nisin产品的国家标准[font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font]。[align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]第2章 乳酸链球菌素的性质及标准[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]2.1 Nisin的结构特点[/size][/font][align=left]乳酸链球菌素(Nisin; CNS:17.019; INS: 234)是由属于N型血清的某些乳酸链球菌在代谢过程中合成和分泌的具有很强杀菌作用的多肽抗生素类物质。它的成熟分子仅由34个氨基酸残基组成,分子式为C143H228N42O37S7,相对分子质量为3348。随着科技发展,人们深入研究,发现Nisin的类型有6种,分别为A,B,C,D,E和Z,其中对Nisin A和Nisin Z 的研究最为活跃,区别分别在于Nisin A 的第27位AA为His,而Nisin Z 的第27位AA为Asn,其抗菌特性几乎无差别[font='times new roman'][size=16px][2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font],其分子结构见图1。[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106201028412317_1856_1608728_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='宋体'][size=14px]图1-1 Nisin A的结构(Nisin Z在27位His位为Asn)[/size][/font][/align] Nisin是由34个氨基酸残基组成的多肽,N末端为异亮氨酸,C端为赖氨酸,含2种特殊氨基酸Dha和Dhb,有5个硫醚键形成的分子内环,其中1个称为羊毛硫氨酸,其他4个是β-甲基羊毛硫氨酸。活性分子常为二聚体或四聚体。由于它的独特结构使它一方面在酸性pH值条件下,可经115.6 ℃的高压灭菌而不失活;另一方面表现出对许多革兰氏阳性菌,包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分歧杆菌、棒杆菌、利斯特氏菌、乳杆菌、芽孢杆菌等有很强的抑制作用[font='times new roman'][size=16px][4][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]2.2Nisin特性[/size][/font]乳酸链球菌素(Nisin)的特性包括:溶解性、稳定性、抑菌性以及安全性。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.1溶解度[/size][/font][/align]乳酸链球菌素(Nisin)是一种浅棕色固体粉末,使用时需溶于水或液体中,且于不同pH值下[url=/item/%E6%BA%B6%E8%A7%A3%E5%BA%A6]溶解度[/url]不同。Nisin的溶解度随着pH值的下降而显著增加。如在水中(pH=7),溶解度为49.0mg/ml(Nisin);若在0.02M [url=/item/%E7%9B%90%E9%85%B8]盐酸[/url]中,溶解度为118.0mg/ml(Nisin);在碱性条件下,几乎不溶解。产品中由于含有乳蛋白,其水溶液呈轻微浑浊。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]稳定性[/size][/font][/align]乳酸链球菌素(Nisin)的稳定性也与溶液的PH值有关。如溶于PH=6.5的脱脂牛奶中,经85℃ 巴氏灭菌15分钟后,活性仅损失15%,当溶于PH=3的[url=/item/%E7%A8%80%E7%9B%90%E9%85%B8]稀盐酸[/url]中,经121℃15分钟高压灭菌仍保持100%的活性,可看出其耐酸耐热性能优良。当pH超过4时,特别是加热条件下,它在水溶液中的分解速度加快,活力降低;在pH等于5时,灭菌后丧失40%活性;pH为6.8时,灭菌后丧失90%活性。乳酸链球菌素加入食品后,受到牛奶、肉汤等大分子的保护,稳定性大大提高。Nisin的稳定性也与温度有关,Delevs-Hroughton报道,将添加250IU/g Nisin的pH等于5.6-6.0,含水量54%~58%的巴氏灭菌精制干酪贮藏于不同温度中,30个星期后,20℃ 中的Nisin残留量为90%左右,25℃ 为55%,30℃ 下降到不到40%[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.3抑菌性[/size][/font][/align]乳酸链球菌素对许多革兰氏阳性菌,包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分歧杆菌、棒杆菌、利斯特氏菌、乳杆菌、芽孢杆菌等有明显的抑制作用,尤其对产生芽孢的革兰氏阳性细菌有特效,对革兰阴性菌影响不大。可能是因为革兰阴性菌的细胞壁较复杂,仅能允许分子量60Da以下的物质通过,乳酸链球菌素的分子量达到 3150Da,因此无法到达细胞膜。通常,产芽孢的细菌耐热性很强,如鲜乳采用135℃ 、2s超高温瞬时灭菌,非芽孢细菌死亡率100%,芽孢细菌死亡率90%,还有10%芽孢细菌不能杀灭。Nisin抑制细菌的生长及芽孢的萌发是由于其对细胞表面的强烈吸附而引起细胞质的释放实现的。Nisin是带有正电荷的疏水短肽,因而它可以作用于革兰氏阳性菌细胞壁带负电荷的阴离子成分上,如磷壁酸、糖醛酸磷壁酸、酸性多糖和磷脂。相互作用的结果是与细胞壁形成管状结构,使得小分了量的细胞组成成分从孔道中泄露出来,导致细胞内外能差消失,对蛋白质、多糖等物质的生物合成产生抑制作用。而G-与NisinG+相比,其细胞壁成分复杂而且结构致密,Nisin无法通过,无法对其发挥作用,但当经过处理改变G-的细胞壁通透性后同样对Nisin敏感[font='times new roman'][size=16px][6][/size][/font]。通过分子模型分析了乳链菌肽与质膜之间的相互作用及其对磷脂的影响表明,乳酸链球菌素吸附在质膜上,其N末端比C末端更深入地插入脂肪层中,表明N末端和C末端具有不同的疏水特点。对乳链菌肽与不同的中性和负电性磷脂模型的研究结果表明, 乳链菌肽扰乱了膜中脂肪,尤其是磷脂酰甘油的正常排列。对乳酸链球菌素与卵磷脂模型的作用方式研究表明,乳链菌肽可显著地改善二软脂酰-sn-甘油酰-3-卵磷脂的多层分散形态,而不会引起脂肪晶相的显著改变。乳链菌肽能显著地干扰膜的渗透性与膜结构。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]安全性[/size][/font][/align]通过病理学家研究以及毒理学试验都证明乳酸链球菌素(Nisin)是完全无毒的。乳酸链球菌素(Nisin)可被消化道[url=/item/%E8%9B%8B%E7%99%BD%E9%85%B6]蛋白酶[/url]降解为氨基酸,无残留,不影响人体[url=/item/%E7%9B%8A%E7%94%9F%E8%8F%8C]益生菌[/url],不产生[url=/item/%E6%8A%97%E8%8D%AF%E6%80%A7]抗药性[/url],不与其它抗生素产生交叉抗性。世界上有不少国家如英、法、[url=/item/%E6%BE%B3%E5%A4%A7%E5%88%A9%E4%BA%9A]澳大利亚[/url]等,在包装食品中添加乳酸链球菌素(Nisin),通过此法可以降低灭菌温度,缩短灭菌时间,降低热加工温度,减少营养成份的损失,改进食品的品质和节省能源,并能有效地延长食品的保藏时间。还可以取代或部分取代化学防腐剂、发色剂(如[url=/item/%E4%BA%9A%E7%A1%9D%E9%85%B8%E7%9B%90]亚硝酸盐[/url]),以满足生产保健食品、绿色食品的需要。乳酸链球菌素为天然的多肽物质,食用后可被体内的蛋白酶消化分解成氨基酸,无微生物毒性或致病作用,因此其安全性较高。ADI: 0~3001U/kg (FAO /wHO, 1994)。雄性小鼠经口LDo09.2g/kg(bw),雌性小鼠经口LD56.81g/kg(bw),雄性大鼠经口LDso14. 70g/kg(bw),雌性大鼠经口LD36.81g/kg(bw)。[font='times new roman'][size=16px]2.3 Nisin作用[/size][/font](1)能有效抑制引起食品腐败的细菌和孢子,延长食品保存时间;(2) 降低灭菌温度,缩短热处理时间,减少营养成分的损失,改进食品的品质、风味、结构、颜色等性状 (3)它对食品的色、香、味、口感不产生副作用 (4)可取代或部分取代化学防腐剂,以满足生产健康食品、绿色食品的需要 (5)节省能源,增加有效工作时间 (6)它是一种多肽,可被人体内的酶降解、消化。乳酸链球菌素对蛋白水解酶如胰蛋白酶、胰酶、唾液酶和 消化特别敏感,但对粗制凝乳酶不敏感。(7)它的标准品纯度为2.5%,并定为1x101U/go.乳酸链球菌素既可以降低灭菌温度,又可以延长食品的保藏时间,在目前,具有这样双重作用的食品防 腐剂是不多见的。可以降低灭菌温度,这在食品加工中具有很大的实用价值[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]使用方法[/size][/font]GB2760规定,乳及乳制品、预制肉制品、熟肉制品、可直接食用的熟制水产品0.5g/kg 杂粮灌肠、米面灌肠、改变物理形状的蛋制品0.25g/kg 食用菌及菌类罐头、八宝粥罐头、酱油、酱及酱制品、复合调味料、除水之外的饮料类0.2g/kg 醋0. 15g/kg.其他国家的规定见表2.1。[align=center][font='宋体'][size=14px]表2.1 批准使用乳酸链球菌素的国家举例[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td][font='宋体'][size=14px]国家[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用的食品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]最大使用量[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]澳大利亚[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪,经加工的干酪,罐装番茄[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]比利时[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]100[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]塞浦路斯[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪,凝结的干酪,罐装蔬菜[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]欧盟[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]E234,作为天然防腐剂[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]视具体食品和加盟国而定[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]法国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]意大利[/size][/font][/td][td][/td][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]墨西哥[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]荷兰[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪,经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]800[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]秘鲁[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]允许使用[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]俄罗斯[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]干酪,罐装蔬菜[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]800[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]英国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]凝结的干酪,干酪,罐装食品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]无限制[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]美国[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]经加工的干酪[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1000[/size][/font][/td][/tr][/table][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]2.5 Nisin的使用标准[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.1 Nisin的使用标准和限量标准[/size][/font][/align]乳酸链球菌素 nisinCNS号 17.019 INS号 234功能 防腐剂[table][tr][td][align=center][font='宋体'][size=14px]食品分类号[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]食品名称[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]最大使用量/(g/kg)[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='宋体'][size=14px]备注[/size][/font][/align][/td][/tr][/table][table][tr][td][font='宋体'][size=14px]01.0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]乳及乳制品(01.01.01、01.01.02、13.0涉及品种除外)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]04.03.02.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]食用菌和藻类罐头[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.04.02.01[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]杂粮罐头[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.04.02.02[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]其他杂粮制品(仅限杂粮灌肠制品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.07[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]方便米面制品(仅限方便湿面制[/size][/font][font='宋体'][size=14px]品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]06.07[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]方便米面制品(仅限米面灌肠制品)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]08.02[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]预制肉制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]08.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]熟肉制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]09.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]熟制水产品(可直接食用)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.5[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]10.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]蛋制品(改变其物理性状)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.25[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.03[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]醋[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.15[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.04[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]酱油[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.05[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]酱及酱制品[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]12.10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]复合调味料[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]14.0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]饮料类(14.01包装饮用水除外)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]0.2[/size][/font][/td][td][/td][/tr][/table][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3 Nisin的检测标准[/size][/font][/align]检出限2.0 mg/kg(mg/L);定量限6.0 mg/kg(mg/L)。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.1 交叉反应率[/size][/font][/align]乳酸链球菌素100%;纳他霉素0.1%;苯甲酸钠0.1%;聚萘氨酸0.1%;山梨酸钾0.1%;对羟基苯甲酸0.1%;多粘菌素B1%;多粘菌素E1%;万古霉素1%;缬氨霉素1%;平阳霉素1%;环孢菌素A1%。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5.3.2 回收率[/size][/font][/align]牛奶、饮料、乳制品(液态)回收率如下:——添加量为1 μg/mL时,回收率为78.6%~110.6%;——添加量为30 μg/mL时,回收率为98.7%~117.9%;——添加量为300 μg/mL时,回收率为79.4%~116.5%。肉制品、乳制品(固态)回收率如下:——添加量为0.5 μg/mL时,回收率为93.1%~105.9%;——添加量为10 μg/mL时,回收率为75.8%~116.3%;——添加量为100 μg/mL时,回收率为88.2%~112.4%。[align=center][font='times new roman'][size=16px]第3章 乳酸链球菌素在食品中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]3.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Nisin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在乳和乳制品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.1在原料奶保鲜中的应用[/size][/font][/align]Nisin用于原料奶的保鲜是非常有效的,在世界许多国家,牧场往往远离加工厂,加上当地气候比较炎热,且无适宜的冷冻设备,因此通常在原料奶中加入Nisin,以增加原料奶的保质期。Anonynous等人研究证实,在寒冷、室温及较高温度下,添加30-S0IU/mL的Nisin,就可使原料奶保质期廷长1倍以上,孔保华等人在鲜奶中添加Nisin研究鲜奶在贮存期间的质量变化,结果如表3.1所示,在整个贮存期间对照组的细菌总数均高于添加Nisin的处理组,且随着Nisin用量的增加,细菌总数呈梯度下降;而且在整个贮存期间对照组pH明显低于其它组,下降速度较快,其它组pH下降速度较慢。这是由于添加Nisin抑制了细菌的活性,因而pH相对较高[font='times new roman'][size=16px][7][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在巴氏杀菌乳中的应用[/size][/font][/align]蒋艳在实验中发现,巴氏杀菌乳在整个贮存期间未添加Nisin的组、细菌总数均显著高于添加Nisin的各组样品,且随着添加Nisin浓度的增加,细菌总数逐渐减少、产品保质期延长(如表3.2),同时,对贮存期间巴氏杀菌乳酸度、风味的测定发现, Nisin对乳中的产酸菌有明显抑制作用且对风味没有影响。添加Nisin后,在4℃ 环境下保存,可使产品保质期达到12天左右,但由于Nisin价格较费,在实际生产中应考虑生产成本,确定合适的添加量。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.3在酸奶中的应用[/size][/font][/align]酸奶属高水分食品,水分活度约为0.90-0.95,酵母菌、霉菌及细菌等各种微生物都能生长,而最先导致酸奶腐败变质的微生物是细菌,它是最活跃量普遍的因素,起主导作用。因此抑制细菌的繁殖,就能有效地延长酸奶的保质期。潘利华的实验表明,在没有添加稳定剂的酸奶中, Nisin的添加量为500IU/ mL时,不影响发酵过程,也不能延长保质期。但在水果酸奶生产中,由于新鲜水果带入了酵母菌和细菌(210个/ml),致使产品在1周内即发生腐败,即使添加 Nisin对抑菌作用也无效,相反还会促进腐败菌的生长,在这种情况下添加香兰素(2g/kg)可以起到抑菌效果,而且对产品风味无影响。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.4在干酪保藏中的应用[/size][/font][/align]Nisin最初用于干酪的防腐,其已成功地用于硬制干酪、巴氏灭菌干酪、巴 氏灭菌乳、罐藏浓缩牛乳、高温灭菌乳、酸乳、乳制甜点等乳制品中。在干酪的加工过程中,Nisin是最有效的保护剂,干酪原料经80℃-100℃巴氏消毒后,梭菌芽孢仍能存活,乳酪中最常见的微生物为丁酸梭菌、酪丁酸梭菌、生抱梭菌,尤其是肉毒梭菌在加工的乳酪中产生毒素。Taraka等(1986)研究表明,在经巴氏处理的干酪中,加入500 IU/mL-1000IU/mL Nisin能阻止梭菌的生长和毒素的形成,同时还能降低食盐和磷酸盐的用量[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。加工干酪由于其高pH值、高水分和厌氧包装,故产品中存在的微生物问题主要是芽孢菌的生长, 如C sporogenes、C butyricum 和C tyrobutyricum,因此抑制加工干酪中的微生物就是抑制芽抱菌生长,有报道证实, Nisin作为加工干酪防腐剂有很好的作用。此外, C.botulinum对加工干酪的污染有日益增长的趋势,有研究表明, 12.5 -250.0 mg/kg的Nisin对加工干酪粉中防止C.botulinum的生长是有效的,它可延缓和防止C.botulinum的生长,并可延缓和防止C.botulinum毒素的产生。一般具有高水分、低盐和磷酸盐的产品要求应用的Nisin量较高. Natalia R等人也证实,一株产Nisin Z的Lactococcus lactis sp. lactis IPLA 729gB明显抑制 Vidiago酪中 C.tyrobutyricum 的生长。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.1.5在长货架期软雪糕奶浆中的应用[/size][/font][/align]Nisin能有效地抑制包括李氏菌在内的大多数革兰氏阳性菌。余保宁对Nisin在长货架期软雪糕奶浆的应用实验中发现、随着奶浆存放时间的延长, Nisin对微生物的抑制效果均表现为随着添加量的增加而增大,从细菌总数的数据分析看 Nisn的浓度大于或等于50mg/kg时,就能起到较好的抑菌作用。同时,有研究发现,添加不同防腐剂处理软雪糕奶浆观察其在4℃条件下菌数变化,发现Nisin和苯甲酸钠的抑菌效果较好,而且尤以Nisin的保鲜效果最佳、原因可能是 Nisin对梭菌和芽孢杆菌活性的抑制,这些产生内生孢子的细 菌是食品的主要腐败微生物,它们的孢子比营养细胞对Nisin更为敏感,这是由于孢子在软雪糕奶浆调和过程中已受到热损伤,因此变得对Nisn较为敏感。这也是Nisn比其它保鲜剂更适用于热加工食品防腐保鲜的重要原因。[align=center][font='宋体'][size=14px]表3.1 贮存期间细菌总数和[/size][/font][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][font='宋体'][size=14px]的变化[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td=1,2][font='宋体'][size=14px]Nisin添加量(IU/g)[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]0天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]4天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]7天[/size][/font][/td][td=2,1][font='宋体'][size=14px]11天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数(个/ml)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数(个/ml)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数(个/ml)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]细菌总数(个/ml)[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]pH[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]空白[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.9[/size][/font][font='宋体'][size=14px]×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]4[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.55[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.0×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.49[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.6×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]7[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.05[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.6×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]9[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.82[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]200[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.0×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]3[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.59[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.55[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.3×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]7[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.21[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]8[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.09[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]300[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.4×102[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.63[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×105[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.59[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.1×106[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.37[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.6×107[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.39[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]400[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]2[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.67[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.8×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.60[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.5×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]3[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.58[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.5×10[/size][/font][font='宋体'][size=14px]5[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.46[/size][/font][/td][/tr][/table][align=center][font='宋体'][size=14px]表3[/size][/font][font='宋体'][size=14px].2[/size][/font][font='宋体'][size=14px] 不同浓度Nisin添加量对巴氏杀菌乳在贮存期间细菌总数的影响[/size][/font][/align][table][tr][td=1,2][font='宋体'][size=14px]Nisin添加量(mg/kg)[/size][/font][/td][td=8,1][font='宋体'][size=14px]细菌总数(个/ml)[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]1天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]11天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]13天[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]15天[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]0[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.9×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.8×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.7×10[/size][/font][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]100[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.3×10[/size][/font][/td][td][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]200[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.3×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.2×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.3×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.3×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]300[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]7.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.1×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.1×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]2.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.1×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]400[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]5.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.9×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]6.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.2×10[/size][/font][/td][/tr][tr][td][font='宋体'][size=14px]500[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]9.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.4×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]8.0×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.7×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]4.6×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]1.5×10[/size][/font][/td][td][font='宋体'][size=14px]3.7×10[/size][/font][/td][/tr][/table][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]3.2 Nisin在肉制品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.1牛肉冷却肉保鲜[/size][/font][/align]将鲜牛肉在2℃条件下经24h预冷,用不同浓 度的Nisin溶液浸渍30s,沥干,真空包装。80℃热水浸渍25s,4℃下贮藏、观察。结果发现,在牛肉冷却肉保鲜中,Nisin有显著的抑菌作用,细菌总数明显降低,且保鲜效果随Nisin浓度增加而增强,其有效保鲜浓度为0.075g/kg,且与乳酸钠之间存在协同作用,而与山梨酸钾发生拮抗作用。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.2在香肠中的应用[/size][/font][/align]亚硝酸盐是常用的肉制品发色剂,能够有效地抑制肉毒杆菌的生长和繁殖,但含亚硝酸盐的食物有致癌的危险,故世界各地对其用量都有严格的限制、并有禁止使用的趋势。添加Nisin到香肠中可降低亚硝酸盐的用量,又能有效地延长香肠的保质期[font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.3在西式切片火腿中的应用[/size][/font][/align]火腿切片,先熟化后再切片包装。为防止二次污染,研究人员在切片中添加Nisin研究在无菌化包装条件下,延长火腿切片的保质期。试验结果可以看出,对照组不加Nisin,仅加发色剂亚硝酸盐0.016g/ e,在4℃下贮存,保质期为14天,试验组单独添加0.042 g/kg Nisin,并将亚硝酸盐用量减少一半,保质期为28天,比对照组提高1倍。另一试验组,添加0.042 g/kg Nisin和 20glkg乳酸钠,再加亚硝酸盐0.008g/kg,4 ℃ 下贮存,保质期则延长到70天,较好地解决了西式火腿切片保质期短的问题[font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在即食腊肉制品中的应用[/size][/font][/align][align=left]即食腊肉含水量较高,要保持其独特的耐嚼感,杀菌强度就不能过高。添加Nisin能很好地解决这一问题,Nisin能增加一些细菌对热的敏感性,且在小范围内也有辅助杀菌作用,可降低灭菌温度、缩短灭菌时间,同时能保持很好的色泽和风味。3.2.5在扒鸡中的应用[/align]扒鸡又名五香脱骨鸡,有近百年的历史,是山东的特色名吃,因肉质软烂,骨肉可以分离而得名。软包装扒鸡,是选健康童子鸡为原料,宰杀后经蜜水浇灌,素油烹炸,再以豆蔻、砂仁、丁香等10多种名贵中药调味增香、精工扒制而成,但与手工制作的散装扒鸡比较,有肉质过于软烂, 咀嚼性差等缺陷,为提高软包装扒鸡的质量,在扒鸡加工过程中添加Nisin,以降低其灭菌强度,改善扒鸡的食用品质。除杀菌温度由121℃降为105℃外,其它工艺条件不变,保质期可以达到半年以上,且口感也得到改善。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.2.6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在泡凤爪制品中的应用[/size][/font][/align][align=left]泡凤爪属于动物性泡菜,是将发酵工艺成功用于肉制品生产的新食品。虽然其生产历史较短,由于其独特的风味,低脂高蛋白质,胶原蛋白含量丰富, 口感细腻,深受广大消费者的喜爱。但由于水份活性高,胶原蛋白含量丰富,限制了其进行热力杀菌,因此极易腐败添加30g/100kg的Nisin对泡凤爪的贮存、保鲜具有较好、较显著的作用。3.2.7在烤肉中的应用[/align]烤肉常采用优质黄牛后腿肉,经过若干工序制作而成的低温肉制品。产品表层粘有辣椒或咖喱粉,外表干爽,口感鲜嫩,风味独特,深受消费者喜爱。由于未经高温灭菌,因此在常温下不能长期保存。加入Nisin后能有效地抑制细菌生长繁殖,28℃下产品保质期从4~5天延长到了20天。[font='times new roman'][size=16px]3.3 Nisin在罐藏食品中的应用[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.3.1在罐头食品中的应用[/size][/font][/align]罐头食品中经常污染一些极为耐热的细菌芽孢,如嗜热脂肪芽孢杆菌和热解糖梭菌的芽孢,一旦条件适宜,它们就会生长,引起产气、产酸腐败. 0.1g/kg的乳酸链球菌素添加于罐头食品中,可以使罐头食品在炎热的条件下保存2年。并能减少热处理强度1/2 ,节省能源,使罐头食品保持良好营养价值、外观、风味、色泽,保持产品品质、延长食品保质期,其效果优于山梨酸钾。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.3.2在低盐酱菜中的应用[/size][/font][/align]传统酱菜的制作主要是利用高浓度盐的高渗作用,起到防腐保鲜的作用,但是我国居民膳食指南提倡每人每日食盐摄入量应该少于6g,而对于高血压患者,每天的食盐摄人量应该在4g左右,因此,我国酱菜的研究方向应该朝着低盐的方向发展,但是盐浓度过低,微生物会大量繁殖,致使食品的货架期变短,而且Nisin的半数致死量与食盐相同,所以使用天然防腐剂Nisin成为酱菜行业中的选择。易建华等[font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font]采用乳酸链球菌素、纳他霉素进行酱菜的保藏实验研究,单一使用二者时,300g/kg乳酸链球菌素和150 mg/kg纳他霉素效果最好,最优复合配方为300 g/kg乳酸链球菌素+150 mg/kg纳他销素;乳酸链球菌素与纳他霉素复合防腐剂对酱菜总酸度影响较小,同时,在保藏3个月内,乳酸链球菌素与纳他霉素复合防腐剂可以改善酱菜的感官品质。[font='times new roman'][size=16px]3.4 Nisin在啤酒酿造中的应用[/size][/font]由于乳酸链球菌素不能抑制酵母菌,因而可用于啤酒、果酒及其它酒类产品来防止乳酸菌引起的腐败。洗涤酵母:乳酸链球菌素可代替传统的酸洗法清除酵母菌中污染的乳酸菌,保持酵母原有的生命力、发酵力和凝聚力。添加1g/kg—1.5g/kg的乳酸链球菌素于酵母浆中混合均匀后放置4-6小时即可。减少巴氏灭菌时间:在巴氏灭菌后,加入0.01g/kg—0.05g/kg乳酸链球菌素到成品中。抑制细菌:发酵前加入0.025g/kg—0.1g/kg的乳酸链球菌素,成品酒中残留0.01g/kg—0.05g/kg即可。在葡萄酒的主发酵和后发酵中,加入0.1g/kg的乳酸链球菌素,可防止发酵过程中短乳杆菌、葡萄明串珠菌、干酪乳杆菌引起的污染。[font='times new roman'][size=16px]3.5 Nisin在焙烤食品中的应用[/size][/font]在发面烤饼、甜面包和煎饼等中添加Nisin,对引起产品腐败的耐热蜡状芽孢杆菌有很强的抑制作用,可延长制品的保质期。添加0.2g/Kg的乳酸链球菌素于产品中即可达到抑菌要求。[font='times new roman'][size=16px]3.6 Nisin在果汁饮料中的应用[/size][/font]酸土芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)是一种耐酸且耐热的产孢子 菌,最适于在25~60℃ ,pH为5.0~6.0的环境下生长、繁殖、据资料报道,在果园、森林土壤以及生产饮料用水中均有酸土芽孢杆菌的生长。因此,酸土芽孢杆菌很容易被带人果汁及果汁类饮料的生产加工过程中,引起果汁及果汁类产品的酸败,如美、英、德 等国,都曾报道过由于该菌的污染而引起果汁类产品酸败的质量事故。为防止果汁饮料的酸败, Komitopoulou 等人试验了Nisin对市售纯果汁中酸土芽孢杆菌孢子的抑制作用,结果显示:在25℃ 温度下贮存的苹果汁、桔子汁和葡萄柚汁中, Nisin的添加量仪需5 IU/mL,即可抑制酸土芽孢杆菌孢子的生长。在44℃温度下贮存的纯果汁,只有葡萄柚汁有相同的抑菌效果,而桔子汁和苹果 汁中,酸土芽孢杆菌孢子对Nisin的敏感性降低了,在Nisin添加量为100 1U/mL的试样中,酸土芽孢杆菌才被完全抑制。显然, 在不同果汁中, Nisin的最低抑菌浓度是不相同的,这可能与果汁自身pH值的不同有关。Nisin有较高的热稳定性,因此,对果汁及果汁类产品在巴氏灭菌前添加适量的 Nisin,不仅可以降低热加工强度,提高Nisin 的残留量,而且,可以阻止存活的酸士芽孢杆菌孢子的生长,防止果汁及果汁类产品的酸败[font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]3.7 Nisin在方便食品中的应用[/size][/font]方便食品中存在的主要问题是菌落总数,大肠菌群超标等,本品能有效防止微生物的生长,提高产品品质,延长产品保持期。添加少量的Nisin于色拉酱、冷盘、面点和汤类等方便食品中,能有效抑制酵母菌、细菌的生长繁 殖,效果可以和山梨酸盐等化学防腐剂媲美,且能使 盐浓度下降为7%~9%。在小包装休闲方便面中,如鸡腿、鸡爪、肉干等禽肉制品中可正常使用,蔬菜类的方便食品,如低盐榨菜、金瓜丝等也都在生产中正常使用。[font='times new roman'][size=16px]3.8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] Nisin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在热处理密封包装食品中的应用[/size][/font]许多经热处理密闭包装的食品,在加工过程中,高强度的杀菌会影响食品的品质,而低温热处理又不能杀灭耐热孢子,达不到保质的要求。如在该类食品中添加0.05g/kg— 0.2g/kg 的乳酸链球菌素,就可以解决上述问题。[font='times new roman'][size=16px]3.9 Nisin在植物蛋白食品中的应用[/size][/font]在豆奶、花生牛奶等中添加乳酸链球菌素0.1g/kg—0.15g/kg,保质期延长3倍以上。 内酯豆腐中添加 0.1g/kg 的乳酸链球菌素,能使保质期延长5倍以上。豆干中添加0.1g/kg的乳酸链球菌素、复合少量其它防腐剂,经合适的灭菌,保质期可达6个月。盒装内酯豆腐,在炎热的夏季,保质期不到12h。超过12 h,产品就会脱水、变酸、变质。添加Nisin,保质期可以延长到24 h。 1 d的保质期,安全可以满足这种即食产品在市场上流通的需要。如对保质期还有更高的要求,根据北京农大王绍林老师的研究,添加Nisin再配合微波杀菌,在室温18℃下,保质期可以达到3d[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[font='times new roman'][size=16px]3.10 Nisin在鱼贝类等海产制品中的应用[/size][/font]鱼、鲜虾等海鲜制品以其美味及高营养价值深受人们喜爱,且多冷食,因易腐败变质,易遭受李斯特菌和E-肉毒杆菌的污染,对人体造成危害。控制半成品、成品中的细菌数就显得十分重要。添加100 mg/L-150 mg/L Nisin可抑制李斯特菌,延长保存期和新鲜度,使用方法与肉制品相同。以生虾肉为主料,加工的虾肉糜,一般只有2d的保质期,加入Nisin后可使保质期达到60~70天。[font='times new roman'][size=16px]3.11 Nisin 在酱类制品中的应用[/size][/font]添加Nisin于沙拉酱和调味用酱汁中,可有效抑制乳酸菌和孢子的生长,使低脂低盐产品的腐败性降低,可延长保存期达4倍之多,建议使用量为50 mg/L200 mgl[font='times new roman'][size=16px][5][/size][/font]。[align=left][font='times new roman'][size=16px]3.12 其他[/size][/font][/align]有用Nisin和纳他霉素复合,代替化学防腐剂用于高档酿造酱油以供出口。也有在酱制品如辣椒酱中使用取得成功。除食品行业以外,有用Nisin代替化学防腐剂应用于化妆品的制造。0.05g/kg—0.1g/kg 乳酸链球菌素添加到蛋制品中,可有效抑制引起产品腐败的耐热性孢子,将原来保存期 7 天的蛋制品的保质期延长到1个月以上。0.05g/kg—0.2g/kg 的乳酸链球菌素加入到沙拉酱等中,可有效抑制乳酸菌和孢子的生长,使低脂低盐产品的腐败性降低,延长保存期 3 倍以上。在香基香料加工中,Nisin可降低灭菌温度,减少灭菌时间,能有效杀死或抑制产品中各种有害微生物,如对细菌、大肠杆菌、革兰氏阴性菌、李斯特氏菌等都有较强的抑制作用,延长产品保质期,提高产品品质。 在膏状香精中添加0.2g/Kg的乳酸链球菌素、0.1g/Kg的纳他霉素和山梨酸钾可抑制其中的各种有害微生物的生长。[align=center][font='times new roman'][size=16px]第4章 结论[/size][/font][/align]综上,乳酸链球菌素作为一种新型天然对人体无毒害的食品防腐剂,应用前景十分广阔,它是一种天然、高效、安全的天然食品添加剂,符合未来食品防腐剂的要求,它能有效地抑制引起食品腐败的革兰氏阳性菌,特别对耐热芽孢杆菌、肉毒梭菌及李斯特氏菌有强烈的抑制作用,可降低食品灭菌温度、缩短灭菌时间、改善食品风味、外观和提高食品营养价值、延长保藏时间,符合国家农业行业标准NY/392-2000绿色食品食品添加剂使用准则。天然食品防腐剂取代化学合成防腐剂是一种必然趋势,乳酸链球菌素的开发和利用将对促进我国绿色食品的发展和保障人民身体健康具有重要的意义。[align=center][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]参考文献[/size][/font][/align][align=left][size=13px][1]田文利,吴琼,吕红线,王锦.乳酸链球菌素(Nisin)的研究进展[J].食品工业,2000:26-28.[/size][/align][align=left][size=13px][2]Allison G E and Fremaux C and Klaenhammer T R. Expansion of bacteriocin activity and h[/size][size=13px]ost range upon complementation of two peptides encoded within the lactacin F operon.[J]. Journal of bacteriology, 1994, 176(8) : 2235-41.[/size][/align][align=left][size=13px][3]郭本恒. Nisin的物理化学性质[J]. 农牧产品开发, 2001(02):3-5.[/size][/align][align=left][size=13px][4]张红印, 吴祖兴, 张一鸣,等. 天然防腐剂及其在食品加工中的应用[J]. 冷饮与速冻食品工业, 2001, 007(003):20-21.[/size][/align][align=left][size=13px][5]孙来华,张志强.乳酸链球菌素的特性及其在食品中的应用[J].食品研究与开发,2008(10):119-123.[/size][/align][align=left][size=13px][6][/size][size=13px]Hurst A[/size][size=13px]. Nisin [[/size][size=13px]J[/size][size=13px]].Advanse in Applied Microb biology,1981.27:85-123.[/size][/align][align=left][size=13px][7]王广萍, 郝奎, 付忠梅. Nisin在乳和乳制品保藏中的应用[J]. 中国乳业, 2006, 000(004):39-42.[/size][/align][align=left][size=13px][8]赵剑飞. Nisin的性能及在肉制品中的应用[C]// 中国肉类科技大会. 中国畜产品加工研究会, 2005.[/size][/align][align=left][size=13px][9][/size][size=13px]刘筠筠,杨嘉玮. 美国食品添加剂的安全监管及其启示[/size][size=13px][J].[/size][size=13px] 食品安全质量检测学报,2014,5[/size][size=13px](1):154-159.[/size][/align][align=left][size=13px][10]夏云梯, 潘利华, 等. 乳酸链球菌素在食品工业中的应用(三)[J]. 中国食品添加剂, 2000, 000(004):63-65.[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]

  • 全世界都没有奶粉中肉毒杆菌的限量标准!!

    事件回放:新西兰乳制品巨头恒天然集团3日宣布,旗下部分婴儿奶粉和运动饮料等产品可能 “受到污染”,含有肉毒杆菌。之后,娃哈哈,可瑞康,多美滋,可口可乐均中招相继中招。据专家介绍,低的ph值不适宜细菌生长,高温也可以破坏毒素,但是这个温度未必可以杀死芽孢。肉毒杆菌芽孢抗热性很强,芽孢通常认为对人是无害的,但在儿童体内,由于肠道菌群的缺乏,肉毒杆菌的芽胞在儿童的肠道弱碱厌氧环境中是能够产毒的,也就是说即便将食物中的肉毒素破坏掉,但是对儿童的危害是不容忽视的,对成人也是不能排除的。肉毒杆菌,全名肉毒梭状杆菌(也叫肉毒梭菌),是目前毒性最强的毒素之一,在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力。人们食入和吸收这种毒素后,神经系统将遭到破坏,出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状。目前检测方法有:GB/T 4789.12-2003 食品卫生微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验SN/T 2525-2010 食品中肉毒梭菌的PCR检测您是否做过有关肉毒杆菌的检测?有什么样的简便方法?而对于这样的一种细菌毒素,全世界都没有奶粉中肉毒杆菌的限量。于是,不仅是事件本身,限量标准也引起了大家的讨论。有专家表示:肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物,而标准的管理是要考虑成本的,正因如此,各国都不把它列入标准。但这并不意味着根本不管,比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。你认为该不该制定相关的标准?为防止肉毒杆菌的污染,在食品的生产过程中该如何控制和监管?

  • 芽袍杆菌类微生态制剂

    芽袍杆菌类微生态制剂

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701091458_620587_676_3.jpg通常市面上常见乳酸菌的营养食品,今天在一篇文章中发现还有芽袍杆菌类微生态制剂,除具有营养价质外,还有耐高温的性能与大家分享一下。根据菌种类型不同,微生态制剂可分为单一菌种微生态制剂、复合微生态制剂。单一菌种微生态制剂又可分成乳酸菌类、芽孢杆菌类、酵母菌类、霉菌类和光合细菌等。芽孢杆菌在逆境下可以产生芽孢来抵抗不良生长环境的影响,因此是很好的微生态制剂生产菌种,人们对芽抱杆菌的研究也越来越多。利用芽孢杆菌生产微生态制剂具有很多的优点:一当芽孢杆菌以芽抱的形式存在时,进入人或动物胃肠道时可以耐受胃酸和胆盐且保持高活性。二由于芽孢的存在可以耐受100℃的高温,在生产制剂制粒的过程中损失率比较小,活性高,保存时间长。三,芽孢杆菌类可以产生活性很强的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等多种酶类物质,还可以产生某些小环肤类细菌素或者一些多肤类物质,其对肠道中的致病均有拮抗作用。

  • 【“仪”起享奥运】食品复配防腐剂--乳酸链球菌素与化学防腐剂

    [align=center][/align][font=宋体, SimSun][size=16px]目前在糕点中常用的化学防腐剂对霉菌、酵母的抑制作用较好,而对细菌的抑制作用较弱。生物防腐剂乳酸链球菌素是从乳酸乳球菌发酵产物中提取的、具有抗菌活性的多肽物质,能够抑制许多引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌的生长、繁殖,特别对耐热芽孢杆菌、肉毒梭菌等所产生的芽孢有强烈的抑制作用。[/size][/font][size=16px][/size][font=宋体, SimSun][size=16px]张攀先[2]等人在实验中选用乳酸链球菌素与常用化学防腐剂对蒸蛋糕中腐败微生物进行抑制并进行优化复配,结论显示,[b]复配防腐剂(0.2g/kg 乳酸链球菌素+0.25g/kg 脱氢乙酸钠+0.3g/kg 丙酸钠)能够显著的抑制蒸蛋糕中腐败微生物的生长[/b],且抑菌效果要优于化学防腐剂(脱氢乙酸钠和丙酸钠),能够改善产品的品质,延长产品的保质期。且与化学防腐剂(脱氢乙酸钠和丙酸钠)相比,添加了乳酸链球菌素的复配防腐剂不仅增强了对蒸蛋糕中腐败微生物的抑制能力,同时也降低了化学防腐剂的添加量,提高了产品的安全性。[/size][/font]

  • 肉毒梭状杆菌和肉毒素

    鉴于目前恒天然奶粉出肉毒杆菌一事,一起学习一下肉毒杆菌和肉毒素。肉毒杆菌的全名叫肉毒梭状杆菌(也叫肉毒梭菌Clostridium botulinum),是一种革兰氏阳性厌氧杆菌,其生长繁殖及产毒的最适温度为18~30℃。肉毒杆菌广泛分布于土壤、淤泥及动物粪便中,其中土壤是重要污染源,它可借助食品、农作物、水果、海产品、昆虫、禽类等传播到各处。肉毒杆菌家族一共兄弟7个,本身其实没有毒性,但其中有4个能在厌氧环境下(比如肠道、密闭发酵食品)产生肉毒毒素。食品在加工、贮藏过程中被肉毒杆菌污染,食前对带有毒素的食品又未加热或未充分加热,就易引起中毒。在我国的新疆、青海等少数民族地区几乎每年都会出现自制发酵肉制品导致的肉毒中毒、甚至死亡。肉毒毒素(botulinum toxin,AX)是肉毒杆菌产生的含有高分子蛋白的神经毒素,是目前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强烈的生物毒素,它主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱,引起肌肉松弛麻痹,特别是呼吸肌麻痹是致死的主要原因。肉毒毒素真正被大众了解,是因为一些明星注射肉毒来除皱。虽然这个毒素的毒性比较大,一点点就能毒死人,但它本身对热不稳定,煮开几分钟就破坏掉了,真正难解决的是它的芽孢。肉毒杆菌在感觉不舒服的时候就像作茧一样用一些蛋白和糖类物质把自己包起来,然后就能“刀枪不入”,一般的加工手段都杀不死它。等它重新进入合适的环境,比如人的肠道,它又能苏醒过来继续干坏事。成人由于肠道里面的菌群早已站稳了脚跟,少量的肉毒杆菌是斗不过这些“地头蛇”的,因此对成人的危险性相对较小。但婴儿尤其是1岁以下的小宝宝,正常菌群还处于建设阶段,这个时候肉毒杆菌来捣乱的话,有可能对宝宝造成较大影响。  我国乃至全世界都没有乳粉中肉毒杆菌的限量标准,因为肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物,而标准的管理是要考虑成本的,正因如此,各国都不把它写入标准。但这并不意味着根本不管,比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。用标准管理有限的问题,用过程的控制实现更全面的安全保障,这才是科学的食品安全管理理念。对于负责任的大企业,其质控项目数量和质控要求都是远远高于国家标准要求的。

  • 保健食品乳杆菌检测

    保健食品中仅含有乳杆菌和双歧杆菌两种有益菌。根据GB 4789.35-2016标准,乳杆菌数量等于乳酸菌总数(MRS平板计数结果)减去双歧杆菌数量(改良MRS平板计数结果)?会出现减成负数的结果吗?

  • 澳新修订阿维菌素等7种农兽药最大残留限量标准

    澳新修订阿维菌素等7种农兽药最大残留限量标准据澳大利亚农药和兽药管理局(apvma)消息,7月29日澳大利亚农药和兽药管理局发布 2014年第15号公报,修订《澳新食品标准法典》第 1.4.2章《最大残留限量标准》,并自发布之日起生效。 这些农药包括:阿维菌素、三氟氯氰菊酯、吡蚜酮、异丙甲草胺等7种。

  • 关于肉制品肉毒杆菌污染的科学解读

    一、背景信息  近期,加拿大和美国召回可能被肉毒杆菌污染的肉酱、鱼罐头等产品,再次引起大家对肉毒杆菌的关注。在既往解读饮料中肉毒杆菌污染基础上,本期解读肉制品肉毒杆菌污染。二、专家解读  (一)罐装和家庭自制的发酵肉制品属于易被肉毒杆菌污染的食品。  肉毒杆菌是一种厌氧菌,即在缺氧环境下才能繁殖、生成芽胞、产生毒素,芽胞具有一定耐热性,肉毒毒素具有耐酸性,因此,低酸性罐头食品(含铁罐、玻璃罐)及家庭自制的密封腌渍食物是易被肉毒杆菌污染的食品。  (二)我国已制定食品中肉毒杆菌及其毒素的相关检测标准。  鉴于肉毒毒素的可能危害性,其已在全球范围内得到高度重视,美国和欧洲每年均会发布关于该菌的流行病学调查报告。美国于1973年制定了低酸性食品罐头的良好作业规范(GMP),对低酸性食品罐头实行严格的加热杀菌管理,减少可能存在的肉毒杆菌污染风险。我国对于密封罐头等可能存在肉毒杆菌污染风险的食品,其微生物要求均为“应符合商业无菌”,并制定了相应肉毒杆菌及肉毒毒素检验方法标准和食物中毒诊断标准。  (三)企业应主动依法召回“可能给消费者带来风险的食品”。  根据资料显示,美国、加拿大报道的四起食品召回事件并不是由于肉毒杆菌导致食源性疾病暴发后的行动,而是在调查监测中发现问题和潜在风险(可能存在肉毒杆菌污染)后,生产企业的自愿召回行为,属于对社会的食品安全风险预警和对消费者的健康保护。

  • 阿维菌素在水产品中残留检测方法的建立

    阿维菌素类生物农药(avermectins, AVMs)属大环内酯类抗生素,但与一般大环内酯类抗生素不同的是阿维菌素还具有很高的杀虫活性,被誉为是近20年来抗寄生虫药物研究的重大突破。AVMs的结构新颖,作用机制独特,是一种优良的新型农畜两用抗生素,广泛用于作物种植与动物养殖中。这类药物包括爱比菌素、甲胺基阿维菌素、乙酰胺基阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、莫西丁克和塞拉菌素,其中塞拉菌素主要用于伴侣动物。按世界卫生组织(WHO)的5级分级标准, AVMs属于高毒化合物,在动物组织中残留时间较长,具有神经和发育毒性;2002年12月我国农业部公告第235号文规定在所用食品蔬菜、水果中的最高残留量200μg/kg;牛的脂肪、肝中的最高残留量100μg/kg,肾的最高残留量为50μg/kg;所用食品羊的肌肉、肝的最高残留限量为25μg/kg,脂肪的最高残留限量为50μg/kg,肾的最高残留限量为20μg/kg,并将检测农兽药中阿维菌素类药物的残留量列为残留监控重点: AVMs作为农药直接喷洒在各种农作物上,会随雨水进人水体中;作为兽药,大部分药物通过粪便以原型排出,进而污染水体;AVMs还可作为驱虫药物应用在水产养殖中,从而对水生生物和人类造成潜在危害,因此有必要建立水产品中AVMs的多残留检测方法。通过2009年对北京地区水产养殖中所使用的药物调查发现,含有阿维菌素的药物使用比较普遍,但用量与水产品中残留量尚不明确。因此有必要对北京地区水产养殖中的阿维菌素使用情况进行调查。我国目前还没有对该药物在水产品中的使用进行大范围的检测,但欧盟、日本等大多数国家已经规定其限量。因此该药物的残留直接影响到我国水产品的出口贸易。另外,北京作为国际化的大都市,食品安全的保障尤其重要,该项目的实施有助于对滥用该药物的控制与预防,使得北京市的水产品安全保障与国际接轨。目前我国测定阿维菌素残留的检测标准有:农业行业标准NY/T 1463-2007 “饲料中阿维菌素的测定 高效液相色谱法”检测限为1.5mg/g。在国内动物源性食品中阿维菌素残留量的检测还没有相关的检验标准。因此,开展水产品中阿维菌素残留量检测方法的研究,制定适合水产品中阿维菌素残留检测的标准具有十分重要的意义本研究利用高效液相色谱法-串联质谱法在水产品中此药物的残留检测技术上做了深入探究。

  • 【原创大赛】食品中阿维菌素残留的测定

    【原创大赛】食品中阿维菌素残留的测定

    阿维菌素,是一种不错的杀菌、杀虫剂。之所以说它不错,因为它的来源,是从天然的阿维链霉菌发酵制得。虽然作为农药使用,但是在环境和土壤中,很容易被微生物分解,因此无累积作用。再好的东西,也要适量使用。阿维菌素使用过量时,会引起人畜的眼睛刺激、重者昏迷,对于蜜蜂、鱼类、蚕而言,属于高毒。下面看看月旭科技参照国标,采用苹果、菠菜为样品,进行阿维菌素检测的实验过程。1、[b]适用范围[/b]食品中水果及蔬菜中阿维菌素检测测定方法(本实验采用苹果,菠菜)前处理方法参考《GB 29696-2013 牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定》《GB 23200.19-2016 食品安全国家标准 水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定 液相色谱法》2、[b]溶液的配置[/b]阿维菌素标准储备液:精密称取0.010g(精确至±0.0005g)阿维菌素标准品于10mL容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度线配置成浓度为1000μg/mL的标准储备液。阿维菌素工作液:移取0.5mL阿维菌素标准储备液于50ml容量瓶中,用乙腈稀释成10μg/mL。洗涤液:乙腈-水-三乙胺(30mL:70mL:20μL)3、[b]提取步骤[/b]样品经组织捣碎机捣碎,称取样品5g±0.05g于50mL离心管中,加入8mL乙腈,涡旋1min,离心10min(4000r/min),吸取上清液于另一50mL离心管中;残渣中加入8mL乙腈,重复提取一次,合并两次上清液,加水20mL,三乙胺50μL,混匀,待净化。4、[b]SPE净化步骤[/b]SPE柱:月旭Welchrom C18E规格:500 mg/6mL。活化:5mL乙腈,5mL洗涤液上样:待净化液全部上样,自然流干,抽干5min淋洗:3mL异辛烷,抽干5min洗脱:5mL乙腈,收集于15mL试管中氮吹至近干,用乙腈定容至1mL,过0.22μm滤膜,上HPLC检测。5、[b]注意事项[/b]1)若上样时流速过慢,可适当加压,使其能滴落;2)氮吹时注意不能过快,近干即可3)流动相和样品提取溶剂选用乙腈,乙腈提取效果好且乙腈为流动相时目标物灵敏度高4)三乙胺对阿维菌素在小柱的保留及回收率影响较大6、[b]色谱条件[/b]色谱柱:月旭Ultimate XB-C18,4.6*150mm,5μm流动相:水:乙腈(10:90)柱温:40℃进样量:20μL检测波长:245nm流速:1.0mL/min7、[b]色谱图或者加标回收率结果[/b][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081311418041_5481_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图1.阿维菌素对照0.1mg/L[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081312008871_1611_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图2.阿维菌素对照5mg/L[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081312148673_7209_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图3.苹果样品图谱[/b][/align][align=center][b][/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081312304771_2173_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图4.菠菜样品图谱[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081313014530_3128_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图5.苹果样加标0.2mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081313180901_4314_932_3.jpg!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图6.菠菜样加标0.2mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081313460964_3442_932_3.png!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图7.苹果样加标1mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,336]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081314009742_1936_932_3.jpg!w690x387.jpg[/img][/align][align=center][b]图8.菠菜样加标1mg/kg[/b][/align][align=center][img=,600,133]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081314269091_947_932_3.png!w690x154.jpg[/img][/align][align=center][b]表1:加标回收率测定结果[/b][/align][align=center][img=,600,408]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910081314496641_1527_932_3.jpg!w575x391.jpg[/img][/align]8、[b]相关产品信息[/b]

  • 解读产志贺毒素大肠杆菌O26

    一、背景信息  近日,据美国食品安全新闻网消息,由美国墨西哥风味连锁餐厅Chipotle食物中毒引发的产志贺毒素大肠杆菌O26疫情在美国蔓延,导致20人住院。美国疾病预防和控制中心(CDC)称,近两年来由产志贺毒素大肠杆菌O26引发的食物中毒事件明显增多,在未来可能引发更多的疫情,尤其是引发溶血性尿毒综合症的病例数量可能会远超过产志贺毒素大肠杆菌O157。二、专家解读  (一)产志贺毒素大肠杆菌是全球最重要的新发高致病性食源性病原菌。  产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,简称STEC)是一类携带了前噬菌体编码一种或两种志贺毒素基因的新发高致病性食源性病原菌,包括大肠杆菌O26,以及O157、O45、O103、O104、O111、O121、O145等150多种其它血清型的大肠杆菌。该菌为革兰氏阴性杆菌,无芽胞,有鞭毛。可以在10—65℃生长,最适生长温度为33—42℃,具有较强的耐酸性(pH 2.5—3.0),可以抵抗胃酸的消化作用。  据不完全统计,美国1983—2002年发生的非O157的STEC感染者中,70%是由O26、O45、O103、O121、O111 和O145血清型所致;2011年9月,美国农业部食品安全检验局曾发布通告,强调大肠杆菌O26是美国最常见的非O157 STEC。爱尔兰对肉和乳制品中非O157 STEC的分布特征研究发现,血清型O26也是引起人类食源性疾病最主要的非O157血清型。STEC O26已逐渐成为美国、日本及部分欧盟发达国家引起暴发事件的主要病原菌。  (二)肉制品是引发食源性STEC感染的主要高危食品。  牛、羊等经济型动物是STEC的天然宿主,国际相关研究发现牛和羊中STEC携带率可高达71%甚至以上。美国农业部(USDA)和欧盟食品安全局(EFSA)也证实养殖场中存在高风险污染的STEC,并且可以通过环境、粪便、野生动物、土壤等在一定范围内循环存在,最终造成肉制品等污染。1982—2006年多个国家STEC暴发事件的归因分析表明,最主要原因是肉制品污染(42.2%),其次是乳制品(12.2%)。除此之外,生鲜果蔬及其制品等也可能是STEC O26重要的传播介质。通过对美国1992—2002年期间24起STEC暴发事件统计发现,67%的疫情是由牛肉制品导致的,其中O26是最主要致病血清型。  (三)国际组织及部分国家和地区已对肉制品中STEC污染给予高度重视。  1999年第32届食品卫生法典委员会(CCFH)会议上,各国政府对食品中的微生物风险应按“食品—病原”组合进行风险管理达成共识,其中就包括“牛肉中大肠杆菌O157”。联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)食品微生物风险评估联合专家组(JEMRA)于2011年发布了风险评估会议报告(Enterohaemorrhagic Escherichia coli in raw beef and beef products: approaches for the provision of scientific advice),为如何控制生牛肉及牛肉制品中的出血性大肠杆菌提供了科学建议。但是,迄今CCFH尚未对如何应用食品卫生通则控制牛肉中的出血性大肠杆菌制定相关科学导则,也未制定相关产品的限量标准。  2012年3月,USDA宣布强制执行在初加工的牛肉制品中不得检出六大类非O157 STEC(O26、O45、O103、O121、O111 和O145)。2011年德国发生STEC O104暴发事件后,欧盟也加强了对STEC的监测和评估工作,已连续5年对食品和病人中的STEC进行监测。

  • 【原创大赛】畜禽肉中盐霉素、莫能菌素残留分析方法

    【原创大赛】畜禽肉中盐霉素、莫能菌素残留分析方法

    一、背景1.1莫能菌素﹝Monensin﹞是聚醚类离子载体抗生素,是一种[url=http://baike.baidu.com/subview/138504/138504.htm][color=windowtext]反刍动物[/color][/url]中运用较广泛的饲料添加剂;原为[url=http://baike.baidu.com/subview/150635/150635.htm][color=windowtext]链霉菌[/color][/url]所分泌的一种物质,具有控制[url=http://baike.baidu.com/subview/39929/39929.htm][color=windowtext]瘤胃[/color][/url]中[url=http://baike.baidu.com/subview/3852509/3852509.htm][color=windowtext]挥发性脂肪酸[/color][/url]比例,减少瘤胃中蛋白质的降解,降低饲料干物质消耗,改善营养物质利用率和提高动物能量利用率等作用。1.2莫能菌素为百盛客户对肉类原料中兽药残留的监控项目,为了应对客户要求,满足实验室检测要求,对莫能菌素进行新项目技术开发。盐霉素为原有分析项目,此次技术开发对盐霉素前处理及仪器分析条件重新优化,与莫能菌素合并同为聚醚类抗生素检测检测方法。[img=,490,100]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141014_01_3081717_3.png[/img]二、前处理流程2.1提取称取(2.00±0.02)g样品,加入10mL乙腈混匀,再加入3.00g无水硫酸钠,震荡混匀,超声提取10min;离心取上清液于50mL离心管中,残渣加入5mL乙腈重复提取,合并两次上清液,定容至20mL,加入5mL乙腈饱和正己烷,震荡离心。2.2净化取下层(乙腈层)5mL于圆底烧瓶中,旋转蒸发至1mL,氮气吹干。普通肉类基质:圆底烧瓶中加入1mL乙腈超声溶解。内脏类基质:圆底烧瓶中加入3mL甲醇+水(1+1)超声溶解,过Waters HLB柱(waters oasis HLB 6cc/200mg依次用5mL甲醇 5mL水活化),用5mL水淋洗,5mL甲醇洗脱于100mL圆底烧瓶中,40℃减压蒸干,加入1mL乙腈超声溶解。三、仪器分析条件([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]MS8050)3.1质谱参数:离子源ESI源 Nebulizing Gas Flow: 3 L/min HeatingGas Flow: 10 L/min Interface Temperature 300 ℃;DLTemperature 250 ℃;Heating Block Temperature 400℃ Drying Gas Flow: 10 L/min [table=595][tr][td=1,2]化合物名称[/td][td=1,2]Precursor m/z[/td][td]Product[/td][td]Dwell Time[/td][td]Q1 Pre[/td][td=1,2]CE[/td][td]Q3 Pre[/td][/tr][tr][td]m/z[/td][td](msec)[/td][td]Bias(V)[/td][td]Bias(V) 1[/td][/tr][tr][td=1,3]莫能菌素[/td][td]688.6[/td][td]635.50*[/td][td]100[/td][td]-26[/td][td]-18[/td][td]-28[/td][/tr][tr][td]688.6[/td][td]461.35[/td][td]100[/td][td]-26[/td][td]-26[/td][td]-30[/td][/tr][tr][td]688.6[/td][td]617.5[/td][td]100[/td][td]-26[/td][td]-24[/td][td]-28[/td][/tr][tr][td=1,3]盐霉素[/td][td]773.1[/td][td]431.20*[/td][td]100[/td][td]-28[/td][td]-53[/td][td]-28[/td][/tr][tr][td]773.1[/td][td]531.35[/td][td]100[/td][td]-28[/td][td]-46[/td][td]-36[/td][/tr][tr][td]773.1[/td][td]413.2[/td][td]100[/td][td]-28[/td][td]-53[/td][td]-27[/td][/tr][/table]3.2液相参数: 流动相组成:A: 0.1%甲酸 B: 乙腈;流速:0.35Ml/min;A -10% B -90%恒流分析;进样量:2uL;色谱柱型号:ODS-III 1.6μm四、实验结果及分析4.1线性配制盐霉素、莫能菌素混标(稀释溶剂:乙腈),0.1ug/kg、1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg五个浓度点,仪器分析线性如下:[img=,490,157]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141016_02_3081717_3.png[/img][img=,490,173]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141017_01_3081717_3.png[/img]以上实验中,盐霉素、莫能菌素标准曲线R[sup]2[/sup]均大于0.99,各浓度点精密度良好;仪器分析标准品线性、稳定性符合实验要求。4.2选择性选取牛肉样品进行空白、添加回收实验,实验谱图如下:[img=,490,173]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141019_01_3081717_3.png[/img][img=,490,173]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708141019_02_3081717_3.png[/img]4.3真度对空白牛肉进行前处理,采用空白样品萃取液与溶剂稀释统一标准品标准品,同一浓度下两者峰面积比值的百分比作为真度评价参数,实验结果及谱图如下: [table=386][tr][td]基质类型[/td][td]化合物名称[/td][td]基质稀释标准品[/td][td]溶剂稀释标准品[/td][td]真度(%)[/td][/tr][tr][td=1,2]牛肉[/td][td]盐霉素[/td][td]116,440[/td][td]107,537[/td][td]106.4%[/td][/tr][tr][td]莫能菌素[/td][td]9,845[/td][td]13,312[/td][td]74.0%[/td][/tr][/table]以上实验中牛肉基质对盐霉素无明显基质效应,对莫能菌素产生一定的基质效应,基质效应在70%左右,在可接受范围之内,日常分析准确定量可以做spiked校正。6实验总结本次试验,从前处理、仪器分析、实验分析的真度、精密度、准确度等多项参数验证了此方法的适用性及准确性,可初步满足试验要求,后续继续多基体验证。

Instrument.com.cn Copyright©1999- 2023 ,All Rights Reserved版权所有,未经书面授权,页面内容不得以任何形式进行复制