枯草芽胞杆菌噬菌体

枯草芽孢杆菌芽孢的制备，可以直接用固体培养基培养芽孢后离心获取吗

有了解枯草芽孢杆菌的么 3610和168trpc2两种菌株有什么不同吗

枯草芽孢杆菌检测鉴定方法有哪些？是否有相应标准？谢谢

枯草芽孢杆菌有没有什么选择性培养基，或显色培养基呢？ 在营养琼脂上培养呈褶皱菌斑，加上革兰氏镜检，是否能初步鉴定为枯草呢？ 有没有什么检测方法是被认可的，或有资料支持的呢？

我正在做用微生物处理鱼塘污水，有可以提供枯草芽孢杆菌菌种的朋友吗？谢谢！我的邮箱： zhouyunzhi22@163.com

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

近日，美国巴尔的摩Intralytix公司研制出一种基于噬菌体的EcoShield产品，该产品能显着减少甚至清除碎牛肉中的大肠杆菌O157:H7,此产品目前已获得FDA批准，其纯天然的除菌方式受到FDA的高度评价。 Intralytix公司首席执行官表示，虽然EcoShield产品并非对抗大肠杆菌的"高招",然而它确实提供了一个"杀灭步骤",由此可将大肠杆菌显著得减少或清除99%至100%。 EcoShield产品由三种噬菌体混合而成，对人体、动物、植物无害，能有效的防护大肠杆菌O157:H7。

[font=宋体]噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]phage display[/font][font=宋体]）是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框能正确表达，使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面，可以保持相对的空间结构和生物活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然后利用靶分子，采用合适的淘洗方法，洗去未特异性结合的噬菌体。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过[/font][font=Calibri]3-5[/font][font=宋体]轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体抗体库的构建和筛选技术流程：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体展示技术中，[/font][font=Calibri]M13[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]f1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]fd[/font][font=宋体]噬菌体是最常用的噬菌体，属于[/font][font=Calibri]Ff[/font][font=宋体]家族。与展示密切相关的有两种结构蛋白质：主要衣壳蛋白[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]（或[/font][font=Calibri]gp8[/font][font=宋体]）和次要衣壳蛋白[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]（或[/font][font=Calibri]gp3[/font][font=宋体]）。[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]含有[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个拷贝，以较低的价态存在； [/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]含有[/font][font=Calibri]2700[/font][font=宋体]个拷贝，以较高的价态存在。因此，[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]有利于筛选具有较高亲和力的配体，[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]可用于筛选具有较低亲和力的配体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该技术实现了基因型与表型的统一，目的基因（粉红色）被克隆至噬菌体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]基因，其产物（抗体、肽）以融合蛋白的形式展示到噬菌体的表面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]噬菌体展示技术的筛选过程包括：[/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）一个包含[/font][font=Calibri]106~1011[/font][font=宋体]个克隆的噬菌体文库与包被抗原孵育。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）清洗并除去未结合的噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）洗脱与抗原结合的噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）洗脱下来的噬菌体在辅助噬菌体的帮助下感染大肠杆菌从而扩增洗脱下来的候选噬菌体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）将细胞接种到可筛选的平板上并进行扩增。以上步骤重复[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]次，使得与目标抗原结合噬菌体被富集。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供噬菌体抗体库技术平台，包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font][font=宋体] [/font]

一、目的要求 学习并掌握芽孢染色法。 二、基本原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。三、器材 枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）； 孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。 四、操作步骤 方法1、 （1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。 （4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。 （6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 方法2、 （1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。 （2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。 （3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。 （4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。 （5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。

原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑——噬菌斑。了解噬菌体的特性，快速检查、分离并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体数量增加。采用生物测定法进行噬菌体检查，约需12h，因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染，以便采取必要的防范措施。根据正常发酵（培养）液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮；而侵染有噬菌体的发酵（培养）液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因而在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮，可以进行噬菌体检查。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往不适用。噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。

[size=18px][font=宋体] 在大肠菌群测定过程中，革兰氏染色（Gram Stain）又是一步很重要的鉴定阶段，革兰氏染色的正确性直接关系到能否正确判断该菌落是不是大肠菌群，而革兰氏染色正是一门难以掌握的最基本的细菌学实验技术，许多分析人员因缺少这方面熟练技术而显得对革兰氏染色结果没有把握，有的只好通过多次反复试验以求得一个仍不很肯定的判断结果，既浪费时间又不能保证染色结果是否正确，很可能还导致大肠菌群测定错误或失败，我们在多年的大肠菌群测定分析的实践基础上，通过纯培养一株大肠杆菌（Escherchiacoli ）和一株枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis）并进行多种条件下的革兰氏染色实验比较，以观察革兰氏染色易受哪些因素影响，从而进一步研究这项技术的最佳操作方法。[/font][/size][font=宋体][size=18px][font=宋体]1 [/font][/size][size=18px][font=宋体]实验材料1.1 大肠杆菌 大肠杆菌是大肠菌群中很重要也很有代表性的一种．在某次大肠菌群测定过程中，选取伊红美兰琼脂培养基上不同的典型菌落，按《应用微生物学实验法户〕 中大肠菌群细菌分离法得到甲基红试验阳性、VP 试验阴性、发酵柠檬酸盐阴性、利用脉酸试验阴性等特征的一株大肠杆菌．[/font][/size][font=宋体][size=18px]2 [/size][size=18px]实验结果与分析 2.1菌龄的影响 16h 和24h的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌革兰氏染色均能得到正确结果，但32h以上的枯草芽抱杆菌有13.3％出现阴性结果。出现阴性反应的枯草芽抱杆菌同时发现很多菌体已经不呈典型杆状，显然由于培养时间过长，枯草芽抱杆菌（阳性菌）或已死亡或部分菌自行溶解了，造成细胞壁通透性增大而呈假阴性。因此在大肠菌群测定时，细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h，以免阳性菌呈假阴性干扰革兰氏染色的正确性．2.2细菌堆积密度影响 涂片时生理盐水中细菌浓厚时，菌体明显堆积在一起，从而影响酒精脱色效果，甚至在细菌堆中仍残留结晶紫，因而无论大肠杆菌还是枯草芽抱杆菌，凡密集成堆的常常呈阳性反应，而均匀分散的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌都能得到正确结果，因此测定时应以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准． 我们认为在大肠菌群革兰氏染色时菌龄、细菌密集程度、媒染时间、酒精脱色程度这几方面因素会对染色的正确性产生影响．在大肠菌群测定时，革兰氏染色的最佳条件应该是：细菌在伊红美兰琼脂培养基上培养时间不宜超过24h ，涂片时应以分散开的细菌染色为准，碘媒染时间以1 min为宜，酒精脱色程度是革兰氏染色的关键，脱色时间应严格控制在2S 一30S之间。为进一步确证革兰氏染色操作正确，应把未知菌伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落（cdony）与已知的大肠杆菌和枯草芽抱杆菌的混合菌同片染色，如果混合菌能分辨出阳性菌和阴性菌，则也能肯定未知菌革兰氏染色结果是正确的．[/size][/font][/font]

[font=宋体]噬菌体展示技术是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。下面为大家介绍噬菌体展示技术基本流程：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一般来说，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]有以下[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个步骤[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]1:[/font][font=宋体]构建噬菌体展示库[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术用于将外来[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]整合到病毒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中，使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面，而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库，如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]：结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这些库暴露于选定的目标，只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体，如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]：洗涤[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走，只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]：洗脱[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]：放大[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增，或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示的应用[/b][/font][font=宋体]噬菌体展示技术在基础研究、诊断和治疗应用领域发挥了关键作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组抗体具有高特异性和高亲和力，可用于在侧流分析（[/font][font=Calibri]LFA[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]和细胞成像等多种诊断平台中快速准确地识别样本中的目标抗原。大多这些平台都利用抗原捕获测定或抗体捕获测定来诊断某些疾病的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]阿达木单抗（市场名为[/font][font=Calibri]Humira[/font][font=宋体]）是首款通过噬菌体展示技术获得上市批准的治疗性抗体，其可中和肿瘤坏死因子，主要用于治疗类风湿性关节炎。噬菌体展示技术的出现，使得抗体药物的研发有了突破性进展，已成为最重要的药物筛选平台之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display]噬菌体展示技术平台[/url]，详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font='calibri'][size=13px]噬菌体展示技术流程、原理及九大问题解析[/size][/font]原理：噬菌体展示技术，是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。基于噬菌体展示抗体库构建和筛选的专业知识，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。噬菌体展示技术流程：噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到90%，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。①义翘神州的噬菌体展示平台可以针对哪些种属的抗体进行开发？目前可以对小鼠 、兔子、鸡、人等多个种属的抗体开发进行建库。②义翘神州的噬菌体展示库建库库容有多大？免疫库的库容在5×108~2×109，天然库的库容可以达到1011。③义翘神州的噬菌体展示库筛选抗体的多样性如何？根据不同要求，可以提供十几个到上百个unique hits。④义翘神州噬菌体展示库抗体开发周期需要多长时间？免疫库从建库到获得质粒需要8周时间，天然库需要6周时间。⑤义翘神州噬菌体展示库及其筛选出的克隆可以保存多久？均可保存一年以上。⑥怎样衡量一个库的好坏，有哪些标准？除了库容大小，还可以通过电泳判断插入率，以及通过一代测序验证抗体构建的正确率，评估抗体库的真实库容。或通过二代测序，获得库的序列多样性和覆盖率等具体信息。⑦淘洗时筛选到非特异抗体怎么解决？被动的方法是利用负筛，尽快能去掉非特异克隆。主动的方法是更换免疫原，选择不仅免疫原性好且活性好、特异性强的免疫原。⑧淘洗过程中，如何判断淘洗是否可以终止？有多种途径可以判断，比如通过计算噬菌体淘洗前后的产出和投入比、将每轮淘洗的克隆测序观察序列是否出现富集、以及将噬菌体库检测ELISA等。⑨如何筛选到亲和力高的抗体？可以尝试降低抗原包被量，同时增加洗涤力度。更多详情可以关注：噬菌体抗体库技术平台https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display

噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

各位好，我想请教一个问题，我们做噬菌体的实验，请问噬菌体买回来怎么处理啊，就是怎么扩增、保存啊？和细菌的保存一样吗？谢谢！

噬菌体的主要作用是()。 A、噬菌体的分型鉴定 B、杀灭细菌 C、繁殖 D、A+C

病毒（噬菌体）买回来以后，应该怎么操作啊，是跟细菌菌种一样进行复苏，传代吗？我们要买的是MS2病毒，具体操作步骤能否提供一下啊（用什么培养基，怎么操作）以前没有接触过这类测试，谢谢！

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]是一种筛选技术，通过基因工程技术将外源蛋白或多肽的基因序列插入到噬菌体，进行多轮筛选，最终在体外获得具有高特异性和高亲和力的重组抗体。[/font][font=宋体][font=Calibri]1985[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Smith[/font][font=宋体]首先发现外源[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段可以融合到非裂解丝状噬菌体[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]外壳蛋白的编码基因上，并以融合蛋白的形式表达在病毒表面，而不影响噬菌体的传染性。随后，[/font][font=Calibri]Winter[/font][font=宋体]颠覆了噬菌体展示的过程，他使用噬菌体展示抗体（而不是蛋白质），然后找出与分子甚至细胞结合的目标抗体。噬菌体展示技术这一发明，为单克隆抗体药物的发现带来了巨大的改变。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]杂交瘤和噬菌体展示技术都属于重要的单克隆抗体制备技术。然而，每种方法都有其局限性，以下表格是两者的优势和缺点对比。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]噬菌体展示技术优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]? 大规模生产[/font][font=宋体]? 周期快[/font][font=宋体]? 筛选过程易于控制[/font][font=宋体]? 易于筛选大量的不同克隆[/font][font=宋体]? 可直接筛选人类文库[/font][font=宋体]? 可用于筛选有毒抗原[/font][font=宋体][font=宋体]? 无免疫原性问题（对于[/font][font=Calibri]na?ve[/font][font=宋体]文库）[/font][/font][font=宋体]? 无克隆生存能力问题[/font][font=宋体]? 直接获得序列[/font][font=宋体][font=宋体]? 无动物使用（对于[/font][font=Calibri]na?ve[/font][font=宋体]文库）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]?价格昂贵[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]binders[/font][font=宋体]可能有较低的亲和力[/font][/font][font=宋体]? 技术更难[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]杂交瘤技术优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]? 大规模生产[/font][font=宋体]? 高产量[/font][font=宋体]? 高特异性[/font][font=宋体]? 高灵敏度[/font][font=宋体]? 低成本[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]? 周期长[/font][font=宋体]? 需要人源化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]基于噬菌体展示平台，义翘神州可为客户提供多种噬菌体展示文库构建和筛选服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多噬菌体展示技术和[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display][b]噬菌体抗体库技术平台[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display[/font][/font]

3，聚赖氨酸，它是由链霉素产生的一种具有抑菌功效的多肽，进入人体后可以完全被消化吸收，不但没有任何毒副作用，而且可以作为一种赖氨酸的来源。它具有抑菌谱广、水溶性好、安全性、抑菌范围广等特点。赖氨酸发酵液对多种菌有抑制作用。其中作用明显的有金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、红酵母。同时聚赖氨酸也具有一定的抗噬菌体的能力。它能吸附到上，破坏微生物的结构，引起细胞的物质、能量和信息传递中断，并导致胞内溶酶体膜破裂而诱导微生物产生自溶作用，终导致细胞死亡。聚赖氨酸的应用处于研发阶段，在食品方面目前尚未列入使用卫生标准。

我想请问一下，就是做噬菌体的实验时，为什么要用双层平板啊？这个双层平板有什么作用吗？跟单层的话有什么区别

[b][size=12px][font=微软雅黑]关于蜡样芽孢杆菌[/font][font=微软雅黑][/font][/size][/b][size=12px][font=微软雅黑]1、蜡样芽胞杆菌[i][/i]为革兰氏阳性大杆菌，大小为1-1.3×3-5μm，兼性需氧，[/font][b][font=微软雅黑]形成芽胞[/font][/b][font=微软雅黑]，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，与炭疽杆菌相似。引起食物中毒的菌株多为周鞭毛，有动力。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][size=12px][font=微软雅黑]2、[/font][font=微软雅黑]培养特性　　[/font][b][font=微软雅黑]蜡样芽胞杆菌生长温度为25-37℃，最佳温度30-32℃。在肉汤中生长混浊有菌膜或壁环，振摇易乳化[/font][/b][font=微软雅黑]。在普通琼脂上生成的菌落较大，直径3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，边缘常呈扩展状。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][size=12px][font=微软雅黑]3、[/font][font=微软雅黑]耐热性　　蜡杆芽胞杆菌耐热，[/font][b][font=微软雅黑]其37℃16小时的肉汤培养物的D80℃值（在80℃时使细菌数减少90%所需的时间）约为10-15分钟；使肉汤中细菌（2.4×107/mL）转为阴性需100℃20分钟。其游离芽胞能耐受100℃30分钟，而干热灭菌[i][/i]需120℃60分钟才能杀死[/font][/b][font=微软雅黑]。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][font=微软雅黑][size=12px]4、在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。　蜡样芽胞杆菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引起中毒的食品常于食前由于保存温度不当，放置时间较长或食品经加热而残存的芽胞以生长繁殖的条件，因而导致中毒。[font=微软雅黑]（转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif]食品微生物工程师[/font][font=微软雅黑]）[/font][/size][/font]

噬菌体可以用质谱定量分析吗，不管是根据蛋白或者根据核苷酸。噬菌体的蛋白可以被酶切吗。酶切后定量特征肽段，可行吗？

常用的有琼脂斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、甘油冷冻管保藏法、低温冷冻保藏法等，方法很多。 我选用液体石蜡保存方法，该方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌（如芽孢杆菌属、乙酸杆菌属等）和某些丝状真菌（如：青霉属、曲霉属等），而某些细菌（如：固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌等）和一些真菌（如：卷霉菌、小克银汉霉、毛霉等）不宜采用此法进行保存。微生物检验常用以下菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌药典也没有要求怎样保存，只说选用适宜的保存方法需要验证。但是肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌这些菌种用液体石蜡保存方法适合不？

Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 . Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 ：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌

请教各位：我现在想用透射电镜拍摄噬菌体（一种病毒），负染后电镜，请问支持膜选哪种好呢，碳支持膜、微栅、超薄碳膜、多孔膜？非常感谢！！！

美国典型物保藏中心，又称美国模式典型物收集中心(ATCC)，ATCC是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织。目前它可以提供以下物品：细胞系（3000种）；细菌和噬菌体（15000种）；动植物病毒（2500种）；原生动物 1200种以及重组物品等。北京时代新光TEl: 010-87875910 010-87875015 13371681771 E-mail: zfyu@ bio-life.cnweb: www.bio-life.cn

我想请问2010版的药典上的无菌中的灵敏度的检查，说到了金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 、枯草芽孢杆菌 、生孢梭菌 、白色念珠菌 、 黑曲霉这5种菌，在实际操作中难道都要做吗？还是选择一个革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌就可以了呢？ 我公司的产品是无菌。