似梨木双黄酮吡喃葡

[align=center][b][font='times new roman'][size=18px]卷柏[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]穗花杉双黄酮[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]测定[/size][/font][/b][/align][font='tahoma'][size=14px]小记：[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]我们当时接收到客户样品，进行测定出现[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]跟之前[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]枳壳的问题，发现样品有可能是被提取过又卖出的，含量没测到，后来去药店买来饮片测[/size][/font][font='tahoma'][size=14px] [/size][/font][font='tahoma'][size=14px]是没有问题的[/size][/font][font='tahoma'][size=14px][color=#000000]。[/color][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231829035304_6700_1858223_3.jpeg[/img][/align][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']材料与试剂[/font][font='times new roman']乙腈（色谱级）、[/font][font='times new roman']甲醇、磷酸[/font][font='times new roman']（分析纯）、[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']（购自中检院）、[/font][font='times new roman']卷柏[/font][font='times new roman']药材[/font][font='times new roman']样品（送检样品）[/font][font='times new roman']和药店购买[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']2 [/font][font='times new roman']色谱条件[/font][font='times new roman']LC-20AT[/font][font='times new roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]（日本岛津），色谱柱：[/font][font='times new roman']Zorbax[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']SB[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']C18(250mm*4.6μm*5μm)[/font][font='times new roman']（安捷伦），流动相：以[/font][font='times new roman']甲醇[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']0.1%[/font][font='times new roman']磷酸水[/font][font='times new roman']梯度洗脱[/font][font='times new roman']；[/font][font='times new roman']柱温[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']℃[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']检测波长为[/font][font='times new roman']33[/font][font='times new roman']0nm[/font][font='times new roman']，流动相如下表：[/font][align=center][img=,690,152]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231831114264_3477_1858223_3.jpg!w690x152.jpg[/img][/align][align=left][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']溶液制备[/font][font='times new roman']（按照中国药典[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']020[/font][font='times new roman']年版一部[/font][font='times new roman']卷柏[/font][font='times new roman']项下测定）[/font][/align][font='times new roman']对照品溶液的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取穗花[/font][font='times new roman']杉双黄酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每[/font][font='times new roman']1m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']含[/font][font='times new roman']0.1[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']mg[/font][font='times new roman']的溶液，即得。[/font][align=center][font='times new roman']　[img=,671,183]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231832332250_1831_1858223_3.jpg!w671x183.jpg[/img][/font][/align][align=center][font='times new roman']　　[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']对照品色谱图[/font][/align][font='times new roman']　[/font][font='times new roman']供试品溶液[/font][font='times new roman']的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取本品粉末（过三号筛）约[/font][font='times new roman']0.2g[/font][font='times new roman']，精密称定，[/font][font='times new roman']置具塞[/font][font='times new roman']锥形瓶中，精密加入甲醇[/font][font='times new roman']50m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']，称定重量，加热回流[/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman']小时，放冷，再称定重量，用甲醇[/font][font='times new roman']补足减失的[/font][font='times new roman']重量，摇匀，滤过，[/font][font='times new roman']取续滤液[/font][font='times new roman']，即得。分别精密吸取对照品溶液[/font][font='times new roman']10[/font][font='times new roman']μ[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']，注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，测定，即得。[/font][align=center][img=,683,186]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211231832537485_797_1858223_3.jpg!w683x186.jpg[/img][/align][font='times new roman'][/font][align=center]卷柏药材色谱图[/align][font='times new roman']结果：客户送检样品[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']未检出，药店购买卷柏药材[/font][font='times new roman']穗花杉双黄酮[/font][font='times new roman']含量为[/font][font='times new roman']0.[/font][font='times new roman']41%[/font][font='times new roman']注：[/font][font='times new roman']因为卷柏回流时间比较长，要多关注冷凝水及水浴锅，以免冷凝不及时，溶液挥干，影响提取效果。[/font][font='times new roman']我们再购买药材时不仅要从性状进行鉴别，更要根据中国药典进行含量检测，有必要的可以要求出示相关检测报告，以免买到劣药或者假药。[/font]

黄酮类化合物在自然界分布非常广泛，是一类非常重要的天然有机化合物。传统意义上黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，现在泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。根据黄酮类化合物结构特点，可分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、查耳酮、异黄酮、双黄酮、花色素等种类。黄酮类化合物具有多方面的生物活性，如葛根总黄酮及葛根素(puerarin)、银杏叶总黄酮等具有扩张冠状血管作用，临床用于治疗冠心病；水飞蓟素(silymarin)、异水飞蓟素( silydianin)及次水飞蓟素(slychristin)等有肝脏保护作用，临床上用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种中毒性肝损伤等；木犀草素(luteolin)、黄芩苷( baicalin)、黄芩素(baicalein)以及槲皮素等具有抗菌、抗病毒作用；牡荆素( vitexin)、桑色素、儿茶素等具有抗肿瘤作用等。游离黄酮类化合物一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱水溶液中。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中。花色苷及其苷元以离子形式存在具有盐的通性，亲水性较强，水溶度较大。黄酮化合物单体的分离主要依靠各种色谱方法来实现，除经典的柱色谱法和薄层色谱法、HPLC外，近年来HSCCC已经得到广泛的应用。对于多数极性较弱的黄酮苷元，在进行HSCCC分离实验时，通常可以选用氯仿-甲醇-水的溶剂系统，而氯仿-甲醇-水(4:3:2或5:3:2)则是最常用的溶剂系统。根据被分离样品的具体情况，在上述溶剂系统的基础上，对组成诸元的比例进行适当的调整，就能获得良好的分离效果。还有些苷元也可采用正己烷（石油醚）-乙酸乙酯-甲醇-水的溶剂系统，通过调整溶剂的组成比例来实现有效分离。对于极性较强的黄酮糖苷类成分的HSCCC分离，通常使用的是乙酸乙酯–水为基本结构的溶剂系统，可以通过添加正丁醇、甲醇、乙醇、乙酸来调节溶剂系统的极性。分离这类化合物的典型性溶剂系统有：氯仿-[color

作者：张洪涛;蔡俊安;郭鑫慧;（河南百年康鑫药业有限公司;）摘要：目的采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中绿原酸的含量。方法用外标一点法,Diamonsil ODS1 C18色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(15:85:1)为流动相,流速为1.0mL/min,λ=324nm。结果绿原酸在0.060～1.210μg范围内呈良好线性,回归方程为Y=105427X+586.43,r2=0.9995,平均加样回收率为99.3%,RSD=0.82%(n=6)。结论本方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,为双黄连颗粒中绿原酸的定量分析提供了科学有效的方法 。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208131049_383398_1606903_3.jpg

寒冷的冬天，整个人都是懒洋洋的，尽管有很多试验经历、色谱柱使用体会、很多的原创素材，都懒的起笔。2013年马上来临，趁着2012年的第五届原创大赛，赶快记录一篇原创，分享自己更多的使用体会与试验经历给大家探讨。这次检测的是大豆异黄酮，说起这个，估计很少人接触，而我已经跟它已经认识了好几年。异黄酮是一类物质，有苷和苷元之分，可是接触了很久都不知道苷和苷元有什么区别，为什么这个叫苷，另外一个就叫苷元。而且保健品中有很多叫甙，我也搞不清楚甙和苷有什么区别。大豆异黄酮的测定，目前存在的标准方法：GB/T 23788-2009保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法NY/T 1252-2006大豆异黄酮http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281607_416709_1608710_3.jpg实验过程：色谱柱：Topsil 液相色谱柱（C18，5um，4.6*250mm）检测波长：260nm流动相：乙腈+0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱流速：1.0mL/min进样量：20ul先晒晒标准上的图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281611_416712_1608710_3.jpg以下是我测定的色谱图，根据出峰顺序依次是大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素。标准色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281614_416716_1608710_3.jpg保健食品样品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212281615_416718_1608710_3.jpg总结：1、总体来说，4个组分的保留时间和色谱峰都能与标准对应重现2、色谱峰的理论塔板数都很好，这根柱子已经用了一段时间，具体测了多少样品就不清楚了3、以前检测测的是大豆素和染料木素，同时测定4个还是第一次，效果还算满意你测试过大豆异黄酮吗？有经验赶快讨论吧

大豆异黄酮是从植物中提取，与雌激素有相似结构，因此又称植物雌激素，大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性，是天然的癌症化学预防剂。主要成分：大豆甙(Daidzin)，大豆甙元(Daidzein)，染料木甙(Genistin)，染料木素(Genistein)，黄豆甙(Glycitin)，黄豆甙元(Glycitein)。迪马科技用户采用Endeavorsil C18超高效液相色谱柱成功实现8分钟内6种大豆异黄酮的良好分离，对于大豆异黄酮的分离和检测具有实际意义。UPLC色谱分析条件*：色谱柱：Endeavorsil C18 50 × 2.1 mm, 1.8 μm（Cat.#.：87002）流动相：A：0.2%的磷酸水溶液，B：乙腈时间（min）02467A（%）9085706090B（%）[align=cente

[align=center][b]超高效液相色谱-串联质谱法测定大豆中大豆异黄酮的含量[/b][/align][align=center]户江涛[/align][align=center]（农业农村部豆类产品质量安全风险评估实验室（佳木斯），黑龙江省农垦科学院测试化验中心，黑龙江佳木斯 154007 ）[/align]摘要：采用超高效液相色谱-串联质谱法建立了检测大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。试样经90%甲醇水提取后，6种大豆异黄酮在C[sub]18[/sub]色谱柱上以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相，进行液相色谱分离；质谱检测采用电喷雾正离子化模式和多反应监测模式（MRM）。结果表明，6种大豆异黄酮分别在0.01~0.5 mg/L（D、GL、G）和0.002~0.1 mg/L（De、GLe、Ge）范围内线性关系良好，相关系数（R）为0.9993~0.9998，定量限（LOQ）为0.0001 g/kg。在大豆空白样品添加浓度分别为0.01、0.05、0.2 g/kg（De、GLe、Ge）和0.2、1、2 g/kg（D、GL、G），6种大豆异黄酮的平均回收率为86.6%~96.2%，相对标准偏差（RSD）为1.07%~5.93%（n=6）。本方法简便、灵敏、抗干扰，适用于大豆中大豆异黄酮含量检测。关键词：超高效液相色谱-串联质谱；大豆；大豆异黄酮[align=center]Determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry[/align][align=center]HU Jiangtao[/align][align=center]([i]Laboratory of Qualityand Safety Risk Assessment for Soybean products, Ministry of Agriculture andRural Affairs, Testing and Analysis Center of Heilongjiang Academy of LandReclamation Sciences, Jiamusi 154007,China[/i])[/align][b]Abstract：[/b]A methodwasdeveloped for the determination of soybeanisoflavone in soybean by ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS). The samples were extracted by 90% methanol-water, then 6 soybean isoflavones were separated on aWaters BEH C[sub]18[/sub] column with gradient elution with the mobile phase of0.1% formic acid and acetonitrile, and finally detected by positive eletrosprayionization-mass spectrometry(ESI[sup]+[/sup]-MS/MS) in multiple reactionmonitoring(MRM) mode. The results showed the linearities of 6 soybean isoflavones were good in the concentrationrange of 0.01~0.5 mg/L（D、GL、G）and 0.002~0.1 mg/L（De、GLe、Ge）, the correlation coefficients were 0.9993~0.9998. The limitof quantification(LOQ) of soybean isoflavone was 0.0001 g/kg. At the spiked levels of 0.01、0.05、0.2 g/kg（De、GLe、Ge）and 0.2、1、2 g/kg（D、GL、G） in the blank soybean samples, the mean recovery of soybeanisoflavone was 86.6%~96.2%, andthe relative standard deviation(RSD) was 1.07%~5.93%（n=6）.This method is simple,sensitive, anti-jamming and suitable for simultaneous determination of soybean isoflavone in soybean.[b]Key words: [/b]ultra performance liquid chromatography-tandem massspectrometry (UPLC-MS/MS) soybean soybean isoflavone大豆异黄酮（soybean isoflavone）是一族化合物的统称，是大豆植物体内的一种次生代谢产物，是大豆主要活性成分之一，其母核为3-苯并吡喃酮，主要包括大豆苷、大豆黄苷、染料木苷及其相应苷元[sup][/sup]。研究表明，大豆异黄酮除具有天然抗氧化作用外[sup][/sup]，还具有降低胆固醇含量、预防多种癌症及改善妇女更年期综合征等多方面生物功效[sup][/sup]。大豆异黄酮主要存在于大豆籽实中，其总含量约为0.4~5 g/kg，其中大豆苷、大豆黄苷和染料木苷这三种含量约占总量的97%~98%，而其对应的苷元含量仅占2%~3%左右[sup][/sup]。目前，大豆异黄酮的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）[sup][/sup]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]、紫外分光光度法[sup] [/sup]、质谱法（HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[sup][/sup]）等。紫外分光光度法[sup] [/sup]只能测定大豆异黄酮总量，且灵敏度不高；[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]需要对异黄酮进行衍生，前处理复杂；目前，大豆异黄酮检测现有的国家标准GB/T 26625-2011[sup] [/sup]采用的是高效液相色谱法（HPLC），在实际检测过程中发现，由于紫外检测器灵敏度不高，存在个别样品中异黄酮相应苷元检测不到的情况；同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质影响色谱柱柱效，以至于不能满足分离度要求，严重干扰低含量组分峰面积积分定量。而[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法质谱检测器灵敏度高，通过选定大豆异黄酮的特征离子，能有效去除上述杂质干扰，定量更加准确可靠。目前，国内外采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法检测大豆中大豆异黄酮含量的文献很少[sup][/sup]。本文对大豆中大豆异黄酮检测的前处理方法借鉴GB/T 26625-2011[sup][/sup]，提取液改用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS测定。该方法前处理过程简便、灵敏度高、分析时间短、抗干扰能力强，适用于大批量大豆样品中大豆异黄酮含量的检测。[b]1 实验部分[/b]1.1 材料与试剂大豆苷（daidzin,记为D，以下同）、大豆黄苷（glycitin,GL）、染料木苷（genistin, G）、大豆素（daidzein,De）、大豆黄素（glycitein, GLe）、染料木素（genistein,Ge）（纯度≥99%，Dr.Ehrenstorfer公司）；甲醇、乙腈、甲酸（色谱纯，Fisher公司）；实验用水为Millipore纯水仪制备。1.2 仪器与设备Acquity UPLC型超高效液相色谱仪（Waters公司）；XEVO TQ-S三重四级杆质谱仪（Waters公司）；KQ-500DE型超声波仪（昆山市超声仪器有限公司）；涡旋混合器（IKA公司）；CR21GⅢ型高速离心机（HITACHI公司）。1.3 大豆异黄酮标准储备液的配置分别称取适量的D、GL、G、De、GLe、Ge标准品，用甲醇配置成质量浓度为1mg/mL标准储备液，于-18℃冰箱保存（有效期6个月），待用；使用时用10%甲醇水逐级稀释成所需浓度的混合标准工作液，现用现配。1.4 样品前处理提取：称取粉碎均与后的试样1.0g（精确到0.01g）于50mL聚乙烯离心管中，加入10.0 mL90%甲醇水，涡旋混合30 s后置于60℃超声波清洗器中提取30 min，在离心机中以15000 r/min离心5 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，残渣再加入10.0 mL90%甲醇水溶液按上述步骤提取后，合并两次上清液于100 mL容量瓶中，用10%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀。a）De、GLe、Ge的测定：取1 mL过0.22ｕm有机系微孔滤膜，供UPLC/MS/MS分析测定；b）D、GL、G的测定：由于D、GL、G含量较高，需要将a）中过完滤膜的待测液用10%甲醇水稀释50倍后，供UPLC/MS/MS分析测定。1.5 液相色谱及质谱条件液相色谱：色谱柱:Waters BEH C[sub]18[/sub]（1.7 μm，50mm×2.1mm）；柱温：30℃；流速：0.5 mL/min；进样量：1μL；流动相A：乙腈；流动相B：0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脱程序：0~0.5min，10% A；0.5~3. 0 min，10%~100% A；3. 0 ~4. 0 min，100%A，4 ~4.1.1min，100% A~10% A，4.1 ~5.0min 10% A。质谱：离子源：电喷雾离子源( ESI [sup]+[/sup] ) ；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测( MRM)；毛细管电压：3.2 kv；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：500℃；去溶剂气流量：1000 L /h；定性、定量离子对及碰撞能量见表1。[align=center]表1大豆异黄酮的质谱参数[/align][align=center]Table 1 MRM parameters of soybean isoflavone[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Cone/V[/align] [/td][td] [align=center]Parent ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Daughter ion/(m/z)[/align] [/td][td] [align=center]Collision energy/V[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]417[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]255﹡[/align] 137[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]18[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]G[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]433[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]271﹡[/align] 153[/td][td] [align=center]21[/align] [align=center]50[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GL[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]447[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]285﹡[/align] 270[/td][td] [align=center]25[/align] [align=center]46[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]De[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]255[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]137﹡[/align] 181[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]26[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Ge[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]271[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]153﹡[/align] 215[/td][td] [align=center]30[/align] [align=center]25[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]GLe[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]25[/align] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]285[/align] [align=center][sup] [/sup][/align] [/td][td] [align=center]242﹡[/align] 168[/td][td] [align=center]27[/align] [align=center]35[/align] [/td][/tr][/table]﹡quantitativeion[b]2 结果与讨论[/b]2.1 色谱及质谱条件的优化流动相的选择：对比了酸性体系（0.1%甲酸水溶液）与非酸性体系（纯水、乙酸铵溶液）分别与甲醇、乙腈的流动相体系组合，结果发现目标物在酸性体系中比非酸性体系响应更高、峰形更好；同时大豆提取液中含有蛋白、脂肪等杂质可能会残留在色谱柱上，影响色谱柱的使用寿命，而乙腈比甲醇体系洗脱能力更强，可以有效去这些杂质。综合考虑目标物信号强度、色谱分离效果以及除杂等因素，本研究采用0.1%甲酸水溶液+乙腈流动相体系。质谱的选择：根据6种大豆异黄酮的分子量，用10%甲醇水配置1.0 mg/L 大豆异黄酮标准溶液直接注射到质谱中，在正离子模式下分别对各种组分进行母离子及对应子离子全扫描，最终确定的质谱条件见表1。2.2 质谱法（UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）与色谱法（HPLC）的比较国家标准《GB/T 26625-2011粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》[sup][/sup]中规定的大豆异黄酮检测方法为HPLC法。对同一大豆样品分别采用本文UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法（MRM色谱图见图1、2）和GB/T 26625 HPLC法检测，结果表明这两种方法测定的大豆异黄酮总含量值基本一致。由于De、GLe、Ge这三种苷元在大豆中含量很低，用HPLC法检测时，紫外检测器灵敏度不高，存在个别样品中上述三种组分检测缺失的情况；同时在实际大批量样品检测中发现，随着进样次数的增加，色谱柱柱效下降，大豆提取液中存在的蛋白、脂肪等杂质对含量低的目标物峰干扰越来越大，定量困难。研究发现，同浓度的大豆异黄酮在质谱检测器上的响应值要远远超过紫外检测器，同时质谱法可以通过选定大豆异黄酮的特征离子，有效地去除杂质的干扰，其目标物分离度不受色谱柱进样次数增加的影响，定量更加准确可靠。[align=center][img=,690,651]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050912587968_4111_3299836_3.jpg!w690x651.jpg[/img][/align][align=center]图1 大豆异黄酮标准溶液（0.01mg/L）MRM色谱图[/align][align=center]Fig.1 MRM chromatograms of soybean isoflavone standard solution at 0.01 mg/L[/align][align=center][/align][align=center][img=,690,653]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050913342201_5843_3299836_3.jpg!w690x653.jpg[/img][/align][align=center]图2 大豆样品中大豆异黄酮MRM色谱图[/align][align=center]Fig.2 MRM chromatograms of soybean isoflavone in soybean[/align]2.3线性范围和定量限吸取不同体积的大豆异黄酮标准储备液（1.3），用10%甲醇水分别配置0.002、0.005、0.01、0.05、0.1（De、GLe、Ge）和0.01、0.05、0.1、0.2、0.5（D、GL、G）的大豆异黄酮上机混合标准溶液，以各自定量离子的峰面积为Y对应质量浓度X（mg/L）做标准曲线，得到的线性方程和相关系数见表2。结果表明，大豆异黄酮标准溶液在各自浓度范围内线性良好，相关系数R为0.9993~0.9999。以10倍信噪比（S/N）计算，大豆异黄酮上机液最低定量浓度为0.001 mg/L，通过公式（1）计算得到大豆中大豆异黄酮含量，最终确定本方法大豆异黄酮的定量限（LOQ）为0.0001 g/kg。糠氨酸质量分数计算公式：[align=center][img=,207,87]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908050915166414_5621_3299836_3.jpg!w207x87.jpg[/img] ………………（1）[/align] 式中：X为试样中大豆异黄酮含量，以g/kg计；C为大豆异黄酮上机浓度（mg/L）；V为定容体积（V=100）。表2 大豆异黄酮标准溶液的线性方程和相关系数[align=center]Table 2 Linear equation and correlation of soybean isoflavone in 10% methanol-water standard solutions[/align] [table][tr][td] [align=center]Analyte[/align] [/td][td] [align=center]Linear range/(mg/L)[/align] [/td][td] [align=center]Linear equation[/align] [/td][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]D[/align] [align=center]GL[/align] [align=center]G[/align] [align=center]De[/align] [align=center]GLe[/align] [align=center]Ge[/align] [/td][td] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.01~0.5[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [align=center][sup]0.002~0.1[/sup][/align] [/td][td] [align=center]Y=2393.6x+479.38[/align] Y=1885x+139.66 [align=center]Y=1470.9x+187.97[/align] [align=center]Y=4287.9x+442.79[/align] [align=center]Y=3521.7x-103.62[/align] [align=center]Y=1993x+122.79[/align] [/td][td] [align=center]0.9995[/align] [align=center]0.9999[/align] [align=center]0.9993[/align] [align=center]0.9998[/align] [align=center]0.9997[/align] [align=center]0.9998[/align] [/td][td] [/td][/tr][/table]2.4回收率和精密度大豆中De、GLe、Ge含量较低，而D、GL、G含量较高，故本方法准确度实验分为高低浓度梯度组进行加标。称取大豆试样1.00 g，分别添加0.01、0.05、0.2 g/kg（De、GLe、Ge）和0.2、1、2 g/kg（D、GL、G），每个水平重复6次，同时做该大豆的空白本底实验。按照1.4前处理方法处理后上机检测，计算回收率（扣除空白），结果表明：不同添加浓度下，De、GLe、Ge的平均回收率为91.7%~96.2%，相对标准偏差（RSD，n=6）为2.78%~5.93%；D、GL、G的平均回收率为86.6%~93.8%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.07%~3.77%。[b]3 结语[/b]本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法（UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）测定大豆中大豆异黄酮含量的分析方法。该方法灵敏度高，线性范围宽，能同时覆盖大豆中多梯度浓度大豆异黄酮组分含量的测定。同时该方法具有较高的准确度和精密度，前处理步骤简单，分析速度快，可有效避免由于色谱柱柱效下降对最终检测结果的影响，特别适合大批量样品的检测。田娟娟, 宋宏哲, 张飞, 等. 水剂法纯化大豆异黄酮的研究. 大豆通报, 2005, 6:19-22. Hagen M K, Ludke A, Araujo A S, et al.Antioxidant characterization of soy derived products in vitro and the effect ofa soy diet on peripheral markers of oxidative stress in a heart disease model .Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 2012,90(8):1095-1103. 徐春华, 张治广, 谢明杰, 等. 大豆异黄酮的抗氧化和抗肿瘤活性研究研究 . 大豆科学, 2010, 29(5): 870-873. 李俏俏, 王清路, 薛金艳, 等. 大豆异黄酮对绝经女性血清中脂类物质的影响的研究 . 大豆科学, 2009, 28(1):172-174. 胡润芳, 张玉梅, 陈宇华, 等. 大豆异黄酮含量的初步研究. 东南园艺, 2017, 6:9-11. 刘琴, 朱媛媛, 白兴梁. 不同种类大豆中大豆异黄酮含量及抗氧化性比较. 北京工商大学学报（自然科学版）, 2012, 30(6): 45-51. 袁凤杰, 姜莹, 董德坤, 等. 中国大豆核心种质异黄酮含量分析.中国粮油学报, 2011, 26(2):5-8. Tepavcevic V, Atanackovic M,Miladinovic J,et al. Isoflavone composition，total polyphenolic content，and antioxidant activity in soybeans of different origin. MedFood,2010,13(3):657-664 GB/T 26625-2011《粮油检验大豆异黄酮含量测定高效液相色谱法》. Liggins J,Bluck J C. Deidzein and genistein content of fruits and nuts. Journal ofNutritional Biochemistry,2000,11(6):326-331. 鞠兴荣, 袁建, 汪海峰. 三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量的研究. 食品科学, 2001, 22(5):46-48.

【作者】 郭磊； 刘君；【机构】 哈药集团三精制药股份有限公司；【摘要】 目的:改善色谱分离条件,提高高效液相色谱法测定双黄连口服液绿原酸含量的准确度。方法:以Dikma DiamonsilC18柱(4.6×250mm,5μm)为色谱柱;水-冰醋酸(80∶1)、甲醇为流动相,梯度洗脱;检测波长324nm。结果:绿原酸进样量在7.984～79.84μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.99999),平均回收率为99.97%,RSD为0.17%(n=6)。结论:该方法简便、快速,结果准确、可靠,可替代2005版《中国药典》双黄连口服液中绿原酸的含量测定方法。 更多还原【关键词】 HPLC； 双黄连口服液； 绿原酸； 梯度洗脱； http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061542_381946_2352694_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061542_381947_2352694_3.jpg

杜仲黄酮清除亚硝酸盐作用的研究 实验目的：本实验通过对杜仲黄酮清除亚硝酸盐作用的研究，为研究抗肿瘤作用提供研究依据，也为利用杜仲这一天然资源提供了极有力的实验依据； 实验方法：采用95%乙醇冷浸提取杜仲中的黄酮类成分，根据在弱酸性条件下，亚硝酸盐能与氨基苯磺酸重氮化，再与α-萘胺偶合生成红色的化合物的原理，采用紫外光解法测定杜仲黄酮对亚硝酸盐的清除作用； 结果与讨论: 杜仲提取物中含黄酮类化合物在1.5%左右，对亚硝酸盐的清除率在70%--80%；用95%乙醇提取效果良好，适当浓度对亚硝酸盐的清除作用明显。　 杜仲(Eucommiaulmoides Oliv)为杜仲科杜仲属落叶乔木，是我国特有的珍稀保护树种和传统名贵中药。杜仲主要含木脂素及其甙类、环烯醚萜类有机酸类及氨基酸、杜仲胶、微量元素等，杜仲在我国分布很广，适应性很强，主要分布于贵州、四川、湖北、湖南及陕西等省，其它地区也有引栽。杜仲是一种经济作物，神农本草经将其列为名贵中药和上品，杜仲皮和叶具有降压、扩张血管以及增强免疫功能的作用。 亚硝酸盐是一种允许使用的食品添加剂,在食品加工过程中主要作为发色剂、增香剂和防腐剂，是肉食类制品加工中应用历史最长、最为广泛的添加剂之一。随着农作物生产过程中大量化学肥料的使用，导致蔬菜等植物性食品中亚硝酸盐的含量升高。亚硝酸盐是亚硝胺类化合物的前体物质，在自然界和人体胃的酸性环境中，极易与胺化合,生成亚硝胺。亚硝胺类物质是一类具有很强致癌性的物质。动物实验和流行病学的研究都证明生物类黄酮具有广泛的抑癌和防癌作用，杜仲黄酮对亚硝酸盐的直接消除作用未见深入报道，本实验对此问题进行了实验研究。 现代药理研究报道：杜仲叶的化学成分及其药理作用与皮基本相似，因资源较易得，已成为当今药用开发热点，并取得不少成就，如杜仲胶囊、杜仲平压片、杜仲壮骨丸、杜仲冲剂等。日本以杜仲叶作为鸡饲料添加剂，生产低胆固醇和高密度脂蛋白的鸡蛋，用杜仲叶或其浸膏制成多种杜仲饮料等保健药品，作为抗高血压、高血脂等疾病药物。杜仲的降压作用是经过多年临床证实的，现代药理实验有效地揭示了这一作用的机理。有关杜仲抗肿瘤作用虽经现代药理实验证实，但尚需进一步研究，有报道称黄酮类成分可有效抑制亚硝酸盐的致癌作用，本试验通过对杜仲中黄酮类成分对清除亚硝酸盐作用的研究，为进一步证实抗肿瘤作用提供有力的实验依据。材料与方法1.仪器、试剂与药品1.1[size=14p

核磁共振波谱对一个黄酮化合物的结构分析与鉴定淡黄色粉末，mp 220～222℃。20D：-33.6（c，0.10，CH3OH）；AlCl3反应呈阳性，提示该化合物为黄酮类化合物。ESI-MS谱给出准分子离子(m/z)：421-；HRESI-MS给出+峰m/z：423.09159（计算值：423.09219），分子量为 422.08492，分子式为C19H18O11，不饱和度为 11.IR谱显示有酚羟基(3 356.9)，羰基(1 649.4)，苯环（1 602.2，1 472.7），碳氧键(1 288.4)；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301101_520798_2672081_3.png1H-NMR谱中，5.05(1H，d，J=7.5Hz)有一糖端基氢信号，δ 3.16～3.71 有糖上其它氢信号.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301103_520799_2672081_3.png13C-NMR谱中，δ60～100 有一组糖信号，TLC原位酸水解检出葡萄糖，说明该化合物含有一分子葡萄糖。13C-NMR谱中，δ90～180芳香区有 14 个碳信号，减去一个葡萄糖端基碳，还有 13 个碳信号，根据有关文献，推断该化合物母核为黄酮类化合物。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301104_520800_2672081_3.pngDEPT谱表明该化合物含有 1 个亚甲基，9 个次甲基，9个季碳，扣除葡萄糖的 1 个亚甲基，5 个次甲基，剩下 4 个次甲基，9 个季碳，表明该酮有四个芳氢被取代。δ179.1 为羰基碳信号，δ162.2，163.4，154.5，144.0，156.9，151.2 应为与氧相连的碳信号，除母核上两个连氧碳外，剩余四个碳应连有含氧基团。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301105_520801_2672081_3.png13C-NMR谱中，除了一组葡萄糖信号和　酮母核信号外，未见其它碳信号，可以断定黄酮母核上的四个含氧取代基团均为羟基。1H-NMR谱中，δ7.38(1H,s)和δ6.88(1H,s)为两个孤立芳氢信号，δ6.62(1H,d,J=2Hz)和δ6.38(1H,d,J=2.0Hz)为一组间位偶合氢信号，说明黄酮母核两个芳环中一个被邻位取代，另一个被间位取代。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301106_520802_2672081_3.png由以上信息可知，该化合物含有一个葡萄糖，一个 1,3,6,7-四羟基—黄酮。通过HSQC和HMBC，对该化合物的碳、氢信号进行了归属(如：表格)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520804_2672081_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520805_2672081_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520806_2672081_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410301109_520807_2672081_3.png结合HMBC谱发现，δ13.14 羟基氢与δ162.2（1 位碳）和δ98.2（2 位碳）及δ103.1（8b位碳）远程相关，证明此羟基连在 1 位碳上。δ6.38 氢与δ163.4（3 位碳）和δ162.2（1 位碳）及δ103.1（8b位碳）、δ94.2（4 位碳）远程相关，证明此氢连在 2 位碳上。δ6.6 氢与δ163.4（3 位碳）和δ156.9（4a位碳）及δ103.1（8b位碳）、δ98.2（2 位碳）远程相关，证明此氢连在 4 位碳上。δ6.88 [fon

【作者】 王晓辉； 刘涛； 李清； 陈晓辉； 毕开顺；【Author】 WANG Xiaohui,LIU Tao,LI Qing,CHEN Xiaohui,BI Kaishun(School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)【机构】 沈阳药科大学药学院； 沈阳药科大学药学院 辽宁沈阳110016； 辽宁沈阳110016；【摘要】 对蒙古黄芪中5种异黄酮类成分的含量进行了反相高效液相色谱法测定。色谱柱为D iam ons il C18柱,流动相为乙腈-水系统,梯度洗脱,检测波长230nm,柱温35℃。毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷在20.12~201.2m g/L、芒丙花素-7-O-β-D-葡萄糖苷在4.62~46.2m g/L、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷在4.86~48.6m g/L、毛蕊异黄酮在9.24~92.4m g/L、芒丙花素在6.92~69.2m g/L时峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 2,0.999 7,0.999 7,0.999 5和0.999 5。5种成分的加样回收率均高于94%,相对标准偏差(RSD)小于3.2%(n=9)。该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于黄芪药材中5种主要异黄酮类成分的含量测定。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301613_380608_2379123_3.jpg

[color=black]超声波辅助提取苦荞麦黄酮类成分工艺研究[/color][align=center][color=black]张春艳[/color][url=#footnote_1]1[/url][font=times new roman][sup][size=13px][color=black],2[/color][/size][/sup][/font][font=times new roman][size=13px][color=black]，张丽娜[/color][/size][/font][font=times new roman][sup][size=13px][color=black]1,2[/color][/size][/sup][/font][/align][align=center][color=black](1.中国农业我科学院 作物科学研究所 重大平台中心，北京 100089；2.中国仪器仪表学会科学仪器设备验证评价中心（生命科学站），北京 100089)[/color][/align][color=black]摘要：[/color][color=black]为了优化苦荞麦中芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取工艺，本研究以芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚提取含量为指标，采用单因素实验比较了不同体积分数的甲醇和乙醇作为提取液提取上述三种成分，结果表明：对于芦丁和异槲皮素，以70%乙醇作为提取液的提取量高于以80%甲醇为提取液的提取量，所以本实验采用70%乙醇作为提取液。以三因素三水平正交实验探究不同体积分数乙醇为提取液对芦丁、异槲皮素、槲皮素和山奈酚提取量的影响。结果表明:超声提取法在提取液为70%乙醇,提取温度50℃,超声时间30 min条件下对芦丁和异槲皮素提取量最高，分别为15.58mg/g和0.50mg/g 而超声提取法在提取液为60%乙醇，提取温度25℃,超声时间15 min条件下，对槲皮素和山奈酚提取效果最佳。本研究为苦荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取提供依据。[/color][color=black]关键词：[/color][color=black]苦荞 麦提取 黄酮类[/color][align=center][color=black]Ultrasonic-assisted extraction process of buckwheat flavonoids[/color][/align][align=center][color=black]ZHANG Chunyan[/color][sup][color=black]1,2[/color][/sup][color=black],ZHANG Lina[/color][sup][color=black]1,2[/color][/sup][/align][align=center][color=black](1.Major Platform Center, Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100089, China 2. Scientific Instruments and Equipment Verification and Evaluation Center of China Instruments and Apparatus Society (Bioscience Station))[/color][/align][color=black]Abstract：[/color][color=black]In order to optimize the extraction process of rutin, isoquercetin, quercetin and kaempferol in buckwheat, this study took the extraction content of rutin, isoquercetin, quercetin and kaempferol as the index, and used the single factor experiment to compare the extraction of the above three components with different volume fractions of methanol and ethanol as the extraction solution. The results showed that: For rutin and isoquercetin, 70% ethanol as the extraction solution was higher than 80% methanol as the extraction solution, so 70% ethanol was used as the extraction solution in this experiment. Then three factors and three levels orthogonal experiments were conducted to explore the effects of different volume fractions of ethanol on the extraction of rutin, isoquercetin, quercetin and kaempferol. The results showed that the maximum extraction amounts of rutin and isoquercetin were 15.58mg/g and 0.50mg/g, respectively, under the conditions of 70% ethanol as extraction solution, 50℃ as extraction temperature and 30 min as ultrasonic time. Under the conditions of 60% ethanol, extraction temperature 25℃ and ultrasonic time 15 min, the ultrasonic extraction method had the best extraction effect on quercetin and kaempferol. This study provides the basis for the extraction of rutin, quercetin and kaempferol from Tartary buckwheat.[/color][color=black]Key words:[/color][color=black] buckwheat, ultrasonic extraction, flavonoids[/color][color=black]荞麦为蓼科苦荞麦属作物，一年生草本双子叶植物。荞麦分为普通荞麦(甜苦荞麦)及其亲缘种苦苦荞麦(鞑靼苦荞麦)，尤指前者。荞麦别名为乌麦、三角麦。我国是生产和出口苦荞麦的大国，主要种植分布在内蒙古、云南、山西、四川、贵州等地区。[/color][color=black]荞麦中主要含有黄酮类、糖苷类及有机酸类等化学成分。黄酮类主要包括芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚等。现代药理研究表明，荞麦具有抗氧化、抗肿瘤、抗敏、抗菌、抗病毒、降血脂、降血压等作用。芦丁作为苦荞麦中含量最高的成分，它难溶于水，可溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶等有机溶剂，在光作用下逐渐变暗，熔点为195℃；异槲皮素难溶于水，熔点为 314-317℃，具有较好的祛痰、止咳、平喘作用；槲皮素几乎不溶于水，易溶于碱性水溶液，熔点为 314-317℃；山奈酚微溶于水，溶于热[/color][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%99%E9%86%87?fromModule=lemma_inlink%22 \t %22https://baike.baidu.com/item/%E5%B1%B1%E6%9F%B0%E9%85%9A/_blank][color=black]乙醇[/color][/url][color=black]，[/color][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%99%E9%86%9A?fromModule=lemma_inlink%22 \t %22https://baike.baidu.com/item/%E5%B1%B1%E6%9F%B0%E9%85%9A/_blank][color=black]乙醚[/color][/url][color=black]和碱，熔点为276℃。荞麦芦丁一直以来都是研究的重点，近年来文献报道也很多，关于芦丁、槲皮素等的提取方法，提取溶剂种类、体积分数的选择多种多样，有采用不同体积分数乙醇的，也有采用不同体积分数甲醇进行提取的，提取方式也各不相同。本文采用三因素三水平正交试验方法超声辅助提取荞麦中四种成分，考察不同体积分数提取液，超声温度、超声时间对芦丁等含量的影响。[/color][color=black]1、材料与方法[/color][color=black]1.1 、仪器与设备[/color][color=black]试验主要使用设备如下：[/color][table][tr][td][align=center][color=black]仪器名称[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]型 号[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]厂 家[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]电子天平[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2011F145-11[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]赛利多斯科学仪器（北京）有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]粉碎机[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]TUBE-MLL 100[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]艾卡（广州）仪器设备有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]超声波清洗仪[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]JP-040S[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]深圳市洁盟清洗设备有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]福立高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url][/color][/align][/td][td][align=center][color=black]LC5090[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]浙江福立分析仪器股份有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]UV紫外检测器[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]LC5090-UV[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]浙江福立分析仪器股份有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]Agilent XDB-C18色谱柱[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]XDB-C18(4.6ⅹ250mm 5 μm)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]安捷伦科技（中国）有限公司[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]离心机[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]PICO17[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]赛默飞世尔科技（中国）有限公司[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black]1.2、材料与试剂[/color][color=black]湖南苦荞，来自于中国农业科学院作物科学研究所小棕作物课题高佳老师提供，地方品种；乙醇，甲醇 （HPLC Grade）赛默飞世尔科技（中国）有限公司；DMSO hplc 纯度≥99.7%。[/color][color=black]1.3、试验方法[/color][color=black]1）、芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚标准曲线制作[/color][color=black]精密称取芦丁标准品20.0mg，置于10ml容量瓶中，加入70%乙醇1ml ,配置浓度为2mg/ml的芦丁母液。分别取不同体积母液配置浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0078125mg/ml溶液，过0.22um膜,放置2ml[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]小瓶中，待测。福立高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]（配置：5090二元高压输液泵、5090在线3路脱气器、5090柱温箱(BC[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]ABC[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]ABC[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]ABC[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]优水平[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]B3[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]C2[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]优组合[/color][/align][/td][td=5,1][align=center][color=black]A2B3C2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A2B3C2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A1B1C1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]A1B1C1[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black]芦丁方差分析[/color][table][tr][td][align=center][color=black]方差来源[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]离差平方和[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]自由度[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]均方[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]F值[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]P值[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]显著性[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]A[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]30.42[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]15.21[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]13.92[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0001[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]**[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]B[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]19.12[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]9.56[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]8.75[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0016[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]**[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]误差[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]24.04[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]22[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1.09[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]总[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]26[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][/table][color=black]由表2可以看出，分析苦荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取量，结果表明，方差分析结果和极差分析结果保持一致。提取各成分含量影响因素的大小为乙醇体积分数超声温度超声时间，同样方法处理异槲皮素、槲皮素、山奈酚的数据，影响因素大小以芦丁保持一致，均为乙醇体积分数超声温度超声时间。从方差分析可知，乙醇体积分数、超声温度对芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚影响极显著、超声时间不显著。从表2极差分析结果可知，芦丁、异槲皮素提取最佳组合方式为A2B3C2,槲皮素、山奈酚最佳提取组合方式为A1B1C1。[/color][color=black]3、验证[/color][color=black]由于最优正交实验组合没有在正交表中得以体现，因此按照优化后的最佳组合方式A2B3C2，即在乙醇体积分数为70%，超声温度50℃、超声时间30分钟的条件下，选择三个不同产地的苦荞麦粉作为样品，提取芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的含量，重复三次试验,验证结果见表3。[/color][align=center][color=black]表3验证实验结果[/color][/align][table][tr][td][align=center][color=black]试验号[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]芦丁含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]异槲皮素含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]槲皮素含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]山奈酚含量(mg/g)[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]RSD%[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][color=black]借母溪乡样品[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]13.83[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.69[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.441[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.94[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.033[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.95[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0063[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.96[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.64[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.435[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.031[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0063[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.78[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.443[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.032[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0064[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][color=black]湖南沅陵县样品[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]13.50[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.72[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.456[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.98[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.034[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.38[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0064[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.51[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.31[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.430[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.034[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0063[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]13.37[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.450[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.034[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0066[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][color=black]泸溪县样品[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]15.85[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]1.94[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.511[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.93[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.037[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]2.77[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0064[/color][/align][/td][td=1,3][align=center][color=black]0.68[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]15.65[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.499[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.036[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0065[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]15.25[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.482[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.038[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]0.0065[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black] [/color][color=black]从表3可知，三个不同产地样品，重复三次测得芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的平均含量分别在13.39-15.58mg/g、0.440-0.497mg/g、0.032-0.037mg/g、0.063-0.065mg/g之间，RSD%值均小于5,该优化后的方法与文献比较具有一定的优势。[/color][color=black]4讨论[/color][color=black]试验研究了乙醇体积分数、超声温度、超声时间三个因素对苦荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚提取含量的影响，结果表明，乙醇体积分数为70%，超声温度50℃、超声时间30min条件下，不同产地苦荞麦中芦丁、异槲皮素提取量最高。乙醇体积分数为60%、超声温度25℃、超声时间15min时更利于槲皮素、山奈酚的提取。通过试验研究可以看出，芦丁、异槲皮素在有机溶剂体积比较高时，有较佳的提取效率，相反，槲皮素、山奈酚在有机溶剂体积比较小的时候，提取效率更高一些。通过该方法的建立可以为荞麦芦丁、异槲皮素、槲皮素、山奈酚的提取方法提供依据。[/color][color=black]参考文献[/color][1] [url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Naveen+P&cauthor_id=28929052]P Naveen[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28929052/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Analytical Research and Development, Vidya Herbs Pvt. Ltd, Bengaluru, Karnataka, India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Lingaraju+HB&cauthor_id=28929052]H B Lingaraju[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28929052/%22 \l %22affiliation-2%22 \o %22Phytochemistry Lab, Vidya Herbs Pvt., Ltd., Bengaluru, Karnataka, India.][sup]2[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Anitha&cauthor_id=28929052]Anitha[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28929052/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Analytical Research and Development, Vidya Herbs Pvt. Ltd, Bengaluru, Karnataka, India.][sup]1[/sup][/url], [url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Prasad+KS&cauthor_id=28929052]K ShyamPrasad[/url][sup]2. [/sup]Simultaneous determination of rutin, isoquercetin, and quercetin flavonoids in Nelumbo nucifera by high-performance liquid chromatography method.Int J Pharm Investig,2017 Apr-Jun 7(2):94-100.[2][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Jan+S&cauthor_id=35734108]SabbiJan[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Cytogenetics & Plant Molecular Biology Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Ahmad+J&cauthor_id=35734108]JavaidAhmad[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Cytogenetics & Plant Molecular Biology Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Dar+MM&cauthor_id=35734108]MohdMasaratDar[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-2%22 \o %22Department of Food Science & Technology, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]2[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Wani+AA&cauthor_id=35734108]AijazAWani[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-1%22 \o %22Cytogenetics & Plant Molecular Biology Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]1[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Tahir+I&cauthor_id=35734108]InayatullahTahir[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-3%22 \o %22Plant Physiology and Biochemistry Research Laboratory, Department of Botany, University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]3[/sup][/url],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Kamili+AN&cauthor_id=35734108]AzraN Kamili[/url][url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35734108/%22 \l %22affiliation-4%22 \o %22Centre of Research for Development (CORD), University of Kashmir, Srinagar, Jammu and Kashmir India.][sup]4[/sup][/url][sup].[/sup]Development and validation of a reverse phase HPLC-DAD method for separation, detection & quantification of rutin and quercetin in buckwheat ( Fagopyrum spp .).J Food Sci Technol.2022 Jul 59(7):2875-2883.[3] 罗凤莲[sup]1,2[/sup],蒲培瑶[sup]1[/sup],超声波辅助提取苦苦荞麦总黄酮工艺研究. 农产品加工.2018,(02)[4] 王丽[sup]1,2[/sup],魏茂琼[sup]1,3[/sup],邵金良[sup]1,2[/sup],杜丽娟[sup]1,2[/sup],林昕[sup]1,3[/sup],汪禄祥[sup]1,2[/sup],苦荞麦类黄酮成分的含量测定与分析研究食品安全质量检测学报.2018,9(20).[5] 张继斌，王玉，徐浪，陈志元，丁苗.不同产地苦荞麦中黄酮类成分的含量测定与分析.食品研究与开发2018 年 12 月 第 39 卷第 24 期.[6] [url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Gao%20J%5bAuthor%5d]JiaGao[/url][sup]1[/sup],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Wang%20T%5bAuthor%5d]TingtingWang[/url][sup]1,2[/sup],[url=https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/?term=Liu%20M%5bAuthor%5d]MinxuanLiu[/url][sup]1[/sup],et al.Transcriptome analysis of filling stage seeds among three buckwheat species with emphasis on rutin accumulation[url=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5738128/]PLoS One.[/url]2017 12(12):e0189672.Published online 2017 Dec 20.[7] 任强、吴昊、聂其婷、刘伟.HPLC-DAD法同时测定苦荞麦保健品中芦丁槲皮素山奈酚含量.济宁医学院学报2016,39(05).[url=#footnote_back_1]1[/url] [font=宋体][size=12px]作者简介：[/size][/font][font=宋体][size=12px]张春艳（1976—），女，工程师，主要从事高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]应用研究.Email:[/size][/font][font=宋体][size=12px]cyzhang08@163.com[/size][/font][font=宋体][size=12px] 通信联系人：张丽娜，女，副研究员.Email:[/size][/font][font=宋体][size=12px][color=black]zhanglina@caas.cn[/color][/size][/font]