重组蛋白表征——肽图分析
肽图分析是蛋白质鉴定,特别是重组蛋白鉴定的最常用的方法。它通过酶解(一般使用胰蛋白酶)将蛋白质打碎形成肽段,然后以可重现的方式进行肽段的分离和鉴定。肽图分析是一种非常有用的方法,已成为生物技术领域中最有价值的工具之一,它能检测和监控单个氨基酸改变、氧化、去酰胺化,以及其它降解形式。它还能直接检测常见的单克隆抗体修饰变异,如 N 端环化,C 端赖氨酸处理,N- 糖基化,以及内含子表达等非预期的变异。肽图是蛋白质及其酶解产物的指纹图谱,它能提供待测蛋白质的全面信息。肽图分析包含四个主要步骤,蛋白质的分离和纯化;肽键的选择性酶切;多肽的色谱分离;多肽的分析和鉴定。对测试样品与参考标准品或对照样品进行同步的酶解和分析。肽图应该包括足够数量的肽段以进行有效的分析;它不仅要提供蛋白质鉴定所需的必要信息,还应尽可能地涵盖完整的蛋白质序列。