短刺小克银汉霉

[B]如果你出生在1980至1989年间，你一定认识LiLei和HanMeimei。[/B]　　李雷和韩梅梅，是1990～2004年人民教育出版社中学英语教材里的两个虚拟主角：LiLei和HanMeimei（2000年的教材改名为HanMei），这套教材从1993年起成为全国(除上海外)通行英语初中教材。有人估计，从1990年至2000年，10年间使用人教版英语教材的中学生，高达上亿人。　　今年，人教出版了新的英语辅导教材，李雷和韩梅梅的故事，有了续集，他们也和80后们一样，开始工作、结婚、养育孩子。　　近日，网上流行的《李雷与韩梅梅之歌》，更是让许多人感叹、感概，80后的集体回忆再一次爆发：为了纪念那些再也回不来的青春期和小暧昧。[color=#00008B]李雷与韩梅梅之歌 词曲唱：徐誉滕 一切从那本英语书开始的 那书中的男孩LiLei 身边的女孩名叫HanMeimei 还有JimLily和LucyKateLinTao和UncleWang 一只会说话的鹦鹉叫Polly它到处飞 好多年没有再一次翻开它 但那一段说的谁和谁 偶尔还能细细回味 书中他们的喜与悲 书外身后的是与非 还有隐隐约约和我 一起长大的小暧昧 后来听说LiLei和HanMeimei 谁也未能牵着谁的手 Lucy回国Lily去了上海 身边还有了那么多男朋友Jim做了汽车公司经理 娶了中国太太衣食无忧 LinTao当了警察 UncleWang他去年退了休 有点遗憾LiLei和HanMeimei 谁也未能牵着谁的手 一样的是我们都有了个 当初不曾遥想的以后 还好Polly它还活着 就像我们当年的小美好 他永远都不会老 在心底不会飞走[/color] 读初中时，大家刚好是12——15岁之间，正是情窦初开、有了朦胧男女意识的时候。在那个青春萌动的年代里，这本插图版的英语书让很多人浮想联翩，觉得英语课本讲述的就是一个缠绵悱恻的爱情故事。 Han Meimei，这个齐耳短发的中国女孩，文雅温和，智慧善良，几乎是所有女性美德的化身。在课本中，她更像是一个姐姐的身份，帮助同学们排忧解难。 LiLei，平头短发，喜穿浅色T恤，一看就是那种正统的中国式好学生。不过他并不是那种死板的书呆子，他也很喜欢玩。 Jim Green，在中国生活的英国孩子，一头棕色的卷发，喜欢穿深色的T恤，给人的印象是有活力、聪明，但是有些马虎，时常犯些小错误。[B]三人关系：[/B]Jim喜欢Han Meimei，LiLei也喜欢Han Meimie，Han Meimie对LiLei有点感觉。同时另一个女生Lucy也喜欢Lilei。有江湖八卦为证（以下事件由网友总结，来自教材对话）： 1，借尺子事件　　有一课，记得很清楚，“Can I borrow your ruler?”韩梅梅和李雷坐在第一排，韩梅梅问李雷借尺子，然后Jim在后面看着他们，眼神十分诡异，就是夹杂着嫉妒，羡慕阴险的目光。然后他旁边坐着Lucy，低着头，我当时觉得是因为Lucy不愿意看到面前的这一幕，因为是女生，不可能象Jim这么感情外露的，所以委屈的低下头……　　2，扔飞盘事件　　印象比较深的还有李雷和Jim玩飞盘那次，Jim把李雷的头给砸了，当时觉得Jim是成心这么做的，因为这个事情发生在借尺子事件没多久之后。 3，摘苹果事件　　当年韩MM课外劳动摘苹果，和树下的李帅哥眉来眼去有点得意忘形了，此时被冷落一边的Jim大叫一声：“Be careful！”由此，关爱之情可见一斑。而韩MM除了简单报以“Thank you”之外，居然又自得其乐地跟李帅哥开始了聊天……================================================[B]10~20年后…物不是，人也非[/B]Han Meimei结婚了，新郎不是Lilei　　在新的教材里，当年的hanmeimei变成了Ms han（韩太太）。她嫁的是一个新人物：HanGang(韩刚)。她的齐耳短发也变成了成熟时髦的造型，在厨房中忙前忙后，照顾两个孩子用餐。　　对于这个结局，许多人表示不能接受，“她的孩子一个叫Han Keke, 一个叫Han Xixi，翻译过来就是——可可，惜惜，分明就是表达了她对不能嫁给Li Lei的可惜与无奈。” 　　而李雷，成为了一名教师，戴着眼镜，妻子未知。新版英语教材图说 　　年少的Han Meimei、Li Lei、Lucy和Lili都已成为历史，新的小主角由hanmeimei的两个孩子：Han Keke、Han Xixi、以及一个叫Harry的小男孩担任。连宠物，都由会说话的鹦鹉Polly换成了不会说话的小狗Poppy。==========================[B]那些和青春小鸟一起飞走的小暧昧[/B] 后来听说LiLei和HanMeimei，谁也未能牵着谁的手……”青春期的小暧昧，每个人都曾有过。虽然这些暧昧仅止于萌芽，可是当我们回忆起来的时候，依然会心动。或许，我们怀念的，更多的是不能重来的年少青春。时间是贼，偷走的不仅仅是李雷和韩梅梅　　tianshlee：我是第一批使用那版教材的无数学生中的一个。和其他书比，那本书比较特别，有很多彩色图案，比一般的书本都大，可以把书包撑得很开。　　那时候，一块钱可以吃一顿饭，七毛钱一条鱼，两毛钱买豆芽，一毛钱买米饭，还送一碗免费汤，抬头的时候，可以看到师傅的围裙比地板还脏； 　　那时候，后桌的女生喜欢上了我的同桌，她家在校门口开餐馆，我同桌去那里吃饭时，里面的肉都会多出几块，我一直很羡慕； 　　时间是贼，偷走一切。 　　那套英语课本的最后一课最后一句话是“Goodbye everyone，Goodluck！”但并不是每个人都那么幸运，同学们挣扎着升学或者生活，生活中的糖果开始越来越少，青春变得真实残酷。[B]听到他结婚了，我的心还是揪了一下[/B] wewillwell：初中时我喜欢一个成绩特别差的男生，我们是前后桌，用现在的词语就是很暧昧，初三时他转校了，我没有来得及和他说再见，就因为这，我用了整整10年的青春去想念他。听到他已经结婚生子的那刻，我心真的痛了，就像被抽空一样，其实一直告诉自己他肯定有自己的生活了，一直以为自己早就看淡了，但真正面对的时候是那么的无力。听到这首歌里的Lintao。我的心揪了一下，因为他的名字里有Lintao两个字。　　 那些美好的过往，我们来不及告别，就这样匆匆的溜走。[B]想起了坐在我后面的男生[/B] 紫月洁伊：原来高中时，我感觉坐我后面的男生喜欢我，但我总是以为自己多想了。有一次，下课，他把窗户打开来了，是冬天，我同桌觉得冷，就让他关，他比较调皮，就偏不关。我同桌就向我抱怨。这时一阵冷风吹过，我也觉得冷了，我就回头皱了一下眉，这时，他就立刻关了起来，还脸红。 吉拉拉 ：我画画好，他写字好。初中，我对他有好感，被留下来出国庆的黑板报。他脸上弄了很多粉笔灰。我笑他，他把脸伸过来，“帮我擦掉”。我抖抖的伸出手去擦，他就一直拿很认真的眼神看着我，哇哇噢噢，那一刹那真是此时无声胜有声吖，挖卡卡。[B]听见录音机按键的声音，仍然仿佛是昨天[/B] 油菜花粉儿：一转眼都15年了啊。。。94年念的初一，那个时候的英语老师漂亮的很，还是中日混血，在我们那么小的小镇里，是个大新闻。　　那时遇到了自己喜欢的男生，为了分班能和他分在一起，放弃了自己擅长的文科，班主任劝说无果。。。然而毕业，就再也没见。前几日在校友录上看到他和太太孩子的照片，就那么淡淡的淡淡的，翻过去了。　　 然后爱上另外一个人，完成另外一段无果的爱情，现在已经是快三十的人了，孤单一个，在离家很远的地方赚钱养活自己，回首时候听见录音机按键的声音，仍然仿佛是昨天一样，那个男孩子那样轻巧的撑着桌子跳过四个凳子，跳过我的身后。。。[B]当年满帅的小伙子，也成了一个小腹突出的中年人[/B] blue_vase：高中时候的一个同学。他跟我蛮要好的。平时帮我讲我做不出的数学题。考试帮我作弊。每次下课，就跑到我课桌旁，蹲下来陪我讲10分钟的话。周末陪我逃课，到中山公园打80分。晚上读夜校，会在我家楼下等我，还会送我回家。那时候，听听齐秦的老歌，一起讲讲对于未来人生的打算和迷茫。　　呵呵，可惜他不敢挑明了追我，后来有其他人追我，我有了男朋友。　　一直有联系，到现在还有。也算是同行，办公室就在我隔壁的楼里。很偶尔还会一道吃顿中饭。　　只可惜，当年满帅的小伙子，成了一个小腹突出、秃头厉害的中年人了。====================================================[B]你想到了谁？[/B]光阴虽无刃，抽走留伤痕。听到《李雷&韩梅梅》这首歌，你会想到哪些事？哪些人？你还记得那些最终不了了之的小暧昧吗？在下面写出你的回忆，说不定你想的那个他（她），也正好看到了这里…

有关七夕的诗词 又是一年 匆匆过去 淡云飘忽 偶起微风　夜有喜鹊 牵桥情人 再次相逢 亦难别离转一些有关七夕的诗词:七夕 （唐）徐凝 一道鹊桥横渺渺， 千声玉佩过玲玲。 别离还有经年客， 怅望不如河鼓星。 七夕醉答君东 （明）汤显祖 玉名堂开春翠屏， 新词传唱《牡丹亭》。 伤心拍遍无人会， 自掐檀痕教小伶。 秋夕 (唐)杜牧 红烛秋光冷画屏， 轻罗小扇扑流萤。 天阶夜色凉如水， 坐看牵牛织女星。 七夕夜女歌 (晋)无名氏 婉娈不终夕， 一别周年期。 桑蚕不作茧， 尽夜长悬丝。 韩庄闸舟中七夕 （清）姚燮 木兰桨子藕花乡， 唱罢厅红晚气凉。 烟外柳丝湖外水， 山眉澹碧月眉黄。 古诗十九首之一 （汉）佚名 迢迢牵牛星，皎皎河汉女。纤纤擢素手，札札弄机杼。终日不成章，泣涕零如雨。河汉清且浅，相去复几许？盈盈一水间，脉脉不得语 七夕 （五代后唐）杨璞 未会牵牛意若何， 须邀织女弄金梭。 年年乞与人间巧， 不道人间巧已多。 古意 （唐 ）孟郊 河边织女星， 河畔牵牛郎。 未得渡清浅， 相对遥相望。 七夕 （唐）权德舆 今日云骈渡鹊桥， 应非脉脉与迢迢。 家人竟喜开妆镜， 月下穿针拜九宵。 他乡七夕 (唐) 孟浩然 他乡逢七夕，旅馆益羁愁。 不见穿针妇，空怀故国楼。 绪风初减热，新月始临秋。 谁忍窥河汉，迢迢问斗牛。 七夕 (唐)无名氏 向月穿针易， 临风整线难。 不知谁得巧， 明月试看看。 七夕 (唐)白居易 烟霄微月澹长空， 银汉秋期万古同。 几许欢情与离恨， 年年并在此宵中。 七夕 （唐）权德舆 今日云骈渡鹊桥， 应非脉脉与迢迢。 家人竟喜开妆镜， 月下穿针拜九宵。 鹧鸪天 七夕 （宋） 晏几道 当日佳期鹊误传，至今犹作断肠仙。 桥成汉渚星波外，人在鸾歌凤舞前。 欢尽夜，别经年，别多欢少奈何天。 情知此会无长计，咫尺凉蟾亦未圆。 《马嵬其二》 李商隐 海外徒闻更九州，他生未卜此生休。 空闻虎旅鸣宵柝，无复鸡人报晓筹。 此日六军同驻马，当时七夕笑牵牛。 如何田纪为天子，不及卢家有莫愁？ 七夕 （唐）罗隐 络角星河菡萏天，一家欢笑设红筵。 应倾谢女珠玑箧，尽写檀郎锦绣篇。 香帐簇成排窈窕，金针穿罢拜婵娟。 铜壶漏报天将晓，惆怅佳期又一年。 辛未七夕 （唐） 李商隐 恐是仙家好离别，故教迢递作佳期。 由来碧落银河畔，可要金风玉露时。 清漏渐移相望久，微云未接归来迟。 岂能无意酬乌鹊，惟与蜘蛛乞巧丝。 七夕 （唐） 宋之问 传道仙星媛，年年会水隅。 停梭借蟋蟀，留巧付蜘蛛。 去昼从云请，归轮伫日输。 莫言相见阔，天上日应殊。 七夕 （唐）祖咏 闺女求天女，更阑意未阑。 玉庭开粉席，罗袖捧金盘。 向日穿针易，临风整线难。 不知谁得巧，明旦试相看。 鹊桥仙 （宋）秦观 纤云弄巧，飞星传恨，银汉迢迢暗渡。金风玉露一相逢，便胜却人间无数。 柔情似水，佳期如梦，忍顾鹊桥归路！两情若是长久时，又岂在朝朝暮暮！ 七夕夜女歌 (晋)无名氏 婉娈不终夕， 一别周年期。 桑蚕不作茧， 尽夜长悬丝。 七夕词 (唐)崔颢 长安城中月如练，家家此夜持针线。 仙裙玉佩空自知，天上人间不相见。 长信深阴夜转幽，瑶阶金阁数萤流。 班姬此夕愁无限，河汉三更看斗牛。 鹊桥仙 (宋)范成大 双星良夜，耕慵织懒，应被群仙相妒。娟娟月姊满眉颦，更无奈风姨吹雨。 相逢草草，争如休见，重搅别离心绪。新欢不低旧愁多，倒添了新愁归去。 行香子 (宋) 李清照 草际鸣蛩，惊落梧桐，正人间、天上愁浓。云阶月地，关锁千重。纵浮槎来，浮槎去，不相逢。 星桥鹊驾，经年才见，想离情、别恨难穷。牵牛织女，莫是离中。甚霎儿晴，醍儿雨，醍儿风。 二郎神 七夕 (宋) 柳永 炎光初谢，过暮雨芳尘轻洒。乍露冷风清庭户爽，天如水，玉钩遥挂。应是星娥嗟久阻，叙旧约飙轮欲驾。极目处微云暗度，耿耿银河高泻。 闲雅！须知此景，古今无价。运巧思穿针楼上女，抬粉面云鬓相亚。钿合金钗私语处，算谁在回廊影下？愿天上人间，占得欢娱，年年今夜。

七夕节祝福短信：　　天上有牛郎织女，地上有金童玉女，惟吾与尔。　　七夕如愿，盼今朝红叶香残怨可消，朝朝暮暮图永久，缠缠绵绵诉心焦。上天又给我一个约你的借口，相爱的人儿，与你共渡，天天都是情人节。　　七夕之夜星麻麻，看着水里鱼双双。想到了你心一酸，惟有想着当初情？　　很感谢你给我了一生中最快乐的时光，今天是中国的情人节，祝我们俩永远相爱，白头偕老！深深地吻你！！：)　　别人在桥，我在网！！　　月影光如昼，银霜茫茫；七夕会鹊桥，情意绵绵。仙花团锦簇，美景交融；仙鹊聚天桥，好生幸福！　　一年一次鹊桥会太漫长，手机短语传真情！　　天上牛郎织女相约鹊桥，地上一群傻瓜约会断桥。试问：今夕是何夕？答曰：中国情人节！　　织女不用敛蛾眉，前度牛郎今又回。鹊桥执手望泪眼，良辰美景不思归。　　没有情人的人怎么会喜欢情人节的到来呢？无奈它毕竟已经来了只好祝福别人啦！　　七夕时节忆往昔，眷属难成甚可惜。牛郎织女会此时，我却独饮空叹息。　　我在等属于我们的七夕之夜。你会来吗？我会等的！！！　　我们不做牛郎织女，因为他们相距太远而相见又太短；我们要做我们自己，因为有你在我身边把我的心牢牢拽住！　　外国的情人节送玫瑰，中国的七夕日献月饼，我给你献上我的心！　　我不能一年只见你一次，所以我不过“七夕”！！！　　亲爱的，今天是中国情人节。远远的，送你一个情人节的吻！中国式。　　七是一个奇数，要你来凑一个双偶数。　　情人、爱人、佳人，七夕节的你是我的人儿。　　哥哥好哥哥坏，七夕月饼给几块？哥哥好哥哥坏，巧克力只要七块！　　相爱永远，相伴七夕，七夕就是我们爱的证明！　　柔情似水，佳期如梦，七月七日，牛郎织女，鹊桥相会，中国情人，曰为节日，共度七夕，天长地久。　　天上人间，七夕相见，今生前世，共枕同眠。　　思念是甜蜜的惆怅，它能把女性天生的嫉妒搓揉成忧伤，溶成一片浓浓的深情，像月光般皎洁、明亮。　　上邪，我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！　　关关雎鸠，在河之洲。窈窕淑女，君子好逑。参差荇菜，左右流之。窈窕淑女，寤寐求之。　　银河之上，一世的等待，几世的缘份，都化作了滴滴晶莹的泪珠，洒下凡间，留给世人无限的祝福！　　银河陷落，爱意沸腾，总不比乞巧合欢。　　织女绣云锦，牛郎河西盼。鹊桥河间架，七夕终短暂。愿爱长相依，月儿永无缺。我欲银河逝，予两星永洁！　　羽儿七夕卧梅苑，伟哥夜半望天边，牛郎织女遥祝愿，痴情鱼水永相伴。　　七夕祈愿：心较比干多一窍，貌若西子胜三分。　　今日良辰，可否请美女共进晚餐？！　　其实很多时候，人与人还是隔河相望，把那份最纯最真的情感永埋心中才是最美丽的。　　无情的时空将你我分隔，但想你的心儿依旧难平，七七相见！　　我们能在七夕开始我们的初恋吗？　　七夕许愿很灵吗？试一下?　　茫茫星河，我无法找到你的踪迹；漫漫长夜，你能否感觉我的思念？　　每一分每一妙都在想你,念你,别忘了明天是我们相约的日子。鹊桥中央不见不散!　　七夕虽是牛郎和织女每年一次见面的节日，但我能天天和你在一起，看你，亲你。亲爱的，你说呢？　　老是过西方的情人节，为什么不过我们自己的情人节呢？在这美好的日子里我们一起过好吗？我等你！　　我的心上人是个盖世英雄，我知道，总有一天他会身披五彩战衣，踏着鹊桥来接我，今天你能来吗？你的织女。　　百雀筑桥，星梦传书，星语心愿，七夕与君长相伴！！！　　你说不过洋人的节，今天是七夕中国人的情人节，哈哈，躲不过了吧！　　多少痴心风雨中，多少泪莹划夜空。痴情原是有情心，相逢一笑落梦中。　　鹊桥飞架南北，你我共度良辰，我的宝贝，我想你！！　　有一天，牛郎告诉织女，我们不能见面了，因为喜鹊都去恋爱了。织女说没关系，那我们就发短信息吧！　　七月七日鹊桥仙，金风玉露恨苦短，朝朝暮暮常相伴，不羡牛郎羡鸳鸯！　　牛郎会织女，成了千古佳话，我和你在同一时空下，铸筑爱巢。愿天下有情人终成眷属，用我们的爱架起彩虹！　　看见鹊桥上接吻的那一对了吗？那就是今晚的我们！　　过节啦，是中国人的情人节啊，过中国的情人节，过我们的情人节，好好想你啊，我俩去哪庆祝呢？　　天上人间，岁岁年年，今宵团圆，惟愿永远。对你的那种特别的感情，只想告诉你，今生不变！　　七夕，七夕，我的佳期；织女，织女，我的爱妻；天上地下，千年聚齐；呜呼哀哉，我爱我妻。　　星星如果能读懂此刻的心，月亮如果能明了此刻的情，愿天下有情人终成眷属！　　我们的网络爱情就是从今天开始的！真的好甜蜜！希望每一个中式情人节，你都会在我的身边。　　我是鹊桥旁那颗美丽的流星，只为有你一次真爱的回应，我痴痴地等待着你……久久不愿离去……　　今宵七夕夜，遥望银河情。　　小懒猫，睡得香呢?今天是七夕哦!要想我哦!　　织女等得心焦，牛郎咋还没到？发个短信去叫，快快走上鹊桥！　　七夕第一次听说！不知道第一次的中国的情人节会怎么样过？想想吧！现在来告诉我吧！　　今天是七月七，有人给你送花吗？这有一束先给你备着！　　但愿你我别像可怜的牛郎与织女这般，一年才得以相见一次，我不要!　　织女，其实我们可以网上聊天呀，我正准备装宽带网打可视电话了。　　在你空闲的时候，抬头看看天，一轮月亮，是我看你的眼睛，月边朦胧的云影，是织女亲手为牛郎绣的屏风！　　柔情似水，佳期如梦，忍顾鹊桥归路？两情若是久长时，又岂在朝朝暮暮。　　七夕抬头望碧霄，喜鹊双双拱鹊桥。家家乞巧对秋月，无尽心思君知晓？　　今天是七夕，我为你乞巧，希望你心灵手巧！　　天上牛郎织女来相会，地下多情人儿共祈爱情永恒不渝。　　你我鹊桥边，相对两无言，温情融天际，爱意永缠绵。　　我是董永，你是仙女，愿天天是七夕，岁岁共婵娟。　　面对你默默的等待，我无法喊出那圣洁的爱，只好立于相思树下，用岁月的剪刀，把思念精心地剪裁。　　往年，我祈求上天赐我幸福。现在有你在我身边。我知道，幸福，我已经得到了。我爱你！　　守候星空盼星雨，数落星辰许星愿。星空星雨落千粒，星辰星愿现千回。遥祝远朋行安至，笑柔挚心有相知。　　你是风儿我是沙，七夕啦！你何时才会归来不让我心挂！　　如果真的有鹊桥。我要跟你走到桥的尽头，然后把桥拆了，绝不让你走。愿意吗?　　情人节快乐！愿我俩的爱情能比牛郎织女更深，但不要像他们的两地相思。相思之苦好惨喔！　　莫羡鹊桥仙，人间花更嫣；今沐七夕雨，爱你更心坚！　　七夕抬头望碧霄，喜鹊双双搭鹊桥。家家乞巧看秋月，穿尽红丝儿百条。　　天不老，情难绝，鹊桥上为你我系上同心结??　　怕黄昏忽地又黄昏，不销魂怎地不销魂？新啼痕压旧啼痕，断肠人忆断肠人。今秋，香肌瘦几分？缕带宽三寸。　　3001年的这一天，我在鹊桥的另一边。不见不散！　　年年花相似，岁岁人不同；鹊桥一相会，留你在心中！　　流水落花夏去也，斜风细雨乍秋寒，七月七，月易见，见君难。　　纤云弄巧，飞星传恨，银汉迢迢暗渡。金风玉露一相逢，便胜却人间无数。　　中国情人节，你过了吗？　　好想朝朝暮暮，更想天长地久。思念悠悠，爱意浓浓。　　独上西楼，观月。寂寞梧桐，锁秋。问天上人，见鹊否？是否共婵娟？　　七月七日长生殿，夜半无人私语时。在天愿做比翼鸟，在地愿为连理枝。　　千山万水飞难渡，何处离情诉？天涯地角几多愁，只有拥你入怀恨方休！　　牛郎织女都能在七夕相会，你我呢？　　今天是七夕我很想你，你有空出来吃饭吗？晚上老地方见。吻你！　　无论我们分开多远，终有一日会在最美丽的地方相见，别忘了我们的约会。　　如果天有情，如果梦会灵，就让我的心爱到彻底，我对你的爱已无法说明，就像风吹不息，雨打不停，此情不渝。　　七夕！牛郎织女相会的日子，我是多么的盼望奇迹的出现呀！情人节快乐！　　独自莫凭栏，千里江山，别时容易见时难。流水落花春去也，天上人间。你想我吗？　　在漫漫的人生中，我找到了你，是你给了我生存的信心，是你让我的生活从此不再平淡。我爱你！！

常用的有琼脂斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、甘油冷冻管保藏法、低温冷冻保藏法等，方法很多。 我选用液体石蜡保存方法，该方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌（如芽孢杆菌属、乙酸杆菌属等）和某些丝状真菌（如：青霉属、曲霉属等），而某些细菌（如：固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌等）和一些真菌（如：卷霉菌、小克银汉霉、毛霉等）不宜采用此法进行保存。微生物检验常用以下菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌药典也没有要求怎样保存，只说选用适宜的保存方法需要验证。但是肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌这些菌种用液体石蜡保存方法适合不？

金骏眉是顶级正山小种红茶的一种，起源较晚，创于2005年，但极其珍贵，该茶是采摘于武夷山国家级自然保护区内海拔1500—1800米高山的原生态小种野茶的茶芽，采集芽尖部分，每天每个采茶工人只能采芽尖约2千粒，而1斤的金骏眉需数万颗芽尖，逐见其乃茶叶珍品。因其外形黑黄相间，乌黑之中透着金黄，显毫状，置于茶盘中似奔腾之骏马而得名金骏眉。　　银骏眉简介：　　按照茶叶的品质及采摘的标准不同，又分为金骏眉、银骏眉，其中银骏眉是由金骏眉的出现而产生的，其品质略次于金骏眉者，故称为银骏。　　附：除金骏眉和银骏眉，再接下来在骏眉中品质排第三的是铜骏眉。　　简介：金骏眉是武夷山正山小种的顶级品种。　　一、金。代表等级，金者，贵重之物，色黄而亮也。　　二、骏。纪念首泡制作人，参与制作的人员之一梁骏德茶师名中有“骏”字。　　三、眉。形容外形，眉者，乃寿者 ...　　金骏眉是武夷山正山小种的顶级品种。　　一、金。代表等级，金者，贵重之物，色黄而亮也。　　二、骏。纪念首泡制作人，参与制作的人员之一梁骏德茶师名中有“骏”字。　　三、眉。形容外形，眉者，乃寿者长久之意，而绿茶类中好芽制成称眉者，如有寿眉、珍眉等。　　【冲泡用水】好的山泉水或者农夫山泉水，水加热到沸腾。　　【审评】第一泡至第十泡时长分别为：15秒、25秒、35秒、45秒、1分钟、1分钟10秒、1分钟20秒、1分钟30秒、2分钟、2分钟30秒。　　香气浓郁(刚开始是蜜香味，后来慢慢转成花粉香，而外山金骏眉一般没有什么味道，或者是带涩和地瓜味)，味甜，醇厚，杯底香浓郁。稠度好，回甘快好。茶汤甜醇，泡浓有粘稠感。　　银骏眉等级仅次于金骏眉，由一芽一叶茶青作为原料，品质略次于金骏眉。　　金骏眉、银骏眉的问世以及畅销，树立了中国红茶的顶峰，是对中国名优茶的市场模式的一种总结、一种诠译　　首创于2005年。金骏眉是采摘于武夷山国家级自然保护区内海拔1500—1800米高山的原生态小种野茶的茶芽，采集芽尖部分，每天每个采茶工人只能采芽尖约2千粒，结合正山小种传统工艺，由师傅全程手工制作，每500克金骏眉需数万颗芽尖，是可遇不可求之茶中珍品。其外形黑黄相间，乌黑之中透着金黄，显毫状，置于茶盘中似奔腾之骏马。金骏眉的出现带来了银骏眉的产生。在制作过程中，由一芽一叶茶青作为原料，品质略次于金骏眉者，便称为银骏眉。　　金骏眉是于清明前采摘于武夷山国家级自然保护区内海拔1500-1800米高山的原生态小种野茶的茶芽，采集芽尖部分，由熟练的采茶女工手工采摘，每天一女工只能采芽尖约2千粒，结合正山小种传统工艺，由师傅全程手工制作，每500克金骏眉需数万颗芽尖。　　金骏眉外型细小而紧秀，颜色为金、黄、黑相间，细看，金黄色的为茶的绒毛、嫩芽，开汤汤色为金黄色，啜一口入喉，甘甜感顿生。其水、香、味似果、蜜、花、薯等综合香型，滋味鲜活甘爽，喉韵悠长，沁人心脾，仿佛使人置身于原始森林之中。连泡12次，口感仍然饱满甘甜，叶底舒展后，芽尖鲜活，秀挺亮丽。总之，金骏眉实属可遇不可求之茶中珍品。　　金骏眉闻其有烤红薯味，品其有淡淡蜜味，水入口甘醇。其泡出后出汤好似滴油一样，实在是视觉和味觉的绝妙享受。

生活饮食中哪些食物含有重金属比较多？你知道哪些食物含有重金属吗?你知道自己每天吃了多少重金属吗?大家都隐约知道吃过多重金属对身体有害，那么先看看你吃了多少重金属吧?　　你爱吃动物内脏　　动物内脏尽管有着独特的营养成分，但更有重金属的沉积。因为家禽全靠工业饲料喂养，这些饲料具有不确定性，一旦不安全食物被动物食用后，比如动物所吃的饲料，喝的水如果被重金属如镉污染了，都要靠内脏来代谢，一些重金属等有害物质就会沉积在内脏里，食品污染物监测情况：动物肾脏中，金属镉的含量超过国家标准值100倍。除了镉，动物内脏中还有可能含有铅，那些残留在内脏中的重金属，将会转移到你的身上，成为你的健康杀手。　　建议：每周最多吃一到两次动物内脏即可，而且每次食用量不要超过50克。此外，吃动物内脏时，最好多搭配一些粗粮和蔬菜，以补充膳食纤维。　　你经常喝中药　　中药一向以温和、副作用小而著称，因此有人把中药当作日常补品，有事没事吃两口，但有些中药的使用目的就是以毒攻毒，只不过毒性较低而已，比如中药中常见的雄黄和朱砂，朱砂含汞，雄黄含砷，长期大量使用朱砂、雄黄，可导致汞、砷等重金属在人体内的蓄积，造成严重的肝、肾功能损害，并可能损害人的血液系统和神经系统，因此必须谨慎使用。　　建议：吃中药也要遵医嘱。即使是温和的中药，服药前也要咨询医生，以确定此药是否适合你的体质、症状，可以服用的最长时间，这样才能正确地发挥药效，避免不恰当地服用。　　你爱吃海鲜　　海鲜是健康食谱中的明星，味道鲜美而且富含营养物质，能预防心血管病，改善情绪和记忆力。但与此同时，海鲜的安全问题也不容忽视。由于污染的蔓延，贝类和海鱼已经成为重金属汞、砷的最大来源，以如果长期食用海鲜会导致重金属等有毒有害物质在体内积累而危害健康。　　建议：吃海鲜不要超过每天一种，数量不要超过100克;尽量食用体积小的海鲜。体积大的海鲜处在食物链较高阶段，体内富集的污染物较多;不吃或少吃鱼头、鱼皮、油脂、内脏、鱼卵、鱼翅

涉贝因美、圣元优博、伊利三品牌　　含量未超出内地和国际安全标准　　昨日，有媒体报道指国内三个奶粉品牌产品含有反式脂肪酸成分。广州市工商部门指出，目前这三款奶粉销售正常，并没有要求商超等对其下架。食品专家指出，反式脂肪酸不得人为添加，但可能天然带有，国家标准对反式脂肪酸的含量有限制。　　文/记者何颖思、刘冉冉　　昨日有香港媒体报道称，由该媒体委托进行的检测发现，内地三个颇受欢迎的奶粉品牌，其产品含有反式脂肪成分。其中贝因美冠军宝贝俱乐部、圣元优博，以及伊利金装三只婴儿配方奶粉中，每100克奶粉含有0.4克至0.6克反式脂肪(又称反式脂肪酸)。但三种奶粉包装上均未注明含有反式脂肪。但该三种奶粉的反式脂肪含量尚未超出内地和国际安全标准。　　报道还指出，目前内地法律没有规定婴儿配方奶粉包装须注明反式脂肪含量。一提到反式脂肪酸，不少人都会报以警惕的目光，有些研究表明反式脂肪酸存在引发心血管疾病、糖尿病、癌症等极大健康风险，引起恐慌。为科学的回应公众疑问，国家食品安全风险评估专家委员开展“我国居民反式脂肪酸摄入水平及其风险评估”项目，为期两年。评估结果显示，中国人通过膳食摄入的反式脂肪酸所提供的能量占膳食总能量的百分比仅为0.16%，北京、广州这样的大城市居民也仅为0.34%，远低于WHO建议的1%的限值，也显著低于西方发达国家居民的摄入量。你究竟支持哪种观点呢？

在珠三角，大大小小的工業區充斥這個城市的每一個角落，然而連接這一個個工業區的不是別的，就是為這些工業區的普通員工提供飲食的小攤，駐紮在街道兩旁，架鍋起灶，每逢下班高峰，整個街道就像是哪個飯店的廚房，鍋聲瓢聲吆喝聲伴隨著不斷經過車輛的喇叭聲，場面極其夸張。然而隱藏在喧囂下的是這些沒有受過多少教育的普工的健康危機，而這種危機就藏在這些小攤的鍋盆裡：在一次不經意中，我發現了這些小攤的炒菜用油，我驚奇的發現，基本大部分的攤位用的油都是一種外觀，渾濁不堪，色如機車潤滑油脂，在我看了幾家後，我心頭的疑惑更大了，這也不像是我之前了解的地溝油，那會是怎麼樣的油，而且如此廣泛的運用如此不明來歷的油，讓我不免對我們這些打工姐妹兄弟產生憐憫之心！

2010-05-28 23:43[table][tr][td][size=4][b]取钱也“缺斤短两”？从邮储失职看银行信任危机[/b][/size]平时我们去自由市场买东西，动不动会出现个“缺斤短两”的现象，不过这也好办，下次不去你那买也就是了。不过如果这种“缺斤短两”的现象出现在银行，恐怕就是另一回事了。最近，就有有用户反映某邮政储蓄“管理混乱、金额缺斤短两”。　　储户投诉之一：取款7700元无端少了700元。一周前，何女士柜台支取父亲的7700元退休工资。她眼睁睁地看着柜台营业员从验钞机里点完现钞打好捆后，连存折一并从小窗口递给她，何女士拿到营业员递给的现金和存折后，凭着对中国邮政储蓄的“信赖”，也没再细数，就离开了柜台。 回家将取回的钱交给母亲后，细心的老人接过钱数了一遍，说咋只有7000元？何女士直奔七一北路邮政储蓄所。当找到为之办理取款业务的营业员询问时，没想到这位营业员竟然用责怪的口气对何女士说：是你拉在柜台上了，我叫也叫不住你就走了。听罢营业员这番说辞，何女士无语了，好在缺失的700元已经找回，没有造成什么实质性的损失，也就作罢，但何女士怎么也想不通，为什么钱是她一次接到的，就会拉下700元呢？　　储户投诉之二：验钞机分不清十元和百元面额钞票，万元一捆的百元现钞内竟有五元或者十元夹在里边当百元钞票充数。与何女士住在同一小区的曹女士半个月前在同一个邮政储蓄所3号柜台前，帮一位老太太取了5万元现金（五捆百元现钞），准备去工商银行购买国库券。转存时，工商银行的营业员把刚从邮政储蓄所取出来的整捆现钞拆开后用验钞机过数，刚过第一捆，竟然被验钞机剔出一张10元的钞票。当即，曹女士返回邮政储蓄所找柜台营业员理论，并要求营业员当面把夹有10元面额的万元现金重新过验钞机。结果，夹在100元面额里的10元面额钞票顺利通过邮政储蓄的3号柜台的验钞机，没有任何提示。　　回到我们开头所说的，缺斤短两一说原本只是指街头小贩坑骗顾客的小伎俩，没想到如今竟然“发扬光大”到国家正规的金融机构——邮政储蓄，适用到面额规定很是严格的钞票上了。金融单位的窗口，在很大程度上代表着国家的信誉。长期以来，对这个窗口，有一种信赖已经深植于人们心中：“不必数了，银行不会骗咱！”但如果经常出现上面提到的这些情况，这份长期以来根植于人们心中“信赖”终有一天会消失得无影无踪……[/td][/tr][/table]

目前，美国市面上的能量饮料(含有咖啡因等兴奋剂，可提神的饮料)数以百计，许多儿童都很难抵制其诱惑。美国加州一位中学八年级学生玛尼考西说：“喝了以后，精神很振奋。”玛尼14岁，每星期都喝三四次她最喜欢的高糖分咖啡因饮料。要是出去打篮球比赛，她尤其想喝能量饮料来“振奋一下”。但这些不同品牌的能量饮料有一个共同特征，就是含有大量咖啡因，对儿童和青少年正在发育的身体会造成严重伤害。　　能量饮料中毒就像吸毒过量　　据美国《饮料文摘》杂志报道，美国能量饮料目前已是高达49亿美元的产业，2006年就有数百种新饮料上市，其中许多品牌所含的咖啡因比传统的汽水要高出一到两倍。特调咖啡也是如此，所含糖分和热量奇高，无异于把巧克力棒直接吞进肚子。小学和中学的青少年都乐此不疲，也因此吸收咖啡因而上了瘾，殊不知这对他们正在发育的身体可能产生严重后果。　　在美国的圣路易斯，常见当地的青少年在上学前，先到咖啡馆排队购买特调咖啡(如摩卡咖啡等)。小儿心脏科医生安琪拉夏琦认为，儿童上瘾似乎已成趋势。过去5年来，夏琦医生的患者越来越多，症状包括头晕、昏厥等。她说：“这些小孩都出现脱水现象，因为他们整天什么都没喝，就只喝添加了咖啡因的饮料。”她让患病的儿童带着一瓶水和诊断说明回到学校，建议应该允许这些学生在课堂上喝水。她说，咖啡因摄入量过高还有更严重的后果，容易造成心跳加速、心悸、甚至痉挛等。　　斯蒂芬马丁奈里来自佐治亚州昆内特郡，这个16岁的高二男生一听说市面上出现新品牌的能量饮料(咖啡因含量高达280毫克)，名为“古柯碱”，就决定试试看。25岁的丹迈尔试喝了数十种不同品牌的饮料，将结果公布在他的博客(能量饮料评论Energy　Drink　Review)里。马丁奈里喝了3/4罐“古柯碱”后，既头晕又呕吐，被送到急诊室打点滴。他说，急诊室医生起初是以为他吸毒过量。检验过血液和尿液后，才发现他是由于咖啡因中毒而导致脱水。　　“古柯碱”饮料已被禁售。　　怎么判断儿童咖啡因上瘾　　所有饮料生产商都宣称绝对没有针对儿童销售高咖啡因含量的饮料，但青少年爱去的场合却随处可见能量饮料的踪影。　　能量饮料流行到什么程度?有些人在上传到Myspace网站的照片中，跟一大堆最心爱的饮料一起上镜，向全世界宣称自己可以灌进多少瓶。甚至有的青少年把狂灌能量饮料(在罐底钻上个洞，一口喝干)的影片上传到Youtube网站，因此也难怪全美各地的急诊室医生和药学专家都发现，年轻人出现咖啡因相关症状的情况越来越多。位于旧金山的加州大学医学院的医生盖修查不久前治疗过一名18岁的病人，用救护车送进医院时心跳高达220次，远高出正常范围的60～100次。该患者刚从高中毕业，每天要喝8罐16盎司(约453克)的Rockstar(美国一种能量饮料)，好提起精神上夜班。　　一些小儿科医生担心的不仅是咖啡因中毒。在儿童肥胖症越来越普遍的年代里，医生非常不愿意看到又有新的门道鼓励儿童喝进许多没有营养的热量。过度摄取热量后，许多儿童都有睡眠不足的现象。美国睡眠基金会指出，年龄11～17岁的青少年，超过半数晚间睡眠不足8小时。

湖北省药膳食疗研究会会长郝建新说，矿泉水能稀释血液中的能量物质，并随着尿液排出体外，带走热量，有较好的退热作用。 碳酸饮料能降温是因为碳酸进入胃内后，二氧化碳膨胀，吸收胃内热量，人以打嗝的方式将胃内热气带走。但碳酸饮料中的糖分被人体吸收后会变成能量，提高体温。 酸梅汤的提问的影响主要是乌梅、山楂等物质进入体内，使汗腺、肺气等收敛，减少对外界热量的吸收，同时起到生津止渴的效果，是很好的降温饮料。可酸梅汤中所含的糖分，又会在降温的同时提升体温。 原同济医院中西医结合专家曾良驹教授说，碳酸饮料和酸梅汤中所含的糖分、电解质和其他物质，喝多了不仅会增加热量、使体温升高，还会对肠胃产生不良刺激，影响消化和食欲，可以说任何含糖的饮料都不如白开水解渴、降温。因为白开水容易透过细胞膜进入细胞内，进入血液循环发挥新陈代谢功能，排除体内废物，同时调节体温。 专家提醒，即使再口渴也不宜狂饮，就算是白开水也不行。人大量出汗后，最好分多次少量饮水。

咖啡因的特性能够提升大脑和身体的能力。1979年，研究人员对比了摄取咖啡因的运动运与未摄取的运动员在长距离自行车项目中的表现，发现摄入咖啡因的运动员表现增加7%。其它也有很多研究证实了咖啡因对人体机能有着短时的提升作用。咖啡因也能与其它药结合提高药效。咖啡因能使头痛药的功效提高40%，并能提高身体吸收药品的速度，缩短药品起作用的时间。所以，在很多药品成分中都会有咖啡因。鉴于咖啡因的特性及作用，人们会对其有一定的依赖性。但由于个体差异，每个人可以摄入的咖啡因的量是不同的，这是由人体基因决定的。对于想知道自己一次摄入多少咖啡因才是最合适的人来说，要不赶紧做个咖啡因代谢基因检测了解一下~有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销各类饮品中咖啡因含量对比表【咖啡】 咖啡因含量 80mg（一般含量范围 40-170mg）【红茶】 咖啡因含量 40mg（一般含量范围 25-110mg）【乌龙】 咖啡因含量 30mg（一般含量范围 12-55mg）【绿茶】 咖啡因含量 20mg（一般含量范围 8-30mg）【普洱】 咖啡因含量 2mg （含量极低）【麦茶】 咖啡因含量 0mg【可乐】 咖啡因含量 50mg（一般含量范围 40-80mg）【红牛】 咖啡因含量 80mg（一般含量范围 80-100mg）

咖啡因的特性能够提升大脑和身体的能力。1979年，研究人员对比了摄取咖啡因的运动运与未摄取的运动员在长距离自行车项目中的表现，发现摄入咖啡因的运动员表现增加7%。其它也有很多研究证实了咖啡因对人体机能有着短时的提升作用。咖啡因也能与其它药结合提高药效。咖啡因能使头痛药的功效提高40%，并能提高身体吸收药品的速度，缩短药品起作用的时间。所以，在很多药品成分中都会有咖啡因。鉴于咖啡因的特性及作用，人们会对其有一定的依赖性。但由于个体差异，每个人可以摄入的咖啡因的量是不同的，这是由人体基因决定的。对于想知道自己一次摄入多少咖啡因才是最合适的人来说，要不赶紧做个咖啡因代谢基因检测了解一下~有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销各类饮品中咖啡因含量对比表【咖啡】 咖啡因含量 80mg（一般含量范围 40-170mg）【红茶】 咖啡因含量 40mg（一般含量范围 25-110mg）【乌龙】 咖啡因含量 30mg（一般含量范围 12-55mg）【绿茶】 咖啡因含量 20mg（一般含量范围 8-30mg）【普洱】 咖啡因含量 2mg （含量极低）【麦茶】 咖啡因含量 0mg【可乐】 咖啡因含量 50mg（一般含量范围 40-80mg）【红牛】 咖啡因含量 80mg（一般含量范围 80-100mg）

与高温干馏（即焦化）相比，低温干馏的焦油产率较高而煤气产率较低。一般半焦为50%～70%，低温煤焦油8%～25%，煤气80～100m3/t（原料煤）。　　沿革　煤低温干馏技术的应用始于19世纪，当时主要用于制取灯油（或称煤油）和蜡。19世纪末，因电灯的发明而趋于衰落。第二次世界大战前夕及大战期间，纳粹德国基于战争的目的,建立了大型低温干馏工厂,生产低温干馏煤焦油，再经高压加氢制取汽油、柴油。战后，大量廉价石油的开采，使煤低温干馏工业再次陷于停滞状态，各种新型低温干馏的方法多处于试验阶段。　　历史上曾出现过很多低温干馏方法，但工业上成功的只有几种。这些方法按炉的加热方式可分为外热式、内热式及内热外热混合式。外热式炉的加热介质与原料不直接接触，热量由炉壁传入；内热式炉的加热介质与原料直接接触，因加热介质的不同而有固体热载体法和气体热载体法两种。　　内热式气体热载体法　鲁奇－斯皮尔盖斯低温干馏法是工业上已采用的典型方法。此法采用气体热载体内热式垂直连续炉，在中国俗称三段炉，即从上而下包括干燥段、干馏段和冷却段三部分（图1）。褐煤或由褐煤压制成的型块（约25～60mm）由上而下移动，与燃烧气逆流直接接触受热。炉顶原料的含水量约15%时，在干燥段脱除水分至 1.0%以下，逆流而上的约250℃热气体冷至80～100℃。干燥后原料在干馏段被600～700℃不含氧的燃烧气加热至约500℃,发生热分解；热气体冷至约250℃,生成的半焦进入冷却段被冷气体冷却。半焦排出后进一步用水和空气冷却。从干馏段逸出的挥发物经过冷凝、冷却等步骤，得到焦油和热解水。德国、美国、苏联、捷克斯洛伐克、新西兰和日本都曾建有此类炉型。中国东北也曾建此种炉。60年代初，在中国曾采用的气燃式炉也属此类型，后因大量廉价天然石油的开采而停产。　　内热式固体热载体法　鲁奇－鲁尔盖斯低温干馏法（简称L－R法）是固体热载体内热式的典型方法。原料为褐煤、非粘结性煤、弱粘结性煤以及油页岩。20世纪50年代，在联邦德国多尔斯滕建有一套处理能力为10t/h煤的中间试验装置,使用的热载体是固体颗粒（小瓷球、砂子或半焦）。由于过程产品气体不含废气，因此后处理系统的设备尺寸较小,煤气热值较高,可达20.5～40.6MJ/m3。此法由于温差大，颗粒小,传热极快，因此具有很大的处理能力。所得液体产品较多、加工高挥发分煤时，产率可达30%。　 L-R法工艺流程（图2）是首先将初步预热的小块原料煤，同来自分离器的热半焦在混合器内混合，发生热分解作用。然后落入缓冲器内，停留一定时间，完成热分解。从缓冲器出来的半焦进入提升管底部，由热空气提送，同时在提升管中烧去其中的残碳，使温度升高，然后进入分离器内进行气固分离。半焦再返回混合器，如此循环。从混合器逸出的挥发物，经除尘、冷凝和冷却、回收油类,得到热值较高的煤气

在帖子里：看到了版主及版友的不同答案：餐馆的炊事员要有健康证是（ A顾客隐含的要求/C、适用于产品的法律法规要求 ）。你是如何看的？[color=#DC143C]已有定论，不再讨论了。－LUER[/color]

平端连接通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR 产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用PUS19 的HincⅡ位点进行克隆，以X－gal和IPTG筛选，常可得到足量重组 子。另一种提高克隆效率的途径是先用Klenow大片段或T4DNA聚合酶 消去3'末端突出碱基将PCR产物变成平端DNA，然后再用平端连接法 克隆PCR产物。粘端连接引物中设计入限制酶位点：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非 互补碱基，因此可以在两引物的5'末端设计单限制酶或双限制酶切 位点。这样得到的PCR产物用限制酶消化产生粘性末端，即可与有互 补粘端的载体DNA重组。这种克隆方法效率较高，且当两引物中设计 不同酶切位点时，可有效地定向克隆PCR产物。其缺点是需要加长 PCR引物，除限制酶识别序列外，还需要在其5'端多合成3-4个碱基 以利于限制性内切酶与PCR产物末端的稳定结合。即使如此，其酶切 效率也不够高。其中尤以NotI、XhoI和XbaI等较为难切。采用突变 PCR方法可克服上述缺点。该方法是通过在两PCR引物序列中改变1至 数个核苷酸创造出一个限制性内切酶位点。鉴于PCR引物的3'末端序 列的互补性是PCR成功的关键，在PCR引物的中部或近5'端改变1个或 几个碱基对PCR扩增效果影响不大。这种方法不需要增加PCR引物的 长度，而且酶切效果优于5'加端法。对于特定DNA片段的克隆，此方 法较为经济、实用。但对于基因诊断PCR产物的克隆，似乎5'加端法 更为适宜。T4DNA聚合回切产生粘端如PCR两引物的5'末端是A或T，则可在 其5'端分别加上CG和CCGG.用此二引物扩增的PCR产物在dATP和dTTP 存在的情况下，用T4DNA聚合酶进行处理，则T4DNA聚合酶因具有3'→ 5'外切酶活性而消去3'末端的G和C，产生AccI和XmaI粘性末端（图1）。 此DNA片段直接与用AccI和XmaI切开的载体进行连接。这种方法只需 在PCR引物的5'端加2-4个碱基，但其可选择的限制酶类有限。T－vector法TaqDNA聚合酶能在平端双链DNA的3'末端加一个碱 基，所加碱基几乎全是腺苷。据此，Marchuk等人采用3'端突出一个 胸苷的质粒DNA来克隆PCR产物，其克隆效率比平端的连接至少高出 100倍。他们用EcoRV将pBluescript切成平端，然后在2mmol/LdTTP 存在下，用TaqDNA聚合酶催化pBluescript的两个3'末端各加一处胸 苷。因为在4种dNTP都存在时，Taq聚合酶选择性参入dATP，而当仅 一种dNTP存在时，它只能参入该种碱基。因此，在只加入ddTTP时， 用TaqDNA聚合酶可使平端载体DNA转变成3'末端突出一个胸苷的T尾 载体，称为T－vector.用这种T－vectorsk可以较有效地直接克隆 PCR产物。Hotton等人也报道了另一种制备T－vector的方法。他们 使用脱氧核苷酸末端转移酶在切成平端的载体DNA的3'末端加上一个 胸苷。由于末端转移酶可以催化多个碱基（ddTTP）作为底物，使平 端载体DNA分子的两个3'末端各加上一个T.用这种方法制备的T－vector 的不同之处在于前者3'末端不能与待克隆PCR产物的5'末端连接，仅 5'末端可与PCR产物的3'末端形成磷酸二脂键。共环消解法最近，Jung等人报道了一种有效的PCR产物克隆方 法。用磷酸化的PCR引物扩增得到的PCR产物，先用T4DNA连接酶催化 连接反应，使5'端带有限制酶切位点的扩增DNA片段连接成共环结 构。然后再用相应的限制酶进行消化，产生粘端DNA片段。对于对称 性限制酶位点，只需在引蛾的5'末端加上一关识别序列，因为在串 接成共环后能恢复限制酶切位点难于切开的缺点，且可用于双限制 酶切位点的设计，只不过有PCR产物共环化后，仅约1/4的限制酶切 点得以恢复。故此法较适用于单限制酶位点的克隆。无连接酶亚克隆法(A)无连接酶克隆法（ligase-free subcloning，LFS）是利用引物5’ 末端附加碱基修饰法，修饰碱基不是酶切位点，而是与某一质粒两 端分别互补的碱基。两引物的3’端约20-25个核苷酸分别与待扩增 DNA两翼互补，5’端各有约24个核苷酸分别与线性化质粒的3’端相 同的附加序列。由于线性化质粒的3’端序列各不相同，PCR片段可 以通过选择各引物的合适5’附加序列与引物3’端定向杂交。由此物a和b产生的两端有附加序列的PCR产物与未反应引物分离后， 分别加入两只含有线性化质粒的反应管中进行第二次PCR.第1管中 用引物a和c，引物a即为第一PCR扩增的上游引物a，引物c为下游引 物，与紧邻5’端附加序列内测的质粒（+）链互补。同样，第2管的 引物为b和d，引物b与第一次PCR扩增的下游引物b相同，引物d为上 游引物，与紧邻5’附加序列内侧的质粒（-）链互补。

测定银纳米颗粒银含量时，将107和109银浓度加和还是取平均值来代表纳米颗粒的实际银含量

[color=#DC143C][size=4]故事很感人，但是真实性有待考证，请参考8楼内容判断[/size][/color]——小木卖一次淫，可以帮助一名失学儿童；当一回二奶，可以拯救一所希望小学… 别笑，看过你就不会笑了。 看完这个帖子，无语了,我哭了。我不知道该说什么，是社会错了，还是怎么了？ 殷彩霞死了，死前她是一名****，更确切的说，她是一名老师。是当今中国当之无愧的老师。她用自己肮脏的身体，纯洁了孩子的心灵。 一个****死了，所有的孩子哭着参加了她的追悼会，学校的国旗为她降了一半。 这名年仅21岁的美女教师的追悼会上，校长翻开殷彩霞的日记，当着孩子们的面老泪纵横地朗读起来，她这样写道：卖一次淫，可以帮助一名失学儿童；当一回二奶，可以拯救一所希望小学…… 殷彩霞出生在甘肃省某县的农村，在那个贫困的地方，村里的其他姑娘，无论美丑，早就到南方沿海城市去打工挣钱了，每到春节，她们都会打扮得花枝招展，大包小包的提回来。而殷彩霞高中毕业后没这么做，很多人都不理解，毕竟她的长相在村里是数一数二的。为此，她的父亲经常骂自己的女儿没出息。 听说当地一所民办小学缺老师，她主动跟学校要求免费代课。因为她中学成绩就很好，顺利的通过了学校的文化考核，成为一名真正的民办教师。 当殷彩霞第一次走进课堂的时候，孩子门哗然了，他们从未见过如此漂亮的女老师。从此，教室里常常洋溢着孩子们的欢声笑语。说是教室，其实也就一遮风挡雨的茅草棚，树杆埋成的墙，石板搭起的课桌，砖头码起的讲台，最值钱的就是那块用青砖砌起之后经打磨又刷了黑漆的黑板了，粉笔不够用，常以石灰与泥巴代替。就是在这样条件下，殷彩霞教会孩子们认识了几千个汉字，也教会了他们很多做人的道理。 一天夜里刮大风，茅草棚盖的学校屋顶被掀翻，黑板也被刮倒。第2天孩子们上学的时候各个不知道所措。校长去找县教育局长要钱结果无功而返。老校长晚上回来对殷彩霞说，局长说要你去才给。从来没有出过远门、也没有见过世面的殷彩霞怕把事情搞杂了，胆怯的步行10几公里去了县里。局长的办公室装修很豪华，墙上挂着很多锦旗，办公桌黑里透红，可以照见人影，上面立着一面小国旗，椅子是皮的，好象擦了鞋油一样光亮，比他的脑袋还要亮。局长见到殷彩霞，色咪咪聊了很多不着边际的话。直到天黑了，校长指着另外一扇门对她说，跟我过来拿钱。当殷彩霞走进去的时候，她只看到了一张床，也就是在那张床上，她失去了她的第一次，确切地说，是局长夺走了她的第一次。 床单上留下了处子的血，那血，比挂在局长办公室墙上的国旗还要红。 殷彩霞没有哭，因为，在眼前浮现的是孩子们没有教室上课而可怜的望着她的眼神！ 她连夜步行回到家里，没有跟任何人说起她的屈辱。 第二天，村民们自发来到学校，买了些材料把简陋的教室重新搭建起来了。可遇到刮风下雨的日子，依然上不了课。殷彩霞几次跟孩子们说，县里不久将会来人给他们买砖头盖一所牢固的教室，在这半年里，校长去县城找了局长十几趟，一分钱没拿到。只有他知道局长对殷彩霞做了些什么，但他却无能为力。新学期开始了，很少人交得起学费，能够坚持来校上课的孩子越来越少了，他们都跟着父母放羊去了。殷彩霞内心感到了疼痛，为这些失学儿童而疼痛。 当殷彩霞知道孩子们的希望已经化为泡影的时候，她脱光了自己的衣服，对着镜子暗暗发誓将用自己的身体去实现孩子们的上学梦。在家乡她知道那些花枝招展回来过年的姐妹们都是在外做批肉生意的。她明白那是一条赚钱的捷径。她洗了个澡，告别了校长、告别的父亲，告别了那间千疮百孔的茅草棚，扎着两条麻花辫走向了繁华的大都市。临走的时候，父亲笑了，校长哭了…… 繁华都市的五颜六色并没有给殷彩霞带来一丝兴奋，她眼里始终浮现的是那间低矮茅草棚搭建的教室和孩子们渴望的目光。她走进了一家发廊，躺在了肮脏的床上，经受了人生的第二次蹂躏。那天，她在日记本上写着：局长连个嫖客都不如。 殷彩霞是那帮姐妹里最节俭的女孩。她从来不化妆，也从来不穿那些性感的衣服，她总爱扎着麻花辫，但她的生意却总是最好的，她总是抢了其他****的饭碗，她也经常为此遭到****们的群殴。鼻青脸肿之后，她会走向另一家发廊，似乎只有在那粉色的灯光下她才可以看到希望。看着嫖客们一张张邪恶的嘴脸，她似乎看到了孩子们天真的笑容，但她从来就不曾因此而流泪，因为，她是个老师。 她将自己的收入除去生活费之后，全部寄给了校长。校长按照殷彩霞的意思将她寄回的一笔笔嫖资全都用于改善小学的教学条件上。有人问起那笔钱的来源，校长就说那是社会捐助的善款。 世上没有不透风的墙，有一天终于从邮局传来消息说那些钱是殷老师寄来的。当地媒体得知这一消息后纷纷试图采访殷彩霞，但都被她婉言谢绝了，因为，她是个****。 有钱了，学校变了，第一个月，买了黑板，修了屋顶。第二个月，有了木制的课桌与板凳。第三个月，所有的孩子都有了课本。第四个月，所有的孩子都有了红领巾。第五个月，已经没有孩子光着脚丫上课了。 第六个月，殷彩霞回来了。当孩子们看到她的时候，争先恐后地叫她“殷老师……殷老师回来了……殷老师好漂亮啊……”。看到孩子们激动的笑脸，殷彩霞哭了，这半年里，多少的委屈和泪水，在她眼里都那么的有价值。 在家呆了几天，殷老师又踏上了南下的路。 第七个月，有了操场。 第八个月，有了篮球。第九个月，有了新铅笔。第十个月，学校有了自己的国旗，孩子们每天都能够在操场上看到国旗冉冉升起。在第十一个月，一个房地产商坚持不用套，结果让殷老师意外怀孕了，打完胎后，殷老师成了房地产商的二奶。可那位包养她半年的房产商因为因近段时间深圳房价陡降而抛弃了她，一分钱没付。 殷彩霞终于疲倦了，她想回家，她想回到孩子们的身边，可她最大的梦想是为孩子们盖上一间砖砌的教室，再为孩子们买上两台电脑，因为这个梦想还没实现，所以她只能回头去苦苦哀求那位房产商。房产商说没钱，但可以为她介绍一笔大生意，一老外，愿意出三千美元买她一夜。想到几年前的那阵大风，殷彩霞拖着疲惫的身躯爬上了老外的床。她发誓，过了那个晚上她就回到她久别的家乡，回到她久别的课堂。可就在那个晚上，殷老师被三个强壮的外国人强奸致死。死前她才刚过完自己21岁的生日。 殷老师死了，她没能完成她最后的夙愿，那就是给孩子们盖上一间砖砌的教室，再为孩子们买上两台电脑…… 一个****死了，悄无声息。深圳的天空还是那么蓝，官员们在豪华宴席上高谈阔论，道路上行驶的高级轿车散发着耀眼的光芒。兴奋的人们滔滔不绝地谈论着股票、房价和车市，还有电影、音乐和爱情。路边亲亲我我恋爱的小青年们为了一点小事要死要活。 …… 可在此时，甘肃那个人们已经忘记了的小山村，正在举行只有学生、老师和数百位沉痛的村民的追悼会。 追悼会上，人们看到殷彩霞的一张黑白照片，照片里，她扎着两个麻花辫，笑得如此单纯。校长翻开殷彩霞的日记，当着孩子们的面老泪纵横地朗读起来，她这样写道：卖一次淫，可以帮助一名失学儿童；当一回二奶，可以拯 救一所希望小学…… 校的国旗降了一半。 或许，这是中国历史上，第一个为一个伟大的****而降的国旗。 真诚希望大家多转载此文，贴满各个论坛和空间．让我们的父母官们看看，当他们在台上高谈阔论的时候，当他们在酒桌前恍酬交错的时候，当他们以权谋私的时候，当他们在台上学习三个代表的时候，多想想那个不是G-C-D员的殷彩霞和万千处于水深火热的穷苦百姓。彩霞在那个世界在用哀求的眼神望着我们。 殷彩霞虽然身为****，但她比谁都活得高尚，比谁都活得有尊严。在人心冷漠、****横流之下，她给予孩子们的爱难道不是我们社会最可贵的“大爱”吗？ 殷彩霞带着未完成的遗憾离开了这个世界，作为生者，我们理当完成彩霞的遗志，在这个寒冷的冬天，多给千百万穷苦的人们、多给社会奉献我们的爱心和责任。奉献给大家这篇感人的故事，愿我们每个人都能够开心的生活，为社会多奉献点爱心。 希望大家把这帖子多转转~！！灵魂的震撼

含银光剂和煤油的污水TN、TP测定有影响吗？

新版药典金银花的木犀草苷含量改没改

科研仪器英语口语每日一练（发音技巧第四课）含音频This is Daily English Learning of Analytical Instrument. Today we will talk about pronunciation skills.大家一定要跟着录音练习，音频我放在附件中。音频请勿商业用途，否则本人追求原创版权责任。请您记住，发音技巧的使用程度代表着您的口语流利程度,请大家仔细跟读录音：第四大技巧：弱读弱读的三大规律：第一大规律：把元音弱化为 /ə /Ladies and GentlemenYou and meI have an English teacherI`ll be back in half an hourMy wife and I are very happy.第二大规律：弱化为同类音 长音变短音Me give me a sec to change film.We why don`t we go out for a walk.She she has an accent第三大规律：弱到不发音Difficult Intention Information被击穿的H 音（1）him → `im Don`t tell `im（2）Her →`er Please call `er实例操练：Hey Jude, don`t make it badTake a sad song and make it betterRemember, to let her into your heartThen you can start to make it betterHey Jude, don`t be afraidYou were made to go out and get herThe minute You let her under your skinThen you begin to make it better学习总结：语法性虚词是被弱读的对象，实词很少被弱读。而语法词在英语中的大量运用，使弱读和略读现象在口语会话中极为普遍，请您给予足够的重视，

用时不到3小时，同时确定是否存在耐抗生素菌株2013年05月07日 来源： 中国科技网 作者： 冯卫东 中国科技网讯 美国马萨诸塞州总医院（MGH）研究人员曾首个开发出癌症诊断便携设备，现在他们又在结核病和其他重要传染病的快速诊断技术上取得了新的进展。研究人员在《自然·通讯》和《自然·纳米技术》分别发表研究成果，该设备融合了微流体技术和核磁共振（NMR）技术，不仅能诊断出这些重要的传染病，还能确定是否存在耐抗生素菌株。 两篇论文的共同高级作者、MGH主任医师拉尔夫·惠斯勒博士表示，快速查明与传染病有关的病原体并对耐药性进行测试，对于诊断疾病和决定是否要对患者使用抗生素非常重要。新方法仅需2至3个小时即可完成上述过程，这比动辄需要两周时间才能提供诊断结果的标准培养法有了很大的进步。 MGH研究人员过去曾开发出能检测血液（或非常小的组织样本）中癌症生物标志的便携设备。靶细胞或分子首先由磁性纳米粒子进行标记，然后样本通过一个微型NMR系统，其能检测和量化靶标的量值。但是，要将该系统用于细菌诊断时存在难以找到抗体的问题，在早期研究中，抗体常被用以准确检出特定细菌。于是，研究团队转向将特定核酸序列作为靶标。 在4月23日《自然·通讯》中描述的新设备，可在少量痰标本中检出结核病菌的DNA（脱氧核糖核酸）。DNA从样品中提取后，使用标准程序对靶标序列进行扩增，然后由含有互补核酸序列的聚合物小珠捕获，并由磁性纳米粒子（其序列可与靶标DNA的其他部分进行绑定）进行标记。将微型NMR线圈纳入设备，即可检出样本中存在的任何结核病菌DNA。 对结核病患者和健康人群的对照样本进行的测试表明，该设备在不到3小时的时间内检出了所有的阳性样本，误报率为零。而现有的诊断程序则需数周时间，且漏报率高达40%。 研究人员在5月5日《自然·纳米技术》上描述了一种类似的新技术。该系统将核糖体RNA（rRNA）作为纳米粒子标记的目标。研究人员开发的普通核酸探针能检测许多细菌种群共有的rRNA区域，开发的另一组探针则将13种临床上常见的重要病原体的特定序列作为靶标，这些病原体包括肺炎链球菌、大肠埃希氏菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）等。 该设备的灵敏度非常高，能检出10毫升血液试样中仅存的一两个细菌，从而准确地判断出细菌载荷。对感染患者血液样本的测试表明，系统在不到两小时内准确地识别了特定的细菌种类，还发现了标准培养技术无法检出的两个细菌种类。 惠斯勒表示，基于磁相互作用检测病原体是一种非常可靠的方法，其不用管样品的质量，这意味着在有限资源环境下的大范围净化措施将不再必要。而且，在几个小时内就能检测出细菌，这对控制结核病的扩散具有至关重要的意义。（冯卫东） 《科技日报》（2013-5-7 二版）

三鹿奶粉事件刚刚结束，贝因美又曝出进口乳清蛋白粉含有致病菌，严重者可导致新生儿引起坏死性小肠结肠炎、败血症、脑膜炎等。　　据报道，昨天，国家质检总局公布了最新一批进境不合格食品和化妆品，159批次产品上了“黑名单”。其中贝因美、玛氏食品等上榜。国家质检总局强调，不合格的产品已经依法做退货、销毁或改作他用处理。　　今天，记者第一时间致电贝因美杭州总部负责新闻的黄小姐，她表示，目前公司也是刚刚看到信息，正在对相关事件和环节进行核实，并承诺会在第一时间给予回复。

[font=宋体, SimSun][size=18px]立项公告：[/size][/font] [font=宋体, SimSun][size=18px]经中国材料与试验标准化委员会（以下简称：CSTM标准化委员会）审查，批准以下标准立项，特此公告。[/size][/font] [table=728][tr][td=1,1,72] [font=宋体, SimSun][size=18px]序号[/size][/font] [/td][td=1,1,315] [font=宋体, SimSun][size=18px]标准名称[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]标准立项号[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]所属委员会[/size][/font] [/td][/tr][tr][td=1,1,72] [font=宋体, SimSun][size=18px]1[/size][/font] [/td][td=1,1,315] [font=宋体, SimSun][size=18px]建筑隐含碳排放计算标准和分析方法[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]CSTM LX 9500 01538—2024[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]FC95[/size][/font] [/td][/tr][tr][td=1,1,72] [font=宋体, SimSun][size=18px]2[/size][/font] [/td][td=1,1,315] [font=宋体, SimSun][size=18px]微磁无损检测 硬化层深度检测方法[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]CSTM LX 9807 01539—2024[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]FC98/TC07[/size][/font] [/td][/tr][tr][td=1,1,72] [font=宋体, SimSun][size=18px]3[/size][/font] [/td][td=1,1,315] [font=宋体, SimSun][size=18px]车轮、轮箍及环件用连铸圆坯技术规范[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]CSTM LX 9807 01540—2024[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]FC98/TC07[/size][/font] [/td][/tr][tr][td=1,1,72] [font=宋体, SimSun][size=18px]4[/size][/font] [/td][td=1,1,315] [font=宋体, SimSun][size=18px]用于钢液成分在线分析的激光诱导击穿光谱检测系统[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]CSTM LX 9900 01541—2024[/size][/font] [/td][td=1,1,171] [font=宋体, SimSun][size=18px]FC99[/size][/font] [/td][/tr][/table] [font=宋体, SimSun][size=18px]附件：[/size][/font] [img]https://www.ttbz.org.cn/ueditor/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif[/img][url=https://www.ttbz.org.cn/upload/file/20240826/6386027962563485128544106.pdf]CSTM(B)127-2024 关于CSTM标准《微磁无损检测 硬化层深度检测方法》的立项公告.pdf[/url] [img]https://www.ttbz.org.cn/ueditor/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif[/img][url=https://www.ttbz.org.cn/upload/file/20240826/6386027962695092655149652.pdf]CSTM(B)128-2024 关于CSTM标准《车轮、轮箍及环件用连铸圆坯技术规范》的立项公告.pdf[/url] [img]https://www.ttbz.org.cn/ueditor/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif[/img][url=https://www.ttbz.org.cn/upload/file/20240826/6386027963545241288209461.pdf]CSTM(B)129-2024 关于CSTM标准《用于钢液成分在线分析的激光诱导击穿光谱检测系统》的立项公告.pdf[/url] [img]https://www.ttbz.org.cn/ueditor/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif[/img][url=https://www.ttbz.org.cn/upload/file/20240826/6386027963864559541764068.pdf]CSTM(B)126-2024 关于CSTM标准《建筑隐含碳排放计算标准和分析方法》的立项公告.pdf[/url]

翻译辨误： 　　原文：She spoke with a touch of vinegar.　　译文：她说话带着一点醋意。　　辨析：乍一看译文一点不错，还有点文采，但实际上却是错译。此句的关键在于vinegar的隐喻含义。Vinegar是“醋”不错，但这两个中英文词只有在指那种带酸味的调料（即词的本义denotative meaning）时，意思才是一样的。“说话带点醋意”当然不指说话人嘴里真的带醋味儿，而是隐喻，表示妒忌（即隐含意义connotative meaning）。　　然而，英语中的vinegar的隐含意义不同于汉语“醋”的隐含意义，与嫉妒无关，而是表示“不高兴”或“尖酸刻薄”。因此，原句应译为：她有点/不无刻薄地说。　　不过要注意：vinegar在美语中还有“精力充沛”的意思，如a kid full of vinegar是“一个活蹦乱跳的小伙子”。反过来，汉语的“吃醋”当然也不能译成eat/taste vinegar，而应是be jealous。有趣的是，英语文化中把“嫉妒”和jaundice（黄疸）连起来，说某人嫉妒是be jaundiced。顺便说一下，形容一个人言谈迂腐、说话酸溜溜的，英语是pedantic或priggish；a sour fellow是“一个脾气乖张的人”；the sweet and sour of life则指“人生苦乐”。　　与之有关的颜色隐喻，英汉也不一样，汉语中嫉妒别人常说“得了红眼病”，而英语却说green-eyed。嫉妒被称为green-eyed monster；莎士比亚把“嫉妒”称为the green sickness。 责任编辑： lance　　来源： 论坛

大家都知道肉类食品含有充足的人体必需氨基酸，能够提供人体所需的蛋白质、脂肪、无机盐和维生素等等，是人类日常饮食中非常重要的优质蛋白和微量元素的来源。　　肉类是老百姓餐桌上最常见的食材　　市面上比较常见的肉类大致分为三种　　热鲜肉、冷鲜肉、冷冻肉　　那这三种肉到底如何区分？　　有何区别　　哪种肉品质又是最好的？　　小科带您具体了解一下　　“热鲜肉”是指宰杀后未经冷却处理直接上市销售的鲜肉，刚刚放血的牲畜肉温约为40℃至42℃，此时上市的“热鲜肉”为微生物的生长繁殖提供了适宜的温度，保质期短。　　“冷鲜肉”是指在严格控制的0℃至4℃、相对湿度90%左右的冷藏环境下，将屠宰后的酮体放置16-24小时，肌肉组织发生一系列变化的鲜肉。此时肌肉的僵硬状态逐渐消失，因排酸和蛋白酶、钙激活等多种因素作用，大的肌纤维逐渐向小的肌纤维、纤维片转变，同时蛋白酶在酶的作用下产生氨基酸的风味物质，使肌肉变得柔嫩、多汁，具有丰富的肉香味，便于人体消化吸收，成为真正意义上的食用肉。现在大型超市、肉食专卖店销售上的肉基本上是冷鲜肉。　　“冷冻肉”是指宰后的肉先放入-28℃以下的冷库中冻结，使其中心温度低于-15℃然后在-18℃环境下保藏，并以冻结状态销售的肉。从细菌学的角度来说，当肉被冷冻至-18℃后，绝大多数微生物的生长繁殖受到抑制，比较安全卫生。但是，肉内水分在冻结过程中，体积会增长9%左右，大量冰晶的形成，会造成细胞的破裂，组织结构遭到一定程度的破坏，解冻时组织细胞中汁液析出，导致营养成分的流失，并且风味也会明显下降。超市内放在冷冻柜内销售的肉就是冷冻内。　　小贴士　　以后买肉优先考虑冷鲜肉。　　鲜肉看起来新鲜，但特别新鲜的肉未必好。　　冷鲜肉比热鲜肉多了排酸降温过程，经过排酸、解僵和酶的催化，口感在几种肉里最好，营养也得到了最大程度保留。　　冷冻肉在大宗运输过程中有很大优势，保质期最长，但是成冻和解冻会造成肉质组织和细胞破裂，丧失大量细胞液造成口味、营养下降。

一直以来都想把自己在基因克隆方面的心得写出来，让更多的刚刚进入生命科学领域的人受益，因为自己刚开始做克隆时也遇到过各种问题，经过较长时间的总结和实践，我的题组现在的基因克隆都是一次到位的，基本不需要重复做。其实我只是一个只有几十万科研经费的小青椒，不过我对科研非常热爱，我喜欢买实验用的各种酶啊，好用的耗材之类的东东超过我对自己的衣服鞋子的热爱，所以我看起来穿的及其普通，可是我的实验花费有点奢华，呵呵，可能像我这样的人不多吧，哈哈，反正无所谓开心就好。下面言归正传（1）是酶切位点的选择。我的实验室有Takara、Promega以及NEB三种公司的常用的酶，这极大的丰富了我们的选择，所以在设计PCR产物的酶切位点之前首先要看看哪两个酶之间是可以进行同时酶切的。因为这三家公司的双酶切表的组合完全不同，最佳的方案是我们能够按照需要去选择合适的酶。有人说这得花很多钱吧，其实不然，Takara几乎每年9月都有一次促销活动，在他们七折的时候我一下买了三千块钱的酶，这一年来有用之不尽的感觉。Promega的酶也非常好用，而且长期五折，我也是常用的酶买了一批放在实验室里。至于NEB的实在是有一点贵的，我一般不批量买了，在NEB买的一般都是不常用的酶，比如FseI、AscI等等。酶的选择是实验成功的关键吆。（2）PCR引物的设计这一点我不想多说，虽然有很多的攻略里面讲到了PCR引物设计的原则等等，大家设计的时候要参考各种原则，我认为不然，因为做过实验的战友都清楚，有的时候很多PCR引物的选择是没有选择的，比如我要扩增一个完整的基因的ORF框，那么它的起始密码子，终止密码子部分都要克隆出来的，不能多也不能少一个碱基，即使起始部位或者终止部位的AT含量很高，高到你难以忍受，那怎么办呢，基本我们没有选择，如果实在是没办法的条件下，只能在PCR引物的5端加入人为设计的碱基而把引物的扩增部分后移或前移来避开难以扩增的部位，我不知道说清楚没有，如果引物序列OK，可以忽略上句话。所以大多数情况下引物我们是没得选择的，那么我们只能从PCR扩增条件上下功夫。（3）PCR扩增对于PCR扩增其实不同的基因可能策略不同，我来说几点相同的。首先很多新手会忽略引物的浓度问题，我在最开始做PCR的时候因为当时的基因非常容易扩增，所以其实我的条件并不是最佳的，但当时把基因扩出来了我也没有在意，直到有一天我需要在基因的5端加入3个HA标签，这样的PCR引物长度差异很大，一支引物100多bp，一支引物只有30bp，于是当我还有以前的条件时我扩不出任何的基因。当时扩了几次都不成功，各种温度都试过了也不成。于是我静下心来，把PCR的实验条件进行了全方位优化，在PCR反应体系中，把引物调整到各种浓度的，把模板调整到各种浓度的，有的加Mg2+，有的加BSA，还使用梯度PCR的条件，试了各种扩增温度的，结果让我很开心，最后我的基因被扩增出来了，而且好亮好亮的那种。记得当时自己高兴地跳了起来。也许这就是科研的魅力吧！在这次试验中我找到了最佳的PCR条件，这是三年前的事了，这个条件让我在三年中屡试不爽，几十个基因的扩增从未失手过。其实体系很简单，50ul体系中buffer 5ul、Mg2+ 1mM、dNTP 0.2mM、引物每支1ul（配成10umol/L浓度)、PCR酶一般是0.5ul、其余部分用水补平，混匀，离心一下，进行PCR扩增。其中引物从公司拿到干粉后我一般用水溶解至100umol/L浓度保存，吸取少量稀释十倍后用于PCR反应，这个浓度是最佳的。所以PCR体系中引物并不是越多越好，同样的模板的量也很关键，一般我都在10ng-100ng之间，太少或太多都会抑制PCR反应。当然，不同的基因其退火温度差异较大，建议第一次做直接做梯度PCR，设置的温度范围宽些，总会有扩出来的。反正把反应体系加好，把温度控制好应该就万事大吉了，如果这样仍然扩不出来，那就直接调整DNA模版的量吧，其他的因素应该不是原因（当然得保证引物，以及酶的质量得前提下）。（4）PCR产物的酶切，这是最简单的一步，一般我都是酶切过夜的。因为我认为PCR产物切得尽可能的充分对克隆很重要，毕竟保护性碱基只有几个。（5）质粒的酶切。虽然质粒的酶切很简单但是却很讲究，决定着克隆的成败。质粒提取我一般都用试剂盒，天根的很便宜了，现在好像一盒已经六折，一盒有200个，可以用很久。质粒提取完毕后我会用紫外分光光度法对质粒进行定量测定，根据A260的值计算出质粒的量，然后再进行酶切，一般酶切体系60ul，60ul体系中我只切总量1ug的质粒，一次切两管，酶切过夜后切胶回收或者不切胶直接回收，这取决于两个限制性内切酶之间的距离，十几bp以内我就直接回收了，如果偏大就要切胶回收。（6）连接 连接我采用的是Promega公司的T4 DNA连接酶，它的特点是22度连接三小时以上几款，这样我就可以在上午把质粒片段以及PCR片段回收后马上做连接，连接一个白天，到下午可以做转化了，涂板，过夜培养第二天早上看结果。然后挑克隆（一般我一个基因就挑四个克隆足已）培养一白天，下午稍晚些提质粒，然后马上酶切鉴定，一般酶切鉴定体系中我都做20ul体系，酶用0.5微升就够了（呵呵，该省的就省点吧），酶切一个小时跑胶就可以知道克隆是否成功了。这样从PCR到克隆鉴定完毕，一共三天。不过从我带学生的经验来看，从一个懵懵懂懂的新手到成功掌握该技术快则半个月，多则一个月，引人而异。各位也试试看吧！以上为本人在基因克隆方面的一家之言，难免有疏漏或过于肯定之处，感谢各位战友多提宝贵意见，多多交流，以后我会陆续贴出各种技术的实验心得，欢迎大家相互交流！