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红细胞裂解液

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红细胞裂解液相关的论坛

  • 【分享】非接触式超声波细胞裂解系统SL型

    非接触式超声波细胞裂解系统SL型型号简介：非接触式超声波细胞裂解系统可获得传统超声方法无可比拟的质量、效率和安全性，在分子生物学研究领域样品前处理掀起一场新的浪潮。用途广泛， 常用于细胞的破碎、裂解，细胞颗粒的释放。尤其是应用于腺病毒的微粒释放，除适合制备高效价的重组腺病毒外，还可以制备病毒DNA，DNA终端蛋白化合物，同时是土壤样品制备的理想仪器。已经成为CHIP（染色质免疫共沉淀）研究平台不可缺少的标准化工具。特点：1．无气雾浮质产生-增强生物安全性，用于无菌操作； （如：分支杆菌，乙肝病毒，甲肝病毒，流感（包括H1N1），非典病毒ＳＡＲＳ)；2． 消除了样品交叉污染的危险；能隔着离心管能打断染色体、破碎细胞。3．消除了传统的手持探头，固定探头的繁琐，带有消音压紧装置；4．可有效阻止样品泡沫的产生；5．中文液晶显示，功率可以微调，击进方式可每次5W微调；6．采用周期性的脉冲破碎细胞，脉冲的启动和终止时间可调，可调时间精确至0.1秒7.可处理多种样品，样品处理范围广泛；8．可使用标准地可抛弃式容器 (PCR tubes Eppendorf, 1.5~50ml Corning/Falcon tubes) ；9．可用于处理微量样品；最少到5uL；10．可一次性处理4~32个样品，需选择相应的型号；11．自动的连续旋转离心管则使超声波的能量分布更为均匀，数据专一,且可以重复；12. 带冷却水循环槽，可选配低温冷却液循环机，避免了破碎过程中温度过高，影响病毒的感染力。

  • 红细胞与白细胞的重新定向

    白细胞与红细胞在此重新定向。白细胞（WBC）和红细胞（RBC）是血液中的重要组成部分，在生命体延续发展和生物治疗中具有不同的功能。红细胞，又称红血球，含有一种蛋白质称作血红蛋白。当血红蛋白从肺部吸收氧气时，血液呈红色。随着血液流经全身，血红蛋白向人体组织释放氧气。红细胞的生命周期为4个月，其形如圆盘，中间下凹，边缘较厚，呈圆饼状。白细胞，又称白血球，具有更加复杂的功能。白细胞构成了人体抵抗感染的一种防御机制。有多种不同类型的白细胞，其生命周期和功能各不相同。白细胞还能够产生一种特殊的蛋白质，称作抗体，能够识别并吞噬入侵人体的外来异物。 红细胞白细胞物理特征红细胞呈双凹圆盘状，无核。尺寸大约为6-8 μm。白细胞呈不规则性，但有一个核和外缓冲层。生命周期120天。几天，但在健康人体中可存活数天至数年不等。类型：血液中只有一种红细胞在血液中存在许多类型的白细胞，其功能各不相同：嗜中性粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞（巨噬细胞）、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞。循环系统：心血管系统。心血管和淋巴系统总计红细胞700:1白细胞男性每立方毫米460-6200万个；女性每立方毫米4200-5400万个。每立方毫米4000 – 11000个功能：向身体的不同部位提供氧气，并负责运送二氧化碳和其它废物。产生抗体，对感染形成免疫力，有些具有噬菌功能。血液中含量：

  • 【求购】液基细胞保存液

    【求购】液基细胞保存液

    产品简介:保存液快速对脱落上皮细胞、腺细胞、白细胞等进行很好的保存和固定，保持标本采集时的原始细胞形态，防止细胞在保存过程中发生变形、自溶等。并通过制片使细胞均匀涂布在载玻片上制成薄层细胞涂片。染色后细胞结构在显徵镜下清晰易辨，同时把血液、粘液和炎症细胞减少到最底程度，从而易发现和确认异常细胞。更有利于从细胞的形态变化判定细胞的病变程度，使判定结果更加准确可靠,提高异常细胞的检出率，大大提高宫颈癌筛查方法的特异性和诊断的准确率。·产品性能特点：:红细胞处理能力强：无需另加裂解液，既可将全部红细胞彻底清除，同时完美保存有诊断价值的各种有核细胞形态，从而对于临床上重度宫颈糜烂病人（或大量血细胞标本）能轻松一次性处理干净·消化分解黏液能力强：充分消化粘黏液，去除标本中普遍存在的黏液等干扰成份，释放具有诊断价值的细胞，保留有价值的诊断背景，有效提高检出率,检测结果准确。·细胞形态：核结构完整，其中核膜、核仁、核染色质颗粒及分布清晰可见，胞浆的嗜染性正常，有利于鉴别细胞的类别及来源。 细胞萃取:采用梯度离心分离萃取及红细胞处理专利技术和黏液消化技术多合一去除液基细胞学标本中的血液、黏液等干扰成份，富集提取细胞及诊断成份。 ·兼容性强：保存的细胞同时可做免疫细胞化学、HPV-DNA和衣原体等病原微生物的分子生物学检测，无需多次采样的烦恼。·应用广泛:细胞保存液临床运用非常广泛，除了运用宫颈细胞学检查外，还有胸腹积液、尿液、滑膜液、支气管冲洗液、脑脊液、针吸穿刺细胞及痰液标本细胞检测。·保存时间长：细胞在保存液中保存30天形态不变，真正保持细胞原始形态，更接近本身的组织学结构，更有利于恶性病变与良性反应性改变的鉴别诊断。·保存液细胞包裹技术，可以使细胞均匀悬浮，保证操作者在涂片标本时的随机性，任意取样涂片都具有代表性。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106231241_301155_2324710_3.jpg

  • 离心机如何应用于红细胞压积容量测定

    [b]离心机[/b]如何应用于红细胞压积容量测定摘要：红细胞压积（packedcellvolume，PCV）又称红细胞比容（hematocrit，Hct），是指红细胞在血液中所占容积的比值，测定时将抗凝血在一定的条件下离心沉淀，即可测得每升血液中血细胞所占容积的比值。　　1原理[b]离心机[/b]　　在100刻度玻璃管中，充入抗凝血至刻度，经一定时间离心后，红细胞下沉并紧压于玻璃管中，读取红细胞柱所占的百分比，即为红细胞压积容量（PCV又称压容、比容）。　　2．器材　　（1）温氏管：管长11cm，内径约2.5mm，管壁有100个刻度。一侧自上而下标有0～10，供测定血沉用，另一侧标有10～0，供测定比容用。如无这种特制的管子，可用有100刻度的小玻璃管代替。　　（2）长针头及胶皮乳头：选用长12～15cm的针头，将针尖磨平，针柄部接以胶皮乳头。也可用细长毛细吸管代替。　　（3）水平电动离心机：转速能达4000rpm者。　　3．方法　　（1）用长针头吸满抗凝血，插入温氏管底部，轻捏胶皮乳头，自下而上挤入血液至刻度10处。　　（2）置离心机中，以3000rpm的速度离心30～45min（马的血液离心30min,牛、羊的血液离心45min）,取出观察，记录红细胞层高度，再离心45min，如与第一次离心的高度一致，此时红细胞柱层所占的刻度数，即为PCV数值用％表示。　　4．注意事[b]离心机[/b]项　　（1）温氏管及充液用具必须干燥，以免溶血。　　（2）此时，离心机的转速必须达3000rpm以上，并遵守所规定的时间。　　（3）用一般离心后[b]离心机[/b]，红细胞层呈斜面，读取时应取斜面1/2处所对应的刻度数。血浆与红细胞层之间的灰白层由白细胞与血小板组成，不应计算在内。　　5．临床意义　　（1）红细胞压积增高：见于各种原因所引起的血液浓缩，使红细胞相对性增多，如急性胃肠炎、肠便秘、肠变位、瓣胃阻塞、渗出性胸膜炎和腹膜炎，以及某些传染病和发热性疾病。由于红细胞压积增高的数值与脱水程度成正比，因此在临床上可根据这一指标的变化而推断机体的脱水情况，并计算补液的数量及判断补液量的实际效果。另外。也见于各种原因所致的红细胞绝对性增多，如真性红细胞增多症、肺动脉狭窄、高铁血红蛋白血症等。　　（2）红细胞压积降低：见于各种贫血，但降低的程度并不一定与红细胞数一致，因为贫血有小细胞性贫血、大细胞性贫血及正细胞性贫血之分。

  • 【技术@创新】科学家：人类血红细胞变形机制　利于治疗疾病

    美国俄亥俄州立大学李巨研究小组首次在分子层面上设计一种模型，能够描述血红细胞是如何从正常的扁圆形缩成子弹形，穿过比它们的正常直径还小的血管。该研究结果在线发表在3月12日的《美国科学院院刊》上。 　　研究血红细胞如何从柔软的物体变成几乎液化的形态，能够帮助科学家们更好地了解疟疾、镰状细胞贫血症以及球形红细胞贫血症等。　　人类血红细胞在其4个月的生命中，要成百万次地挤过细小的毛细血管，以便输送氧气，运走二氧化碳等废物。这是生命必需的过程。血红细胞的直径约为8微米，它们在流动过程中，常常穿过直径只有2微米的血管。血红细胞会拉长成子弹形状，然后在穿过血管后，恢复成本来的扁圆形。　　李巨研究小组设计的这种模型显示，血红细胞的细胞骨架在这个变形过程中起到了重要作用。每个血红细胞都有一个细胞骨架，它由一种名为“血影蛋白”的蛋白分子构成，以一种类似毛刷的结构附着在细胞膜内侧。当这层蛋白质结构之间的键接破裂，或者这层结构与细胞膜之间的附着破裂，细胞就会变得更加柔软，从而能够穿过狭窄的通道。　　研究人员发现这种变化或者是由于两个血影蛋白分子之间的键被断开，或者是由于血影蛋白与一种细胞膜中的肌动蛋白的键被断开。而加诸机械力(如挤压或者切断)或者化学能(如ATP)，都足以断开这些化学键，进而引起细胞骨架的变形。　　研究人员将利用该模型进一步研究几种血液疾病，包括疟疾、镰状细胞贫血症以及球形红细胞贫血症等。在疟疾患者中，细胞里的寄生虫会改变细胞膜和细胞骨架，从而使细胞失去原有的弹性，无法穿过血管。在镰状细胞贫血症中，红细胞会变成镰刀状，而在球形红细胞贫血症中，红细胞会变成球形，因而都无法正常地通过血管。　　李巨博士1994年毕业于中国科学技术大学少年班。2000年获得麻省理工学院核工程技术系博士学位，之后在该系从事博士后研究工作，2002年成为俄亥俄州立大学助理教授。曾获美国材料学会2006年度青年科学家奖。

  • 【分享】免疫细胞的分离和保存技术

    用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此，须将各种参与免疫反应的细胞从血液或脏器中分离出来。参与免疫反应的细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。由于检测的目的和方法有同，分离细胞的需求和技术也异。有的仅需分离白细胞，有的则需分离单个核细胞（mononuclearcell），其中含淋巴细胞和单核细胞（monocyte），有的则需分离T细胞和B细胞以及其亚群。分离细胞选用的方法应力求简便可行，并能获得高纯度、高获得率、高活力的细胞。现用分离细胞群的原则，一是根据各类细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以组分，另一则按照各类细胞的表面标志，包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。 一、白细胞的分离 （一）血液中红细胞与白细胞比例约600～1000:1，两者的比重不同其沉降速度亦异，通常用两种方法加以分离。 本法是利用血细胞自然沉降率的分离法，采集血液后应及时抗凝，通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30～60min后，血液分成明显三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞，轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群，离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。 （二）聚合物加速沉淀法 本法是利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮（polyvinylpyrolidone，PVP）等使红细胞凝集成串，加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。本法的细胞获得率比自然沉降法高。

  • 【求购】自动液基细胞制片染色系统

    【求购】自动液基细胞制片染色系统

    ◆产品特点 1、真正高效全自动：全球独家全自动多动能制片染色一体化设备，标本处理、制片、染色一次完成。 2、杜绝拖带污染：使用一次性加样针脱针系统和自动独立滴染湿式染色系统，杜绝了传统染色可能造成的交叉污染。 3、提取黏液包裹细胞：采用梯度离心分离及红细胞处理裂解和黏液消化技术三合一有效提取细胞及诊断成份，富集细胞及诊断成份，保证诊断细胞不丢失。 4、捕获病变细胞：根据人体不同类型细胞比重不同的特点，尤其是病变细胞比重大、沉降速度快，从而最大程度地捕获病变细胞和具诊断价值的成份，提高检出率。 5、薄层细胞均匀分布：基液使细胞均匀悬浮，保证随机性，任意取样涂片都具有代表性，形成均匀分布的真正薄层细胞涂片。 6、无需前处理：直接上机，标本无需前处理，三合一独家技术，细胞结构保存更完好，操作更加方便，省时高效，较国内外同类方法机型自动化程度更高。 7、高品质诊断保障：三合一独家技术有效提取细胞及诊断成份，完全清除黏液、红细胞等干扰成份，有利于病变细胞的鉴别诊断。 8、强大而简捷微机界面：人机对话式中文界面，可选择妇科及非妇科，不同数量及不同染色方法，操作更加方便，功能强大 9、绿色环保：不含一点甲醛，对于临床一线操作人员身体没有损害，无需采取特殊的防护。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106231242_301156_2324710_3.jpg

  • 1%猪红细胞配制方法

    如题，哪位大神知道1%猪红细胞的配制方法？跟1%鸡红细胞配制方法一样吗？本中心扩项急用，跪求各位老师指点一二[img]https://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em63.gif[/img]

  • 尿液分析仪和手工镜检尿液中红细胞的结果分析

    尿干化学法分析仪和传统显微镜镜检是基于两种不同原理的检验手段，因此检测结果可能存在一定程度的差异。临床中两种诊断血尿方法常配合使用以达到检测效率与质量的统一，总结起来，对检测结果的影响因素主要有以下几方面。　　3．1 假阳性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阳性，但镜检却呈阴性 。其原因包括：(1)尿液分析仪潜血实验可与完整红细胞阳性反应，也能够与血红细胞释放的血红蛋白(hemoglobin，Hb)进行反应，这与显微镜只能够观察到完整的红细胞存在差异。健康人群尿Hb水平极低，定为阴性；(2)肌红蛋白(myoglobin，Mb)分子中包含Hb基团，当骨骼肌、心肌严重受损，血MB浓度升高，经肾排泄，导致尿液MB水平升高，潜血反应因此呈阳性，而显微镜检查却呈阴性；(3)部分患者尿中存在对热不稳定的酶，也可导致试剂块发生颜色变化，发生潜血反应；氧化性物质的污染也是造成潜血反应假阳性因素；高温或标本存放时间过长导致潜血反应阳性率增高 ；(4)尿试纸条超过保质期，或没有妥善保存、操作不当、仪器故障等均可能造成假阳性。　　3．2 假阴性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阴性，但镜检却呈阳性。其原因包括：(I)食物、药物影响：某些饮食、药物可引起尿液成份的改变如当尿液中存在大量的维生素时，维生素具有的强还原性使其竞争性结合反应产生的氧，导致尿试纸条无法出现潜血反应即出现假阴性反应；(2)高蛋白、高比重尿样削弱了试剂块潜血反应的敏感度，使能够发生反应的成分被包裹，反应试剂无法接触到，从而出现假阴性结果。　　3．3 离心对检测结果的影响 离心中若速度过快，致使有形成分遭到破坏；但过慢时，沉渣中可能无法找到，以至于漏掉。因此对检验结果出现怀疑时，可实验潜血证实进行验证。总之，随着尿干化学分析仪普及，工作效率得到了极大提升，也使检测红细胞敏感度提高，但显微镜镜检也是无法替代的。对于疑似阳性反应的病例，应采用尿沉渣镜检进行复测，以求结论准确，提高检测可靠性。

  • 【实战宝典】哪种裂解方法最好？

    问题描述：哪种裂解方法最好？解答：[align=left][font=宋体]含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组[/font][font='Times New Roman','serif'] DNA [/font][font=宋体]的首选。裂解包括膜蛋白的游离和与基因组[/font][font='Times New Roman','serif'] DNA [/font][font=宋体]相连接的蛋白质的游离。蛋白酶的作用是使蛋白质变小，故而对蛋白质的游离有巨大的促进作用；同时，巨大的基因组[/font][font='Times New Roman','serif']DNA [/font][font=宋体]是很容易[/font][font='Times New Roman','serif']“[/font][font=宋体]缠[/font][font='Times New Roman','serif']”[/font][font=宋体]住大分子的东西的，蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组[/font][font='Times New Roman','serif'] DNA “[/font][font=宋体]缠[/font][font='Times New Roman','serif']”[/font][font=宋体]住，有利于蛋白质在纯化操作中的去除，使最终获得的基因组[/font][font='Times New Roman','serif']DNA [/font][font=宋体]的纯度更高。[/font][/align][align=left][font=宋体]高浓度蛋白质变性剂[/font][font='Times New Roman','serif'] ([/font][font=宋体]如[/font][font='Times New Roman','serif'] GIT[/font][font=宋体]、[/font][font='Times New Roman','serif']GuHCl [/font][font=宋体]等[/font][font='Times New Roman','serif']) [/font][font=宋体]的裂解方法，是抽提[/font][font='Times New Roman','serif'] RNA [/font][font=宋体]的首选。总[/font][font='Times New Roman','serif'] RNA [/font][font=宋体]的抽提，最重要的是快速裂解细胞膜，至于与基因组[/font][font='Times New Roman','serif'] DNA [/font][font=宋体]相连接的蛋白质的裂解以及基因组与蛋白质[/font][font='Times New Roman','serif'] “[/font][font=宋体]缠[/font][font='Times New Roman','serif']”[/font][font=宋体]住的问题，因为都不会对以后的纯化产生大的影响，可以不考虑。高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜，进而迅速抑制住细胞内的[/font][font='Times New Roman','serif'] RNA [/font][font=宋体]酶，从而确保了[/font][font='Times New Roman','serif'] RNA [/font][font=宋体]的完整性。除了极少量不适用该方法的样品[/font][font='Times New Roman','serif'] – [/font][font=宋体]主要是植物，其它绝大部分样品的[/font][font='Times New Roman','serif'] RNA [/font][font=宋体]的抽提，都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。当然有些样品，如肌肉，即使是[/font][font='Times New Roman','serif'] RNA [/font][font=宋体]抽提，也强烈建议使用含蛋白酶的裂解液[/font][font='Times New Roman','serif'] ([/font][font=宋体]或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质[/font][font='Times New Roman','serif']) [/font][font=宋体]，原因在于这些样品中的蛋白质，是非常难以去除的。该方法是获得最大得率和最高纯度的基础。[/font][/align][align=left][font=宋体]总之，提取不同样品的基因组需要选择不同的方法。[/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【原创大赛】浅谈体内哺乳动物红细胞微核实验的疑难点

    [align=center]浅谈体内哺乳动物红细胞微核实验的疑难点[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心：闫敏[/align] 本人长时间从事毒理学研究和安全评价工作，主要负责一般毒理和遗传毒理，微核试验属于遗传毒理实验中的一项重要研究，在不断的摸索和实验过程中，总结了几点经验和摸索出的关键点并做以下讨论： 红细胞微核实验经过前几次的失败，总结了存在的问题和可能的影响因素如下： 1.阳性结果不明显 阳性对照使用环磷酰胺，环磷酰胺的水溶液不稳定，配制好后2-3h后有可能就会失效，并且要避光2-8℃保存。有时候实验使用的阳性对照溶液配制时间过长，可能已经失效。一般的阳性对照组溶液均为现配现用，不宜长时间放置，容易变质。 2.取材，制片过程存在问题 a.取骨髓时，肌肉组织未完全剥离，导致挤出骨髓时所含杂质太多；可以用纱布进行擦拭并剔除多余组织和肌肉，得到干净的股骨； b.取骨髓的方式有两种，用止血钳挤或者用注射器捅出骨髓，但是两种方法都不能将股骨损坏，导致取出量少，没有代表性，用小牛血清推片后，镜下阅片细胞量很少，达不到阅片效果。止血钳挤骨髓：剪去股骨大骨一端，用止血钳平行夹住股骨，然后轻轻挤压，骨髓会像牙膏一样挤出来，然后放在玻片上。注射器捅骨髓：剪去股骨两端，用镊子镊住股骨，置于小牛血清上，用注射器来回捅骨髓腔，让骨髓释放在血清中，混匀，推片。 c.推片方法：推片一定要和玻片呈角度，一般为45°，推片向内侧倾斜，向外推片，使小牛血清平铺在载玻片面上。 3.染色问题 a.染液配比浓度高，染色时间过长。一般可采用1：9的比例来配制姬姆萨染液，染色10min，染液使用的PBS缓冲液的ph很重要，保持在6.8，ph偏酸或者偏碱都有可能导致红细胞染色效果不好，无法分辨成熟红细胞和嗜多染红细胞。 b.冲洗染液时一定要彻底，及时，不能让染液残留较多。用流水沿玻片磨砂端冲洗，直至洗出的流水为无色。 以上是在做红细胞微核试验时遇见并解决的问题，科研实验和研究就是在不断的失败和改正中获得成功。

  • 骨髓细胞的提取

    名 称：骨髓细胞的提取目的：分离并培养骨髓间充质干细胞原理：先分离出单核细胞然后再通过培养分离出骨髓间充质干细胞内容：步骤一：小鼠骨髓细胞的获取1． 断颈处死小鼠（7-12周，雌雄均可），投入盛有250ml左右的0.1%新洁尔灭或75%酒精中浸泡3-5分钟，拎出后将小鼠仰面翻铺于超净台上一个消毒托盘上。2． 用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。将它们放入另外一个消毒托盘中，并换一套新的剪子和镊子。手术器械事先均必须消毒。3． 小心剥离肌肉，分别剪下Femurs and Tibias, 剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。4． 拿两支5ml无菌注射器，每支吸取5ml IMDM(10%FBS, 50/50u/ml Pen/Strep)，换装一个4号针头（又称皮针）或1ml注射器的针头，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，对准一个无菌15ml离心管，将细胞冲出。每根骨用2.5ml IMDM培养液左右即可基本冲下骨髓腔内的细胞。5． 300C下离心，1200转/10分钟，去上清，但留1ml，以便用于在振荡器上悬浮细胞。6． 加进氯化铵溶液（NH4Cl: 8.99g/L, KHCO3: 1g/L, Na4-EDTA: 0.037g/L ，过滤灭菌, 40C储存）裂解红细胞，按1: 9比例，即1ml 细胞悬液，加进9ml氯化铵溶液，混匀，冰上10分钟。 7． 300C离心，1200转/10分钟，去上清。步骤二：淋巴细胞分离液分离小鼠骨髓细胞1． 按步骤二方法采集小鼠骨髓细胞，并破红细胞2． 细胞用4ml培养液悬浮，缓慢留置于8ml淋巴细胞分离液液面上，2000rpm for 20min.3． 小心吸取云雾状底层的基质细胞约1.5ml的体积，置于1个盛有1ml无菌细胞培养用PBS的15ml离心管中，颠倒混匀，1200rpm for 10min, 去上清4． 如果是注射用细胞，则用5ml PBS洗涤细胞2次；5． 离心沉淀下来的细胞用50-200ul PBS，计数细胞，并计算所需细胞体积数铺板培养

  • 裂解色谱的裂解条件

    裂解色谱的裂解条件

    1．裂解器 裂解器是完成裂解反应的装置，它可控制样品裂解的温度和时间，因此，裂解器的性能对结果的影响是不言而喻的。我们将在下一节详细介绍裂解器的性能指标，这里仅就裂解器的选择作一简单讨论。 目前商品化的四类裂解器为热教（带）裂解器、居里点裂解器、管式炉（包括微型炉）裂解器和激光裂解器。这些裂解器各有其优缺点（见下一节），选择裂解器首先要根据研究的目的和样品的性质，其次是实验室现有条件。当涉及到样品的降解机理时，必须考虑加热元件对样品的催化作用。热丝（带）裂解器和微型炉裂解器的样品负载元件多由铂制成，居里点裂解器则由铁、镍、钻的合金材料制成。裂解室（裂解时样品负载元件置于其中）多由内衬玻璃或石英的不锈钢制成。样品在这些加热的金属表而可能受到催化作用，或发生二次反应，从而造成分析结果的误差。尤其当研究生物大分子的裂解，或者是其他能产生强极性、热不稳定裂解产物的样品时，更应考虑这一点。这时就应选择那些有玻璃和石英内衬的裂解器，或者用石英样品管将样品与金属隔开。2．裂解温度 裂解温度一般是指裂解器的设定温度，而裂解时样品实际达到的温度常被称为平衡温度，后者低于或等于前者。合适的裂解温度应当使样品的裂解过程以初级反应为主。温度过高，样品裂解的初级反应加剧，二次反应大为增加。温度过低，样品裂解不完全。对于大多数样品，合适的裂解温度在400-800℃之间。如合成高分子样品多采用600℃左右的裂解温度，微生物和生物大分子样品多采用500-1000℃，而药物分析的裂解温度则为350-600℃。当然，实际选择时还应考虑具体的样品性质、形态、样品量以及裂解时间、升温速率等因素。3．裂解时间和升温速率 裂解时间是指样品开始升温到裂解完成所用时间。原则上讲，裂解时间越短，二次反应越少，对分析越有利。但必须保证在此时间内样品达到设定裂解温度且裂解基本完全。对于升温速率可调的裂解器，升温速率慢时，裂解时间应相应长一些。同样，裂解温度越高，裂解时间也应越长。一般情况下，采用最高升温速率（如20℃/ms) ，裂解时间为10s左右。对于采用程序升温裂解的研究则另当别论。有些裂解器，如管式炉裂解器，其升温速率是不可调的，这时可依据裂解器的 TRT （从加热开始到达设定温度所需的时间）来设定裂解时间。原则当然是裂解时间要大于TRT。总之，最终裂解条件的确定要通过实验来优化。4．裂解室温度（即样品的初始温度） 对于管式炉裂解器（连续式裂解器）这一温度常常等于室温，而对于热教和居里点裂解器（脉冲式裂解器），该温度是可以控制的。图所示为上述两类裂解器的温度——时间曲线，可见二者是很不同的。图a中设定裂解室温度为250℃，裂解温度600℃。样品进入裂解室（时间为0）后，其温度先由室温升至250℃，裂解时快速升温至600℃，裂解结束后降温至250℃；图b中裂解温度同样为600℃，但裂解开始前样品处于室温，裂解时样品才进入裂解室，快速升温至600℃，此后，直到将样品取出裂解室，样品温度一直维持在600℃。[img=,690,319]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711160756_01_2384346_3.png!w690x319.jpg[/img] 裂解室温度太低，会使裂解产生的高沸点产物冷凝在内壁而失去有用的信息。反之，裂解室温度太高，可能使样品在裂解前就发生挥发或部分裂解，还可能使高沸点产物进入色谱柱后冷凝（如果色谱柱温度不是很高）。使用连续式裂解器就不存在这个问题。另一方面，如果样品在裂解前必须除去挥发性成分，如溶剂，那么，使用脉冲式裂解器是有利的，而且很容易实现多阶裂解，即同一个样品可在不同的温度下裂解，以研究每次裂解后残留的样品情况。5．裂解器的清洗 前面我们己提到样品负载元件的材料性质可能对裂解有催化作用。同样品的污染一样，负载元件的污染也三角影响实验重现性的重要因素。任何类型的裂解器，在每次裂解之后，样品负载元件的表面状态都会有所改变。这是因为碳化物、氮化物或／和金属氧化物残渣会在上述表面形成，而这些活性残留物常常会对其后的裂解起催化作用。所以，为了获得重现的裂解结果，样品负载元件表面应尽可能保持干净，起码应当除去前次裂解的残留物。 清洗样品负载元件的方法主要有三种：一是用溶剂清洗，例如用丙酮、乙醇、甚至某些酸浸泡、清洗，然后烘干。二是用工具清洗，如用小刀刮去表面残留物。二是高温灼烧，例如在裂解器的最高温度下灼烧，或者将样品负载元件置于酒精灯或酒精喷灯上灼烧，以除去污染物。以上三种方法可以视具体情况而结合使用。此外，裂解室内壁也应注意清除污染物。

  • 【实战宝典】核酸提取中裂解液的使用量为多少合适？

    问题描述：核酸提取中裂解液的使用量为多少合适？解答：[align=left][font=宋体]裂解液的用量原则是确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。另外，裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的，而不是以核酸含量为基准，这一点务必牢记。[/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 单细胞凝胶电泳步骤

    单细胞凝胶电泳步骤：1. 分离制备单细胞悬液：（1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。（2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。2. 胶板制备：（1） 取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。（2） 水平取下盖片，取100μl于37℃水浴中保温的0.5%LMA与20μl细胞悬液（约400个细胞）混匀，立即铺片，加上盖玻片，4度凝固5至8分钟。3. 细胞裂解与电泳：（1） 将制备好的胶板去掉盖玻片后，浸于4℃预冷的细胞裂解液中，在4℃下裂解2.5到3小时。（2） 取出胶板，用双蒸水浸没漂洗后放入电泳槽中，浸泡在4℃预冷的电泳液中解旋20分钟。（3） 玻片水平放置阳极端附近，4℃电泳20到25分钟（25V，300mA）。可在电泳槽周围加冰块以保持低温。4. 中和与染色：（1） 电泳结束，将胶板浸泡于中和液中，每次10分钟，共中和3次，每次要更换中和液。最后晾干。（2） 取出胶板，置于染色缸中，在2μg/ml的EB染色液中，暗处染色5到10分钟。（3） 蒸馏水漂洗2次，每次5分钟。稍晾干，滤纸吸去多余水分，尽快在荧光显微镜下观察。从胶板制备开始到最后都应该在暗光下操作。先讲这些，你们可以先开始摸索，真正做了才能发现具体的问题，到时我们再探讨。

  • 单细胞凝胶电泳 标准操作规程(

    关键词：单细胞凝胶电泳目的：为便于各室单细胞凝胶电泳试验结果的可比性背景知识：略原理：在细胞核中，DNA是环状附着在核基质上，细胞裂解过程中，核基质被溶解、抽提，DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口，则使DNA超螺旋变的松弛，DNA环向外展，同时由于暴露了阴电荷，在电场力的作用下，松动的DNA环向阳极迁移，但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA，其迁移距离受到限制，因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。主体内容：操作步骤见下文主要参考文献：略操作步骤：1. 分离制备单细胞悬液：（1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，吹打成单细胞悬液（2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。2. 胶板制备：（1） 取20~50μl于56℃水浴中保温的0.5%普通熔点琼脂糖，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。（2） 取100~150μl 0.5%普通熔点琼脂糖加在底胶上，再于其上加盖玻片，4℃冷凝10分钟。（3） 取下盖片，取50~100μl于37℃水浴中保温的1.0%的低熔点琼脂糖与50~100μl细胞悬液（105个细胞/ml）混匀，立即铺片，加上盖玻片，4℃冷凝10分钟。（4） 去掉盖玻片，取70~100μl于37℃水浴中保温的0.5%的低熔点琼脂糖铺片，加盖玻片，4℃冷凝。3. 细胞裂解与电泳：（1） 将制备好的胶板去掉盖玻片后，浸于4℃预冷的细胞裂解液中，4℃裂解1小时。（2） 取出胶板，放入电泳槽中，浸泡在电泳液中解旋20分钟。（3） 4℃电泳20分钟（25V，300mA）。4. 中和与染色：（1） 电泳结束，将胶板浸泡于中和液中，每次15分钟，共中和两次，注意更换中和液。（2） 取出胶板，置于染色架上，滴加5μg/ml的PI，暗处染色20分钟。（3） 蒸馏水脱色15分钟。5. 镜检和分析：（1） 在荧光显微镜下观察，绿光激发吸收滤片590nm。必要时照相记录。（2） 记数观察的细胞，记录彗星细胞出现的频率，用目镜测微尺测头长与全长，计算核DNA迁移距离。* * * * *使用两层凝胶法，经裂解、DNA解旋、电泳和中和得到湿琼脂糖凝胶片。将湿琼脂糖凝胶片置于冰冷无水乙醇中脱水10分钟，后置于空气中自发干燥。每人制备2张琼脂糖凝胶片。全部操作在采血后8小时内完成，操作过程中注意避光。脱水干燥的琼脂糖凝胶片装于含有干燥剂的载片盒中运回实验室。使用50μl 30μM的溴乙锭溶液染色、照相。使用单细胞凝胶电泳软件分析所有照片，每人随机测量100个以上细胞的尾长和olive尾矩，以尾长和olive尾矩的算术均数代表个体DNA损伤情况。

  • 裂解器的选用和安装

    裂解器的选用和安装

    （一）几种主要裂解器的比较 表（上）对四种主要裂解器的原理作了总结，可以作为选择裂解器的参考。有人通过比较不同裂解器的性能发现，对于特定的样品，居里点裂解器可以给出特征性谱图，但这种裂解器容易被污染，且样品附着在铁磁载体上比较困难。若使用传统的管式炉裂解器，则难以获得重复性的结果。实验过程中污染不断增加，从而导致裂解谱图的逐渐变化。对于挥发性有机物来说，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]裂解器可以给出与理论预测一致的裂解产物分布。而热丝裂解器和居里点裂解器则给出不同的结果。在研究聚合物结构表征时，居里点裂解器比管式炉裂解器更为有效，用热丝裂解器也可获得与居里点裂解器相同的结果，但所用裂解温度应低于后者。作为一个典型的例子，表（下）列出了聚苯乙烯（PS）在不同裂解器上得到的产物分布。显然，不同的裂解器所得的结果是不同的。虽然不同的样品会有不同的裂解产物分布，但研究证明，样品的性质如分子量对裂解产物分布的影响是很小的。因此，引起产物分布差异的主要原因是裂解器和裂解方法的不同。[img=,690,811]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801051623_5871_2384346_3.jpg!w690x811.jpg[/img]（二）选择与安装裂解器 从上面的比较可知，不同的裂解器有不同的特点，所以在选择裂解器时要考虑具体情况，如样品的来源和性质、研究目的、现有仪器装置等等。如果只是在实验室内部研究聚合物的裂解谱图，而不做实验室之间的比较，那么，原则上各种裂解器均可使用，每种裂解器都能为这种实验室内部的比较研究提供有用的信息。如果改变裂解器的类型，以前装置上所得数据就可能失去意义，这是因为同一样品在不同类型的裂解器上往往难以得到完全重现的结果。对于复杂的生物样品来说，裂解谱图的区别往往在于某些裂解碎片产率的不同，因此必须严格控制裂解条件。在Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] 研究中，只有对样品量、样品在裂解器中的负载情况和裂解器的加热特性进行严格控制，方可获得长期的和实验室之间的重现性。当对裂解产物进行定量分析，研究反应机理和反应动力学时，应最大限度地减少二次反应，同时严格控制裂解条件。综上所述，我们推荐首先选择使用热丝裂解器和大功率居里点裂解器。 管式炉裂解器由于二次反应严重而较少用于聚合物和生物样品的Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]研究。当然，微型炉裂解器的性能要好得多，在聚合物的表征应用方面获得了很好的结果。尽管如此，热效裂解器和居里点裂解器的应用还是更为广泛一些，其中热效裂解器的实用性更强。居里点裂解器由于受铁磁材料种类的限制，裂解温度不能连续调节。在研究裂解机理和动力学以及优化裂解调条件时，这一点是很重要的。此外，在分析复杂的混合物时，或者分析无机物基体中的有机成分时，用热丝裂解器还可进行多阶裂解，即对同一样品进行不同温度（由低到高）下的裂解研究。 至于激光裂解器，虽然也可用于聚合物的裂解分析，但由于其裂解温度不易精确控制，故使用较少。它的应用领域主要在有机地球化学方而。如岩矿中有机物的Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]分析，采用一般的裂解器所获挥发性产物的产率较低，激光裂解器则可获得较为理想的结果。在研究挥发性样品的裂解时，多用管式炉裂解器。此外，静态裂解是管式炉裂解器的长处。例如用静态裂解法分析石油馏分就比用热丝裂解器的动态法更为有效。总之，裂解器的选择要根据具体情况，综合考虑。必要时还可改装仪器，以适应特定的研究目的。 裂解器选定之后，就可将其安装在色谱仪上。现在的商品化裂解器一般都适用于各种 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] 仪器，大都采用一根细不锈钢管通过硅橡胶密封垫或 O 形圈及锁紧螺母将裂解器直接装在色谱仪进样口上。在裂解器和色谱柱之间死体积应尽可能小，否则会降低分离效率。同时要注意裂解器和色谱仪之间连接管的保温问题，以防裂解产物在此处冷凝。图示为裂解器和色谱仪连接的典型载气气路图。仪器之前气路上的三通主要是用于保护色谱柱，其中一路载气的流速可用色谱仪固有的气路系统控制。当打开裂解器进样时，通过裂解器的载气就被放空，此时，直接进入色谱柱的载气仍能保持一定的流速，不至于因空气扩散进入色谱柱而造成固定液的氧化降解。而当老化色谱柱时，或者维修裂解器时，也可让载气直接进入色谱柱，而不通过裂解器。[img=,300,376]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801051623_4230_2384346_3.png!w300x376.jpg[/img] 需要强调指出，色谱仪汽化室是构成Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]系统死体积的一个重要因素，因此必须予以考虑。比较理想的方法是在其中的衬管中装填一些涂有固定液的填料（与填充柱的填料相同，且要注意所用固定液与色谱柱固定液相同，用石英玻璃毛堵塞衬管两端以防止填料被吹入色谱柱）。这样，既大大减少死体积，又能防止高沸点裂解产物可能对色谱柱的污染。它还相当于预柱，能起到预分离的作用，而次预柱的温度可以方便地用原仪器的汽化室控制系统控制。 仪器安装好后应检漏，以确保气路系统的密闭性。在进样前，还应对裂解器进行空载加热，以消除本底的影响。然后，就可以用待测药品来选择和优化裂解条件了。

  • 在人类骨髓中发现可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞

    近日，来自加利福尼亚大学的研究者发现了在人类骨髓干细胞和所有的免疫细胞之间存在一类“环节缺失”（missing link）的细胞。这或许为我们深入理解免疫系统以及免疫系统疾病发生的分子机制提供帮助。相关研究刊登在了9月2日的国际杂志Nature Immunology上。这项研究是在人类骨髓中进行的，因为其包含了产生人类自出生后所需血液的所有的干细胞。理解成人正常血液的形成是揭开白血病发病机制关键的一步。之前的研究中，研究者重点研究了骨髓中的血液干细胞，这种干细胞生存时间比较久，可以再生，而且可以产生所有的血液细胞。在这过程中，干细胞可以分裂产生其发育的中间状态体，称为前体干细胞，前体干细胞可以产生血液的不同谱系，比如产生红细胞或者血小板等。和干细胞一样，祖细胞也非常稀少，因此研究就好比海里捞针一样，研究者Lisa这样说，此前的研究工作中，他们发现了一种具有部分分化能力、相当成熟的淋巴祖细胞。在这项最新的研究中，研究者描述了一种更为原始的可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞。

  • 有关裂解进样的裂解进样器

    最近有点掉进气中油的圈子出不来了。从荧光、紫外、红外、总烃、再到色谱。对于大组分样品，色谱有一种裂解进样法，有使用过此装置的版友吗？其能承受的进样量有多大？裂解温度范围最大能做多少温度？有单卖此部件的厂家吗？此次就算能解决问题，我也想从各方面都做个尝试。因为我始终放不下我的总烃法，此法快捷方便，如能解决加温裂化、裂解问题，我相信总烃法可能是最方便的。

  • 细胞决定人类健康：智能超声波细胞破碎仪

    细胞，生活中无处不在，我们身体里有细胞：脑细胞，造血细胞……路边的小草也有细胞，就连我们看不到的细菌都是细胞构成的。细胞与生活息息相关，所以说细胞决定人类健康。　　[b][url=http://www.xo-yq.net/]智能超声波细胞破碎仪[/url][/b]，一款将电能通过转换器变成声能，然后这种能量通过液体介质而变成一个个小气泡，这些小气泡会在短时间内迅速炸裂，产生能量，从而起到破碎细胞的作用。　　生病是人之常情，免不了吃药。药品是怎么来的呢？　　首先通过观察细菌，通过分析细菌的组成，然后讲细胞提取出小部分，导入化合物，最后确定候选物，漫长的过程肯定需要[b]智能超声波细胞破碎仪[/b]啊。　　南京先欧科技，专业制造[b]智能超声波细胞破碎仪[/b]，[b]超声波细胞粉碎机、裂解仪[/b]……[img=智能超声波细胞破碎仪,50,50]http://www.xo-yq.net/img/%E6%99%BA%E8%83%BD%E8%B6%85%E5%A3%B0%E6%B3%A2%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%A0%B4%E7%A2%8E%E4%BB%AA.jpg[/img]

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