拜氏不动杆菌

机会致病菌菌——不动杆菌属摘要 常见菌的研究已经很多了，笔者就机会致病菌——不动杆菌属，主要研究了分类和耐药性的问题及产金属β-内酰胺酶的发生率。感觉结果还有点作用，就将结果总结了下，现就结果报告如下。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

刚看到报纸，＂新西兰奶粉肉毒杆菌事件竟然摆乌龙＂。质检部门情何以堪?

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

[color=#333333]乳清蛋白中检查出肉毒杆菌违反了食品安全法的哪些条款[/color]

在自然界存在一种叫做土壤杆菌的细菌，它能感染植物的受伤组织，特别是根茎交接处的受伤组织，引起冠瘿瘤。冠瘿病损害为数众多的双子叶植物，特别是葡萄、核果类树木和观赏植物。冠瘿细胞是植物肿瘤细胞，在许多方面与动物肿瘤细胞类似。它们只有无限生长的能力，把一小块冠瘿组织放入不含植物激素的培养基中培养，能长成大的细胞团块(愈伤组织)，而正常植物细胞在不加植物激素的培养基中则不能生长。冠瘤拥胞能制造一类叫做冠瘿碱(opine)的氨基酸衍生物(如章鱼碱和蓝曙红)，供根癌土壤杆菌作为养料使用，在正常植物细胞中从未发现过这类物质。 根癌土壤杆菌能把植物细胞转化为肿瘤细胞，是由于它含有一种肿瘤诱导质粒，简称Ti质粒。当细菌感染植物时，Ti质粒中大约占这个质粒l／10的DNA片段(称为转移DNA或T—DNA)进入植物细胞，并整合到植物的染色体上，随染色体一起复制。随后T—DNA携带的细菌基因（致瘤基因和合成冠瘿碱的基因)使在植物细胞中表达，使植物细胞转化成肿瘤细胞，并合成冠瘿碱。由于根癌土壤杆菌能把细菌基因引入植物细胞，并在那里表达出蛋白质来，所以人们称它为天然的“遗传工程师”。这给人们以启示。能否用重组DNA技术把与高产、优质、抗病、抗旱和抗盐碱等优良件状有关的基因循人到T—DNA中，然后再通过根癌土壤杆菌的感染把这些基因引入植物细胞呢?最近几年的研究进展表明，这是完全可能的。 Ti质粒是独立复制的环状DNA分子。由大约1．5—2xl05碱基对组成，相当于细菌染色体的3—5％。它有两个主要类型：一类叫章鱼碱质粒，含有这种质粒的细菌能以章鱼碱为氮源和碳源生长；另一类叫蓝署红质粒，含有这种质粒的细菌能利用蓝曙红。每一种根癌土壤杆菌只含有一种Ti质粒，或者是章鱼碱质粒，或者是蓝曙红质粒。这两种质拉的DNA同源性很低，一般为12—16％，说明它们可能具有不同的进化史。T—DNA是Ti质粒中最重要的组成部分．它所携带的基因主要有两个功能：一是决定肿瘤的形成和肿瘤的形态；二是控制冠瘿碱的合成。如果T—DNA中的致瘤基因发生突变，可能出现三种表型：一是产生比正常肿瘤个大的肿瘤；二是使肿瘤长出许多根；三是使肿瘤长出许多芽。在T—DNA区域以外也有一些基因已被定位，其中毒性基因的功能是决定根癌土壤杆菌对植物的感染以及T—DNA的进入和整合；章鱼碱代谢基因和蓝曙红代谢基因分别编码代谢这两种冠瘿碱的酶；质粒转移基因控制细菌的接合作用；不相容性基因控制Ti质粒与其它质粒的不相容性。 Ti质粒之所以能成为把外源基因引入植物的良好载体有两方面的原因。第一，携带质粒的根癌土壤杆菌的寄主范围很广，实际上它能转化所有的双子叶植物。第二，整合到植物染色休上的T—DNA能随种子遗传，而且T—DNA有自己的启动基因，可以启动与其连接的外源基因的转录。此外，也有人研究以植物病毒DNA为载体转移目的基因，或者直接把DNA注射到植物的花粉管和子房中。Ti质粒直接用作基因载体有两个困难：一是它的分子量太大，内切酶位点很多，不容易进行体外重组DNA操作；二是被T—DNA转化的植物细胞成为肿瘤细胞，不能再生成植株。克服第一个困难的办法是先把T—DNA克隆到大肠杆菌的小质粒上，把目的基因插入到小质粒的T—DNA中，然后再设法转移到天然的Ti质粒中。克服第二个困难的办法是在T—DNA的特殊位点中插入目的基因和供筛选用的抗药基因，一方面使致瘤基因发生插入突变，从而使转化细胞能再生成植株，另一方面使目的基因正好位于T—DNA的启动基因的下游，以便启动目的基因的转录。有人经过研究发现了这样一种作用模型：大多数双子叶植物受伤后会产生一种叫丁香酮(acetosyringone)的物质，这时土壤农杆菌感染后，丁香酮在Ti质粒上Vir A的产物A的协同作用下促进了Vir G产物G的活化(即磷酸化)，然后产物G相继激活Vir B、V ir c、Vir D、Vir E等操纵子，特别是Vir D和Vir E。前者产生两种蛋白，D1为缺刻酶(nickase)，它能特异性地在T—DNA两端产生缺刻；D2则是一种蛋白复合物，它粘在已断开的T—DNA的两端，具“导航”的功能，有人认为它是Rec A，起重组的作用。后者产生单链结分蛋白(SSB)，有保护缺刻产生后的T—DNA的功能。T—DNA在诸多蛋白的导航、保护下重组进核基因组。这种转比方法优点是方便，不需分离原生质，且插入的基因拷贝数目少，比较稳定。但它的缺点是土壤农杆菌主要只适于侵染双子叶植物，单子叶植物能被侵染的较少，这就在一定程度上影响了这种方法的推广。有人发现单子叶植物受伤后很少产生丁香酮，这是否是侵染的关键呢?目的许多实验室都在作这方面的探索，以期望能克服这种方法的局限性。http://hiphotos.baidu.com/wfvcshengwu/abpic/item/629fdb39539824d63b87ce6e.jpg

[b]阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，如果用SN标准检测肠杆菌科还需要再另检阪崎肠杆菌吗？谢谢！[/b]

嗜热芽胞杆菌怎么检测，有谁有相关的国标或者检测方法，谢谢

鉴于目前恒天然奶粉出肉毒杆菌一事，一起学习一下肉毒杆菌和肉毒素。肉毒杆菌的全名叫肉毒梭状杆菌（也叫肉毒梭菌Clostridium botulinum），是一种革兰氏阳性厌氧杆菌，其生长繁殖及产毒的最适温度为18～30℃。肉毒杆菌广泛分布于土壤、淤泥及动物粪便中，其中土壤是重要污染源，它可借助食品、农作物、水果、海产品、昆虫、禽类等传播到各处。肉毒杆菌家族一共兄弟7个，本身其实没有毒性，但其中有4个能在厌氧环境下（比如肠道、密闭发酵食品）产生肉毒毒素。食品在加工、贮藏过程中被肉毒杆菌污染，食前对带有毒素的食品又未加热或未充分加热，就易引起中毒。在我国的新疆、青海等少数民族地区几乎每年都会出现自制发酵肉制品导致的肉毒中毒、甚至死亡。肉毒毒素（botulinum toxin，AX）是肉毒杆菌产生的含有高分子蛋白的神经毒素，是目前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强烈的生物毒素，它主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹是致死的主要原因。肉毒毒素真正被大众了解，是因为一些明星注射肉毒来除皱。虽然这个毒素的毒性比较大，一点点就能毒死人，但它本身对热不稳定，煮开几分钟就破坏掉了，真正难解决的是它的芽孢。肉毒杆菌在感觉不舒服的时候就像作茧一样用一些蛋白和糖类物质把自己包起来，然后就能“刀枪不入”，一般的加工手段都杀不死它。等它重新进入合适的环境，比如人的肠道，它又能苏醒过来继续干坏事。成人由于肠道里面的菌群早已站稳了脚跟，少量的肉毒杆菌是斗不过这些“地头蛇”的，因此对成人的危险性相对较小。但婴儿尤其是1岁以下的小宝宝，正常菌群还处于建设阶段，这个时候肉毒杆菌来捣乱的话，有可能对宝宝造成较大影响。　　我国乃至全世界都没有乳粉中肉毒杆菌的限量标准，因为肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物，而标准的管理是要考虑成本的，正因如此，各国都不把它写入标准。但这并不意味着根本不管，比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。用标准管理有限的问题，用过程的控制实现更全面的安全保障，这才是科学的食品安全管理理念。对于负责任的大企业，其质控项目数量和质控要求都是远远高于国家标准要求的。

[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在当今的生物技术领域，高通量重组蛋白表达技术在基础研究和商业应用中扮演着非常重要的角色。随着后基因组时代的到来，研究人员对大规模蛋白表达和纯化的需求日益增长，大肠杆菌因其易于遗传操作、低成本、生长迅速成为生产重组蛋白的首选微生物宿主。本文将综述大肠杆菌中高通量重组蛋白表达的现状和未来展望，探讨从目的基因获取到蛋白表达和纯化的先进技术，并讨论如何克服[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][u][font=宋体][color=#0000ff]重组蛋白表达[/color][/font][/u][/url][font=宋体]过程中的挑战。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]高通量重组蛋白表达技术[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量研究是一种能够同时检测数千个生物分子，使大规模重复成为可能的研究。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代初，第一台[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]测序仪被开发出来，人类基因组计划随之开启，高通量技术在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、蛋白质、脂质和代谢物检测的需求也急剧增加。自该技术提出以来，大肠杆菌中高通量重组蛋白表达和纯化已经得到了广泛的应用。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]1. [/font][b][font=宋体]目的基因的制备[/font][/b][font=宋体][font=宋体]获取目的基因是重组蛋白表达的第一步。传统的方法是从[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库中直接克隆基因，但这种方法存在局限性，如从库中筛选基因较为费时以及难以添加融合标签等。高通量[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术是目前获取目的基因最常用的技术，设计引物并调整好参数后，即可在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]仪中自动完成目的基因的制备。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]2. [/font][b][font=宋体]表达载体的高通量构建[/font][/b][font=宋体][font=宋体]研究人员开发了多种构建表达载体的克隆方法，包括基于限制性内切酶的克隆、重组克隆和不依赖于连接反应的克隆等。这些方法各有优势和局限性，但在近年来都有显著改进。例如，基于限制性内切酶的克隆因其简单、高效、通用和成本效益而备受关注。一个理想的大肠杆菌表达载体应具备选择标记、复制起点、转录启动子、[/font][font=Calibri]5'[/font][font=宋体]非翻译区（[/font][font=Calibri]5'UTR[/font][font=宋体]）和翻译起始位点。此外，融合标签的添加对于目的基因的转录和蛋白表达同样至关重要。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]3. [/font][b][font=宋体]大肠杆菌表达菌株的选择和细胞培养[/font][/b][font=宋体][font=宋体]为保证蛋白质表达成功及其表达质量，应选择合适的大肠杆菌菌株，如[/font][font=Calibri]BL21[/font][font=宋体]及其衍生菌株是较常用的重组蛋白生产菌株。培养大肠杆菌比较简单的方法是分批培养，但此方法对生长的控制比较有限。近年来，高通量培养技术使研究人员能够在一系列发酵条件下处理大量样品，大大加快了生产时间。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]4. [/font][b][font=宋体]高通量蛋白表达和纯化[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量平台可以快速克隆基因、挑选菌落、分离质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、转化细菌、表达和纯化蛋白质。这些平台虽然成本高昂，但为复杂的分子生物学实验操作提供了极大的便利。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论与展望[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌中的[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][u][font=宋体][color=#0000ff]高通量重组蛋白表达技术[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]极大的推进了重组蛋白的表达进程。尽管存在挑战，但通过不断优化和创新，研究人员正在朝着更高效可靠的蛋白质生产系统改进。未来的发展方向包括进一步优化克隆方法、开发新的融合标签、改进表达载体和菌株，以及利用高通量技术实现从[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]到大规模蛋白质生产的快速转变等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=Calibri]Jia B, Jeon CO. High-throughput recombinant protein expression in Escherichia coli: current status and future perspectives. Open Biol. 2016 6(8):160196. doi:10.1098/rsob.160196[/font]

请问HJ347.2-2018中阳性对照菌株为什么要用大肠埃希氏菌，阴性对照菌为什么用产气肠杆菌？产气肠杆菌跟大肠埃希氏菌在乳糖蛋白胨里的反应机理有什么不同？

我今天再做肉制品的致病菌时，检出沙门氏杆菌，沙门氏杆菌对人体的健康危害有哪些啊

大肠杆菌发酵经验总结首先，补料速率与比生长速率直接影响着乙酸的生成速率和积累量（主要是补料速率与比生长速率影响发酵液中的残糖量，进而影响），所以适当的控制补料速率和比生长速率，对于控制乙酸的量有很好的效果。 其次，必须要保证充足的溶氧，并严格控制pH值，而且补酸碱的速率尽量缓和，不能太快；温度对于蛋白的表达也有很重要的影响，较低的发酵温度下所生产出的蛋白大多是有活性的，而较高的发酵温度下产生的蛋白大多一包涵体形式存在。第三，选取合理的诱导时间非常重要，一般的诱导时间选在指数生长后期，而且诱导时的比生长速率最好能控制在0.2之内，选在此时诱导，1.将菌体的快速生长期与蛋白合成期分开，使这两个阶段互不影响，有利于蛋白的高表达；2.已经得到了大量的菌体，而且菌体的生物量基本接近稳定，不论是从动力学角度，还是能耗，物料成本方面，都比较合理。第四，补料过程中的碳氮比也很重要。若氮源过高，会使菌体生长过于旺盛，pH偏高，不利于代谢产物的积累，氮源不足，则菌体繁殖量少从而影响产量；碳源过多，则容易刑场较低的pH，抑制菌体生长，碳源不足，则容易引起菌体的衰老和自溶。另外，碳氮比不当还会引起菌体按比例的吸收营养物质，从而直接影响菌体的生长和产物的合成。 根据自己的经验，一般情况下，对于一个稳定的发酵工艺下，如果总是在固定的发酵时间段出现溶菌现象，而且能排除噬菌体和染菌的可能性后，那就可能是因为碳氮比不合理造成的。可以适当调整碳氮比。 大家讨论得较多的是关于代谢副产物乙酸对大肠杆菌发酵的影响，针对我们论坛所发的帖，我先总结以下几点，并作出相应解决措施。一、代谢副产物-乙酸乙酸是大肠杆菌发酵过程中的代谢副产物，在多大的浓度下产生抑制作用各种说法不一，一般认为在好气性条件下，5～10g/L 的乙酸浓度就能对滞后期、最大比生长速率、菌体浓度以及最后蛋白收率等都产生可观测到的抑制作用。当乙酸浓度大于10或20g/L 时，细胞将会停止生长，当培养液中乙酸浓度大于12g/L 后外源蛋白的表达完全被抑制。预防乙酸产生的措施： 1、通过控制比生长速率来减少乙酸的产生：比生长速率越高，乙酸产生越多，当比生长速率超过某个值时，乙酸开始产生。可以通过降低温度，调节酸碱度，控制补料等方法来降低比生长速率。 2、透析培养： 在大肠杆菌的培养过程中可以用透析技术除去发酵液中的有害物质，降低乙酸含量从而实现重组菌的高密度发酵和产物的表达。3、 控制葡萄糖的浓度：葡萄糖是大肠杆菌发酵过程中重要的碳源之一，用其作碳源是要将其控制在一个较低的水平上，以减少乙酸的产生。 常用的控制方法主要有： 恒pH法：大肠杆菌会代谢葡萄等产生乙酸，使pH 值下降。因此可通过pH值的高低作为控制葡萄糖的指标，该法的缺点是pH 的变化不完全是由葡萄糖代谢的结果，容易造成补料体系出错。 恒溶氧法：菌体代谢时会消耗氧，使溶氧下降，当葡萄糖浓度低到一定程度时菌体代谢下降，消耗氧能力下降，溶氧上升。因此，根据溶氧曲线补加葡萄糖，保持溶氧恒定，可以控制葡萄糖在一定的水平。 二、温度大肠杆菌发酵最适温度是37 C，当温度最适菌体生长时，比增长速率将会增大。随温度上升细菌代谢加快，其产生代谢副产物也会增加。这些副产物会对菌体的生长产生一定的抑制作用。菌体生长过快也会影响质粒的稳定性。降低培养温度，菌体对营养物质的摄取和生长速率都会下降。同时也减少了有毒代谢副产物的产生和代谢热的产生。有时降低温度更有利于目的蛋白的正确折叠及表达。在重组大肠杆菌的发酵中不同发酵阶段其最适温度也不 同，为了能获得大量的目的蛋白，首先要保证菌体的量，因此在前期可优先考虑菌体的生长，到诱导阶段应将目的产物的表达放在首位。三、培养方式 微生物的培养方式主要有分批、连续和补料分批3种。大肠杆菌发酵大多采用补料分批培养，这是在现代发酵工艺得到优化的一种方式，能有效的优化微生物培养过程中的化学环境。使微生物处于最佳的生长环境。这种方式一方面可以避免某些营养成分初始浓度过高出现底物抑制现象，另一方面能够防止限制性营养成分被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成。补料分批培养已广泛应用于各种各样的初级、次级生物产品和蛋白等的发酵生产中。

保健食品中仅含有乳杆菌和双歧杆菌两种有益菌。根据GB 4789.35-2016标准，乳杆菌数量等于乳酸菌总数（MRS平板计数结果）减去双歧杆菌数量（改良MRS平板计数结果）？会出现减成负数的结果吗？

最近奶粉中肉毒杆菌兴风作浪，鉴于肉毒杆菌的毒性比较强。百度搜索到：肉毒杆菌致病，主要靠强烈的肉毒毒素。肉毒毒素是已知最剧烈的毒物，毒性比KCN强一万倍；目前的检测方法只知有 肉毒杆菌毒素快速检测卡。肉毒毒素是一种蛋白质，分子量大，LCMS有可能对它进行检测，不知能否把肉毒毒素衍生化或其他前处理，再用GCMS检测呢。

威化产品，我们自检到大肠杆菌。然后抽了一些全部混匀揉碎，一半再做，还是测到大肠杆菌，另一半送到第三方，但第三方没捡到，说的合格，这是怎么回事

大肠杆菌包括粪大肠杆菌和总大肠杆菌，

据台湾媒体报道，世界卫生组织日前表示，弧形杆菌（Campylobacter）是引起肠道感染的细菌，通常寄居在家禽与牛等温血动物的肠道中，对幼童、老年人有致命性，但彻底煮熟食物即可消灭。 数月前发生在欧洲的大肠菌疫情，全球有数千人感染，世界卫生组织（WHO）表示，弧形杆菌也是常见易引起肠胃道感染的病菌。 世卫组织说，弧形杆菌大多存留在温血动物中，像是家禽、家畜如牛羊猪、饲养的猫狗等宠物，也常见于鸵鸟与贝类海产。 至于弧形杆菌的主要传染途径，世卫组织表示，主要是未煮熟的肉类与肉类制品，甚至遭到污染的奶制品、水和冰块，都可能成为感染源。 世卫组织说，由于弧形杆菌可导致人畜共通的疾病，宰杀动物的尸体时，若处理不当而沾染动物的排泄物时，也会遭到细菌污染。 一旦感染弧形杆菌，世卫组织说，将导致严重肠胃炎，不论是在开发中或是已开发国家，弧形杆菌导致的腹泻性疾病病例，多于沙门氏病菌引起的腹泻。 世卫组织表示，特别是弧形杆菌的发病率很高，加上弧形杆菌的病程可能会出现后遗症，在医疗设施相对落后的开发中国家，未满2岁的孩童一旦感染弧形杆菌，有时会致死，必须小心谨慎。

什么是非发酵革兰氏阴性杆菌？铜绿假单菌属于非发酵革兰氏阴性杆菌吗？

百日咳抗原 300亿/ml、卡介苗 60mg/ml、大肠杆菌内毒素 1mg/支

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略非常详细地说明了表达载体的构建，转录调控，中止子以及翻译过程中的一些选择。理论性很强，也很详细。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=111861]在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略[/url]

有没有好的针对革兰氏阴性杆菌的杀菌方法？比如消毒剂、射线或者其他化学物质等等方法？哪种方法最适用呢？

[b][font=微软雅黑]双歧杆菌[/font][/b][font=微软雅黑]在食品工业中，喷雾干燥是一种生产率高、操作费用低的工艺，是普遍采用的制备干燥、稳定、体积小的食品或食品添加剂的方法之一。此外，还可用用保护和浓缩微生物。[/font][font=微软雅黑]许多人还报道了用喷雾干燥制备发酵用于生产发酵乳制品或作为提高奶酪风味的附加物。然而，微生物对喷雾干燥的温度及脱水很敏感。因此，如果喷雾干燥应用于发酵剂制备注意微生物的存活率。[/font][b][font=微软雅黑]双歧杆菌[/font][/b] [font=微软雅黑]Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧杆菌。双歧杆菌分布在胃肠的数量随年龄阶段的增长而减少，分布多的是母乳营养儿。已经发现，双歧杆菌有32个亚型，含有双歧杆菌的生物制剂多达70种。婴儿双歧杆菌占总肠道菌的百分之六十，60岁以上老人双歧杆菌只占百分之七点九。[/font][b][font=微软雅黑]双歧杆菌[/font][/b][font=微软雅黑]形态很不一致的杆菌，0.5~1.3 μm×1.5~8μm，常呈弯、棒状和分支状。单生、成对、V字排列，有时成链，细胞平行成栅栏状，或玫瑰花结状。偶尔呈膨大的球杆状 。[/font][align=center][img]https://img69.chem17.com/9/20190409/636904143730081616114.png[/img][/align][b][font=微软雅黑]双岐杆菌[/font][font=微软雅黑]药理作用：[/font][/b][font=微软雅黑]治疗便秘[/font][font=微软雅黑]、[/font][font=微软雅黑]肿瘤防治[/font][font=微软雅黑]、[/font][font=微软雅黑]保护肝脏[/font][font=微软雅黑]、[/font][font=微软雅黑]防治心血管疾病、改善乳糖消化[/font][font=微软雅黑]等[/font][b][font=微软雅黑]双岐杆菌[/font][color=#000000][font=微软雅黑]营养食品作用[/font][/color][color=#000000][font=微软雅黑]：[/font][/color][/b][font=微软雅黑]促吸收[/font][font=微软雅黑]、[/font][font=微软雅黑]抗衰老[/font][font=微软雅黑]、[/font][font=微软雅黑]防治疾病[/font][font=微软雅黑]。[/font][font=微软雅黑]如此重要的[/font][b][font=微软雅黑]双岐杆菌[/font][/b][font=微软雅黑]是如何在喷雾干燥中存活的呢？[/font][font=微软雅黑]双岐杆菌在喷雾干燥的存活情况和载体有很大的关系；有研究表明，双歧杆菌分别与含有明胶、树胶和可溶性淀粉的载体一起喷雾干燥，结果发现喷雾干燥后双歧杆菌的存活因其载体种类不同而不同。[/font][font=微软雅黑]很大程度上取决于所用的载体。比较不同的载体浓度对存活的影响。发现双歧杆菌在与明胶、树胶或可溶性淀粉喷雾干燥后存活率高。经喷雾干燥后双歧杆菌表现大存活，温度升高则失活升高，然后温度升高引起的失活程度因所用载体不同而不同。已有研究表明，采用可溶性淀粉程度大，采用脱脂乳则小。[/font]

北京商报2月2日报道 日前，国家质检总局公布了去年8月至11月进境的852批不合格食品、化妆品名单。其中，味全食品的三类配方奶粉被检验出含有致病菌阪崎肠杆菌。 去年10月17日，产自台湾的9.624吨配方奶粉从香港进境时被检验出阪崎肠杆菌超标，进口商为深圳市恒利安贸易有限公司。不合格奶粉包括味全婴儿配方奶粉、味全幼儿成长配方奶粉和味全较大婴儿配方奶粉。　　据了解，阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50%以上，婴儿配方奶粉是目前发现的阪崎肠杆菌主要感染渠道。此外，检验出的不合格婴儿食品还包括产自澳大利亚的宝利氏牛奶菌落总数超标、百乐斯婴儿米粉霉菌超标等。　　此次公布的不合格食品、化妆品产地涉及美国、日本、西班牙等多个国家和地区，包括葡萄酒、冻鱼冻肉、饮用水、饼干等多种产品。如美国产莱萃美品牌叶酸营养素片霉菌数超标、强维牌氨基酸混合食品原料铅和砷超标，韩国的兰芝柔润凝亮修护眼霜和大长今牌黄土美面膜被检出细菌总数超标。 (本文来源：北京商报 作者：李雪)

一、概述及分类肠杆菌科是由多个菌属组成，生物学性状相似，均为革兰氏阴性杆菌，这些细菌常寄居在人和动物的消化道，并随粪便排出体外，广泛分布在水和土壤中，大多数肠道杆菌属于正常菌群。当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时，成为条件致病菌而引起疾病。部分肠道杆菌是致病菌。例如：产毒大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌、各种志贺氏菌可使人患肠道传染病。肠杆菌科细菌种类繁多，主要根据细菌的形态，生化反应，抗原性质以及核酸相关性进行分类。肠杆菌科的细菌分为20个属。1、 什么是大肠菌群？大肠菌群名称并非细菌分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化反应及血清学方面并非完全一致。大肠菌群：需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖，产酸，产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。目前已被国内外广泛应用于评价食品卫生质量的重要指标之一。2、 什么是大肠杆菌？埃希氏菌属的代表菌种是大肠埃希氏菌。大肠埃希氏菌俗称大肠杆菌，它是人类和动物肠道正常菌群的成员，随粪便排到自然界，并污染食品，本菌是组成水、食品中大肠菌群成员之一，其数目多少代表粪便污染和程度。能引起肠道感染的大肠埃希氏菌有下列五个病原群(1)肠产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)产生ST、LT、引起婴儿、旅游者腹泻。(2)肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)寄居十二指肠、回肠、空肠。引起婴儿腹泻。(3)肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)有侵袭力，痢疾样症状。(4)肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)引起出血性结肠炎，主要菌型O157。(5)肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)损害肠细胞外毒素，引起小儿顽固性腹泻。3、 什么是大肠杆菌O157：H7？ EHEC O157:H7属于肠杆菌科埃希氏菌属。它是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要血清型。

本人用大肠杆菌W3110表达一个Ⅱ型膜蛋白，此蛋白具11个跨膜区，tac启动子控制，1mM IPTG 16℃诱导时OD600逐渐下降，同时菌液变粘，可能是菌体破裂核酸释放导致。而37℃诱导时却无此现象。请论坛的各位朋友帮忙分析一下，该如何改进？在此谢过。

实验室常用来破碎大肠杆菌，用于提取表达外源蛋白等试验，在超声波破碎大肠杆菌过程中常常温度探头测得大肠杆菌菌液中温度逐渐升高，有可能会致使热敏物质失活，该怎么解决呢？今天来谈谈在超声波细胞破碎仪处理大肠杆菌过程中降低温度的解决措施。 超声波细胞破碎仪在处理大肠杆菌过程中，由于超声波的空化效应会产生大量的热使菌液的温度逐渐升高，所以我们在处理样品的时候一定要采用冰浴或者其他降温方法，在这您提供两点建议，一种是用实验室的碎冰来做冰浴，示意图如下：（同学们的智慧是无穷的，此图来自于中国药科大学某实验室正在处理大肠杆菌） http://www.shunmayq.com/Upload/image/dachangganjun.jpg （图中液体为冰水混合物，也可以用碎冰） 另外一种方法一般适用于50或者50毫升以上超声细胞破碎仪处理大肠杆菌时使用。图片中超声波细胞破碎仪，。您可以将菌液放置于我们特制的双层夹套反应杯中，在冷却水循环系统上设置好您需要的温度，就可以放心实验不必担心菌液的温度升高啦 http://www.shunmayq.com/Upload/image/1234.jpg 与此同时，在处理大肠杆菌过程中实验条件摸索也来得尤为重要。功率是根据您的处理量多少来调节的，我们建议如果可以用小功率来处理样品切忌用大功率，功率越小对应的超声波的热效应也会相对降低，另外超声时间尽量放短，间隙时间尽量放长，例如超声1秒停2-3秒。

求助：保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的光学显微镜的镜检照片和菌落形态的照片，谢谢！！！！！！！！！！！！