平板计数肉汤

请教一下各位：配金黄色葡萄球菌接完B-P平板后配普通肉汤要几毫升？

本品是一种最基本的非选择性培养基，含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。因含有动、植物两种蛋白质，苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。 【用途】： 用于志贺氏菌的增菌培养 【贮藏条件】： 2～8℃,避光储存，拆封后及时放入冰箱冷藏； 【保质期】：6个月；【注意事项】 1、检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用； 2、请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰； 3、经过预培养的培养基严禁使用； 4、在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可； 5、弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人员指示方法处理。 有需要志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的请私聊我。

一位老板网曝“家丑”：　　加一堆添加剂啊，还含二氧化钛　　良心上过不去了，打算转行　　店里又浓又白的羊肉汤到底是怎么熬出来的呢？通过查询，扬子晚报记者惊讶地发现，一位网名为“线索人”的羊肉汤馆老板竟然自己在网上“自揭家丑”。　　“线索人”自称今年20出头，来自以产羊肉出名的四川简阳，与朋友凑了9万元在成都开了一家羊肉汤馆。开业后无论怎么熬，始终熬不出诱人的乳白色。“骨头都浪费了几十斤，这样熬成本太高了。”　　屡次失败的“线索人”请来了他的“长辈”。“昨天，长辈来了，还带来了他的一大罐白色浓浆，还有灰绿色的香精，非常香，带羊肉味。”在“长辈”的指点下，“线索人”在炒羊肚的时候加入羊肉香精，在熬汤的时候加入白汤浓浆。“结果，我们成功了。”　　“线索人”仔细研究了“秘方”，发现包括羊肉香精、增白剂、大骨高汤添加剂等，其中一种增白剂还含有二氧化钛。于是他就上网查了一下二氧化钛：“度娘一查，二氧化钛是添加剂，还可以做化妆品用，食品也有，但是没有加肉、汤里面的，我悲剧了……即便不出人命，良心过不去啊……看网上说对肾、胃不好，万一出事，我大把青春咋办？”来源： 扬子晚报

1.抗菌药物贮存液制备 　　抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。2.药敏试验用抗菌药物浓度范围 　　根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。3. 培养基　　 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。4.接种物的制备　　 有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种　　 取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。6.孵育　　 将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。7.结果判断与解释 　　在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断，与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。根据NCCLS推荐的分界点值标准，判断耐药（resistant, R）、敏感(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效，禁忌症除外。R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制，或属于具有特定耐药机理（如β-内酰胺酶），所以临床治疗效果不佳。I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度，疗效低于敏感菌。还表示被测菌株可以通过提高剂量（如β-内酰胺类药物）被抑制，或在药物生理性浓集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介还作为“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控，所导致较大的错误解释。

羊肉汤中添加剂包括羊肉香精、增白剂、大骨高汤添加剂等，其中一种增白剂还含有二氧化钛。你们知道吗？

没有牛肉的“牛肉汤”

做水质粪大肠。单倍乳糖蛋白胨和三倍乳糖蛋白胨都说了需要多少ml，就是没有说EC肉汤一根试管里面需要加多少ml，求各位老师解答

山药鸭肉汤食材准备：鸭肉500g、山药1根、生姜1小块、料酒1勺、食盐适量1、鸭子洗净斩小块，冷水下锅，加1勺料酒，煮出浮沫后，撇去浮沫，将鸭肉捞出来洗净；山药削皮洗净，切成块状；生姜切薄片；2、热锅加油，放入姜片炒香，再倒入鸭肉，炒至鸭肉表面变干后，往锅中加入适量热水，大火煮10分钟，再转小火炖1个小时，然后放入山药，继续煮20分钟，出锅前加适量食盐调味即可。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309121337107093_2889_1642069_3.png[/img]

请问羊肉汤使用增白剂属于滥用食品添加剂吗？新闻链接：成都将开展为期1个月的专项监督检查，依法查处滥用食品添加剂行为 　　日前，成都市食品药品监督管理局接到举报，反映个别餐饮服务单位销售的羊肉汤添加“羊肉香精”、“增白剂”等添加剂，可能对人体健康造成危害。11月23日，成都市食品药品稽查总队联合青羊区食药监局对市区小关庙的8家羊肉汤锅店进行了突击监督检查，现场尚未发现“羊肉香精”和“增白剂”等。 　　据介绍，市民举报的增白剂含有的二氧化钛属于食品添加剂，只能在果酱、凉果、可可制品等食品中使用，如果加在羊肉及汤中属于滥用食品添加剂。餐饮服务单位可以按标准使用复配食品添加剂，由于在当天现场检查中未发现“羊肉香精”，食药监部门暂无法认定其是否为复配食品添加剂，成都市食药监局将在全市排查过程中根据实物具体认定。 　　冬季来临，成都进入羊肉消费旺季。成都市食品药品监督管理局23日下发通知，要求各区（市）县局对经营羊肉汤、羊肉火锅的餐饮服务单位开展为期1个月的专项监督检查，重点检查各餐饮服务单位在羊肉汤锅中使用食品添加剂的情况，以及是否存在非法添加非食用物质的行为。自制火锅底料、自制调味料的餐饮服务单位要向监管部门备案所使用的食品添加剂名称，并在店堂醒目位置或菜单上予以公示。对滥用食品添加剂行为，将坚决依法查处

以前一直只做蔬菜中的农残检验，自从水饺事件后，公司开始要求检验肉汤类产品中的敌敌畏、甲胺磷，不知各位大侠都用什么方法检验肉产品中的这几种农药呢？

EP中，控制菌检查大肠埃希菌用到的麦康凯肉汤，培养温度是42-44摄氏度，这样的温度有什么原理？为什么不选择平时细菌的一般温度？谢谢

[font=SimSun, STSong, &]BGLB肉汤管培养大肠杆菌为什么会这样，是时间太久了吗？[/font]

现代的年轻人追求“多快好省”的办事效率，生活节奏快，工作压力大，花费时间也变为非常奢侈的事情。 而时间对于老人来说却有另一番的意义，或者，他们期盼的只是家里人能有一两个小时的促膝长谈，那该是多么的温馨的时光。 　　天气寒冷，很多人，特别是老人，因活动得少，血液流动 　　不顺畅，容易四肢冰冷。这时候，食疗可是能够派上大用场的，查资料所得，羊肉具补中益气、温胃助阳的功效；《本草纲目》也说有：“补中益气，主治虚劳寒冷”的功用。于是花了几个小时，炮制成这款滋补羊肉汤，羊肉爽滑，羊汤清甜。 　　是夜，手脚温暖到天明，是羊肉的功效吧，或许因心意使然。 　　【材料】羊肉(选多肉爽滑的部位)，杞子，去核红枣，姜，陈皮 　　【调味】盐 　　【制作】把羊肉洗净后切大块，烧热锅放入少许油和姜爆炒，加入羊肉块炒，炒至有香气飘出，羊肉表面干爽即可，加入热开水和其他材料用大火煮十分钟，除去浮沫，移入沙锅用小火煲两小时放盐即可食用。

关于大肠菌群平板计数法还有哪些困惑？1.导读经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。2.方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。但大肠菌群多少算是含量较高呢？国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g(mL)为界，超过这个含量一般认为是含量较高。但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g(mL)，那必须选用平板计数法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。件、酸3.培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。4.稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。什么样的稀释度是合适的呢？这要根据计数来决定。计数环节要求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板进行计数，因此培养后菌落数在这个范围内的稀释度就是适宜的稀释度。实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员可以预计的，但是对盲样，我们能做的只有根据实际情况多检测几个稀释度了。这里需要提一句，液体样品的检测稀释度可以包括原液。5.证实试验需要从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部的典型和可疑菌落进行BGLB肉汤管验证。这里挑取的菌落也是应当有选择的，典型菌落和可疑菌落的比例应当与平板上培养的两种菌落的比例相同或相近，这样能够降低检测过程中的误差。6.计数的报告报告过程是很多朋友存在疑问的地方，因为平板计数法的结果报告需要结合培养基菌落数和复发酵验证两方面进行计算。存在疑问的情况主要有以下几种：6.1、所有稀释度都不在计数范围内怎么办？这种情况一般都是最低稀释度的平板都小于15CFU，这种情况就是以最低稀释度的平板菌落数乘以验证试验的比例来计算。例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8，菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气，菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气，则计算过程是这样的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。6.2、连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎么办？这个需要参考菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。我们需要先计算每个平皿的验证后的菌落数，再代入公式计算即可。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16，经过复发酵验证产气的管数分别为7、8、8、8，则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我们14）,16*8/10=12.8（我们计13）,然后将84、100、14、13四个数代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959，结果应报告960 CFU/g(mL)。6.3、只有一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围，其他均不在计数范围怎么办？这样我们只需要复发酵验证这一个平皿即可，根据这一个平皿的菌落数进行报告。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13，则我们只需要从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落进行复发酵验证即可，假如共有7支发酵管阳性，则应计算142*7/10=99.4，结果报告99CFU/g(mL)。其实只要是平板菌落计数的相关问题，我们都应按照GB 4789.1-2016里要求的结果与报告要求进行计算和报告即可，无论那种情况，都是万变不离其宗的。

一、实验目的了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原理 稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。三、实验器材 1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。四、实验方法 1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。 （1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9[fo

关于大肠菌群检测方法，2010版国标规定有月桂基硫酸盐以蛋白胨肉汤还有平板计数法，有MPN和CFU两个单位，也可以用测试片做样品，现在国家审核，要求以CFU计数么？

请问平板计数琼脂高压后为什么变色了，还能用吗，急救，谢谢大家了

我做微生物时间不是很长，这一次实验发现了这么一个问题。我做了两个稀释级1：10和1：100的供试液，各自进行营养琼脂平板的培养。观察结果的时候，我发现，1：10稀释级的两个平板都没有菌落生长，但是1：100稀释级的两个平板各有1个和2个菌落生长，而且菌落的形态也不像平常黄白实心的圆点，而是呈絮状的，有点像霉点一样的。像这种情况的话，是样品本身含有的菌还是样品被污染了呢？结果是要按1：100的稀释级来计数吗？

出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1　主题内容与适用范围　　本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。　　本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2　设备和材料2.1 工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2　恒温培养箱：36±1℃。2.3　恒温水浴箱：45±1℃。2.4　均质器。 2.5　振荡器。2.6　吸管：1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7　平皿：直径为90 mm。2.8　稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9　玻璃珠：直径为5mm左右。 2.10 天平：感量0.1g。3　培养基和试剂 3.1　平板计数琼脂。3.2 75％乙醇。3.3　稀释剂：磷酸盐缓冲稀释液。4　操作程序 4.1　样品制备 4.1.1　以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75％乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2　制备样品匀液4.1.2.1　固体或半固体食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2　干燥或干粉食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3　液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2～4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2　稀释样品匀液 4.2.1　用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2　分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3　平板接种4.3.1　对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2　分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3　分别加12～15mL平板计数琼脂(已放45＋1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4　培养 　　待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15％。4.5　菌落计数和记录4.5.1　培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25～250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0～4℃,但不得超过24 h。 4.5.2　如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3　如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4　当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25～250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5　当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6　如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7　同一稀释度的两个平板中,一个有25～250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8　两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25～250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9　某稀释度的两个平板都有25～250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25～250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致；第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落；第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50％,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25％,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数（下表,样品10）。　　当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5％之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10％之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6　计算和记录数字　　适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。　　记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5　结果报告 　　报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。　　　　　　　　　　　　　　平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 ＜100 (＜1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1　平板计数琼脂 　　胰蛋白胨　　　　　 5.0g 　　酵母浸膏　　　　　 2.5g 　　葡萄糖　　　　　　 1.0g 　　琼　脂 　　　　　　15.0g 　　蒸馏水 　　　　　　1000mL 　　将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2　磷酸盐缓冲稀释液 贮存液：　　　　　磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 　　蒸馏水　　　　　　 500mL 　　用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明：　　本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。　　本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草　　　　本标准主要起草人李志培、邓明义。　　本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施

出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1　主题内容与适用范围　　本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。　　本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2　设备和材料2.1 工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2　恒温培养箱：36±1℃。2.3　恒温水浴箱：45±1℃。2.4　均质器。 2.5　振荡器。2.6　吸管：1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7　平皿：直径为90 mm。2.8　稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9　玻璃珠：直径为5mm左右。 2.10 天平：感量0.1g。3　培养基和试剂 3.1　平板计数琼脂。3.2 75％乙醇。3.3　稀释剂：磷酸盐缓冲稀释液。4　操作程序 4.1　样品制备 4.1.1　以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75％乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2　制备样品匀液4.1.2.1　固体或半固体食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2　干燥或干粉食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3　液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2～4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2　稀释样品匀液 4.2.1　用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2　分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3　平板接种4.3.1　对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2　分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3　分别加12～15mL平板计数琼脂(已放45＋1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4　培养 　　待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15％。4.5　菌落计数和记录4.5.1　培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25～250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0～4℃,但不得超过24 h。 4.5.2　如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3　如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4　当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25～250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5　当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6　如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7　同一稀释度的两个平板中,一个有25～250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8　两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25～250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9　某稀释度的两个平板都有25～250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25～250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致；第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落；第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50％,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25％,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数（下表,样品10）。　　当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5％之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10％之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6　计算和记录数字　　适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。　　记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5　结果报告 　　报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。　　　　　　　　　　　　　　平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 ＜100 (＜1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1　平板计数琼脂 　　胰蛋白胨　　　　　 5.0g 　　酵母浸膏　　　　　 2.5g 　　葡萄糖　　　　　　 1.0g 　　琼　脂 　　　　　　15.0g 　　蒸馏水 　　　　　　1000mL 　　将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2　磷酸盐缓冲稀释液 贮存液：　　　　　磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 　　蒸馏水　　　　　　 500mL 　　用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明：　　本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。　　本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草　　　　本标准主要起草人李志培、邓明义。　　本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施

检测粪大肠菌群时，如EC肉汤管产气者，将产气的EC肉汤管分别接种()，然后置培养箱内培养。 A、乳糖发酵管 B、伊红美兰琼脂平板 C、蛋白胨水 D、葡萄糖发酵管

[color=#5f9cef][b]二者范围不同：[/b][/color]GB4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》范围中规定：“本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。”[color=#f96e57]这里所说的含量高低通常以100CFU为准，即含量低于100CFU采用MPN法，含量高于100CFU采用CFU法。[/color][b][color=#5f9cef]概念不同：[/color][/b][color=#f96e57]• MPN（most probable number）法：[/color]即最近似数法，也称为最可能数法，是食品检验中常用的方法。1915年，McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法， 这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。[color=#f96e57]• 平板计数法 (colony forming units）：[/color]CFU 即菌落形成单位，样品经过处理培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，以CFU/ml或CFU/g报告之。[color=#f96e57]• 滤膜法（membrane filter method）：[/color]将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的菌落总数。[color=#f96e57]• 菌落：[/color]是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。[b][color=#5f9cef]原理不同：[/color][/b][color=#f96e57]• MPN法：[/color]利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。因为细菌在样本内的分布是随机的，所以检测细菌时，可应用概率理论计算菌数，实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际菌落数， 实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。举例说：稀释度为 0.01，0.001，0.0001所对应的阳性管数分别为 2-0-0 ；查MPN检索表可知：MPN值为92 CFU/ml(g), 当置信度为95%，则其下限和上限分别为14，380，即对应的菌落浓度区间为14~380 CFU/ml(g)，意思是：这个检验结果显示细菌浓度落在14-380 CFU/ml(g)区间均有可能，只不过92 CFU/ml(g)出现的概率最大，概率为31.9%. [color=#f96e57]平板计数法[/color]：平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。[color=#f96e57]滤膜法：[/color]在压力差的作用下，悬浮液中的液体（或气体）透过可渗性介质（过滤介质），直径大于网孔直径的菌体为介质所截留，从而实现样品和菌体的分离。然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，菌体可直接在膜上生长，从而可直接计数。[b][color=#5f9cef]MPN优缺点[/color][/b][color=#f96e57]优点：[/color]操作简便、灵敏度较高，时间短，可直接观察试管得出结论，每个接种稀释度均有重复，重复次数越多，误差就会越小。[color=#f96e57]缺点：[/color]要求样品具有均一性，适合检验液体样品，且只能用于检验在发酵培养基中产气的菌种。[color=#f96e57]注意事项：[/color]需选择合适的稀释度和接种量。[b][color=#5f9cef]平板计数法优缺点[/color][/b][color=#f96e57]优点：[/color]1、能测出样品中的活菌数，直观，能够直接读数2、平板菌落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大。3、由于是菌悬液倾注或涂布，所以比较均匀，能较好的反应菌落的疏密程度。4、灵敏，平行性较好。[color=#f96e57]缺点：[/color]1、手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。2、厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，比较难检测出。3、菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。4、长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。5、检验时间长。[color=#f96e57]注意事项：[/color]样品需要充分均匀以及选择合适稀释度和接种量，检验过程必须严格无菌，以防污染杂菌。[b][color=#5f9cef]滤膜法优缺点 [/color][/b][color=#f96e57]优点：[/color]1、可以检测大量的样品。2、浓缩效应使微生物检测的准确度提高。3、带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档。4、可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果。[color=#f96e57]缺点：[/color]1、成本高。2、操作要求高。[color=#f96e57]注意事项：[/color]对样品的流动性要求比较高，并且含菌量不能太高。[b][color=#5f9cef]分类以及操作方法[/color][/b][color=#f96e57]MPN法：[/color]根据需要以及检验的精度不一样可使用9管法以及15管法；其中9管法通常用作食品检验，而15管法用在饮用水的检验（15管法的精度要高些）；基本操作：样品梯度稀释——接种——培养——观察结果——查表报告。[color=#f96e57]平板计数法：[/color]有平板倾注法，一般检验使用的方法；平板涂布法，用于细菌含量比较高，并且要求知道细菌菌落形态（只计数特定细菌）；以及滤膜法，检测特定种类菌常用方法，应用越来越广泛；基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。（滤膜法是：样品——过滤——贴滤膜——培养 ——计数报告。）[b][color=#5f9cef]适用性[/color][/b][color=#f96e57]MPN法：[/color]适用于具有特殊生理功能的微生物类群或者检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品（土壤、污水、牛奶等）。[color=#f96e57]平板计数法：[/color]应用广泛，是检验、菌种分离、纯化等用得最多的方法（固体、液体样品均可）。[color=#f96e57]滤膜法：[/color]主要应用于洁净度较高的样品，并且样品的流动性决定了可操作性。[b][color=#5f9cef]卫生学意义[/color][/b]两者都是检测的活菌数，MPN是通过极大近似值然后估计，求出分布函数中的参数、置信区间，再估计；但是CFU通过数据直接求数学期望，平均值和方差。测定结果判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，一定程度反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

我现在碰到了一个难题，CNAS上要求：所有实验室用的培养基及试剂使用之前都要进行验证，但是如何验证呢？平板计数琼脂如何验证呢？北京陆桥的琼脂不稳定，有哪位高手可以告诉我，平板计数琼脂如何验证？那实验室用的其他培养基及试剂如何验证？先谢谢了

我想请问一下，就是菌种悬浮液的制作，我的步骤是从营养琼脂菌种斜面挑取少量菌种到营养肉汤中36度培养24h，然后稀释n倍，用平板计数法看一下有多少个？这个方法对吗？可不可以直接挑取少量菌种于生理盐水中，直接稀释？是不是这样菌种不能混匀？大侠们赐教哈~~~

感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性]培养基[/url]中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp[sup]r[/sup]等)得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性[://]培养基[/url]上。重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其编码α肽链的DNA序列，此结构称为[i]lac[/i]Z'基因。[i]lac[/i]Z'基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段(146个氨基酸)。任何携带着[i]lac[/i]Z'基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后，便会产生出有功能活性的半乳糖苷酶，在IPTG(异丙基β—D—硫代半乳糖苷)诱导后，在含有Xgal(5-溴-4-氯-3-吲哚-6-D-半乳糖苷)的培养基平板上形成蓝色菌落（半乳糖苷酶能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝）。而当有外源DNA片段插入到位于[i]lac[/i]Z'中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，也就不能分解Xgal而显蓝色，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料 超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、恒温水浴、离心管、试管、培养皿、锥形瓶、接种针、玻璃涂棒、酒精灯、镊子、牙签、大肠杆菌DH5a 、质粒(二) 试剂0.1mol／L CaCl2溶液 LB液体培养基 LB固体培养基 氨苄青霉素(Amp)：用无菌水配制成100mg／mL溶液，置—20℃冰箱保存。Xgal：将Xgal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg／mL，不需过滤灭菌，分装小包装，避光贮存于-20℃。IPTG：取2g IPTG溶于8mL双蒸水中，再用双蒸水补至10mL，用0.22um滤膜过滤除菌，每份1mL，贮存于-20℃。[实验步骤](一) 制备感受态细胞1、吸取15µl E.coil菌液，接种于20ml LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜，待OD600=0.5左右将该菌悬液以1：50接种量转于50ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20-30min测一次OD600，至OD600=0.6左右，停止培养。2、培养液转入离心管中，在冰浴10min，4℃下5000rpm离心10min。3、弃上清液，用4ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置30min。4、4℃下5000rpm离心6min。5、弃上清液，用2ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置片刻后即制成感受态细胞悬液。6、以上制好的感受态细胞悬液可在冰上放置，24小时内直接用于转化实验，也可加入15%高压灭菌过的甘油，混匀后，分装于1.5ml离心管中，每管100µ l感受态细胞悬液，置-70℃条件下保存。.(二) 质粒DNA转化大肠杆菌1、取100µl摇匀后的感受态细胞悬浮液（如是冷冻保存液，则需化冻后马上进行下面的操作），加入5µl连接产物，轻轻摇匀，冰上放置30min后，于42 IPTG水浴中保温90s，然后迅速在冰上冷却2min。2、加入900µl LB液体培养基，则总体积约1ml，混匀于37℃振荡培养90分钟使受体菌恢复正常生长状态并使转化体产生抗药性Amp[sup]r[/sup]。3、在预制的LB琼脂平板上，加40uL 20mg／mL的Xgal和4uL 200mg／mL的IPTG溶液，并用灭菌玻璃推子(酒精灯上烧后冷却)，均匀涂布于琼脂凝胶表面，37℃倒置吸收。4、将恢复培养的菌体4000rpm离心5min，移去上层900µl LB培养基，用余下的100µl重悬菌体至均匀。(四) α互补现象的检查将重悬菌体均匀涂布于含X-gal+IPTG+氨苄青霉素的LB平板上，37℃倒置培养12—24h，出现菌落。其中白色菌落从理论上讲为重组克隆。如果进一步验证，可挑取多个白色菌落分别接种到1ml含有氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养6-8h，然后提取质粒酶切验证，或进行菌落PCR扩增鉴定。

7寸平板，好大个。你买那个，还不如买个笔记本。同样配置的，笔记本肯定比平板便宜吧。要买平板，就买3.5寸的。支持多点触控，就行了。3.5寸的，看个文档，比如pdf,word文档，都没问题的。上网，应该没问题吧。关键这个尺寸正好。你拿个7寸的到处跑....也太扎眼了，呵呵。

有没有朋友用平板计数方法测大肠杆菌的啊？如计数结果小于30是不是就是合格呢