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人膀胱癌细胞

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  • 伟大的发现——中山大学发现杀癌细胞病毒 不损伤正常细胞

    广州中山大学研究发现天然病毒M1可杀灭癌细胞中新网广州10月13日电(许青青 蔡珊珊) 记者13日从广州中山大学获悉，该校中山医学院颜光美教授课题组研究发现天然病毒M1能选择性地感染并杀伤包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种体外培养的癌细胞，而对正常细胞无毒副作用。全球癌症发病率呈现快速增长态势，现有的治疗手段远远未能满足临床需求。颜光美教授课题组发现，M1病毒是一种从中国海南岛分离得到的天然病毒，能选择性地感染并杀伤包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种体外培养的癌细胞，而对正常细胞无毒副作用。整体动物实验表明，经尾静脉注射的M1病毒能显著富集在肿瘤组织并抑制肿瘤生长，正常器官则不受影响。除细胞水平及动物实验之外，课题组还使用临床标本离体活组织培养模型进一步证实了上述新型溶瘤病毒的有效性和特异性。据悉，该研究成果对阐明新型天然溶瘤病毒M1选择性杀伤肿瘤细胞的机制和研发新型靶向抗肿瘤药物都具有重要意义。相关资料：癌细胞增殖方式癌细胞是一种变异的细胞，是产生癌症的病源，癌细胞与正常细胞不同，有无限生长、转化和转移三大特点，也因此难以消灭。癌细胞由“叛变”的正常细胞衍生而来，经过很多年才长成肿瘤。“叛变”细胞脱离正轨，自行设定增殖速度，累积到10亿个以上我们才会察觉。癌细胞的增殖速度用倍增时间计算，1个变2个，2个变4个，以此类推。1912年8月13日，法国医生发现癌细胞。

  • 【转帖】《国际癌症杂志》：长期被动吸烟 得膀胱癌几率增高

    来源：人民网-健康时报 发布时间：2007-10-12 15:44:25 小号字 中号字 大号字 http://www.sciencenet.cn/htmlnews/2007101217222177191544.html?id=191544 因受二手烟侵害，女性肺癌的发病率不断上升，不幸的是这种现象再次复制到膀胱癌患者身上。好发于50岁以上男性的膀胱癌，近年来女性发病率却逐年升高。 中国中医科学院广安门医院泌尿科主任医师张亚强解释说，香烟对人体的毒害不只局限于肺部，经肺部进行完气体交换后，尼古丁等有害物质会进入血液，随着血液循环，参与全身新陈代谢。最后通过肾脏过滤作用，带着尼古丁等有害物质的尿液会聚集到膀胱内。 可以说，膀胱是香烟毒素的集中地。而膀胱只有储存到500毫升尿液时，才会有尿意，一滴一滴积累起来的有毒尿液，在膀胱中长时间与膀胱内壁黏膜接触，从而增加膀胱癌变几率。 最新一期《国际癌症杂志》（International Journal of Cancer）发表的研究报告称，长期在吸烟环境中被动吸烟的儿童，长大后患膀胱癌的危险明显增加。研究结果还显示，每推迟5年开始吸烟，患膀胱癌几率就降低19%。换言之，接受香烟刺激的年龄越小，得膀胱癌几率越高。 因此，在张亚强医生的门诊中，他总会问膀胱癌患者有无吸烟史，并坚决要求患者戒烟，或远离吸烟环境，以免影响治疗效果。尤其是晚上临睡前抽烟，会延长尼古丁等有害物刺激作用时间，加速癌变进展。 特别是已确诊的腺性膀胱炎、膀胱结石，以及其他炎症等膀胱疾病患者，一定要远离二手烟。如出现无痛性血尿、尿急、排尿困难等，应及时到医院做B超。 目前，膀胱肿瘤的治疗主要是手术切除、膀胱灌注化疗及免疫治疗。具体治疗方法取决于肿瘤的大小、部位、恶性、浸润程度以及全身情况。

  • 【资料】人肝癌细胞系研究进展

    肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是发病率高、治疗困难、死亡率高的恶性肿瘤，全球每年有1000000人死于肝癌。我国肝癌的死亡率在所有恶性肿瘤中居第二位，年死于肝癌的人数占全世界肝癌年死亡总数的53%。虽然肝癌的诊断和治疗有了长足的进步，但生存率在总体水平上变化不是很明显。迄今已建立的一系列人肝癌细胞系（cell line）和人肝癌细胞系的动物模型，为肝癌的发病机理和治疗研究奠定了良好的基础。咱们坛子里是否有做这方面工作的战友，分享一下相关文献。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=122088]人肝癌细胞系研究进展[/url]

  • “光测”让癌细胞难逃法眼

    记者5月26日从南开大学获悉，该校物理科学学院田建国、刘智波研究组利用全内反射下石墨烯对介质折射率异常敏感的光学现象，实现了超灵敏单细胞实时流动传感。这一成果可以使癌细胞在形成之初即被精确“光测”出来，将为癌症预防提供一条新途径。 石墨烯是一种呈蜂巢状排列的单层碳原子结构，是目前已知的最薄、最坚硬的纳米材料。在全内反射这种特殊的结构下，对于介质折射率异常灵敏是石墨烯材料的重要特性之一。田建国、刘智波领导的研究组发现，折射率的灵敏度与石墨烯的层数有极大关系，并且层数有一个最优值。他们通过与南开大学化学学院陈永胜课题组合作，不断控制石墨烯的层数，最终制出厚度为8个纳米的石墨烯材料，其折射率的灵敏度和分辨率达到目前国际上最高水平。 在此基础上，课题组结合微流体技术和病变细胞的折射率差异，将这一超高的折射率灵敏度成功应用于单细胞传感。记者在实验室看到，实验人员将制备出的8纳米厚石墨烯均匀铺于一块三棱镜的一面，紧贴石墨烯上方建有一条细胞通道。实验时，一束光从棱镜一面射入，穿透石墨烯照射在细胞通道上，反射光从棱镜另一面射出。实验人员通过光电转化，即可得到一份波形图。如果细胞通道中存在癌细胞，则波形图上将会呈现出明显的波峰。即使数千个正常细胞中有一个发生了病变，这种“光测”方法都可以将其准确识别出来。 该课题组论文已在国际纳米科学技术领域权威刊物《Nano Letters》上发表，美国著名的纳米技术与纳米科学网进行了同步报道。

  • 【分享】日本成功利用有机 EL材料发光识别癌细胞

    [font=Arial,Helvetica,sans-serif]据日本共同社网站6月12日报道，日本群马大学副校长竹内利行（内分泌代谢专业）等人近日成功研发出了通过有机EL材料使体内的癌细胞发出红色可视光的新技术。极为细小的癌细胞若仅靠肉眼经常容易被忽视。据称，该技术在内视镜检查的配合下，有助于发现胃和肠等器官表面上细小的癌细胞。 据竹内等人介绍，有机EL材料“铱络化物”在特殊光线的照射下，在与空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]同的氧气浓度约20%的环境下不会发光，而在浓度低于10%时则会发光。癌细胞因扩散速度快而经常处于低氧状态，因此在“铱络化物”的作用下可以发光。 竹内等人将“铱络化物”注射到带有癌细胞的白鼠的静脉中，成功令发生癌变的部位发光。据称，实验中即使仅2毫米的癌细胞也可以识别，只要距离表面深度1厘米以内均可以发现。 该技术应用于人体时，通过从内视镜的前端喷射“铱络化物”，被消化道吸收后即可凭借发光与否识别癌细胞。与目前癌细胞检查所使用的正电子发射断层成像装置（PET）和磁共振成像装置（MRI）相比，此项技术的费用相对较低。[/font]

  • 新型微芯片可快速检测癌细胞

    新华社华盛顿11月20日电 （记者林小春）美国研究人员20日在美国《科学转化医学》杂志上报告说，他们开发出的一种微芯片可简单、快速地检测人体体液中是否存在癌细胞，这一成果将有助于早期的癌症诊断。 癌变细胞的变形能力要比正常细胞大得多。研究人员利用癌变细胞的这一特征开发出一种有多个小孔的微芯片，从胸水提取的细胞进入这些小孔后会撞上芯片的“墙壁”弹回而发生变形，变形程度会被高速成像设备记录下来，以每秒100个细胞的速度分析,从而判断是否存在癌细胞。 领导研究的美国加利福尼亚大学洛杉矶分校教授饶建宇对新华社记者说，他们利用微芯片检测了100多个样本，结果100％地找出了癌变样本。而现有的癌症检查方法通常只能检测出80％到90％。下一步，他们将开展更大规模的临床试验。 饶建宇说，目前的癌症检查往往是间接地判断癌变细胞的一些行为特征，如浸润性和转移能力、对药物的敏感性等，一般要先对细胞进行固定处理再染色，或提取DNA及蛋白成分等进行分析，程序多而复杂，但所得结果往往是片面和间接的。 而微芯片技术则是直接判断癌变细胞的物理及行为特征，无需对细胞处理或染色，因此简单而快速，也更加精确。饶建宇说：“这就好像判断一个人的角斗能力，光看高矮胖瘦或家庭背景等也许有一些帮助但不够，而直接的比赛是最管用的。” 他说：“人们谈癌色变往往是由于癌细胞具有浸润和转移的共性，同时又有千变万化的个性，因此以直接的方法来判断癌细胞的物理及行为特征尤为重要，这使得我们对癌细胞的认识更直接、全面和准确，对癌症的诊断由此上了一个新平台。”

  • 世界最快速相机可用于探测“流氓”癌细胞

    http://photocdn.sohu.com/20120710/Img347740451.jpg 加州大学洛杉矶分校的工程师们开发了一种全新的光学显微镜，显微镜上配备了世界上最快速的相机，可用于探测“流氓”癌细胞。　　【搜狐科学消息】据国外媒体报道，美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的工程师们近日研制出了一款世界上最快速的相机，可用于探测难以捉摸的“流氓”癌细胞。这一科研成果的研究报告发表在了最新一期的《美国国家科学院院刊》上。　　从大量各类正常细胞中识别和分离出一些罕见细胞对于某些疾病的早期发现、监测和治疗来说正在变得越来越重要。这些罕见细胞中，在体内自由移动的癌细胞就是一个很好的例子。通常情况下，在10亿个健康细胞中也只有一小撮癌细胞，然而它们会抢先转移，癌细胞扩散导致癌症患者的死亡率高达约90%。这样的“流氓”细胞除了癌细胞以外，还包括用于再生医学的干细胞及其它类型的细胞。不幸的是，检测这样的细胞是很困难的。要取得良好的统计准确性需要一台自动化、高通量的仪器，可以在相当短的时间内对数以百万计的细胞进行检测。配备了数码相机的显微镜是目前分析细胞的唯一设备，但是该设备对于这项研究来说速度显得太慢了。　　现在，美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的工程师们开发了一种全新的光学显微镜，可以让这项艰巨的任务变得轻松许多。加州大学洛杉矶分校电气工程学院的工程师巴赫拉姆•贾拉利(Bahram Jalali)说：“为了抓拍到这些难以捉摸的细胞，相机必须具备在非常高的帧速率下持续捕获并对数百万张图像进行数字化处理的能力。传统的CCD和CMOS摄像头达不到这样的速度和灵敏度，因为从像素阵列读取数据需要时间，它们在速度极快的情况下对光变得不那么敏感。”　　目前的流式细胞仪具有较高的通量，但是因为它依靠单点的光散射而不是拍照，在检测非常罕见的细胞类型时还不够灵敏，比如对于那些目前处于早期阶段或癌细胞转移前的癌症患者不适用。为了克服这些限制，巴赫拉姆•贾拉利和UCLA的的生物工程学副教授迪诺•迪•卡罗（ Dino Di Carlo）领导的一个包括生物技术、光学、高速电子和微流体的跨学科研究团队开发出了高通量流式光学显微镜，这款显微镜非常灵敏，具备实时探测含量为百万分之一的罕见细胞的能力。　　贾拉利的团队以他们在2009年创建的光子时间飞梭相机技术为基础，研制出了世界上最快的连续运行的相机。贾拉利、迪•卡罗和他们的同事在报告中描述了他们如何将这台相机与先进的微流体和实时图像处理技术进行整合，以对血液样本中的细胞进行分类。新的血液筛查技术每秒可筛查10万个细胞，比传统的基于成像的血液分析仪高出约100倍的通量。迪•卡罗说：“这项科研成果需要与一些尖端技术进行整合，通过生物工程部门、电气工程部门和加州纳米技术研究院的合作，并采用了UCLA细胞诊断学部门开发的重要的技术基础设施。”贾拉利和迪•卡罗均是加州大学洛杉矶分校的加州纳米技术研究院的成员。　　他们的研究演示了如何实时辨别血液中罕见的乳腺癌癌细胞。初步结果表明，这种新技术有可能迅速地在大量血液中检测到极稀少的循环癌细胞，并将提高癌症早期检测、监测药物和放射治疗的效率。加州大学洛杉矶分校的电气工程和生物工程的项目经理本田惠介(Keisuke Goda)说：“这项技术可以大大减少错误，并将降低医疗诊断成本。”　　研究人员通过将实验室生长的癌细胞与模拟现实生活中的病人的不同比例的血液进行混合得到了检测结果。加州纳米技术研究院的一名成员格达（Goda）说：“为了进一步验证该技术的临床应用效果，我们目前正在与临床医生合作进行临床试验。这项技术也将可能用于进行尿液分析、水质监测和相关的应用。”（尚力）

  • 【转帖】纳米微粒结合转铁蛋白 猎杀癌细胞

    美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫—德西蒙博士领导的研究小组发现，人体中的一种正常的良性蛋白质，如果和纳米粒子相结合，就能瞄准并杀死癌细胞，而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前，研究人员曾认为，纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质，近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的，需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而，结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子，不仅能识别它们，还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白，能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长，即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。然而令人吃惊的是，转铁蛋白附着在纳米粒子表面后，其能有效地筛选标靶，攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面，蛋白质受体被过度表达，于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们，而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。德西蒙实验室发明了一种“打印”技术，能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子，其能安全且精确地识别广谱癌症，除了B细胞淋巴瘤外，还能有效地指向非小型细胞，如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。研究人员目前正在进一步研究，携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的，而对其他细胞却无毒。化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法，但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤，而副作用更小。不过，德西蒙承认，该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧，即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。

  • 科学家发现癌细胞不死原因

    【西班牙《国家报》1 0月26日报道】巴塞罗那瓦尔德希伯伦大学附属医院的一个研究小组日前宣布，确认了癌细胞的一种基因物质能够使恶性肿瘤不老化并失控地增殖。 　　玛蒂尔德·列奥纳特医生领导的这项研究成果刊登在《医学研究评论》杂志上。研究报告指出，小核糖核酸(m icroARNs)对细胞不死发挥了突出的作用。　　核糖核酸在蛋白质的生成过程中起到重要作用，但此前对小核糖核酸的功用实际上并不了解。最新研究表明，小核糖核酸与另一种遗传物质之间相互作用，阻断或激活细胞的增殖过程。瓦尔德希伯伦大学的研究小组已经确认了28种能使癌细胞继续增殖的小核糖核酸。研究人员认为，对这些小核糖核酸采取行动会为阻止甚至消除癌细胞的这种特性打开大门，是在抗击癌症方面的一大显著进步。癌细胞会不停地分裂和增殖，而健康细胞能够进行40-60次分裂，然后就停止分裂，最终死亡。　　癌细胞的有害之处正是其不老化的能力，这种能力使其成为一种不死组织，因为它在不会自我消灭的同时还毫无控制地成倍增加。新研究成果确认了造成这种不死特性的小核糖核酸，便于今后研究出一种能够阻断这种能力，让癌细胞像健康细胞一样老化和自我毁灭的机制。 （来源： 新华国际）

  • 【转帖】纳米粒子与转铁蛋白结合即可猎杀癌细胞

    转铁蛋白与纳米粒子结合就可瞄准并杀死拉莫斯癌细胞，而无需负载其他化疗药物，此项发现将有望发展出癌症靶向治疗的新策略。　　 相关研究成果发表在本周的《美国化学协会杂志》上。　　美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫德西蒙博士领导的研究小组发现，人体中的一种正常的良性蛋白质，如果和纳米粒子相结合，就能瞄准并杀死癌细胞，而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前，研究人员曾认为，纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。 　　转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质，近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的，需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而，结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子，不仅能识别它们，还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白，能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长，即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。 　　然而令人吃惊的是，转铁蛋白附着在纳米粒子表面后，其能有效地筛选标靶，攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面，蛋白质受体被过度表达，于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们，而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。 　　德西蒙实验室发明了一种“打印”技术，能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子，其能安全且精确地识别广谱癌症，除了B细胞淋巴瘤外，还能有效地指向非小型细胞，如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。 　　研究人员目前正在进一步研究，携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的，而对其他细胞却无毒。 　　化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法，但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤，而副作用更小。 　　不过，德西蒙承认，该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧，即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。（科技日报）

  • 【转帖】石榴汁的成分能抑制癌细胞迁移

    石榴汁的成分能抑制癌细胞迁移 在美国细胞生物学会于费城召开的第50届年会上公布了这项研究根据今天在美国细胞生物学会(American Society for Cell Biology)于费城举行的第50届年会上公布的一项研究，加州大学里弗赛德分校(UCR)的科研人员发现石榴汁中的一些成分似乎能够抑制癌细胞的运动并且削弱它们被一种化学信号吸引的能力，这种信号已经被证明能够促进前列腺癌向骨的转移。加州大学里弗赛德分校(UCR) Manuela Martins-Green博士实验室的科研人员打算在一个前列腺癌体内模型中进行进一步的测试，从而确定这两种成分的剂量依赖性效应和副作用。石榴汁对前列腺癌恶化的作用即便存在，也是有争议的。在2006年的一项针对每天饮用一杯8盎司石榴汁的前列腺癌患者的研究中，加州大学洛杉矶分校（UCLA）的科研人员检测到了前列腺特异性抗原（PSA）水平的下降，这提示癌症恶化可能减缓。加州大学洛杉矶分校（UCLA）的科研人员并没有设法描述该研究中石榴汁效应背后可能的生物机制。

  • 美陆军研发超级抗癌药 宣称可彻底消灭癌细胞

    http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20120113/00241d8fef0e1079d1f91e.jpg美国陆军开发出超级抗癌药物腾讯科技讯（亮亮/编译） 据国外媒体报道，来自美国陆军部队的专家近日在位于德克萨斯州的圣安东尼奥市军事医疗中心成功研制出一种名为“E-75”的超级抗癌药物，对多种肿瘤的治疗都具有很好的效果。据了解，研究人员研制这种化学药物最开始的初衷是为了降低乳腺癌的再发率，但在研究的过程中，研究人员却意外的发现这种药物同时还具有其他的功效。因为，那些吞服了这种药物的人们与服用普通控制药物的人们相比，前者患上结肠癌、前列腺癌、肺癌的概率有了明显的降低。研究人员在实验中选择了一些经基因测试或医疗审定后，被断定为有患上乳腺癌危险的女性，并将其分为两组，一组吞服控制性药物，另一组吞服了“E-75”药物。研究结果显示，吞服“E-75”药物的研究对象的乳腺癌再发率仅有10%，而吞服控制药物的一组竟高达20%。这就意味着超级抗癌药物“E-75”具有着正面积极的保护作用。研究人员之所以会选择这样的研究方法，是因为避免出现类似人们在感染流感后再注射流感疫苗的现象。研究人员解释说，抗癌药物“E-75”的“工作方式”相对来说较为简单，它能够成功的在人们体内建立一个特有的免疫系统，这种系统能够搜寻、识别以及确认呈现在多种类型癌细胞表面的蛋白质，从而对应的进行免疫。但是并不是所有肿瘤都是由分泌这种蛋白质分子的细胞组成的，这也是为何抗癌药物“E-75”不能治疗目前所有癌症类型的主要原因。而且，抗癌药物“E-75”在人体内所建立的特有免疫系统不能击败所有癌症细胞的主要原因之一，还因为有一些癌细胞具有“欺骗”免疫系统的功能，以至于当免疫系统进行识别时，会把这些癌细胞误认为是人体的一部分。但是一旦免疫系统“揭穿”这些癌细胞的“伪装面具”，它们就会毫不留情的对这些癌细胞进行消灭，不留任何一个“活口”。但是即便这样，研究人员仍然坚信，只要在该药物的基础上继续进行研究，未来一定会出现治疗癌症的新型药物和治疗方法，它们定会拥有帮助全世界数百万人改善生活质量的巨大潜力。研究人员表示，它们在过去几十年的主要研究任务就是激活该独特的免疫系统，这也是与癌症“战斗”的主要方法之一。该军队的陆军上校补充解释道，现在出现的关键问题是大多数癌症疫苗在被发现时，癌症患者往往已经处于癌症末期或晚期，因此通过直观的方式去检查是没有意义的。(中国科技网)

  • Science：生物“计算机”能识别并摧毁癌细胞

    近日来自哈佛大学、麻省理工学院以及瑞士苏黎世联邦高等工业学院的研究人员在新研究中成功地将生物“计算机”诊断网络导入到人类细胞中，这种生物网络通过对5种肿瘤特异性分子进行逻辑组合分析识别出了特异的癌细胞，并触发了这些癌细胞的毁灭过程。这一研究成果在线发表在9月2日的《科学》（Science）杂志上。文章的通讯作者是哈佛大学系统生物学中心的生物工程学家Yaakov Benenson及麻省理工大学的Ron Weiss教授。Benenson长期致力于开发在活体细胞内运作的生物计算机。生物计算机是一种完全由DNA、RNA及蛋白质构成的分子自动机（molecular automata），它们的“输入”是细胞质中的RNA、蛋白质以及其他化学物质，“输出”的则是很容易辨别的分子信号。由于生物计算机能够探测和监控基因突变等细胞内一切活动的特征信息，因此它们可以确定癌细胞等病变细胞。此外，它们还能够自动激发微小剂量的治疗行为。利用这些“分子医生”将有望引发人类医学的重大变革——明确地对人体病变细胞或组织进行治疗，而健康的细胞完全不会受到干扰。不过，要最终实现这一目标，还有很长的路要走。科学家近期进行的一些相关研究，大都是尝试以不同方式开发具有多种用途的生物计算机。在这篇文章中，研究人员成功构建了一个多基因合成“电路”，此电路负责鉴别肿瘤细胞与正常细胞，进而靶向性摧毁识别的肿瘤细胞。其具体工作原理是：对细胞内5种肿瘤特异性分子及出现频率进行抽样及综合分析。是由当5种因子同时在细胞内出现时，该电路才做出正识别响应。这使得肿瘤检测的精确性大大增高。研究人员希望这一成果能为开发出特异的抗癌治疗奠定基础。随后科学家们用这一多基因合成网络对实验室中培养的两种人类细胞Hela细胞（一种子宫颈癌细胞）和正常细胞进行了检测。当遗传生物计算机被导入到这两种不同的细胞类型中时，只有Hela细胞被摧毁，而正常细胞则安然无恙。获得这一结果并非易事，研究人员为之投入了大量的基础工作。Benenson及同时首先针对正常健康细胞和Hela细胞中的miRNA分子进行了高通量筛查，最终确定了能将Hela细胞从健康细胞中鉴别出的5种特定的miRNA组合。“这些miRNA分子被导入到细胞中进行检测。新型的生物计算机利用诸如‘是’与‘非’的逻辑运算对这五种miRNA分子进行组合。只有当对所有分子的整体运算结果为逻辑‘真’时才会生成需要的结果——即促使细胞死亡，”Benenson说。目前研究人员已确定这一生物计算机网络在活细胞中能够非常稳定地工作，准确组合所有细胞内因子并生成正确答案，这代表着研究者们在该领域又向前迈进了重要的一步。 http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011090911135106.jpgdoi:10.1126/science.1205527 PMC:PMID:Multi-Input RNAi-Based Logic Circuit for Identification of Specific Cancer CellsZhen Xie, Liliana Wroblewska, Laura Prochazka, Ron Weiss, Yaakov BenensonEngineered biological systems that integrate multi-input sensing, sophisticated information processing, and precisely regulated actuation in living cells could be useful in a variety of applications. For example, anticancer therapies could be engineered to detect and respond to complex cellular conditions in individual cells with high specificity. Here, we show a scalable transcriptional/posttranscriptional synthetic regulatory circuit—a cell-type “classifier”—that senses expression levels of a customizable set of endogenous microRNAs and triggers a cellular response only if the expression levels match a predetermined profile of interest. We demonstrate that a HeLa cancer cell classifier selectively identifies HeLa cells and triggers apoptosis without affecting non-HeLa cell types. This approach also provides a general platform for programmed responses to other complex cell states.

  • MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建

    MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建

    [font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]在人小细胞肺癌细胞系中的表达及[/color][color=#000007] [/color][font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]低表达[/color][color=#000000]细胞模型的构建[/color]MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中高表达提取人正常肺上皮细胞 BEAS-2B，SCLC-A 型 H69、H209、DMS153 细胞，SCLC-N 型 H446、H82、H2066 细胞，SCLC-P 型 H526、H211 细胞，SCLC-Y 型 H841、DMS114、SW1271 细胞的 RNA，利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 检测 MSI1 在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图 2-1 显示，MSI1 在小细胞肺癌细胞系中的表达远远高于正常肺上皮细胞，综合分析，选取了 H69、H82、H526 及 SW1271 细胞用于后续实验。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326443512_4838_5389809_3.png[/img]图 小细胞肺癌细胞系中 MSI1 mRNA 的表达（***P0.001）MSI1 低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系 H69、H82、H526、SW1271 细胞，使用慢病毒感染技术敲低 MSI1 的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选， 然后在荧光显微镜下观察如图 ， 可见 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌细胞慢病毒感染成功。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326451025_2121_5389809_3.png[/img]图 慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片（H69、H82、H526、SW1271 明场及荧光照片） 敲低 MSI1 后转录和蛋白水平验证分别提取对数生长期的 H69-NC 、H69-shMSI1-1 、H69-shMSI1-2 、H82-NC 、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 RNA 和蛋白，利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 技术分别检测各细胞 MSI1 mRNA 相对表达量，结果如图 所示，与对照组相比，H69-shMSI1-1、 H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 组 MSI1 mRNA 表达量明显降低（P0.01）， 抑制率约为 75%。利用 Western blot 技术检测各细胞内 MSI1 蛋白的表达情况。结果如图 2-3 所示，与对照组相比，MSI1 蛋白表达在 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞中明显降低。表明 MSI1 低表达细胞模型构建成功。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326454704_2148_5389809_3.png[/img]图 敲低 MSI1 在转录水平和蛋白水平的验证（***P0.001）

  • Nature：破解癌细胞永生化之谜

    我们体内所有的正常细胞都配备一种自动的自我摧毁机制：在经过大约60次分裂之后，它们都死亡。这种内在时钟引起癌症研究人员的极大兴趣，这是因为大多数类型的癌症在这种天生的定时机制上存在缺陷。癌细胞的分裂发生差错而不受控制，因而它们能够继续无限分裂下去而导致肿瘤快速生长。在一项新研究中，瑞士研究人员发现一种蛋白复合物参与这种不受控制的过程。2012年7月4日，相关研究成果发表在《自然》杂志上。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201207/2012070615373433.jpg

  • 维生素C可以杀死一类顽固癌细胞

    有研究说足够浓度的维生素C可以杀死一类顽固癌细胞，对治疗胰腺癌、结肠癌和卵巢癌有疗效。所以多吃富含维生素C的蔬菜对健康很有帮助。

  • MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达细胞模型的构建实验方法与步骤 细胞的复苏 1.复苏前的准备：打开水浴锅，设置温度37℃；紫外线将超净台消毒30 min；配置完全培养基。 2.将要复苏的H69、H446细胞从液氮取出，用一次性PE手套包裹冻存管，迅速放入水浴锅中震荡，使其快速融化。 3.在15 mL离心管中加入5 mL完全培养基及融化的细胞悬液，900 r/min离心8分钟，弃去上清，得到细胞沉淀。 4.在25 cm2的培养瓶中加入5 mL完全培养基，并用1 mL培养基将沉淀的细胞重悬并加入准备好的培养瓶中，放入CO2恒温培养箱中继续培养。 细胞的传代 1.选取在悬浮培养瓶中生长至90%的H69细胞，用移液枪将细胞悬液移入15 mL离心管中，选取在贴壁培养瓶中生长至90%的H446细胞，用PBS溶液将细胞吹至漂浮，并移入15 mL离心管中，两种细胞均900 r/min离心8分钟，弃掉上清。 2.分别在3个25 cm2培养瓶中加入5 mL完全培养基，在细胞沉淀中加入3 mL培养基并充分吹打混匀，将3 mL细胞悬液平均放入3个培养瓶中并混匀，放入培养箱中继续培养。 MSI1低表达细胞模型的构建1.从-80℃冰箱取出慢病毒载体冰上融化，将慢病毒用空白培养基稀释为滴度2×108，充分混匀，准备好病毒感染增强液。2.将25 cm2悬浮培养瓶中H69细胞移入15 mL离心管中并用移液枪充分吹打混匀，取其中500 μL放入细胞计数仪中计数，取出1.2×106个细胞置入新的离心管中，加入空白培养基至6 mL。3.在12孔板中以MOI=10的病毒滴度进行感染，培养16 h。4.16 h后将细胞悬液离心，换成不加双抗的完全培养基继续培养，72 h后观察荧光。5.待细胞生长至状态良好，加入1 μg/mL嘌呤霉素筛选至90%以上细胞均产生荧光。荧光实时定量PCR（Q-PCR）检测MSI1在mRNA水平的表达 总RNA的提取分别将细胞离心，PBS缓冲液清洗2次，900 r/min离心8 min，得到细胞沉淀。分别加入1 mL Trizol，用移液枪吸打至细胞完全破裂，加入200 μL氯仿，震荡30 s，室温静置10 min，以有效分离无机相和有机相，随后4℃，12,000 g/min离心15 min。将上清移至高压过的1.5 mL离心管中，加入与上清等体积的异丙醇，轻柔颠倒震荡数次，室温静置10 min，随后4℃，12,000 g/min离心10 min。弃去上清，加入75%无水乙醇，4℃，12,000 g/min离心5 min。弃去上清，沉淀置于冰上自然干燥，但不可完全干燥。用30 μL DEPC水溶解总RNA。用NanoDrop One超微量分光光度计进行定量和纯度检测，用1%琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测。 cDNA的合成逆转录体系试剂名称使用量模板RNAMonScriptTM 5*RT111 All-in-One MixMonScriptTM dsDNaseNuclease-Free Water1 μg4 μL1 μLup to 20 μL将混合液轻柔吹打混匀，瞬时离心，37℃ 2 min，55℃ 15 min，85℃ 5 min，得到cDNA。 Q-PCR检测MSI1 mRNA的表达GAPDH引物序列：Forward primer:Reverse primer:5’-GGTCGGAGTCAACGGATTTG-3’5’-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’MSI1引物序列：Forward primer:Reverse primer:5’-GAACCATCCCGTCCTGTATCA-3’5’-GAAACCATGAAGCCCCAACC-3’Q- PCR反应体系：Q-PCR反应体系试剂名称使用量cDNAForward primerReverse primerMonAmpTM Chemhs qPCR MixLow ROXNuclease-Free Water50 ng0.2 μL0.2 μL5 μL0.1μLup to 10 μLQ-PCR反应程序： Q-PCR反应程序反应步骤反应温度反应时间循环次数预变性95℃10 min1变性95℃10 s40退火55-65℃10 s延伸72℃30 s溶解曲线溶解曲线按仪器默认溶解曲线 结果采用t检验，用Graphpad prism5计算MSI1在mRNA水平的表达量。 Western blot检测MSI1在蛋白水平的表达总蛋白的提取将对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞移入15 mL离心管中，900 r/min离心8 min，并用PBS溶液洗涤2次，以去除培养基中血清影响。分别加入含PMSF的蛋白裂解液100 μL，与细胞充分混匀。4℃裂解1小时后，4℃，12000 g/min离心15 min，将上清移至新的离心管中，得到细胞总蛋白。 BCA法测定蛋白浓度 将Solution A和Solution B以50:1的体积比配置BCA工作液，充分混匀。将2 mg/mL蛋白标准品等比稀释，最小浓度为125 μg/mL，并分别与配置好的200 μL BCA工作液混匀，铺入96孔板中。37℃孵育30 min，测定波长562 nm处OD（光密度值）值，并绘制蛋白标准曲线。取适量H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白，20：1稀释后，与200 μL BCA工作液混合均匀。37℃孵育30 min，用酶标仪测定波长562 nm处OD值，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。Western blot检测MSI1蛋白的表达 分别收集对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白，加入相应体积4×SDS Loading Buffer，沸水浴煮5 min，分别取40 μg细胞总蛋白，在提前配制的10% SDS-PAGE分离胶电泳。电泳结束后，将蛋白转至PVDF膜上。用含5%脱脂牛奶的封闭液 37℃封闭1.5 h。弃去封闭液，用TBST缓冲液洗3次，每次10 min，加入MSI1兔单克隆抗体（1:1000），并以GAPDH为内参，加入GAPDH鼠单克隆抗体（1:5000）；4℃孵育过夜，次日用TBST缓冲液洗膜3次，每次10 min。在敷有MSI1抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗兔IgG（1:5000），在敷有GAPDH抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗鼠IgG（1:5000），37℃敷育1 h，TBST 缓冲液洗膜3次，每次10 min。用增敏化学发光底物试剂检测，暗室曝光显影。在GAPDH表达量相同的情况下比较MSI1的表达情况。多次重复，应用ImageJ计算出各个蛋白条带的灰度对比，结果采用t检验，并应用Graphpad prism5作出柱状图。 MSI1在人小细胞肺癌细胞系中高表达 提取人正常肺上皮细胞BEAS-2B、小细胞肺癌细胞H446、H69的RNA，利用Q-PCR检测MSI1在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图2-1显示，MSI1在小细胞肺癌细胞系H446、H69中的表达远远高于正常肺上皮细胞。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428158_6718_5389809_3.png1 MSI1 mRNA在小细胞肺癌细胞系中的表达（**代表与正常肺上皮细胞相比，小细胞肺癌细胞MSI1表达量增高具有统计学意义，P0.01）。 MSI1低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系H69细胞，使用慢病毒感染技术敲低MSI1的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选，然后在荧光显微镜下观察如图2-2，可见H69-NC、H69-shMSI1细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌H69细胞慢病毒感染成功。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428036_9359_5389809_3.png MSI1低表达细胞模型的构建。应用shMSI1慢病毒载体感染H69细胞，利用嘌呤霉素筛选，并在荧光显微镜下观察。 荧光实时定量PCR（Q-PCR）检测MSI1的mRNA表达水平提取对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞的RNA，并测量RNA浓度及完整性，用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性可见，RNA有三条带，从上到下依次为28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA，且28S rRNA的亮度是18S rRNA的两倍。用NanoDrop One超微量分光光度计测定人总RNA的A260/A280的值为2.00左右，A260/A230的值为2.30左右，说明提取的RNA质量和完整性很好，可以用于后续试验。利用Q-PCR技术检测各细胞内MSI1 mRNA相对表达量，结果如图2-3所示，与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量明显降低（P0.01），抑制率约为75%。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434330_8277_5389809_3.png MSI1在RNA水平的表达（***代表与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量下降具有统计学意义，P0.001）。 Western blot检测MSI1蛋白表达水平将BSA标准品（2 mg/mL）进行等比稀释，最低浓度为125 ug/mL，并应用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定在波长562 nm下的OD值，以OD值为纵坐标，对应蛋白质浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准蛋白曲线如图2-4所示。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201435248_4142_5389809_3.png图2-4 标准蛋白曲线分别提取H69-NC、H69-shMSI1细胞的总蛋白质，利用Western blot技术检测各细胞内MSI1蛋白的表达情况。结果如图2-5所示，与对照组相比，MSI1蛋白表达在H69-shMSI1细胞中明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功。ahttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201437240_855_5389809_3.pngbhttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434999_3303_5389809_3.png图2-5 MSI1蛋白水平表达：（a）MSI1蛋白表达条带；（b）MSI1蛋白的相对表达量。（*表示与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1蛋白表达下降具有统计学意义，P0.05）。首先验证MSI1在小细胞肺癌细胞系中的表达情况，利用Q-PCR技术检测在RNA水平，MSI1在肺正常上皮细胞及小细胞肺癌细胞系中的表达，结果显示，MSI1在小细胞肺癌细胞中的表达明显高于正常肺上皮细胞。随后以人经典型小细胞肺癌细胞系H69细胞为研究对象，构建MSI1低表达细胞模型，应用shMSI1慢病毒载体感染H69亲本细胞，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，利用Q-PCR及Western blot验证MSI1在RNA及蛋白水平的表达，结果显示，H69-shMSI1组MSI1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功，可以用于后续实验。

  • 【分享】我学者证实树莓可抑制肝癌细胞生长

    水果树莓可明显抑制肝癌细胞系增殖，使肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达减弱，并使抑癌基因野生p53的表达增强。由哈医大附属第四医院刘明博士完成的一项国家自然基金课题，首次成功锁定树莓预防肝癌生长的两个特异性蛋白质作用靶点，为果蔬预防原发性肝癌提供了重要的理论依据。这一成果近日获得2008年度黑龙江省医药卫生科技进步一等奖。 　　2000年，刘明博士赴美国康奈尔大学研修深造期间，尝试将树莓中的鞣化酸与肝癌细胞混合培养，发现前者能显著抑制后者的生长。近年来，他从医学、营养学等角度开展了“树莓预防及抑制肝癌机制的研究”。 　　研究结果表明，随着树莓中植物化学物质浓度的增加，总抗氧化自由基清除能力也随之增强。0.25毫克/毫升至10毫克/毫升的树莓提取物对肝癌细胞系HepG-2的抑制率呈逐渐增加趋势，最高抑制率可达90%%左右。 　　在利用化学毒物黄曲霉毒素和二乙基亚硝胺建立的稳定大鼠原发肝癌模型上，随着树莓提取物浓度的增高，实验组大鼠肝脏上的瘤径变小，肿瘤的数量减少，成瘤率减低，结节程度减轻；肝癌细胞VEGF、增殖细胞核抗原表达的程度亦明显降低。同时，实验组大鼠血清在两种特异蛋白(M2597、M4513)质峰上与树莓干预组及正常大鼠血清差异明显，说明蛋白质峰M2597、M4513极有可能为树莓预防肝癌的蛋白质作用靶点。 　　专家评价，今后，利用树莓中提取的植物化学成分，进行合理搭配及组成预防剂，十分有助于防范肝癌的发生，并能抑制肝癌的发展，提高患者生存率。

  • 敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响

    敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响

    [align=center][size=18px]敲低[/size][size=18px] MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][/align][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组[/size][size=16px]细胞细胞[/size][size=16px]离心，并用完全培养基调整细胞浓度，H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、[/size][size=16px] [/size][size=16px]H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 以每孔 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2，以每孔 1.3×[/size][size=16px]104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，37℃ 恒温培养箱中培养。铺板后，分别于 24 h、48 h、72 h、96 h、120h 在每孔加入 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] CCK-8 溶液，37℃ 恒温培养箱中孵育 4h。并用酶标仪测定波长 450 nm 处 OD 值，利用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 计算增殖情况。[/size][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69 、H82 、H526 、SW1271 的对照组和实验组细胞， 其中 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、[/size][size=16px]H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 细胞系以 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细胞密度接种于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 以 1.3×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细[/size][size=16px]胞[/size][size=16px]密度接种于[/size][size=16px] 96 孔板中。待细胞融合率约 80%，加入不同浓度顺[/size][size=16px]铂[/size][size=16px]。每组均设置对照组及空白组（仅有同体积培养基）。H69、H82、H526 的对照组和实验组[/size][size=16px]加药浓度梯度为 0、1、2、4、8、16、32、64 nmol/mL，SW1271 对照组和实验组细胞加药浓度梯度为 0、2、4、8、16、32、64、128、256 nmol/mL，（加药浓度梯度根据细胞类型、前期预实验结果及细胞对药物的敏感程度而定）。每种浓度设 6 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]复孔，每孔总体积为 100 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px]，培养 24、48、72、96、120 h 后[/size][size=16px]分别检测细胞活力。每孔加入[/size][size=16px] 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] 的 CCK-8[/size][size=16px]（避光），培养箱中孵育[/size][size=16px] 4 h 后取出，使用酶标仪测定波长为 450 nm 的吸光度（OD 值）。利用公式：抑制率=（加药组－空白组）/（对照组－空白组）计算增殖抑制率。实验重复 3 次，取平均值。以药物浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，利用[/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 绘图。[/size] [size=16px]敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/size][size=16px]CCK-8 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]，生成的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。[/size][size=16px]CCK-8 法 测 生 长 曲 线 实 验 结 果 如 图[/size] [size=16px]3-1 显 示 ， 实 验 组 H69-shMSI1-1 、[/size][size=16px]H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 OD [/size][size=16px]值明显[/size][size=16px]低于对照组。[/size][size=16px]表明敲低[/size][size=16px] MSI1[/size][size=16px]抑制了[/size][size=16px] SCLC 细胞的生长增殖。[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321138249_2126_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][size=16px]图[/size][size=16px] [/size] [size=16px]MSI1 低表达对 H69、H82、H526、SW1271 对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 作图所示（*P0.05,**P0.01,***P0.001,表示与对照组相比，[/size][size=16px]敲低组[/size][size=16px] OD 值减小[/size][size=16px]具有统计学意义）。[/size] [size=16px]测敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]药敏实验结果如图[/size][size=16px] 3-2 所示，与对照组相比，实验组 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-2 经不同浓度[/size][size=16px]顺铂处理[/size][size=16px] 24、48、72、96、120 h 后细胞的药物敏感性无明显变化。[/size][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321124223_9282_5887180_3.png[/img]

  • 禽类病毒或能杀死癌细胞

    维吉尼亚马里兰大学兽医学院科学家发表的文章称感染鸡的病毒有望能够治疗人类前列腺癌。纽卡斯尔病毒对鸡类有害但是不影响人类。科学家改造该病毒发现能够杀死各种类型的前列腺癌细胞。该文章发表在4月份Journal of Virology上。近六分子一的男人会发展成前列腺癌。通常采用激素疗法或化疗方法治疗前列腺癌病人，但是两者都有副作用。马里兰大学兽医系教授Elankumaran Subbiah博士希望开发出新的更高效并副作用小的治疗方法。纽卡斯尔病毒感染家禽和野生禽类，特别是鸡。尽管该病毒能引起人类轻度结膜炎和感冒样症状，但是并不对人类健康有很大危害。

  • 【分享】电磁辐射会加速癌细胞增长

    医学研究证明，长期处于高电磁辐射的环境中，会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变。电磁辐射过度还会影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能，严重的还会诱发癌症，并加速人体的癌细胞增长。专家提醒消费者——由于电脑产品具有生产组装过程相对简单，市场需求较大的特点，吸引了很多企业加入电脑的生产行业。目前国家信息技术设备电磁兼容性标准要求在生活环境中使用的电脑产品辐射干扰指标要达到《信息技术设备的无线电骚扰限值和测量方法》中B级限值的要求。非生活环境中使用的电脑产品辐射干扰指标要达到A级限值的要求。抽查结果表明，一些企业在批量生产时产品一致性没有很好的控制，致使被抽样品电磁兼容辐射干扰指标达不到B级限值的要求。辐射干扰是台式电脑工作时向空间发射的一种电磁波干扰。医学研究证明，长期处于高电磁辐射的环境中，会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变。此外，电磁辐射过度会影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能，严重的还会诱发癌症，并加速人体的癌细胞增长。这种电磁辐射污染已经成为室内环境污染的新威胁。庭用户要尽量避免把家电摆放得过于集中，以免使自己暴露在超限量辐射的危险之中。特别是一些易产生电磁波的家电，如电脑、电视、冰箱、收音机等，最好不要集中摆放在卧室里。要避免长时间使用家用电器、手机等，还要尽量避免同时启用多种家电。与家电保持安全距离很有必要，距离越远，受电磁波侵害就越小。另外，必须长期处于高电磁辐射环境中工作的人需要多食用胡萝卜、豆芽、西红柿、油菜、海带、卷心菜、瘦肉、动物肝脏等富含维生素A、C和蛋白质的食物，以此加强机体抵抗电磁辐射的能力。

  • 西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡

    西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡在我国，西达本胺已获批作为PTCL临床用药。西达本胺属于苯酰胺类化合物，是我国自主研发的首个亚型选择性口服HDACI，国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验，其选择性抑制I类HDAC1、2、3亚型和II类HDAC10亚型，可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡，阻滞周期、引发DNA损伤，还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比，西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡，其中最为主要的是线粒体凋亡途径，该途径受Bcl-2家族介导的细胞色素C释放通路调控。抗凋亡蛋白Bcl-2表达受到抑制，促凋亡蛋白Bax表达上调，使线粒体膜电位降低，细胞色素C释放到细胞质中，Caspase途径被激活，细胞发生凋亡。例如：西达本胺增强B淋巴瘤细胞组蛋白H3、H4 乙酰化水平，使线粒体膜电位降低随后激活Caspase 3，促进细胞凋亡；在肾癌中，它可以下调Bcl-2表达，上调Bax表达，随着药物浓度增加引起786-O 细胞凋亡。西达本胺可以调控ROS水平。HDACI可以上调ROS水平，导致DNA双链损伤。研究证明，西达本胺作用于白血病细胞后，诱导细胞内ROS产生，细胞凋亡增加[17]。此外，在胰腺癌细胞系中，西达本胺明显增强细胞内ROS的产生，上调γH2AX（DNA双链断裂的标志物）表达水平，诱发细胞DNA损伤。西达本胺通过调控细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases，CDKs）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Cyclin-dependent kinases inhibition，CDKI）的表达阻滞细胞周期。例如，西达本胺使MM细胞系P21、P27的表达量增高，CDK4、CDK6、Cyclin D2表达量下降，阻滞MM细胞系于G1期[19]。在NK/T细胞淋巴瘤中，西达本胺上调P21表达，下调Cyclin E表达，诱导细胞发生G0/G1期阻滞，从而抑制细胞的增殖。

  • 科学家利用基因组序列设计新药 精准打击癌细胞

    原标题：科学家利用基因组序列设计新药 科技日报讯（记者常丽君）据物理学家组织网2月10日（北京时间）报道，来自美国弗罗里达大学斯克里普斯研究所（TSRI）的科学家称，他们开发出一种很有潜力的通用方法，可通过基因组序列来设计新药，并利用这种方法识别出一种高效化合物，其能让癌细胞攻击自身并最终死亡。相关论文在线发表于2月9日的《自然·化学生物学》。 “这还是第一次只凭借一个RNA序列，就理性地设计出治疗性小分子。许多人可能怀疑这一点。”负责该研究的斯克里普斯研究所副教授马修·迪斯尼说，“我们证明了这种方法能以前所未有的精确性瞄准一个致癌RNA。” 迪斯尼的实验室一直在开发能掌控药物与RNA折叠结合的方法，尤其是对microRNA（微RNA）的控制。微RNA上世纪90年代才被发现，是一种存在于所有动植物细胞中的短分子。通常，每个微RNA作为一个或多个基因的“光控开关”，与这些基因的转录结合并有效防止它们转录成蛋白质。以这种方式，微RNA调节着各种各样的细胞过程。有些微RNA与疾病相关，比如MiR-96，能阻碍凋亡过程或编程细胞的死亡，使细胞生长失控而促发癌症。 研究人员将他们的方法称为信息RNA。这是一种计算技术，通过计算能找到针对疾病相关基因组序列的信息，以及所有瞄准该序列的细胞RNA，再通过细胞RNA找到针对性药物。这些药物RNA序列能针对性地与数以千计的细胞RNA序列相互左右，而对其他序列没有影响。 利用信息RNA，他们识别出了瞄准MiR-96的化合物，以及瞄准其他20多种疾病相关微RNA的化合物。研究显示，抑制MiR-96的候选药物能抑制癌细胞生长，而且那些没有功能性MiR-96的细胞不会受到药物影响。 “这说明该方法在药物选择方面具有前所未有的精确性。”迪斯尼说。他还指出，新的候选药很容易生产，具有细胞渗透性，能专门瞄准MiR-96，针对性远远超过目前最先进的RNA瞄准技术。 “利用我们的程序，能找到高度特化的药物。”论文第一作者、迪斯尼实验室的研究生塞·普拉迪普·维拉盖普蒂说，“我们希望将来能针对其他癌症或任何疾病RNA设计出候选药物。” 总编辑圈点 长期以来，人类用于对付恶性肿瘤的放疗、化疗等方法，都是敌我不分、近乎“自残”的手段——一发炮弹打向战场，虽然杀敌一千，但也自损八百。这种局面，随着近年来靶向治疗的出现，正在发生改变。更精确的瞄准，不仅减少了患者的痛苦，也让打击效果有了保证。本文的研究，可以说是让科学家拿到了一把梦寐以求的狙击枪，不单稳准狠，更是能跟踪打击，认准设定目标，枪枪有准头。话说回来，到底它是不是真这么好使，还得战场上见真章。来源：中国科技网-科技日报 作者：常丽君 2014年02月11日

  • 狗嗅出癌症非天方夜谭 "义犬嗅癌救主"有其事

    看看下面的帖子，你会惊叹自然界的奇妙。每一种生物都是很聪明的，都有它存在的价值。狗嗅出癌症非天方夜谭 "义犬嗅癌救主"有其事犬的嗅觉强于人的嗅觉1万倍至10万倍 研究人员用实验证实——— 癌症可以用鼻子嗅出来！对于人类来说，这可能是天方夜谭，但嗅觉灵敏的小狗就有这种本事。医学界早就有一种猜想，即癌细胞可能会发出一种特殊的气味。人类的鼻子闻不出这种气味，只有犬类才能嗅到。但在相当长的一段时间内，这个猜想一直没有被证实。最近，经过科学家的不懈努力，这个事实终于得到证实。 “义犬嗅癌救主”的有趣故事 狗能嗅出癌症的事实和观点最早可追溯到1989年。当时，英国伦敦的两位皮肤病学家在英国著名医学杂志《柳叶刀》上描述了一个有趣的病例：一名44岁的女性患者要求切除她腿上的一颗痣，因为她的狗总是凑到她的腿上嗅闻这颗痣，即使她穿裤子时也是如此。一天，在她穿着裙子时，她的狗甚至试图咬掉这颗痣。这位女士不胜其烦，于是找到皮肤科大夫，要求为她切除这颗痣。痣切除手术后的检查结果令人大吃一惊，这颗痣是恶性黑色素瘤，是一种致命性皮肤癌。由于发现得早，这位女性保住了性命。 随后，对类似事件的报道就变得多了起来。 2001年，两名英国医生也描述了一个病例。一位66岁的男性患者腿上长了一块湿疹，已有18年。一天，他养的宠物犬开始不断地嗅闻他的湿疹。狗的举动让他非常吃惊，并迫使他到医院进行检查。检查结果显示，他患了皮肤癌。皮肤癌被很快切除后，他的狗就不再对他原来的湿疹部位感兴趣了。 研究人员开始训练“狗专家” 为了证明狗是否能够嗅出癌症患者产生的异常体味，2004年，英格兰白金汉郡的阿默莎姆医院的卡罗琳威利斯博士和“聋人听力犬组织”的研究人员用医院职员养的6条宠物犬作为试验对象，包括三只矮脚长耳犬、一只蝶耳长毛观赏犬、一只拉布拉多犬和一只杂种狗。研究人员分别从膀胱癌患者、其他疾病患者和健康人身上取出尿液样本，对这6只狗进行为期7个月的训练，使这些狗只对人的尿味“感兴趣”，而对年龄、性别、饮食以及其他因素引起的差别视而不见。 研究人员从36名膀胱癌患者和108名志愿者身上采取了尿样。每只狗嗅7份尿样，一旦确定是癌症患者的尿样，就趴在尿样旁边，否则就继续闻下一份尿样，当测定出癌症患者的尿样后，它会得到一块美味食品作为奖赏。有意思的是，6条狗在测试中都盯上了一名志愿者，都判定其尿液为癌症病人的尿液，而在先前的检查中，这名志愿者是完全健康的。于是，医生们为这名志愿者做了更详尽的检查，结果在其右肾内发现了危及生命的肿瘤。 2005年4月，英国退休外科专家约翰丘奇让一只两岁的英国小猎犬“坦戈”通过闻嗅病人的尿样，诊断病人是否患有癌症。据报道，“坦戈”只学习了7个月，就成了一名“癌症诊断专家”。丘奇发起“嗅癌狗”计划，想征募一些家庭宠物犬，然后将它们一个个训练成能够闻嗅出病人癌症的“狗专家”。

  • 美批准治疗膀胱过度活动症新药上市

    据新华社华盛顿电 （记者任海军）美国食品和药物管理局6月28日批准一种学名为米拉贝隆的药物上市，这种药物主要用于治疗膀胱过度活动症。 新上市的药物商品名为Myrbetriq，此前已在日本获批上市，由日本第二大制药公司安斯泰来生产。这种缓释药片每日服用一次可帮助服用者放松膀胱肌肉，并舒缓膀胱过度活动症引起的尿频等症状。 据介绍，4000多名膀胱过度活动症患者参加的安慰剂对照临床试验显示，在12周的试验期间，每日服用25毫克或50毫克新药物的患者，小便次数都有所减少。试验中，患者的不良反应主要有血压升高、感冒症状、尿道感染、头晕等。 美国药管局表示，严重高血压患者、末期肾病和严重肺损伤者不宜服用这种药物。 膀胱过度活动症是一种以尿急、尿频、急迫性尿失禁等为特征的症候群，食品和药物管理局的数据显示，美国约有3300万人受这种疾病困扰。

  • 饿死癌症细胞！

    清华大学宣布：该校医学院颜宁教授研究组在世界上首次解析了人源葡萄糖转运蛋白GLUT1的晶体结构，初步揭示了它的工作机制以及相关疾病的致病机理，在人类攻克癌症、糖尿病等重大疾病的探索道路上迈出了极为重要的一步。未来，人类有望“饿死”癌细胞。或许，我们要真的有望攻克人类疾病史上的这一顽疾了！

  • MSI1对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制研究

    MSI1对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制研究

    [font='times new roman'][size=21px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=21px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=20px][color=#000000]实验方法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞的生长增殖的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测小细胞肺癌细胞系生长增殖情况[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分别将对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞离心，并用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]完全培养基调整细胞浓度，以每孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个细胞平铺于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃恒温培养箱中培养。铺板后，分别于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]24 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]48 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]72 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%CO[/color][/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养箱中孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。并用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，结果应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]t[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检验，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算增殖情况。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用琼脂糖及[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ddH[/color][/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]O[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分别配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的软琼脂凝胶，高压灭菌后维持[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃不会凝固，按[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]比例将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的软琼脂与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1640[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基混合，将混合液置入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中冷却凝固半小时，作为底层琼脂置于培养箱中备用。分别将对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞计数，按[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]比例将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂凝胶与细胞悬液混合铺入上层，每孔细胞数为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个，注意不要产生气泡。每[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]天滴加少量培养基，防止干燥。待上层凝固后放入恒温培养箱中培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]周后拍照计数克隆形成数及单个细胞团细胞数目，比较两种细胞克隆形成能力的差异，结果应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]t[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检验，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]影响小细胞肺癌细胞的相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检测相关蛋白的表达[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]提取适量[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]稀释后，与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L BCA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]工作液混合均匀。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]562 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。在蛋白原液中加入相应体积[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS Loading Buffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，沸水浴煮[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，分别取[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]g[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10% SDS-PAGE[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分离胶电泳。电泳结束后，将蛋白转至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PVDF[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜上。用含[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]脱脂奶粉的封闭液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃封闭[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。弃去封闭液，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，加入相应抗体，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃孵育过夜，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。加入相应二抗（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:5000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]），[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃敷育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。用增敏化学发光底物试剂检测，暗室曝光显影。重复多次实验，应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ImageJ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算出各个蛋白条带的灰度对比，并应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]作出柱状图。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000] MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞生长增殖能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]试剂可用于检测细胞生长增殖能力，过程简便精确。其基本原理为：试剂中含有的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]WST-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-(2-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]甲氧基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硝基苯基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-3-(4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硝基苯基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-5-(2,4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]二磺酸苯[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-2H-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]四唑单钠盐），在电子载体的作用下被细胞中的脱氢酶还原为黄色甲瓒产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]酶标仪测定[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可间接反映活细胞数量。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞增殖能力，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值明显低于对照组，并且增长变化不明显。表明，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达抑制小细胞肺癌细胞的生长增殖。[/color][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203024978_3594_5389809_3.png[/img][/align][font='times new roman'][color=#000000] H69-NC[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]细胞生长曲线。应用[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]作图所示（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.001,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]OD[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]值减小具有统计学意义）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞单细胞克隆能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验能够检测悬浮细胞单个细胞克隆形成的能力，培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]周后肉眼可见克隆形成，拍照并分别计数两种细胞克隆形成数量及单个克隆细胞团的细胞数目。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]形成的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]克隆数目[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]明显[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]减少[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]＜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，克隆细胞团体积明显较小，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]并且通过计数单个克隆的细胞数发现，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组单个克隆的细胞数明显低于对照组（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]＜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）。该实验同样表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达对小细胞肺癌细胞的增殖具有抑制作用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203030673_3184_5389809_3.png[/img][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203032295_6922_5389809_3.png[/img][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]琼脂克隆形成实验。（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）软琼脂克隆形成实验镜下观察；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）克隆形成率；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]c[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）单个克隆形成的细胞数（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组克隆形成率及单个克隆的细胞数减小具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.001[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]影响人小细胞肺癌细胞的相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为目前已知研究较为广泛的的肿瘤干细胞标志物，为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞系中与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的相关性，分别提取对数生长期[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在蛋白质水平的表达量。结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量明显降低。表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的敲低降低了小细胞肺癌细胞的干性，并且[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]具有相关性。[/color][/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203030163_8814_5389809_3.png[/img][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203031179_6656_5389809_3.png[/img][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白的表达[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]:[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相对表达量[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白表达下降具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是否对小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程产生影响，分别提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量，结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显下降，而[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量增加，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后，小细胞肺癌细胞的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程受到明显抑制。[/color][/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203035586_9939_5389809_3.png[/img][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203034079_6990_5389809_3.png[/img][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达：（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相对表达量（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达下降具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞凋亡过程的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞凋亡是多基因调控的细胞程序性的死亡，为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞中对细胞凋亡的影响，提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白后，通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证细胞凋亡相关蛋白的表达，结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组凋亡相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved caspase9[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]aspase[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显上调，抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bcl-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达促进了小细胞肺癌细胞系凋亡过程。[/color][/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][font='times new roman'][color=#000000]图[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]3-5 [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]凋亡相关蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表达：（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）凋亡相关蛋白表达条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）凋亡相关蛋白相对表达量（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组凋亡相关蛋白表达下降具有统计学意义）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]主要研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制，首先利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验及软琼脂克隆形成实验验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后小细胞肺癌细胞的生长增殖能力。结果显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组细胞生长速度明显减慢，单个细胞克隆能力明显降低，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后抑制了小细胞肺癌细胞系的生长增殖。通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达。结果显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的敲低降低了小细胞肺癌细胞的干性，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量可能与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]具有相关性，但具体机制尚不清楚，需进一步研究。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程是肿瘤转移[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程的关键步骤，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低后间充质标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，而上皮标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量增加，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低抑制了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程。通过验证凋亡相关蛋白发现，凋亡相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved caspase9[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]aspase[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显上调，抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bcl-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下降，表明敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后促进了凋亡的产生。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路在细胞生长发育过程中具有重要作用，在多种肿瘤中表达失调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]信号通路关键下游靶点，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达使[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞中也通过激活[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路发挥作用。[/color][/size][/font]

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