蛋白胨缓冲液

我发现在做冻干粉针剂的无菌检查时，用0.9%氯化钠溶液溶解药品，后薄膜过滤？有一次，同事错用了pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，结果药粉都没溶解。在做一种药品的原料药的微生物限度检查时，一种用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，然后薄膜过滤。请问微生物无菌检查和限度检查时用的冲洗液，为什么有时候用0.9%氯化钠溶液，有时候用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液？如何去选择？依据是什么？谢谢！

本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此，蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。 　　不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨，又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白胨（Pancreatic digest of casein），是一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定，以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业，氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造，生丝处理，食品加工。在国际市场上，胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。 　　胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准： 　　常规各项理化指标： 　　1. 澄清度（磷酸盐、碱性沉淀）：无沉淀、澄清 　　2. 2%水溶液：透明 　　3. 酸碱度：6－7 　　4. 氨基氮：≥3% 　　5. 色氨酸：≥0.8% 　　6. 胨含量：≥80% 　　7. 总氮：≥13% 　　8. 水份：≤5% 　　9. 灰份：≤6% 　　10. 氯化钠：≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物，与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上，属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。

刚开始接触蛋白分析，样品等电点在5.0左右，使用C4，300A的反相柱，使用0.1%TFA和乙腈作为流动相，出峰正常，但换用20mM磷酸盐缓冲液(pH=6.5和4.5)和乙腈洗脱就没有峰，调高了乙腈比例仍然没有峰，请有经验的朋友指点，谢谢。

1、匀浆缓冲液（200 mM Tris–HCl、150 mM NaCl、10 mM EDTA、pH 8.0）怎么配制？2、[font='Times New Roman']Tris–HCl[font=仿宋]缓冲液（[/font][font=Times New Roman]50 mM[/font][font=仿宋]，[/font][font=Times New Roman]pH 8.0[/font][font=仿宋]）怎么配制？[/font][/font]

配营养琼脂时 换一瓶新蛋白胨 结果发现上次买的一批蛋白胨全成板块了 。。。 还能用吗？？？

蛋白胨水培养基( l )成分 蛋白胨 10g 水 l000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管，121 ℃ 灭菌15 分钟。( 3 )用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。 ① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35 ℃ 培养24～48 小时，必要时培养4～5 天，沿管壁加人靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。 ② 靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g ，加入戊醇（或异戊醇）75ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml 徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深．或称取对二甲氨基苯甲醛1g ，加人95 ％乙醇95ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml 徐徐滴入。

我是做啤酒微生物检测的新手，做了2次菌落总数都没有成功，遇到几个问题请教一下；1.培养基中是用的蛋白胨代替的胰蛋白胨，可以吗？2.空白培养基上有菌落长出。（生理盐水和培养基是用的灭菌锅灭菌，移液管和培养皿是用的牛皮纸包好后160度干燥2小时灭菌。操作在无菌室内的超净工作台上。）个人觉得是不是移液管灭菌不好，培养皿一直都是这样灭菌的，做酵母的时候没有问题。3.有几个细菌长在培养基表面的，大部分长在培养基内部的，一点一点的，不知道是不是这样子的？

我最近在用毛细管电泳淌度法测药物与蛋白结合常数，但是重现性很差，而且甚至连线性关系都没有。我就想问一下，文献上说要在缓冲液中加入不同浓度的药物、然后以蛋白进样。可是Inlet的A1，A2和Outlet的A1放的都是缓冲液，应该怎么这三瓶缓冲液都加入药物还是只要其中一瓶加入药物就可以呢？本科生对仪器不够了解，希望各位大神能够提供些帮助和解答。谢谢！

请问专家，用HPLC分析蛋白多肽，流动相加入三氟乙酸作用是什磨？磷酸盐缓冲液可代替吗？谢谢！

我做毛细管电泳,想测出差异蛋白的分子量,但是,试剂合都用完了,仍然一个好东西也没跑出来.以后想自己配电极缓冲液,做non-gel capillary electrophoresis查了一下,线性丙希新酰胺的两在3%-4.8%.请问谁有配方?

在测试酸性蛋白酶酶活时，要选用pH2.0的缓冲体系，请问各位前辈是否必须将酪素溶液的pH调为2.0　？　如果是这样该选用什么缓冲溶液呢？　我曾尝试选用磷酸缓冲液，但酪素不能完全溶解，不知是缓冲液的问题还是溶解方法的问题，急死我了！请各位前辈指点一下，本人不胜感激！！！

[font=仿宋]请教一下各位大佬，以下蛋白质分离纯化过程中需要用到的各种缓冲溶液该如何配制？1、匀浆缓冲液（[/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]200 mM Tris[/color][/font][color=#4d5865]–[/color][font='Times New Roman'][color=#4d5865]HCl[/color][/font][/color][/b][font=仿宋][color=#c00000]、[/color][/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]150 mM NaCl[/color][/font][color=#4d5865]、[/color][font='Times New Roman'][color=#4d5865]10 mM EDTA[/color][/font][color=#4d5865]、[/color][font='Times New Roman'][color=#4d5865]pH 8.0[/color][/font][/color][/b][font=仿宋][color=#c00000]）[/color][/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]2、Tris[/color][/font][color=#4d5865]–[/color][font='Times New Roman'][color=#4d5865]HCl[/color][/font][/color][/b][font=仿宋]缓冲液（[font='Times New Roman']50 mM[/font]，[font='Times New Roman']pH 8.0[/font]）[/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]3、2[/color][/font][/color][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]0 mM [/color][/font][/color][/b][font=微软雅黑]NaH2PO4[/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]( pH 7.2 )[/color][/font][color=#4d5865]加[/color][font='Times New Roman'][color=#4d5865]500 mM NaCl[/color][/font][/color][/b][font=仿宋]4、含有[/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]1mM PMSF[/color][/font][color=#4d5865]、[/color][font='Times New Roman'][color=#4d5865]1mM [/color][/font][/color][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]cocktail[/color][/font][/color][/b][font=仿宋]的[/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]50mM Tris[/color][/font]– [font='Times New Roman'][color=#4d5865]HCl[/color][/font]缓冲液（[/color][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]pH 7.4[/color][/font][/color][font=仿宋][color=#0000ff]）[/color][/font][/b][font=仿宋]5、缓冲溶液中[/font][b][color=#0000ff][font='Times New Roman'][color=#4d5865]NaCl[/color][/font][/color][/b][font=仿宋]从[font='Times New Roman']0[/font]到[font='Times New Roman']400mM[/font][/font][b][font=仿宋][color=#0000ff]递增的洗脱[/color][/font][font=仿宋][color=#0000ff]溶液[/color][/font][font=仿宋][color=#0000ff]以上各种溶液配制需要准备什么原材料，怎么使溶液pH达到要求？[/color][/font][/b]

为什么大肠菌群MPN法，GB4789.2-2003是用9管的乳糖胆盐，而GB5750做水时候要用15管法的乳糖蛋白胨，而改版后的新GB4789.2008.2中改用LST，其与乳糖胆盐相比又有什么优势呢？

请教各位老师，从一个资料上看说乳糖蛋白胨中的乳糖不能换成葡萄糖是因为葡萄糖经发酵产酸过多使PH达到4.5，使大肠杆菌死亡！这个说法对吗？还有大肠菌群的生长ph范围是多少。有根据吗？

一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。三、材料与仪器（一）试剂 牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。(二)其他 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。四、操作步骤（一）称量 根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。（二）溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。（四）过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。（五）分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。1．液体分装 分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。2．固体分装 分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。3．半固体分装 装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。（六）加棉塞 分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。（七）包扎 棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。（八）保存 灭菌后的培养基放入37℃养箱中培养24小时，以检验灭菌的效果，无污染方可使用。

我做毛细管区带电泳分离蛋白质，蛋白质要荧光标记时用PH9.3碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液，但运行缓冲液是不同PH不同浓度的磷酸盐。不知是否会有影响，该怎么办呢？ 快让实验弄疯了，请各位师兄师姐传授一二，小妹刚开始接触毛细管电泳，遇到问题就很郁闷......

缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。 硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2MNa2HPO48.0毫升，而0.2MNa2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1MNa2HPO48.0毫升，而0.1MNa2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为:需Na2HPO4量为 :计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等。

[font=Verdana]有个问题想请教一下大家[/font][font=Verdana]我同学现在在做CE的实验，但是她每次基线都跑不平稳[/font][font=Verdana]在进缓冲液跑空针的时候也同样如此[/font][font=Verdana]她的缓冲液都是现配的，应该没有什么污染的问题。柱子是新安装[/font][font=Verdana]的，按照标准处理程序冲过，电极用水和乙醇檫过，也没有弯。氘[/font][font=Verdana]灯寿命足够。实验室的空调一直开着，应该也不是潮湿度的问题。[/font][font=Verdana]所以不明白问题出在哪里？难道是检测窗口那里脏了？[/font][font=Verdana]希望有知道的朋友帮我解决一下，谢谢了[/font][font=Verdana][/font] [font=Verdana]ps：缓冲液过滤了，超声过，电流平稳，大概在60左右[/font][font=Verdana][/font] [font=Verdana]检测窗口也无明显污迹[/font][font=Verdana][/font] [font=Verdana]实在让人匪夷所思啊[/font]

乳糖蛋白胨灭菌完放在室内不放冰箱可以保存吗

敬请指导：怎么使用磷酸缓冲液梯度？能够自动进行流加吗？磷酸缓冲液和醋酸缓冲液的缓冲能力怎么区分？哪一个效果更好？谢谢！

我举个例子来说明一下：柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L） 这里的0.1mol每升指的是什么！？与柠檬酸—柠檬酸钠（0.05mol/L）有什么不同？！ 这个不同对缓冲液体系有什么影响么！？配制pH4.8的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）的方法如下：0.1 mol/L柠檬酸 9.2mL 再加 0.1mol/L柠檬酸钠10.8mL那么配制pH4.8的柠檬酸—柠檬酸钠（0.05mol/L）缓冲液该如何进行？！

乳糖蛋白胨的培养基，是需要自己培养还是买 成品？成品是否需要 检测纯度之类的？？？

在配制分析缓冲液中加入3%PEG6000和牛IgG，两者不论先后顺序加入，都会出现沉淀现象。查阅有关PEG沉淀法，首要条件是要求蛋白质分子处在等电点环境中，通过条件缓冲液不同PH值，但均出现沉淀现象，请问这是什么原因？

请问各位专家，在使用缓冲液的时候是否 可以随意更换呢？比如说，我先使用磷酸钾缓冲液，然后换用了柠檬酸磷酸缓冲液，可以吗？要是不可以的话，二者的本质区别是什么呢？不管对仪器还是对样品来说，会产生哪些方面的 影响呢？谢谢！本人是新手，请大家指教。

N-三（羟甲基）甲基-3-氨基丙磺酸，简称TAPS.作为DNA筛分体系中常用的缓冲液体系，也可作为RNA样品的缓冲液成分，适用于叶绿体薄层备样的电子传递和磷酸化研究，在冷冻干燥过程中保护氧合血红蛋白氧化为高铁血红蛋白，也可作为毛细管区带电泳进行蛋白微量分析的背景电解质。

我今天已经把装有乳糖蛋白胨的培养基115[size=2]℃[/size]20min高压灭菌好了，但样品明天才来，那我这培养基可以放到明天才用吗？

有时候为了改善色谱的保留以及峰形，需要添加一定浓度的缓冲液。文献上用的缓冲液浓度有高有低。对于同一种物质测定，分别添加10mmol/L和1mmol/L两种浓度的缓冲液，我实际做的效果差不多，在理论上有两个浓度会有差别吗？缓冲液浓度大小有没有一个设定的范围？

对于缓冲液的配置一直是迷迷糊糊Q1 现在如果我想配置醋酸缓冲液 pH 4 （12mM）和 pH 4 （50mM） ，请问这个怎么实现？还有此时 pH 4 （12mM）和 pH 4 （50mM）的离子强度分别是多少？Q2 关于磷酸-柠檬酸缓冲体系 大家用的是磷酸氢二钠的二水化合物还是十二水化合物？

请教大家两个问题，看到文献用0.1M 醋酸钠 (pH 7.2)的缓冲液。在网上查了一下，貌似醋酸钠缓冲液的缓冲区间是3.7-5.6，是用醋酸钠和醋酸混合而成的。按理说醋酸钠是强碱弱酸盐，如果少加一些醋酸，应该可以达到pH 7.2。但是问题是，这样在这个pH值下，就没有什么缓冲能力了？另外一个问题是，文献说用pH 为2.5的磷酸盐缓冲液，可是磷酸盐缓冲液的缓冲区间是5.7-8.0，那么我怎么能调到2.5呢？加盐酸吗？可是这样是不是也失去缓冲液的意义了？谢谢大家。祝十一快乐:)