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龙胆山酮酚

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  • 介绍中药——龙胆草

    龙胆草,原名:[url=https://baike.so.com/doc/1704429-1802107.html]龙胆[/url],别名:胆草、草龙胆、山龙胆,拉丁文名:Gentiana scabra Bunge. 龙胆科、龙胆属多年生草本,根茎平卧或直立,具多数粗壮、略肉质的须根。枝单生,直立,黄绿色或紫红色,中空,近圆形,具条棱,棱上具乳突,稀光滑。枝下部叶膜质,淡紫红色,鳞片形,先端分离,中部以下连合成筒状抱茎 产内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、贵州,陕西、四川、湖北、湖南、安徽、江苏、浙江、福建、广东、广西。生于山坡草地、路边、河滩、灌丛中、林缘及林下、草甸,海拔400-1700米。在苏联、朝鲜、日本也有分布。

  • 【原创大赛】【第五届原创】HPLC法测定疏肝片中的龙胆苦苷含量

    HPLC法测定疏肝片中的龙胆苦苷含量摘要: 目的 建立测定感愈胶囊中绿原酸含量。方法 色谱柱为Krom asilC18柱( 4. 6 mm @ 250 mm, 5 Lm ) ; 流动相:甲醇-水( 23:77); 流速1. 0 m l# m in- 1; 柱温: 40e ; 检测波长326 nm。结果 绿原酸进样量在0. 0414~ 0. 828 Lg 范围内线性关系良好( r= 1. 0000, n= 7), 平均加样回收率为99. 01%, RSD为1. 40% ( n = 6)。结论 该方法简便快速, 结果准确, 可用于疏肝片中龙胆苦苷含量的测定。关键词: 舒肝片; 液相色谱法; 龙胆苦苷1.仪器:岛津LC-20AT高效液相色谱仪配SPD-M20A二极管阵列检测器,瑞士梅特勒AP205天平(0.01mg)超声波清洗仪(江苏昆山超声仪器厂)色谱柱:Kromasil C18 (5μm×250×4.6mm)流动相:甲醇:水=30:70柱温:302 溶液的制备 2.1 对照品溶液的制备:精密称取龙胆苦苷对照品 9.86 mg、 7.37 mg,分别置100 ml、50ml量瓶中,加30%乙醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取2 ml、 1 ml,分制成每1ml含19.72 ug、 14.74 ug的溶液,即得。取本品,研细,取 约0.8克,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率33KHZ)超声处理 20 分钟,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。3 测定法:照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录附录Ⅵ D),分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。4. 结果样1 1.9%样2 2.3%样3 2.2%样4 1.8%样5 2.1%5.讨论:1.本文建立了疏肝片中的龙胆苦苷的高效液相测定法的研究。2.本实验过程中比较了不同流动相,最终确定了甲醇和水,此种流动相对物质的分离度较好,基线较平稳。3.为进一步研究奠定了相关基础。

  • 26.10 龙胆质量评价方法研究

    26.10 龙胆质量评价方法研究

    【作者】:魏岚【摘要】:本研究以常用中药材龙胆为研究对象,收集了40个不同品种、不同产地的龙胆样品,对其进行质量评价方法研究。 建立了反相高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷的含量,采用Diamonsil ODS色谱柱,以乙腈-水-醋酸(10∶80∶1,v/v)为流动相,对羟基苯甲酸为内标,于270nm处检测。龙胆苦苷的线性范围为12.8~153.6μg·mL~(-1)(r=0.9999),平均回收率为99.1%(RSD 0.4%)。建立了同时测定龙胆中当药苦苷和当药苷含量的反相高效液相色谱法,以Diamonsil ODS为色谱柱,乙腈-水-醋酸(10∶105∶1,v/v)为流动相,于240nm处检测。当药苦苷和当药苷的线性范围分别为4.0~64μg·mL~(-1)(r=0.9999),3.2~96μg·mL~(-1)(r=0.9998);平均回收率分别为97.7%(RSD 1.4%),97.9%(RSD 1.2%)。结果表明,上述建立的测定方法简便可靠、重复性好,为龙胆的质量评价提供了定量依据。 采用反相高效液相色谱法,对龙胆的甲醇提取物进行了色谱指纹图谱研究。实现了包括龙胆苦苷、当药苦苷和当...【作者单位】:沈阳药科大学【关键词】:龙胆; 高效液相色谱法; 色谱指纹图谱; 化学模式识别; 质量评价;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207311357_380877_1838299_3.jpg

  • 龙胆泻肝散黄芩甘,龙胆苦干不合格的原因,。

    做龙胆泻肝散的时候,龙胆苦干和黄芩甘不合格,完全是按药典做的,想问一下,导致不合格的原因!是不是由于样品没有处理好[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903052314281402_1665_3511113_3.jpeg[/img]

  • 68.3 高效液相色谱法测定龙胆泻肝汤颗粒中龙胆苦苷含量

    68.3 高效液相色谱法测定龙胆泻肝汤颗粒中龙胆苦苷含量

    作者】 许仲; 叶胜体; 张妥; 【Author】 Xu Zhong1,Ye Shengti1,Zhang Tuo2(1.Yangjiang Municipal Institute for Drug Control,Yangjiang,Guangdong,China 529500; 2.Yangjiang Municipal Hospital of Chinese Medicine,Yangjiang,Guangdong,China 529500)【机构】 广东省阳江市药品检验所; 广东省阳江市中医医院;【摘要】 目的建立测定龙胆泻肝汤颗粒中龙胆苦苷含量的高效液相色谱法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(21∶79)为流动相,检测波长为270 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为40℃。结果龙胆苦苷进样量在20.42~61.26μg范围内与峰面积有良好的线性关系(r=0.996 9),平均回收率为98.17%,RSD为0.6%(n=6)。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于龙胆泻肝汤颗粒制剂的质量控制。 更多还原http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271646_386529_2379123_3.jpg

  • 溶剂效应消除器应用-龙胆中龙胆苦苷的分析(2020版药典)

    溶剂效应消除器应用-龙胆中龙胆苦苷的分析(2020版药典)

    自峰形前延抑制器发布以来,在许多用户的应用实践中发现了它的一些新能力,超出了最初的设计范围,它不仅有抑制峰形前延的作用,还有稳定保留时间,防止基线漂移,对传统手段无法解决的前延状况(样品已用流动相溶解,传统方案无法解决)仍然表现出改善峰形、提高柱效和分离度的奇效。针对新的情况,本公司对溶剂效应的产生原理进行了更深入的研究,并结合本产品的结构特点对其消除溶剂效应的机理进行了更新层次的探讨和解释,原有的名称“峰形前延抑制器”已不足以概括它的功能,因此更名为“溶剂效应消除器”,并对其硬件进行了升级,原有的“峰形前延抑制器YZQ-001”不再生产,取而代之的是新一代的溶剂效应消除器“Solvnt-Smoother Solvs-AB”,货号:Solvs-AB。以下是用伍丰 LC-100进行分析的应用图谱,2020版药典方法,中药龙胆中龙胆苦苷的分析。[img=,690,607]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106070833126994_5688_2568233_3.png!w690x607.jpg[/img]

  • 【原创大赛】【第五届原创】仪器与试药HPLC法同时测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷和栀子苷的含量

    摘要: 目的 建立复方龙胆泻肝丸中龙胆苦苷和栀子苷的含量测定方法。方法 液相色谱法。色谱柱:Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5µm);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(25:75);流速1.0ml/min;柱温:35℃;检测波长:283nm。结果: 龙胆苦苷在0.2403~1.1214μg 范围内呈线性关系(r=1.0000,n=6),平均加样回收率为98.08 % RSD为0.68 % (n=9)。结论 该方法操作简便,结果可靠,可用于复龙胆泻肝丸中龙胆苦苷和栀子苷的含量测定。关键词:高效液相色谱法;龙胆泻肝丸;龙胆苦苷 栀子苷1仪器与试药1.1仪器岛津LC-20AT高效液相色谱仪,SPD-M20A检测器, LCsolution色谱工作站, Metteler AB265S(0.01mg);Sartorius BS124S(0.1mg)1.2 试药 龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110721-201014);甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为纯化水。龙胆泻肝丸2 溶液的制备 2.1 对照品溶液的制备:精密称取龙胆苦苷对照品 10.15 mg、 5.35 mg,分别置25 ml、量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液S1和S2;精密称取栀子苷对照品 10.07 mg、 6.78 mg,分别置25 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液S3和S4;精密称取黄芩苷对照品 11.03 mg、 10.88 mg,分别置100 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;精密吸取对照品溶液S1、S3各 1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,制成每1ml含龙胆苦苷39.34 ug 和栀子苷40.28 ug的溶液;精密吸取对照品溶液S2 2 ml,S4 1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,制成每1ml含龙胆苦苷41.47 ug 和栀子苷27.12 ug的溶液,即得。2.2 供试品溶液的制备:取本品,研细,取约 0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入加入甲醇 25 ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率33KHZ)超声处理 20 分钟,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。4 测定法:照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录附录Ⅵ D),分别精密吸取对照品溶液 10 μl与供试品溶液 5 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

  • 40.7 灵龙感冒胶囊中龙胆苦苷的含量测定

    40.7 灵龙感冒胶囊中龙胆苦苷的含量测定

    作者:付成国; 朱靖平; 白冰; 高红梅; 朱丽佳; 付强; 张崇禧;(吉林修正药业新药开发有限公司; 哈尔滨化工四厂;)摘要:目的建立灵龙感冒胶囊中龙胆苦苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水(20︰80);检测波长:272 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃。结果龙胆苦苷在0.32~4.01μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.83%,RSD=0.34%(n=6)。结论本方法简便快捷、可靠性高、分离度较好,可作为灵龙感冒胶囊的质量控制方法。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061431_381896_1606903_3.jpg

  • 24.10 RP_HPLC梯度洗脱法测定儿童_号口服液中龙胆苦苷_盐酸巴马汀_盐酸小檗碱

    24.10 RP_HPLC梯度洗脱法测定儿童_号口服液中龙胆苦苷_盐酸巴马汀_盐酸小檗碱

    【作者】:申兰慧, 石 涛, 邹爱峰, 任金山, 张胜强【摘要】: 目的: 建立儿童Ò 号口服液( 黄柏、龙胆草、知母等) 中龙胆苦苷, 盐酸巴马汀及盐酸小檗碱高效液相色谱测定方法。方法: 以Diamonsil TM C18柱( 250mm @ 4. 6mm, 5Lm) 为色谱柱, 以乙腈- 磷酸- 三乙胺- 水为流动相, 检测波长为270nm, 流速为1mL#min- 1。结果: 龙胆苦苷, 盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的线性范围分别为72. 8~ 728Lg#mL- 1( r = 0. 9998) , 7. 55~75. 5Lg#mL- 1( r = 0. 9998) , 12. 45~ 124. 5Lg#mL- 1( r = 0. 9999) , 平均加样回收率( n = 6) 分别为98. 17% , 98. 78% ,98. 60% ; RSD 分别为1. 60% , 1. 35% , 1. 25% 。结论: 该方法准确, 重复性好, 专属性好, 适合于儿童Ò 号的质量控制。【作者单位】: 中国药科大学药物分析教研室, 东南大学药剂科, 南京威尔曼药物研究所【关键词】: RP- HPL C; 梯度洗脱; 龙胆苦苷; 盐酸巴马汀; 盐酸小檗碱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207311305_380827_1838299_3.jpg

  • 【求助】对于龙胆苦苷HPLC的问题?

    第一次在这里发帖,请求各位高手予以帮助我在做龙胆苦苷的含测,在进标准品时出现这样的情况,不知原因为何故?[em06] [img]http://www.sxzy.com/bbs/attachments/forumid_25/z9Q1DJtbA==_kQ7I9pKzcyAw.jpg[/img][img]http://www.sxzy.com/bbs/attachments/forumid_25/z9Q1DEwbWw=_1UA9BJqSOGVO.jpg[/img]

  • 45.8 HPLC测定决明子中红镰霉素龙胆二糖苷的含量

    45.8 HPLC测定决明子中红镰霉素龙胆二糖苷的含量

    【作者中文名】唐力英; 王祝举; 邬秋萍; 赫炎; 黄璐琦;【作者英文名】TANG Li-ying1; WANG Zhu-ju1; WU Qiu-ping2; HE Yan3; HUANG Lu-qi1(1.Institute of Chinese Materia Medica; China Academy of Chinese Medical Sciences; Beijing 100700; China; 2.Jiang Xi University of Traditional Chinese Medicine; Nanchang 330004; 3.Institute of Basic Clinical Medicine; China);【作者单位】中国中医科学院中药研究所; 江西中医学院; 中国中医科学院中医临床基础研究所; 中国中医科学院中药研究所 北京; 江西南昌;【摘要】目的:建立决明子中红镰霉素龙胆二糖苷的含量测定方法。方法:采用HPLC,Diamonsil C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-四氢呋喃-1%冰醋酸(18∶3∶79),流速1 mL.min-1,柱温30℃,检测波长278nm。结果:红镰霉素龙胆二糖苷在0.1~0.5μg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率101.1%(n=5),RSD2.2%。结论:本法快速、灵敏、准确、可靠、重复性好,可用于中药决明子药材的质量控制。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208131715_383578_2379123_3.jpg

  • 【金秋计划】龙胆苦苷靶向PAQR3激活PI3K/AKT通路改善糖脂代谢紊乱

    [font=宋体]【金秋计划】[/font]龙胆苦苷(Gentiopicroside,GPS)是条叶龙胆的主要活性物质,具有广泛的药理活性,包括抗炎、抗氧化等。最近发现龙胆苦苷能有效改善糖尿病小鼠的周围神经病变和视网膜病。此外,作者之前的研究发现GPS显著改善血糖水平并有效抑制炎症以减轻肾脏微血管病变。然而,GPS是否以及如何改善高脂饮食(HFD)诱导的糖脂代谢仍然很大程度上是未知的。2022年6月,中山大学药学院黄河清/刘培庆教授联合广州中医药大学药学院刘中秋团队在Acta Pharm Sin B(IF=14.5)发表题为“Gentiopicroside targets PAQR3 to activate the PI3K/AKT signaling pathway and ameliorate disordered glucose and lipid metabolism”的文章,发现龙胆苦苷(GPS)有效改善肝脏胰岛素抵抗,改善糖脂代谢紊乱。从机制上讲,GPS促进PAQR3和DDB2的互作,促进DDB2介导的PAQR3泛素降解。此外,GPS直接与PAQR3的N端结合,并在空间上抑制PAQR3与P110 α的互作,从而维持PI3K/AKT信号通路。 1、GPS激活PI3K/AKT通路减少脂质合成并增加葡萄糖利用率棕榈酸(PA)可用于诱导肝细胞和骨骼细胞中的胰岛素抵抗。作者发现GPS能增加PA处理的HepG2细胞中葡萄糖利用率,起到与二甲双胍相似的效果。此外,GPS显著降低HepG2细胞中的TG和TC含量,减少脂滴沉积并增加了糖原合成。考虑到PI3K/AKT轴激活对调节葡萄糖和脂质代谢很重要,作者检测发现,PA刺激显著抑制PI3K活性并减少了PIP3的产生,而GPS共处理可恢复PI3K活性并促进PIP3的产生。此外,FOXO1和SREBP-1c是调控胰岛素信号通路中GCK、G6Pase、PEPCK和LDLR等的主要转录因子,GPS有效阻断了PA诱导的HepG2细胞中的FOXO1和SREBP-1c核易位。图片图1 GPS激活PI3K/AKT通路减少脂质合成并增加葡萄糖利用率2、GPS体外抑制PAQR3与P110α互作促进PI3K/AKT通路激活作者使用PI3K的特异性抑制剂LY294002进一步研究GPS 在 PI3K/AKT 轴上的作用,发现在PA处理的HepG2细胞中,与LY294002的预孵育显著逆转了GPS共处理诱导的PI3K、AKT和GSK3 β磷酸化增加。有研究报道PAQR3竞争性地拴住了高尔基体中PI3K的催化亚基(p110α),以抑制 p110α–p85α二聚体的形成,从而负向调节胰岛素信号通路。作者发现GPS处理显著降低了PA处理细胞中高尔基体中PAQR3和p110α的分布。co-IP结果证实GPS处理可逆转PA刺激导致的PAQR3和p110α互作的增加。同时,GPS处理显著增加p110α与p85α互作,表明GPS处理促进了PI3K二聚体的形成。此外,PAQR3过表达显著逆转了GPS处理对减少高尔基体中PAQR3和P110α分布的影响,消除了GPS共处理诱导的PI3K二聚体(P110α–P85α)的形成,也逆转了GPS诱导的PI3K/AKT轴的激活,而PAQR3敲低足以恢复PI3K/AKT轴并改善糖脂代谢标志物表达,而与GPS联合处理没有产生额外的效果。图片图2 GPS抑制PAQR3与P110α互作促进PI3K/AKT通路激活3、GPS通过DDB2介导的PAQR3体外泛素化抑制PAQR3蛋白表达作者接着研究了GPS负调控PAQR3蛋白水平的机制,发现GPS不影响PA处理的HepG2细胞中PAQR3的mRNA水平,半衰期分析显示GPS处理组PAQR3周转率快于未处理组,表明GPS在翻译后水平上调控PAQR3的表达。据报道PAQR3可能被泛素-蛋白酶体途径降解。作者发现在蛋白合成抑制剂CHX存在下,用蛋白酶体抑制剂MG132处理可以阻断HepG2细胞中PAQR3蛋白的降解,而溶酶体抑制剂氯喹CQ不能阻止PAQR3降解,结果阐明了PAQR3降解是由蛋白酶体介导的。此外,作者发现PAQR3可以被多泛素化。DDB2是一种底物受体模块,可决定靶向底物对泛素化的特异性,最近的研究表明,DDB2是PAQR3的转录后调节因子,可促进泛素介导的PAQR3降解。作者通过过表达DDB2验证了DDB2在促进PAQR3泛素化以恢复PI3K激活中的作用。PA刺激下DDB2下调,PAQR3上调,GPS协同处理显著增加DDB2表达,PAQR3表达降低。此外,PA处理细胞中DDB2和PAQR3的共定位降低,而GPS共处理显著增加了DDB2和PAQR3的共定位。Co-IP结果验证了GPS可促进PA处理细胞中DDB2和PAQR3的互作。此外,GPS诱导的PAQR3泛素化在很大程度上受到DDB2-siRNA的抑制。同时,DDB2敲低损害了GPS对促进PA处理的HepG2细胞中P110α和P85α的互作,损害了GPS诱导的PI3K磷酸化。这些结果表明,GPS通过DDB2介导的PAQR3泛素降解抑制PAQR3的表达。图片图3 GPS通过DDB2介导的PAQR3体外泛素化抑制PAQR3蛋白表达4、GPS直接靶向结合PAQR3Co-IP结果表明GPS可抑制PAQR3和P110α的互作,与PAQR3表达的抑制无关,而这种作用是否可归因于GPS和PAQR3的直接结合尚不清楚。作者利用重组PAQR3蛋白通过SPR、MST和TSA证实了GPS与PAQR3蛋白直接互作。分子对接确定GPS复合物与PAQR3的Leu40、Asp42、Glu69、Tyr125和Ser129形成7个关键氢键,以稳定结合构象,这对GPS的抑制活性很重要。蛋白质配体相互作用指纹图谱(PLIF)计算表明,GPS和Glu69之间存在两种强氢键相互作用和强表面接触,表明Glu69可能是GPS的重要结合位点。利用定点诱变构建PAQR3的PAQR3-S129T/Y125F/E69D/D42E/L40G和PAQR3-E69Del突变体,并通过CETSA和SPR发现Glu69的缺失影响GPS和PAQR3结合,表明 Glu69 可能是GPS的重要结合位点。图片图4 GPS直接结合PAQR35、GPS激活糖尿病小鼠的PI3K / AKT信号通路改善糖脂代谢紊乱采用链脲佐菌素(STZ)和高脂饮食(HFD)诱导的糖尿病小鼠确认GPS在体内的效果,发现GPS给药降低了空腹血糖(FBG)水平和糖化血清蛋白(GSP),降低了肝脏重量/体重(LW/BW)的比值,增加了肝糖原的含量,降低了肝组织中的总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量。重要的是,GPS在改善葡萄糖和脂质代谢方面与二甲双胍相当。作者进一步观察了糖尿病小鼠肝脏的形态,发现GPS或二甲双胍均明显改善糖尿病小鼠肝组织病理性肝损伤和脂质沉积,增加了LDLR和GCK在肝脏中的分布,恢复STZ-HFD诱导的受损AKT和GSK3β信号转导,改善了肝脏中糖脂代谢标志物的表达,有效阻断FOXO1和SREBP-1c在肝细胞核中的积累。图片图5 GPS激活糖尿病小鼠的PI3K / AKT通路改善糖脂代谢紊乱6、GPS抑制PAQR3在体内的表达促进PI3K的激活体外结果表明GPS诱导的PAQR3抑制介导了PAQR3在胰岛素抵抗中的保护作用,作者进一步在糖尿病小鼠中检测发现糖尿病小鼠肝组织中PAQR3表达上调,PI3K磷酸化下调,GPS治疗逆转该现象。此外,提取肝组织的高尔基体,Western blot显示GPS降低了高尔基体中PAQR3和p110α的表达,降低 PAQR3 和p110α的共定位。Co-IP结果进一步证实,在糖尿病小鼠中,GPS处理后PAQR3与p110α之间增加的互作受到强烈抑制,P110α与P85α之间的相互作用增加,这与体外结果一致。图片图6 GPS抑制PAQR3在体内的表达促进PI3K的激活7、GPS 促进体内DDB2和 PAQR3的互作来促进PAQR3泛素化降解与细胞实验一致,GPS显示对糖尿病小鼠Paqr3的mRNA水平没有影响。此外,PCR结果表明GPS显著提高了糖尿病小鼠Ddb2的mRNA水平,这可能有助于DDB2蛋白表达的上调。免疫荧光显示,GPS处理的肝组织中DDB2和PAQR3的共定位显著增强。Co-IP结果进一步证实,DDB2和PAQR3的结合在糖尿病小鼠中减少,而GPS处理促进了DDB2和PAQR3在糖尿病小鼠肝组织中的互作。此外,肝组织中PAQR3的泛素化水平在糖尿病期间下调,伴随着PAQR3 蛋白的上调。结果表明,GPS增加了DDB2的表达,这可能促进了PAQR3的泛素化和降解。综上所述,GPS通过DDB2介导的PAQR3泛素介导的降解抑制糖尿病小鼠PAQR3的表达。图片图7 GPS促进体内DDB2和 PAQR3的互作来促进PAQR3泛素化降解总结该研究发现龙胆苦苷在棕榈酸(PA)处理的HepG2细胞中减少脂质合成并增加葡萄糖利用,此外,龙胆苦苷改善了链脲佐菌素(STZ)治疗的高脂饮食(HFD)诱导的糖尿病小鼠的糖脂代谢。机制上,龙胆苦苷通过促进DDB2介导的PAQR3泛素化降解来促进PI3K/AKT轴的激活。此外, SPR、MST和TSA的结果表明,GPS直接与PAQR3结合。分子对接和CETSA结果显示GPS直接与PAQR3 NH的氨基酸结合,并在空间上抑制PAQR3与PI3K催化亚基(P110α)的互作以恢复PI3K/AKT信号通路。总之,研究确定了抑制PAQR3表达并直接靶向PAQR3以恢复胰岛素信号通路的天然产物龙胆苦苷,作为治疗糖尿病的潜在候选药物。

  • 桐山漏斗介绍

    桐山漏斗:桐山(KIRIYAMA)是日本一个非常有名的玻璃仪器厂家。与布氏漏斗的作用一样,属于高精细品。桐山漏斗有个优点:通常,布氏漏斗过滤后的溶液作弃去处理。因为布氏漏斗的瓶子接触了各种各样的滤液,不免被污染,继而污染新的滤液。而桐山漏斗可以更换干净的盛接容器,通常为各种烧杯。这时若滤液还有其它用处,就不用担心滤液被以前的滤液给污染了。

  • 2015中国药典检测方案有奖问答01.25(已完结)——精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测

    2015中国药典检测方案有奖问答01.25(已完结)——精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测

    问题:精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测使用了哪几款液相色谱柱?答案:Platisil ODS 、Diamonsil C18、Leapsil C18 【活动奖励】幸运奖(2钻石币):抽奖软件,当天随机抽取3个回答正确的版友ID号(最后一个ID号,截止至下午3:00),每人奖励2个钻石币吕梁山(ID:shih20j07)mengzhaocheng(ID:mengzhaocheng)梧桐(ID:mengzhou)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251513_583448_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251514_583449_1610895_3.png积分奖励:所有回答正确的版友奖励10个积分(幸运奖获得者除外)。【注意事项】同样的答案,每人只能发一次PS:该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”,回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容,无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除,即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测样品制备制备方法1. 对照品:取芍药苷对照品、丹酚酸B对照品、丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL各含芍药苷80 μg、丹酚酸B 0.16 mg、丹参酮ⅡA10 μg的混合溶液,即得。2. 供试品:取本品10片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.5 g,精密称定,精密加入75%甲醇25 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率400 W,频率40 kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。分析条件色谱柱Platisil ODS 150 x 4.6 mm,5 μm (Cat#:99501)流动相A:乙腈 B:0.1%磷酸溶液 梯度流速1.0 mL/min柱温30 ℃检测器芍药苷、丹酚酸B:UV 230 nm,丹参酮ⅡA:UV 270 nm 进样量5 μL 色谱图对照品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251002_583419_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 12.068 1598880 89096 10350.125 0.958 -- 2 59.100 863860 30575 99529.191 0.971 76.864 *药典要求理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251002_583420_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数 N USP拖尾因子 分离度 1 92.337 372136 25387 865104.545 0.974 -- 供试品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251003_583421_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 [a

  • 【原创大赛】HPLC法同时测定龙蛋泻肝丸中三种活性成分含量

    龙胆泻肝丸含龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、车前子、生地、当归、柴胡、甘草诸药。方中龙胆草上泻肝胆实火,下清下焦湿热,为君药。黄芩、栀子苦寒,有清热燥湿、导热下行之效,为臣药。泽泻、木通、车前子清热利湿,可使湿热从小便而解。生地、当归有滋阴养血之功。柴胡有疏肝解郁和引经之用。甘草调和诸药。龙胆泻肝丸泻肝而不伤肝,利湿而不伤阴,其配伍相辅相成,疗效为医家和患者所称道。该药除用于高血压、急性眼结膜炎、急性中耳炎、急性胆囊炎、急性盆腔炎、尿路感染、外生殖器感染等症的治疗以外,现在也常用于乙型病毒性肝炎及其他一些慢性病的治疗。本文建立了龙胆泻肝丸中三种有效成分含量测定的方法,以期为龙胆泻肝丸质量控制提供依据。1 仪器与试药1.1 仪器岛津LC-20AT高效液相色谱仪,SPD-M20A检测器, LCsolution色谱工作站, Metteler AB265S(0.01mg);Sartorius BS124S(0.1mg)超声处理仪(江苏昆山超声仪器厂)1.2 试药 龙胆苦苷、栀子苷、黄芩苷苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号111640-200503);甲醇为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯化水。 龙胆泻肝丸市场购买)2 实验方法与结果2.1 色谱条件与图谱色谱柱: Kromasil C18柱(4.6mmx250mm,5um);检测波长:240nm;流速:1.0ml.min-1;流动相:甲醇-0.2%磷酸酸;柱温:35℃。 按以下梯度进行洗脱。梯度洗脱时间(分钟)甲醇(A%)0.2%H3PO4(B%)0~25208025~3020~4380~5730~504357 2.2 溶液制备2.2.1对照品溶液 精密称取龙胆苦苷对照品 10.15 mg置25 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液S1;精密称取栀子苷对照品 10.07 mg置25 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液S2;精密称取黄芩苷对照品[u

  • 【春思】五一活动二——梧桐山半日游

    【春思】五一活动二——梧桐山半日游

    五一的第一天,我们去了大梅沙。因为那天大家玩得有点过,第二天起来的比较晚,差不多都是10点多了,一个个的才慢条斯理的出来。我因为要去她姐家接她,所以比他们都早了几个钟头。等他们吃完早饭(其实不知道是早饭,还是中饭),天气有些变化,下起了中雨,不过还好,出来前大家都备了伞。 按照原计划行动,上次爬这座山,是公司组织的,我们直接从山的正门上去的,这次,我们没有走正门,走了莲塘的侧门,直接上可到小梧桐。这段路全是台阶式的,所以虽然很陡峭,但是相比之下路程就少了很多,爬起来当然是吃力点咯。我一个人背着包,冲到前面十几米高,对这下面的兄弟姐妹:“加油,没多高了!”也算是给他们打气吧,我就怕她们中有人中途而废,我就郁闷了,我做事不喜欢中途废掉,来了不爬上去多没意思哦![img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903071728_137218_1614854_3.jpg[/img] 老天好像开玩笑似的,等我们爬累了,到了小梧桐那个亭子时候,居然停了,还出点阳光,山腰雾气顿生,笼罩了整个山头。头发上的雾水,脸上的汗水,夹杂着往下流,有时候眼睛都不敢睁大,汗水流进去的感觉超难受。到那个亭子,就离好汉坡不远咯,很快就可以到山顶啦,可以先休息下,停下脚步。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903071742_137219_1614854_3.jpg[/img] 就这样,和这群人走走停停的,也差不多走了2个钟头,到了好汉坡,带上来的的水也喝得差不多了,零食也在中间休息的时候吃个精光。确实,在雨天爬着座山(深圳第一高的山),是有些危险,所以要比较小心的。越是担心这些,越是慢了,人也快很累。刚好好汉坡那里有东西可以买,来了2个卤鸡蛋,再加一碗酸辣粉,凑合凑合,给她来了碗酸辣粉,我们吃完了,那帮家伙才摸上来,我们只好看着她们吃了,闲不下来,偷偷的给她们拍了一张[em0905][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903071750_137220_1614854_3.jpg[/img] 吃完了,大家继续前进。好汉坡,不爬上去叫啥子好汉? 即使再累,也得拖着双腿往上爬!这样的天气,我们这样一帮人,就一个信念,来了就要上。不放弃,不抛弃。 其实到了好汉坡,至少已经走了全称的2/3,上面就没多少路可以走了。忍一忍,挨一挨,就过去了的。有时候就是这样,越是想着痛,你的步子就越是迈不开。痛就痛吧,如果后面有狼或者虎豹之类,终点有猎人等着,我看你不跑,呵呵…… 终究我们还是上来了,做个留恋吧,免得比人说我没有爬上来,呵呵,其实这已经是我第三次爬这座山了,这次爬山,是最刺激的,最有挑战性的!走的路比较堵,比较滑,还要不时的被人拖着走~[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903071800_137221_1614854_3.jpg[/img] 山顶的感觉是:身体是冷的,心是热的;风比较无情,人有情! 这次爬山,宣告完美结束! 虽然下山的故事,更多,大家猜吧……

  • 【金秋计划】基于ISSR和SCoT分子标记的丹参遗传多样性评价及生境因子对丹酚酸和丹参酮的影响

    优良的遗传基因是决定优质药用植物形成的基础和内在因素[1]。DNA分子标记可以从居群及分子的水平上来阐明优质药用植物产生的生物学本质[2],已有大量报道表明基于DNA分子标记的遗传多样性分析揭示了厚朴、肉苁蓉、甘草等道地药材独特药材品质是由当地独特的环境与药材基因型相互作用所产生的[3-6]。目前,已开发出包括扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,ALFP)、简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)、相关序列扩增多态性(sequence related amplified polymorphism,SRAP)、简单重复序列间区(inter-simple sequence repeat,ISSR)、目标起始密码子多态性(start codon targeted polymorphism,SCoT)、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)在内的大量分子标记可用于药用植物研究[7-9],其中,ISSR和SCoT由于具有引物通用性、随机性、设计简单、重复性好等优势而更加适用于药用植物遗传多样性及亲缘关系分析[10, 11]。 《神农本草经》中提出“土地所出,真伪新陈,并各有法”。特定的大气、水文、土壤等环境条件造就了不同的药材特性[12]。因此,为了增加药用植物中有效成分的含量,提高药材的品质,需要探索分析药用植物的品质与赖以生存的环境之间的联系[13]。例如,年平均气温、年日照时数、pH、Sr、Ca、S和交换性K等生态因子都是影响远志有效成分和生物活性的主要因素[14]。日照时数、相对湿度是影响黄芪中黄芪甲苷和黄芪多糖及黄酮类成分的关键因子[15]。除遗传因素和环境因素的影响外,药材的栽培、采收技术和产地的初加工等人文因素都会对药用植物的次生代谢产物有影响[16],近年来,随着野生资源的逐渐减少。栽培的中药材已经成为了常用中药的主要来源。大多药材栽培产区的药农在长期栽培过程中结合实践,积累了丰富的种植生产经验,有效的控制了药材的质量[17-18]。 丹参Salvia miltiorrhiza Bge.隶属唇形科(Labiatae)鼠尾草属Salvia L.,为多年生草本植物[19],以其干燥根及根茎入药,用于治疗胸痹心痛、月经不调、疮瘍肿痛等病症[20]。丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮等是丹参中主要的二萜类有效成分[21-22]。迷迭香酸、丹酚酸A、丹酚酸B等则是主要的酚酸类成分[23-24]。现代药理学认为,丹参酮类和丹酚酸类化合物(尤其是丹酚酸B)均具有较强的抗肿瘤、抗菌消炎、心脏保护等多种药理作用,临床上广泛应用于心脑血管疾病的治疗[25-26]。丹参一般栽种在海拔较低的丘陵地带,野生丹参常见于草丛、林下、山坡及溪谷旁[27]。其对环境的适应性较强,广泛的分布于我国华东、华中、华北、华南等地区,西北、西南的部分省区也有分布。四川、山东、陕西、河南是丹参栽培的传统道地产区,其中,四川中江所产丹参在各产区丹参中品质较佳,一直作为中药丹参出口的优质道地药材,大量出口于中国周边东南亚国家。 近年以来,由于丹参长期的只种不选导致栽培品种退化,质量下降,使得道地性丧失。另一方面,由于过度采挖,导致野生资源遭到破坏,而临床需求量不断增大使得丹参资源日益紧缺、丹参的药材市场混杂,药材质量和数量难以保证,严重影响其疗效,制约其产业发展。因此,本研究以采自四川中江、陕西商州(镇安、山阳)、山东蒙阴(临朐、济阳、新泰、平邑)、河南伊川、山西曲沃等丹参主要栽培区的丹参样品以及栽培区土壤气候为研究对象,利用ISSR和SCoT标记对不同产区丹参进行遗传多样性评价,并结合有效成分、生态环境的分析,明确影响丹参品质的主导因子以及丹参种植的适宜环境,以期为丹参的高产稳产、优质及后续丹参扩大种植的产区选择提供理论依据。 1 仪器与材料 T100 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪(美国Bio-Rad公司)、GelDoc XR凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司)、DYY-7C型电泳仪(北京六一生物科技有限公司)、BCD-532WDPT型超低温冰箱(青岛海尔股份有限公司)、LC-20A型高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](日本岛津公司)、CR22N型高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)、Thermo Scientific? iCAP? PRO XP ICP-OES(美国Thermo Fisher公司)等。本研究共采集22个丹参S. miltiorrhiza Bge.居群,每个居群随机选取3株植株分别取适量幼嫩叶片,用于丹参遗传关系的分析。选择部分产地丹参为代表测定丹参有效成分,同时采集丹参根际土壤,材料采集信息如表1、2所示。 2 方法 2.1 ISSR和SCoT分子标记分析 使用植物DNA提取试剂盒(浙江兰博生物科技有限公司)提取四川、山东、陕西、河南、山西5个省22个居群66份材料的DNA。由擎科生物技术有限公司合成UBC加拿大哥伦比亚大学设计的ISSR引物和Collard & Mackill开发的36条SCoT引物[28-29]。2种分子标记的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应体系均为10 μL 2×Taq [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Master MIX Ⅱ(北京天根生物科技有限公司)、引物1 μL、模版DNA 1 μL、ddH2O补齐至总体积20 μL。ISSR标记的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增步骤为:94 ℃预变性10 min,39个循环下94 ℃变性30 s、48~59 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min,最后再设置72 ℃继续延伸10 min。SCoT标记的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增步骤为:94 ℃预变性5 min,36个循环下94 ℃变性30 s、52.9~59.7 ℃退火90 s、72 ℃延伸1 min,最后72 ℃继续延伸10 min。 2.2 丹酚酸和丹参酮类成分测定 按照《中国药典》2020年版[20]所规定的提取方法及色谱条件,提取不同居群丹参中的丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹酚酸B,并利用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法(HPLC)进行含量测定。 2.3 气象指标调查 在中国气象数据网(http://data.cma.cn)上查询极大风速、最低气压、最高气压、最高温度、平均气温、平均最高气温、平均气压、平均水气压、平均2 min风速、平均相对湿度、日降水量≥0.1 mm日数、日照时数、最大风速、最大日降水量和最小相对湿度等15个气象指标。 2.4 土壤理化检测 参照《土壤分析技术规范》(第二版)[30]中土壤样品的采集、处理与贮存,采用五点取样法,收集丹参种植土壤,混合均匀,自然风干,过筛备用。并参照其中方法测定土壤有机质(油浴加热重铬酸钾氧化-容量法)、颗粒组成(比重计法)、阳离子交换量(乙酸钙法)、全N(凯氏蒸馏法)、全P(氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法)、全K([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度法)、水解N(碱解扩散法)、有效P(碳酸氢钠法)、速效K(火焰光度计测定法[31])、全量铜、锰、锌、钠、钙、镁、硼、铝(电感耦合等离子体原子发射光谱法)。 2.5 数据处理与分析 利用Excel 2019、SPSS 19.0进行数据的统计和分析,本研究所有数据均保证3个生物重复和3个技术重复。对于扩增产物的电泳结果,有条带的记为“1”,无条带的记为“0”,通过Excel 2019统计扩增位点总数(total number of amplification bits,TB)和多态性位点数(number of polymorphic bits,PB)。采用非加权组算术平均法(UPGMA)进行聚类分析。使用POPGENE 1.32分析得到的存在/不存在数据矩阵,计算等位基因数(number of alleles,Na)、有效等位基因数(effective number of alleles,Ne)、Nei氏基因多样性指数(Nei’s gene diversity index,H)、香农信息指数(Shannon information index,I)、多态性百分比(percentage of polymorphic bits,PPB)等遗传参数。 3 结果与分析 3.1ISSR和SCoT标记多态性分析 本研究从42对ISSR引物中筛选出了14对扩增条带清晰,多态性好、重复性好的引物,用于后续ISSR多样性分析。共扩增出140条条带,其中有133条多态性条带,PPB达到95%,平均每对引物扩增得到10条条带。引物UBC 808、UBC 823、UBC 825、UBC 834扩增的条带数目最多,有12条,多态性条带也是12条,PPB为100%。引物UBC 841扩增得到的条带数目最少为7条,(图1-A,表3)。 利用POPGENE 1.32计算,得到Na、Ne、H和I。其中UBC 811的Ne、H、I各项指数最高,分别为1.68、0.37和0.53。UBC 825的Ne、H、I各项指数最低,分别为1.19、0.14和0.26。Na、Ne、H和I平均值分别为1.95、1.41、0.24和0.37(表3)。 从36对SCoT引物中共筛选出10个扩增条带清晰、重复性好的引物,用于扩增22个?丹参居群(66个样本)的DNA。共扩增出97条条带,其中93条为多态性条带,平均多态性率为95.88%(图1-B,表4)。SCOT 28引物的扩增条带数最低为7条,多态性条带也是7条,PPB为100%。SCOT 3引物的扩增条数最高(14条),多态性率为100%,表明SCoT引物也具有较高的多态性和信息量。SCoT 28的Ne、H、I各项指数最高,分别为1.70、0.40和0.58。SCoT 14的Ne、H、I各项指数最低,分别为1.33、0.19和0.31。Na、Ne、H和I平均值分别为1.96、1.51、0.30和0.45(表4)。 3.2 不同居群丹参遗传多样性分析 结合ISSR和SCoT标记计算不同居群丹参的遗传多样性参数,Na范围1.64~1.79,平均值为1.71,Ne为1.34~1.43,平均值为1.38。H为0.21~0.26,平均值为0.23,I为0.31~0.37,平均值为0.35。其中,山东产区各居群的杂合度较高,遗传多样性较为丰富,四川中江产区杂合度较低,遗传多样性较低,稳定性较强(表5)。 3.3 不同丹参居群间遗传距离、PCA及聚类分析 遗传距离是用来衡量居群之间亲缘关系的重要参数,遗传距离越小,代表居群间的亲缘关系越近。结合ISSR和SCoT标记,计算了居群间的遗传距离,如图2-A所示,方格颜色越蓝代表2个居群间的遗传距离越近,越红则越远。来自四川中江的5个居群(SCZJ-1、SCZJ-2、SCZJ-3、SCZJ-4、SCZJ-5)互相之间表现出较近的遗传距离,而其他居群间的遗传距离较远。PCA分析和UPGMA聚类分析均表明SCZJ-1、SCZJ-2、SCZJ-3、SCZJ-4、SCZJ-5聚到了一类,而山东产区的丹参居群混杂的聚到了河南、陕西产区的类群中(图2-B、C)。总体说明四川中江各居群间的遗传稳定性较强,亲缘关系较近,而山东各居群的遗传变异性较大,亲缘关系混杂。 3.4 不同居群丹参有效成分含量测定 测定了不同产区丹参中丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和总丹参酮的含量。色谱图见图3。各产地丹参的丹酚酸B含量均达到《中国药典》2020年版要求,其中,四川中江(SCZJ)的丹酚酸B含量远高于药典规定的3%,并且显著高于其他产区栽培丹参。陕西野生丹参(SXZA-Y、SXSY-Y)也具有较高的丹酚酸B含量,具体结果见图4。除了山西曲沃(SXQW)丹参酮总量未达到《中国药典》要求外,其他产地均达到《中国药典》的0.25%。此外,2个陕西野生丹参(SXZA-Y、SXSY-Y)的总丹参酮含量均未达到《中国药典》要求,且明显低于各产区栽培丹参。 山东蒙阴(SDMY)的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ以及总丹参酮含量均显著高于其他产区,并且,SDMY和山东济南(SDJN)的丹参酮ⅡA含量显著高于其他产区。此外,SCZJ、山东临朐(SDLQ)、山东新泰(SDXT)和河南伊川(HNYC)等产区也具有较高的丹参酮ⅡA含量。总体而言,SCZJ富含丹酚酸B,山东产区丹参的丹参酮含量普遍较高,而SXQW的丹参酮类化合物和丹酚酸B均显著低于其他产区。 3.5 丹参产地气候资料收集与分析 丹参各产地间的多个气象因子均有明显差异,其中,平均相对湿度在51.02%~80.91%,日降水量≥0.1 mm的天数在66~123 d,这2个气候因子均以四川中江最高,陕西商州次之,山西曲沃最低。最大日降水量32.0~151.8 mm,年日照时数在1 084.4~2 363.4 h,其中,四川中江和陕西商州的日照时数明显低于其他几个产地。平均气温在13.37~17.77 ℃,陕西商州最低,四川中江最高。平均最高气温(19.68~22.33 ℃)也是四川中江为最高,陕西商州为最低。山东产区最高气压、最低气压、平均气压、日照时数均高于其他产区,但其日降水量≥0.1 mm日数低于其他产区。山西曲沃产区的降水量最少,相对湿度最低(表6)。 3.6 丹参种植土壤理化性质分析 11个不同的产地中有6个产地为壤质黏土,2个产地为砂质壤土,2个产地为黏壤土,1个产地为砂质黏壤土。丹参种植土壤多为壤质黏土,没有过砂和过黏的土壤(表7)。进一步对不同产地丹参种植土壤的pH、有机质含量、阳离子交换量进行测定,结果显示SXQW丹参种植土壤pH最高(8.37),SDMY丹参种植土壤pH最小(6.75),不同产区土壤pH值介于6.75~8.37栽培产区丹参种植土壤pH值呈中性和弱碱性,由此可见,丹参在中性和微碱性的土壤中都可生长(图5-A)。丹参种植土壤中有机质含量以SDXT最高,为28.17 g/kg;以SXZA-Y最低,为7.15 g/kg,除了SDMY和SXZA-Y偏低外,有机质含量大多为10~20 g/kg(图5-B)。土壤阳离子交换量是衡量土壤肥力的指标和合理施肥的重要依据,本次研究结果表明不同采集地丹参种植土壤阳离子交换量均有显著性差异(P<0.05)。其中SXSY-Y土壤阳离子交换量最高,为20.482 cmol(+)/kg。除SDXT和SDPY 2个产地含量较低外,其他几个产地丹参种植土壤阳离子交换量均在10~20 cmol(+)/kg(图5-C)。 3.7 不同产地丹参土壤中矿质元素分析 通过对丹参种植土壤速效N、P、K的研究发现,不同产地丹参种植土壤碱解N含量差别较大,含量在3.80~66.85 mg/kg,其中,SXQW土壤碱解N含量最低(3.80 mg/kg),SCZJ和SDMY 2个产地土壤碱解N含量较其他产地丰富。土壤速效P质量分数处于27.61~63.29 mg/kg,11份土壤样品速效P含量均较丰富。土壤速效K研究结果表明,SXQW土壤速效K量极高,达到420.95 mg/kg。不同产地全N量在1.00~4.97 g/kg不等,全P量在0.19~0.67 g/kg,全K量在9.27~25.46 g/kg(表8)。进一步对不同采集地丹参种植土壤中的微量元素进行测定,8种无机元素中Ca的含量最高,Cu的含量最低。各产地中Na、Ca、B和Mg元素的变化范围很大,这不仅与土壤的理化性质有关,而且与植物自生营养的吸收以及代谢产物的合成有关。道地产区SCZJ产地的丹参种植土壤中Al、Mn、Ca、Mg等无机元素含量明显低于其他大部分产地,B含量高于其他产地(表9)。 3.8 环境因子与丹参有效成分相关性 丹参药材中的有效成分与气象因子之间呈现出不同程度的相关性,风速、气压等与丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮呈显著(P<0.05)或极显著正相关(P<0.01)。日降水量≥0.1 mm日数与丹参酮Ⅰ含量呈显著负相关(P<0.05)。平均水气压、平均相对湿度、日降水量≥0.1 mm日数与丹酚酸B含量成显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)正相关,日照时数与丹酚酸B含量成显著负相关(P<0.05)(图6-A)。同时,将土壤理化指标及矿质元素含量与丹参有效成分进行相关性分析,发现隐丹参酮含量与土壤质地中<0.002 mm粒径含量显著性负相关(P<0.05),丹酚酸B含量与土壤有机质呈显著性负相关(P<0.05)(图6-B)。隐丹参酮含量与丹参种植土壤中的Cu、Mg元素含量呈极显著(P<0.01)正相关,丹酚酸类化合物中的丹酚酸B含量与碱解N(HN)含量呈极显著性正相关(P<0.01),与K、速效K(AK)含量呈显著(P<0.05)或极显著负相关(P<0.01)(图6-C)。 综上所述,风速、气压以及土壤中Cu、Mg元素含量是促进丹参酮类成分积累的主要环境因子,气压、湿度、降水量、以及土壤中碱解N含量主要促进了丹酚酸B含量的积累。同样的,过多的降水,土壤粒径过小也会抑制丹参酮的积累。日照过长、土壤中有机质含量或是钾离子含量过高则阻碍了丹酚酸B的积累。 3.9 遗传因子与环境因子、有效成分之间的相关性 平均水气压与Na、I之间呈显著负相关,平均相对湿度与Na显著负相关,与Ne和I极显著负相关。平均最高气温与H呈显著负相关,日降水量≥0.1 mm日数与Na和H显著负相关,与Ne和I极显著负相关。日照时数与Na、Ne和I极显著正相关,与H显著正相关(图7-A)。pH、阳离子交换量、有机质含量以及土壤粒径含量等指标与遗传因子之间均不具有显著相关性(图7-B)。土壤中的N与H呈显著正相关,而碱解氮(HN)与H呈显著负相关。Al与H显著正相关,Ca与Ne显著正相关,与H极显著正相关(图7-C)。I与丹参酮ⅡA含量显著正相关,丹参酮I与Na呈显著正相关,与Ne、H和I呈极显著正相关,I与隐丹参酮含量显著正相关,而丹酚酸B含量与H和I显著负相关(图7-D)。综上所述,水气压、湿度、气温、降水、日照等气候因子以及土壤中N、Al和Ca影响了丹参的遗传变异。不同居群丹参的遗传多样性越强可以促进丹参酮类成分的积累,而遗传稳定性越强则有助于丹酚酸B含量的积累。 4 讨论 ISSR和SCoT标记由于引物设计具有随机性和通用性的特点,在以往多种药用植物的研究中均表现出高的多态性[32-34]。本研究利用这2种标记对不同居群丹参遗传多样性进行分析,基于PPB、Na、Ne、H、I、Ht、Hs等指标发现ISSR和SCoT都具有丰富的多态性,说明了它们都是鉴别丹参亲缘关系的有力标记。结合ISSR和SCoT标记分析的不同居群丹参之间的遗传距离指数进行聚类分析,四川中江所有居群(SCZJ1~SCZJ5)单独聚到一类,在DNA水平和其他群体产生了较大的差异,是由于四川丹参花发育异常导致不结实,长期采取无性繁殖[35-36]。这种繁殖方式加速了四川丹参的地理隔离进程,阻碍了与其他产区丹参之间的基因交流。而四川丹参表现出的色朱味浓、皮细而肥壮、丹酚酸B含量高等独特的性状,与其在基因型上与其他产区丹参的差异密切相关。但是,长期单一的无性繁殖方式会导致其种性退化,因此,想要促进四川丹参产业的可持续性发展,应加强对四川丹参的品种选育和资源保护。 温春秀等利用AFLP对几个丹参居群的遗传分化情况进行了研究,结果显示山东居群丹参的遗传多样性最丰富[37]。本研究得到的分析结果与其一致,山东产区丹参居群分布在不同聚类组中,并且其遗传距离和地理分布没有直接的相关性,显示山东丹参遗传变异较大,这可能是由于山东丹参栽培主要靠种子繁殖,同时丹参在山东种植区域分布很广,人工选育和引种的手段也是导致其遗传变异大,种质资源混杂的原因之一[38]。所以后续应加强山东丹参种植过程中的种子种苗选育过程,从而来保证其种质的稳定。 药材道地性的形成往往是生态环境与基因型相互作用的结果,不同产地之间的气候类型存在一定差异,或许是造就不同产区丹参遗传变异以及质量差异的重要原因。在本研究中,风速、气压与丹参酮类成分含量呈显著正相关,降水量≥0.1 mm日数与丹参酮I含量呈显著负相关。可能是由于降水较少,植物易受到干旱胁迫,轻度的干旱胁迫能够促进丹参酮类成分的积累[39],且降水量≥0.1 mm日数与Na、Ne、H、I等遗传因子均显著负相关,而这些遗传因子与丹参酮类有效成分呈显著正相关,说明降水过多会制约丹参的遗传多样性,将不利于丹参酮类成分积累。但相对湿度不足的情况下,降水量过低则导致重度干旱,同时也会抑制有效成分的积累,这可能是山西产区有效成分偏低的原因。本研究还发现,水气压、相对湿度和日降水量≥0.1 mm日数与丹酚酸B含量呈显著正相关,日照时数与丹酚酸B含量呈显著负相关。已有研究表明,轻度的水分涝胁迫能显著提高丹酚酸B的含量,降低丹参酮的含量[40]。丹参是喜光植物,一定的日照时数有利于有机物的合成积累,但过长的日照时数则会引起土壤水分的蒸发,抑制丹参根系生长,因此日照时数保证的情况下,较少的日照时数和充足的降水量有利于植物根系的生长,从而导致分布在整个根的丹酚酸B含量的积累[41]。并且,水气压、相对湿度和日降水量≥0.1 mm日数与Na、Ne、H、I等遗传因子呈显著负相关,而这些遗传因子与丹酚酸B含量具有显著负相关关系。说明了这些气候因子可以增强丹参居群的遗传稳定性,从而促进丹酚酸B含量积累。总体而言,降水量、湿度和日照时数是影响丹参遗传变异和有效成分的主要气候因子,这与此前余彦鸽对野生丹参生态因子分析研究的结果相似[31]。其中,降水量介导了丹酚酸B和丹参酮含量积累的分流。因此,后期可根据当地的降水量、湿度和日照时数等条件判断是否适宜丹参种植。 除气候因素外,由于不同的土壤类型中土壤质地及理化性质差异会引起土壤水、热、养分、通透性的不同,从而影响到植物根系水分及养分吸收,最终也会对药用植物的生长发育和产量、质量造成一定影响[42-43]。本研究中,土壤粒径<0.002 mm以后将不利于隐丹参酮的积累。这可能与植物成分在根系的分布类型有一定关系,水溶性成分相对于脂溶性成分的分布在全根中比较均匀,脂溶性丹参酮主要都集中在表皮上,所以更易受到土壤质地的影响。土壤中矿质元素是影响药用植物生长发育及次生代谢物积累的生态因子[44-46],中药材生长所需要的矿质元素主要有N、P、K等10多种[47]。本研究发现,隐丹参酮含量与无机元素Cu和Mg含量呈显著正相关,Cu和Mg是植物所需的微量元素,适量的Cu和Mg积累能促进药用植物中有效成分合成。丹酚酸B含量与碱解N呈显著性正相关,与K、速效K呈显著负相关,碱解N含量与H遗传因子显著负相关,而H与丹酚酸B含量显著负相关,说明碱解N能促进丹参遗

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    [size=20px][color=#93c6bc][b]鉴别[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体](1)本品粉末黄绿色。茎表皮细胞呈长方形或类方形,气孔[color=var(--weui-LINK)]不定式[i][/i][/color],副卫细胞5~6个。叶表皮细胞呈波状不规则形,气孔不定式,副卫细胞4~5个。腺毛头部2~8细胞,顶面观呈长圆形,细胞成对并生;柄部4~13细胞,排列成1~2列。非腺毛大多碎断呈纤维样,顶端尖,完整者可达4mm,细胞相接处略膨大似竹节状。[/font] [font=宋体](2)取本品粉末0.5g,加甲醇10ml,超声处理15分钟,滤过,取滤液作为供试品溶液。另取苦蒿素对照品,加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取供试品溶液6[/font][font=宋体]μ[/font][font=宋体]l[/font][font=宋体]、对照品溶液4[/font][font=宋体]μ[/font][font=宋体]l[/font][font=宋体],分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮(5:3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。[/font] [font=宋体][/font][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [size=20px][color=#93c6bc][b]检查[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size] [font=宋体][/font] [b][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][/b] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][b]水分[/b] 不得过12.0%(通则0832第二法)。[/font] [b][font=宋体]总灰分[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过10.0%(通则2302)。[/font] [b][font=宋体]酸不溶性灰分[i][/i][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过3.0%(通则2302)。[/font] [b][font=宋体]【含量测定】[/font][/b][font=宋体] 照高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法(通则0512)测定。[/font] [b][font=宋体]色谱条件与系统适用性试验[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]以[color=var(--weui-LINK)]十八烷基硅烷键合硅胶[i][/i][/color]为填充剂;以甲醇-水(55:45)为流动相;检测波长为210nm。理论板数按苦蒿素峰计算应不低于5000。[/font] [b][font=宋体]对照品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取苦蒿素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。[/font] [b][font=宋体]供试品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取本品粉末(过三号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。[/font] [b][font=宋体]测定法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10[/font][font=宋体]μ[/font][font=宋体]l[/font][font=宋体],注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url],测定,即得。[/font] [font=宋体]本品按干燥品计算,含苦蒿素(C[sub]22[/sub]H[sub]32[/sub]O[sub]6[/sub])不得少于0.30%。[/font] [font=宋体] [/font]

  • 【讨论】水质测定,铜、锌、挥发酚、氨氮、硝氮、亚硝氮测定方法有哪些?

    水质分析具体的方法很多,但是我们可能就经常采用那么一两种而已。在这里开个贴,希望大家提供标题相关项目您采用的方法,最好具体说您对该方法的体会。还有就是您觉得哪个方法最好及其原因。我自己查询到的方法1、水质 铜的测定 2,9-二甲基 1,10-菲啰啉分光光度法 GB 7473-87Water quality-Determination of copper-2,9 Dimethy 1,10-phenanthrofine spectrophotometric method2、水质 铜的测定 二乙基二硫代氨基甲酸钠分光光度法 GB 7474-87Water quality-Determination of copper-Sodlum dtethyldithiocabamate spectro-photometric method3、水质 铜、锌、铅、镉的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度法 GB 7475-87Water quality-Determination of copper,zinc,lead and cadmium-Atomlc absorption spectrometry 4、水质 硝酸盐氮的测定 紫外分光光度法(试行) HJ/T 346─ 2007Water quality—Determination of nitrate-nitrogen—Ultraviolet spectrophotometry5、水质 氨氮的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分子吸收光谱法 HJ/T 195-2005Water quality—Determination of Ammonia—Nitrogen By Gas—phase molecular absorption spectrometry6、水质 亚硝酸盐氮的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分子吸收光谱法 HJ/T 197-2005Water quality—Determination of Nitrite—Nitrogen By Gas—phase molecular absorption spectrometry 7、水质 硝酸盐氮的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分子吸收光谱法 HJ/T 198-2005 Water quality—Determination of Nitrate—Nitrogen By Gas—phase molecular absorption spectrometry 8、水质 锌的测定 双硫腙分光光度法 GB 7472-87 Water quality-Determination of zinc-Spectrophotometric method with dithizonc 9、水质 铵的测定 蒸馏和滴定法 GB 7478-87Water quality-Determination of ammonium-Distillation and sltration method 10、水质 铵的测定 纳氏试剂比色法 GB 7479-87Water quality-Determination of ammonium-Nesster's reagent colorimetric method 11、水质 硝酸盐氮的测定 酚二磺酸分光光度法 GB 7480-87Water quality-Determination of nitrate-Spectrophotometric method with phenol disulfonic acid 12、水质 铵的测定 水杨酸分光光度法 GB 7481-87Water quality-Determination of ammonium-Spectrophotometric method with salicylic acid 13、水质 挥发酚的测定 蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法 GB 7490-87Water guality-Determination of volatile phenolic compounds-After distillation by means of 4-AAP spectrophotometric method 14、水质 挥发酚的测定 蒸馏后溴化容量法 GB 7491-87 Water quality-Determination of volatile phenolic compounds-After distiliation with bromine method 15、水质 亚硝酸盐氮的测定 分光光度法 GB 7493-87 Water quality-Determination of nitrogen (nitrite)-Spectrophotometric method

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