泡盛曲霉

食用油中黄曲霉毒素B1的柱前衍生法怎么也做不好，回收只有20%，找不到原因，有做过的吗？具体方法：称取油样5g，加入84+16乙腈-水20毫升浸泡过夜，次日超声20min，离心5min，取上清液过黄曲霉专用柱，取净化液2毫升，氮吹，吹干后，加入正己烷0.6毫升，三氟乙酸0.3毫升，混匀，40度烘箱衍生15min，取出氮吹，吹干后1毫升15+85乙腈+水定容，上机测定。

黄曲霉毒素跑样不稳定，出双峰

黄曲霉的生长条件是什么？它容易在哪些食品里面滋生？在什么情况下会产生黄曲霉毒素？ 黄曲霉是一种容易在种子类食物中滋生的霉菌。在25-30℃的温度下，80%-100%的相对湿度，17%-18%的种子水分含量，粮食、坚果、油籽等产品最容易滋生黄曲霉。幸好，各种豆类，包括大豆，并不是黄曲霉喜欢繁殖的材料，它更喜欢花生、玉米和大米等食品。 从这里可以看出，黄曲霉是粮食、豆类、油籽等种子类食品受潮时滋生的，种子总体而言仍然处在水很少的状态，而不是已经充分吸水的状态。人们都有一个经验：水汪汪的大米粥、绿豆汤，从来不会长霉，而是很快变味坏掉——因为水多的时候细菌繁殖非常快，根本轮不到霉菌繁殖。霉菌们所热爱的培养基质，大多是一些相对“干”一点，但又干得不够的食品，比如馒头啊，面包啊，糕点啊，受潮的种子之类。所以，面包放久之后会长出白色、绿色、黑色的霉斑，却不会发酸变臭，正是因为它的状态符合霉菌的胃口。 为什么呢？因为霉菌是非常喜欢氧气的，具有较强的“陆生”特性。如果把食品泡在水里，氧气不足，它们就很难繁殖起来。知道这个微生物学的基本知识，就会明白，霉菌几乎不能在淹水条件下产毒，所以泡豆子不可能长出黄曲霉毒素来。 所以说，买大豆的时候，要注意大豆的干燥程度，储藏中也要避免让它受潮。如果担心豆子在储藏当中被黄曲霉污染，那么先用水泡一泡，然后把泡豆水扔掉，实际上反而更为安全。 事实上，绝大部分豆制品加工时，都需要经过泡豆程序。不管是煮豆粥，做豆腐，做纳豆，或做豆酱等。所谓泡豆带来致癌危险，纯属违背科学常识的不实说法，大可不必为此惶恐不安，更不必为此不敢喝豆浆、不敢吃豆腐。 需要注意的是，在夏天泡豆子，如果超过4小时，最好能放在冰箱当中。因为泡豆的水分很高，很容易繁殖各种细菌。细菌不会产生黄曲霉毒素，却可能让豆子产生难闻的味道。如果不幸污染了某些致病菌，它们繁殖过度，或产生细菌毒素，都可能引起胃肠道疾病。尽管在打豆浆、做豆腐时还需要经过加热杀菌，也不可不防啊！

各位老师：刚开始做液相。黄曲霉实验后，相关实验器具，说是要用10%的次氯酸钠溶液泡。基本是配标液的器具处理。如果泡的话，要用烧杯，也要泡一定的时间。同一个实验室的同事意见很大。想让我直接扔了。请问各位老师是怎么处理的呢？我们黄曲霉是用的waters的UPLC仪器，用的是无衍生法。标准曲线最低点能做出来。做之前用金标法快检试剂盒筛查。想请教下各位老师，这样做应该没问题吧？

柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力，应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用，黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。

波动范围太大了，而不用衍生液时跑的很平稳，难道是碘会堵塞管路，有没有做过黄曲霉毒素的同行们交流下

最近在检测黄曲霉毒素时，为何要衍生，好多文献只是提到水可以猝灭，但是对于原因却不清楚，所以产生了疑问，B1、G1为何在水中会猝灭，衍生的机理是什么，请教下各位老师，有没有相关的文献或者出处。

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 （aspergillus flavus）寄生曲霉 （a.parasiticus）产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素，对肝脏组织的破坏性极强，生活中一定要小心这些食物中藏着的黄曲霉素。一、发霉的花生玉米黄曲霉素藏在发霉的食物里，特别是淀粉含量高的食物里，花生、玉米等，淀粉在高温和潮湿的环境下会滋生导致肝癌的黄曲霉菌。建议：1.每次少买点，不要“存”，以免霉变。2.如果您发现有一颗花生坏了，那一碗花生米，或者是存放的一袋子的花生米都得扔掉。3.家里有食物残渣的边边角角也要清洗干净。二、变质的米饭别以为做熟了就能放松警惕，变质的米饭是最容易产生黄曲霉毒素的!建议：做饭菜，吃多少、做多少，最好当天吃完，不留剩饭菜。三、发苦的坚果果吃到变苦的瓜子，一定要及时吐掉并且漱口，因为瓜子等坚果的苦味正是来自霉变过程中产生的黄曲霉毒素，经常摄入会增加肝癌风险。建议： 吃到霉变的、发苦的坚果千万别犯懒，一定要马上吐出来。四、没洗干净的筷子我们平时使用来吃花生、玉米等淀粉含量高的食物的筷子里最容易藏淀粉，一来二去霉变了，黄曲霉素就藏在里面了。建议： 1.最佳选择是铁筷子，很难出裂痕，也就不会有食物残渣。2.平时洗筷子的时候要记得先泡一泡，软化上面的食物残渣，以便容易清洗掉。五、劣质芝麻酱你爱吃的芝麻酱、花生酱，有些商家为了降低成本，用糠芝麻、瘪花生甚至变质的芝麻、花生做原料，其中变质的花生中含有黄曲霉毒素。而且这种加工后的产品，可比发霉花生难识别多了。建议：去大超市购买知名品牌。六、小作坊自榨油小作坊的压榨机或家用榨油机工艺简单，缺乏除去有害物质工艺，不能对原材料进行精炼，即使自己选料，也可能会出现农药残留、重金属污染问题，以及存在黄曲霉毒素问题。七、久泡的木耳很多人应该都听过这条一度很火的新闻，浙江瑞安的一位消费者因为食用泡发了三天的黑木耳，导致食物中毒，出现多脏器功能衰竭，一度生命垂危。木耳在泡发过程产生何种细菌或毒素，需要进行进一步的检测和判断。可能有哪些微生物毒素呢？譬如黄曲霉毒素、青霉毒素等。

生花生米长毛了，是不是产生黄曲霉毒素了？昨天发现一袋花生米，有些长绿毛了，肯定是不能吃了花生米好像最容易有黄曲霉毒素！

最近在检测玉米中的黄曲霉毒素b1遇到了一些问题想寻求大家的帮助。 我先是用国标（GB5009.22-2016)中的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-柱前衍生法跑了标品和样品（标品未衍生），流动相（甲醇乙腈50+50，水，梯度洗脱），标品从1ug/ml浓度开始有尖峰，低于1ug/ml的也有峰但不是尖峰，类似第一张图。但由于标品浓度跑的太高，样品浓度可能不在线性范围内，所以后面又利用甲醇水50+50柱后衍生跑了标品（浓度从1ng/ml到100ng/ml),但是均为跑出结果，图形算是波浪，冲了很久的柱子进样还是波浪，如第二张图，都是荧光检测器。想问下大家低浓度跑不出东西可能是什么原因？ 还有想问下大家关于检测限和定量限我要怎么确定，因为我不知道样品中含有多少黄曲霉毒素，我怎么确定我跑的标曲范围是否适用？[img=,690,125]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/07/202307161349357771_4933_6035573_3.png[/img][img=,690,148]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/07/202307161349401476_8259_6035573_3.png[/img]

大家工作中作黄曲霉毒素B1时，测定用的衍生装置是哪种的：柱后衍生泵？光化学衍生装置？还是电化学衍生装置？它们的哪种衍生方式性价比更高？

用PICKERING柱后衍生系统检测黄曲霉毒素，用0.05%碘液（甲醇水2：8），衍生泵压力偏高，超过2000，用甲醇冲洗的时候压力正常1000。想请教下各位大神，衍生泵压力偏高，是否跟碘液的溶剂比例有关，调高甲醇水的甲醇比例是否能够降低衍生泵压力。 在反相液相色谱中，调整溶剂比例是否能够影响系统压力，原理是什么，求各位大神解惑。

黄曲霉毒素光化学器柱後衍生法的B1及G1会因为紫外线254nm照射而结构改变

大神们，我们用的waters2695+2475检测器+waters柱后衍生器，柱后碘衍生法（碘浓度0.05%），流动相配比：水55%，甲醇35%，乙腈10%。标品用的O2SI黄曲霉毒素总量1ppb混标，大前天跑标品，G3 G1 B2 B1，四个峰都能出，昨天跑G1，B1都不出了。这是什么原因导致的呢，急救啊~~

各位大佬麻烦问一下，我走的黄曲霉为什么会这样，用的方法是5009.27-2016的柱前衍生（第二法），条件是12:12:76(乙腈:甲醇:水) 柱温是40 检测波长是 360nm到440nm 除了没用方法规定的15cm柱子其余都是一样，为什么会走成这样[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305311535415716_9092_5517077_3.png[/img]

食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

[color=#444444]我们用碘衍生方法，按照药典中样品前处理的方法配制样品溶液，加样做回收率，其中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1的回收率均在70%以上，而黄曲霉毒素G2的回收率总是在40%左右，换了另一个品牌新色谱柱结果一样，想问一下这个跟四种毒素的结构有关系吗，或者跟免疫亲和柱有关吗？[/color][img=,absmiddle]http://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/rolleyes.gif[/img]

1、仪器及方法：黄曲霉毒素检测，waters柱后衍生系统，衍生液为0.05%碘溶液，反应温度70℃，流速0.2ml/min2、现象：衍生液不输液（上机检测过程中，几个小时之后会出现不输液或者是输液量降低，压力为0或者是降低为100psi（正常压力1100psi左右））3、故障排查：将衍生液（0.05%碘溶液)更换为屈臣氏水（超声10min)。 a、滤芯拆掉，做prime，仍然不出液。不是滤芯的问题， b、拆卸4个单向阀，超声，之后做prime，正常输液。、 c、单独断开衍生泵走0.2ml/min的流速，按时间计时，出液量正常。压力稳定950-1000psi d、将屈臣氏水更换为衍生液（0.05%碘溶液)，按照abc三个步骤做。出液量正常。0.2ml/min流速压力正常1000-1150psi e、上机检测黄曲霉毒素，运行20h，正常。正常关机。大约3h之后，断开衍生泵。将衍生液更换为屈臣氏水，做prime，直至出液正常。更换为衍生液（0.05% 碘溶液)，用0.2ml/min流速直至出液正常，压力正常1000-1150psi f、二次上机检测黄曲霉毒素，晚上运行，第二天上班（已经运行15h），经看样品曲线，运行6h之后，基线不稳，可以看出是输液量不正常，压力显示为150psi。做prime不出液。经和waters工程师沟通，可以再超声单向阀。超声之后按照abcd四个步骤操作，更换新开封的碘配置的碘液。0.2ml/min的流速压力2h内从950上升到1150psi。4、[b]疑问[/b]：上机检测前半时间衍生泵还是正常输液，后半段时间输液就不正常，是什么原因导致的？仅仅是单向阀的问题还是有别的地方存在故障。请大神解答。

专家好：如何对尿液中的百生肼，氧氟杀星和卷曲霉素的测定？

各位大侠，我在用柱前衍生，高效液相做黄曲霉检测时，回收率只有百分之七十多，这样子能接受么？请问有用液相，柱前衍生做黄曲霉的前辈，你们的回收率是多少呀？我是用免疫亲和柱净化后再衍生的，能指点一下检测黄曲霉有那些地方是比较关键的控制点么？帮忙提高一下回收率，谢谢

加拿大发布允许食品中使用菌黑曲霉派生磷脂酶A2的临时营销售批准来源：厦门WTO工作站 2009年10月21日，加拿大发布G/SPS/N/CAN/399号通报，加拿大卫生署拟制定有关用于生产面包、面粉、全麦粉、非标准面包品、非标准整蛋、非标准蛋黄及转基因蛋黄素内的菌黑曲霉PLA-54[Aspergillus niger (PLA-54)]派生磷脂酶A2的临时营销售批准。 加拿大卫生署收到一份要求准用一种转基因菌黑曲霉杆菌派生的，携带该酶的猪胰基因编码的磷脂酶提案。磷脂酶属粗分类脂肪酶。现有数据评估支持由转基因菌黑曲霉派生的这种磷脂酶A2是安全有效的。因此，加拿大卫生署拟议修改食品药物法规，准许这种黑曲霉派生磷脂酶A2按药品生产质量管理规范(GMP)用于生产面包、面粉、全麦粉、非标准面包品、非标准整蛋、非标准蛋黄及转基因蛋黄素。作为改善协调机制应答能力的手段之一，在履行修改法规协调程序的同时，特发布临时营销许可，准许按GMP要求直接使用这种磷脂酶A2；且准许销售用上述物质制作的食品。 有关此项的最终规定将在12-18个月内批准并生效。通报评议截止日期为2009年12月24日。

我用GB/T5009.23-2006《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定》试着做了几次，但结果很不理想。有峰的时候同一标准峰高峰面积差别太大，而且有时候很不规则，但更多是根本没峰，做不出来。问了很多人都说柱前衍生很难做，有条件用柱后衍生的好。但是既然连国标都有柱前衍生的方法，就应该有他存在的道理。我做不出来，请各位大大指点下柱前衍生到底怎么做能提高成功率。 柱前衍生化步骤如下（一段）：从多功能净化柱的收集池内转移2ml净化液到棕色具塞小瓶中，在真空吹干机下60摄氏度吹干（或在60摄氏度水浴下氮气吹干，注意不要使液体鼓吹、飞溅）。加入200ul正己烷和100ul三氟乙酸，密闭混匀30s后，在40摄氏度烘干箱中衍生15min。室温真空吹干机吹干（或室温水浴下氮气吹干），以200ul水---乙腈（85+15）溶解，混匀30s，1000r/min离心15min，取上清液至液相色谱仪的样品瓶中，供测定用。还有我想问下做柱后衍生的，柱后衍生化系统，什么型号的，推荐下，可能要买个。。。。。

各位大神，我单位拟采购一台光化学衍生器用于测定黄曲霉毒素，现看了两家的产品，LC-TECH和ROMER，很难抉择，请各位大神给点意见，哪个品牌的哪个型号好，感激不尽！

食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子结构上十分接近.。毒性：远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄人，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。黄曲霉毒素进入机体后，在肝脏中的量较其他组织器官为高，说明肝脏可能受黄曲霉毒素的影响最大。肾脏、脾脏和肾上腺也可检出，肌肉中一般不能检出。黄曲霉毒素如不连续摄入，一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周即经呼吸、尿、粪等将大部分排出。

什么是黄曲霉毒素　　黄曲霉毒素（Aflatoxins）是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少，目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），前者为基本毒性结构，后者与致癌性有关。B1的毒性（其毒性比氰化钾毒性高）及致癌性极强且耐热（B1的分解温度为268℃左右，一般烹调加工破坏很少），在天然污染的食品中以B1最为多见。　黄曲霉毒素分布　　黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中；在水中的溶解范围为10毫克/升~20毫克/升， 可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中，不溶于己烷、石油醚和乙醚；易被碱或强氧化剂破坏；进入人体后主要经消化道吸收，大部分分布 在肝脏、肾脏，少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中，其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。

哪位来时用国标5009.24做过液相法测定黄曲霉M1，怎么标品都跑不出来。条件完全按照国标做的。