四氮唑蓝

一、原理 超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料；水稻或小麦叶片 （二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。 （三）试剂　1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）；2. 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml；3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存；4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。三、实验步骤 1. 酶液提取　取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。2. 显色反应　取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。 3. SOD活性测定与计算　至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的吸光度。四、结果计算 已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。

一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。二、蛋白质含量测定方法 1. 凯氏定氮法2. 双缩脲法3. Folin-酚试剂法4. 紫外吸收法5. 考马斯亮蓝法三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）试剂： 1. 考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100 mg溶于50 ml 95%乙醇，加入100 ml 85% H3 PO4 ，雍蒸馏水稀释至1000 ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3 PO4 。2. 标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15 mol/LNaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。（二）器材： 1. 722S型分光光度计使用及原理。2. 移液管使用。（三）标准曲线制作： 1. 试管编号0123456100ug/ml标准蛋白（ml）0.00.10.20.30.40.50.60.15mol/L NaCl （ml）10.90.80.70.60.50.4考马斯亮蓝试剂 （ml）5555555摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色A595nm2. 以A595nm 为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。（1）利用标准曲线查出回归方程。（2）用公式计算回归方程。（3）或用origin作图 ，测出回归线性方程。即A595nm =a×X( )+6；一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。（4）绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。（四）蛋白质含量的测定： 样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm ，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。一般被测样品的A595nm 值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm 值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。（五）注意事项： 1. 玻璃仪器要洗涤干净。2. 取量要准确。3. 玻璃仪器要干燥，避免温度变化。4. 对照：用被测物质以外的物质作空白对照。蛋白质含量测定实验难度系数 0共 0 人点评打分实验材料结晶牛血清清蛋白 g—球蛋白试剂（盒）Na2CO3酒石酸钾钠蒸馏水硫酸铜钨酸钠钼酸钠磷酸硫酸锂液体溴NaOH酚酞仪器耗材可见光分光光度计旋涡混合器秒表[url=http://www.biomart.cn/equipm

RT，求5-氨基四氮唑的液相条件，或者四氮唑类的液相条件

[color=#444444]5-氨基四氮唑分子量为85，熔点为205℃左右，麻烦大家推荐纯度测试方法，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]可以吗？[/color]

[color=#444444]有谁知道四氮唑类化合物的分析方法，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]或液相都可以，四氮唑类化合物是不是遇高温不稳定啊？[/color]

1、实验室使用的是SDL的CI3000+的日晒机，灯管及衬管都是配套的。 2、4级蓝羊毛（欧标，SDL蓝羊毛布）晒至4级需要的时间：与别的实验室交流过，有的16个小时左右，有的20个小时左右等。这个与灯管使用时间相关。3、ISO105-B02或者国标上面说的是4级蓝羊毛晒至灰卡4级，这就涉及到评级问题，是目光评级或仪器评级。 我们实验室采用的是目光+仪器结合，用仪器测出来晒至16小时的 ΔE值是1.7±0.3左右，仪器给出评级4级； 平行实验员目光评级也接近灰卡4级，所以定为16小时，若灯管超出使用寿命或其他原因不在考虑之内。 问题：A、你们实验室 欧标或国标 4级蓝羊毛晒至对应灰卡四级时间？评定方法？ B、3级蓝羊毛晒至4级时间长短？做光汗复合色牢度的时间长短如何确定，依据？

有一种产品叫藻蓝蛋白，它是一种螺旋藻提取物，深蓝色粉末，100%溶于水，溶于水时颜色透亮可爱，是一种纯天然可食用色素。可应用于冰淇淋、口香糖、饮料、糕团、点心、糖果、果冻、馅料、面条、芥末、糖衣药片、胶囊等。藻蓝蛋白在欧盟是作为食品原料使用的，而不是食品添加剂。藻蓝蛋白是美国FDA允许的唯一天蓝蓝色色素。欧盟和美国FDA都不限制其使用量。藻蓝蛋白不仅颜色鲜艳，而且本身是一种营养丰富的蛋白质，其氨基酸组成齐全，必须氨基酸含量高。它既是一种蛋白质，又是一种极好的天然色素，同时又具有抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、补血等保健功效。

各位朋友们，能请教一下用正常土壤测碱解氮滴定之后把样品放在旁边，盖子还盖在上面没有密封，过一段时间后内室会复蓝吗？这是正常的吗？我用的有机肥样品，不知道是不是氮含量太高，导致它没有完全释放完？因为我的样品太蓬松，所以用的是1g有机肥+0.2g硫酸亚铁，用1mol/L的氢氧化钠滴定，不确定是不是因为它氮含量太高，氢氧化钠促使其氨气挥发不完全，导致复蓝现象。

用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，发现蛋白质与染色液混合后吸光度值很不稳定，在1h内时间越长，吸光度越来越低，与文献上的越来越高并趋于稳定有所差异，不知道是不是这个原因，做加标回收率很低，求大神指教到底是什么原因会导致这样的情况。

[font=Arial]Aquatech India2011年荷兰阿姆斯特丹水展印度展展会时间：2011年3月2日----4日（一年一届）展会地点：印度孟买展览中心主办单位：荷兰阿姆斯特丹国际会展中心、Inter Ads-Brooks Exhibition（India）Pvt.Ltd 支持单位：国际水协会IWA 美国水质协会WQA 中国区独家代理：北京骏丰天逸国际展览有限公司报展联系人：李雪昭 地址：北京市朝阳区朝阳路67号财满街9号楼01144室 电话：010—51388532 010-51388685传真：010---51388685 QQ: 1194381679 邮箱：margaretlee2010@hotmail.com Website: www.genissexpo.com 手机：13426498664[/font][font=Arial]展会简介：AQUATECH荷兰国际水处理展Water ASIA,将于2011年3月举办第二届AQUATECH INDIA荷兰国际水处理展览会印度展，为迎合印度水工业领域对一个真正整合行业资源的高品质水展的期盼，AQUATECH的主办方荷兰阿姆斯特丹RAI国际会展中心通过成功并购由Inter Ads Brooks公司主办的Water Asia，强强联手将世界品牌水展AQUATECH带到印度，并购后的新站更名为AQUATECH INDIA将全面涵盖水工业各个领域，致力于将展会打造成印度第一高质量水展，作为目前世界上发展最快国家之一，快速的经济增长和有限的水资源注定印度水行业充满机遇和挑战，目前印度拥有12亿人口，而经济持续保持8%的年增长率，政府计划在2002年将印度发展成世界经济五大强国之一，而与此对应，占据16%的世界人口的印度仅拥有全球水资源4%，贫乏的水资源使得印度政府充分认识到大力发展水行业的重要性必要性，并计划在以下领域大力投资，农业用水的有效化，海水淡化基地，老旧设施的重建及商业和工业领域水处理系统的大力开发。荷兰阿姆斯特丹国际水处理展览会背景：AQUATECH荷兰水展开始于1964年，拥有40多年历史，品牌系列水处理展览会在欧洲，北美，南美，东南亚等世界各地成功举办，赢得行业盛誉，每届AQUATECH水展全面展示世界各国顶尖产品，技术和解决方案，并构建了强有力的知识交流平台，被全球行业领导者视为水工业的首选商贸平台，成为高品质成功水展的代名词。展品范围：环境保护技术方面 环保材料、滤芯滤料、纸浆模塑产品、环保电器、环保污水处理设备、环保板、环保电池、环保动力设备、环保袋、环保漆、环保清洗设备及零配件、环保餐具、空气净化、净水剂、噪声与振动控制、环卫机械设备、除尘、脱硫、脱氮技术等设备，汽车尾气净化器、CNC、LPG、汽车清洁能源技术、CFC代用品、洁净煤技术、工业锅炉的发行和节能技术、城市生活垃圾收运、处理及资源化技术装备，各种工业固体废渣的处理技术、有毒、有害废物的处理，处置等技术和装备，各种总收入气，废渣和资源化，无害化的综合利用技术和设备。 水技术方面：净化设备、净化剂、供水系统、排水系统，建筑上下水系统、水资源检测、分析、监控仪器与设备，水环境配套设备，过滤设备仪器及材料，水厂设备和技术、材料，水厂整体装备及配套设施水工程施工与咨询，水景工程与泳池系统，工业废水和城市污水处理，节水和废水资源回用技术与设备，纯净水、蒸馏水、矿泉水、高纯水等制水技术、设备及产品，膜及分离工程技术与设备，水处理药剂及配套设备各种排污、给排水、真空泵、潜水化工泵、水泵、水表、阀门、管道及机械类，管网检测及处理修复工程技术、密封件材料及管道设备等[/font]

请问哪位大侠采用靛酚蓝法测定氨氮的 含量啊。现在急需这方面的知识。。

最近看到安捷伦帮助文件里编写宏的问题，不知道是否可以在Data Analysis的主菜单栏添加一个菜单加载运行自己写的macro？还望高手指教？

本单位采购了镧氮合金，需要检测镧、氮、硅等，不知哪位大侠有好经验分享一下？目前检测时，样品处理不完全。

欢迎yinwei担任碧水蓝天正式版主！我们希望有更多的热心用户能加入到版主队伍中来，也希望在职的版主能在版面中发现有能力的热心用户推荐给我们。论坛正在招募版主，有兴趣的用户请到此页面申请：http://bbs.instrument.com.cn/resume/

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量加标回收率在80％左右，怎么做都升不上去，请大神指教有可能的原因，样品是β环糊精，蛋白质含量在0.2％左右

欢迎yilan629担任安捷伦气相色谱实习版主！我们希望有更多的热心用户能加入到版主队伍中来，也希望在职的版主能在版面中发现有能力的热心用户推荐给我们。论坛正在招募版主，有兴趣的用户请到此页面申请：http://bbs.instrument.com.cn/resume/

我用水扬酸法做氨氮现在也是摸索阶段,昨天按照第四版做的，但是有些问题,我做完后怎么是显示黄色呀?有点发绿.按照书上说应该是绿色或者蓝色，那到底是显色剂的问题，还是其他的问题？那位用水扬酸发做氨氮的大哥，给我解决下，谢谢

[em0715]Bradford法蛋白定量溶液配制过程中，工作液已经过滤多次了，颜色还是发蓝。想问问各位高人是不是滤纸的问题？用什么样的滤纸过滤这种溶液呢？什么牌子的滤纸质量比较好？多谢！

【序号】：1【作者】：严玉洲；黄有馨【题名】：乙炔还原法测定蓝藻固氮酶活性的技术条件 【期刊】：江苏农业科学【年、卷、期、起止页码】：1982年08期 【全文链接】：http://epub.cnki.net/grid2008/detail.aspx?filename=JSNY198208007&dbname=CJFD1982

请教一个问题:考马斯亮蓝法测总蛋白质含量，目标物中总蛋白含量大概在0.0001-0.06mg/g范围内，有合适的仪器推荐吗？ 目前有一台普通的721型可见分光光度计，试测效果不佳。

我现在测氨氮用国标的水杨酸法。但是测出来有好多都是负值，不知道为什么。我们做的大多都是河湖的地表水，我前处理用了续凝沉淀的那个方法。但是有的还是不行。我的空白做出来是绿色的。不知道对不对。有的水样做出来是淡蓝的。一测就是负的。不知道是我空白做的不对还是水样有干扰。我看看了其他帖子说，次氯酸钠不能长时间保存是吗？大概陪完能保存多长时间。还有就是他说3.5%的次氯酸钠吧，怎么个配法？我买的是市售的那种。浓度好象是10%最后。然后就没别的了。我是个新手做检测的，这方法就是看着第四版一点点做的，但是一做水就有时出负的絮凝以后还是负的，颜色总是淡蓝的。不知道是不是我配的药有问题还是其他的原因。有做的大哥大姐。详细的和我说说。要不加我QQ379188054谢谢了！

四甲级联苯胺测余氯加2滴开始上层变黄绿色 摇匀了变红 再加4，5滴变蓝 联苯胺是按国标用0.1mol盐酸配的 求解答

有没有版友用waters atlantis hilic silica色谱柱做三聚氰胺的？之前用的是安捷伦RX-sil做三聚氰胺，重现性比较差，重复5针响应程下降趋势，近期入手一款waters hilic 色谱柱今天做了一下，仍然有之前的问题。。这款柱子做三聚氰胺应该是没问题的呀，请教做过的版友有没有什么经验介绍，不胜感激

比起大肠馆，蓝欣的名头就响多了，如果早些年进入复旦的，那么应该记得三号门对面，邯郸路靠近国定路交界的地方有个饭店比较集中的区域，名头比较响的有三家，红墙，绿岛，还有蓝欣，简称红绿蓝。 红墙的老板据说是复旦里出来的厨师，和校内的关系搞得不错，一旦有了公务招待活动，红墙是能拿了经费本直接消费的，熟人应该还能签单。菜式多为本帮的普通菜，烧的味道也比较地道，但毕竟因为前面的原因，学生也只是用来当作比较高档的吃饭场所。绿岛就是最早小天府所在地，只不过不是川菜，没有多少特色，或许就是不久就变为小天府的原因。蓝欣就是后来才有的，这是一家以本帮为主的菜馆，菜烧得很有特色，而且性价比相对红墙由略高，所以引了不少红墙的主顾光顾。 蓝欣开张的时候已经是96年左右的事情了吧，学生也开始因为家庭的富足而有了余钱，生意也因此有了火爆的感觉，去五角场路过那里，总是看到有人排队，后来就有了取代国定路上小绍兴的分店，生意也是一样的好。蓝欣的价位不是很便宜的那种，所以原来也只是偶尔同学请客才知道有这么个地方，邯郸路和国定路上的分店服务态度没有多少印象，记得当时bbs上似乎还有人批评的文章，大概客人多了招呼不周的说法吧。 但四平路的分店让我的的确确喜欢上了这个名字。环境的布置，服务员的穿着，相对其他小店的规范服务，相对不少大店的谦和而不隐带傲慢笑容，还有那些经典实惠的菜式，让我每次有好朋友来上海，一般都会领他们来这里品尝江南的菜式，我想没有一个人失望。 蓝欣的菜单里面第一道菜是招牌凉菜脆皮黄瓜，黄瓜用刀削成薄片，醋，味精，辣油拌了，开胃爽口，每次必点，其他店面（梅园邨）也见过类似的菜，却总不如这里的干脆利落。还有一道比较少人点，就是仿川菜口水鸡。不比小天府的麻辣，这里的辣是用花生酱和温和的辣油拌制而成，香浓是特色，而且不时的来个特价，是吃口水鸡却又不太喜欢花椒的人之首选。还有一个是我比较偏爱的就是本帮圈子，这里是唯一能让我觉得弥补一下没有大肠馆遗憾的地方。绿油油的草头浇了白酒爆炒出来垫在下面做衬，圈子用酱糖上色，铺在草头上面，远远就能闻到特别的香味，圈子的香浓美味加上草头的爽口，搭配得真是妙不可言，可惜现在的蓝欣大酒店已经没有这道菜，憾甚！！！蓝欣的很多菜量都很足，喜欢这里的白灼草虾，清蒸鲈鱼，红烧鮰鱼，还有豆豉蒸河鳗，都能让我和朋友们大块朵颐。 然而同大肠馆一样，频繁移动也是蓝欣不可避免的命运。前几天和师弟谈起这家店，他说蓝欣改到哪里，那里就开始大修，想想的确如此。当时鼎盛时期有三家分店的蓝欣，真的不是很运气。先是为了孵化基地，把最初的老店拆迁，搬到了四平路上新华书店的对面，起了两层店面，正在说还不错的时候，这边国定路的店门口也贴出了拆迁的通告。当我们还觉得蓝欣还不错，有余幸能存了一个立足之地，五角场的大动土木，蓝欣忽然间就消失了，一段时间里，再也没有见到这家店面。 后来又是bbs上看到有人说有了这家店，政立路和淞沪路的交界，改名叫蓝欣大饭店，4层楼高，装修得很气派，但是性价比不高，竟然有些忧虑，怕自己喜欢的店掉了自己的风格，后来终于去了一次，宽松的氛围和如一的服务笑容，让我觉得，如果还有财力，五角场总还有一个可以享受美食的天地让我宽怀。

水体中藻蓝蛋白的光谱检测[color=red]【由于该附件或图片违规，已被版主删除】[/color]

[b][font=宋体]摘要：[/font][/b][font=宋体]试样经乙酸溶解，经过滤后制备成测试溶液。经紫外法预测试，蛋白浓度较低，选择考马斯亮蓝法（[/font]Braford[font=宋体]法）测定蛋白浓度。以[/font]BSA[font=宋体]溶液浓度绘制标准曲线，其线性相关系数达到[/font]0.99[font=宋体]以上。标定样品蛋白浓度时发现测量值超出标曲的有效计算范围。降低实验测试[/font]BSA[font=宋体]浓度和反应试剂体积，重新绘制微量蛋白浓度标准曲线，测定后可得蛋白浓度为[/font] 11.05μg/ml[font=宋体]，玉米秸秆中蛋白含量为[/font]0.221%[font=宋体]。[/font][b][font=宋体]关键词：[/font][/b][font=宋体]蛋白质浓度；考马斯亮蓝法；玉米秸秆[/font][b]1 [font=宋体]蛋白质浓度测定方法对比[/font][/b]（1） [font=宋体]双缩脲法：双缩脲是在大约[/font]180°C[font=宋体]条件下加热两个尿素分子，以达到释放出一个氨分子而获得的产物。在强碱性溶液中，缩二脲和硫酸铜形成紫色络合物，称为缩二脲反应。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为[/font]540nm[font=宋体]。[/font]（2） Folin[font=宋体]酚试剂法：[/font]Folin—[font=宋体]酚试剂中的磷钼酸盐[/font]—[font=宋体]磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正相关。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多。[/font]（3） [font=宋体]紫外法：蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在[/font]280nm[font=宋体]波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据。[/font]（4） [font=宋体]考马斯亮蓝法：也称[/font]Bradford[font=宋体]检测法，考马斯亮蓝[/font]G-250[font=宋体]在游离状态下呈红色，最大光吸收在[/font]488nm[font=宋体]；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质[/font]-[font=宋体]色素结合物在[/font]595nm [font=宋体]波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。[/font][b]2 [font=宋体]试剂和材料[/font]2.1 [font=宋体]试剂[/font][/b]1[font=宋体]）[/font]BSA[font=宋体]粉末[/font]2[font=宋体]）乙酸[/font]3[font=宋体]）考马斯亮蓝试剂：（[/font]Thermo CoomassiePlus Assay Reagent[font=宋体]）[/font][b]2.2 [font=宋体]仪器设备[/font][/b]1) Amersham Biosciences Ultrospec 2100 [i]pro[/i][align=left]2) [font=宋体]分析天平[/font][/align][align=left]3) [font=宋体]涡旋振荡器[/font][/align][align=left]4) [font=宋体]离心机[/font][/align][align=left]5) [font=宋体]石英比色皿[/font][/align][b]3 [font=宋体]实验方法[/font]3.1 [font=宋体]配置样品溶液[/font][/b][font=宋体]称取粉碎均匀的样品[/font] 25mg [font=宋体]至[/font] 15ml [font=宋体]离心管中，加入[/font] 1%[font=宋体]乙酸水溶液[/font] 5ml[font=宋体]，样品终浓度为[/font] 5mg/ml[font=宋体]，颠倒混匀至样品完全溶解。[/font][b]3.2 [font=宋体]配置常规蛋白浓度标准品和样品[/font][/b][font=宋体]称取[/font]BSA [font=宋体]粉末[/font] 2mg [font=宋体]左右至[/font] 2ml [font=宋体]离心管中，加入[/font] 1%[font=宋体]乙酸水溶液[/font] 1ml[font=宋体]，标准品母液终浓度为[/font] 2mg/ml[font=宋体]。用[/font] 1%[font=宋体]乙酸水将标准品分别稀释至表[/font]1[font=宋体]中标准蛋白浓度。[/font][b]3.3 [font=宋体]测试[/font][/b][font=宋体]用二次水做[/font]blank[font=宋体]。取[/font]200μl[font=宋体]考马斯亮蓝试剂与[/font]200μl[font=宋体]标准品[/font]/[font=宋体]样品混合，室温放置[/font]10[font=宋体]分钟，测定在[/font]595nm[font=宋体]波长吸收值。每个测试样品至少重复三次。[/font][b]3.4 [font=宋体]配置微量蛋白浓度标准品[/font][/b][font=宋体]称取[/font]BSA [font=宋体]粉末[/font] 2mg [font=宋体]左右至[/font] 2ml [font=宋体]离心管中，加入[/font] 1%[font=宋体]乙酸水溶液[/font] 1ml[font=宋体]，标准品母液终浓度为[/font] 2mg/ml[font=宋体]。用[/font] 1%[font=宋体]乙酸水将标准品分别稀释至表[/font] 2 [font=宋体]中标准蛋白浓度。[/font][b]3.5 [font=宋体]微量蛋白浓度测试[/font][/b][font=宋体]用二次水做[/font]blank[font=宋体]。取[/font]750μl[font=宋体]考马斯亮蓝试剂与[/font]25μl[font=宋体]标准品[/font]/[font=宋体]样品混合，室温放置[/font]10[font=宋体]分钟，测定在[/font]595nm[font=宋体]波长吸收值。每个测试样品至少重复三次。[/font][b]4 [font=宋体]结果[/font]4.1 [font=宋体]绘制标准曲线[/font][/b][font=宋体]根据[/font] 125~1000 μg/ml OD595 [font=宋体]绘制标准曲线，获得线性相关曲线如图[/font] 1[font=宋体]。线性相关方程为[/font] y=0.0008x + 0.0522[font=宋体]，[/font]R2=0.9937[font=宋体]。[/font][img=,415.15,219.75]file:///C:/Users/jiajia66/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image001.png[/img][align=center][b][font=黑体]图[/font]1 [font=黑体]常规浓度标准曲线[/font][/b][/align][b]4.2 [font=宋体]测定并计算蛋白浓度[/font][/b]经过分析检测，标准品和样品与亮蓝[font='Times New Roman',serif]G-250[/font]试剂反应后[font='Times New Roman',serif]OD595nm[/font]吸收峰为如下：[align=center][b][font=黑体]表[/font]1 [font=黑体]标准曲线测定[/font][/b][/align] [table=614][tr][td] [font=宋体]标准物（[/font]BSA[font=宋体]）[/font][font=宋体]浓度（[/font]μg/ml[font=宋体]）[/font] [/td][td] 0 [/td][td] 25 [/td][td] 125 [/td][td] 250 [/td][td] 500 [/td][td] 750 [/td][td] 1000 [/td][td] 1500 [/td][td] 2000 [/td][td] [font=宋体]样品[/font][font=宋体]（[/font]5mg/ml[font=宋体]）[/font] [/td][/tr][tr][td] OD(595nm) [/td][td] 0.348 [/td][td] 0.339 [/td][td] 0.466 [/td][td] 0.546 [/td][td] 0.737 [/td][td] 1.014 [/td][td] 1.160 [/td][td] 1.265 [/td][td] 1.399 [/td][td] 0.341 [/td][/tr][tr][td] [/td][td] 0.327 [/td][td] 0.345 [/td][td] 0.466 [/td][td] 0.589 [/td][td] 0.822 [/td][td] 0.992 [/td][td] 1.107 [/td][td] 1.257 [/td][td] 1.406 [/td][td] 0.350 [/td][/tr][tr][td] [/td][td] 0.309 [/td][td] 0.347 [/td][td] 0.471 [/td][td] 0.589 [/td][td] 0.821 [/td][td] 1.024 [/td][td] 1.187 [/td][td] 1.255 [/td][td] 1.433 [/td][td] 0.354 [/td][/tr][tr][td] [font=宋体]平均值[/font] [/td][td] 0.328 [/td][td] 0.343667 [/td][td] 0.467667 [/td][td] 0.574667 [/td][td] 0.793333 [/td][td] 1.01 [/td][td] 1.151333 [/td][td] 1.259 [/td][td] 1.412667 [/td][td] 0.348333 [/td][/tr][tr][td] [font=宋体]扣除[/font]blank [/td][td] [/td][td] 0.015667 [/td][td] 0.139667 [/td][td] 0.246667 [/td][td] 0.465333 [/td][td] 0.682 [/td][td] 0.823333 [/td][td] 0.931 [/td][td] 1.084667 [/td][td] [/td][/tr][/table][font='Times New Roman',serif] [/font]带入标准曲线由此计算可得样品中蛋白含量过低，超出标准曲线范围。因此采用微量浓度测定方法。[b]4.3 [font=宋体]绘制微量蛋白浓度标准曲线[/font][/b][font=宋体]根据[/font] 3~30 μg/mlOD595 [font=宋体]绘制标准曲线，获得线性相关曲线如图[/font] 1[font=宋体]。线性相关方程为[/font] y=0.0166x + 0.0845[font=宋体]，[/font]R2=0.9906[font=宋体]。[/font][img=,393.4,205.15]file:///C:/Users/jiajia66/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png[/img][align=center][b][font=黑体]图[/font]2 [font=黑体]微量浓度标准曲线[/font][/b][/align][b]4.4[font=宋体]测定并计算蛋白浓度[/font][/b][align=left][font=宋体]由此计算可得样品中蛋白浓度为[/font] 11.05 μg/ml[font=宋体]，蛋白含量为[/font]0.221%[font=宋体]。[/font][/align][align=center][b][font=黑体]表[/font]2 [font=黑体]微量蛋白浓度标准曲线测定[/font][/b][/align] [table=613][tr][td] [font=宋体]标准物（[/font]BSA[font=宋体]）[/font][font=宋体]浓度（[/font]μg/ml[font=宋体]）[/font] [/td][td] 0 [/td][td] 3 [/td][td] 6 [/td][td] 12 [/td][td] 24 [/td][td] 30 [/td][td] [font=宋体]样品[/font][font=宋体]（[/font]5mg/ml[font=宋体]）[/font] [/td][/tr][tr][td] OD(595nm) [/td][td] 0.256 [/td][td] 0.365 [/td][td] 0.43 [/td][td] 0.561 [/td][td] 0.744 [/td][td] 0.828 [/td][td] 0.521 [/td][/tr][tr][td] [/td][td] 0.245 [/td][td] 0.371 [/td][td] 0.44 [/td][td] 0.557 [/td][td] 0.744 [/td][td] 0.811 [/td][td] 0.526 [/td][/tr][tr][td] [/td][td] 0.253 [/td][td] 0.361 [/td][td] 0.44 [/td][td] 0.564 [/td][td] 0.747 [/td][td] 0.816 [/td][td] 0.511 [/td][/tr][tr][td] [font=宋体]平均值[/font] [/td][td] 0.251333 [/td][td] 0.365667 [/td][td] 0.436667 [/td][td] 0.560667 [/td][td] 0.745 [/td][td] 0.818333 [/td][td] 0.519333 [/td][/tr][tr][td] [font=宋体]扣除[/font]blank [/td][td] [/td][td] 0.114334 [/td][td] 0.185334 [/td][td] 0.309334 [/td][td] 0.493667 [/td][td] 0.567 [/td][td] 0.268 [/td][/tr][/table]

亲们，跑蛋白电泳时，0.05%的溴酚蓝水溶液怎么配比较好呢，因为它不溶于水。还有SDS溶液应该怎么配，它也不溶于水啊，一搅拌全是泡沫