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对人工盘煤的几点思考 火力发电已有130年的历史。随着科技的进步，火力发电厂的生产能力、管理水平、高产低耗指标等都有着长足的发展，而且在不断地提高和完善当中。但至止上世纪未，几乎所有的火力发电企业对库存盘煤的方式仍然世袭百年的传统——人工盘煤。 所谓人工盘煤，就是每月底，由几个部门抽出人员（往往是策划、燃料、财务、审计等），先对煤场进行推土机整形、人工拉皮尺、计算数学模型、得出体积、再乘以煤的密度、算出重量、填写报表。一般而言，这种数据结果往往与实际数量的误差在7%左右。可天长日久，更多的企业只是凭经验，目测一下煤场，估计一个数据直接填写报表，其实际误差是可想而知的。进入本世纪后，国内市场上相继出现了几种与之相关的产品，其中不乏有自动化程度高、速度快、误差小的好产品，但推广和普及都不理想。眼下采用非人工盘煤方式的企业还不足10%。究其原因，有以下几种因素：一、 认识因素 很多企业的相关人员，甚至包括厂级领导认为，燃煤进场时有轨道衡、入炉前有皮带秤，至于库存数是否准确，关系不大，“反正肉烂在锅里”。初听似乎有理，可仔细分析，还是经不起推敲：且不说轨道衡与皮带秤本身就存在着正负误差，二者计量的煤在时间上就有差异（如干煤进场、湿煤入炉，挥发、自损等因素），再者煤本身有着太复杂的特性，存放时间的长短、密度的大小、天气的变化等，对其数量的变化都有着深刻的影响。无奈一些企业一直被“关系不大”的认识误区所笼罩。二、 体制因素 在五大集团未设立以前，几乎每个火电企业的厂长都有降耗任务，有的为此设立了“厂长煤耗”。能否降耗是一回事，争取降耗的奖励却是另一回事。库存煤的数量掌握在自己手中，需要多的时候就多报，需要少的时候就少报，主动权在握，奖金和福利就有保障，因此，库存煤数量不能弄得尽人皆知。这种因素即便是五大集团形成后的今天也没有从根本上得到改变。这是国有企业体制天然的缺陷所致。三、 管理因素 相对于安全生产、提高经济效益而言，库存盘煤问题实在无关紧要，虽然每月终都有麻烦的时候，甚至出现部门间扯皮现象。可企业要做的事太多，安全设施、技改项目、大修计划等都不能一一落实，在这类小事上花一笔钱是很不划算的——这是很多企业的普遍想法。殊不知建立一个现代化企业，从整体上提高企业管理水平是需要每个环节都要与之相匹配的，况且库存燃煤的数量的准确与否，直接关系到企业的成本核算，直接反映到企业经济效益和管理水平的高低。管理不上一定层次，整体要求不达到一定标准，就很少有人意识到库存盘煤的重要性。四、心理因素 本世纪初，有商家率先引进美国激光测距仪应用到火电企业的库存盘煤中。部分企业喜出望外，这下可解了燃“煤”之急，纷纷购进。后来才发现它并不是理想的盘煤用具。因为在煤的密度问题（世界难题）未解决前，要对堆积如山的燃煤进行盘点的唯一方法就是测算其体积。然而该测距仪用其测距十分准确，用其测体积的确有些勉为其难，要对煤的表面特征用激光打点的原理测出全部体积，其工作量可想而知，况且其精度的高低受操作人员工作态度的影响。因而早期购置该产品的企业要么凑合使用；要么束之高阁，再次回到人工盘煤的方式上。因此一些企业再听到什么盘煤仪时，心有余悸，不再相信这类产品，其实是因噎废食。 解决人工盘煤的必要性一、 现代企业制度的需要 随着电力体制改革的不断深入，每一个发电企业必将是独立的法人或核算单位。五大集团的格局形成后，全面提高企业的管理水平和经济效益已经提出了客观要求。现代企业制度的建立、投资者权益的保障、企业竞争能力的加强都不允许“肉烂在锅里”的现象继续；成本核算、财务报表的真实与否直接牵系到股东的利益和企业的生存状况。看似小问题的库存盘煤，可能造成企业管理上的大漏洞。要适应电力改革的发展，必须防微杜渐，从基础工作抓起，每一个环节都应该有据可依、有章可循。燃料在火电企业的生产成本中占70%以上，对燃料的各个环节进行科学的管理无疑是现代企业制度管理的必然要求。二、竞价上网的需要 厂网分开已经定型，竞价上网指日可待。企业的电量能否上网，以什么价格上网终将是决策者们要面临的现实。不敢想象，如果明知自己电量的单位成本核算不准，如何应对竞价上网？以装机容量120万机组的火电企业为例，按最低警戒库存量应该在8.4万吨，假设月终人工盘煤的误差在5%，那么就有4200吨煤的误差，如果按240元/吨计，当月就有100余万元资金在财务报表上是不真实的，无论是库存量、误差率、还是煤的单价，这些都是保守估计。如果从宏观上看，全国有近600家火力发电厂，每月都面临库存盘煤问题，仅此一项的误差怎么也得以亿元计。这对竞价上网的影响因素显然不可低估。此类问题不解决，上网电价的成本岂不成了假成本？三、企业自身的要求 每月的库存盘煤，对相关部门和相关人员来说，是艰难的一天（有的不只一天），耗时又费力，意见还难以统一，都有考核指标，谁说了也不算，没有客观标准，还不排除有少数企业的少数人在中玩猫腻现象。未来的发电企业，人员定编越来越少，管理越来越规范，煤资源越来越紧张。对于这种每月必须履行的库存盘煤，必须要有科学、准确、客观的方法，才能有效地提高企业的管理水平，只有这样，才能为企业的生存和发展营造更好的环境。最近，温总理对全国开展资源节约活动作出重要批示，称其意义重大。到2005年，我国的装机容量将达到4.8亿千瓦，届时年耗燃煤将达七、八亿吨，电煤库存应在3000万吨左右。在库存盘煤方面，每提高一个点的准确率，就有上亿元的资金真实地反映在帐面上。历年来，库存盘煤方式之所以从未引起任何部门的重视，这是人们的惯性思维所至，“煤不值钱”、“关系不大”、“肉烂在锅里”等，事实上煤价已由几十元一吨上升到几百元一吨，而且还将上扬。近年的“煤荒”愈演愈烈，我们必须重新正视煤的价值，特别是以煤为首要生存条件的火力发电企业更应对其有全新的认识。它的每一个细节都会或多或少地影响到我们的未来，关注和重视库存盘煤工作，应该纳入有关部门和领导的议事日程。 目前国内的几种盘煤产品介绍 目前国内市场上主要有三类盘煤产品。一是上述美国产激光测距仪，近年有所改进，主要办法是在测距仪的基础上配上地图星水平角度测量仪。该系统本来是用于野外勘测，其特点是不需要载体，较灵活，售价较低。但用在盘煤上仍然存在精度的高低受操作人员的工作态度影响，即人为因素较浓。二是东北某公司盘点系统，其工作原理是对煤场表面特征进行激光扫描，特点是在扫描范围内其精度较高，但存在扫描不全的问题。三是华中某大学开发的自动测量系统，其工作原理也是激光扫描，特点是量身定制，精度能达到99%以上，无死角，系国家863项目内容，科技部创新基金资助成果，通过了国家测绘局的专家鉴定，有完整的知识产权，但价格略高于前两种。[em17]

有没有谁有比较好的检测酶抑制剂抑制效率的方法,也就是测Ki值的方法?谢谢

1、脱霉剂对牛本身的伤害未知2、脱霉剂在奶中是否有残留3、在奶中的残留对人身体的伤害有多大4、残留限量是否经过毒理学实验5、脱霉剂是否有检测方法？

1． 缓冲液：将缓冲液试剂袋中的试剂倒出，溶于 500ml 蒸馏水中，溶解、混匀即可。2． 底物；向标有“底物”的试剂瓶中加入 2.7 ml 蒸馏水,溶解、混匀即可。0~5oC 环境下冷藏保存。3． 显色剂：按试剂瓶上的标签说明，向标有“显色剂”的试剂瓶中加入 26 ml 缓冲液，溶解、混匀即可。4． 酶试剂：酶试剂已配成溶液可直接使用。平常要在 0~5oC 环境条件下冷藏保存，切勿冷冻至结冰！！！ “酶试剂使用前请摇晃均匀。使用时用一瓶取一瓶，用完再取用新的，要防止其它物质的污染，以免溶液中毒失效，未用完的试剂可放在清洗干净的反应瓶中 0~5oC 环境条件下保存。反应瓶建议用去污粉清洗，尽可能 不用洗洁精清洗。（去污粉可在一般的日杂商站或医药化学试剂商店买到。）5．样品的抑制率 在 40-50%之间为可疑农残超标样品，抑制率大于 50%为农残超标样品。6．器具专用原则：所有用于转移试剂或样品的器具都要专用并帖上标记，以免混用而造成交叉污染。7．试剂“只出不进”原则：每次测试时，从试剂瓶中吸出（抽取）的试剂不管是否使用，只要吸出来了，即便用不上或用不了造成浪费也不要打回去。否则，容易污染整瓶试剂造成更大损失，甚至影响以后所有的测试，产生错误的测试数据。8．对照液的制备：取酶 100ul，缓冲液 2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀，再加入显色剂100ul，底物 20ul。摇匀后立即转移到比色皿中，放入仪器进行对照测试。9．检测样品液的制备：取 2g 果蔬样品（叶菜剪成 1 厘米见方的小片，瓜果取厘米见方的横截面）放入三角瓶中，加入 10ml 缓冲液， 振荡提取２分钟后过滤，取出清液即为待测试液。取酶 100ul，待测试液 2.5ml，加入专用管制瓶中，混匀静置抑制 10 分钟后，（按仪器显示的时间计时）加入显色剂 100ul，底物 20ul 。摇匀后立即转移到比色皿中后把比色皿放入仪器中马上进行样品测试。

我国“替尼类”（酪氨酸激酶抑制剂）抗肿瘤药的市场现状2012年1月FDA批准辉瑞公司小分子酪氨酸激酶抑制剂阿西替尼上市,开始了又一轮抗肿瘤靶向药物研究的新高潮。酪氨酸激酶在肿瘤的发生、发展过程中起着非常重要的作用,以酪氨酸激酶为靶点进行药物研发已成为国际上抗肿瘤药物研究的热点。酪氨酸酶抑制剂在临床上通过抑制肿瘤细胞的损伤修复、使细胞分裂阻滞在G1期、诱导和维持细胞凋亡、抗新生血管形成等多途径实现抗肿瘤效果;其抗癌谱广,已经成为治疗各种癌症疾病的一线用药。伊马替尼是基于癌细胞分子作用机理而开发的第一个抗癌新药,开创了肿瘤分子靶向治疗的时代。目前我国已有8个酪氨酸激酶抑制剂上市,包括伊马替尼、厄洛替尼、舒尼替尼等,此类药物的市场情况如下表,其中只有埃克替尼一个为国产产品,其它均为进口产品。表1:酪氨酸激酶抑制剂靶向抗肿瘤药在中国上市情况通用名 商品名 中国上市年份 在中国上市的首家公司 伊马替尼 格列卫 2002 诺华 吉非替尼 易瑞莎 2004 阿斯利康 厄洛替尼 特罗凯 2006 罗氏 索拉非尼 多吉美 2006 拜耳 舒尼替尼 索坦 2007 辉瑞 尼洛替尼 达希纳 2009 诺华 达沙替尼 施达赛 2011 百时美施贵宝 埃克替尼 凯美纳 2011 浙江贝达药业有限公司 靶向治疗,是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点(该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子,也可以是一个基因片段),来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞。由于靶向制剂可以提高药效、降低毒性,从而增强了药品的安全性、有效性和病人用药的顺应性,所以日益受到国内外医药界的广泛重视。从2011年各大公司年报数据了解到,诺华的伊马替尼销售额最大,超过46亿美元,罗氏的厄洛替尼和辉瑞的舒尼替尼销售额都超过10亿美元。表2:2011年各大药企的酪氨酸激酶抑制剂产品全球销售额通用名 企业 2011年销售额 伊马替尼 诺华 46.59亿美元 厄洛替尼 罗氏 12.51亿瑞士法郎 舒尼替尼 辉瑞 11.87亿美元 索拉非尼 拜耳 7.25亿欧元 达沙替尼 达沙替尼 8.03亿美元 尼洛替尼 诺华 7.16亿美元 吉非替尼 阿斯利康 5.54亿美元 拉帕替尼 葛兰素史克 2.31亿英镑

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酶，底物，还有缓冲溶液，三个成套的，多少钱一套啊，我们用量很大，想买便宜的，对了一套可以做几个样品啊，这个都麻烦说清楚啊，我的邮箱是mars200002@163.com,如果是厂家的话，可以把资料发到邮箱里，如果您用过，麻烦给说一下好吗

有做过溶酶体贮积症[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]检测酶活的老师吗？最近在做这个实验，通过酶活反应将底物转化为产物，通过产物的量与酶的体积、反应时间等计算酶活。排查了不少因素，也仿照大量文献报道的酶反应剂都应用到实验中，而得到的酶活却与文献、NCBI上的阈值有一定出入，如果自己买到第三方校准品，自己根据自己的实验结果定正常人水平的酶活阈值可以吗？有哪些需要注意的吗？谢谢！

科学家观察到酶是如何“编辑”DNA的 有望用以纠正人类遗传疾病 科技日报讯 （记者陈丹）一个国际研究小组在了解酶如何“编辑”基因方面取得了重要进展：观察到了一类被称为CRISPR的酶绑定并改变DNA（脱氧核糖核酸）结构的过程。这项发表于5月27日（北京时间）美国《国家科学院学报》上的研究成果有望为纠正人类的遗传疾病铺平道路。 CRISPR意即“成簇的规律间隔的短回文重复”，在上世纪80年代才首次为人们所认知。到目前为止，已发现40%已测序细菌和90%已测序古细菌的基因组存在这种重复序列，而且细菌已开发出一套可以探测和切断外来DNA的免疫策略。其机理大致如此：CRISPR序列与很多病毒、噬菌体或者质粒的DNA序列同源，受到攻击的细菌会以相匹配的DNA为目标进行自然防御。它们所采用的手段，就是利用一种名为Cas9的内切酶，裂解外来DNA。 基因工程师们意识到，如果将细菌的CRISPR-Cas9系统插入其它生物体细胞，它们也能够对目标DNA进行切割。就在去年，这一革命性的基因编辑技术收获了一系列成果：多个研究团队已经成功对人体、小鼠、斑马鱼、大米、小麦等细胞中的基因进行删除、添加、激活或抑制等操作，从而证明该技术的广泛适用性。 不过，人类基因组有30亿个碱基对，要准确锁定某个目标DNA，工作量大致相当于从一套23卷的《百科全书》中找出一个拼错的单词。因此，研究人员为Cas9这把“基因剪刀”找了一个与目标基因匹配的RNA（核糖核酸）作为“导航仪”。在这个靶向过程中，Cas9拉开DNA链，并插入RNA，使之形成了一个被称为R环的特定序列结构。 在最新研究中，英国布里斯托尔大学和立陶宛生物技术研究所的科学家使用经过特别改装的显微镜对R环模型进行了检测。显微镜下的单个DNA分子被磁场拉伸着，通过改变DNA受到的扭力，他们能够直接观测由单个CRISPR酶介导R环形成的过程。这使得这个过程中以前不为人知的一些步骤毕现无疑，也让研究人员能够探讨DNA碱基对序列对R环形成的影响。 布里斯托尔大学生物化学系教授马克·斯兹克泽尔昆说：“我们进行的单分子实验加深了有关DNA序列对R环形成的影响的认识。这将有助于未来合理地重新设计CRISPR酶，以提高其精确度，将脱靶效应（即在不需要的地方引起基因变异）降至最低。这对我们最终利用这些工具来纠正患者的遗传疾病至关重要。” 总编辑圈点： 不知基因谁裁出，免疫系统似剪刀。Cas9蛋白酶，本来是原始生命用来防御生物入侵的防御性武器，但却被人类变成进攻利器。它在人类手中犹如火箭弹，威力巨大，使用方便。但它精确度有限，容易误切人类不希望影响的基因段。科学家们此次通过改造显微镜，看清了Cas9破拆单个DNA的全过程。这样，人们就能将火箭弹改造成导弹，指哪儿打哪儿。曾经让患者绝望的遗传病，未来或许一针下去就解决了。来源：中国科技网-科技日报 作者：陈丹 2014年05月28日

我要做农药残留检测实验，需要购买乙酰胆碱酯酶，但不知道向谁购买。我找到有进口的，但超出预算，需要改购国内的，谁可以提供点国内有卖这种产品的厂家信息吗? 急！谢谢！[em63]

一、产品名称：掘进机虚拟实训操作教学系统二、产品开发背景及应用前景：“煤矿生产，安全为天”，作为国内首家提出软硬结合的煤矿虚拟实训操作平台构想的徐州翰林科技有限公司，立志于革新煤矿现有安全与技能培训模式。其最新研究成果——《煤矿井下虚拟实训互动平台》，将颠覆传统缺乏实际操作的黑板口授、多媒体点播的培训手段，创新的将井下采、掘、机、运、通、逃生救援等各种设备的实操训练，搬到地面，通过对机械设备操作部分1：1比例操作仪的操作练习：系统虚拟再现生产环境、机械设备工作状态、设备分解、检修维护等，综合的展现出来。《煤矿掘进机虚拟实训操作仪》作为《煤矿井下虚拟实训互动平台》一期工程成果，他采用国际先进的支持底层绘制和造型能力的图形函数库，有着广泛的硬件支持的OPENGL技术研发，最大特点是：系统研发不受到任何外围环境限制，可以实现所能想象的各种互动功能，使系统具有最大的拓展性，及个性化产品研发。虚拟实操的培训模式，是虚拟仿真技术更高层次的应用，是对多媒体技术应用的全新诠释，所以，我们有理由相信：这种先进的、安全的、经济的、低碳节能的培训训模式将成为未来煤矿从业人员培训的主流模式。

有人做沉积物里面的酶吗？讨论一下。

密理博（Millipore）公司作为全球生命科学领域的策略性供应商，为生物科学研究和生物制药工业提供技术、工具和服务。2007年11月20日，密理博正式宣布拓宽P13激酶产品线，使其成为目前全球最丰富的脂质激酶产品线。密理博目前提供17种脂质激酶，既可以从市面上购买，也可以参加金标准激酶服务。其他没有一家公司可以提供如此品种繁多的激酶。脂质激酶是一种新兴的且发展前景良好的潜在药物靶标，P13激酶可以调节各种细胞功能，包括细胞生长、增殖、分化、迁移、生存和细胞间通信。因此，P13激酶功能缺陷会导致多种疾病，包括多种形式的肿瘤。密理博新开发的脂质激酶组合和激酶服务提供切断细胞通信的工具，是开发新疗法的关键步骤。和密理博卓越的PI3激酶HTRF™ 分析方法、激酶服务和小分子抑制剂相结合，新增的脂质激酶组合为研究者提供脂质激酶信号通路研究的最完整解决方案。新增的脂质激酶组合包括野生型和疾病相关突变型。密理博作为全球领先的生命科学公司，为生物科学研究和生物制药研发提供前沿的技术、工具和服务。作为策略性合作伙伴，我们携手客户共同面对人类健康问题的挑战。从科研、开发到生产，我们的科学专家和创新的解决方案帮助客户处理最复杂的问题以帮助他们达到预期目标。

科学性传统的实操培训，通过老工人的传帮带，容易把一些不好的习惯或不规范的操作，传承下去，造成事故隐患。采煤机虚拟实训操作系统根据煤矿三大规程的要求将“手指口述”安全确认法融入其中，这种仿真的实操培训形式将严格规范工人的技能操作，使之更科学，更合理。而且硬件设备和软件交互控制，解决纯软件操作的抽象和纯硬件设备操作的单一问题。

为什么在做15979溶血链球菌的链激酶实验时，加了标准菌株的样和样品都不能凝固，而标准菌株的杆菌肽实验有抑菌带

酶制剂的酶活测定方法及影响因素随着我国畜牧业的发展和生物工程技术的不断进步，酶制剂在饲料工业中的应用越来越普遍。由于酶制剂能够消除饲料中的某些抗营养因子的负面作用，提高饲料消化率，改善动物生产性能，降低生产成本，因此日益受到饲料界的重视。但是，由于酶制剂来源比较复杂、分子结构不明确，分离提纯困难等多种原因，使这类产品有国家标准的不多，即使有国标也存在一些问题。给广大养殖用户和生产企业带来很大不便。本文简要介绍一下常用的酶活测定方法及测定过程的影响因素，仅供广大饲料工作者提供参考。1 酶制剂的定义及分类所谓的酶制剂就是通过产酶微生物发酵工程或含酶的动、植物组织提取技术生产加工而成，具有一种或多种底物清楚的酶催化活性，有助于改善动物对饲料营养成分的消化、吸收等，并有功效的生物学评定依据，符合安全性要求，作饲料添加剂用的酶制剂产品（NY/T 722-2003）。工业上应用的酶制剂大多为水解酶，按作用底物的不同，可分为淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等。按动物体内是否分泌，分为消化酶和非消化酶两大类。消化酶指动物自身能够分泌的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等，在幼龄动物或特殊生理阶段时，动物也存在消化酶分泌不足需要外源供给的情况。非消化酶是指动物自身不能够分泌或很少分泌，必须由外源供给的酶，这类酶能消化动物自身不能消化的物质或降解一些抗营养因子，主要有植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等。2 常见的酶活测定方法通常酶制剂活性的检测是采用实验室分析手段来进行评价，它可以用来筛选优质酶制剂、确定复合酶制剂的最佳组方及确定产品的最佳添加量等，酶制剂实验室评价技术是目前饲料厂家应用最为广泛的一种方法。其操作相对简单，检测所用时间短，便于生产实践应用。酶活测定结果虽不能完全反映酶的使用效果，但通过检测至少可以避免使用劣质的酶制剂。我国饲料工业标准中已经确立了饲用植酸酶（GB/T 18634）、纤维素酶（NY/T912）、β-葡聚糖酶（NY/T 911）的测定方法。另外，许多企事业单位为了生产研究的需要也制定了很多用于各种酶制剂活力的测定方法。目前测定酶制剂活性的方法主要有：2.1 比色法比色法是以反应生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法，根据原理不同可分为还原糖法和色原底物法。2.1.1 还原糖法 这种方法是通过酶作用于化学合成或从自然界提取出来的底物来进行测定的。非淀粉多糖酶与底物在特定的条件（温度、pH值和底物浓度）下反应，反应产物为还原糖，在与显色剂反应后，通过比色确定还原糖的生成量，同时制作标准曲线。酶的活性表示为单位时间产生一定浓度的产物所需要的酶量（mg 或mL）。该法可适用于大部分酶活力的测定，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶等的测定。根据显色剂的不同又可分为DNS 法、钒钼酸铵法和地衣酚法。其中DNS 法由于操作简单、显色稳定，是目前众多实验室和饲料企业在测定非淀粉多糖酶时应用最多的测定方法。2.1.2 色原底物法 原理是利用人工合成的含色原基团的底物在酶的作用下释放出有色物质，利用分光光度计比色测定有色物质的含量计算酶活。如木聚糖酶活力的测定。该法操作简单、重现性好，但酶作用于合成底物与天然底物的效果有一定区别，用合成底物测定的酶活并不能代表酶制剂在应用于天然饲料时所能发挥的酶活大小。2.2 黏度法这种方法是根据酶能够降低一定浓度的标准底物（控制pH值、温度等条件）的黏度的能力来确定酶的活性。利用的底物主要有化学合成的底物（如CMC 用于纤维素酶的测定） 和自然提取的底物（如小麦阿拉伯木聚糖用于木聚糖酶的测定）。测定的酶的活性值是通过与同时测定的标准酶活性的比较，来确定酶的活性。该法可用于木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶等酶活测定。这种方法的特点是通过降低底物的粘度来反映酶的活性，这也正是酶在体内起作用的重要特征。该法虽然灵敏度较高，但重现性差，操作复杂费时，应用难于普及。2.3 免疫学法用于酶活性分析的免疫学法包括ELISA 法和免疫凝胶扩散法。这两种方法是根据酶与抗体之间发生反应，然后ELISA 法通过第二步反应，凝胶扩散法则通过印染过程来确定酶的活性。这些方法非常灵敏，能够检测到极低水平的酶蛋白。但它们的缺点是对于每个产品的酶需要特殊的抗体，另外抗体能够与非酶蛋白质发生反应。由于抗体本身所用的蛋白质是特定的，因此，由不同生产者生产的同种类型的酶之间是没有交叉性的。另外，采用实验动物的敏感性也值得探讨。2.4 凝胶扩散法这种方法是将酶作用的底物与某种凝胶混合后倒入培养皿中，凝固之后，在凝胶上切开一条凿，倒入标准酶液和测试酶液。培养一定时间后，在切开的凝胶周围能够看到水解区域，区域的大小与酶的含量成正比。在某些情况下，还可以再加入其他试剂来显示水解的区域。如木聚糖酶活力的测定。这种方法虽然简单，但培养时间长。因为这种方法是根据区域的大小来确定酶的活性，所以其准确性要低于其他非扩散的方法。2.5 比浊法以酵母或酵母细胞壁在缓冲溶液中的浊度或吸光度的降低来表示酶活力，如β-葡聚糖酶活力的测定。2.6 体外模拟消化技术酶活测定毕竟不能反映外源酶在机体内真实的作用效果，因此，对于体外法评定饲料营养价值的研究不断增加。体外法评定饲料营养价值是通过模拟消化道内温度、pH、消化酶分泌、胃肠运动和养分吸收等参数，在体外建立一套与畜禽消化道内环境接近的操作程序，对饲料及酶制剂进行营养价值预测和评定。常用的体外模拟消化技术包括：①胃蛋白酶—胰酶法；②胃蛋白酶—小肠液法；③胃蛋白酶—胰酶—瘤胃液法；④胃蛋白酶—胰酶—碳水化合物酶法。由于不同的饲料用酶是不同的微生物通过发酵过程产生的，酶产品的酶学性质差别较大。并且各种微生物所分泌的酶的最佳pH 值、温度和对底物的亲和性都不相同。而目前，饲用酶除植酸酶、纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶有正式颁布的国标或行标酶活测定方法外，其他饲用酶制剂目前都还没有一个统一的定义及检测标准。因此，饲料厂家在比较不同厂家的酶制剂时，在没有统一的测定方法情况下，应首先确定自己认可的检测方法，然后在完全相同的测定条件进行检测，这样得出的结论才具有可比性。3 酶制剂活性测定影响因素的分析饲用酶制剂活性测定的主要影响因素有温度、pH、作用时间、底物等4大要素以及一些非定义要素，如酶液稀释度、标准曲线、显色剂、缓冲液等，下面就这几方面进行归纳分析一下：3.1 影响饲用酶制剂活性测定的四大要素所谓的酶活性就是指在特定的系统和条件下测到的反应速度。为了确保酶制剂测定结果的一致性，饲用酶制剂活性单位定义中对影响酶活大小的主要条件进行了规定，其中包括温度、pH 值、时间和底物，这些都是酶活力测定系统中最重要的因素，对酶促反应速度影响很大。3.1.1 温度对酶活测定的影响 酶制剂对温度非常敏感，在检测过程中对温度的控制则显得非常重要。温度对酶活性影响主要表现在两个方面：一方面，是当温度升高时，酶与底物的反应速率加快；另一方面，由于随着温度的升高将使酶的稳定性下降，部分酶蛋白分子逐渐变性而失去活性，引起酶反应速率下降。温度的这两种影响的综合作用而产生酶反应的“最适温度”。对于不同的酶制剂在不同的情况下最适温度是有一定的差别。研究木聚糖酶时发现，在30℃～40℃条件下酶活较稳定，50℃后随着温度的升高，酶活力开始下降，90℃时基本失活。研究纤维素酶最适酶解条件时发现，在36℃～58℃之间纤维素酶相对酶活随着温度升高而升高，当温度在58℃～62℃之间时，相对酶活性没有明显变化，曲线近似呈水平状态，在40℃、45℃、50℃条件下，其相对酶活分别为56%、70%、80%，而当温度大于58℃以上时相对酶活不再升高。同时，酶在不同条件下适宜温度也可能要受到酶的纯度、底物、激活剂、抑制剂以及酶促反应时间等因素的影响。3.1.2 pH 对酶活测定的影响 pH 值在酶活测定时对测定结果影响很大，各种酶制剂在一定条件下都有其特定的最适酶解pH，酶的最适pH 会随着底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度的不同而改变，因此最适pH 也只有在一定条件下才有意义。pH 影响酶活力的原因可能有以下几个方面：① 过酸或过碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶构象的改变，也影响酶活性部位催化基团和结合基团的解离状态，酶活性丧失；② 当pH 改变不是很剧烈时，酶虽未变性，但酶活受到了影响。pH 影响了底物的解离状态，或者使底物不能和酶结合，或者结合后不能生成产物。pH 影响酶分子活性部位上有关基团的解离，从而影响与底物的结合或催化，使酶活性降低可能影响到中间络合的解离状态，不利于酶解生成产物；③ pH 影响维持酶分子空间结构的有关基团解离，从而影响了酶活性部位的构象，进而影响酶的活性；④ pH 影响底物的带电状态。这些都直接影响酶和底物的亲和力，影响酶解反应速度。有文献报道，很多酶最适酶解pH 都在3.0～6.0。研究不同pH 值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性的影响发现，在pH 值3.6 以下，随着pH 值的增大，木聚糖酶的活性逐渐升高；pH 值为3.6 时，木聚糖酶的活性最高，且在3.

用分光光度计测酶活，步骤是这样的，先用蒸馏水调一次零，然后测了一次空白管，然后测的六组测定管。结果套完公式，酶活结果出现负数是为什么？没测一个样品都要调零，还是最开始调一次零就可以，如果我有空白管，那我应该用蒸馏水调零还是空白管？

小小一颗话梅中，到底有多少添加剂？记得在某一知名相亲节目中，有一位从事营养学研究的男嘉宾，他声称绝不找爱吃话梅的女朋友，因为一颗话梅需要肝脏解毒3天！话梅真的有这么大的毒性吗？它的制作工艺究竟是什么样的？到底用了多少食品添加剂呢？爱吃话梅的楼主想到这个问题都会觉得害怕。小小一颗话梅，你到底含有多少添加剂？

糖化酶和高温酶活性的测定我们用分光光度计来测,要求波长660,但是,由于酶的活性比较高,每次测定都要稀释,有一个稀释倍数,这个稀释倍数需要算出来,不知道怎样才能算得准确,和算的方法.稀释倍数不对就测不出来.请求帮助!!!

－防霉剂的分析－ Analysis of Fungicides ■ 前言 Introduction 用于收获后农产品的杀菌剂、防霉剂被称为收获后农药。在日本禁止向收获后的农作物播 撒农药，但在从海外进口的水果、谷物中有可能出于农作物收获后的保管或防止运输中的霉繁 殖而使用收获后农药。为了管理收获后农药的残留，日本对于防霉剂、防虫剂作为食品添加剂 设置了残留标准值。除水果等农作物以外，在食安监发第1113001号对于一次性筷子中残留的防 霉剂规定了试验方法。其中，防霉剂分析多采用HPLC法。一次性筷子的试验法规定采用基于HPLC 的定量分析方法，但作为检出防霉剂时的确认试验方法，规定采用GC/MS分析法。 本应用新闻介绍使用GC/MS确认分析一次性筷子、柠檬果汁中的防霉剂：邻苯基苯酚(OPP)、 噻菌灵(TBZ)、联苯(DP)、抑霉唑的结果。 注：邻苯基苯酚(OPP)、 噻菌灵(TBZ)、联苯(DP)、抑霉唑是防霉剂，不是食品添加剂。

在用连续监测法测定酶活力时，分光光度计一定要有保温装置吗？用普通的分光光度计可以测定吗

每逢黄梅时节，江南一带常常是阴雨绵绵，气候潮湿，东西特别容易生霉。东西为什么会发霉呢？主要是因为在物体表面生长繁殖了一种或几种霉菌。霉菌是一种由蛋白质构成的微生物。这些霉菌在温暖、潮湿的环境里生长、繁殖得特别快，有时伸展到物体内部，有时会长出一大片来，这时物体就发霉了。如果霉菌附着在衣服上，会分泌出一种酶，分解纤维素，产生霉班，使织物的强度显著降低。在日常生活中，我们经常用樟脑丸来防止衣物被虫蛀。工业上常用的防霉剂，是汞的有机化合物——硫柳汞。醋酸苯汞、甲基丙烯酸苯汞、油酸苯汞、硬脂酸苯汞等，只要在物品中加入0.l％左右，就有良好的防霉效果。这是因为微生物与这些有机汞接触后，汞就侵入微生物体内，与蛋白质生成汞盐沉淀，将霉菌杀死。所以放有防霉剂的地方，霉菌就不能生存，东西就不会发霉。然而，有机汞的不足之处是毒性很大，容易产生副作用，因此，目前已逐步被高效低毒的山梨酸，尿囊素等新防霉剂所代替。现在，各种防霉剂的应用范围很广。油漆中放了防霉剂，机械、电器设备表面喷涂的油漆在湿度较大的地方也不会生霉；电缆中放了防霉剂，就能保证电缆在水底或地下不会生霉，电影机和照相机镜头、包装纸张等也都要应用防霉剂。

美疾控中心专家：美实际感染数或比报告数高2到7倍。美媒：国因新冠死亡的总人数已超过了二战美国战死的总人数；

中国人真的很聪明，实在是太聪明了，但有的聪明没有用在正地方，正应验了一句话，不怕贼偷，就怕贼有文化，这不，有文化的某些人又来祸害人了。先说早期比较火热的抗生素，给牛打了药，奶里就残留抗生素。于是奶站拒收，奶被倒掉。后来聪明人发明了B-内酰胺酶，加入奶中，再去检测，就检测不出来抗生素了，聪明吧，正所谓道高一尺魔高一丈。后来研究发现，B-内酰胺酶及其分解抗生素的产物，其对人的危害比抗生素本身还大。这不，现在检出黄曲霉毒素了，又有人搞出脱霉剂，对黄曲霉进行一些处理，奶里面就检测不出黄曲霉了。但这种脱霉剂本身是否会残留在奶中，而这些残留对人又有多大危害呢？或脱霉剂与黄曲霉毒素反应后生成的产物，其毒性会更大呢？这一点只是我个人观点，但这个问题确实存在，不知道有没有搞这方面研究，一起聊聊。首先说说脱霉剂，一般市售的脱霉剂，大致可分为矿物质吸附剂类、酵母细胞壁类、微生物类、酶制剂类、混合类等很多种。据有关报道，在国内，矿物质吸附剂类的脱霉剂使用率最高。例如：水合铝硅酸盐类，膨润土，蒙脱石等。这类的脱霉剂主要我觉得是吸附性的，没学过兽医，但我感觉这个对牛不好，改天我咨询一下我们单位兽医方面的专家。这种脱霉剂成本较低，掺杂在饲料中，让牛给吃了，估计在牛的肠胃里也不能消化，对牛的寿命也有影响，估计在奶里的残留应该也不少。吸附性的脱霉剂是在饲料中添加可以吸附霉菌毒素的物质，使毒素在经动物肠道时不被动物所吸收，直接排出体外。厂家的人肯定会这么宣传，矿物质吸附剂类脱霉剂，不会被牛吸收，不产生有害物质，也不会对饮奶人造成伤害。但我个人不太相信，除非拿出科学数据来。吸附性脱霉剂的缺点：在吸附饲料中霉菌毒素的同时，也吸附了饲料中的部分维生素和微量元素。同时，其吸附作用有限。还有另一类脱霉剂，说白了就是防腐剂。我个人觉得这些东西，添加在食品中就是食品防腐剂，添加在饲料中就是脱霉剂。其作用都是一样的，就是防止饲料或食品发霉，产生霉菌，进而产生真菌毒素。我猜测可能这类脱霉剂会使用在食品中淘汰的一些防腐剂，但其成本比较低的，添加在饲料中，防止饲料的霉变。不管添加哪种脱霉剂在饲料中，我的观点：要先验证这种脱霉剂在奶中的残留，残留后对人体的影响，要多很多毒理学的实验，而且这个过程要持续好几年，要做小白鼠实验，最后灵长类的，最后才能确认其毒性。而现在在国内，说句难听的，人都代替小白鼠直接实验了，没问题长期使用，吃出问题来禁止，然后大搞检测运动，三聚氰胺就是例子。所以，这次，期望中国最强大的有关部门防患未然，提前将脱霉剂扼杀在萌芽状态，在做好黄曲霉毒素检测的同时，将脱霉剂一起纳入监管范围，谢谢！！！

气质联用仪 面积比没显示 怎么办？

[align=center]几种酶的酶活力检测方法及结果分析[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心：王涛[/align]大蒜属百合科葱属植物蒜的鳞茎，其风味独特，营养丰富，用途十分广泛。在生产上，大蒜不能通过杂交制种，只能采用其鳞茎繁殖，由于长时间的营养繁殖造成植株体内病毒积累，使得蒜头变小，品种退化，产量降低，大大降低了大蒜的商品价值。大蒜在长期的生长过程中，由于受到病原菌的植物的附着与侵入，会产生自身的抗性机制，其中的保护性反应是复杂的新陈代谢的结果，其生理反应是通过酶催化活动来实现的。这些酶包括抗病性酶超氧岐化酶SOD，多酚氧化酶PPO和过氧化物酶POD等，以及感病性酶纤维素酶和果胶酶。本文主要描述了大蒜苗中的SOD，PPO，POD，纤维素酶和果胶酶的酶活力检测方法，并从酶活的角度分析，大蒜茎尖脱毒技术可以有效提高SOD，PPO，POD等与植物抗病性有关的酶的活性，而与植物感病性有关的酶的活性如纤维素酶和果胶酶的活性有所降低，其中脱毒苗中的SOD，PPO和POD的活性分别比未脱毒苗相应地高出93.37 U/g，19.48 U/gmin和382.55 U/gmin，纤维素酶和果胶酶的活性则分别低出18.29 U/gmin和38.08 U/gmin。这就从植物生理的角度上验证了脱毒大蒜苗抗病和高产的原因。[b]1实验药品及仪器1.1缓冲液的配置[/b]1.1.1磷酸缓冲液的配置首先分别配置母液A、B，再根据质量分数分别取对应的母液，调pH即可。母液A：0.2 mol/L Na[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]溶液：称量71.63 g Na[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]12H[sub]2[/sub]O，定容至1 L。母液B：0.2 mol/L NaH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]溶液：称量31.21 g NaH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]2H[sub]2[/sub]O，定容至1 L。0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH7.8，内含1%PVP)：22.875 mL A +2.125 mL l B+1 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，稀释至100 mL。0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)：3.075 mL A + 21.925 mL B，稀释至100 mL。0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)：12.3 mL A + 87.7 mL B，稀释至200 mL。1.1.2醋酸缓冲液的配置同磷酸缓冲液一样，先配置母液。母液A：0.2 mol/L HAc溶液：吸取11.5 mL 醋酸溶液，定容至1 L。母液B：0.2 mol/L NaAc溶液：称量27.2 g 三水合乙酸钠，定容至1 L。0.2 mol/L (pH4.6) 醋酸缓冲液：51 mL A + 49 mL B混合均匀即可。0.2 mol/L（pH4.8）醋酸缓冲液：40 mL A + 60 mL B混合均匀即可。1.1.3其他试剂的配置100 umol/L EDTA-Na[sub]2[/sub]溶液：称取0.03721 g EDTA-Na[sub]2[/sub]，用磷酸缓冲液定容至1 L。20 umol/L核黄素：称取0.00753 g核黄素定容至1 L。130 mmol/L甲硫氨酸（Met）：称取1.9399 gMet，用磷酸缓冲液定容至100mL。750 umol/L氮蓝四唑（NBT）：称取0.06133 g NBT，用磷酸缓冲液定容至100 mL。0.1 mol/L邻苯二酚：称取1.1011 g邻苯二酚定容至100 mL。20%三氯乙酸（TCA）：称取20 g TCA定容至100 mL。二氧甲基酚即愈创木酚30%H[sub]2[/sub]O[sub]2 [/sub]3,5-二硝基水杨酸显色剂（DNS显色剂）：称取2.5 g DNS溶于水中，加入2.5 g氢氧化钠、50 g酒石酸钾钠和100 mL水，加热溶解后再加入0.5 g苯酚和0.125 g无水亚硫酸钠，待全部溶解后冷却，定容至500 mL，贮于棕色瓶中，放置一周后使用，用之前过滤[sup][/sup]。葡萄糖标准液：称取0.54 g葡萄糖定容至500 mL。纤维素底物（CMC）：称取0.625 g羧甲基纤维素钠溶于0.2 mol/L (pH 4.6) 醋酸缓冲液中，定容至100 mL。果胶底物：称取0.5 g果胶溶于0.2 mol/L (pH 4.8) 醋酸缓冲液中，定容至100 mL，放置冰箱内冷藏。D-半乳糖醛酸标准液：称取0.1 g D-半乳糖醛酸溶于0.2 mol/L (pH 4.8) 醋酸缓冲液中，定容至100 mL。[b]1.2主要实验仪器[/b]紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司可见光分光光度计 上海第三分析仪器厂TCL-16C型台式离心机 上海安亭科学仪器厂超净工作台 上海博迅实业有限公司医疗设备厂电热恒温水浴锅 上海跃进医疗器材厂灭菌器 上海申安医疗器械厂海尔冰箱 青岛海尔集团电子分析天平 北京赛多莉斯天平有限公司数显pH计；恒温光照培养箱；制冰机；计时器；[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]；试剂瓶；容量瓶。[b]2实验方法2.1材料[/b]大蒜脱毒试管苗：采用大蒜茎尖组织脱毒技术，经过3次继代培养所获得的生长健壮脱毒苗。大蒜苗植株：将市售山东金乡大蒜，分瓣去皮后，栽种于花盆中，日光照射，生长两个月之后所得植株。[b]2.2方法[/b]共测两组植株（第一组为大蒜脱毒苗，第二组为大蒜苗植株即未脱毒苗）的五种酶的酶活，这五种酶分别是超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、纤维素酶和果胶酶，最后将两组酶活数据分别做对应比较。同一植株做三次平行实验，取平均值。[b]3酶活测定3.1超氧物歧化酶（SOD）活力的测定[/b]本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，这种自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙。后者在560 nm处有最大吸收，而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。3.1.1粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中，加入1 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.8,内含1%PVP)在冰浴下研磨匀浆，匀浆液装入2 mL离心管中，在4000 r/min下离心10 min，取上清液，冷藏待用。3.1.2显色反应取7只5 mL透明度好的试管，用记号笔编号，1为空白管，2~4为测定管，5~7为对照管。各管按照表3-1依次添加试剂溶液，混匀后，将空白管置于暗处，其它各管置于4000 lx日光灯下反应20 min。[align=center]表1 测定SOD活性试剂添加量[/align][align=center]Table 1 The add content of reagent to SOD[/align][table][tr][td][align=center]试剂[/align][/td][td][align=center]用量/ mL[/align][/td][td][align=center]备注[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.05 mol/L磷酸缓冲液[/align][/td][td][align=center]1.5[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]130 mmol/L Met[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]750 umol/L NBT[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td=1,2][align=center]总体积为3.0 ml，对照管与空白管加入缓冲液代替酶液[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]100 umol/L EDTA-Na[sub]2[/sub][/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]20 umol/L 核黄素[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]酶液[/align][/td][td][align=center]0.05[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]蒸馏水[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][/table]3.1.3活力测定与计算以暗处管为空白，分别测定其它各管在560 nm波长下的吸光度（OD）。以抑制NBT光化还原的50%作为一个酶活性单位（U）表示。按下式计算SOD的总活性：SOD总活性（U/g）=（A[sub]o[/sub]-A[sub]s[/sub]）*V[sub]t[/sub]/ A[sub]o[/sub]*0.5*W*V[sub]1 [/sub]（公式3-1）式中：SOD总活性以每克鲜质量的酶单位表示（U/g）；A[sub]o[/sub]-照光对照管的吸光度；A[sub]s[/sub]-样品管的吸光度；V[sub]t[/sub]-样品液总体积（mL）；V[sub]1[/sub]-测定时样品液用量（mL）；W-样品鲜质量（g）。[b]3.2多酚氧化酶（PPO）活力的测定[/b]多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌，其活性可以用比色法测量产物的形成，邻苯二酚是其常用的底物。3.2.1粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中，加入2 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0)，在冰浴下研磨匀浆，匀浆液装入2 mL离心管中，在4000 r/min下离心15 min，取上清液，冷藏待用。3.2.2活力测定与计算取2支试管，一支为空白对照管，对照管中加入1 mL酶液+3 mL 0.05 mol/L(pH 6.0)磷酸缓冲液；另一支为测定管，测定管中加入1 mL酶液+1 mL 0.1 mol/L邻苯二酚+2 mL 0.05 mol/L(pH 6.0)磷酸缓冲液。然后在37 ℃水浴保温10 min，立即冰浴，冷却下来之后，各管加入2 mL 20% TCA终止反应。立即在410 nm波长下测定吸光度，每min测一次，共测3 min。以每min内吸光度变化0.01为酶活性单位（U）。PPO活性（U/gmin）=ΔA*V[sub]0[/sub]/0.01W*V[sub]1[/sub]*t [sub] [/sub]（公式3-2）式中：ΔA = A[sub]s[/sub]-A[sub]o[/sub]；A[sub]o[/sub]-对照管的吸光度；A[sub]s[/sub]-测定管的吸光度；V[sub]0[/sub]-酶液提取总量（mL）；V[sub]1[/sub]-测定时酶液用量（mL）；W-样品鲜重（g）；t-反应时间（min）。[b]3.3过氧化物酶（POD）活力的测定[/b]选用愈创木酚法，即在过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。3.3.1反应混合液的制备量取50 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH6.0），加入28 uL二氧甲基酚，加热搅拌至溶解，冷却后再加入19 uL 30% H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]，混合均匀保存于冰箱中。3.3.2粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中，加入5 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0)，在冰浴下研磨匀浆，匀浆液装入2 mL离心管中，在4000 r/min下离心15 min，取上清液，冷藏待用。3.3.3活力测定与计算取2只比色杯，一只加入2 mL反应混合液和1 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0)，作为校零对照；另一只加入2 mL反应混合液和1 mL酶液，立即开启秒表计时器，在470 nm波长下测定吸光度，每隔1 min读数一次。以每min吸光度变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（U）。POD活性=△A*Vt /0.01W* V[sub]1[/sub]*t （公式3-3）式中：△A-反应时间内吸光度的变化量；V[sub]t[/sub]-酶液总体积（mL）；V[sub]1[/sub]-测定时酶液用量（mL）；W-样品鲜重（g）；t-反应时间（min）。[b]3.4纤维素酶活力的测定[/b]选用DNS法测定纤维素酶活力。DNS法测定的是纤维素酶对羧甲基纤维素钠（CMC）的糖化能力，其水解产物如纤维二糖和葡萄糖是还原糖，可以将DNS还原成棕红色的氨基化合物，在一定浓度范围内，还原糖的量与该物质溶液颜色的深浅成比例，因此可以用分光光度计进行测定，该方法可表示纤维素酶的总活力。3.4.1绘制葡萄糖标准曲线取5支试管，用记号笔编号后，按表3-2量取试剂，每管分别加入1 mL 2 mol/L氢氧化钠和2 mL DNS显色液，摇匀后置于沸水浴中加热5 min，流水冷却，用蒸馏水定容至10 mL，静置20 min后以1号管为对照于490 nm波长处测吸光度，绘制标准曲线。[align=center]表2葡萄糖标准曲线制作表[/align][align=center]Table 2 Standard curve of Glucose[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td]标准葡萄糖溶液（mL）[/td][td]0.2 mol.L[sup]-1[/sup]，pH4.6醋酸钠缓冲溶液（mL）[/td][td][align=center]试管中葡萄糖量（umol）[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]4.6[/align][/td][td][align=center]2.4[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]4.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]4.2[/align][/td][td][align=center]4.8[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]6.0[/align][/td][/tr][/table]3.4.2粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中，加入2 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.6)，在冰浴下研磨匀浆，匀浆液装入2 mL离心管中，在4000 r/min下离心15 min，取上清液，装入离心管中再离心10 min，定容至10 mL，冷藏待用。3.4.3活力测定与计算取3支试管，一支作为空白对照，另2支作为平行样品。样品管中加入50℃预热的酶液1 mL，底物溶液（CMC）4 mL；空白对照管加4 mL底物溶液（CMC）。3支试管放入50℃水浴中，5 min后取出，立即加入1 mL 2mol/L NaOH溶液和2 mL DNS显色剂。摇匀后，空白对照管中加入1 mL酶液，立即将3支试管放入沸水浴中，反应5 min后取出，流水冷却，定容至10 mL，在490 nm波长处测吸光度。用测得的OD值在标准曲线上差得相应的葡萄糖的量，代入下面公式计算活力。以每min催化纤维素水解成1 umol葡萄糖的酶量表示酶活大小（U）。纤维素酶活性（U/gmin）=葡萄糖量/5*E* W （公式3-4）式中：5为反应时间（min）；Ew为1 mL酶液中含有的酶量（g）；W-样品鲜重（g）。[b]3.5果胶酶活力的测定[/b]选用DNS法测定果胶酶活力。该方法是利用果胶酶在一定温度，时间和条件下水解果胶，释放出还原性D-半乳糖醛酸，与3,5-二硝基水杨酸共热产生棕红色的氨基化合物，即发生显色反应。在一定范围内，水解生成D-半乳糖醛酸的量与吸光度成正比，与果胶酶活力成正比，通过分光光度计测定吸光度，可以计算出果胶酶的活力。3.5.1绘制D-半乳糖醛酸标准曲线取6支试管，编号后依次按照表3-3加入试剂，摇匀后置于沸水浴中反应5 min后，冷却，用蒸馏水定容至10 mL，静置20 min后以1号管为对照于540 nm波长处测吸光度，绘制标准曲线。[align=center]表3[b] [/b]D-半乳糖醛酸标准曲线的绘制[/align][align=center]Table 3 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td]D-半乳糖醛酸标准液（mL）[/td][td]0.2 mol.L[sup]-1[/sup]，pH4.8醋酸缓冲液（mL）[/td][td][align=center]DNS显色液（mL）[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]0.2[/align][/td][td][align=center]3.8[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]3.4[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]3.2[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]3.0[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][/table]3.5.2粗酶液的提取与提取纤维素酶的方法相同。3.5.3活力测定与计算取5支试管，用记号笔编号。1、2号管为样品管，分别加入1 mL果胶底物，在48℃水浴中预热5 min，再分别加入4 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8)，之后，1号管中加入1 mL酶液，立即摇匀，在48℃水浴中反应30 min；2号管中加入1 mL酶液，立即放入沸水浴中反应5 min，冷却。分别取1、2管中容液各2 mL于3、4管中，并加2 mL水，2.5 mL DNS显色剂，混匀，沸水浴反应5 min，流水冷却。5号管加入4 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8)，2.5 mL DNS显色剂，静置20 min后以5号管为对照校零，在540 nm波长处测3、4管的吸光度；用测得的（OD[sub]3[/sub]-OD[sub]4[/sub]）值在标准曲线上查得相应的D-半乳糖醛酸的量，代入下面公式计算活力。以每min酶作用生成的D-半乳糖醛酸的量为一个酶活单位（U）。果胶酶活性（U/ gmin）=Y*3*N/t* W [sub] [/sub]（公式3-5）式中：Y-酶作用生成的D-半乳糖醛酸的量；3-测酶活取了反应液的1/3；N-样品稀释倍数；W-样品鲜重（g）；t-反应时间（min）[b]4标准曲线的绘制4.1葡萄糖标准曲线[/b]依照3.4.1步骤，最后测得各个试管中的吸光度依次为0，0.432，0.672，0.865，1.073。按照表4，以葡萄糖浓度为横坐标，490 nm处的OD值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线（如图1）。[align=center]表4葡萄糖标准曲线[/align][align=center]Table 4 Standard curve of Glucose[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]葡萄糖浓度umol[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]2.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]4.8[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]490 nm OD[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.432[/align][/td][td][align=center]0.672[/align][/td][td][align=center]0.865[/align][/td][td][align=center]1.073[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,580,219]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010439441511_1108_2904018_3.png!w580x219.jpg[/img] [/align][align=center]图1葡萄糖标准曲线[/align][align=center]Figure 1 Standard curve of Glucose[/align][b]4.2 D-半乳糖醛酸标准曲线[/b]依照3.5.1步骤，最后测得各个试管中的吸光度依次为0，0.211，0.384，0.561，0.743，0.965。按照表5，以D-半乳糖醛酸的量为横坐标，540 nm处的OD值为纵坐标，绘制D-半乳糖醛酸标准曲线（如图2）。[align=center]表5 D-半乳糖醛酸标准曲线[/align][align=center]Table 5 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]D-半乳糖醛酸的量mL[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.2[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]540 nm OD[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.211[/align][/td][td][align=center]0.384[/align][/td][td][align=center]0.561[/align][/td][td][align=center]0.743[/align][/td][td][align=center]0.965[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,579,188]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010440011153_826_2904018_3.png!w579x188.jpg[/img] [/align][align=center]图2 D-半乳糖醛酸标准曲线[/align][align=center]Figure 2 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][b]5结果与分析[/b]将所测得的OD值，根据各个公式计算出SOD，PPO，POD，纤维素酶和果胶酶的酶活力，结果如表6所示。再将大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果做成柱状图进行比较，如图3所示。可以看出，脱毒试管苗中的SOD，PPO，POD的活性均高于未脱毒试管苗的对应酶的活性，而这三种酶都与植物的抗病性有关，说明在抗病性上脱毒试管苗强于未脱毒试管苗；纤维素酶和果胶酶的活性则是未脱毒苗比脱毒试管苗高。此外，作为植物抗氧化系统第一道防线的SOD，其活性大小在脱毒试管苗与未脱毒苗中相差93.37 U/g，前者比后者高出约1.5倍，说明经脱毒的试管苗抵御活性氧侵害的能力更高。PPO能催化木质素及其他酚类氧化物的形成，从而构成保护性屏蔽，抵抗抗病菌的入侵，也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。脱毒试管苗的PPO活性比未脱毒苗的PPO活性高出19.48 U/gmin，约2.45倍。说明脱毒苗在抵抗抗病菌的入侵方面，能力更强。在植物对病原菌侵染的防卫反应中，POD和SOD都有着极其重要的作用，SOD能有效的清除机体内的超氧自由基，它可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢，而POD可以将过氧化氢分解为完全无害的水，在脱毒试管苗与未脱毒苗中POD的活性均比较大，两者相差382.55 U/gmin，约1.7倍，说明经脱毒的试管苗可以更有效的抵御过氧化氢的毒害。而纤维素酶和果胶酶均与植物的感病性有关，其活性则是未脱毒苗比脱毒试管苗高，分别高出18.29 U/gmin和38.08 U/gmin，约2.4倍和1.2倍，说明脱毒苗的感病几率有所降低。POD不仅可以将过氧化氢分解为完全无害的水，而且还具有多种生理功能，如从叶绿体和细胞质中去除过氧化氢、氧化有毒化合物、合成细胞壁、对各种胁迫的应急、吲哚-3-乙酸的调控、乙烯的生物合成等，还参与了植物酚类的聚合和氧化以及木质素和植保素的合成。因此POD是植物体中活性较高的一种酶，从图3中也可以看出，POD的活性在五种酶中最高。[align=center]表6 大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果[/align][align=center]Table 6 Enzyme activity assay results between virus-free garlic in vitro and not virus-free plantlets[/align][table][tr][td][align=center]酶总活性[/align][/td][td][align=center]SOD[/align][align=center](U/g)[/align][/td][td][align=center]PPO[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]POD[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]纤维素酶[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]果胶酶[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]脱毒苗[/align][/td][td][align=center]157.46[/align][/td][td][align=center]27.43[/align][/td][td][align=center]610.95[/align][/td][td][align=center]7.77[/align][/td][td][align=center]31.97[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]未脱毒苗[/align][/td][td][align=center]64.09[/align][/td][td][align=center]7.95[/align][/td][td][align=center]228.40[/align][/td][td][align=center]26.06[/align][/td][td][align=center]70.05[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,564,289]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010440223303_2970_2904018_3.png!w564x289.jpg[/img] [/align][align=center]图3大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果比较[/align][align=center]Table 3 Comparison of enzyme activity assay results between virus-free garlic in vitro and not virus-free plantlets[/align]