人白细胞干扰素

p style="text-align: center "img title="001.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/ba35b535-be8a-430c-81ba-e344d5c787ab.jpg"//pp　　同样的问题，60年前也被人问过。当时，前苏联《病毒学杂志》的编辑特意询问：“侯云德是谁?他是什么样的人物?他的论文怎么会发表这么多?”不怪编辑好奇，这位中国留学生在前苏联学习的3年半时间，发表了17篇学术论文，并在仙台病毒等研究上取得了一系列重大突破，最终直接越过副博士，被原苏联高等教育部破格授予医学科学博士学位。/pp style="text-align: center "img title="002.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/4e6d6c88-1dee-4d5c-9568-705da3660e81.jpg"//pp style="text-align: center "strong侯云德院士留学苏联照片/strong/pp　　一辈子与病毒打交道，作为我国分子病毒学和基因工程药物的开拓者，侯云德说：“认识世界的目的应当是要改变世界，学习病毒学、研究病毒学，目的应当是预防和控制病毒，为人类做出更加切身的贡献。”/pp style="text-align: center "img title="003.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/73c8e6ed-ec14-4d7a-ac34-6967c4deb849.jpg"//pp style="text-align: center "strong侯云德院士在病毒基因工程国家重点实验室大楼门口留影/strong/pp　　“道固远，笃行可至 事虽巨，坚为必成”，集毕生精力编织传染病防控网络/pp　　2008年，侯云德79岁。这一年，他被国务院任命为“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项技术总师。/pp　　这时，距离2003年的“非典”疫情已经过去5年。公众或许已淡忘了当时的恐慌，侯云德却不敢忘。“‘非典’来得太突然，我们没有准备，病毒研究不充分，防控体系太薄弱了。传染病在历史上是可以让一个国家亡国的，老的控制了，还会不断出现新的，传染病防控绝对不能轻视!”这位少时立志学医、并且要当名医的科学家，一生都在为祖国的防病事业而奋斗。/pp　　本该颐养天年的年龄，侯云德又忙碌起来，担负起我国现代传染病防控体系顶层设计的重任。他带领专家组，设计了2008-2020年降低“三病两率”和应对重大突发疫情的总体规划，主导建立了举国体制协同创新的传染病防控技术体系，全面提升了我国新发突发传染病的防控能力。/pp　　第一次挑战很快来临!/pp　　2009年，全球突发甲流疫情，国外死亡人数上万名。在国务院领导下，我国成立了由卫生部牵头、38个部门组织的联防联控机制，侯云德作为专家组组长，针对防控中的关键科技问题，开展多学科协同攻关研究。“这个组长可不好当，相当于坐在火山口上，责任重大。一旦判断失误，防控不当，疫情就有可能蔓延。”中国疾病预防中心病毒病预防控制所副所长董小平研究员回忆说。/pp　　当时，我国仅用87天就率先研制成功新甲流疫苗，成为全球第一个批准甲流疫苗上市的国家。世界卫生组织建议注射两剂，侯云德则提出不同观点：“新甲流疫苗，打一针就够了!”/pp　　在疫情随时有可能爆发的情况下，提出这一建议的侯云德，承担的压力可想而知。打两针是国际共识，只打一针，万一达不到免疫效果呢?/pp　　“科学家要敢讲真话，为国家和人民着想，不能只计较个人得失。”侯云德是有底气的。依据长期积累的经验，结合新疫苗的抗体反应曲线和我国当时的疫苗生产能力和注射能力，侯云德坚定地提出了一次接种的免疫策略。最终，这一方案大获成功，世界卫生组织也根据中国经验修改了“打两针”的建议，认为一次接种预防甲流是可行的。/pp　　2009年的甲流疫情，我国取得了“8项世界第一”的研究成果，实现了人类历史上首次对流感大流行的成功干预。据来自清华大学第三方的系统评估，我国甲流的应对措施大幅度降低了我国发病率与病死率，减少2.5亿发病和7万人住院 病死率比国际低5倍以上。这一重大研究成果获得世界卫生组织和国际一流科学家高度赞赏和一致认同，获得2014年国家科技进步一等奖。/pp　　侯云德提出了应对突发急性传染病的“集成”防控体系的思想，重点布置了病原体快速鉴定、五大症候群监测、网络实验室体系建立的任务，全面提升了我国新发突发传染病的防控能力，使我国成功应对了近十年来国内和国际数次的重大传染病疫情。“MERS、寨卡、H1N1等病毒在我国都没有流行起来，N7N9也得到了有效控制，我国在传染病防控方面的能力大幅提升，进入世界一流行列。侯院士作为这一体系的总师，功不可没。”卫计委科教司监察专员、“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项实施管理办公室主任刘登峰表示。/pp style="text-align: center "img title="004.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/9098ed3f-6e0a-48d1-806b-f89717141406.jpg"/p style="text-align: center "strong中国预防医学科学院1992年工作会议/strong/pp　　是“中国干扰素”之父，更是杰出的战略科学家/pp　　侯云德是一位科学家，更是一名战略科学家。他的很多科研成果和举措，在当时都是具有前瞻性和开创性的，并且影响深远。/pp　　“中国干扰素”之父，是业内不少人对侯云德的尊称。20世纪七八十年代，美国、瑞士等国的科学家以基因工程的方式，把干扰素制备成治疗药物，很快成为国际公认的治疗肝炎、肿瘤等疾病的首选药，但价格极为昂贵。/pp　　侯云德敏锐地捕捉到基因工程这一新技术，1977年，美国应用基因工程技术生产生长激素释放因子获得成功，这一突破使侯云德深受启发：如果将干扰素基因导入到细菌中去，使用这种繁衍极快的细菌作为“工厂”来生产干扰素，将会大幅度提高产量并降低价格。他带领团队历经困难，终于在1982年首次克隆出具有我国自主知识产权的人α1b 型干扰素基因，并成功研制我国首个基因工程创新药物——重组人α1b 型干扰素，这是国际上独创的国家I类新药产品，开创了我国基因工程创新药物研发的先河。α1b 型干扰素对乙型肝炎、丙型肝炎、毛细胞性白血病等有明显的疗效，并且与国外同类产品相比，副作用小，治疗病种多。这项研究成果获得了1993年国家科技进步一等奖。此后，侯云德带领团队又相继研制出1个国家I类新药(重组人γ干扰素)和6个国家II类新药。/pp　　侯云德更具前瞻性的，是他没有固守书斋，不仅主导了我国第一个基因工程新药的产业化，更推动了我国现代医药生物技术的产业发展。/pp　　“我现在还记得，26年前在侯云德先生的办公室里，他打开抽屉给我看，一抽屉都是各种各样的论文。侯先生说，这些科研成果如果都能转化成规模化生产，变成传染病防控药品，该有多好啊!”北京三元基因药业股份有限公司总经理程永庆回忆，那时缺医少药，很多药都需要进口，而且价格高昂。/pp　　一年后，在一间地下室里，当时60多岁的侯云德创立了我国第一家基因工程药物公司—北京三元基因药物股份有限公司。/pp　　侯云德主导了我国第一个基因工程新药的产业化，将研制的8种基因工程药物转让十余家国内企业，上千万患者已得到救治，产生了数十亿人民币的经济效益，对我国改革开放初期的科技成果转化具有重要的指导意义。/pp　　“那时的干扰素药品100%进口，300元一支，一个疗程要花两三万元。现在的干扰素90%是国产的，价格下降了10倍，30元一支。但是侯先生还给我们提出了要求，希望价格能再降到20元钱、10元钱，让普通百姓都能用得起!”程永庆感慨地说。/pp　　侯云德的战略性，还体现在他对国家整个生物医药技术发展的顶层设计。/pp　　“侯云德院士是当之无愧的科学大家，在生物医药技术领域，做什么、不做什么，都是侯院士在把握方向。”中国疾病预防控制中心主任高福钦佩地说。在对我国科技发展产生重要影响的“863”计划中，侯云德连续担任了三届863计划生物技术领域首席科学家，他联合全国生物技术领域的专家，出色完成了多项前沿高技术研究任务。顶层指导了我国医药生物技术的布局和发展。在此期间，我国基因工程疫苗、基因工程药物等5大领域取得了巨大成就，生物技术研发机构成十数倍增加，18种基因工程药物上市，生物技术产品销售额增加了100倍。/pp style="text-align: center "img title="005.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/c0030ebb-cac3-42a0-b720-a1fe1139835a.jpg"/p style="text-align: center "strong侯云德院士(右一)全家福/strong/pp　　“双鬓添白发，我心情切切，愿将此一生，贡献四化业”/pp　　“侯老师能够做出方向性的判断，靠的不是拍脑门，而是长期以来扎实的积累。”侯云德的学生、中国医科院病原所所长金奇研究员告诉记者，尽管已是89岁高龄，但侯老师的勤奋，很多年轻人都比不上。/pp　　“侯老师每天都会关注国内外病毒学的最新动态，并且亲自翻译、撰写，送给相关部门领导和同事参阅。每期都有上万字，两周一期，已经写了200多期。”金奇说，他读研究生时，侯老师工作非常忙碌，但仍然会在下班后到实验室找学生聊天。“聊什么?聊的就是他掌握的最新技术和动态，通过侃大山的方式实时输送给我们。侯老师对我们这些学生，对年轻人，在培养提携上总是不遗余力。”/pp　　在学生和同事眼中，侯云德是无私的，愿意将自己的知识与技术传授给他人。在做干扰素研究的初期，试剂紧缺，都是他自己从国外背回来的，但其他同事有需要，他二话不说就分享给大家使用 上世纪80年代初他的实验室建立了一系列基因工程技术后，不少人到他的实验室取经，侯云德乐于分享，从不留一手，常常还要赔上昂贵的试剂。有人认为他这么做不利于保持本室的技术优势，他却不以为然。“我国科学家应当团结起来，不能把持技术不外流，技术优势要靠不断创新，只有不断创新才能使自己处于优势地位。”/pp　　中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所党委书记兼法人代表武桂珍研究员告诉记者，尽管创造的经济效益数以亿计，但侯先生对生活的要求非常低。“他的汽车超期服役要淘汰了，我们问他想换辆什么车?侯先生说，带轱辘的就行。生病住院，也从来不跟组织提任何要求。有时输完液晚上8点了，还要自己回家做饭吃。”武桂珍说，侯先生所思所想所求，都是我国的防病事业。在他身上，深深映刻着老一辈科学家的家国情怀。/pp　　采访时，谈及自己的科研成果与成就，侯云德院士谦虚地笑了：“我做的都是分内之事，只是认真做了，并没有很特别。而且很多事也不是我一个人做的，我是领头人而已。”/pp　　今年89岁的侯云德，仍然每天7点就开始工作，并且不吃早饭。据说，这是年轻时养成的习惯，因为要抓紧一切时间做实验。尽管动过两次大手术，但老人看起来仍然精神抖擞。耄耋之年，他曾赋诗一首以明其志：“双鬓添白发，我心情切切，愿将此一生，贡献四化业。”/p/p/p

p　　中国工程院院士、中国医学科学院院长曹雪涛团队日前发现，甲基转移酶分子SETD2能够显著增强干扰素的抗病毒效应，促进机体抵抗病毒能力，提高干扰素疗法清除乙肝病毒效果。该发现为抗病毒免疫应答效应机制提出了新观点，也为有效防治病毒感染性疾病提供了新思路。相关成果发表于新一期《细胞》杂志。/pp　　干扰素是机体抵抗病毒感染的关键性细胞因子，可通过激活免疫细胞内信号通路而诱导出一系列抗病毒效应分子，从而激活和维持免疫系统抗病毒能力。干扰素是目前临床治疗乙型肝炎的常用药物之一，然而其疗效有限，因此，揭示干扰素抗病毒效应的具体机制以寻找有效防治病毒感染的新型免疫措施具有重要意义。在国家基金委、科技部973项目等资助下，曹雪涛院士与浙江大学医学院免疫学研究所陈坤博士以及第二军医大学医学免疫学国家重点实验室联合攻关，针对表观遗传机制参与免疫应答过程与免疫性疾病发生，而目前尚不清楚表观遗传分子如何调控干扰素抗病毒免疫功能这一重要科学问题，通过高通量RNA干扰筛选体系分析了700余种表观遗传酶分子在干扰素抑制乙肝病毒中的作用，发现了甲基转移酶分子SETD2对于干扰素抑制乙肝病毒复制至关重要。通过制备肝细胞特异性敲除SETD2基因小鼠模型的体内实验，证实SETD2能显著增强干扰素抑制乙肝病毒以及其他多种病毒复制的体内效应。机制研究表明，SETD2分子通过其甲基转移酶活性，直接催化干扰素关键性信号蛋白分子STAT1的第525位赖氨酸发生单甲基化修饰(STAT1-K525me1)，从而促进干扰素效应信号的活化，诱导出更高水平的抗病毒蛋白，发挥更强抗病毒效应。/pp　　该研究揭示了甲基转移酶SETD2分子能够直接诱导干扰素信号蛋白分子的甲基化并促进干扰素抗病毒效应的重要功能，表明该发现丰富了人们对于机体抗病毒免疫调控机制的认识也为下一步开展相关研究提供了新思路。鉴于干扰素信号调控异常与炎症性疾病、慢性感染疾病发生发展等密切相关，该研究也为研发抗病毒、抗炎药物提供了潜在靶标，为干扰素临床应用方案的优化提供了新方向。/pp/p

p　　在国家自然科学基金基础科学研究中心项目、中国医学科学院医学与健康科技创新工程等基金的资助下，中国医学科学院曹雪涛院士与刘硕博士、姜明红副教授等利用高内涵筛选体系，对E3泛素连接酶RNF家族分子在I型干扰素抗病毒天然免疫应答反应中的调控作用进行了筛选，发现RNF家族的多个分子能够参与调控抗病毒天然免疫，其中E3泛素连接酶分子RNF2能够显著抑制干扰素的抗病毒功能。/pp　　干扰素刺激靶细胞后，通过激活转录因子STAT1，诱导一系列干扰素刺激基因的表达而发挥抗病毒免疫功能。研究发现，病毒感染可触发RNF2与STAT1的DNA结合功能域相互作用，促进STAT1第379位赖氨酸发生K33连接的多聚泛素化修饰，从而促使STAT1从其结合的DNA上解离，最终降低了下游的干扰素刺激基因的表达。体内实验表明，髓系细胞特异性缺陷RNF2小鼠对多种病毒感染的抵抗能力增强并伴随抗病毒干扰素刺激基因的表达增加，从而证实了RNF2确实具有抑制干扰素抗病毒效应的作用。/pp　　该研究结果揭示了病毒感染可以通过调动RNF2分子，诱导干扰素发挥抗病毒功能的重要转录因子STAT1发生一种新型的K33多聚泛素化修饰，抑制转录因子STAT1发挥作用进而抑制干扰素抗病毒功能。这一发现深化了抗病毒天然免疫调控机制的认识，对病毒感染及相关的炎症性疾病等的治疗及药物研发提供了新的潜在靶点。/pp/p

白细胞介素- 1（interlenkin 1，1L-1）的间接作用，可使内毒素引起机体发热。本篇文章介绍IL-1的受体分泌及调节介绍。IL-1的受体有两种：IL-1RⅠ和IL-1R Ⅱ。三种IL-1都能与受体结合，IL-1Ra与受体结合后不引发信号转导效应，但可抑制IL-1α和IL-1β同受体结合。上述两种受体常常表达在同一细胞中，但不同的细胞仅优势表达某一种受体。IL-1RⅠ是相对分子质量为80000的糖蛋白，人的基因位于2号染色体长臂上。主要表达在内皮细胞、平滑肌细胞、T细胞，肝细胞、成纤维细胞、角质细胞和表皮树突状细胞等。IL-1RⅠ高度糖基化，阻止糖基化会降低其生物学活性。IL-1R Ⅰ的胞质内肽链较长，并参与信号转导，与Toll受体的胞质区显著同源，故称为Toll/白细胞介素同源区域（Toll /in-terleukin-1 homologous region，TIR），缺乏酪氨酸激酶的活性。人IL-1R Ⅰ mRNA约5kb，编码569个氨基酸残基，细胞外320个氨基酸残基构成3个免疫球蛋白样功能域，跨膜区有19个氨基酸残基，其余230个氨基酸残基在胞质内。IL-1受体辅助蛋白（interleukin-1 receptor accessory protein，IL-1RAcP）其胞外和胞质结构域与IL-1RⅠ具有同源性，IL-1与IL-1RⅠ结合亲和力较低，可使构象发生改变，并被IL-1RAcP识别，参与受体复合物的形成，能够增强其亲和力，使之发挥生物学效应。IL-1RⅡ主要表达在B细胞、单核细胞和中性粒细胞中。IL-1R Ⅱ的 mRNA约1803bp，编码386个氨基酸残基，是相对分子质量为68000的糖蛋白。该蛋白质含有5个糖基化位点，经过N-糖苷酶处理使糖链分解后，相对分子质量为55000。IL-1RⅡ细胞外的332个氨基酸残基构成3个免疫球蛋白样功能域，其胞内只有很短的29个氨基酸残基，没有信号转导功能。用抗IL-1RⅡ抗体不能阻止IL-1的信号转导，用抗IL-1RⅡ抗体能够有效地阻止IL-1的信号转导。IL-1RⅡ是一个诱骗分子，可为IL-1的自身负反馈。将IL-1RⅡ的细胞外部分与IL-1RⅠ的胞质内部分嵌合构建的嵌合受体能够与IL-1结合并能转导信、号效应。可溶性IL-1受体：健康人和某些病理组织液中可检查到IL-1R Ⅰ和 IL-1RⅡ的胞外结构部分为可溶的IL-1受体，但其具体的生物学作用不是很清楚。IL-1的信号转导途径用图9-1表示。

日前，在北京检验检疫局组织的牛结核病γ-干扰素检测方法的验证和比较试验项目评估会上，以中国工程院洪涛教授为组长的评估专家委员会在听取了该局牛结核病γ-干扰素检测方法技术组的验证技术报告，审阅了相关资料后，一致认为：该验证试验证明此技术可以检测牛结核病，且与世界动物卫生组织(以下简称：OIE)发布的信息一致，具有重要的社会效益和实用价值。建议将该方法尽快申请制定国家标准，以便该技术尽早用于我国牛结核病的普查、净化和进出境动物检疫工作。　　据北京市检验检疫科学技术研究院马贵平院长介绍，牛结核病被我国列为二类动物疫病，国家标准《动物结核病诊断技术》包括了结核分枝杆菌的染色镜检、分离培养、动物实验、皮内变态反应，与OIE推荐标准相比，增加了动物接种试验，但缺少γ干扰素试验等方法。此次北京检验检疫局所做γ-干扰素检测方法的验证和比较试验项目即可补充牛结核病检测方法，以完善我国牛结核检测标准体系。　　目前我国在牛结核病的普查及监测中普遍使用皮内结核菌素试验，此方法是OIE规定的国际贸易指定使用的方法，被世界各国接受和采用。北京检验检疫局牛结核病γ-干扰素检测方法技术组即采用与皮内结核菌素试验相比较的验证试验，技术组对239头牛进行试验，试验结果显示，牛结核分枝杆菌γ-干扰素试验能检出早期感染结核杆菌的牛，可以作为皮内结核菌素试验的平行试验以最大限度地检出被感染动物，或者作为系列试验对皮内变态反应结果进行确诊或否定。

喷雾干燥 & 冷冻干燥技术制备白细胞介素粉体研究趋化因子是一种小的(8-12 kDa)细胞因子，参与许多病理过程，因此是重要的靶点。它们通常由不同类型的细胞(如白细胞)分泌，并通过与同源 G 蛋白偶联受体的细胞表面结合来介导生物学效应。趋化因子配体和受体有 50 多种，根据其初级氨基酸序列的半胱氨酸残基排列进行分类和命名。趋化因子可用于(慢性)炎症性疾病、癌症和感染性疾病的治疗应用。目前，市场上有两种基于白介素的产品，即重组白介素-11预白介素(Neumega)和重组人白细胞介素-2醛白介素(Proleukin)。Neumega 是一种由大肠杆菌重组 DNA 技术产生的血小板生成生长因子，可静脉给药。皮下应用的 Proleukin 是一种淋巴因子，也是通过转基因大肠杆菌的重组 DNA 技术产生的。为了增加储存的稳定性、保持药物的生物活性，Neumega 和 Proleukin 都采用冷冻干燥的工艺，制成冻干粉制剂使用。虽然冷冻干燥（FD）是一种广泛使用的技术，具有多种优点，可以快速、温和干燥，但喷雾干燥(SD)可以缩短工艺周期，并可以在常压下进行加热处理。同时，颗粒的性质，如粒径、固体状态和残余水含量可以通过参数进行调节。这里必须指出的是，蛋白质的变性或/和展开也可能发生在 SD 过程中，SD 过程的放大是复杂和高成本的。SD 的另一个重要挑战是粉体回收率低于 100%，这对于高成本疗法和工艺开发来说是一个问题，特别是放大到最终设备上。对于白细胞介素，已经有了一些成功的冷冻干燥研究案例。然而，据我们所知，SD 作为一种替代方法尚未被研究过。这项工作的目的是开发一种 SD 工艺，使模型白介素以一种保留白介素结合亲和力和生物活性的方式干燥。为此，我们使用了模型白细胞介素，探索喷雾干燥工艺的潜在可行性，并对比分析冷冻干燥和喷雾干燥工艺对白细胞介素活性影响。1材料在磷酸盐缓冲盐水中提供野生型CXCL8（CXCL8，72个氨基酸，8.4kDa）、CXCL8的突变体（dnCXCL8，66个氨基酸，7.7kDa）等各种试剂。将蛋白质溶液用PBS稀释至最终蛋白质浓度为1mg/ml，即1% w/w。冷冻干燥机喷雾干燥仪：BUCHI B-90 HP▲ 步琦纳米喷雾干燥仪 B-90 HP2实验过程配方溶液分别采用如下冻干程序（表1）和喷干程序（表2）进行样品制备。干燥后的样品在 4-8℃ 的氩气干燥器中保存 12 周。并进行粉体的物性表征。表1，适用于所有配方中 FD 程序。箭头表示间隔内的压力或温度增减。间隔冻干工艺时间间隔[hh：mm]温度[℃] 压力[mbar]0速冻，放入小瓶～00:20-196atm.1冻结，平衡02:00-20atm.2初级干燥00:30↑ -15↓ 0.0453_01:00-150.0454_10:00↑ 00.0455_08:0000.0456二级干燥01:30↑ +200.0457_02:30+200.0458结束，封装小瓶_～+25atm.表2，SD 工艺参数及由此产生的过程变量。通过使用纯缓冲液进行测量来确定以 ml/min 为单位的喷射速率。实验过程中喷嘴温度升高，喷嘴温度是在 SD 过程结束时观察到的温度 。进口温度[℃]喷雾速率[%]空气流量[l/min] 粒度[μm]6030（～0.51ml/min）100±27.0过程变量出口温度[℃]压力[mbar]喷头温度[℃]29±131±152±23实验结果1、 通过激光衍射分析测定粒径SD 蛋白粉通过 HELOS 系统的激光衍射分析进行筛选。在 SD 后和第4周、第8周和第12周将粉末直接湿分散在甲苯中进行分析。通过对同一批次 SD 粉的三个样品进行测量，确定了 PSD 分析的标准误差。不分析 FD 粉末的粒度，因为冻干物通常是最终的药物剂型，没有对饼状进行研磨或破碎，只分析了 SD 粉。图1 通过激光衍射分析测定粉体粒径，在 10 次超声脉冲后进行测量，SD 粉末的 PSD 随储存时间的变化不大。除了在第0周分析的 SD dnCXCL8 喷雾粉末和在第8周分析的 SD HSA-dnCXCL8 外，所有干粉的跨度都小于 2.8。在测量这两个 PSD 时，一些较大的团块将分布分别向 517μm 和 129μm 的 x90 方向移动(图1b、图1c)，导致 PSD 变宽。2、 圆二色光谱测定结构利用圆二色谱(CD)对 SD 和 FD 后的蛋白质二级结构的变化进行评价，并将其与未处理蛋白质的光谱进行比较。CD 光谱在设备上记录，波长为 190-250nm，使用 1mm 石英比色皿，响应时间 4s。5 次扫描取平均值，并用 PBS 校正背景，计算平均残基椭圆率，并绘制不同曲线。由 图4 显示，经过 SD 和 FD 后的 CD 光谱显示只有轻微的结构变化。液体白细胞介素制剂在 90℃ 温度下热处理5分钟，SD 温度在 60℃ 温度下热处理 5 分钟，会产生轻微的沉淀，但结构保持完整 (图4A)。dnCXCL8 也出现类似的结果。SD 和 FD 均未引起二级结构的改变。即使加热蛋白质也未引起二级结构的变化(图4B)。虽然 HSA-dnCXCL8 具有更明确的α-螺旋结构，但 SD 和 FD 后没有变化。在 90℃ 热处理 5min 后二级结构发生了完全损失 (图4C)。3、 离液展开测定稳定性采用荧光光谱检测gdmhcl在0-6M范围内诱导展开，并在SD和FD后和储存3个月后测定蛋白质稳定性。将样品稀释至0.7μM，并在室温下平衡5min。CXCL8 和dnCXCL8 的激发波长为 280nm, HSA-dnCXCL8 的激发波长为 290nm。在 300-400nm 范围内测量所有3种蛋白的发射光谱，并将狭缝宽度设置为 5nm。蛋白质展开的特征是波长移位，并使用 Origin 2019b 的玻尔兹曼进行计算得到如下图谱。图5 显示，展开的过渡中点和 CXCL8 的相对协同性在很大程度上没有变化。对于 dnCXCL8，无法建立明确的过渡点。对于 FD HSA-dnCXCL8 也观察到了同样的情况。对于参考光谱和 FD 光谱（HSA-dnCXCL8 除外），显示了标准偏差，如图中的误差条所示。4、 趋化性测试：博伊登室测定为了检测 SD 和 FD 后以及储存三个月后的白细胞介素的活性，进行了趋化试验测定中性粒细胞的活化和迁移，预计 CXCL8 具有促迁移作用，而 dnCXCL8 和HSA-dnCXCL8 不应表现出任何中性粒细胞迁移激活。使用 NIS-Elements BR 3.2 软件进行细胞计数，计算每种情况下的平均值和标准偏差。上图显示储存 12 周后 SD CXCL8 的 CI 较对照显著增加 (图6a, p = 0.05)。SD 和 FD CXCL8 在中性粒细胞活化和迁移方面没有变化。对于 dnCXCL8, SD 和 FD 样本的 CI 与各自的参考 CI 相当。HSA-dnCXCL8 在 SD 后 (即W0) 的 CI 显著增加 (图6c, p = 0.04)。4结论本研究针对磷酸盐缓冲盐水配制的白细胞介素（未添加额外添加剂）采用 SD 和 FD 两种干燥方式分别进行深入评估。用纯缓冲液进行的 DoE 确定了一种最佳的 SD 工艺，在 60℃ 的干燥空气温度、100 L/min 的空气流速和 30% 的喷雾速率下具有较高产率，这表明即使是热不稳定的蛋白质也可以喷雾干燥。此外，SD 工艺比 FD 更快、更有效，理论上导致每分钟产量比 FD 高 130 倍（甚至考虑到 SD 的产量仅 63% 和 77% 之间）。FD 粉末呈现饼状结构，而 SD 粉末的粒度为 X5020μm。这为粒子工程提供了定义粒子特性的可能性，允许更广泛的应用。RM 是可比较的，同样二级结构没有改变，结合亲和力和活性保持至少 12 周，这些结果表明白细胞介素的 SD 是可行的。未来，将继续优化本研究中的工艺参数，并将其转移到具有工业型台式喷雾干燥器中，以更大规模地系统考察粉体产量和工艺时间，从而对 SD 进行全面评估，作为 FD 的替代方案，实现经济快捷高效的生产！5文献来源Comparing freeze drying and spray drying of interleukins using model protein CXCL8 and its variants

博士Eric T. Ahrens表示，起初我们想观察这种技术联合作用对于新型细胞疗法的效果，而我们可以通过反馈细胞活性、改善剂量等途径来改善细胞疗法的效率；当前并没有有效的方法对人类机体中的细胞进行成像，早先可以利用基于金属离子的血管MRI对比制剂和放射性同位素来成像，但是其在体内就不能够对细胞进行有效区分了。hz-E10044human soluble cluster of differentiation 28,sCD28 ELISAkit 人可溶性CD28(sCD28)检测试剂盒hz-E10045Human lymphocyte factor ELISAkit人淋巴细胞因子检测试剂盒hz-E10046Human thymus activation regulated chemokine,TARC ELISAkit人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)检测试剂盒hz-E10047Human Neural cell adhesion molecule ligand 1,NCAM-L1 人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)检测试剂盒ELISAkithz-E10048Human Cobra venom neuronal protective factor,CVNPF ELISAkit人神经保护因子(CVNPF)检测试剂盒hz-E10049Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor,sTNFαR 人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)检测试剂盒ELISAkithz-E10050Human soluble cytokine receptor,sCKR ELISAkit人可溶性细胞因子受体(sCKR)检测试剂盒hz-E10051Human soluble Factor-related Apoptosis ligand,sFASL/Apo-1 人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)检测试剂盒ELISAkithz-E10052Human inhibitor of apoptosis,IAP ELISAkit人细胞凋亡抑制因子(IAP)检测试剂盒hz-E10053Human colony-stimulating factor,CSF ELISAkit人集落刺激因子(CSF)检测试剂盒hz-E10054Human monocyte interferon gamma inducing factor,MIGF 人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIGF/CXCL9)检测试剂盒ELISAkithz-E10055Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant,I-人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)检测试剂盒TAC ELISAkithz-E10056Human cluster Of differentiation,CDl4 ELISAkit人CD14分子(CDl4)检测试剂盒hz-E10057Human apoptosis inducing factor,AIF ELISAkit人凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒hz-E10058Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISAkit人白细胞共同抗原(LCA/CD45)检测试剂盒hz-E10059Human cluster Of differentiation,CD4 ELISAkit人CD4分子(CD4)检测试剂盒hz-E10060Human Placenta Cadherin,P-cad ELISAkit人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)检测试剂盒hz-E10061Human Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISAkit人角化细胞生长因子(KGF)检测试剂盒hz-E10062Human Platelet-Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB ELISAkit 人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)检测试剂盒hz-E10063Human CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISAkit人CXC趋化因子配体16(CXCL16)检测试剂盒研究者表示，这项研究中他们利用全氟碳化合物(PFC)示踪技术和非侵入性磁共振成像成技术进行结合来直接检测标记细胞的氟原子，自然状态下氟原子在机体中的浓度极低，这就可以利用MRI技术对氟标记的细胞进行观察；而本文中研究者首次通过患者的白细胞制备了被修饰和标记的树突细胞，随后研究者将这些细胞注入到4期结直肠癌患者的机体中来刺激机体抗癌T细胞免疫反应。

肿瘤浸润白细胞( Tumor Infiltrating Leukocytes, TIL) 作为深入实体肿瘤内部的免疫细胞群体，在肿瘤-免疫学研究中占据重要地位。MACS Technology以卓越的技术致力于高质量TIL新发现，并助力肿瘤微环境研究。Agenda：肿瘤微环境与肿瘤浸润白细胞研究肿瘤浸润白细胞的目的肿瘤浸润白细胞研究的困难及挑战美天旎肿瘤浸润白细胞研究解决方案Q&A主讲人简介：田瑜博士，Ph.D., Product Manager, Miltenyi Biotec复旦大学神经生物学国家重点实验室取得博士学位，后就职于Prof. Brian Seed研究室从事单克隆抗体表达系统的研发工作。2016年进入生命科学产品营销领域，现任美天旎中国产品经理。直播时间：2020年3月26日（本周四）下午3：00—4：00报名方式：扫描上方二维码，即可报名参与！

结核病问题的解决仍是一个长期的世界性的难题。从20世纪90年代初世界卫生组织宣布全球进入结核病公共卫生紧急状态起,在相当长的一个时期内公众普遍乐观地认为,通过推行直接面视下短程化疗(DOTS)措施就可以有效解决结核病的问题。但是随着全球范围结核病防治工作的普遍开展和实践,到2011年前后,全球逐渐形成解决结核病问题需要将公共卫生管理和技术工具开发相结合的共识。结核病的有效防治需要在诊断、预防、治疗等3个方面(新诊断技术、新疫苗和新药物)下力气。在传染病相关的行政管理中,中国的模式和行政效率在世界上都是领先有效的。在行政手段有效保障的基础上,进一步提高控制能力的任务就需要客观具体的技术产品来实现了。随着我们对结核病、耐药结核病、耐多药结核病、广泛耐药结核病研究的日益深入,对其认识也是逐步提高的。在应用已有手段解决普遍性问题的同时,针对新发现的尚缺乏有效诊治手段的结核病类型,我们就需要研究更多新技术并开发更多的新产品,从技术能力上切实解决这些问题。免疫学诊断方法免疫分子用于结核病诊断新进展：在活动性结核病患者体内结核分枝杆菌特异性单阳性TNF-α+和双阳性IFN-γ+/TNF-a+CD4+T细胞的比例显著高于潜伏性感染者和未感染者。此外，表达IL-17的CD4+T细胞（主要为单阳性IL-17+和双阳性IL-2+/IL-17+表型）的频率在活动性结核病患者中高于其他两种组。分枝杆菌特异性CD4+T细胞的数量和功能特征在结核病感染和未感染结核的儿童之间以及潜伏和活动性结核病之间存在显着差异【1】。细胞因子和可溶性粘附分子谱和生物标志物用于治疗监测再治疗涂阳肺结核患者。复治期间，IFN-γ、IL-2、IL-7和可溶性CD54水平以及IL-2/IL-10和IFN-γ/IL-10比率呈上升趋势，可作为复治是否有效的血清指标【1】。IP-10和RANTES的组合可能被用作诊断和治疗监测肺结核中的生物标志物。肺结核患者血浆IP-10和RANTES水平显着高于健康对照组，IP-10和RANTES的组合在训练组中的AUC为1.0时表现**。响应治疗时，IP-10和RANTES均显着水平在6个月内减少【2】。γ-干扰素释放试验（IGRAs）用于结核病诊断新进展：IGRAs的原理是当机体内被结核菌抗原致敏的效应T细胞，在体外受到相同抗原的刺激（在APC细胞辅助下）后，会分泌大量的γ干扰素。通过IFN-γ的检测来判断结核感染的情况。IGRAs试验灵敏度高，特异性高，快速简便，是一种值得推广的检测方法，为潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断，阴性结果对排除结核感染有一定的帮助。IGRAs试验用于筛查潜伏性感染时不受卡介苗接种的影响，但不适用于流行病学筛查。但是IGRAs预测哪些患者将来进展为活动性结核病的方面的应用较少。最近的一个大样本研究评估IGRAs和TSTs显示在低发病率国家，IGRAs和TST的阴性预测值＞99%，但阳性预测值仅为3%-4%【3】。下一代IGRAs发展前瞻需考虑以下几个方面：增加预测潜伏性感染到活动性结核的能力；能够检测结核分枝杆菌感染的临床阶段；监测潜伏感染或结核病的治疗效果；增加新抗原（如Rv3873、Rv3879和Rv3615）及增加更多细胞因子（IP-10，MCP-2，MIG等）来提高IGRA的敏感性。此外，随着结核分枝杆菌的菌量增加，结核特异性的CD8+ T细胞更容易检测到。CD8反应可以初步区别活动性与潜伏感染，与治疗效果相关【4】。双因子检测DeFine.TB 结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒结核分枝杆菌特异性细胞因子（IFN-γ和IL-2）检测试剂是 “十三五” 国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。01 新的检测靶标IL-2特异性高达94.3%研究结果发现IFN-γ的ROC 曲线下面积为0.859，而IL-2 的ROC 曲线面积0.865（详见Fig. 2 ） ，IFN-γ的总体敏感性和特异性分别为83.8% 和81.5%，IL-2的特异性为94.3%，灵敏度为72.6%（详见Table2）。02 新的检测靶标IL-2提高结核病的检出率双因子检测的敏感性为87.9%，单因子检测敏感性为83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的检测靶标IL-2，表明约16%的活动性结核患者中IFN-γ结果为阴性，而这些患者中有1/4的IL-2 结果为阳性。当IFN-γ和IL-2 串联组合时，特异性进一步提高到96.0%，可与分子诊断的培养阳性检测结果相媲美，甚至可以对培养阴性的患者产生可靠的结果。03 并联检测敏感性高达87.9%，串联检测特异性高达96.0%进一步分析IFN-γ和IL-2联合应用对活动性结核病的诊断价值。对IFN-γ和IL-2 进行并联检测时，敏感性升至最高的87.9%，特异性达到79.8%，阳性预测值达93.9%；当IFN-γ和IL-2 进行串联检测时，718 例非结核患者中有689 例检测结果为阴性，特异性为96.0%，敏感性为68.5%，阳性预测值为98.4%。值得注意的是，串联检测在结核病确诊患者的敏感性（72.1%），高于临床诊断敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串联检测的准确度与结核病的严重程度相关。04 双因子联合检测灵活性高，满足不同的检测场景研究团队根据活动性结核病不同流行模型，分别阐述了IFN-γ和IL-2联合检测在不同模型中诊断价值，并提出了适用于综合性医院和专科医院各自的诊断算法。在综合性医院中，约有10%的结核疑似患者最终确诊为活动性结核，与常规涂片镜检相比，使用具有更高敏感性的双因子并联检测可帮助临床医生发现更多活动性结核病患者（如图B）；在结核病专科医院，结核病疑似患者中活动性结核病的比例达到50%，使用具有高特异性的双因子串联检测可为活动性结核病患者特别是菌阴结核患者提供诊断依据（如图A）。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。

众多的研究表明，感染根管内的厌氧菌，尤其是革兰氏阴性厌氧菌在根尖周感染中起着主导作用。内毒素在根尖周病中的致病作用已经引起越来越多学者的注意。 由于根尖周组织主要是成纤维细胞，当内毒素通过根尖孔侵入根尖周时，对根尖周的成纤维细胞产生细胞毒性作用，这种作用可能取决于内毒素量的大小。在大量内毒素攻击下，出现成纤维细胞的分裂停止或坏死，而破坏了根尖周的屏障作用。但在炎症转化时，小剂量内毒素的刺激作用又有助于成纤维细胞的DNA合成和分裂，对于炎症的转归和愈合具有促进作用。 骨吸收是牙周病和尖周病的主要组织损伤，严重的骨吸收导致牙齿的丧失，内毒素对牙槽骨的吸收起着十分重要的作用。内毒素可以直接激活造血干细胞转变为破骨细胞而导致骨吸收，也可以通过多形白细胞和T、B淋巴细胞介导的内源性调节因子而导致骨吸收。最近研究发现，白细胞介素-1、肿瘤坏死因子、干扰素在牙槽骨吸收中起着一定的调节作用。 内毒素在根尖周病的作用机制是多方面的。随着研究的深人，相信会有更多的代谢产物被提纯和确立其在根尖感染中的作用，并为今后口腔其他感染疾病提供新的研究领域。

1、体液的组成体液包括血液（血浆、血清）、腹水、髓液、尿以及乳汁等，其中在临床上一般以血液的使用率最为普遍。我们知道血液在心血管系统内是由有形物质（红细胞、白细胞、血小板）及液体状血浆组成。其基本组成如下图： 2、体液测定评价通过对体液中的内毒素含量测定，可以对革兰氏阴性菌所引起的败血症、菌血症、术前术后感染症以及真菌感染症等进行诊断，据国外文献报道正常人血浆中的内毒素水平在3pg/ml左右。通过对血液中的内毒素含量测定可对以下一些症状进行监控和了解。（1）早期诊断；（2）给治疗方案提供理论资料；（3）给药后的治疗效果以及预后判定；（4）一些感染症状的鉴别诊断等。 3、干扰物质的去除由上述简介我们知道，血液的组成十分复杂，因此血中内毒素的测定将会受到来自血浆各种组分的影响，为了获得准确的内毒素测定值，除去这些物质的影响将是十分重要的。目前作为血浆的主要干扰物质有：a2纤维蛋白溶酶抑制剂，抗凝血酶Ⅲ，a1抗凝血蛋白酶，抗凝因子Xa，纤维蛋白酶胰蛋白酶等，对于这些物质的去除方法有很多，如高氯酸法（PCA）法，即在血浆中加入PCA，通过离心将变性物沉淀除去。然后取上清液进行内毒素测定。

现如今，各类杀菌清洗剂逐渐走进寻常百姓家，因去污快、使用方便备受人们的青睐。近日，霍华德休斯医学研究所的科研人员发现细胞，像很多人一样，竟然也会用“洗涤剂”来抵御细菌。　　这是人类首次发现了人体细胞内具有“洗涤剂”功效的保护性蛋白。相关研究以A human apolipoprotein L with detergent-like activity kills intracellular pathogens为题发表在顶级期刊《Science》杂志。文章指出，科研人员发现了一种名为“ APOL3 ”蛋白质，可以通过溶解细菌膜阻止细胞感染，从而实现细胞自主免疫。　　人体的免疫系统是由特化细胞组成的复杂网络，它们就像一群“保镖”，可以保护人体健康，抵御外来病原微生物，如各种细菌、病毒、寄生虫等，甚至可以预防癌症的形成。但当这些特化细胞被动员的同时，警报信号也会惊扰到正常细胞，身为正义的一方，面对外来入侵者，正常细胞固然不会坐以待毙，可它们到底是如何抵抗病原菌的呢?　　众所周知，沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。而干扰素是时当机体感染病毒时, 宿主细胞通过抗病毒应答产生的一组结构类似、功能相近的低分子糖蛋白, 是抗病毒感染最重要的一种免疫因子。沙门氏菌(绿色)等微生物感染人类细胞　　因此，研究人员利用沙门氏菌菌株感染了人体内的非免疫细胞，发现警报信号“干扰素 γ(IFN-γ)”会促进非免疫细胞分泌一种蛋白质，以阻止沙门氏菌“接管”人体细胞，为了揭开这种蛋白质的神秘面纱，该研究团队基于CRISPR-Cas9技术筛选了19000多种人类细胞基因，最终锁定了“ APOL3 ”!　　人载脂蛋白L3(APOL3)是一种关键的效应蛋白，遍布于人体的全身，其杀菌机理与清洗剂中的表面活性剂使油性污垢乳化类似，一部分被水吸引，一部分被油脂吸引。APOL3的负染色电子显微镜检查　　当然，APOL3去除的不是衣物上的污垢，而是由脂质分子组成的细菌内膜，当 APOL3 靶向 IFN-γ激活细胞内的病原体时，APOL3会对细菌内膜 (IM) 造成致命的伤害。　　研究指出，当APOL3与干扰素刺激基因 (ISG)编码的蛋白质协同作用时，鸟苷酸结合蛋白 1 (GBP1)会扰乱外膜(OM)抗原的通透性屏障，使APOL3进入细菌内膜，并对细菌进行致命一击。APOL3 通过外膜 (OM) 到达内膜 (IM)　　该研究的通讯作者之一、John D. MacMicking博士表示：“整个除菌过程是高度选择性的，APOL3 避开了细胞膜的主要成分胆固醇，而是针对细菌喜爱的独特脂质。”　　面对外来入侵者，免疫系统变得日渐强大，逐渐进化出了多种途径抵御外敌，未来，期待这项研究会为人类细胞抵御感染提供新的见解。

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)导致的新冠肺炎（COVID-19）自2019年至今仍然在全球蔓延，其变异株Omicron由于高传播率目前已取代其它毒株成为全球新冠的主要流行毒株。各国已采取大规模疫苗接种，通过其产生的中和抗体和抗病毒T细胞来缓解和对抗新冠肺炎。有研究报道，病毒特异性T细胞在病毒清除（即SARS-CoV-1感染后17年）和在抗体滴度减弱的COVID-19患者中检测到SARS-CoV-2特异性T细胞会持续很长时间。因此需要充分了解新冠肺炎中T细胞免疫过程，对疫苗开发和免疫治疗具有重要意义。COVID-19患者中的T细胞免疫反应T细胞免疫反应是高度特异性的，在引发有效的抗病毒反应方面具有不可或缺的作用。在SARS-CoV-2感染的早期阶段，树突状细胞(DC)和巨噬细胞可以吞噬病毒感染的细胞，通过抗原呈递启动T细胞反应。随后，CD4+T细胞刺激B细胞产生病毒特异性抗体，细胞毒性CD8+T细胞靶向病毒感染的细胞。有研究报道，SARS-CoV-2特异性CD4+和CD8+T细胞在COVID-19症状发作后的前2周内的外周血中很明显。大多数SARS-CoV-2特异性CD4+T细胞表现出中枢记忆表型，主要产生Th1细胞因子，而CD8+T细胞具有更高水平的穿孔素表达的效应表型。另外有研究报道COVID-19患者T细胞活化的异质性，并提供证据表明CD4+和CD8+T细胞都能够产生有效的免疫反应，并出现受损或过度的T细胞反应。轻度COVID-19患者的T细胞升高，产生强大的抗病毒免疫反应。特别是CD8+T细胞表达更高水平的细胞毒性分子，例如颗粒酶A和FAS配体，它们有利于消除病毒感染的细胞。然而，在严重疾病病例中，CTL（Cytotoxic T cells，细胞毒性T细胞）比例减少，同时幼稚和中枢记忆CD8+T细胞的百分比也均较低。此外，与健康对照组相比，COVID-19患者的终末分化效应CD4+和CD8+T细胞的百分比更高。且重症COVID-19患者的调节性T细胞(Tregs)水平低于轻症患者。总之，T细胞亚群（包括Treg、Th1、幼稚和记忆T细胞）平衡中的这些失调可能导致严重的炎症状况，并可能导致COVID-19复发。尽管由CD4+和CD8+T细胞介导的早期抗病毒反应最有可能具有保护作用，但SARS-CoV-2有效的先天免疫逃避能力使T细胞难以通过限制I型和III型干扰素反应来产生有效的抗病毒反应。COVID-19恢复期患者和健康人中的T细胞免疫反应恢复康复患者的T细胞计数可以为T细胞在抗病毒反应中的作用提供重要参考。有研究报道，超过70%的COVID-19恢复期患者存在SARS-CoV-2特异性T细胞。100% CD4+T细胞和70% CD8+T细胞在康复患者中具有SARS-CoV-2 Spike特异性反应。功能测定证实CD4+T细胞表现为Th1表型并产生大量IFN-γ，和针对S蛋白较低水平的IL-4、IL-13、IL-5或IL-17A。同样，大多数SARS-CoV-2刺突特异性CD8+T细胞产生IFN-γ，绝大多数IFN-γ+CD8+T细胞也共表达颗粒酶B和肿瘤坏死因子α (TNFα)。这些数据表明，康复患者中的大多数CD4+和CD8+T细胞产生了针对S蛋白的大量抗病毒免疫反应，说明功能性T细胞在病毒清除和恢复中的重要性。此外，这些数据也说明利用SARS-CoV-2的S蛋白作为疫苗生产关键候选者的重要性。T细胞反应在无症状和未接触过的个体中观察到的T细胞反应最低。但是即使没有并发的体液反应，无症状/轻度恢复期的COVID-19患者也可以产生强大而持久的记忆T细胞反应来预防复发性感染。有研究报道，与有症状的个体相比，无症状患者的免疫反应较弱，并且相当一部分有症状的患者在恢复期早期表现出中和抗体量减少。COVID-19恢复期患者在出院后2周内也显示出与针对人ACE2的中和抗体滴度和病毒特异性T细胞计数的强相关性。细胞因子风暴细胞因子风暴是指在各种病理条件下检测到的大量促炎细胞因子和趋化因子，是在SARS-CoV-2感染患者中观察到的关键病理特征之一。在重症COVID-19患者中记录到高细胞因子水平。各种免疫细胞类型，包括巨噬细胞、中性粒细胞、DC，以及NK、B和T细胞，可导致COVID-19患者的细胞因子风暴和炎症反应的过度激活状态。由先天免疫细胞释放的TNFα、IL-6和IL-1β可能是SARS-CoV-2感染晚期患者发生细胞因子释放综合征和严重全身炎症反应的主要驱动力之一，其中一些可能是导致这些患者淋巴细胞减少或Th1反应不足的潜在机制之一。另据报道，在COVID-19重症病例中，血清TNFα和IL-6水平升高与总T细胞计数呈负相关，表明这些细胞因子可能参与淋巴细胞减少和T细胞丢失。相反，处于恢复期的患者上述细胞因子的血清水平显著降低，并显示T细胞计数恢复。鉴于这些发现，有人提出IL-6阻滞剂，如sarilumab、siltuximab和tocilizumab，以及IL-1β受体阻滞剂用于治疗重症COVID-19患者以解决过度炎症和控制炎症的传播。趋化因子和细胞因子水平升高，例如CCL2/3/5、CXCL8/9/10和IFN-γ、TNFα、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12 、IL-33、粒细胞/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（G-CSF和GM-CSF）、血管内皮生长因子A（VEGFA）和血小板衍生生长因子亚基B（PDGFB），促进其它白细胞向组织的募集，导致组织损伤。基于T细胞反应的疫苗研究SARS-CoV-2完整基因组的快速可用性可用于开发多种疫苗，使其在刺激幼稚T细胞后产生效应和记忆T细胞，发挥免疫保护。成功的SARS-CoV-2疫苗应该产生对有效免疫反应具有高度特异性的SARS-CoV-2反应性T细胞，而不会产生炎症或疾病开始的不良影响。SARS-CoV-2的蛋白被确定为最适合疫苗开发的靶标，以触发病毒特异性T细胞反应和体液免疫反应。表达S蛋白的腺病毒病毒载体疫苗，即5型腺病毒(Ad5-nCoV)，在健康个体(NCT04313127)中检测其疫苗的安全性和耐受性，观察到2周后成功产生特异性抗病毒T细胞和体液免疫反应。Moderna开发了基于mRNA的疫苗，编码SARS-CoV-2抗原（S蛋白），通过脂质体递送系统给药。因mRNA疫苗可以模拟天然病毒感染，并仅编码抗原蛋白并且不能整合到宿主染色体中。因此，基于mRNA的疫苗更能发挥细胞免疫和体液免疫。T细胞免疫检测---细胞因子释放检测（CRA）疫苗中的抗体测试是常规进行的，但因为特异性病原体的T细胞在血液中存在的总T细胞（通常小于1-3%）中只占很小的一部分，需要在从全血中纯化的细胞中进行。而这些检测都需要复杂的设备和高度专业化的人员，这可能不是每个常规实验室都可以使用的。杜克-新加坡国立大学Antonio Bertoletti教授团队采用了一种快速和简单的替代方法，即基于Ella微流控ELISA技术的全血细胞因子释放测定(Cytokine release assay, CRA)实验：直接将刺激性抗原或肽添加到全血中，导致血浆中细胞因子（通常是IFN-γ）的分泌，然后进行定量。该检测方法通过简单地将Spike肽库添加到全血中，可以轻松快速地检测和相对定量接种疫苗个体中的Spike特异性T细胞反应。此方法检测时间比常规方法缩减了7个小时，总时间缩短了12个小时。总结因T细胞免疫反应在疾病的早期阶段表现出保护作用，也可能导致致命症的发生，因此COVID-19的治疗和预防中需要深入地了解疾病过程中的免疫反应。特别是在症状轻微的患者中阻断促炎细胞因子的早期治疗干预可能会产生有害影响，并导致免疫反应不足和病毒清除受损。在危重COVID-19患者中恢复T细胞耗竭和改善过度炎症反应的晚期治疗干预可能具有更好的临床结果。在疫苗开发中，也要充分考虑其是否可以增强抗病毒免疫和特定T细胞反应从而加强疫苗保护的持久性。参考文献Robust T Cell Immunity in ConvalescentIndividuals with Asymptomatic or Mild COVID‐19.Highly functional virus‐specific cellular immune response in asymptomatic SARS-CoV‐2 infection.T‐cell responses and therapies against SARS‐CoV‐2 infection.Rapid determination of the wide dynamicrange of SARS‐CoV‐2 Spike T cell responses in whole blood of vaccinated andnaturally infected.T cell immunity to SARS-CoV-2 followingnatural infection and vaccination.关于我们ProteinSimple是美国纳斯达克上市公司Bio-Techne集团（NASDAQ:TECH）旗下行业领先的蛋白质分析品牌。我们致力于研发和生产更精准、更快速、更灵敏的创新性蛋白质分析工具，包括蛋白质电荷表征、蛋白质纯度分析、蛋白质翻译后修饰定量检测、蛋白质免疫实验如Western和ELISA定量检测蛋白质表达等技术，帮助疫苗研发、生物制药、细胞治疗、基因治疗、生物医学和生命科学等领域科学家解决蛋白质分析问题，深度解析蛋白质和疾病相互关系。联系我们地址：上海市长宁路1193号来福士广场3幢1901室 电话：021-60276091热线：4000-863-973邮箱：PS-Marketing.CN@bio-techne.com网址：www.bio-techne.com

果维康以维生素C、维生素C纳、山梨醇粉、天然香料、硬脂酸镁、阿斯巴甜、色淀为主要原料的保健食品，具有补充维生素C的保健功能。维生素C又称L-抗坏血酸，具有抗氧化自由基的作用、并能刺激身体制造干扰素来破坏病毒以减少白血球与病毒的组合，保持白血球的数目，提高中性细胞和淋巴细胞的杀菌和抗病毒能力，对提高人体免疫力有着重要作用。维生素C还具有抗氧化作用。感冒时中性白细胞会释放出大量氧化自由基及氧化性物质，从而引起相关症状，而白细胞内的维生素C则能促进组织这些有毒物质跑到白细胞之外。感冒时，白细胞内的维生素C浓度会大量降低，如果补充大剂量维生素C的浓度，减轻感冒症状。因此，在感冒早期服用维生素C，可以减轻感冒症状，缩短近1/4的感冒时间。 本实验我们使用的是上海禾工科学仪器有限公司研发生产的AT-6全自动滴定仪对果维康中维生素C的含量进行测定。 AT-6电位滴定仪是一款智能的滴定分析器，采用7英寸中文人机对话全彩触摸屏，高精度滴定管、电磁切换阀以及多样的高分辨检测模块，将简单易懂的操作和最高精确性以及出色的可靠性完美地结合在一起。根据样品性质，仪器选用不同电极可进行酸碱滴定、氧化还原滴定、络合滴定、非水滴定和pH测量等多种滴定。AT-6电位滴定仪具备多项专利技术，仪器运行安静平稳，检测精度高，测量结果重复性好，各项性能指标达到进口同类产品，同时仪器故障率及使用寿命远高于国内同类产品。仪器具有串口通讯连接打印机实现分析结果打印，具有USB接口连接U盘实现数据备份，具有WLAN接口连接电脑实现联机控制。 技术参数显 示 屏：7.0英寸高清全彩触摸式显示屏测量范围：-2000mV-2000mV；0-14PH值；0-200μA分 辨 率：0.1mV；0.001PH；0.1μA；0.1℃准 确 度：±0.2mV；±0.003PH；0.2μA输入阻抗：大于1×1012Ω，补偿电流：小于1×10-12A滴定管规格：20mL（标配）；5mL，10mL （精度0.15%级）滴定模式：动态等当点滴定模式、增量等当点滴定模式、（电位或PH值）EP终点永停滴定模式、PH校正及测量应用范围：酸碱滴定、氧化还原滴定、络合滴定、非水滴定、pH测量、颜色滴定滴定精度：1/20000滴定管体积电极接口：直插式、BNC ，配有温度电极接口测量方法：20种记录存储：200条（可批量导出U盘）滴 定 台：带升降支架的磁力搅拌台（标配），杆式螺旋搅拌器数据接口：RS232串口，USB接口，WLAN接口环境温度：5-40℃环境湿度：≤80%电 源：220V/50H实验仪器AT-6电位滴定仪 （自动电位滴定仪AT-V6、自动滴定仪AT-E6)铂复合电极10ml滴定管单元测定方法含量测定：取样品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/l）在T960电位滴定仪上滴定至终点，同时做空白实验。每1ml碘滴定液（0.05mol/l）相当于8.806mg的C6H8O6.试剂滴定剂:C（I2))=0.050mol/L, 滴定剂的浓度按照国标标定.稀醋酸果维康维生素C片（市售）实验步骤仪器准备，请参照说明。取样品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/l）在T960电位滴定仪上滴定至终点，同时做空白实验。每1ml碘滴定液（0.05mol/l）相当于8.806mg的C6H8O6。测试结果（1）参数设定: 常量滴定（2) 实验数据 空白体积：V0=0.335ml滴定剂浓度：C(I2)=0.05155mol/L 式中C为碘标准溶液的浓度V1为样品所消耗的滴定液的体积V0为空白所消耗的滴定液的体积m为所称样品的质量0.008806为1ml碘（0.05mol/l）相当于8.806mgC6H8O6. （3）曲线样品量：0.790g, 终点体积：11.389ml样品量：0.790g, 终点体积：11.436ml样品量：0.790g, 终点体积：11.674ml 实验结果从实验中可以看出该果维康中维生素C平均含量为12.83%。AT-6电位滴定仪完全可以满足果维康中维生素c含量的测定需求。 关键词：电位滴定仪，全自动滴定仪，全自动电位滴定仪，滴定仪，AT-6

细胞检测的全球领先者依赖创新技术，简化疾病研究；推出&ldquo 一孔全部完成&rdquo 检测模式 圣弗朗西斯科 &ndash 在美国细胞生物学会 (ASCB) 第 48 届年会上，专注于提高人类及其生存环境的健康和安全的全球领先公司 PerkinElmer, Inc.，今天宣布扩展了其领先的 AlphaLISA&ldquo 无需洗涤&rdquo 检测产品线。 此产品系列发展迅速，目前拥有 27 种试剂盒，包括能够检测炎症、癌症、神经退行性疾病、代谢病和血管生成的关键生物标记物的试剂盒。现在可以达到&ldquo 一孔全部完成&rdquo ，即培养细胞和检测在一个孔中完成。这些试剂盒可以在各种复杂生物体液中使用，不需要费时费力的分离和洗涤步骤。 AlphaLISA 技术可以节省时间，消除因难于通过自动化完成而需要大量人力的流程，人力的参与会降低精度并且干扰较弱的生物分子相互作用。 &ldquo 全新的&ldquo 一孔全部完成&rdquo 功能极大地增强了 AlphaLISA 产品线的性能，并且在简化细胞检测方面向前迈进了一大步，&rdquo PerkinElmer 生物研发业务总裁 Richard Eglen 博士说。&ldquo AlphaLISA 是一项能够改进实验室工作流程的可靠技术，不需要昂贵的洗涤仪器和费时的 ELISA 技术，同时也简化了高通量自动化系统。&rdquo 除了炎症、癌症和代谢病检测，&ldquo 一孔全部完成&rdquo 试剂盒目前还包括能够推动多种重要疾病领域药物开发的一系列检测。此外，许多试剂盒还允许研究人员检测用于治疗的生物制剂中的宿主细胞污染物。 不断扩展的 AlphaLISA 免疫测定试剂盒*包括： Amyloid beta 40 老年性痴呆症 Amyloid beta 42 老年性痴呆症 CHO 宿主细胞蛋白 生物制剂 人类 IgG 生物制剂 NS/0 宿主细胞蛋白 生物制剂 表皮生长因子受体 癌症 红细胞生成素 癌症 前列腺特异抗原 癌症 血管内皮生长因子 癌症 软骨寡聚基质蛋白 炎症 粒细胞集落刺激因子 炎症 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 炎症 干扰素 &gamma 炎症 白细胞介素 10 炎症 白细胞介素 17 炎症 白细胞介素 1b 炎症 白细胞介素 2 炎症 白细胞介素 3 炎症 白细胞介素 6 炎症 白细胞介素 8 炎症 脂联素 代谢 生长激素 代谢 胰高血糖素样肽 1 代谢 胰岛素 代谢 瘦素 代谢 催乳激素 代谢 P24 病毒 AlphaLISA 是专利的均相微珠检测技术，并经过 PerkinElmer 的 EnVision 多标记检测仪验证。该检测仪是高度灵活的模块化系统，能够检测包括 TR-FRET、发光和荧光在内的几种检测模式。 关于 PerkinElmer, Inc. PerkinElmer, Inc. 是一家专注于提高人类及其生存环境的健康和安全的全球领先公司。据报道，该公司 2007 年收入为 18 亿美元，拥有约 9,100 名员工，为超过 150 个国家/地区的客户提供服务，同时该公司也是标准普尔 500 指数的成员。有关其它信息，请访问 www.perkinelmer.com 或致电 1-877-PKI-NYSE。 * 仅供研究使用。不适用于诊断过程。 ### 媒体联系人： Mario Fante PerkinElmer, Inc. 电子邮件：mario.fante@perkinelmer.com 电话：781-663-5602

在7月初出版的Journalof Translational Medicine杂志（2020年影响因子5.531）刊登了首都医科大学附属北京胸科医院联合广州市胸科医院、湖南省胸科医院和新疆维吾尔自治区胸科医院共同开展的一项前瞻性多中心诊断研究成果，该研究为活动性结核病的精准诊断提供了全新的思路与方法。 研究背景结核病一直是全球特别是发展中国家的主要死因之一。WHO 推荐的结核病分子诊断方法在培养阳性结核患者中有较好的效果，但它们的灵敏度难以涵盖到培养阴性结核病例。IFN-γ释放试验虽然可以用做结核感染诊断，但无法区分活动性结核和结核潜伏感染。在结核病高负担国家，如何准确诊断活动性结核病，特别是实现菌阴结核的实验室诊断，是控制结核病传播和终止结核的难点。在国家十三五传染病防治科技重大专项支持下，该团队使用结核特异性细胞因子IFN-γ和IL-2 联合检测技术对上述问题给出了新的解决方案。 研究方法该项研究在2017年7月至2018年12月期间连续纳入了3245例疑似结核患者，最终，2536例被诊断为活动性肺结核和718例非结核病例，其中活动性肺结核病例有1092例为结核病确诊病例，1444例为临床诊断病例(详见Table 1)。对患者同时采取痰液样本和血液样本，针对每位受试者采集外周血单个核细胞经结核特异性蛋白ESAT-6–CFP-10-Rv1985c刺激后，分析其IFN-γ和IL-2的释放水平，建立活动性结核预测模型。研究结果①新的检测靶标IL-2特异性高达94.3%研究结果发现IFN-γ的ROC 曲线下面积为0.859，而IL-2 的ROC 曲线面积0.865（详见Fig. 2 ） ，IFN-γ的总体敏感性和特异性分别为83.8% 和81.5%，IL-2的特异性为94.3%，灵敏度为72.6%（详见Table2）。 ②新的检测靶标IL-2提高结核病的检出率双因子检测的敏感性为87.9%，单因子检测敏感性为83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的检测靶标IL-2，表明约16%的活动性结核患者中IFN-γ结果为阴性，而这些患者中有1/4的病例IL-2 结果为阳性。当IFN-γ和IL-2 串联组合时，特异性进一步提高到96.0%，可与分子诊断的培养阳性检测结果相媲美，甚至可以对培养阴性的患者产生可靠的结果。 ③并联检测敏感性高达87.9%，串联检测特异性高达96.0%进一步分析IFN-γ和IL-2联合应用对活动性结核病的诊断价值。对IFN-γ和IL-2 进行并联检测时，敏感性升至最高的87.9%，特异性达到79.8%，阳性预测值达93.9%；当IFN-γ和IL-2 进行串联检测时，718 例非结核患者中有689 例检测结果为阴性，特异性为96.0%，敏感性为68.5%，阳性预测值为98.4%。值得注意的是，串联检测在结核病确诊患者的敏感性（72.1%），高于临床诊断敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串联检测的准确度与结核病的严重程度相关。 ④双因子联合检测灵活性高，满足不同的检测场景研究团队根据活动性结核病不同流行模型，分别阐述了IFN-γ和IL-2联合检测在不同模型中诊断价值，并提出了适用于综合性医院和专科医院各自的诊断算法。 在综合性医院中，约有10%的结核疑似患者最终确诊为活动性结核，与常规涂片镜检相比，使用具有更高敏感性的双因子并联检测可帮助临床医生发现更多活动性结核病患者（如图B）；在结核病专科医院，结核病疑似患者中活动性结核病的比例达到50%，使用具有高特异性的双因子串联检测可为活动性结核病患者特别是菌阴结核患者提供诊断依据（如图A）。 根据在不同医院中结核病患者不同的比例，采用IFN-γ/IL-2并联和串联检测进行预测 迪澳生物DeFine.TB 结核分枝杆菌特异性细胞因子（IFN-γ和IL-2）检测试剂是“十三五”国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品，目前国内已获批上市。该试剂盒的检测原理与文章所用技术一致，选取了存在于结核分枝杆菌，但在卡介苗和大多数非结核分枝杆菌中普遍缺失的RD1区和RD2区编码的ESAT-6、CFP-10、Rv1985c蛋白，应用基因工程技术将其表达成为融合蛋白（ESAT-6-CFP-10-Rv1985c）。 在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。“双因子”检测临床应用的价值： 发现更多的活动性结核患者 病原学阴性结核病的辅助诊断 用于免疫抑制剂用药前结核感染的排查 健康及高危人群结核病的筛查 肺外结核病的辅助诊断 非结核病的鉴别诊断 治疗过程中结核病活化状态风险预测

在本月初出版的Journal of Translational Medicine杂志（2020年影响因子5.531）刊登了首都医科大学附属北京胸科医院联合广州市胸科医院、湖南省胸科医院和新疆维吾尔自治区胸科医院共同开展的一项前瞻性多中心诊断研究成果，该研究为活动性结核病的精准诊断提供了全新的思路与方法。 研究背景结核病一直是全球特别是发展中国家的主要死因之一。WHO 推荐的结核病分子诊断方法在培养阳性结核患者中有较好的效果，但它们的灵敏度难以涵盖到培养阴性结核病例。IFN-γ释放试验虽然可以用做结核感染诊断，但无法区分活动性结核和结核潜伏感染。在结核病高负担国家，如何准确诊断活动性结核病，特别是实现菌阴结核的实验室诊断，是控制结核病传播和终止结核的难点。在国家十三五传染病防治科技重大专项支持下，该团队使用结核特异性细胞因子IFN-γ和IL-2 联合检测技术对上述问题给出了新的解决方案。 方 法该项研究在2017年7月至2018年12月期间连续纳入了3245例疑似结核患者，最终，2536例被诊断为活动性肺结核和718例非结核病例，其中活动性肺结核病例有1092例为结核病确诊病例，1444例为临床诊断病例(详见Table 1)。对患者同时采取痰液样本和血液样本，针对每位受试者采集外周血单个核细胞经结核特异性蛋白ESAT-6–CFP-10-Rv1985c刺激后，分析其IFN-γ和IL-2的释放水平，建立活动性结核预测模型。 研究结果新的检测靶标IL-2特异性高达94.3%研究结果发现IFN-γ的ROC 曲线下面积为0.859，而IL-2 的ROC 曲线面积0.865（详见Fig. 2 ） ，IFN-γ的总体敏感性和特异性分别为83.8% 和81.5%，IL-2 的特异性为94.3%，灵敏度为72.6%（详见Table2）。新的检测靶标IL-2提高结核病的检出率双因子检测的敏感性为87.9%，单因子检测敏感性为83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的检测靶标IL-2，表明约16%的活动性结核患者中IFN-γ结果为阴性，而这些患者中有1/4的病例IL-2 结果为阳性。当IFN-γ和IL-2 串联组合时，特异性进一步提高到96.0%，可与分子诊断的培养阳性检测结果相媲美，甚至可以对培养阴性的患者产生可靠的结果。 并联检测敏感性高达87.9%，串联检测特异性高达96.0%进一步分析IFN-γ和IL-2联合应用对活动性结核病的诊断价值。对IFN-γ和IL-2 进行并联检测时，敏感性升至最高的87.9%，特异性达到79.8%，阳性预测值达93.9%；当IFN-γ和IL-2 进行串联检测时，718 例非结核患者中有689 例检测结果为阴性，特异性为96.0%，敏感性为68.5%，阳性预测值为98.4%。值得注意的是，串联检测在结核病确诊患者的敏感性（72.1%），高于临床诊断敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串联检测的准确度与结核病的严重程度相关。 双因子联合检测灵活性高，满足不同的检测场景研究团队根据活动性结核病不同流行模型，分别阐述了IFN-γ和IL-2 联合检测在不同模型中诊断价值，并提出了适用于综合性医院和专科医院各自的诊断算法。在综合性医院中，约有10%的结核疑似患者最终确诊为活动性结核，与常规涂片镜检相比，使用具有更高敏感性的双因子并联检测可帮助临床医生发现更多活动性结核病患者（如图B）；在结核病专科医院，结核病疑似患者中活动性结核病的比例达到50%，使用具有高特异性的双因子串联检测可为活动性结核病患者特别是菌阴结核患者提供诊断依据（如图A）。 根据在不同医院中结核病患者不同的比例，采用IFN-γ/IL-2并联和串联检测进行预测 迪澳生物DeFine.TB结核分枝杆菌特异性细胞因子（IFN-γ和IL-2）检测试剂是“十三五”国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品，目前国内已获批上市。该试剂盒的检测原理与文章所用技术一致，选取了存在于结核分枝杆菌，但在卡介苗和大多数非结核分枝杆菌中普遍缺失的RD1区和RD2区编码的ESAT-6、CFP-10、Rv1985c蛋白，应用基因工程技术将其表达成为融合蛋白（ESAT-6-CFP-10-Rv1985c）。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。“双因子”检测临床应用的价值： 发现更多的活动性结核患者 病原学阴性结核病的辅助诊断 用于免疫抑制剂用药前结核感染的排查 健康及高危人群结核病的筛查 肺外结核病的辅助诊断 非结核病的鉴别诊断 治疗过程中结核病活化状态风险预测

肿瘤异质性对癌症预后和治疗反应有显著影响。传统的基因组和转录组分析被广泛用于研究不同的癌症类型，在预测预后和对不同治疗的反应以及为癌症治疗提供靶点方面具有潜在作用。不同癌症类型的单细胞分析表明，肿瘤免疫微环境的详细信息在多种癌症类型之间共享。目前，自从发现检查点抑制剂以来，免疫治疗彻底改变了癌症治疗并引起了越来越多的关注。肿瘤免疫微环境由非细胞成分(血管、细胞外基质、信号分子等)和细胞成分(T细胞、髓细胞、成纤维细胞等)组成。尽管传统的基因组和转录组学分析，也强调免疫相关途径和计算方法，并已应用于预测免疫细胞成分，但技术限制阻碍了时间的精确表征。传统的批量基因组和转录组分析获得的信号均来自不同细胞，掩盖了特定细胞类型和状态的识别。原位杂交和免疫组织化学已被用于探索单个细胞的基因组、转录组和蛋白质组学特征，但其产量相对较低。流式细胞术能够分析数千或数百万个单细胞蛋白质组学图谱；然而，这些方法需要事先选择感兴趣的抗体。随着细胞分离和测序技术的突破，单细胞转录组测序已经能够在单次运行中在单细胞水平上对许多细胞进行无偏好的全基因组分析。单细胞转录组测序已被用于分析单个细胞的转录组学，用于解析细胞间的异质性。肿瘤免疫微环境在诊断、治疗和预测不同类型癌症的预后方面显示出了潜力。与传统方法相比，scRNA-seq可用于识别新的细胞类型和相应的细胞状态，加深了我们对肿瘤免疫微环境的理解。1.介绍了scRNA-seq的原理，并比较了不同的测序方法。2.根据肿瘤免疫微环境中新的细胞类型、持续的过渡状态以及肿瘤免疫微环境成分之间的相互通讯网络找到了癌症的预后预测和治疗的潜在靶点。3.总结出在肿瘤免疫微环境中应用scRNA-seq后发现的由癌症相关成纤维细胞、T细胞、肿瘤相关巨噬细胞和树突状细胞组成的新型细胞簇。4.提出了肿瘤相关巨噬细胞和耗尽的T细胞的发生机制，以及中断这一过程的可能靶点。5.对肿瘤免疫微环境中细胞相互作用的干预治疗进行了总结。几十年来，肿瘤免疫微环境中的细胞成分定量分析已被应用于临床实践，预测患者生存率和治疗反应，并有望在癌症的精确治疗中发挥重要作用。总结目前的研究结果，我们认为单细胞技术的进步和单细胞分析的广泛应用可以导致发现癌症治疗的新观点，并应用于临床。最后，作者提出了肿瘤免疫微环境研究领域的一些未来方向，并认为通过scRNA-seq对这些方向进行辅助。相关会议预告：8.30召开，点击报名scRNA-seq在刻画肿瘤免疫微环境中的应用scRNA-seq技术进展scRNA-seq程序主要包括单细胞的分离和提取、cDNA合成、核酸扩增、测序和数据分析。与传统的批量测序相比，scRNA-seq单个细胞中的RNA量相对较少。因此，需要更有效的扩增方法。研究人员已经成功建立了稳定的单细胞文库构建过程，以产生足够的cDNA用于测序。单细胞分离和捕获是scRNA-seq在不同方法中的基本程序。目前单细胞分离和捕获的常用方法。这些程序分为四大类：激光捕获微切割、油滴包裹技术、流式细胞荧光分选技术和微流控微孔技术。scRNA-seq技术的未来发展可能会降低成本并增加细胞产量，使scRNA-seq成为研究单个细胞转录组的标准工具。肿瘤免疫微环境的细胞成分肿瘤免疫微环境的细胞成分包括淋巴细胞(T和NK细胞)、髓细胞(巨噬细胞和树突状细胞)、成纤维细胞和其他免疫细胞。成纤维细胞传统上被归类为基质细胞，因为它们在构建细胞外基质中发挥着重要作用。在这里，作者将肿瘤免疫微环境的癌相关成纤维细胞包括在内，因为它们分泌丰富的促炎和抗炎因子来重塑免疫微环境。细胞毒性CD8+T细胞识别肿瘤细胞上的特异性抗原并随后消除它们，是免疫微环境最常见和最有效的免疫细胞。CD8+T细胞的细胞毒性功能依赖于CD4+T Th1细胞。其他CD4+T细胞，包括Th2细胞和Th17细胞，也促进肿瘤微环境中的免疫反应。调节性T细胞抑制肿瘤免疫微环境并加剧肿瘤进展。自然杀伤T细胞和自然杀伤细胞也参与其中。它们的受体识别肿瘤细胞，从而激活其他免疫细胞。作为先天免疫的重要组成部分，骨髓细胞，包括肿瘤相关巨噬细胞和树突状细胞，在肿瘤免疫微环境中发挥着重要作用。巨噬细胞通常分为促炎M1和抗炎M2表型。肿瘤相关巨噬细胞主要由M2巨噬细胞组成，通过产生生长因子和细胞因子促进肿瘤生长、肿瘤存活和血管生成。DC对于T细胞的抗原呈递至关重要，连接先天免疫和适应性免疫。癌症相关成纤维细胞在肿瘤免疫微环境中维持增殖和分泌调节因子，可分为炎症性CAF和肌纤维母细胞CAF。炎症性CAF具有较高的细胞因子和趋化因子分泌，而肌纤维母细胞CAF高度表达收缩蛋白，成纤维细胞对免疫微环境起相互抑制作用。研究表明，成纤维细胞募集M2巨噬细胞和调节性T细胞，抑制肿瘤微环境中的免疫反应。肿瘤相关成纤维细胞也被发现在某些情况下会支持抗肿瘤免疫。除了分泌抗体，B细胞还通过产生与T细胞相互作用的细胞因子参与细胞免疫。研究表明，B细胞抑制细胞毒性T细胞并诱导CD4+T细胞分化为调节性T细胞。B细胞也是最近引入的三级淋巴结构的重要组成部分，富含B细胞的三级淋巴结构与各种肿瘤的生存和免疫治疗反应有关。先前的研究强调了细胞成分在时间中的重要作用。然而，免疫细胞的鉴定常基于有限的细胞标记，并借助免疫组织化学。个体免疫细胞的转录组图谱是探索不同免疫细胞及其相应功能所必需的。为了理解细胞进化过程及其决定因素，有必要应用scRNA-seq观察每个细胞的转录动态。利用scRNA-seq探索免疫微环境的新发现聚类和注释对于解释scRNA-seq数据探索至关重要。根据细胞相似性对数据进行划分，挑战在于在不提供先验知识的情况下估计固有的簇数或密度。可能的解决方案是采用分层聚类方法来揭示细胞的分层结构，这也与细胞本体相一致。给定聚类方法产生的数据划分结果，需要细胞类型注释来提供生物学意义。注释的主要挑战是确定每个聚类中存在多少细胞类型，以及是否存在当前未发现的细胞类型。在实践中，研究人员通常首先识别每个聚类的标记基因，然后根据专业知识和文献对其进行注释。scRNA-seq使研究人员能够以更高的分辨率将免疫细胞分类为具有不同功能的亚群，描述了免疫细胞的常规亚型。利用scRNA-seq发现的淋巴细胞(T和NK细胞)、髓细胞(巨噬细胞和树突状细胞)和成纤维细胞的组成(图2)。人和小鼠样本的scRNA-seq表明，成纤维细胞可分为抗原呈递CAFs、癌症相关成纤维细胞或肌成纤维细胞。抗原提呈CAFs独特地表达主要组织相容性复合体(MHC)II类基因，包括激活CD4+T细胞的CD74。在结直肠癌中也观察到类似的抗原提呈CAFs亚群。乳腺癌症基因工程小鼠模型中成纤维细胞的scRNA-seq进一步鉴定了血管CAF、基质CAF、发育CAF和循环CAF。血管CAF、基质CAF和发育CAF似乎起源于固有成纤维细胞和恶性细胞发生上皮-间充质转化时的血管周围位置。循环CAF是血管CAF群体中增殖的部分。在其他小鼠模型中也发现了血管CAF和基质CAF，它们在患者乳腺肿瘤样本中是保守的，并且发现它们会增加乳腺癌症细胞的转移。提高CAF的分辨率为开发精确靶向CAF的药物提供了生物标志物。另一项关于乳腺癌症的scRNA-seq研究将调节性T细胞分为五类：共表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4的调节性T细胞、具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体，以及相互或仅表达相同基因的GITR和其他调节性T细胞，它们具有不同的功能。不同预后的患者具有不同比例的调节性T细胞簇，为个性化治疗提供了靶点。免疫微环境对T细胞和髓细胞进行了更详细的泛癌研究，发现存在颗粒酶K+T细胞、干扰素刺激基因+T细胞、杀伤细胞免疫球蛋白样受体在记忆性T细胞和NK细胞上表达、转录因子7+CD8+T细胞，ficolin 1+常规DC2、分泌性磷酸蛋白1+TAM，以及肿瘤微环境中的叶酸受体β+TAMs。基于scRNA-seq数据，免疫微环境还发现了新的免疫细胞亚群。葡萄膜黑色素瘤的scRNA-seq鉴定了以前未识别的细胞类型，包括主要表达检查点标记LAG3而不是程序性死亡-1或CTLA-4的CD8+T细胞。同时，在肝细胞癌中发现浸润耗尽的CD8+T细胞和具有高表达layilin的记忆T细胞的克隆富集，这些研究为癌症免疫治疗提供了新的靶点。因为CD8+T细胞是参与消除恶性细胞的主要成分。大肠癌CXC基序趋化因子的scRNA-seq鉴定配体BHLHE40+Th1样细胞与干扰素-γ调节转录因子BHLHE40。在不稳定肿瘤中，这些细胞对免疫检查点阻断有良好的反应，可能会提高免疫疗法的疗效。树突状细胞对于呈递抗原以激活肿瘤免疫微环境中的T细胞是必不可少的。胃癌的scRNA-seq揭示了一个新的树突状细胞簇，表达吲哚胺2,3-双加氧酶1和趋化因子C–C基序趋化因子配体(CCL)22、CCL17、CCL19和白细胞介素-32，它们参与T细胞的募集。胰腺导管腺癌的scRNA-seq还鉴定了除了常规细胞标记物之外还高表达吲哚胺2,3-双加氧酶1的树突状细胞簇。吲哚胺2,3-双加氧酶1对于催化色氨酸消耗和犬尿氨酸产生、抑制T细胞增殖和细胞毒性至关重要，这揭示了树突状细胞和T细胞之间的密切相互作用。此外，通过scRNA-seq鉴定了溶酶体相关膜蛋白3+树突状细胞，并且似乎是经典树突状细胞族的成熟形式。溶酶体相关膜蛋白3+DC可以迁移到淋巴结，并高度表达与T细胞相互作用的配体。这些表达特异性标记物的新型树突状细胞簇的发现为癌症免疫治疗提供了一个新的视角。使用scRNA-seq在肺腺癌中发现了肿瘤相关巨噬细胞的新特征基因，包括髓系细胞触发受体2、CD81、具有胶原结构的巨噬细胞受体和载脂蛋白E。此外，乳腺癌症的scRNA-seq表明，除了M2型基因如CD163、跨膜4域A6A和转化生长因子β1外，血管生成因子纤溶酶原激活剂、尿激酶受体和IL-8也在肿瘤相关巨噬细胞中表达。肿瘤相关巨噬细胞中这些新的基因特征图谱与患者生存相关，并为癌症治疗提供了新的潜在靶点。肿瘤样本scRNA-seq显示，一个肿瘤相关巨噬细胞亚群呈现出SPP1、巨噬细胞清除剂受体MARCO和MHC II类基因的高表达。MARCO和SPP1是巨噬细胞激活中的抗炎和免疫抑制信号，而MHC II类基因与促炎功能有关。其他scRNA-seq研究表明，肿瘤相关巨噬细胞经常同时具有促炎和抗炎特征。这一现象表明，肿瘤微环境中的巨噬细胞活化与传统的M1/M2极化不一致。图2：利用scRNA-seq揭示免疫微环境中的新的免疫亚群单细胞数据揭示免疫细胞进化大多数免疫细胞都处于细胞发育过程中。大量的免疫细胞处于发育轨迹的瞬态状态，而不是分化良好的细胞的离散状态。借助scRNA-seq和深入分析，研究人员可以探索分化细胞的特征、特定细胞类型的转变及其可能的机制。最常用的计算方法是拟时序分析。轨迹描述了细胞的发育过程，其特征是基因表达的级联变化。分支点代表细胞分化的显著差异。各种机器学习计算方法已被用于构建轨迹，包括Monocle3、DTFLOW、DPT、SCORPIUS和TSCAN，这些方法已在单独的综述中进行了评估和比较。由于肿瘤相关巨噬细胞和T细胞代表了免疫微环境中最丰富的免疫细胞类型，这里主要关注这两种细胞类型。scRNA-seq显示，TAMs经常共表达M1基因，包括TNF-α和M2基因，如IL-10，并且肿瘤相关巨噬细胞的分化和状态与其抗肿瘤作用直接相关。拟时序轨迹分析证实，肿瘤相关巨噬细胞在M1和M2表型之间连续转换。转录因子IRF2、IRF7、IRF9、STAT2和IRF8似乎在决定TAMs分化中很重要，并可作为表观遗传学靶点诱导肿瘤相关巨噬细胞的M1极化，从而产生促炎和抗肿瘤的微环境。使用环境刺激和抗原T细胞受体(TCR)刺激测定T细胞表型。不同状态的细胞之间TCR库的重叠，即TCR共享，也可用于研究T细胞的进化。结合scRNA-seq和TCR追踪在结直肠癌中发现20个具有不同功能的T细胞亚群。在黑色素瘤肿瘤的耗竭T细胞中发现了28个基因的耗竭特征，包括TIGIT、TNFRSF9/4-1BB和CD27，并且在大多数肿瘤的高耗竭细胞中也被发现上调。另一项关于T细胞的研究进一步鉴定了CD8+T细胞中的其他耗竭标记物，如LAYN、普列可底物蛋白同源物样结构域家族A成员1和突触体相关蛋白47。拟时序轨迹分析表明，T细胞在时间上处于连续激活和终末分化(衰竭)状态(图3)。已经进行了额外的研究来研究耗尽的T细胞的进化和逆转T细胞耗尽的潜在靶点。scRNA-seq与TCR分析相结合表明，功能失调的衰竭T细胞和细胞毒性T细胞可能在时间上与发育有关。因此，研究集中在CD8+T细胞从效应细胞到衰竭T细胞的过渡过程。scRNA-seq鉴定出两个CD8+T细胞簇为非小细胞肺癌中预先耗尽的T细胞。在肺腺癌中，预先耗尽与耗尽的T细胞比率与更好的预后相关。因此，在耗尽前中断预先耗尽的T细胞可能对癌症免疫治疗至关重要。由于免疫细胞和恶性细胞之间的密切相互作用，恶性细胞的进化在免疫细胞进化中也起着至关重要的作用。拟时序轨迹分析表明，转移性肺腺癌的轨迹分支不同于向纤毛细胞和肺泡型细胞的正常分化。受恶性细胞进化的影响，正常的骨髓细胞群体被单核细胞衍生的巨噬细胞和新型树突状细胞取代。T细胞也被发现会衰竭，从而构建免疫抑制的肿瘤微环境。同样，另一项研究表明甲状腺癌症细胞来源于乳头状甲状腺癌症细胞亚簇，其中构建了不同的肿瘤免疫微环境，导致预后显著恶化。图3：肿瘤相关T细胞和巨噬细胞的进化过程免疫微环境中不同细胞间的通讯网络免疫微环境上的细胞通讯与肿瘤进展有关。配体-受体相互作用是一种重要的细胞通讯类型，对于构建免疫微环境和识别潜在的治疗靶点至关重要。scRNA-seq是在细胞基础上进行的，这使得研究未发现的细胞相互作用变得可行。已经开发了许多基于scRNA-seq数据研究配体-受体相互作用的分析工具，包括iTALK、CellTalker和CellPhoneDB。这些工具利用了已知配体-受体对相互作用的数据库。其中，CellTalker利用差异表达的基因，而CellPhoneDB包括配体和受体的亚基结构。其他工具，如NicheNet，也考虑了受体细胞下游通路的变化。在肿瘤进展过程中，恶性细胞导致免疫细胞的募集和功能障碍，从而相互影响肿瘤的发生和恶性细胞的进化，形成恶性循环(图4)。发现TAMs通过表皮生长因子受体-双调节蛋白配体受体对与恶性细胞相互作用。在基底样乳腺癌细胞系中AREG的调节导致抗炎TAMs的招募。同时，基于scRNA-seq，发现了一种EGFR相关的反馈回路可促进胰腺腺鳞癌的进展。来源于TAMs的抑瘤素M也与其在恶性细胞上的受体相互作用，以激活信号转导子和转录激活子3。研究人员通过整合素受体与胶原蛋白、纤维连接蛋白、血小板反应蛋白1配体和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4-R-反应蛋白3的相互作用，发现CAF与胃癌细胞之间的通信，这些配体调节干细胞。此外，胰腺导管腺癌的scRNA-seq揭示了TIGIT与T细胞和NK细胞中的甲型肝炎病毒细胞受体2之间的相互作用，以及它们在恶性细胞中的相应配体PVR和LGALS9，导致免疫细胞功能障碍和胰腺癌症进展。因此，基于单细胞数据探索免疫细胞和恶性细胞之间的细胞相互作用提供了可能治疗靶点，以打破肿瘤进展的恶性循环。除了恶性细胞外，scRNA-seq和随后的分析还预测了免疫细胞之间在时间上的相互作用，这表现出相反的功能(图3)。例如，研究发现TAM降低了CXCL12-C-X-C基序趋化因子受体3和CXCL12-CXCR4的相互作用，增强了鼻咽癌细胞毒性T细胞和Tregs之间的CD86-CTLA-4相互作用，导致肿瘤免疫微环境加重癌症进展。此外，CAFs通过分泌CXCL12募集Tregs，并通过periostin与M2巨噬细胞相关。图4：免疫微环境中的细胞通讯网络基于scRNA-seq的肿瘤免疫微环境的临床应用和潜在靶点几十年来，临床实践中一直采用时间的量化来预测患者的生存率和对治疗的反应。利用免疫组化分析的免疫评分，量化肿瘤中的原位免疫细胞浸润。与传统的免疫评分相比，scRNA-seq在免疫微环境上提供了前所未有的渗透免疫细胞分辨率。已经鉴定出与预后相关的新的免疫细胞簇。例如，在早期复发的肝细胞癌中发现了一种独特的低细胞毒性先天性样CD8+T细胞表型。这些T细胞过表达KLRB1，同时下调共刺激和耗竭相关分子，包括肿瘤坏死因子受体超家族、成员9、CD28、诱导型T细胞共刺激因子、TIGIT、CTLA-4和HAVCR2。这种T细胞簇的浸润与癌症的不良预后相关。此外，基于scRNA-seq的细胞相互作用也被计算在预测模型中。基于细胞间通讯相关基因构建了机器学习模型，以预测肺腺癌的复发。将八个细胞间通讯相关基因和患者的临床信息相结合，获得了0.841的受试者-操作者特征曲线下面积。除了预后预测外，肿瘤免疫微环境中独特的细胞相互作用也与免疫疗法的反应有关。scRNA-seq分析发现，抗PD-1治疗的应答者和非应答者之间存在不同的细胞-细胞通信网络，有可能预测患者对抗PD-1疗法的反应。因此，在scRNA-seq的帮助下，可以更准确地预测患者的预后和对免疫疗法的反应。利用scRNA-seq在精准医学中具有启发性，例如帮助靶向治疗克服耐药性。例如，医生在使用替比法尼治疗的非CR肌肉浸润性膀胱癌症患者治疗前后应用患者衍生异种移植物的scRNA-seq。在治疗后的PDX中发现PD-L1的上调，并降低了免疫细胞的抗肿瘤作用。因此，选择了用PD-L1抑制剂进行额外治疗。随后，患者获得了良好的反应。此外，在单药耐药性肿瘤中，通过scRNA-seq鉴定了新的免疫亚型。用抗集落刺激因子1受体阻断TAMs不能减少胆管癌的肿瘤进展。scRNAs-eq鉴定了表达APOE的粒细胞髓系衍生抑制细胞的补偿富集，其介导T细胞抑制。TAMs和粒细胞性骨髓源性抑制细胞的双重抑制与抗CSF1R和抗淋巴细胞抗原6复合物、基因座G治疗联合增强了小鼠的免疫检查点阻断效果小鼠模型，这在临床实践中很有前景。除了治疗耐药肿瘤外，scRNA-seq在免疫微环境上的应用也突出了需要进一步研究的潜在新靶点。T细胞是免疫微环境中去除恶性细胞最重要的免疫细胞。然而，在不同的肿瘤中，耗尽的CD8+T细胞会导致不利的预后。除了众所周知的免疫抑制检查点外，scRNA-seq还鉴定了高表达内皮前体蛋白、酪氨酸酶相关蛋白1和内皮素受体B型的耗尽CD8+T细胞，这些细胞可以作为新的潜在靶点。髓细胞是免疫微环境招募免疫细胞所必需的。通过scRNA-seq鉴定TREM2/APOE/补体组分1，q亚组分阳性巨噬细胞浸润为透明细胞肾癌复发的预后生物标志物。另一项研究证实，小鼠中靶向TREM2的抗体与缺乏MRC1+和CX3CR1+巨噬细胞以及表达免疫刺激分子的髓系簇的扩增有关，这促进了T细胞反应并导致更好的预后。细胞相互作用也可以用作治疗靶点。肝内胆管癌的scRNA-seq揭示了血管CAFs与肝内胆管细胞之间的串扰。血管CAFs分泌的IL-6诱导Cajal间质细胞细胞的表观遗传学改变，从而增强恶性肿瘤。因此，IL-6信号在Cajal间质细胞的中断变得非常有趣。表1总结了scRNA-seq显示的癌症治疗的潜在靶点。表1：scRNA-seq显示的癌症治疗的潜在靶点总结scRNA-seq可以绘制全面的肿瘤免疫微环境细胞图谱，为各种肿瘤的临床应用提供了新的视角。此外，免疫微环境的细胞成分和通讯为癌症治疗提供了潜在靶点，并有助于精确医学的发展。技术的进步和单细胞分析的广泛应用可以发现癌症治疗的新观点，助力临床研究。作为突破性的新技术，单细胞分析技术有望逐渐取代传统的整体样本二代测序。单细胞分析技术在临床和药物开发方面的应用前景更为广阔，可以代替或补充分子、细胞和组织病理检测的现有技术，也可以用于新兴的细胞治疗。

CD8+ T细胞是杀伤癌细胞的最主要细胞类群。肿瘤浸润T细胞中含有应答肿瘤抗原的T细胞。然而伴随着肿瘤发生过程，这些T细胞经常分化为功能失调状态，即T细胞耗竭。调节肿瘤浸润T细胞的治疗方法已经取得了显著的临床效果，但在不同癌症类型之间差异很大。越来越多的证据显示不同癌症类型的微环境对塑造T细胞的组成和状态发挥着重要作用，但迄今为止仍然缺少对不同癌症类型的T细胞的系统比较。单细胞转录组测序 (scRNA-seq) 已成功应用于精细的表征多种癌症的肿瘤微环境，包括肿瘤浸润T细胞。2021年12月17日，北京大学生物医学前沿创新中心（BIOPIC）、生命科学学院、北京未来基因诊断高精尖创新中心（ICG）张泽民课题组联合北京大学肿瘤医院季加孚、步召德课题组以及北京大学第三医院，在Science上发表了题为Pan-Cancer Single Cell Landscape of Tumor-Infiltrating T Cells的研究论文。结合单细胞基因表达谱和 T细胞受体序列，研究者系统刻画了肿瘤浸润性T细胞的异质性和动态性，并系统比较了癌症类型之间的异同。利用单细胞测序和生物信息技术，研究者之前对三个癌种，即肝癌、非小细胞肺癌和结直肠癌完成了T细胞单细胞水平的研究。为了更好地了解肿瘤浸润T细胞的全貌，了解癌种间的共性和特殊性，本研究收录了更多的癌症类型，包括骨髓瘤、淋巴瘤、肾癌、卵巢癌、子宫内膜癌、食道癌、甲状腺癌、乳腺癌、胃癌和胰腺癌，并广泛收集国际上已发表的类似数据。本研究通过创新生物信息方法，校正混杂因素和批次效应后，有效整合了不同实验平台和实验室来源的数据，从而构建了系统的单细胞水平的泛癌症T细胞图谱，图谱最终涵盖了来自21种癌症类型的316名患者的397,810高质量T细胞数据。本研究一共识别出17个CD8+T细胞类群和24个CD4+T细胞类群。所有T细胞类群都能在至少80%的癌种中找到。比较癌、癌旁组织和外周血的T细胞组成，可以看到明显的差异。外周血的CD8+T细胞由初始T细胞和终末分化效应T细胞主导。癌旁组织则出现较多的记忆T细胞，而癌组织中出现特有的耗竭T细胞。基于香农熵的多样性指数也定量地表明，从外周血到癌旁组织再到癌组织，T细胞组成的多样性逐渐升高。类似的，CD4+T细胞组分的多样性在癌组织中也最高。在癌组织中丰度最高的CD4+T细胞为TNFRSF9+Treg，且其显著高于在外周血和癌旁组织中。这些结果表明，肿瘤微环境明显地重塑了T细胞的状态。研究揭示了 T 细胞亚群的异质性、分化谱系及其与肿瘤生物学特征的关联。对于 CD8+ T 细胞，研究者分别通过效应记忆T细胞和组织驻留T揭示了T耗竭的两种常见主要途径，以及它们在不同癌症类型中的偏好。研究者还提出了表达干扰素刺激基因的 T 细胞作为 T 细胞耗竭的中间状态。对于 CD4+ T 细胞，研究发现肿瘤中的两种T滤泡辅助细胞，并进一步发现其与肿瘤突变负荷相关，提示了肿瘤细胞如何塑造肿瘤微环境。根据肿瘤浸润T细胞的组成，癌症患者可以分为末期耗竭 CD8+ T 细胞占比高与组织驻留记忆 CD8+ T 细胞占比高的两个组群。基于T细胞的肿瘤免疫分型为理解肿瘤浸润T细胞的总体特性提供了一个参考，也将进一步指导开发新的癌症免疫疗法和病人分层。T细胞单细胞图谱的主要发现北京大学前沿交叉学科研究院博士毕业生郑良涛、生命科学学院博士生秦世尚、前沿交叉学科研究院博士后司雯为该论文的并列第一作者，北京大学BIOPIC和生命科学学院张泽民教授、北京大学肿瘤医院季加孚教授和步召德教授、百奥智汇胡学达博士为该论文的共同通讯作者。

人原钙黏素1(PCDH1)ELISA试剂盒人白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒人B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA试剂盒人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA试剂盒人免疫球蛋白A Fc段受体Ⅰ(Fc&alpha RⅠ/CD89)ELISA试剂盒人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ(Fc&epsilon RⅡ/CD23)ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(Fc&gamma RⅢ/CD16)ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(Fc&gamma RⅡ/CD32)ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(Fc&gamma RⅠ/CD64)ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(Fc&gamma RⅢ/CD16)ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(Fc&gamma RⅡ/CD32)ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(Fc&gamma RⅠ/CD64)ELISA试剂盒人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒人干扰素调节因子(IRF)ELISA试剂盒人淋巴毒素&beta (LTB)ELISA试剂盒人淋巴毒素&alpha (LTA)ELISA试剂盒人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA试剂盒人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒人&beta 干扰素(IFN-&beta /IFNB)ELISA试剂盒人可溶性CD38(sCD38)ELISA试剂盒人可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA试剂盒人可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒人Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒人转化生长因子&beta 2(TGF&beta 2)ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒人白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)ELISA试剂盒人红细胞刺激因子(ESF)ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA试剂盒人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA试剂盒人巨噬细胞趋化因子(MCF)ELISA试剂盒人&alpha /&beta 干扰素受体(IFN-&alpha /&beta R)ELISA试剂盒人B细胞生长因子(BCGF)ELISA试剂盒人B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒人上皮细胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA试剂盒人可溶性粘附分子(Sam)ELISA试剂盒人巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)ELISA试剂盒人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒人胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒人可溶性CD28(sCD28)ELISA试剂盒人淋巴细胞因子ELISA试剂盒人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)ELISA试剂盒人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)ELISA试剂盒人神经保护因子(CVNPF)ELISA试剂盒人可溶性肿瘤坏死因子&alpha 受体(sTNF&alpha R)ELISA试剂盒人可溶性细胞因子受体(sCKR)ELISA试剂盒人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)ELISA试剂盒人细胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA试剂盒人集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒人&gamma 干扰素诱导单核细胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA试剂盒人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA试剂盒人CD14分子(CDl4)ELISA试剂盒人凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒人白细胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)ELISA试剂盒人角化细胞生长因子(KGF)ELISA试剂盒人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒人CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒人CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒人&gamma 干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒人基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒人淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒人&alpha 干扰素(IFN-&alpha )ELISA试剂盒人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒人白介素27(IL-27)ELISA试剂盒人白介素23(IL-23)ELISA试剂盒人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒人组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒人干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒人白介素1(IL-1)ELISA试剂盒人白介素17(IL-17)ELISA试剂盒人白介素1&beta (IL-1&beta )ELISA试剂盒人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA试剂盒人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒人细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA试剂盒人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒人结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒人白介素18(IL-18)ELISA试剂盒人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA试剂盒人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA试剂盒人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子&beta (TNF-&beta )ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子&alpha (TNF-&alpha )ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒人转化生长因子&beta 1(TGF-&beta 1)ELISA试剂盒人转化生长因子&alpha (TGF-&alpha )ELISA试剂盒人基质细胞衍生因子1&beta (SDF-1&beta /CXCL12)ELISA试剂盒人干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒人可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒人可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒人血血小板衍生生长因子可溶性受体&alpha (PDGFsR-&alpha )ELISA试剂盒人神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒人神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒人的神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白3&beta (MIP-3&beta /ELC/CCL19)ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白3&alpha (MIP-3&alpha /CCL20)ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白1&beta (MIP-1&beta /CCL4)ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白1&alpha (MIP-1&alpha /CCL3)ELISA试剂盒人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒人白介素3(IL-3)ELISA试剂盒人白介素2可溶性受体&beta 链(IL-2sR&beta )ELISA试剂盒人白介素2可溶性受体&alpha 链(IL-2sR&alpha /CD25)ELISA试剂盒人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒人白介素1&alpha (IL-1&alpha 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Peprotech成立于1988年，由一群专注于开发和生产重组细胞因子的科学家创立，这些细胞因子应用于生命科学研究。如今，Peprotech已经在高品质细胞因子产品领域居于世界领先地位，包括大肠杆菌、昆虫和哺乳动物细胞表达的重组蛋白等高质量的细胞因子，单克隆/多克隆抗体，酶联免疫吸附开发试剂盒。公司在世界各地设有客服办事处，分布在美国，英国，法国，德国，以色列，韩国，中国，日本，巴西和墨西哥。Peprotech将继续保持其产品极具竞争力的价格，并不断扩展澳大利亚，新西兰和其他地方的销售。近期为适应当前研究和不断增长的需求，Peprotech扩充了生产能力，建造了5000平米无动物源性的生产基地。Peprotech与学术界和产业界的研究人员合作，他们为Peprotech不断扩大的产品线提供了不可或缺的建议，使得Peprotech能一直保持与当前科学进步同步。Peprotech会尽最大努力满足客户的特殊研究需要。PeproTech致力于为生命科学研究提供最高质量的因子产品。联科生物是PeproTech公司在亚洲的最大代理商，亦是中国区的首席合作伙伴。Peprotech广泛的产品线包括：免疫调节蛋白；白细胞介素、集落刺激因子、生长因子；趋化因子 ；干扰素；脂肪因子；转化生长因子?和骨形态发生蛋白；神经营养因子；成纤维细胞生长因子；TNF受体配体；防御素 ；多克隆抗体；单克隆抗体；酶联免疫吸附试剂盒；其他重组蛋白。 阅读原文：http://www.liankebio.com/ArticleShow/articleID/2014040020.html

作为液体活检的重要标志物之一,循环肿瘤细胞(CTCs)在外周血中的含量可以用来辅助判断患者的癌症病发状况。除此以外,CTCs对于肿瘤细胞转移行为等基础研究也具有非常重要的意义。然而人体血液中的CTCs含量极其稀少,通常仅有0~10个/mL,与之相对,红细胞、白细胞和血小板的含量则分别达到5×109 个/mL、4×106 个/mL和3×108 个/mL,而且肿瘤细胞在转移过程中可以通过上皮-间质转化(EMT)和间质-上皮转化(MET)来不断地改变自身的特征。正是由于其稀缺性和异质性,以及血液中复杂基质的干扰,CTCs的精准检测成为巨大的难题。 由于常规的光学分析手段在检出限和灵敏度上均难以达到直接检测的要求,因此通常在进行外周血中CTCs的检测之前,要通过一些样品前处理方法来实现其分离和富集。常采用的样品前处理方法可以分为物理法和化学法,物理法主要根据细胞在物理特征上的差异来进行分离,例如膜过滤分离和密度梯度离心,就是分别依据细胞的大小和密度来完成筛选。化学法则主要依靠生物大分子的特异性识别作用,例如抗原抗体相互作用,核酸适配体与靶标的选择性结合。　　上述样品前处理方法虽然能够在不同程度上实现CTCs的分离富集,但也存在着一定的缺陷。由于这些方法都是非连续性的,在吸附、洗脱和转移的过程中难免会造成细胞的丢失,加之CTCs本身的稀缺性,很容易导致假阴性结果的产生。利用微流控芯片功能集成的特点则可以很好地解决这一问题,CTCs的捕获、释放、计数及检测等操作均可在芯片上完成,连续的自动化处理可以有效减少人为误差的干扰。此外,微流控芯片所需要的进样量非常小,可以大大减少珍贵样品和试剂的消耗,降低检测成本。并且在微尺度下表面力的作用会明显放大,可以有效提高物质混合和反应的效率,实现快速高效的分离分析。因此,近年来多项研究尝试利用微流控芯片平台开展CTCs分离检测工作,取得了良好的效果。本文对微流控芯片技术用于CTCs分离检测的相关研究进展进行了综述,将采用的分离方法主要分为物理筛选和生物亲和两大类,同时囊括正向富集和反向富集两种策略。此外,对于近期发展的芯片原位检测CTCs新方法也进行了介绍。　　1、CTCs分离芯片研究进展　　作为商品化较为成功的CTCs分离检测系统,强生公司的CellSearch产品采用的是基于上皮细胞黏附分子(EpCAM)抗体特异性识别肿瘤细胞的方法,类似的方法在CTCs分离芯片中也被广泛使用,可以视作利用生物亲和作用进行CTCs分离富集的代表。　　另一方面,依据细胞在物理性质方面的差异,无须生物标志物的条件下即可实现CTCs的筛选,其中有无外力介入的被动分离方法,例如利用微尺度下流体力学中的惯性效应和黏弹性效应来进行筛分。　　也有外加物理场的主动分离方法,诸如介电泳、表面声波和光镊技术等。除了直接对CTCs进行特异性识别实现正向富集外,也可以通过选择性结合诸如白细胞等干扰,再将其排除,从而达到反向富集的效果。　　2、、芯片原位CTCs检测　　对于CTCs的检测,通常采取先进行细胞染色,再用荧光显微镜观察的方法,但该方法在灵敏度上有待提高,且重现性较差,需要手动操作和人工计数。　　此外,以荧光光谱为代表,一些常见的光谱检测手段也被广泛应用在芯片上CTCs的检测中。　　除了光学分析方法外,研究人员通过使用传感元件实现了CTCs芯片检测结果的数字化直读或可视化分析。　　3、总结与展望　　本文对CTCs分离微流控芯片的技术原理、分离策略和研究进展进行了综述。其技术原理主要分为物理筛选和生物亲和两大类,分离策略分为正向富集和反向富集两个方向。同时,介绍了CTCs芯片原位检测的主要技术方法和优化策略。随着微流控芯片技术的快速发展,其微尺度流体操控、微结构加工和集成传感检测能力得到极大提升,进一步推动了CTCs分离微流控芯片技术的发展。多项研究显示,以微流控芯片为平台来分离检测外周血中的CTCs,可以充分发挥芯片本身微量、高效、易于自动化和集成化的优势,最终实现对临床血液中CTCs的快速精准分析,在肿瘤早期诊断、复发与转移监测以及抗肿瘤药物评价等多个领域具有重要的应用空间。　　现阶段,CTCs芯片在筛选精度和筛选效率方面仍存在较大的提升空间。针对这一挑战,由于精准与高效二者难以兼得,未来的芯片设计应该更专注于单个目标的实现。一方面,针对基础研究,应当注重于提高CTCs筛选的细胞纯度及细胞活性。可以先利用惯性效应对血液进行粗分离,筛分出尺寸较大的白细胞和CTCs。再采用液滴分选的方法,通过免疫磁性分离实现CTCs的精确筛选。液滴分选技术能够达到单细胞分析的精度,利用液滴分选进行肿瘤细胞筛选也已有文献报道。另一方面,针对临床检测领域,研究重点则在于实现临床样本的高通量分析。可以采用电分析方法,依据不同种类细胞的比膜电容和细胞质电导率差异来设置恰当的阈值,对流经检测窗口的CTCs实现快速分析。此外,微流控芯片技术属于多学科交叉领域,CTCs芯片的发展同时也受益于微机电系统(MEMS)、材料学、流体力学和生物医学等研究领域的技术突破。随着相关领域研究技术的发展,CTCs芯片未来有望成为肿瘤基础研究和癌症早期临床诊断的重要平台。

近日，中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心发文，建议将肺外结核纳入结核病防治规划管理。肺外结核常累及多系统和多器官，病变部位分布广，临床表现复杂多样，隐蔽性强，无特异性；且样本获取困难或获取的样本含菌量少，相关实验室诊断技术较落后，不能为其快速诊断提供有效方法。这使得其早期诊断较为困难，误诊率和漏诊率较高。而淋巴结结核在肺外结核中占比最大，如何进行早期精准诊断已成为临床亟需解决的问题。一、我国淋巴结结核的流行现状淋巴结结核是结核分支杆菌侵入淋巴系统导致的淋巴结增大或坏死性炎症，好发于儿童和青壮年，女性患者明显多于男性。在肺外结核中，淋巴结结核是最常见的类型，占所有结核病的4.0％－5.1％，占肺外结核的20.3％－50.0％［1］。肺结核可与肺外结核并发，据我国的一项多中心研究显示，肺结核并发肺外结核的患者中，颈部淋巴结核并发率为1.93%，仅次于结核性脑膜炎的2.72%［2］。男性肺结核患者并发颈部淋巴结核的并发率为1.44%，低于女性［3］。儿童最常见的肺外结核依次为淋巴结核、结核性脑膜炎、支气管结核［4］。二、淋巴结结核的临床表现及危害淋巴结核一般既往有结核病史或者结核接触史，早期典型的临床表现极少，影像学缺乏特异性，多由于淋巴结肿大形成无痛包块而被发现，包块可自行消散，可继续肿大发展为干酪样病变甚至形成脓肿、破溃或窦道，严重者会出现全身中毒症状。不仅造成患者形象上的改变，还会引起疼痛、活动受限、感染灶迁延等并发症，给患者的生理和心理都带来严重不良影响。三、淋巴结结核常用的实验室诊断方法目前，淋巴结结核实验室诊断方法主要有抗酸杆菌涂片镜检、分离培养、免疫学检测、分子生物学检测和质谱检测[包括微生物质谱、液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)和核酸质谱(MALDI-TOF)]等。细菌学检查是结核病诊断的“金标准”。通常情况下，淋巴结结核取其分泌物进行检测，涂片染色受分泌物质量的影响较大，而且难以取得，其灵敏度低，特异性差；细菌培养周期长，阳性率低，漏诊概率大，导致淋巴结结核的细菌学确诊异常困难［5］。随着分子生物学技术的发展，分枝杆菌的病原学诊断得到长足的发展。PCR作为一种简便、高效的基因扩增技术，已成为结核病分子生物学诊断最有力的工具，被广泛使用。但经大量临床验证，PCR的检测结果有很多不确定因素，存在一定程度的假阳性和假阴性，故目前仍不能取代现有的其他实验室检查手段。近年来，免疫学检测技术的研发也成为热点之一，γ-干扰素释放试验（IGRAs）已得到广泛应用。该方法通过采集患者外周静脉血进行检测，对刺激后产生分泌γ-干扰素的外周血单个核细胞进行定量检测，通过数量来判断患者是否感染了结核分枝杆菌，采样第二天出结果。有研究［6］显示IGRAs方法学的灵敏度在80%左右，特异性在75%-80%之间，在临床中会造成一定程度的漏诊和误诊，而且无法区分机体是新近感染还是潜伏感染或是活动性结核病，主要用于筛查结核分枝杆菌感染。因此，临床急需新的检测手段和方案帮助临床医生对淋巴结核进行精确的诊断。四、淋巴结结核的治疗及效果评估目前国内外对淋巴结核的治疗以内科保守抗痨治疗为主, 对久治不愈的进行外科手术治疗及术后抗痨，且抗痨联合手术治疗效果优于单纯抗痨治疗［7］。中药内服［8-9］、外敷［10］、局部用药［11］通过观察肿块大小、症状和副作用来判断治疗效果，高频超声［12］会监测包括结核结节大小、形态、内部回声、周边组织关系、血流分布情况、弹性成像分级等因素的变化。这些方法对患者的疗效评估具有重要指导作用，但均未涉及患者在治疗过程中体内结核菌的变化情况。五、迪澳双因子（IFN-γ和IL-2）联合检测 淋巴结结核诊断更优解决方案结核分枝杆菌特异性细胞因子检测试剂是“十三五”国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品，是目前国内首个获批的“双因子”联合检测试剂。该产品通过采集人外周血单个核细胞，与特异性抗原刺激共培养之后，检测结核特异性T细胞分泌的γ-干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）的浓度，来判断机体是否受到结核杆菌的感染。通过双因子检测，能够及时发现活动性淋巴结结核患者，同时对于非淋巴结结核患者能够进行及时、准确的排筛。其主要特点有： ○双阳结果高度警示活动性结核病通过双因子筛查，及时发现活动性结核患者，提高活动性淋巴结结核检出率，从而更好辅助临床医生制定治疗方案及防控措施。 ○菌阴结核病检出率高对于病原学检测结果为阴性，而临床又高度怀疑为结核的患者，使用双因子检测可以提高检出率的同时还可以提示活动性结核。 ○鉴别诊断特异性强淋巴结结核的临床症状通常不典型，且与其他炎症性疾病存在相同的病理细胞学特征和临床症状，“双因子”联合检测特异性更高，能够极大地提高筛查的准确性，减少漏诊误诊情况的发生。 ○能够为患者用药治疗的疗效评估提供更多的参考依据通过治疗过程中定期监测双因子，观察IFN-γ和IL-2的数值变化，为患者用药治疗效果的评价提供更多参考。【参考文献】[1] 王黎霞，成诗明，陈明亭，等. 2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[J]. 中国防痨杂志, 2012(08):485-508．[2] 杨松, 王乐乐, 李同心, 严晓峰, 唐神结. 肺外结核流行病学研究进展[J]. 中华流行病学杂志, 2021, 42(1): 171-176.[3] 李敬新, 庞学文, 张丹, 等. 2015-2017年天津市肺外结核流行病学分析[J]. 预防医学情报杂志, 2019, 35(4): 407-411.[4] 唐神结, 李亮, 高文, 等. 中国结核病年鉴(2019)[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2020: 07.[5] 黄少君. 分子生物学诊断新方法在淋巴结结核诊断中的应用研究[D].北京, 北京市结核病胸部肿瘤研究所, 2016.[6] Wang L, Tian XD, et al. Evaluation of the performance of two tuberculosis interferon gamma release assays (IGRA-ELISA and T-SPOT.TB) for diagnosing Mycobacterium tuberculosis infection[J]. Data Brief. 2018，21: 2492–2495[7] 李玥莹, 李群宝. 抗痨联合手术治疗淋巴结核的疗效分析[N]. 新疆医科大学学报, 2009(6).[8] 梅英, 黄金鹏. 小柴胡汤加减方治疗颈淋巴结结核的疗效观察[J]. 中国现代医生, 2019, 57( 27 ):128-130.[9] 张亮, 梅月志, 李坤, 戴宇彪. 结核灵联合西医常规治疗颈部淋巴结结核的疗效观察[J]. 罕少疾病杂志, 2019, 26(3 ):40-42.[10] 何益平,钟骏慧. 肿意膏外敷治疗颈淋巴结核400例临床观察[J]. 中国药业, 2017,26(22).[11] 万荣, 李明武 朱惠琼, 刘永莉. 抗结核药物超声导入治疗淋巴结结核的临床观察[J]. 云南医药, 2016,37(06).[12] 戴宇彪, 李坤, 梅月志. 高频超声在颈部淋巴结核疗效评估中的价值探讨[J]. 临床医学工程，2018,25 (5): 545-546.

过继性细胞疗法 (Adoptive Cell Therapy, ACT) 目前在肿瘤治疗过程中取得了令人振奋的临床结果，美国和中国也相继批准了多款靶向CD-19 和 BCMA 的临床产品。然而这种治疗方案面临着一个很棘手的临床问题––抗原丢失问题，即一部分肿瘤细胞会通过下调抗原表达或不表达抗原从而逃脱TCR-T细胞或CAR-T 细胞的杀伤，从而导致癌症的进展，直至病患的死亡。多年来美国维克森林大学医学院鲁勇课题组在Th9细胞的抗肿瘤功能的研究方面做出了一系列卓越的工作，并定义了Th9 细胞代表着一种全新的T 细胞模式 (New T cell Paradigm) 能够攻击晚期肿瘤。这些工作发表了包括Lu et al JCI 2012【1】，PNAS 2014， Cancer Cell 2018【2】等一系列论文。2021年10月21日，鲁勇课题组（现已任职于Houston Methodist/Weill Cornell Medicine，详情请见本文最后）再次在Cancer Cell上发表了题为 Adoptive cell therapy with tumor-specific Th9 cells induces viral mimicry to eliminate antigen-loss variant tumor cells的研究论文，首次报道了肿瘤特异性 Th9 细胞 (TCR-Th9 或 CAR-Th9) 可以根除含有特异性抗原丢失癌细胞的晚期恶性肿瘤。在该项工作中，研究人员首次发现在晚期恶性肿瘤中的细胞免疫治疗中，使用传统的CAR-T或者TCR-T虽然在前期都能产生良好的抗肿瘤作用。不幸的是这些治疗总是伴随着后期的肿瘤的复发，而且T细胞治疗剂量增加5-10倍 (high dose) 也不能有效的控制肿瘤复发。非常有趣的是当使用Th1高剂量或者Th17细胞进行治疗时，复发的黑色素肿瘤大面积肿瘤组织由原先的黑色变成了白色。研究者通过大量实验发现这是因为T细胞攻击的名叫TRP-1的抗原发生了丢失，而TRP-1蛋白是黑色素瘤产生黑色素时必须的。当黑色素瘤发生TRP-1抗原逃逸时，肿瘤停止产生黑色素，其颜色也随后自发发生了变化。类似于这样的抗原丢失情况在文中使用的多种肿瘤模型中都很常见。但是研究者发现只有使用肿瘤特异性的Th9细胞进行治疗时，能治愈这些晚期肿瘤，且不会出现复发的情况。研究发现Th9 细胞除了通过直接靶向杀伤表达特异性抗原的肿瘤细胞外，具备其他类型T细胞没有的特性（机理总结见下图）：即可以通过eATP-ERVs-TLR3/Mavs途径刺激招募到肿瘤中的单核细胞释放一型干扰素（Type I IFN）进而激活宿主自身免疫系统杀伤抗原丢失的肿瘤细胞，最终达到彻底根除肿瘤的目的。这种能激活达到如此强度的自身免疫系统杀伤能力的T细胞目前只发现存在于Th9细胞治疗中。这项工作的意义在于为过继性细胞治疗中出现的抗原丢失临床问题提出了切实具体的解决方案，具有极高的转化意义和临床应用价值。原文链接：https://doi.org/10.1016/j.ccell.2021.09.011

污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。　　(一)污染的类型　　细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。　　1、细菌污染　　细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。　　培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。　　2、真菌污染　　真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。　　培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊 倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。　　真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。　　丝状菌污染　　3、支原体污染　　支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2&mu m，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。　　培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。 阳性 阴性　　4、病毒污染　　组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。　　尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。　　5、非同种细胞污染　　由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。　　非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。　　(二)污染的鉴别　　1、细菌、真菌污染的检测　　(1)肉眼观察　　细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。　　(2)接种观察　　采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。　　(3)镜下观察　　在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。　　若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。　　2、支原体污染的检测　　(1)相差显微镜观察　　直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。　　(2)荧光染色法观察　　用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。　　(3)电镜检测　　若条件许可，可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。　　支原体扫描电镜图片　　(4)培养检测　　将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无&ldquo 荷包蛋&rdquo 菌落出现。　　3 、病毒的检测　　1) 应用电镜技术快速诊断动物病毒病　　冠状病毒电镜图　　2) 逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒　　(三)污染的清除　　培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之 在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。　　若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。　　一、细菌和真菌的清除　　1、使用抗生素　　抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。　　二、支原体的清除　　1、用MRA处理　　用MRA(Mycoplasma Removal Agent)处理细胞，每4天换一次液,连续处理15天以确保细胞纯洁健康，效果好.　　2、用清洗纯化法清除支原体污染的方法　　细胞营养驯化&rarr 优质细胞群的筛选&rarr 细胞清洗&rarr 反复离心洗涤　　其原理是利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生,所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限。　　如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。　　3、药物辅助加温处理　　先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。　　4、使用支原体特异性血清　　用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济。　　(四)、污染的预防　　预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。　　一般预防可从以下几方面着手：　　1、添加抗生素　　2、从物品、用品消毒灭菌着手　　细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。　　操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。　　3、从操作者做起　　(1)进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。　　(2)操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。　　(3)操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。　　4、防止细胞交叉污染　　在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。　　在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。　　细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。　　5、无菌室的彻底消毒　　1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室 　　2)甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。

理论物理学家埃德· 威滕（Edward Witten）与生物学家所罗门· 斯奈德（Solomon Snyder）在各自学术领域谁的影响力更大？如果在这种跨学科比较中，再加入历史学家及经济学家卡尔· 马克思、心理学家弗洛伊德等人，如何在能衡量他们的学术影响力呢？简单地论文引用率？数学家们可能不会乐意，因为相比生物化学领域，他们的论文的吸引力要低得多。现在，美国研究人员的一项最新研究数据（在不断更新）显示，马克思是最有影响力的学者；而威滕则是最有影响力的科学家。研究人员甚至为这个数据库专门开发出了 FireFox 和 Chrome 的浏览器拓展插件。来自美国印第安纳大学的研究人员分析了约 3.5 万名学者的平均 H 指数&mdash &mdash H 指数是论文数量和论文被引用的次数的一个混合量化指标，比如 H 指数 20 代表着一位研究人员至少发表了 20 篇论文，每篇论文的被引用次数至少 20 次&mdash &mdash 制定出学者影响力排名。结果显示，马克思（Karl Marx）是历史上最有影响力的学者，其次是精神分析专家弗洛伊德（Sigmund Freud），第三是普林斯顿高等研究院的物理学家威滕（Edward Witten），第四是法国的人文思想家德里达（J Derrida），第五是教育心理学家皮亚杰（J Piaget）。当然，这项统计分析研究被批评存在严重缺陷。{试剂酶联网：www.shjgogo.com} ELISA试剂盒相关产品推荐：人原钙黏素1(PCDH1)ELISA试剂盒 Human protocadherin 1,PCDH1 ELISA试剂盒人白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒 Human Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA试剂盒人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒 Human cutaneous T cell-attracting chemokine,CTACK ELISA试剂盒人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒 Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK ELISA试剂盒人B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA试剂盒 Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1,BLC-1 ELISA试剂盒人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA试剂盒 Human connective tissue-activating peptide Ⅲ,CTAPⅢ ELISA试剂盒Human Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor,M-CSFR ELISA试剂盒人免疫球蛋白A Fc段受体Ⅰ(Fc&alpha RⅠ/CD89)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin A,Fc&alpha RⅠ ELISA试剂盒人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ(Fc&epsilon RⅡ/CD23)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E,Fc&epsilon RⅡ ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(Fc&gamma RⅢ/CD16)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,Fc&gamma RⅢ ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(Fc&gamma RⅡ/CD32)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G,Fc&gamma RⅡ ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(Fc&gamma RⅠ/CD64)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G,Fc&gamma RⅠ ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(Fc&gamma RⅢ/CD16)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,Fc&gamma RⅢ ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(Fc&gamma RⅡ/CD32)ELISA试剂盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G,Fc&gamma RⅡ ELISA试剂盒人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(Fc&gamma RⅠ/CD64)ELISA试剂盒 Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G,Fc&gamma RⅠ ELISA试剂盒人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA试剂盒 Human granulocyte chemotactic protein-2,GCP-2 ELISA试剂盒Human Interferon &omega ,IFN-&omega ELISA试剂盒人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒 Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1,GlyCAM-1 ELISA试剂盒人干扰素调节因子(IRF)ELISA试剂盒 Human interferon Regulatory Factor,IRF ELISA试剂盒人淋巴毒素&beta (LTB)ELISA试剂盒 Human lymphotoxin&beta ,LTB ELISA试剂盒人淋巴毒素&alpha (LTA)ELISA试剂盒 Human lymphotoxin&alpha ,LTA ELISA试剂盒人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒 Human CC-chemokine receptor 1,CCR1 ELISA试剂盒人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA试剂盒 Human CX3C-chemokine receptor 1,CX3CR1 ELISA试剂盒人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒 Human pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA试剂盒人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒 Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 ELISA试剂盒人&beta 干扰素(IFN-&beta /IFNB)ELISA试剂盒 Human Interferon &beta ,IFN-&beta /IFNB ELISA试剂盒人可溶性CD38(sCD38)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 38,sCD38 ELISA试剂盒人可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 21,sCD21 ELISA试剂盒人可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒 Human Leptin Soluble Receptor,sLR ELISA试剂盒人Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒 Human Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA试剂盒人转化生长因子&beta 2(TGF&beta 2)ELISA试剂盒 Human transforming growth factors &beta 2,TGF&beta 2 ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒 Human monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA试剂盒人白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒 Human leukotriene D4,LT-D4 ELISA试剂盒人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)ELISA试剂盒 Human Neural-Cadherin, N-Cad ELISA试剂盒Human heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF ELISA试剂盒人红细胞刺激因子(ESF)ELISA试剂盒 Human erythropoiesis stimulating factor,ESF ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA试剂盒 Human TNF related activation induced cytokine,TRANCE ELISA试剂盒人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA试剂盒 Human growth hormone relasing factor,GH-RF ELISA试剂盒人巨噬细胞趋化因子(MCF)ELISA试剂盒 Human macrophage chemotatic factor,MCF ELISA试剂盒人&alpha /&beta 干扰素受体(IFN-&alpha /&beta R)ELISA试剂盒 Human Interferon &alpha /&beta Receptor,IFN-&alpha /&beta R ELISA试剂盒人B细胞生长因子(BCGF)ELISA试剂盒 Human B cell growth protein,BCGF ELISA试剂盒人B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒 Human B cell differetiation factor,BCDF ELISA试剂盒人上皮细胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA试剂盒 Human Epithelial Cell Adhesion Molecule,Ep-CAM ELISA试剂盒人可溶性粘附分子(Sam)ELISA试剂盒 Human soluble adhesion molecules,Sam ELISA试剂盒人巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)ELISA试剂盒 Human Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AmAC-1 ELISA试剂盒人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒 Human soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2/sFLK-1 ELISA试剂盒人胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒 Human thymic stromal lymphopoietin,TSLP ELISA试剂盒人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒 Human Perforin/Pore-forming protein,PF/PFP ELISA试剂盒人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒 Human pleiotrophin,PTN ELISA试剂盒人可溶性CD28(sCD28)ELISA试剂盒 human soluble cluster of differentiation 28,sCD28 ELISA试剂盒人淋巴细胞因子ELISA试剂盒 Human lymphocyte factor ELISA试剂盒人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)ELISA试剂盒 Human thymus activation regulated chemokine,TARC ELISA试剂盒人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)ELISA试剂盒 Human Neural cell adhesion molecule ligand 1,NCAM-L1 ELISA试剂盒人神经保护因子(CVNPF)ELISA试剂盒 Human Cobra venom neuronal protective factor,CVNPF ELISA试剂盒人可溶性肿瘤坏死因子&alpha 受体(sTNF&alpha R)ELISA试剂盒 Human soluble Tumor Necrosis Factor&alpha receptor,sTNF&alpha R ELISA试剂盒人可溶性细胞因子受体(sCKR)ELISA试剂盒 Human soluble cytokine receptor,sCKR ELISA试剂盒人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)ELISA试剂盒 Human soluble Factor-related Apoptosis ligand,sFASL/Apo-1 ELISA试剂盒人细胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA试剂盒 Human inhibitor of apoptosis,IAP ELISA试剂盒人集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒 Human colony-stimulating factor,CSF ELISA试剂盒人&gamma 干扰素诱导单核细胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA试剂盒 Human monocyte interferon gamma inducing factor,MIGF ELISA试剂盒人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA试剂盒 Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant,I-TAC ELISA试剂盒人CD14分子(CDl4)ELISA试剂盒 Human cluster Of differentiation,CDl4 ELISA试剂盒人凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒 Human apoptosis inducing factor,AIF ELISA试剂盒人白细胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒 Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISA试剂盒人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒 Human cluster Of differentiation,CD4 ELISA试剂盒人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)ELISA试剂盒 Human Placenta Cadherin,P-cad ELISA试剂盒人角化细胞生长因子(KGF)ELISA试剂盒 Human Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISA试剂盒人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒 Human Platelet-Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB ELISA试剂盒人CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒 Human CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISA试剂盒人CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒 Human CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA试剂盒

肿瘤微环境的免疫抑制是肿瘤免疫治疗的主要障碍。干扰素刺激因子（STING）激动剂可以触发炎症性的先天免疫反应，有可能克服肿瘤的免疫抑制。虽然STING激动剂可能有望成为潜在的癌症治疗药物，但是肿瘤对STING单一疗法的耐药性已经在临床试验中出现，其机制尚不清楚。2023年9月4日，天津医科大学肿瘤医院任秀宝教授团队在Theranostics（IF=12.4）上发表题为“Blocking Tim-3 enhances the anti-tumor immunity of STING agonist ADU-S100 by unleashing CD4+ T cells through regulating type 2 conventional dendritic cells”的文章。本实验使用小鼠肿瘤模型，测量了STING激动剂ADU-S100（S100）和抗T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3抗体（αTim-3）的体内抗肿瘤免疫效果。利用流式细胞术检测了肿瘤特异性T细胞的激活和肿瘤微环境的改变。同时测量了树突状细胞（DC）的成熟和功能，以及CD4+ T细胞在联合治疗中的重要性。此外，还通过体外实验验证了S100对CD4+ T细胞的影响。最后，进一步评估了在人类肿瘤样本中高表达Tim-3的常规树突状细胞（cDC）2对生存或治疗效果的影响。S100通过激活cDC1增强了CD8+ T细胞的反应，但未能启动cDC2。在机制上，S100的给药导致了小鼠和人类cDC2（Tim-3+cDC2）中Tim-3的上调，这具有免疫抑制作用。Tim-3+cDC2抑制了CD4+ T细胞，并减弱了CD4+ T细胞驱动的抗肿瘤反应。S100与αTim-3的联合治疗有效地促进了cDC2的成熟和抗原呈递，释放了CD4+ T细胞，从而降低了肿瘤负担，延长了生存。此外，人类肿瘤微环境中Tim-3+cDC2的高百分比预示着不良的预后，而Tim-3+cDC2的丰度可能作为CD4+ T细胞质量的生物标志物和免疫治疗反应性的贡献指标。这项研究证明了阻断Tim-3可以通过调节cDC2来增强STING激动剂ADU-S100的抗肿瘤免疫效果，释放CD4+ T细胞。它还揭示了ADU-S100单一疗法的内在障碍，同时提供了一种克服肿瘤免疫抑制的联合策略。实验部分本实验收集了58例接受新辅助化疗（NAC）或新辅助培溴利珠单抗联合化疗（NAPC）治疗的肺癌患者的肿瘤标本。使用TissueGnostics公司TissueFAXS Spectra全景多光谱组织扫描定量分析系统获取图像。获取到图像利用StrataQuest软件进行定量分析，评价肿瘤浸润性TIM-3+CDC2或CD4+T细胞与疗效的关系。Panel : CD11c、CD1C、Tim-3、CD4、Foxp3和DAPI为了验证在DC上表达的Tim-3对CD4+ T细胞的负向调控作用，文章作者对Tim-3+ cDC2 和 CD4+ T的作用关系进行了分析，并参考主要病理反应（MPR）作为临床特征指标进行作用关系评估。考虑到在免疫作用中CD4+T细胞处于cDC2的下游，其存在的相互作用在传统意义上只能通过整体水平进行粗略评估，但是无法精准量化，故此次本文作者借助于Tissue Cytometry技术对Tim-3-cDC2/Tim-3+cDC2 和 CD4+ T/Treg细胞的分布进行了空间定量分析。研究者根据文献记载，采用泊松分布原理，将Tim-3-cDC2/Tim-3+cDC2半径（r = 30 μm）内的CD4+T细胞的分布密度进行比较，发现在 NAC 和 NAPC 患者中，与 Tim-3-cDC2 相比，Tim-3+cDC2 周围的 CD4+ T 细胞显着减少，代表CD4+ T 和 Tim-3+cDC2 之间细胞接触的可能性降低。这个分析结果启发性的为Tim-3+cDC2肿瘤患者预后不良的关系提供了初步的证据，“急需相关临床试验证实“——作者在文中写道。大部分现有的技术是利用空间坐标方法，对细胞空间生物学信息进行研究，但是当细胞呈梭形或不规则形态时，细胞中心点就无法代表其真实的组织形态轮廓，导致分析结果出现偏差。Tissue Cytometry技术与其他技术不同，采用组织原位真实的细胞形态、轮廓，通过原始成像结果中真实像素距离运算作为距离分析基础，这样不但可以获得真实细胞的距离关系，更可以通过组织-细胞形态计算其微环境分布水平，让分析结果更加精准可靠。Figure 1 高比例TIM-3+cDC2预示肿瘤患者预后不良(A)治疗后肺癌样本的多重免疫荧光图像(B)接受NAC或NAPC治疗的患者的MPR百分比的比较。接受NAC或NAPC治疗的MPR或非MPR患者的(C)Tim-3+cDC2或(D)CD4+T细胞的比较。(G-I) 采用空间分析方法，计算参考细胞周围30μm半径范围内感兴趣细胞的密度，并进行图示。与NAC和NAPC患者中Tim-3+cDC2细胞相比，Tim-3-cDC2细胞周围30μm范围内的 (H) CD4+ T细胞和 (I) Treg细胞密度如下。

详细信息 医疗设备采购（KLBH2022-J1-0010）竞争性谈判公告 广西壮族自治区-北海市-银海区 状态：公告 更新时间： 2022-08-11 项目概况：医疗设备采购项目的潜在供应商应在北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司购买竞争性谈判文件，并于2022年8月15日15时30分（北京时间）前提交响应文件。 一、项目基本情况 项目编号：KLBH2022-J1-0010 项目名称：医疗设备采购 采购方式：√竞争性谈判 □竞争性磋商 □询价 预算金额：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 最高限价：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 采购项目需求： 分标号 标的名称 数量及单位 简要技术需求或者服务要求 A 血液透析设备等一批 一批 血液透析机21台、血液净化滤过机（双泵机）7台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血液透析设备：1.具备作碳酸氢盐、醋酸盐常规透析功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 B 心电监护仪等一批 一批 心电监护仪6台、呼吸机1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：心电监护仪：1.要求整机无风扇设计，配置提手。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 C 血细胞分析仪等一批 一批 血细胞分析仪1台、全自动生化分析仪1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血细胞分析仪：1.检测原理：采用三角度激光散射法对白细胞进行五分类检测，采用乳胶免疫比浊法进行C-反应蛋白（CRP）测定。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 D 纤支镜等一批 一批 纤支镜1台、冰毯机4台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：纤支镜：1.具备呼吸系统疾病诊断功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 E 动态血压监测仪等一批 一批 动态血压监测仪2台、空气波压力治疗系统1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：动态血压监测仪：1.具备24小时血压记录系统。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 合同履行期限：自签订合同之日起15天内完成安装、调试并交付使用。 本项目（是/否）接受联合体：否。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无； 3.本项目的特定资格要求：具有国家主管部门颁发的有效的医疗器械生产许可证，或按《医疗器械经营监督管理办法》（国家食品药品监督管理总局第8号令）医疗器械分类管理要求具有有效的第二类医疗器械经营备案凭证及医疗器械经营许可证。 三、获取谈判文件 时间：2022年8月10日至2022年8月12日，每天上午8:00至12:00，下午15:00至18:00（北京时间，法定节假日除外） 地点：北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司 方式：现场购买 （1）购买竞争性谈判文件须递交的材料：法定代表人（负责人）身份证复印件（法定代表人（负责人）办理时须提供）或委托代理人身份证复印件及法定代表人（负责人）授权委托书原件（委托代理时须提供）、营业执照副本复印件，以上材料均须加盖单位公章。 （2）如需要邮购，请将以上要求的材料扫描件发送至klbh3832133@126.com，邮件须注明 公司名称+项目名称+报名材料 ，并提供收件人姓名、联系电话、收件地址、开票信息。供应商报名成功后，采购代理机构将竞争性谈判文件的电子版发送至供应商报名时的电子邮箱。 售价：谈判文件工本费每本250.00元，售后不退。如需邮寄竞争性谈判文件纸质版，每本另加邮费50.00元【谈判供应商须于竞争性谈判文件发售截止时间将工本费及邮费汇到广西科联招标中心有限公司指定账户，汇款、转账时请备注项目名称或项目编号信息】。购买竞争性谈判文件的价款及邮费交纳的指定账户： 开户名称：广西科联招标中心有限公司北海分公司 开户银行：中国建设银行股份有限公司北海北部湾东路支行 银行账号：45050165510109188888 四、响应文件提交 截止时间：2022年8月15日15时30分（北京时间） 地点：将响应文件密封提交到广西科联招标中心有限公司北海分公司开标厅（北海市北海大道科技大厦三楼）。谈判供应商的谈判代表参加谈判，法定代表人(负责人)或委托代理人必须持有效证件[法定代表人(负责人)凭身份证或委托代理人凭法定代表人(负责人)授权委托书原件和身份证]依时到达指定地点等候当面谈判。 五、公告期限 自本公告发布之日起3个工作日。 六、其他事项： 1.疫情防控要求：到我公司获取文件及开标的供应商须佩戴口罩、配合进行体温检测、主动出示 健康码 绿码、行程码，广西区内邕外（14日内有本土新冠病例报告所在的县、市、城区）的人员，须提供24小时内核酸检测阴性证明。来自非涉疫区域到我公司开标人员，须提供14日内没有涉疫区旅居史的承诺书，否则须提供48小时内核酸检测阴性证明。 2.本项目不收取谈判保证金。 3.网上查询地址：____（http://____/）、广西科联招标中心有限公司（http://www.gxkl.com/）。 4.本项目需要落实的政府采购政策： （1）促进中小企业发展； （2）促进残疾人就业政策； （3）支持监狱企业发展； 5.单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得参加同一合同项下的政府采购活动。为本项目提供过整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得再参加本项目上述服务以外的其他采购活动。 6.对在 信用中国 网站(https://www.creditchina.gov.cn/) 、中国政府采购网(http://www.ccgp.gov.cn/)被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单及其他不符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定条件的供应商，不得参与政府采购活动。 七、联系事项： 1.采购人信息 名称：北海市第二人民医院 地址：北海市银海区新世纪大道116号 联系方式：王华坤 0779-2022377 2.采购代理机构信息 名称：广西科联招标中心有限公司 地址：北海市北海大道科技大厦三楼 联系方式：简良； 0779-3832133/3830266 3.项目联系方式 项目联系人：简良； 0779-3832133/3830266 广西科联招标中心有限公司 2022年8月9日 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 基本信息 关键内容：血球分析仪,细胞计数器 开标时间：2022-08-10 00:00 预算金额：710.00万元 采购单位：北海市第二人民医院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：广西科联招标中心有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 医疗设备采购（KLBH2022-J1-0010）竞争性谈判公告 广西壮族自治区-北海市-银海区 状态：公告 更新时间： 2022-08-11 项目概况：医疗设备采购项目的潜在供应商应在北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司购买竞争性谈判文件，并于2022年8月15日15时30分（北京时间）前提交响应文件。 一、项目基本情况 项目编号：KLBH2022-J1-0010 项目名称：医疗设备采购 采购方式：√竞争性谈判 □竞争性磋商 □询价 预算金额：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 最高限价：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 采购项目需求： 分标号 标的名称 数量及单位 简要技术需求或者服务要求 A 血液透析设备等一批 一批 血液透析机21台、血液净化滤过机（双泵机）7台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血液透析设备：1.具备作碳酸氢盐、醋酸盐常规透析功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 B 心电监护仪等一批 一批 心电监护仪6台、呼吸机1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：心电监护仪：1.要求整机无风扇设计，配置提手。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 C 血细胞分析仪等一批 一批 血细胞分析仪1台、全自动生化分析仪1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血细胞分析仪：1.检测原理：采用三角度激光散射法对白细胞进行五分类检测，采用乳胶免疫比浊法进行C-反应蛋白（CRP）测定。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 D 纤支镜等一批 一批 纤支镜1台、冰毯机4台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：纤支镜：1.具备呼吸系统疾病诊断功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 E 动态血压监测仪等一批 一批 动态血压监测仪2台、空气波压力治疗系统1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：动态血压监测仪：1.具备24小时血压记录系统。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 合同履行期限：自签订合同之日起15天内完成安装、调试并交付使用。 本项目（是/否）接受联合体：否。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无； 3.本项目的特定资格要求：具有国家主管部门颁发的有效的医疗器械生产许可证，或按《医疗器械经营监督管理办法》（国家食品药品监督管理总局第8号令）医疗器械分类管理要求具有有效的第二类医疗器械经营备案凭证及医疗器械经营许可证。 三、获取谈判文件 时间：2022年8月10日至2022年8月12日，每天上午8:00至12:00，下午15:00至18:00（北京时间，法定节假日除外） 地点：北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司 方式：现场购买 （1）购买竞争性谈判文件须递交的材料：法定代表人（负责人）身份证复印件（法定代表人（负责人）办理时须提供）或委托代理人身份证复印件及法定代表人（负责人）授权委托书原件（委托代理时须提供）、营业执照副本复印件，以上材料均须加盖单位公章。 （2）如需要邮购，请将以上要求的材料扫描件发送至klbh3832133@126.com，邮件须注明 公司名称+项目名称+报名材料 ，并提供收件人姓名、联系电话、收件地址、开票信息。供应商报名成功后，采购代理机构将竞争性谈判文件的电子版发送至供应商报名时的电子邮箱。 售价：谈判文件工本费每本250.00元，售后不退。如需邮寄竞争性谈判文件纸质版，每本另加邮费50.00元【谈判供应商须于竞争性谈判文件发售截止时间将工本费及邮费汇到广西科联招标中心有限公司指定账户，汇款、转账时请备注项目名称或项目编号信息】。购买竞争性谈判文件的价款及邮费交纳的指定账户： 开户名称：广西科联招标中心有限公司北海分公司 开户银行：中国建设银行股份有限公司北海北部湾东路支行 银行账号：45050165510109188888 四、响应文件提交 截止时间：2022年8月15日15时30分（北京时间） 地点：将响应文件密封提交到广西科联招标中心有限公司北海分公司开标厅（北海市北海大道科技大厦三楼）。谈判供应商的谈判代表参加谈判，法定代表人(负责人)或委托代理人必须持有效证件[法定代表人(负责人)凭身份证或委托代理人凭法定代表人(负责人)授权委托书原件和身份证]依时到达指定地点等候当面谈判。 五、公告期限 自本公告发布之日起3个工作日。 六、其他事项： 1.疫情防控要求：到我公司获取文件及开标的供应商须佩戴口罩、配合进行体温检测、主动出示 健康码 绿码、行程码，广西区内邕外（14日内有本土新冠病例报告所在的县、市、城区）的人员，须提供24小时内核酸检测阴性证明。来自非涉疫区域到我公司开标人员，须提供14日内没有涉疫区旅居史的承诺书，否则须提供48小时内核酸检测阴性证明。 2.本项目不收取谈判保证金。 3.网上查询地址：____（http://____/）、广西科联招标中心有限公司（http://www.gxkl.com/）。 4.本项目需要落实的政府采购政策： （1）促进中小企业发展； （2）促进残疾人就业政策； （3）支持监狱企业发展； 5.单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得参加同一合同项下的政府采购活动。为本项目提供过整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得再参加本项目上述服务以外的其他采购活动。 6.对在 信用中国 网站(https://www.creditchina.gov.cn/) 、中国政府采购网(http://www.ccgp.gov.cn/)被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单及其他不符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定条件的供应商，不得参与政府采购活动。 七、联系事项： 1.采购人信息 名称：北海市第二人民医院 地址：北海市银海区新世纪大道116号 联系方式：王华坤 0779-2022377 2.采购代理机构信息 名称：广西科联招标中心有限公司 地址：北海市北海大道科技大厦三楼 联系方式：简良； 0779-3832133/3830266 3.项目联系方式 项目联系人：简良； 0779-3832133/3830266 广西科联招标中心有限公司 2022年8月9日

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)是一组具有髓系特征的多发性异质性恶性肿瘤。通过化疗、放疗、造血干细胞移植、支持性治疗和靶向治疗等方式，可以提高患者五年总存活率；但是，与其他血液肿瘤相比，AML的治疗效果较差，最常见的表现是缓解后复发。因此，对于复发和化疗耐药的患者来说，迫切需要寻找新的具有有效和可控副作用的治疗药物和技术。溶瘤病毒（Oncolytic Virus, OVS）是一类具有复制能力的肿瘤杀伤型病毒，通过直接溶解感染的肿瘤细胞和间接增强宿主的抗肿瘤免疫力来介导肿瘤细胞的破坏。其种类有：新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）、单纯疱疹病毒-1（Herpes simplex virus-1, HSV-1）、呼肠孤病毒（Reovirus）和溶瘤腺病毒（Oncolytic adenovirus）等。由于OVS优先破坏肿瘤细胞，而对正常细胞无害，同时越来越多的研究证据表明，AML细胞感染溶瘤病毒会显著增加肿瘤细胞的死亡率，这为AML的治疗提供了新的方法和思路，已经在多个临床试验中进行了安全性和可行性的探索。然而，B淋巴细胞会对血液循环中的OVS产生中和抗体(Neutralizing Bntibodies、NAbs)，从而阻止病毒的传播，最终会降低病毒的治疗效果。▲ OVS的双重作用模式，优先靶向并杀死癌细胞，而对正常细胞几乎没有有害的影响间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一类存在于多种组织(如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等)，具有多向分化潜力的多能干细胞。在过去的十年中，MSCs被认为是OVS的理想载体，其原因有：(1)、MSCs为病毒提供了一个复制场所；(2)、MSCs能避免被免疫系统清除；(3)、MSCs确保病毒能到达肿瘤部位；(4)、MSCs会分泌细胞因子，增强抗肿瘤免疫反应。然而，携带溶瘤病毒的人脐带来源的间充质干细胞(Human umbilical cord-derived MSCs, Huc-MSCs)的抗肿瘤效果及其分子机制尚不清楚。▲ 间充质干细胞的分化潜力近日，贵州医科大学成体干细胞转化研究重点实验室赵星和何志旭教授课题组首次报道Huc-MSCs作为呼肠孤病毒的细胞载体，并使用博鹭腾AniView100多模式动物活体成像系统检测携带呼肠孤病毒的Huc-MSCs和MSCs在活体内对AML的治疗效果和抗肿瘤效果。该工作有助于提升研究人员对MSCs携带OVS的抗肿瘤机制的理解，并可能为临床治疗AML提供新的策略。相关成果已在国际著名期刊《International Immunopharmacology》发表。评价携带呼肠孤病毒的Huc-MSCs在体内的治疗效果。根据荧光素酶报告基因可用于体内移植的Huc-MSCs的定量，将呼肠孤病毒(Luc-MSCs-Reo)负载于Huc-MSCs，并静脉注射注射到AML小鼠模型内。通过博鹭腾AniView100多模式动物活体成像系统进行成像，结果显示Huc-MSCs位置同肿瘤THP-1细胞定位相同。小鼠的Kaplan-Meier生存曲线结果表明，接受呼肠孤病毒感染的Huc-MSCs的小鼠的中位存活时间比接受裸鼠呼肠孤病毒的小鼠显著增加。这些数据证实了Huc-MSCs作为呼肠孤病毒载体具有良好的治疗效果。▲ 携带呼肠孤病毒的Huc-MSCs对AML小鼠模型的治疗作用评价携带呼肠孤病毒的MSCs的体内抗肿瘤效果。建立具有免疫活性的小鼠AML模型，通过博鹭腾AniView100多模式动物活体成像系统进行成像，结果显示标记DIR的MSCs和呼肠孤病毒感染的MSCs对C1498肿瘤具有肿瘤归巢能力，提示携带呼肠孤病毒的MSCs维持其固有的向肿瘤细胞迁移的能力。根据各组的肿瘤体积和重量、肿瘤中的病毒RNA定量显示、治疗后小鼠血清干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α水平及免疫组织化学法观察到肿瘤中CD8的表达结果，可得MSCs有效地将呼肠孤病毒运送到肿瘤部位，并触发小鼠的免疫反应，对肿瘤生长有明显的抑制作用。这些结果证实了MSCs载体能够增强呼肠孤病毒的抗肿瘤效果。▲ 携带呼肠孤病毒的MSCs对C57BL/6小鼠C1498肿瘤的治疗作用