溶血磷脂酰胆碱

一般注射药品中会添加乳化剂，而常用的乳化剂大豆磷脂、蛋黄卵磷脂等中含有溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）和溶血磷脂酰胆碱（LPC）两种物质。这两种物质具有较强的表面活性，其浓度较高时容易引起红细胞膜破裂，从而引起溶血或细胞坏死现象。因此按照新版《中国药典》规定，中/长链脂肪乳注射液、丙泊酚注射液等注射剂均将其作为影响质量的主要杂质进行质控。

本文使用岛津高效液相色谱仪Nexera LC-40与蒸发光散射检测器ELSD-LT Ⅲ连用，建立了蛋黄卵磷脂中的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的定量分析方法。该方法中，磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺分别在5 ~ 1000 mg/L，2.5 ~ 500 mg/L线性范围内线性良好，相关系数均大于0.999，准确度为89.3~108.7%；精密度实验中，重复分析6次，各目标化合物保留时间RSD为0.14 ~ 0.22%，峰面积RSD为2.85 ~ 2.95%，精密度良好。实际样品加标实验中，各目标化合物低、中、高浓度加标回收率为82.0 ~ 99.5%，准确度较好。实验结果表明，该方法能准确地测定蛋黄卵磷脂中的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺含量。

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定大豆卵磷脂类食品中磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）三种物质的含量。色谱条件：硅胶柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.2mL/min，进样量为10μL，柱温为20℃，检测波长为208nm。实验结果：在连续进样7针的重复性测试中，磷脂酰乙醇胺保留时间的RSD为0.075%，峰面积的RSD为1.044%；磷脂酰肌醇保留时间的RSD为0.498%，峰面积的RSD为1.682%；磷脂酰胆碱保留时间的RSD为0.121%，峰面积的RSD为1.608%；磷脂酰乙醇胺的仪器检出限为0.008mg/mL，仪器定量限为0.027mg/mL；磷脂酰肌醇的仪器检出限为0.009mg/mL，仪器定量限为0.030mg/mL；磷脂酰胆碱的仪器检出限为0.015mg/mL，仪器定量限为0.052mg/mL；对市面上购买的大豆卵磷脂试样进行测定，平行测定的两次结果中，磷脂酰乙醇胺的含量分别为394.3mg/g和387.0mg/g，磷脂酰肌醇的含量分别为103.5mg/g和100.8mg/g，磷脂酰胆碱的含量分别为100.6mg/g和98.4mg/g。

磷脂酰胆碱是一种两性分子，由亲水的头部和疏水的尾部组成。亦称卵磷脂。磷脂酰胆碱是磷脂的主要成分之一，从植物中提取的，磷脂酰胆碱将大脑的指令迅速传递，信息传递速度越快，记忆力越强，是健脑食物。它能增强婴儿智力，提高学习效率。尤其是胎儿，在生长发育中对磷脂酰胆碱的需求极大。

脂肪乳注射液（C14~24）是由大豆油（供注射用）经乳化、均质制成的灭菌乳状液体，适用于需要高热量的病人，以补充适当热量和必需的脂肪酸。其处方中含有大豆油、油酸、脂肪酸、溶血磷脂酰胆碱与溶血磷脂酰乙醇胺等多种有效成分，且每种有效成分的含量应满足要求，所以严格把控每种有效成分的含量非常重要。本实验按照2020版《中国药典》要求，对脂肪乳注射液（C14~24）中的大豆油和油酸进行了有效检测。

胆碱在心血管和肝健康中发挥着重要作用，可以帮助改善记忆，增强体能。牛奶、鸡蛋、器官和其他肉类中含有很多胆碱，而谷类、水果和蔬菜中胆碱含量很少。图-（A）是采用UV检测器，硅质反相HPLC离子对分离法对胆碱的分离。从排除基体干扰与有利于分析的角度来看，阳离子交换柱与抑制型电导检测器显示了更为优良的特性，它们分离胆碱、乙酰胆碱得到的色谱图如图-（B）所示，同A比较，B中的胆碱与乙酰胆碱的顺序颠倒过来且Na+与K+同时被检测出。

胆碱与乙酰胆碱均为神经递质，常用于治疗失忆或者老年痴呆症等脑部功能失调症状。胆碱也是复合维生素B族成分，也常与肌醇组成合剂。它们能在体内生成卵膦脂，促进胆固醇代谢，用于治疗脂肪肝、肝硬化、血管硬化。乙酰胆碱则常用于眼药水中。它们的分析可以使用阳离子色谱或者反相离子对色谱，检测可以用柱后酶解直流安培检测，也可以柱前衍生紫外检测。美国药典中检测眼药水中的乙酰胆碱则用反相离子对色谱分离折光检测器检测。

本文使用岛津临床用液相色谱三重四极杆质谱仪LCMS-8050 CL及X-连锁肾上腺脑白质营养不良筛查和诊断试剂盒（液相色谱-串联质谱法，质谱生物科技有限公司），建立了干血片中4种溶血磷脂酰胆碱同时测定的方法，该方法可辅助筛查诊断X-连锁肾上腺脑白质营养不良。

融雪剂的冰点是衡量融雪剂质量的重要指标之一，融雪剂冰点的测定可以采用SH128 全自动冰点测定仪或者SH128C 全自动航煤冰点仪冰点是:在没有过冷的情况下，冷却液开始结晶的温度 或在过冷的情况下，冷却液最初形成结晶后迅速回升所达到的温度。

胆碱在心血管和肝健康中发挥着重要作用，可以帮助改善记忆，增强体能。牛奶、鸡蛋、器官和其他肉类中含有很多胆碱，而谷类、水果和蔬菜中胆碱含量很少。图-（A）是采用UV检测器，硅质反相HPLC离子对分离法对胆碱的分离。从排除基体干扰与有利于分析的角度来看，阳离子交换柱与抑制型电导检测器显示了更为优良的特性，它们分离胆碱、乙酰胆碱得到的色谱图如图-（B）所示，同A比较，B中的胆碱与乙酰胆碱的顺序颠倒过来且Na+与K+同时被检测出。

人乙酰胆碱(ACH)检测试剂盒人乙酰胆碱(ACH)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人乙酰胆碱(ACH)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人乙酰胆碱(ACH)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人乙酰胆碱(ACH)抗原、生物素化的人乙酰胆碱(ACH)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乙酰胆碱(ACH)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

蛋黄卵磷脂是一种磷脂混合物，其中的主成分是磷脂酰胆碱(PC)，因此其生理作用也以PC的功能为主。本品为乳白色或淡黄色粉末状或蜡状固体，具有轻微的特臭，触碰时有轻微滑腻感。用于乳化剂、脂质体膜材、食品药品领域等。本实验参照《中国药典》使用凯氏定氮法对蛋黄软磷脂中的氮含量进行测定。

本实验依据中华人民共和国国家标准《GB/T 35867-2018/ISO 11701:2009 粮油检验卵磷脂中磷脂含量的测定高效液相色谱蒸发光散射检测法》分离检测了磷脂酸（PA）、磷脂乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰肌醇（PI）等卵磷脂成分。

蛋黄卵磷脂是一种磷脂混合物，主要成分是磷脂酰胆碱（PC），因此其生理作用也以PC的功能为主。蛋黄卵磷脂含氮（N）量应为1.75%～1.95%。蛋黄卵磷脂对热非常敏感，在酸性、碱性和酯酶作用下易水解。对蛋白质、蛋黄过敏者禁用。用于乳化剂、脂质体膜材、食品领域等[1]。据大多数报告，PC能抑制血清甘油三酯和总胆固醇，而提高高密度脂蛋白。本实验参照《中国药典》2020版规定蛋黄卵磷脂用0704氮测定方法进行测定[2]。

又称氯化乌拉胆碱，为带正电的氨甲酰胆碱与带负电的氯离子形成的盐，为季铵盐类的拟副交感神经药，具有乙酰胆碱的毒蕈碱样作用，作用较持久，也有尼古丁的作用，特别是对胃肠道和膀胱平滑肌的选择性较高，主要用于手术后腹气胀、尿潴留以及其他原因所致的胃肠道或膀胱功能异常。美国药典(USP)方法 NF (第0页)建议，乌拉胆碱的重量分析法可以用选择性更强的离子色谱分析方法代替。如图-0和图-所示，使用戴安阳离子分离柱，抑制型电导检测

大豆磷脂是从生产大豆中提取精制而得磷脂混合物，是由甘油、脂肪酸、胆碱或胆胺所组成的酯，能溶于油脂及非极性溶剂。大豆磷脂不仅具有较强的乳化、润湿、分散作用，还在促进体内脂肪代谢、肌肉生长、神经系统发育和体内抗氧化损伤等方面发挥很重要的作用。《中国药典 2015年版》给出了测定其氮含量的方法，本实验参照药典中的方法对大豆磷脂中的氮进行定量测定。

蜂毒肽（Melittin）是蜂毒的主要成分和主要生物活性物质，约占蜂毒干重的40%~50%，是由26个氨基酸残基组成的多肽，分子式为C131H229N39O31，相对分子量为2846.46。参照国标《GBT 40486-2021蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定高效液相色谱法》，使用C18色谱柱TSKgel ODS-100Z（4.6 mm I.D.×15 cm，5μm）对蜂毒肽标准品进行定量分析，其浓度-峰面积的校正曲线优异，可满足该国标中的测试要求。

大豆磷脂是从生产大豆油的油脚中提取的产物，是由甘油、脂肪酸、胆碱或胆胺所组成的酯，能溶于油脂及非极性溶剂。大豆磷脂的组成成分复杂，一般为浅黄至棕色的粘稠液体或白色至浅棕色的固体粉末。大豆磷脂不仅具有较强的乳化、润湿、分散作用，还在促进体内脂肪代谢、肌肉生长、神经系统发育和体内抗氧化损伤等方面发挥很重要的作用。现在我们参照《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质含量检测》标准来测试一下大豆磷脂中的氮含量。

大豆磷脂是从生产大豆油的油脚中提取的产物，是由甘油、脂肪酸、胆碱或胆胺所组成的酯，能溶于油脂及非极性溶剂。大豆磷脂的组成成分复杂，主要含有卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、磷酯酰丝氨酸、磷脂酸及其他磷脂。 大豆磷脂不仅具有较强的乳化、润湿、分散作用，还在促进体内脂肪代谢、肌肉生长、神经系统发育和体内抗氧化损伤等方面发挥很重要的作用。为了对大豆磷脂中的重金属成分进行检测，采用微波消解的方法对其进行前处理，本方法消解迅速，酸用量少，酸雾污染小，有利于后续对痕量元素的准确快速测定。

大豆磷脂是从生产大豆油的油脚中提取的产物，是由甘油、脂肪酸、胆碱或胆胺所组成的酯，能溶于油脂及非极性溶剂。大豆磷脂的组成成分复杂，主要含有卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、磷酯酰丝氨酸、磷脂酸及其他磷脂。 大豆磷脂不仅具有较强的乳化、润湿、分散作用，还在促进体内脂肪代谢、肌肉生长、神经系统发育和体内抗氧化损伤等方面发挥很重要的作用。为了对大豆磷脂中的重金属成分进行检测，采用微波消解的方法对其进行前处理，本方法消解迅速，酸用量少，酸雾污染小，有利于后续对痕量元素的准确快速测定。

人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)检测试剂盒人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)抗原、生物素化的人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

机体的各组织和细胞均含卵磷脂，其中在脑、神经组织、肝、心脏、肾上腺和精液中含量较为丰富，卵黄中含量最多（约含10%）。卵磷脂易溶于乙醇、乙醚等亲脂溶剂，可利用此类溶剂提取。它不溶于丙酮，利用此性质可与中性脂肪分离。纯卵磷脂中的胆碱基在碱性溶液中分解成三甲胺，三甲胺有特异鱼腥臭味，可鉴别。

机体的各组织和细胞均含卵磷脂，其中在脑、神经组织、肝、心脏、肾上腺和精液中含量较为丰富，卵黄中含量最多（约含10%）。卵磷脂易溶于乙醇、乙醚等亲脂溶剂，可利用此类溶剂提取。它不溶于丙酮，利用此性质可与中性脂肪分离。纯卵磷脂中的胆碱基在碱性溶液中分解成三甲胺，三甲胺有特异鱼腥臭味，可鉴别。

人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒中文名称 人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒英文名称 Human acetylcholine receptor antibody (AChRab) ELISA kit 规格 96T/48T 生 产 商 进口原装/分装 产品介绍 实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)抗原、生物素化的人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)检测试剂盒人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)抗原、生物素化的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)ELISA试剂盒中文名称 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)ELISA试剂盒英文名称 Human muscarinic acetylcholine receptor (M-AChR) ELISA kit 规格 96T/48T 生 产 商 进口原装/分装 产品介绍 实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)抗原、生物素化的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

本实验采用液质联用技术检测了乙酰胆碱，该方法背景干扰小、重现性好、灵敏度腐、结果准确、简单快速，符合生物样品分析要求，可用于实际样品定量分析 为基础医学研究及临床诊断提供了有效的检测方法。

胆碱的对人体的作用相当广泛，如促进脑发育和提高记忆能力、调控细胞凋亡、促进脂肪代谢、促进体内甲基代谢、降低血清胆固醇等。因此，在乳粉中添加胆碱越来越受到重视，世界许多国家，包括中国在内，均已将胆碱批准作为营养食品添加剂。鉴于目前传统的检测方法（高氯酸肥水滴定、雷氏盐比色法等）不同程度的存在操作繁琐、选择性差、干扰因素多等缺陷，一些无良企业将一些廉价的无机氯化物掺入到乳制品中，出现了一些“空壳奶粉”。因此，建立一种准确、快捷的测定胆碱的方法十分重要。

卡巴胆碱为M、N胆碱受体激动药，是人工合成的拟胆碱药，具有双重缩瞳作用，可直接作用瞳孔括约肌上的胆碱受体，即刻产生缩瞳效果 同时有抗胆碱酯酶作用，能维持长时间的缩瞳效果。卡巴胆碱注射液为中国药典收载品种，目前使用的含量测定方法为紫外分光光度法，该方法需对卡巴胆碱衍生后才能测定，操作繁琐，易引入误差。本实验使用离子色谱法对卡巴胆碱进行测定，灵敏度高，重现性好，且该色谱条件可同时分离测定卡巴胆碱注射液中含有的杂质胆碱和乙酰胆碱。

琛航公司用SofTA（美国索福达）蒸发光散射检测器检测大豆磷脂的测试报告一、实验条件Cometro（美国康诺）高效液相色谱梯度系统；SofTA（美国索福达）Model 300S 蒸发光散射检测器，DT=70℃，SC=30℃；Cometro（美国康诺）6000 LDI Pump；Scienhome（天津琛航）Kromasil Sil 250*4.6mm色谱柱流动相：流动相A：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺=85:15:0.45:0.05 流动相B：正己烷-异丙醇-流动相A=20:48:32；梯度洗脱时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0109020307035955361090411090流速：1ml/min；样品：三氯甲烷-甲醇（2:1）溶解；进样量：10ul。二、实验结果样品： Channel A ResultsRetention TimeAreaArea PercentHeightHeight Percent2.83531313546.87429227213.8963.05618755804.1181691168.0414.1831219944926.78297605746.4085.7562133820.468111400.53022.1172784935861.14064739230.78131.2482812990.61872340.344空白溶剂 空白梯度 三、结果与讨论1. 由空白梯度显示，基线噪音小于0.5mV，漂移小于2mV/小时。2. 由空白溶剂显示，3min处有一溶剂峰。3. 由样品谱图显示，样品中主成分保留时间应为22.117min，由于没有标准品，根据相关文献推测为磷酸酰胆碱，4.183min处峰为磷脂酰乙醇胺，31.248min处峰为磷脂酰肌醇，样品中各成分分离度符合药典要求。结论：使用SofTA（美国索福达）Model 300S 蒸发光散射检测器分析大豆磷脂，信噪比高，基线漂移小，出峰情况良好，可以满足药典要求。