联呋喃甲酰二肟

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呋喃西林代谢物产生途径的研究（烟台杰科检测服务有限公司，山东 烟台 265231）摘要：呋喃西林代谢物（SEM）是检测呋喃西林的标记物，本身具有致癌和弱毒性。研究发现食品中SEM的来源途径多样，不仅限于呋喃西林原药在动物体内的代谢，还包括偶氮甲酰胺（ADC）高温热解、次氯酸钠与含氮物质反应等。关键词：呋喃西林代谢物（SEM）；偶氮甲酰胺（ADC）；次氯酸钠 ；标记物Nitrofurazone metabolites produced by a variety of ways 关键词：呋喃西林代谢物（SEM）；偶氮甲酰胺（ADC）；次氯酸钠 ；标记物呋喃西林（图一）是一种引入硝基的广谱抗菌类药物， 因其杀菌能力强、抗菌谱广、不易产生耐药性、价格低廉、疗效好等优点，得到广泛应用。呋喃西林在临床上表现为明显的三致作用（致癌、致畸、致突变），因此引起各国的高度重视，欧盟早在1995年就禁止呋喃西林用作兽药，澳大利亚、美国也相继在2001年和2002年出台了相关法律，将呋喃西林作为养殖禁用药物。 呋喃西林在动物体内极易降解，短短数小时内即可代谢为呋喃西林代谢物(SEM)（图二）,SEM与蛋白质结合，性质较稳定不易分解，可在动物体内存留数周。SEM常被用作检测呋喃西林原药的标记物，世界上大多数国家都以监测SEM来达到对呋喃西林原药监控的目的。 研究者发现，食品中SEM的来源不仅限于呋喃西林在动物体内的生物代谢，偶氮甲酰胺的高温热解反应、次氯酸钠作为消毒剂在食品加工过程中与含氮物质接触等都有可能导致SEM的产生。根据近年来国内外的有关研究，现将呋喃西林代谢物产生的途径做以下概述： 1、呋喃西林原药在动物体内代谢 虽然世界上大多数国家都禁止将呋喃类药物用作兽药，但因其药效和价格上的优点（上述第一段），仍有养殖者私自使用。 呋喃西林在动物体内代谢后与细胞膜蛋白结合，可在数周内保持稳定，从而延缓药物在体内的消除速度。普通的食物加工方法（如烧烤、微波加热、烹调）难以使结合态的SEM降解，经验证在弱酸条件下可以使代谢物从蛋白质中释放出来，当人食用了含有SEM的食物后，在胃酸的作用下，SEM与蛋白质解离，被人体吸收，当富集到一定量时会产生致癌的危险。 2、偶氮甲酰胺（ADC）高温热解 偶氮甲酰胺（Azodicarbonamide）（图三），简称ADC，为黄色至橘红色结晶性粉末，具有漂白和氧化双重作用，常用作面粉改良剂，可改善面团的物理操作性质及面制品组织结构 。偶氮甲酰胺能将面粉蛋白质内氨基酸的硫氢根（-SH）氧化成二硫键（-S-S-），使蛋白质链相互连结而构成立体网状结构，改善面团的弹性、韧性及均匀性，使生产出的面制品具有较大的体积，较好的组织结构。偶氮甲酰胺也是一种生产聚氯乙烯材料的发泡剂，食品玻璃容器盖子上的密封圈就是用聚氯乙烯材料制成的。 2.1 ADC—聚氯乙烯材料的发泡剂 人们第一次将偶氮甲酰胺与SEM联系在一起，是在2003年欧盟发生的一次严重的食品安全事件后。2003年欧洲食品安全局通报了一批SEM超出限量的食品，这些食品包括：果汁、果酱、蜂蜜、泡菜和消毒蔬菜、蛋黄酱，芥末，酱汁和番茄酱以及一些瓶装婴儿食品。这些食品有一个共同的特点：都是带有密封圈的玻璃或金属罐包装。欧洲食品安全局发布的调查结果为：SEM残留可能是ADC引起的。ADC用作密封圈（聚氯乙烯材料）的发泡剂，高温发泡的同时产生SEM，食物在与密封圈接触的过程中，SEM发生了迁移。 ADC的分解产物主要有气体（34%），包括氮气、一氧化碳、二氧化碳和氨，以及一些非挥法性残留物，主要是联二脲（hydrazodicarbonamide，HDC）（34%）和脲唑（urazole ）(27%)。ADC在180℃-220℃的高温下加热30分钟，即可生成SEM。ADC的分解产物HDC和脲唑经加热处理可缓慢生成SEM，而同样的热处理条件下，SEM也可以生成HDC和脲唑，尽管生成的量很少。欧盟在2003年10月9曰，发布了关于SEM有害人体健康的警告，SEM具有弱毒性和致癌性。2004年1月6日，发布了2004／1／EC指令，规定在2005年8月2日后禁止使用ADC作为发泡剂用于聚氯乙烯密封垫片生产中。 2.2 ADC—面粉改良剂 Pereira et al研究发现：向不含SEM的面粉样品中添加ADC，经一定条件处理后，检出SEM 2.2 μg/kg -5.2 μg/kg。这些研究似乎证明了偶氮甲酰胺是面粉中检出西林的“罪魁祸首”。 面粉中检出氨基脲的事例并不常见，更多的是经过加热或烘烤的面制品。Becalski等研究发现：将含有ADC的面粉在特定温度下烘烤，以及用含有ADC的面粉制作成面包（经高温烘烤），都能检测出较高浓度的SEM，而同样含有ADC的面粉，不经高温处理，几乎检测不到SEM。该研究同时还发现面包中心的检出浓度要比面包外壳的稍大，经分析可能是由于面包中心的温度稍高的原因。Becalski还研究了湿度对SEM产生的影响：加水后的面粉和面包在200℃条件下烘焙，与干燥的面粉和面包同条件处理后相比，前者SEM的检出浓度要略高。这与ADC的热解产物HDC水解生成SEM需要水的条件是相符的。 在欧盟国家ADC是不允许作为面粉改良剂来使用的。同比，美国、巴西以及中国允许ADC在小麦粉中的最大添加量为45mg/kg。Anton发现，ADC添加到小麦粉中约有0.1%转化成SEM。而45mg/kg的允许添加量，显然是不安全的。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106190944_300449_2177386_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106190946_300450_2177386_3.jpg 图1 图2http://n

动物源性食品中硝基呋喃类药物检测的固相萃取方法一、实验目的本实验利用固相萃取法作为样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂用量。二、实验目标物呋喃唑酮(CAS:67-45-8)，呋喃它酮(CAS:139-91-3)，呋喃西林(CAS:59-87-0)，呋喃妥因(CAS:67-20-9)。三、应用范围本方法适用于动物源性食品中硝基呋喃类药物的LC-MS/MS检测及确证。四、参考文献 推荐性国家标准《GB/T 21311-2007 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱-串联质谱法》。五、实验材料 C8/SAX固相萃取柱200mg/6mL。六、实验方法1、样品前处理 将样品组织搅碎、均质。精确称取约1g(精确到0.01g)样品于15mL带螺盖的离心管中，加入1mL水和8mL甲醇，涡旋混合均匀，2000r/min离心3min(15℃),弃去上清液；加入8mL乙醇，涡旋混合均匀，2000r/min离心3min(15℃),弃去上清液；加入8mL乙酸乙酯，涡旋混合均匀，2000r/min离心3min(15℃),弃去上清液。2、水解和衍生化向质控和样品同待测样品中加入5mL 0.2mol/L的盐酸水溶液、100μL衍生化试剂、以及100μL内标工作溶液(20μg/L)和的混合标准溶液(10μg/L)。盖好盖子，充分振荡混匀，然后放入空气浴摇床，在37℃，200r/min条件下衍生化16h（过夜）。3、样品提取 加入0.3M的磷酸钠水溶液500μL。用试管滴加10mol/L的氢氧化钠溶液，涡旋混合均匀，用精密pH试纸调节pH值至7.0—7.2。9500r/min 离心10min，取上清液。4、SPE柱净化(1)活化：依次以5mL甲醇和5mL纯水预处理。(2)洗脱：上清液全部过柱，流速控制在约每秒1滴。依次以5mL水和5mL 50%甲醇/水溶液淋洗柱子。淋洗液完全通过小柱后，至少抽真空5min。以4mL 4%的甲醇氨洗脱，洗脱液用15mL试管收集。(3)浓缩定容：40℃氮气吹干。残渣以0.05%甲酸/甲醇溶液（9:1，v/v）溶解。溶解液以0.22μm的水相滤膜过滤，滤液可直接用于LC-MS/MS分析。5、LC-MS/MS条件 液相色谱-质谱/质谱仪 色谱柱：C18柱：150mm×2.1mm，2.0μm，或相当者 流动相：甲醇-5mM乙酸铵七、实验结果1、添加回收结果 向样品中加入不同水平的四环素类药物，回收率结果如下：（见表1）表1 动物组织中四环素类药物添加回收结果 样品名称 化合物名称 添加水平（ng/mL） 回收率（%） 猪肉 呋喃唑酮 50 80.75 100 82.58 呋喃它酮 50 89.74 100 90.88 呋喃西林 50 92.74 100 91.28 呋喃妥因 50 95.63 100 96.94 2、 空白样品添加农药残留物色谱图 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508141653_560805_3310_3.jpg

[b][b]液相色谱-串联质谱法测定草鱼中硝基呋喃类代谢物AOZ残留量[/b]摘要[/b]: 本文根据农业部783号公告-1-2006水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱－串联质谱法来检测草鱼中硝基呋喃类代谢物AOZ的残留。样品经水解、衍生化和净化后，采用多反应监测模式测定。通过化合物的保留时间、定性离子和定量离子的筛查与确证，实现对草鱼中硝基呋喃类代谢物AOZ的定性与定量。结果表明，其线性系数大于0.99，在2.5mg/kg和4.5mg/kg添加水平下，AOZ回收率在95%-100%之间，相对标准偏差(RSD)小于15%。样品经水解、衍生化和净化后，以流动相A:0.002mol/L的醋酸铵溶液,B:甲醇进行梯度洗脱，C18(100mm×2.1mm，i.d,5um）色谱柱分离，采用正离子多反应监测( MＲM) 模式检测，基质匹配标准溶液定量。线性范围内相关系数均大于[color=#ff0000] [/color]0. 99。加标回收率在95.00%-100% 之间，相对标准偏差在6.19%- 8.43% 之间，结果表明，该方法简便、快速、灵敏度高、重现性好，可测定草鱼中硝基呋喃类代谢物AOZ的残留。[b]关键词[/b]: 高效液相色谱 － 串联质谱 硝基呋喃代谢物AOZ 草鱼；[b]Abstract[/b]:In this paper, AOZ residue of nitrofuran metabolites in grass carp was detected by liquid chromatography-tandem mass spectrometry according to the determination of nitrofuran metabolites residues in aquatic products in the ministry of agriculture no.783 bulletin 1-2006. After hydrolysis, derivatization and purification, the samples were determined by multi-reaction monitoring. AOZ, a nitrofuran metabolite in grass carp, was qualitatively and quantitatively determined by retention time, qualitative and quantitative ion screening. The results showed that the linear coefficient was greater than 0.99, the recovery of AOZ was between 95% and 100% and the relative standard deviation (RSD) was less than 15% at the addition levels of 2.5mg/kg and 4.5mg/kg.After the samples were hydrolyzed, derivated and purified, the samples were separated by gradient elution in mobile phase A:0.002mol/L ammonium acetate solution,B: methanol, and separated by C18(100mm×2.1mm, i.d,5um) chromatographic column. Positive ion multireaction monitoring (MRM) mode was adopted for detection, and the matrix matched standard solution quantification. The correlation coefficients in the linear range are all greater than 0.99. The standard recovery was between 95.00% and 100%, and the relative standard deviation was between 6.19% and 8.43%.[b]Key words[/b]:ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；nitrofuran metabolites-AOZ Grass carp.[b]1 实验部分[/b]1.1 仪器与试剂液相色谱—质谱联用仪( 岛津[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]-8030) 超纯水系统(WP-UP-YJ-20， 沃特浦) 分析天平(Quintix 2102-1CN,赛多利斯公司)；旋涡混合器（VORTEX 3，IKA公司）；恒温水浴振荡器（江苏安普SHA-C)；离心机（湖南湘仪H-2050R）；甲醇(色谱纯，默克股份两合公司) 醋酸铵( 分析纯，天津市致远化学试剂有限公司)；2-硝基苯甲醛（色谱纯，天津市百世化工有限公司）；二甲基亚砜（分析纯，天津市百世化工有限公司）；磷酸氢二钾（分析纯，天津市百世化工有限公司）；乙酸乙酯（分析纯，天津市泰兴试剂厂）；农药标准物质: 均来自农业部环境保护科研监测所（天津）；实验用水为经沃特浦超纯水系统处理后的超纯水。1.2 [b]样品处理[/b]1.2.1[b] 样品水解与衍生化[/b] 准确称取样品2.0g（精确至 0.01 g） 到50 mL 离心管中，加入0.05mL的100ng/mL混合内标（AOZ-D[sub]4[/sub]），旋涡混合50s，再加入5mL盐酸溶液（0.2mol/L）和0.15mL的2-硝基苯甲醛溶液（0.05mol/L）,涡旋振荡50s后，置于恒温水浴振荡器中37℃避光震荡16h。1.2.2 [b]样品的提取净化[/b]取出离心管冷却至室温，加入3-5mL磷酸氢二钾溶液（1.0mol/L），调节pH至7.0-7.5，加入4mL乙酸乙酯，涡旋振荡50s，4000r/min离心5min，取上层清液转移至10mL玻璃离心管中；再加入4mL乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液于40℃下氮气吹干。加入1.0mL甲醇溶液（甲醇：水=5:95（V:V））涡旋振荡溶解残留物，过0.45um滤膜，待测。1.2.3 [b]溶液配制 [/b]（1）[b]标准储备液。[/b] 分别取上述标准品（100.0 ug/mL 溶液），用甲醇稀释成 10 ng/mL 和100 ng/mL的标准储备液。（2）[b]标准工作溶液。[/b] 分别吸取上述标准品10ng/mL的标准储备液0.010mL、0.025mL、0.050mL、0.10mL和100ng/mL的标准储备液0.025mL、0.05mL、0.10mL于7个50mL离心管中，不加样品，按照1.2.1和1.2.2步骤操作，按照1.3测定。1.3 [b]色谱 － 质谱条件[/b]1.3.1 [b]色谱条件 [/b] 色谱柱:C18柱，(100mm × 2.1mm，5μm ) 柱温为40℃；进样量为20μL。流动相：A.0.002mol/L的醋酸铵溶液,B:甲醇 色谱洗脱条件见表 1。[align=center]表 1 高效液相色谱梯度洗脱条件[/align][table][tr][td][align=center]时间，min[/align][/td][td][align=center]A,%[/align][/td][td][align=center]B,%[/align][/td][td][align=center]流速，mL. [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3.5[/align][/td][td][align=center]15[/align][/td][td][align=center]85[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]15[/align][/td][td][align=center]85[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5.1[/align][/td][td][align=center]76[/align][/td][td][align=center]24[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][/tr][/table]1.3.2[b]质谱条件[/b]离子源: 电喷雾离子源ESI 扫描模式为正离子扫描 雾化气流量3L/min；干燥气流量15L/min；加热块温度250℃；DL温度250℃；CID气230kPa；IG真空度1.9×10[sup]-3[/sup]pa；PG真空度7.5×10[sup]1[/sup]pa；检测方式为多重反应监测。其他质谱参数见表2。 [align=center]表 2 反应监测的质谱采集参数[/align][table][tr][td][align=center]化合物[/align][/td][td][align=center]母离子m/z[/align][/td][td][align=center]子离子m/z[/align][/td][td][align=center]碰撞能量（v）[/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center]AOZ[/align][/td][td][align=center]236[/align][/td][td][align=center]104[/align][/td][td][align=center]19[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]236[/align][/td][td][align=center]134*[/align][/td][td][align=center]22[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]AOZ-[/align][/td][td][align=center]240[/align][/td][td][align=center]134*[/align][/td][td][align=center]14[/align][/td][/tr][tr][td=4,1]注：*为定量碎片离子[/td][/tr][/table][b]1.4 添加回收实验[/b] 准确称取不含上述药物的草鱼样品2.0g，分别以2.5mg/kg和4.5mg/kg2个水平进行添加回收实验，重复5次，按照上述实验方法测定，计算添加回收率和相对标准偏差。[b]2 结果与讨论2.1线性回归方程[/b]AOZ的基质标准曲线为 y = 0.217700 x -0.000564679( r = 0.9969876，r[sup]2[/sup]=0.9939843) 如图3 [align=center]图3（标准曲线AOZ）[/align][img=图片3 标准曲线,690,367]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910100829478357_6345_3416090_3.png!w690x367.jpg[/img][b]2.2方法的准确度、精密度[/b]在空白草鱼中分别进行 2.5和4.5 mg / kg 2 个水平的加标回收试验，每个水平重复测定 5 次，计算加标回收率和相对标准偏差。由表 5 可知，在 2.5和4.5mg / kg 2个添加水平下，AOZ的平均回收率分别为 99.648% 和95.63% ，相对标准偏差分别为 8.43% 和6.19%，方法显示出良好的准确度和精密度，可以满足试剂样品中农药残留的检测要求。[align=center]表 5 AOZ在草鱼中的回收率和相对标准偏差[/align][table][tr][td][align=center]农药[/align][/td][td][align=center]添加浓度( mg / kg)[/align][/td][td][align=center]平均回收率( %)[/align][/td][td][align=center]重复 1[/align][/td][td][align=center]重复 2[/align][/td][td][align=center]重复 3[/align][/td][td][align=center]重复 4[/align][/td][td][align=center]重复 5[/align][/td][td][align=center]平均值相对标准偏差( % )[/align][/td][td][align=center]标准曲线[/align][/td][td][align=center]相关系数r2[/align][/td][/tr][tr][td]AOZ[/td][td]2.5[/td][td]99.648[/td][td]2.517[/td][td]2.261[/td][td]2.663[/td][td]2.723[/td][td]2.292[/td][td]8.43[/td][td][align=center]Y=0.217700X-0.000564679[/align][/td][td]0.9939843[/td][/tr][tr][td]AOZ[/td][td]4.5[/td][td]95.63[/td][td]4.223[/td][td]4.768[/td][td]4.043[/td][td]3.870[/td][td]4.613[/td][td]6.19[/td][td][align=center]Y=0.217700X-0.000564679[/align][/td][td]0.9939843[/td][/tr][/table][b]2.3实际样品分析[/b] 用本方法对市场销售的2份草鱼进行硝基呋喃类代谢物AOZ检测，均未检出,见图6。 [align=center]图6[/align][img=图片6,690,366]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910100830145934_7979_3416090_3.png!w690x366.jpg[/img][b]3、结论[/b]本研究通过对样品前处理方法、质谱条件和色谱条件的优化，建立了液相色谱-串联质谱法测定草鱼中AOZ残留量的分析方法，该方法前处理简单、快速、回收率高，方法的灵敏度、准确度和精密度等均满足农药残留分析的要求，适用于大量样品的快速检测。[b]参考文献[/b]高洁，朱莉萍等.超高效液相色谱-串联质谱法测定多脂肪类动物源性食品中硝基呋喃代谢物. 食品安全质量检测学报2018年第9卷第6期，2018.[b] [/b]

【中文名称】呋喃唑酮；痢特灵；3-（5-硝基呋喃甲叉）胺基-2-噁唑烷酮【英文名称】furazolidone;foroxone【结构或分子式】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203012030_351889_1855403_3.jpg【性状】 黄色结晶性粉末，无臭味苦。【溶解情况】 微溶于水和乙醇。【用途】 抗菌谱类似呋喃因。对大肠杆菌、痢疾杆菌等最敏感。但口服时肠道不易吸收。用于菌痢和肠炎。也可用于泌尿道感染。 可作饲料添加剂，较早应用于防治球虫病，主要对球虫生长过程中的第二代繁殖体有作用，可预防和控制鸡脆弱艾美耳球从、毒害艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫，除对球虫原虫作用外，对细菌性痢疾也有效。。【制备或来源】 （1）可由β-羟基乙基肼与碳酸二乙酯经环合、缩合制得。 （2）由乙醇胺经缩合，亚硝化，环合，还原，再缩合制得。【生产单位】略