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尿囊素生物素盐

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  • 【第三届原创参赛】山药中尿囊素的提取工艺研究

    [align=center][size=3][font=宋体][size=2]维权声明：本文为mengzhou原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。也请哪些垃圾网站不要随便转载，谢谢合作！[/size]山药中尿囊素提取方案研究试验[/font][/size][size=3][/size][/align][size=3][font=Times New Roman]1.[/font][/size][size=3][font=宋体]山药的成分主要有薯蓣皂苷元、粘[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]、淀粉、胆碱、氨基酸、尿囊素[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]([/size][size=3]allantion)[/size][/font][size=3][font=宋体]、止杈素[/font][/size][size=3][font=Times New Roman](d[/font][/size][size=3][font=宋体]－[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]abscisin)[/font][/size][size=3][font=宋体]等，据报道尿囊素具有抗刺激物、麻醉镇痛、促进生长、消炎和抑菌作用，常用于治疗手足皲裂、鱼鳞病、多种角化皮肤病。尿囊素有广泛的生物活性，是山药的有效成分之一。[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=Times New Roman]2.[/font][/size][size=3][font=宋体]尿囊素[/font][/size][size=3][font=宋体]不溶于冷水、乙醇、[/font][/size][size=3][font=宋体]乙醚及氯仿，可溶于热水、稀乙醇及丙三醇。因山药中含有淀粉，用热水提，难过滤，故用含水醇溶液作为提取溶剂。[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=Times New Roman]3.[/font][/size][size=3][font=宋体]尿囊素提取方案的筛选[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=Times New Roman]3.1 [/font][/size][size=3][font=宋体]确定因素及水平[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=宋体]尿囊素的测定方法有用[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]70%[/font][/size][size=3][font=宋体]乙醇加热回流提取，也有用[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]40%[/font][/size][size=3][font=宋体]甲醇加热回流提取；还有文献报道用超声提取尿囊素含量。根据预试验结果，认为加热回流法提取尿囊素效果比较理想。在此基础上，对影响尿囊素提取效果的主要因素和水平进行正交试验设计分析（见表[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]1[/font][/size][size=3][font=宋体]）：提取溶剂（甲醇、乙醇）、溶剂浓度（[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]40%[/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]70%[/font][/size][size=3][font=宋体]）、溶剂用量（[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]50ml[/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]100ml[/font][/size][size=3][font=宋体]）及提取时间（[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]1h[/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]3h[/font][/size][size=3][font=宋体]）。[/font][/size][size=3][/size][size=3][b][font=宋体]表[/font][font=Times New Roman]1 [/font][font=宋体]尿囊素提取试验的因素及水平[/font][/b][/size][align=center][table=96%][tr][td=1,3,16%][align=center][size=3][font=宋体]水平[/font][/size][/align][/td][td=4,1,83%][align=center][font=宋体]因[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]素[/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=宋体]浓度[/font][/size][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=宋体]溶剂[/font][/size][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=宋体]用量[/font][/size][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=宋体]时间[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3][i]A[/i][/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3][i]B[/i][/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3][i]C[/i][/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3][i]D[/i][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3]40%[/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=宋体]甲醇[/font][/size][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3]50ml [/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1h[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2[/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][font=Times New Roman][size=3]70%[/size][/font][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=宋体]乙醇[/font][/size][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=Times New Roman]100ml[/font][/size][/align][/td][td=1,1,20%][align=center][size=3][font=Times New Roman]3h[/font][/size][/align][/td][/tr][/table][/align][size=3][font=Times New Roman]3.2 [/font][/size][size=3][font=宋体]正交试验[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=宋体]根据因素、水平数，选择正交试验表[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]L[sub]8[/sub](2[sup]7[/sup])[/font][/size][size=3][font=宋体]安排尿囊素提取工艺试验，试验设计及结果见表[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]2[/font][/size][size=3][font=宋体]。[/font][/size][size=3][/size][align=center][size=3][b][font=宋体]表[/font][font=Times New Roman]2 [/font][font=宋体]尿囊素提取工艺正交试验[/font][/b][/size][/align][align=center][table=96%][tr][td=1,4,9%][align=center][size=3][font=宋体]试[/font][font=@Batang] [/font][font=宋体]验[/font][font=@Batang] [/font][font=宋体]号[/font][/size][size=3][/size][/align][/td][td=7,1,82%][align=center][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]列[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]号[/font][/size][/align][/td][td=1,4,8%][align=center][size=3][font=宋体]结果[/font][/size][/align][align=center][font=Times New Roman][size=3][i]y[sub]i[/sub][/i](%)[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,11%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][font=Times New Roman][size=3]3[/size][/font][/align][/td][td=1,1,14%][align=center][font=Times New Roman][size=3]4[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][font=Times New Roman][size=3]5[/size][/font][/align][/td][td=1,1,9%][align=center][font=Times New Roman][size=3]6[/size][/font][/align][/td][td=1,1,10%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=7,1,82%][align=center][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]因[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]素[/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,11%][align=center][i][font=宋体][size=3]A[/size][/font][/i][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][i][font=宋体][size=3]B[/size][/font][/i][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][i][font=宋体][size=3]A×B[/size][/font][/i][/align][/td][td=1,1,14%][align=center][i][font=宋体][size=3]C[/size][/font][/i][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][i][font=宋体][size=3]A×C[/size][/font][/i][/align][/td][td=1,1,9%][align=center][i][font=宋体][size=3]B×C[/size][/font][/i][/align][/td][td=1,1,10%][align=center][i][font=宋体][size=3]D[/size][/font][/i][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,9%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,11%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1(40%)[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman]1([/font][font=宋体]甲醇[/font][font=Times New Roman])[/font][/size][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,14%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1(50ml)[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,9%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,10%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1(1h)[/size][/font][/align][/td][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.59[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,9%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2[/size][/font][/align][/td][td=1,1,11%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,14%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2(100ml)[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,9%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,10%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2(3h)[/size][/font][/align][/td][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.71[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,9%][align=center][font=Times New Roman][size=3]3[/size][/font][/align][/td][td=1,1,11%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman]2([/font][font=宋体]乙醇[/font][font=Times New Roman])[/font][/size][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,14%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,9%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,10%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2[/size][/font][/align][/td][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.68[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,9%][align=center][font=Times New Roman][size=3]4[/size][/font][/align][/td][td=1,1,11%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,14%][align=center][font=Times New Roman][size=3]2[/size][/font][/align][/td][td=1,1,12%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,9%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,10%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,8%][align=center][font=Times New 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Roman]2[/font][/size][size=3][font=宋体]直观分析知：[/font][/size][size=3][font=宋体]各因素[/font][/size][size=3][font=宋体]对试验结果的影响程度依次为[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]D[/font][/size][size=3][font=宋体]＞[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[/font][/size][size=3][font=宋体]＞[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]C[/font][/size][size=3][font=宋体]＞[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]B[/font][/size][size=3][font=宋体]，[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]B[/font][/size][size=3][font=宋体]之间交互作用的影响较大；尿囊素的最佳提取方案为[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[sub]2[/sub]B[sub]2[/sub]C[sub]2[/sub]D[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]。[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=Times New Roman]3.4 [/font][/size][size=3][font=宋体]方差分析[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=宋体]为了判断不同因素对试验结果影响的显著程度，把作用不明显的因素合并为试验误差进行方差分析，结果见表[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]3[/font][/size][size=3][font=宋体]。[/font][/size][align=center][size=3][b][font=宋体]表[/font][font=Times New Roman]3 [/font][font=宋体]尿囊素提取工艺正交试验方差分析[/font][/b][/size][/align][align=center][table=100%][tr][td=1,1,8%][align=center][font=宋体][size=3]因素[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=宋体][size=3]偏差平方和[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=宋体][size=3]自由度[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][i][font=宋体]F[/font][/i][sub][font=宋体]比[/font][/sub][font=宋体][/font][/size][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][size=3][i][font=宋体]F[/font][/i][sub][font=宋体]0.05[/font][/sub][font=宋体][/font][/size][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][i][font=宋体]F[/font][/i][sub][font=宋体]0.01[/font][/sub][font=宋体][/font][/size][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=宋体][size=3]显著性[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]A[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.003[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]12.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]*[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]B[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]A×B[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.003[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]12.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]*[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]C[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]A×C[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]B×C[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.001[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]4.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=Times New Roman][size=3]D[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][font=Times New Roman][size=3]0.021[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]1[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]84.000[/size][/font][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][font=Times New Roman][size=3]7.710[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]16.300[/size][/font][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][font=Times New Roman][size=3]**[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,8%][align=center][font=宋体][size=3]误差[/size][/font][/align][/td][td=1,1,21%][align=center][size=3][font=Times New Roman]0.00[/font][/size][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman]4[/font][/size][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,16%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][td=1,1,13%][align=center][size=3][font=Times New Roman][/font][/size][/align][/td][/tr][/table][/align][size=3][font=宋体]方差分析表明，不同提取浓度、提取时间以及因素[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]B[/font][/size][size=3][font=宋体]之间的交互作用对尿囊素的提取工艺影响存在显著性差异；溶剂类型和用量对提取工艺影响无显著性差异。故首先选择[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]B[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]D[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]；因素[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]C[/font][/size][size=3][font=宋体]影响不明显，但[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]C[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]水平提取效果较好，综合分析以[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[sub]2[/sub]B[sub]2[/sub]C[sub]2[/sub]D[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]为最佳提取工艺。[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=Times New Roman]3.5 [/font][/size][size=3][font=宋体]提取工艺的确定[/font][/size][size=3][/size][size=3][font=宋体]综上分析，确定最佳的提取工艺为[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]A[sub]2[/sub]B[sub]2[/sub]C[sub]2[/sub]D[sub]2[/sub][/font][/size][size=3][font=宋体]，即：用[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]70%[/font][/size][size=3][font=宋体]乙醇[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]100ml[/font][/size][size=3][font=宋体]，加热回流提取[/font][/size][size=3][font=Times New Roman]3[/font][/size][size=3][font=宋体]小时。[/font][/size][color=red][size=3][/size][/color]

  • 生物素中间体的色谱检测

    [color=#444444]先已合成的生物素的中间体：双苄基生物素和双苄烯生物素的液相色谱峰重叠，有何办法能将两峰分开。[/color][color=#444444]采用的色谱条件是：C18柱，流动相是磷酸盐缓冲溶液：乙腈=60:40，流速1ml/min, 波长210 nm[/color]

  • 生物素蛋白标记常见问题及注意事项

    [font=宋体][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统 [/font][font=Calibri](biotin-avidin system[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]BAS)[/font][font=宋体]，是[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点，两者的亲和常数（[/font][font=Calibri]K=1015 mol/L[/font][font=宋体]）比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体（[/font][font=Calibri]K=105[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1011 mol/L[/font][font=宋体]）至少高[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万倍，是目前已知强度最高的非共价作用，这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素蛋白标记常见问题：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、什么是生物素标记蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在生物化学中，生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素亲和常数至少比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体高一万倍[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此，生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现，也为类似于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验简化了流程，提高了效率。此外，由于生物素的小尺寸（[/font][font=Calibri]MW = 244.31g / mol[/font][font=宋体]），不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、生物素标记蛋白有哪些应用？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析，将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，[/font] [font=宋体]改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢？这需要非常严苛的条件（例如，[/font][font=Calibri]pH=1.5[/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]GuHCl[/font][font=宋体]），这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质，最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密，但是在降低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]以后，亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低[/font][font=Calibri]pH([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]pH=4)[/font][font=宋体]从柱子上释放。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测中的应用：在常规[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]原理的基础上，结合生物素[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]与亲和素[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如抗体等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]测定，[/font][font=Calibri]western[/font][font=宋体]印迹和其他免疫分析方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记注意事项：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]用量比[/font][font=Calibri](mg/mg)[/font][font=宋体]宜为[/font][font=Calibri]2:1, IgG[/font][font=宋体]应用浓度[/font][font=Calibri]0.5~5[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/ml [/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ag[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ab[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font]

  • 生物素标记抗体：原理、应用与前景

    [b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]在生物学和医学的研究中，抗体标记技术已成为一种重要的研究手段。其中，生物素标记抗体凭借其独特的优势，在许多领域中得到了广泛应用。本文将详细介绍生物素标记抗体的原理、应用及发展前景。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、生物素标记抗体的原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素，又称维生素[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]，是一种存在于自然界中的小分子有机物质。它可以通过化学反应与抗体结合，生成生物素标记抗体。这一过程通常是在抗体的氨基基团上连接一个生物素衍生物，形成共价键。这种连接方式不会改变抗体的免疫活性，同时使得生物素标记抗体能够与相应的抗原结合。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]三、生物素标记抗体的应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫分析：生物素标记抗体在免疫分析中发挥了重要作用。通过将生物素标记抗体与相应的抗原结合，可以实现对抗原的灵敏检测。这种方法被广泛应用于生物学、医学及食品安全等领域。[/font][font=宋体]蛋白质组学研究：在蛋白质组学研究中，生物素标记抗体可用于蛋白质的分离和纯化。通过生物素标记抗体与抗原的特异性结合，可以从复杂的蛋白质混合物中分离出目标蛋白质。[/font][font=宋体]细胞生物学研究：生物素标记抗体在细胞生物学研究中具有广泛的应用价值。例如，通过生物素标记抗体追踪细胞内蛋白质的分布和动态变化，有助于深入了解细胞的生命活动。[/font][font=宋体]疾病诊断与治疗：生物素标记抗体在疾病诊断和治疗中也发挥了重要作用。例如，针对癌症的免疫治疗中，生物素标记抗体可以用于识别和攻击癌细胞，从而达到治疗目的。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、发展前景[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]随着生物学和医学技术的不断进步，生物素标记抗体的应用前景日益广阔。未来，随着技术的不断创新和完善，生物素标记抗体的性能将得到进一步提升，从而推动其在更多领域中的应用。同时，随着人类对生命现象认识的深入，将有更多具有挑战性的研究课题需要借助生物素标记抗体这一强大工具。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]五、结语[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记抗体作为一种重要的研究手段，在生物学、医学及其他相关领域中发挥着不可或缺的作用。随着技术的不断进步和应用领域的拓展，我们有理由相信，生物素标记抗体的未来将更加光明，为人类探索生命奥秘提供更多可能性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]相关产品，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 生物素的检测

    最近用陆桥的微孔板做生物素，结果简直惨不忍睹，3个平行偏差好大，标曲去了好多点才勉强到0.99，质控样的平行也很差，值也做不准，一次偏大一次又偏小。请老师指导该怎么做

  • 明治奶粉生物素含量不达标可致婴儿脱发

    明治奶粉生物素含量不达标可致婴儿脱发

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211201436_405528_2518341_3.jpg其一款婴儿奶粉在香港被查出生物素含量不达标，可导致婴儿脱发、皮疹等，香港食环署已建议停售，至此相关奶粉的事件已经成为常态新闻了，三聚氰胺、婴儿提早发育、还有婴儿脱发等等，这些让人触目惊心的新闻背后到底有多少不可告人的秘密？根据食环署近日公布的一份报告，明治细仔奶粉0-12个月(850克)的生物素含量只有0.81微克/100千卡，低于食品法典委员会标准。风险评估发现，如根据标签上的喂哺建议，其生物素摄入量将低于世界卫生组织建议的摄入量5微克/日。而另一款和光堂的初生婴儿奶粉为0.68微克/100千卡，同样低于食品法典委员会标准。食物安全中心发言人表示，膳食生物素缺乏症是非常罕见的，未曾在母乳喂养的婴儿出现。但是如果零至6个月大婴儿长期只单纯靠上述奶粉摄取生物素，不排除对健康有不良影响。生物素缺乏的婴儿可能会出现脱发、皮疹、肌肉张力低、嗜睡等症状。你家的孩子现在吃的是什么奶粉？奶瓶塑化剂事件刚过，奶粉生物素问题又来了，怎样才能给自己孩子的健康给一个安全的保障？奶粉中生物素含量应该怎么来测定？奶粉生物素含量国家标准有哪些？生物素的物性是什么？为什么会引起婴儿脱发？

  • 注射用水溶性维生素的分析（2）——叶酸，生物素

    注射用水溶性维生素的分析（2）——叶酸，生物素

    [align=center][b]注射用水溶性维生素的分析（2）[/b][/align][align=center][b]——叶酸，生物素[/b][/align]客户提供了注射用水溶性维生素粉针剂及对照品（叶酸，生物素），要求本实验室依据客户所提供方选择合适色谱柱，满足方法中对叶酸，生物素及其前后相邻杂质的分离要求，进而达到准确定量的目的。首先，依据客户提供的色谱条件我们尝试了使用中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5 4.6 mm i.d. × 150 mm（A4AB 07251），分析对照品溶液与供试品溶液，结果如图1所示，对照品溶液中叶酸及生物素得到了良好的分离结果；在分析供试品溶液时，叶酸与其后杂质峰能够得到分离度为1.83的良好分离结果。[align=center][img=,673,421]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801110920_3890_2222981_3.jpg!w673x421.jpg[/img][/align][align=center]图1 CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII（150 mm）分析对照品及供试品溶液结果[/align]注*峰上所标数字为分离度，下同。[img=,673,298]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801110920_2922_2222981_3.jpg!w673x298.jpg[/img]为提高分离能力，使叶酸峰与其后杂质峰分的更远，我们尝试将色谱柱长度由150 mm换为250 mm，再一次分析供试品及对照品溶液，结果发现叶酸和生物素保留时间均明显延长，叶酸峰由16.97 min延长到29.03 min，此时叶酸峰与其后相邻杂质峰能够得到更好的分离，分离度为4.23，但同时也发现生物素峰被包于杂质峰中（如图2）。[align=center][img=,690,437]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111011_6191_2222981_3.jpg!w690x437.jpg[/img][/align][align=center]图2 CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII（250 mm）分析对照品及供试品溶液结果[/align][align=left][img=,668,303]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111011_2127_2222981_3.jpg!w668x303.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]为使客户有更多色谱柱选择，本实验室也尝试了高碳载量的SUPERIOREX ODS色谱柱对对照品溶液及供试品溶液进行分析，同样能够得到待测组分与前后杂质峰的良好分离，分离度均在2.0以上；同时，我们也发现在分析供试品时，由于供试品中复杂基质的影响，叶酸峰会出现一定的拖尾现象（如图3）。[/align][align=left][/align][align=center][img=,619,394]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111012_1478_2222981_3.jpg!w619x394.jpg[/img][/align][align=center] 图3 SUPERIOREX ODS分析对照品及供试品溶液结果[/align][align=center][/align][align=left][img=,687,297]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111012_3462_2222981_3.jpg!w687x297.jpg[/img][/align][align=center][/align][align=left]我们也尝试使用可以在100%水系流动相下使用的高极性AQ色谱柱分析供试品溶液及对照品溶液，发现由于整体保留时间过长而使得生物素峰被包于杂质峰中，因此，我们尝试缩短整体保留时间，在药典规定范围内，提高流动相中有机相比例，将流动相比例由磷酸二氢钾缓冲溶液-乙腈（93：7）调整为（91：9），最终发现供试品中叶酸和生物素也能够与其相邻杂质峰取得良好分离结果，且分离度更佳（见图4）。[/align][align=left][/align][align=center][img=,655,416]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111020_155_2222981_3.jpg!w655x416.jpg[/img][/align][align=center]图4 CAPCELL PAK C[sub]18 [/sub]AQ S3分析对照品及供试品溶液结果[/align][align=left][img=,661,296]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111021_778_2222981_3.jpg!w661x296.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]综上实验结果，使用中等极性的[b]CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] MGII S5[/b] 4.6mm i.d. × 150 mm（A4AB 07251）和高碳载量的[b]SUPERIOREX ODS S5[/b] 4.6 mm i.d. × 150 mm（AZAB 12684）色谱柱，在客户原条件下，均能够实现叶酸、生物素及其相邻杂质间的良好分离；[/align][align=left]使用高极性[b]CAPCELL PAK C[sub]18[/sub] AQ S3[/b] 4.6 mmi.d. × 150 mm（A7AB 02100）色谱柱，在药典规定流动相可调整范围内，将流动相中磷酸盐缓冲液和乙腈比例调整为91 / 9（原条件为93 / 7），也可实现注射用水溶性维生素中叶酸和生物素及相邻杂质的良好分离。[/align]

  • 检测生物素标记蛋白的新方法——DiDBiT技术

    [b][font=宋体][color=#060607]前言[/color][/font][/b][font=宋体][font=宋体]在生物医学研究领域，蛋白质的功能性鉴定及其在各种生物过程中的作用机制一直是科研人员关注的焦点。近年来，质谱技术因其高分辨率和高灵敏度在蛋白质组学研究中发挥着越来越重要的作用。然而，传统的质谱策略在鉴定具有特定生物功能的蛋白质亚群时，常常受到标记物与非标记物区分困难的限制。为了解决这一问题，科学家们开发了一种名为[/font][font=宋体]“直接检测含生物素标签的蛋白质”（[/font][font=Calibri]Direct Detection of Biotin-containing Tags, DiDBiT[/font][font=宋体]）的新技术，显著提高了生物素化蛋白质的直接检测效率。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术检测方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]主要是利用质谱技术（[/font][font=Calibri]MS/MS[/font][font=宋体]）来直接检测含生物素的肽段，无需额外的实验步骤即可直接鉴定生物素化蛋白质。与传统的生物素蛋白质鉴定方法相比，[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术显著提高了检测的灵敏度和效率。[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术通过优化样品的预处理和质谱分析步骤来提高生物素化肽段的检测灵敏度。首先对细胞裂解物进行蛋白质消化，然后使用[/font][font=Calibri]NeutrAvidin[/font][font=宋体]珠子富集含生物素的肽段，最后进行质谱分析。这种方法的关键在于通过降低样品复杂性，提高了生物素标记肽段的检出率。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术的应用[/font][/font][/b][font=Calibri]Lucio Matias[/font][font=宋体][font=宋体]等人采用[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术，在啮齿动物的神经系统中标记新合成的蛋白质，结果表明使用[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术提高了生物素标记新合成蛋白质的检测，与传统方法相比，检测灵敏度提高了约[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]倍。他们还成功地应用[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术在成年大鼠视网膜中直接检测新合成的蛋白质，显示出前所未有的时间分辨率，短至[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]小时。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]此外，[/font][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术具有高度的灵活性和可扩展性。它可以与其他蛋白质组学技术相结合，如蛋白质相互作用研究、蛋白质翻译后修饰分析等，从而为我们提供更为全面和深入的蛋白质功能信息。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术的应用展示了其在蛋白质组学研究中的广泛潜力，尤其是在快速鉴定特定细胞类型或生物学状态下新合成蛋白质的能力。此技术不仅提高了实验的准确性和效率，而且通过直接检测生物素化肽段，显著简化了实验流程，降低了实验的复杂性和成本。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]DiDBiT[/font][font=宋体]技术提供了一种强大的工具，用于在复杂生物样本中直接鉴定和分析含生物素的蛋白质。这种高灵敏度和高分辨率的策略适用于广泛的生物标记策略和样本准备，显著提高了从样本中区分真实候选物和污染物的能力。此技术特别适用于含量较少的生物素化蛋白质的研究，为蛋白质组学和细胞生物学提供了新的研究工具。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]本篇文章由义翘神州编辑整理，同时义翘神州提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][u][font=宋体][color=#0000ff][b]生物素标记蛋白[/b][/color][/font][/u][/url][font=宋体]，更多详情可以点击查看！[/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=宋体][font=Calibri]Schiapparelli LM, McClatchy DB, Liu HH, Sharma P, Yates JR 3rd, Cline HT. Direct detection of biotinylated proteins by mass spectrometry. J Proteome Res. 2014 13(9):3966-3978. doi:10.1021/pr5002862[/font][/font]

  • 维生素B7 生物素 VitaFast Biotin 定量检测试剂盒说明书

    VitaFast Vitamin B7 生物素试剂盒简单易用，采用微生物方法，在微孔板中定量检测食品和药品中的生物素总量（包括添加和原生生物素）。AOAC – RI认证的样品： 婴幼儿配方乳粉、谷类食品、药丸、散剂、果汁和牛奶

  • 超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中生物素的含量

    超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中生物素的含量

    [size=16px]超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法测定奶粉中生物素的含量[/size][align=center][size=16px]户江涛[/size][/align][align=center][size=16px]（黑龙江省农垦科学院测试化验中心，黑龙江 佳木斯 154007 ）[/size][/align][size=16px]摘要：采用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法建立了检测奶粉中生物素含量的分析方法，对试样提取、净化条件，流动相、色谱柱和质谱条件进行了优化，结果表明该方法与国标微生物法对同一样品检测得到的生物素含量基本一致，但检测所需时间大大减少，且抗干扰能力、精密度均比微生物法高，特别适和大批量奶粉中生物素含量检测。关键词：超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱；奶粉；生物素生物素又称维生素B7，是生物体内羧基转化酶作用的一种辅酶，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。人类自身不能合成生物素，需从膳食中获得，而奶粉是人类（特别是婴幼儿）获取生物素的重要途径，准确测定奶粉中生物素含量有重要意义。目前国家标准规定的生物素测定方法《GB 5009.259-2016 食品安全国家标准 食品中生物素的测定》为微生物法。该方法需要购买特定菌种，成本较高，且菌种难保存、易受污染，实验操作复杂、费时费力、技术难度大、对检验人员和实验室要求较高，且容易受到基质干扰、检测结果重复性较差。同时奶粉成分复杂，所含生物素含量极低，一般为十几个微克/100克。因此，制定一种准确、高效、便捷、灵敏度高的生物素测定方法迫在眉睫。基于高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的分离能力和质谱的高灵敏度、高选择性，采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱测定法具有前处理简单、分析速度快，适用的基质范围广、实用性强，可以为奶粉中生物素含量的测定提供一种有效的检测手段。本文建立的超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法测定奶粉中生物素含量[color=black]的方法前处理过程简便、分析时间短、灵敏度高、抗干扰能力强，特别适用于大批量奶粉样品中生物素[/color]含量的检测。1 实验部分1.1 材料与试剂[color=black]生物素（纯度[/color][font=宋体][color=black]≥[/color][/font][color=black]99%，Sigma公司）；婴儿配方乳粉定量分析质控样品（BQC1051147452，北京普天同创生物科技有限公司）；乙腈、甲酸（色谱纯，Fisher公司）；Prime HLB固相萃取柱（200 mg，3 mL，[/color][font=宋体]Waters[/font][color=black]公司）；0.2 um有机系滤膜；实验用水为Millipore纯水仪制备。[/color]1.2 仪器与设备UPLC XEVO TQ-S超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱仪（Waters公司）；涡旋振荡器。1.3 [color=black]生物素[/color]标准储备液的配置称取一定量生物素[color=black]标准品[/color]，用50%乙醇-水溶液配置成质量浓度为100 ug/mL标准储备液，于2~4℃冰箱保存（有效期1个月），待用；临用前将溶液回温至室温，并吸取一定体积储备液用水逐级稀释成所需浓度的标准工作液。1.4 样品前处理准确称取1.00 g(精确到0.01 g)奶粉试样于50 mL离心管中，加入10.00 mL纯水涡旋混匀2 min，然后加入10.00 mL乙腈，涡旋混匀1 min，然后在离心机中以15000 r/min离心5 min，取出后吸取2 mL上清液置于[color=black]Prime HLB固相萃取柱中，使其自然流出弃去最初几滴，然后用玻璃试管接取流出液约1 mL涡旋混匀，[/color]过0.22[font=宋体]ｕ[/font]m有机系微孔滤膜后供UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析测定。1.5 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]及质谱条件[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]：色谱柱:Waters HSS [font=times new roman]T3（1.8 μm，100mm×2.1mm）；柱温：30℃[/font]；流速：[font=times new roman]0.3 [/font]mL/min；进样量：[font=times new roman]2[/font] [font=times new roman]μL；流动相A：乙腈；流动相B：0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脱程序：0~0.5min，10% A；0.5~3. 0 min，10%~100% A；3. 0 ~4. 0 min，100%A，4 ~4.1min，100% A~10% A，4.1 ~5.0min 10% A。[/font]质谱：离子源：电喷雾离子源( ESI [sup]+[/sup] ) ；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测( MRM)；毛细管电压：3.2 kv；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：500℃；去溶剂气流量：1000 L /h；定性、定量离子对及碰撞能量见表1。[/size][align=center][size=16px]表1生物素的质谱参数[/size][/align][table][tr][td][align=center][size=16px]分析物[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]锥孔电压/V[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]母离子/(m/z)[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]子离子/(m/z) [/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]碰撞能量/V[/size][/align][/td][/tr][tr][td][size=16px]生物素[/size][/td][td][align=center][size=16px]30[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]245[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]227﹡[/size][/align][align=center][size=16px]97[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]13[/size][/align][align=center][size=16px]25[/size][/align][size=16px][/size][/td][/tr][/table][size=16px]﹡为定量离子2 结果与讨论2.1 色谱质谱条件及前处理过程的优化流动相的选择：对比了酸性体系（0.1%甲酸水溶液）与甲醇、乙腈的流动相体系组合，结果发现生物素在乙腈体系中响应值比甲醇更好一些，故本研究采用0.1%甲酸水溶液+甲醇流动相体系。色谱柱的选择：比较了[font=宋体]Waters [/font]BEH C[sub]18[/sub]（1.7 μm，50mm×2.1mm）和[font=宋体]Waters [/font]HSS T[sub]3[/sub]（1.8 μm，100mm×2.1mm）两种不同填料的分析柱，实验时发现目标物在这两款色谱柱上响应值差不多，但目标物在BEH C[sub]18[/sub]上保留时间比HSS T[sub]3[/sub]要短，考虑到生物素本身属于水溶性维生素，极性较强，若出峰太早可能造成奶粉中一些极性强的基质随目标物一起共流出进而干扰目标物测定，因此本方法采用了HSS T[sub]3[/sub]色谱柱。质谱参数优化：将1.0 mg/L 生物素标准溶液直接注射到质谱中，在正离子模式下进行母离子全扫描，发现目标物各自对应的准分子离子峰[M+H][sup]+[/sup]具有很好的响应，然后在分别进行子离子全扫描，各得到两对丰度高、干扰小的子离子对进行MRM监测，最终确定的质谱条件见表1，相应的色谱质谱图见图1、图2。前处理过程优化：生物素属于水溶性维生素，用纯水作为提取试剂可以得到很好的提取效果。但实验过程中发现，用纯水将奶粉溶解后整个溶液呈乳白色，只通过离心方式很难去除其中大量的蛋白、脂肪等杂质，需要对提取液进行除蛋白操作。通过考察乙酸铅、三氯乙酸、乙腈等几种常用的沉淀蛋白方法，综合考虑在去除蛋白的同时要尽可能减少其它杂质的引入，因此本方法采用乙腈除蛋白的方式，比较了几种不同水/乙腈比例，最终选定水/乙腈（1:1体积比）达到最优的实验效果。对于脂肪的去除则选用了目前较流行的[color=black]Prime HLB固相萃取柱通过式方法，即提取液通过Prime HLB时脂肪等大分子保留在SPE小柱上，目标物不保留以达到去除脂肪等杂质的目的，[/color]综合以上因素本实验最终采用了1.4的前处理方法。[/size][align=center][size=16px][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210071506558084_124_1729077_3.jpg[/img][/size][/align][align=center][size=16px]图1 [color=black]生物素[/color]标准溶液（10 ng/mL）MRM色谱图[/size][/align][size=16px][/size][align=center][size=16px][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210071506561980_1283_1729077_3.jpg[/img][/size][/align][align=center][size=16px]图2 奶粉样品中[color=black]生物素[/color]MRM色谱图[/size][/align][size=16px][color=black]2.2 线性范围和定量限[/color][color=black]吸取不同体积的生物素标准储备液（1.3），用[/color]纯水[color=black]分别配置不同浓度的[/color]上机标准溶液，以各自定量离子的峰面积（或与内标峰面积比值）为Y对应质量浓度X（[color=black]m[/color]g/L）做标准曲线，得到的线性方程和相关系数见表2；以10倍信噪比（S/N）计算得到生物素的定量下限，结果见表2。表2 生物素标准溶液的线性方程、相关系数和定量下限（LOQ）[/size][table][tr][td][align=center][size=16px]分析物[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]线性范围/(ng/mL)[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]线性方程[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]R[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]LOQ/(ug/100g)[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][size=16px]生物素[sub] [/sub][/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]0.2~50[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]Y=3078.1X-106.32[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]0.9993[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]0.5[/size][/align][/td][/tr][/table][size=16px][color=black]2.3回收率和精密度[/color][color=black]生物素在奶粉中天然存在[/color]，选取已知生物素含量的奶粉作为基质进行加标。具体添加水平为：[color=black]0.5，5，50[/color] ug/100g。[color=black]每个[/color]水平重复6次，[color=black]同时做该奶粉的本底实验。[/color]按照1.4前处理方法处理后上机检测，回收率计算结果（扣除空白后）见表3。结果表明，该方法生物素的平均回收率为87.2%~110%，相对标准偏差（RSD，n=6）为2.3%~5.2%，均满足实验要求。[/size][align=center][size=16px]表3 奶粉生物素的加标回收率和相对标准偏差（n=6）[/size][/align][table][tr][td][align=center][size=16px]分析物[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]添加水平(ug/100g)[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]回收率/%[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]相对标准偏差/%[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][size=16px]生物素[/size][/align][size=16px][sub] [/sub][/size][/td][td][align=center][size=16px]0.5[/size][/align][align=center][size=16px]5[/size][/align][align=center][size=16px]50[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]86.8[/size][/align][align=center][size=16px]93.2[/size][/align][align=center][size=16px]91.6[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][align=center][size=16px]4.6[/size][/align][align=center][size=16px]3.3[/size][/align][align=center][size=16px]2.1[/size][/align][size=16px][/size][/td][/tr][/table][size=16px][color=black]2.4实际样品分析[/color][color=black]为进一步验证该方法的准确性，采用本方法和《[/color]GB 5009.259-2016[color=black]》微生物法同时对北京普天同创生物科技有限公司的奶粉质控样品BQC1051147452生物素含量进行检测，结果见表4[/color]。由表4可知，UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法测定结果与国标方法的结果基本一致，无显著性差异，但前者所需时间更短，精密度更好。[/size][align=center][size=16px]表4 奶粉质控样品[color=black]BQC1051147452[/color]生物素的测定结果[/size][/align][table][tr][td][align=center][size=16px]检测方法[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]特性值区间(ug/100g)[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]测定平均值（n=6）[/size][/align][/td][td][align=center][size=16px]相对标准偏差/%（n=6）[/size][/align][/td][/tr][tr][td][size=16px]UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法微生物法[sub] [/sub][/size][/td][td][align=center][size=16px]15.6~22.4[/size][/align][align=center][size=16px]15.6~22.4[/size][/align][size=16px][/size][/td][td][size=16px]18.718.1[/size][/td][td][align=center][size=16px]2.5[/size][/align][size=16px] 4.6[/size][/td][/tr][/table][size=16px]3 结语本文建立了超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法（UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）测定奶粉中[color=black]生物素[/color]含量的分析方法。该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度，前处理步骤简单，分析速度快，特别适合大批量样品的检测。参考文献：[1] GB 5009.259-2016 食品安全国家标准 食品中生物素的测定.[2] 薛霞, 赵慧男, 魏莉莉, 等. 超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法测定蜂蜜中五种水溶性维生素的含量[J]. 食品与发酵工业. 2021,47(12) : 250-256.[3] 李佳兴, 周利, 金艳, 等. 超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法测定枸杞子中8种水溶性维生素[J]. 食品科技. 2018,43(11) : 336-341.[/size]

  • 生物素标记蛋白方式有哪些？Avi-Tag+化学标记方式介绍

    [font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-Tag[/font][font=宋体]生物素标记蛋白：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]重组蛋白融合一个额外的[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸序列，即[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]，通常连接至蛋白的[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]末端。 [/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]肽段被大肠杆菌生物素连接酶[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]所识别，[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]连接酶通过酶促反应将生物素连接到[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]序列内的单个赖氨酸残基。因此，[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签蛋白以特定位点的方式进行生物素化，从而实现标记均一。 这使固定在亲和素包被表面的蛋白方向具有一致性，并且由于[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签位于蛋白的末端，因此对蛋白活性的影响通常很小，有助于保持生物素化的蛋白与未标记的蛋白保持相同的特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素与链霉亲和素[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]亲和素（[/font][font=Calibri]SA[/font][font=宋体]）之间的强非共价相互作用，具有高灵敏度和高特异性。义翘神州开发了多种[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]生物素标记的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势：[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性，经[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BLI[/font][font=宋体]等验证[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 多种属，覆盖细胞治疗、抗体、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体等热门靶点[/font][/font][font=宋体]? 高批间一致性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]化学标记生物素蛋白：[/font][font=宋体][font=宋体]化学标记法，是将蛋白[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合，通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、[/font][font=Calibri]tag free[/font][font=宋体]等特点，是常用的生物学方法之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势：[/font][font=宋体]? 高信号强度，每个蛋白分子通常平均含有多个生物素，有助于对其检测。[/font][font=宋体]? 标记方法简单，检测灵敏度高。[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]等验证，批间一致性高[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记蛋白应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、用于生物素标记的三种天然产物分子探针的设计与合成研究[/font][/font][font=宋体]从中药中提取分离得到的天然产物具有结构多样、药理作用广泛的特点，常被用来作为先导化合物开发新药，因此需要对其具体作用机制进行研究。天然产物药理作用广泛对应着多靶点的特性，但其靶标蛋白的难以确定也阻碍了人们对其的进一步研究与开发。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]基于亲和性蛋白组学分析方法（[/font][font=Calibri]Affinity-based Protein Profiling,ABPP[/font][font=宋体]）是基于活性小分子与靶标蛋白之间的亲和作用，在活性小分子上引入报告基团，利用亲和层析技术可以将靶标蛋白进行分离的一种方法，其作为一种十分有效的工具被广泛应用于天然产物靶标蛋白的发现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选取三个从中药中提取分离得到的活性天然小分子，设计合成相应的小分子探针，旨在为它们靶标蛋白的发现以及作用机制的研究提供一个有效的工具，具体内容如下：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、对目前主要的用于天然小分子的靶标蛋白鉴定方法进行了介绍，且着重介绍了[/font][font=Calibri]ABPP[/font][font=宋体]方法及其在天然产物靶标蛋白鉴定的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、以薯蓣皂苷元和生物素为原料，经过酯化、酰胺化、取代、水解反应等步骤分别合成含有长臂亲脂性链和亲水性链的薯蓣皂苷元生物素标记探针[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8,[/font][font=宋体]并以[/font][font=Calibri]MTT[/font][font=宋体]法对其进行抗肿瘤活性评价。实验得到的探针分子、重要中间体用[/font][font=Calibri]MS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1H-NMR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]13C-NMR[/font][font=宋体]表征，确认所得化合物结构与目标化合物一致。细胞活性实验结果表明合成的探针分子[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]具有与薯蓣皂苷元相当的抗肿瘤活性，且对探针分子标记的靶标蛋白进行电泳分析，发现了三条薯蓣皂苷元可能特异性作用的蛋白条带，这些结果都为后续薯蓣皂苷元抗肿瘤靶标蛋白的发现奠定基础。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font]

  • 【金秋计划】青蒿素类衍生物可治疗多囊卵巢综合征及其机制

    [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一种普遍存在的生殖内分泌疾病，全球发病率约为10%-13%。其特征是高雄激素血症、排卵功能障碍、多囊卵巢形态，并且通常伴有代谢紊乱。雄激素升高是驱动PCOS表型特征的关键因素。尽管多囊卵巢综合征的患病率很高，但针对这种复杂综合征的药物干预仍面临巨大挑战。目前可用于PCOS的治疗方案有限，主要针对特定症状的管理。因此，迫切需要制定创新的治疗策略。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]青蒿素是植物来源的化合物，作为疗效稳定且副作用小的一线抗疟疾药物而闻名，但也被证明具有一些有益的代谢作用。复旦大学汤其群教授团队早期系统筛选了促进白色脂肪棕色化的小分子化合物，发现青蒿素类衍生物能够激活产热脂肪细胞来增强能量消耗和胰岛素敏感性的能力，从而防止饮食引起的肥胖和代谢紊乱（Cell Research，2016）。青蒿素在啮齿动物PCOS样模型和人类PCOS患者中的治疗潜力及机制尚不清楚。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]2024年6月14日，复旦大学附属中山医院汤其群教授团队在Science（IF=56.9）发表题为“Artemisinins ameliorate polycystic ovarian syndrome by mediating LONP1-CYP11A1 interaction”的文章，发现青蒿素类衍生物能够显著改善PCOS的疾病表型。机制上，青蒿素能够靶向线粒体蛋白酶LONP1，促进LONP1与其底物CYP11A1的结合，加速CYP11A1的降解，抑制卵巢雄激素的合成，降低PCOS患者的雄激素水平，改善月经周期及卵巢多囊样变。该研究证明青蒿素还可以缓解多种啮齿动物模型和人类患者中多囊卵巢综合征的内分泌表现，这表明了一种治疗这种内分泌疾病多个方面的潜在方法。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]1、在啮齿类动物模型中，蒿甲醚（ATM）对PCOS样表型有抑制作用[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了评估青蒿素对PCOS发展的影响，作者首先使用脱氢表雄酮（DHEA）建立PCOS样小鼠模型，并同时给药发现蒿甲醚（artemether，ATM，一种青蒿素），发现ATM可以消除DHEA处理小鼠血清中升高的睾酮，从而防止PCOS样特征，改善DHEA引起的发情周期中断，改善卵巢异常形态。在观察到预防效果的基础上，作者评估ATM的治疗效果。在建立DHEA诱导的PCOS样模型后，通过腹腔注射不同剂量的ATM处理小鼠，发现ATM降低血清睾酮，恢复正常的发情周期，抑制子宫水肿，并显著减少卵巢囊泡（图1）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]接下来，作者在大鼠模型中研究了ATM的抗PCOS作用，发现腹腔注射ATM足以使PCOS样大鼠的血清睾酮水平降至与对照大鼠相似的水平，并缓解被打乱的发情周期。卵巢组织学分析显示ATM逆转了DHEA处理大鼠的低排卵表型。在注射胰岛素和hCG（两者都是雄激素产生的强效诱导剂）建立的另一个PCOS样大鼠模型中，这一发现得到了进一步验证综上所述，在啮齿类动物模型中，ATM治疗改善了PCOS的主要特征，包括血清睾酮水平升高、发情周期不规则、多囊卵巢形态和低生育能力（图2）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]2、青蒿素抑制卵巢中的甾体生成和睾酮产生[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]ATM引起的睾酮急剧下降促使作者探索青蒿素在调节雄激素合成中的作用。发现在PCOS样模型中，无论是腹腔还是口服，ATM均未显示出对促卵泡激素（FSH）和黄体生成素（LH）的影响。作者猜测青蒿素通过靶向卵巢调节睾酮水平，发现ATM显著抑制卵巢间质细胞中睾酮的产生。同样，SM934，也是一种青蒿素类似物，显示出与ATM诱导的睾酮水平相当的抑制作用。除了降低睾酮，ATM和SM934还明显降低孕烯醇酮、孕酮和17a-OHP，这些都是卵巢甾体生成的中间体和睾酮的前体，这一观察结果被另一种青蒿素衍生物青蒿琥酯（ATS）进一步验证。这些数据强烈表明，青蒿素抑制卵巢膜间质细胞的类固醇生成过程和随后的雄激素合成（图3A-3I）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]3、青蒿素通过降低CYP11A1来限制睾酮的产生[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了揭示青蒿素诱导雄激素合成减少的细胞途径，作者对分离的卵巢间质细胞进行蛋白质组学分析，发现CYP11A1是ATM诱导下调最显著的蛋白，CYP11A1催化胆固醇向孕烯醇酮的转化，这是类固醇激素生物合成的第一步，ATM对CYP11A1的下调与前面观察到的青蒿素抑制雄激素合成相一致。作者接着在大鼠和小鼠卵巢间质细胞和PCOS样小鼠卵巢中验证了青蒿素剂量依赖性地下调CYP11A1蛋白，而不影响HSD3B2和CYP17A1。接下来，作者发现补充孕烯醇酮（CYP11A1催化反应的产物）或者过表达CYP11A1挽救了青蒿素处理细胞中下降的睾酮，而CYP11A1表达被破坏后青蒿素无法进一步降低睾酮的产生，表明上调和下调CYP11A1决定了睾酮的产生，青蒿素通过CYP11A1影响睾酮的产生（图3J-3O）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]4、青蒿素介导LONP1和CYP11A1之间的相互作用[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]作者接着探索青蒿素调节CYP11A1的机制。发现青蒿素诱导的蛋白水平降低，但Cyp11a1的mrna不受青蒿素的影响，表明青蒿素有转录后调控作用。随后，作者检测了CYP11A1的稳定性，发现ATM和SM934明显缩短了CYP11A1蛋白的半衰期。进一步研究表明，蛋白酶抑制剂MG132挽救了ATM和SM934诱导的CYP11A1下调，这共同表明青蒿素通过抑制其蛋白稳定性来降低CYP11A1水平（图4）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了确定导致青蒿素诱导的CYP11A1不稳定的介质，作者应用IP-MS来鉴定ATM或SM934治疗下CYP11A1的相互蛋白，确定了两个候选蛋白在ATM和SM934均存在，co-IP验证发现其中的LONP1蛋白（一种线粒体蛋白酶，在线粒体蛋白质质量控制中至关重要）为目标蛋白，通过ATM和SM934诱导，LONP1和CYP11A1之间的相互作用显著增强。此外，LONP1过表达显著下调CYP11A1，这些数据表明，LONP1而不是TFG可能参与调节CYP11A1蛋白水平。内源性co-IP进一步证实，ATM和SM934增强了LONP1和CYP11A1之间的结合亲和力。综上所述，这些数据强烈表明，青蒿素增强了CYP11A1-LONP1的关联，就像“分子胶”一样，是一类诱导或稳定蛋白质之间相互作用的小分子。接下来，通过分子对接预测了LONP1和CYP11A1的结合位点，蛋白突变验证了CYP11A1中F252-T259区域对于CYP11A1-LONP1相互作用至关重要（图4）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]5、LONP1促进CYP11A1降解，抑制睾酮合成[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]在确定了青蒿素增强了CYP11A1-LONP1的相互作用之后，作者试图研究LONP1在青蒿素诱导的CYP11A1降解中的作用。发现LONP1过表达降低了CYP11A1水平，MG132挽救了CYP11A1水平，MG132是一种蛋白酶抑制剂，也能够抑制LONP1。这些结果与上述数据一致，表明MG132可以恢复青蒿素引起的CYP11A1下降。此外， CDDO-Me（LONP1抑制剂）逆转了ATM引起的CYP11A1表达降低，敲低LONP1完全逆转了ATM诱导的CYP11A1下降。而催化失活的LONP1 (LONP1-S844A) 没有像WT LONP1那样降低CYP11A1的表达或缩短CYP11A1蛋白的半衰期，说明LONP1通过其蛋白酶活性降低了CYP11A1（图5）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了证实LONP1是否直接介导了CYP11A1的下调，作者使用纯化的CYP11A1和LONP1蛋白进行了体外蛋白酶测定，发现ATM促进了LONP1催化的CYP11A1降解，而在缺乏LONP1或ATP的情况下，ATM对CYP11A1没有影响。此外，CYP11A1 (DF252-T259)的突变体形式未能与LONP1结合，对青蒿素诱导的下调表现出抗性。这些观察结果共同支持了LONP1在介导青蒿素诱导的CYP11A1下调中不可或缺的作用。接下来，作者评估了LONP1对卵巢雄激素合成的影响，发现LONP1的过表达下调了CYP11A1蛋白，进而降低孕烯醇酮、孕酮、17a-OHP和睾酮水平。通过腹腔注射AAV-LONP1在小鼠卵巢中过表达LONP1。结果显示，LONP1降低了CYP11A1同时抑制了血清睾酮。这些数据共同表明，LONP1的过表达复制了青蒿素降低雄激素的作用（图5）。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]6、LONP1是青蒿素的直接靶点[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]然后，作者试图确定青蒿素是否直接靶向LONP1或CYP11A1。通过生物素标记的青蒿素进行Pulldown实验证实了bio-ATS有效地降低了CYP11A1，进一步发现bio-ATS对LONP1蛋白而不是CYP11A1具有结合亲和力。游离ATS、ATM或SM934的竞争以及实验热稳定性实验同样表明LONP1，而不是CYP11A1，是青蒿素的直接靶点。进一步分子对接确定了青蒿素与靶点的结合模式。SPR和蛋白突变实验证实青蒿素对CYP11A1水平的抑制作用很大程度上依赖于其与LONP1蛋白水解结构域的结合。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]7、双氢青蒿素治疗多囊卵巢综合征的疗效观察[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]最后，作者进行了一项试点临床研究，以验证青蒿素治疗多囊卵巢综合征患者的疗效。19例PCOS患者口服双氢青蒿素治疗12周，发现双氢青蒿素治疗显著降低了PCOS患者的血清睾酮。血清AMH水平与生长卵泡的数量密切相关，因此在PCOS患者中通常升高，而双氢青蒿素治疗显著降低了血清AMH。与这一结果一致的是，超声检查发现，双氢青蒿素治疗后，窦腔卵泡计数明显减少。63.16%的PCOS患者恢复了正常的月经周期。结果表明双氢青蒿素可有效改善PCOS患者高雄激素血症，改善多囊卵巢形态，促进月经正常。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]总结[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]在这项研究中，作者将青蒿素确定为抗PCOS药物研究结果证明了青蒿素衍生物在缓解啮齿动物模型和人类患者的PCOS症状方面的功效，通过抑制卵巢雄激素合成来抑制高雄激素血症。青蒿素促进CYP11A1蛋白降解以阻止雄激素过量产生。从机制上讲，青蒿素直接靶向LONP1，增强了LONP1-CYP11A1相互作用，并促进了LONP1催化的CYP11A1降解。LONP1 的过表达复制了青蒿素的降雄激素作用。研究数据表明，青蒿素的应用是治疗多囊卵巢综合征的一种有前途的方法，并强调了LONP1-CYP11A1相互作用在控制高雄激素血症和多囊卵巢综合征发生方面的关键作用。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size]

  • 请教有没有大神用试剂盒方法检测乳粉中的生物素？？求救~~~

    我们实验室用VitaFast的试剂盒检测乳粉中的生物素，之前一直以来做出来的数据还不错，但最近一段时间总是黑暗孵育24h后每个孔都混浊了，就连空白对照也混浊了，我们分析了原因，考虑是不是培养基污染了？还是加样的时候污染了？我们重新配制了新的培养基，重复做了几次，总是出现偶尔正常，偶尔被污染的状况，但是B12和叶酸却没有这样的事情发生，我们也问过试剂公司，他们说其它购买的使用者没有出现像我们一样的情况~~~~~ 我们也重新拿了新购买未开封的试剂盒重复去检测了，所有的枪头也是用原装的，滤膜是用0.22um的。但还是偶尔出现全板被污染的情况，偶尔又是正常的，实在搞不懂是因为什么原因？希望大家有经验的帮帮忙，我们要怎么做才能找到被污染的原因，排除污染源，看看是哪个环节出了问题，谢谢大家！

  • 同位素标记物、同位素技术_生物素标记肽

    同位素标记物、同位素技术_生物素标记肽

    随着多肽在生物医药领域越来越广泛和深入的应用，标记和修饰性的多肽种类的需求越来越多，质量需求也越来越高。稳定同位素标记就是其中典型的一种。稳定同位素标记示踪，可以实现肽类代谢途径研究，能够随时追踪含有同位素标记的多肽在体内或体外位置及数量的变化情况。同位素标记具有高灵敏度、定位简单、定量准确等优点，使得同位素修饰在医学及生物化学领域得到越来越广泛的关注。目前我们公司合成的同位素标记多肽主要为C13，N15两种同位素标记的多肽，通过直接在肽链中引入同位素标记的氨基酸达到有效标记整条肽链的目的，常用的同位素标记的氨基酸有Tyr，Thr,Lys,Arg,Glu等。同位素标记的多肽与普通肽的区别在于其结构中某一个或几个氨基酸中的C被C13取代或者N被N15取代。[align=center][img=,422,228]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/01/201901151433525331_7755_3531468_3.jpg!w422x228.jpg[/img][/align]专业的团队，一流的合成纯化技术，严谨的工作态度，严格的质量要求，是我们能够满足客户对同位素标记多肽的不同纯度要求的重要保障。与此同时，同位素标记多肽的原料（同位素标记的氨基酸）价格昂贵，使得我们合成成本高，这就直接导致了这种多肽价格的高昂，秉着客户至上，竭力满足客户需求的经营理念，我们国肽生物提供微克，毫克到千克级别的质量服务。成功案例：序列WVQTLSEQVQEELLSSQVTQELHPLC分析：[align=center][img=,562,236]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/01/201901151434210520_3873_3531468_3.jpg!w562x236.jpg[/img][/align]MS分析：[align=center][img=,562,256]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/01/201901151434419961_6047_3531468_3.jpg!w562x256.jpg[/img][/align]合肥国肽生物官网：http://www.bankpeptide.com[img=,690,163]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/01/201901151435146731_1710_3531468_3.jpg!w690x163.jpg[/img]

  • 63.4 高效液相色谱法测定尿感宁胶囊中秦皮乙素含量

    63.4 高效液相色谱法测定尿感宁胶囊中秦皮乙素含量

    作者：李兵; 张志勇;（贵州省贵阳市第一人民医院药剂科; 贵州省药品检验所;）摘要：目的建立测定尿感宁胶囊中秦皮乙素含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(15∶85),波长350nm,流速1mL/min。结果线性范围为0.0408～0.3672μg,回归方程为Y=3752573X-5745.6,r=0.9999,平均回收率为99.68%,RSD=1.01%(n=6)。结论该方法专属性强、精密度高、重现性好,可作为尿感宁胶囊的质量控制。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271057_386352_1606903_3.jpg

  • 尿素的应用领域介绍

    医学领域皮肤科以含有尿素的某些药剂来提高皮肤的湿度。非手术摘除的指甲使用的封闭敷料中，含有40%的尿素。测试幽门螺杆菌存在的碳-14-呼气试验，使用了含有碳14或碳13标记的尿素。因为幽门螺杆菌的尿素酶使用尿素来制造氨，以提高其周边胃里的pH值。同样原理也可测试生活在动物胃中的类似细菌。农业领域尿素是一种高浓度氮肥，属中性速效肥料，也可用于生产多种复合肥料。在土壤中不残留任何有害物质，长期施用没有不良影响。畜牧业可用作反刍动物的饲料。 但在造粒中温度过高会产生少量缩二脲，又称双缩脲，对作物有抑制作用。我国规定肥料用尿素缩二脲含量应小于0.5%。缩二脲含量超过1%时，不能做种肥，苗肥和叶面肥，其他施用期的尿素含量也不宜过多或过于集中。尿素是有机态氮肥，经过土壤中的脲酶作用，水解成碳酸铵或碳酸氢铵后，才能被作物吸收利用。因此，尿素要在作物的需肥期前4～8天施用。尿素适用于作基肥和追肥，有时也用作种肥。尿素在转化前是分子态的，不能被土壤吸附，应防止随水流失；转化后形成的氨也易挥发，所以尿素也要深施覆土。（土壤转化施入土壤中一小部分以分子态溶于土壤溶液中，通过氢键作用被土壤吸附，其他大部分在脲酶的作用下水解成碳酸铵，进而生成碳酸和氢氧化铵。然后铵根离子能被植物吸收和土壤胶体吸附，碳酸氢根离子也能被植物吸收，因此尿素施入土壤后不残留任何有害成分。另外尿素中含有的缩二脲也能在脲酶的作用下分解成氨和碳酸，尿素在土壤中转化受土壤PH值、温度和水分的影响，在土壤呈中性反应，水分适当时土壤温度越高，转化越快；当土壤温度10℃时尿素完全转化成铵态氮需7-10天，当20℃需4-5天，当30℃需2-3天即可。尿素水解后生成铵态氮，表施会引起氨的挥发，尤其是碱性或碱性土壤上更为严重，因此在施用尿素时应深施覆土，水田要深施到还原层。）尿素适用于一切作物和所有土壤，可用作基肥和追肥，旱水田均能施用。由于尿素在土壤中转化可积累大量的铵离子，会导致pH升高2-3个单位，再加上尿素本身含有一定数量的缩二脲，其浓度在500ppm时，便会对作物幼根和幼芽起抑制作用，因此尿素不宜用作种肥。尿素（氮肥）能促进细胞的分裂和生长，使枝叶长得繁茂。根据《国家发展改革委关于缓释肥料等执行农用化肥铁路优惠运价政策的通知》（发改价格〔2021〕1285号），尿素被列入《实行铁路优惠运价的农用化肥品种目录》，实施铁路货运优惠 。调节花量为了克服苹果地大小年，遇小年时，于花后5-6周（苹果花芽分化的临界期，新梢生长缓慢或停止，叶片含氮量呈下降趋势）叶面喷施0.5%尿素水溶液，连喷2次，可以提高叶片含氮量，加快新梢生长抑制花芽分化，使大年的花量适宜。疏花疏果桃树的花器对尿素较为敏感但嘎面反应较迟钝，因此，国外用尿素对桃和油桃进行了疏花疏果试验，结果表明，桃和油桃的疏花疏果，需要较大浓度（7.4%）才能显示出良好效果，最适合浓度为8%-12%，喷后1-2周内，即能达到疏花疏果的目的。但是，在不同的土地条件下，不同时期及不同品种的反应尚需进一步试验。水稻制种在杂交稻制种技术中，为了提高父母本的异交率，以增加杂交稻制种量或不育系繁种量，一般都采用赤毒素喷施母本以减轻母本包颈程度或使之完全抽出；或喷施父母本，调节二者的生长，使其花期同步。由于赤霉素价格较贵，用其制种成本高。人们用尿素代替赤霉素进行实验，在孕穗盛期、始穗期（20%抽穗）使用1.5%-2%尿素，其繁种效果与赤霉素类似，且不会增加株高。防治虫害用尿素、洗衣粉、清水4:1:400份，搅拌混匀后，可防止果树、蔬菜、棉花上的蚜虫、红蜘蛛、菜青虫等害虫，杀虫效果达90%以上。尿素铁肥尿素以络合物的形式，与Fe2+形成螯合铁。这种有机铁肥造价低，防治缺铁失绿效果很好。此外叶面喷0.3%硫酸亚铁时加入0.3%尿素，防治失绿效果比单喷0.3%硫酸亚铁好。因为尿素具有优异的溶解染料性能，又有温和的还原性/抗氧化性及极为优异的吸湿性，所以在纺织工业上是优良的染料溶剂/吸湿剂/粘胶纤维膨化剂，树脂整理剂，有广泛的用途。尿素在纺织工业上与其它吸湿剂的吸湿性比较：与自身的重量比。饲料添加剂：人类粮食资源与蛋白质的短缺，也造成饲料工业一大难题。业者积极寻找蛋白质的新来源，并扩及蛋白质以外的氮来源，例如含氮量高的尿素。1897年，Waesk 等人提出反刍动物能转化非蛋白质氮为菌体蛋白质的想法。1949年，C. J. Watson 等人喂食绵羊含有N15标记的尿素胶囊，4天后在绵羊血液、肝脏、肾脏中检验出含有N15的蛋白质。这证实了反刍动物可以利用非蛋白质氮。同年 J. K. Looli 等人以尿素当作惟一氮源喂食绵羊，发现绵羊能够正氮平衡，表明绵羊瘤胃里的微生物能利用尿素合成其生长所需的10种必需氨基酸。自此，尿素及尿素化合物成为反刍动物的饲料添加剂了。工业领域它可以大量作为三聚氰胺、脲醛树脂、水合肼、四环素、苯巴比妥、咖啡因、还原棕BR、酞青蓝B、酞青蓝Bx、味精等多种产品的生产原料。对于钢铁、不锈钢化学抛光有增光作用，在金属酸洗中用作缓蚀剂，也用于钯活化液的配制。工业上还用作制造脲醛树酯、聚氨酯、三聚氰胺-甲醛树脂的原料,尿素加热至200℃时生成固态的三聚氯酸(即氰尿酸)。三聚氰酸的衍生物三氯异氰尿酸、二氯异氰酸钠、异氰尿酸三(2-羟乙酯)、异氰尿酸三(烯丙基)酯、三(3,5-二叔丁基-4-羟基苄基)异氰酸酯、异三聚氰酸三缩水甘油醚、氰尿酸三聚氰胺络合物等有许多重要应用。前两者是新型高档消毒、漂白剂，三氯异氰尿酸全世界总所产能力超过8万t。用于燃烧废气脱硝的选择性还原剂，以及车用尿素，其组成成分为32.5%的高纯尿素和67.5%的去离子水。选择性催化还原(SCR)排气后处理是通过尿素在燃烧排气中热解反应产生的氨，来与汽车尾气中的氮氧化物（NOx）进行选择性催化还原反应的一种技术，是降低燃烧锅炉和柴油发动机等燃烧废气中的有害物质NOx的关键而主流的技术。SCR系统是满足现代汽车严格排放法规例如欧Ⅳ/欧V/ 欧VI（国IV/国V/国VI）法规的必备系统。车用尿素在欧洲叫AdBlue （添蓝液），在美国叫DEF（柴油机排气处理液）。特殊塑料的原料，尤其尿素甲醛树脂；某些胶类的原料；肥料和饲料的成分；取代防冻的盐撒在街道，优点是不使金属腐蚀；加强香烟的气味；赋予工业生产的椒盐卷饼棕色；某些洗发剂、清洁剂的成分；急救用制冷包的成分，因为尿素与水的反应会吸热；车用尿素处理柴油机、发动机、热力发电厂的废气，尤其可降低其氧化氮；催雨剂的成分〈配合盐〉；过去用来分离石蜡，因为尿素能形成包合物；耐火材料；环保引擎燃料的成分；美白牙齿产品的成分；为化学肥料；染色和印刷时的重要辅助剂。在化妆品中的应用尿素是一种很好用的保湿成分，它就存在于肌肤的角质层当中，属于肌肤天然保湿因子NMF的主要成分。对肌肤来说，尿素具有保湿以及柔软角质的功效，所以也能够防止角质层阻塞毛细孔，藉此改善粉刺的问题。用于面膜、护肤水、膏霜、护手霜等产品中保湿成份的添加。添加比例为3-5%。实验室应用尿素能非常有效地使蛋白质变性，尤其能非常有效地破坏非共价键结合的蛋白质。这特点可以提高某些蛋白质的可溶性，其浓度可达10摩尔/体积。尿素也可用来制造硝酸尿素

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