酪氨酸脱羧酶

本标准规定了a-乙酰乳酸脱羧酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。本标准适用于符合GB 2760要求的用语啤酒生产的a-乙酰乳酸脱羧酶制剂 。

[size=3][b]酪氨酸溶解方法[/b][/size]我要用酪氨酸加入到植物组织培养基中，培养基pH不宜太小，约为6左右，请问怎么溶解酪氨酸？谢谢

多巴胺由酪氨酸合成，豆类、深海鱼类、奶制品和坚果富含酪氨酸，可以适当增加摄入；新鲜蔬果，尤其是深绿色蔬菜，也有助合成多巴胺。想要快乐，可常吃这些食物。

【中文名称】酪氨酸；β-（对羟苯基）-α-氨基丙酸；α-氨基对羟基苯基丙酸；2-氨基-3-（4-羟基苯基）丙酸T【英文名称】Tyrosine【结构或分子式】 file:///C:/Users/h/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.gif【相对分子量或原子量】181.20【密度】1.456(l)【熔点（℃）】l:342～344（分解）；d:310～314(分解)；dl:340(分解)【性状】 l-体从水中结晶出来者，无色至白色丝光针状结晶或结晶性粉末；d-体从水中结晶者为无色晶体；dl-体从水中结晶者为有光泽的针状晶体。【用途】 l-体：医药用作甲状腺功能亢进；食品添加剂。【制备或来源】 （1）由含蛋白质的物质（废丝、酪蛋白和玉米等）水解液中提取；（2）以葡萄糖为原料，经短杆菌出发诱导的l-酪氨酸生产菌发酵而得；（3）以苯酚、丙酮酸、氨为原料，利用β-酪氨酸酶催化制取。【其他】 比旋光度：l-体：-10.6°(c=4.1mol/LHCl,25℃);d-体：+10.3℃(c=4.1mol/LHCl)。与糖类共热可产生氨基羰基间的反应，而产生一种特殊的香料。非必须氨基酸。

现在想进一针酪氨酸，但是不溶于水，需要用盐酸溶解，请问进质谱怎么解决溶解性问题

文/陈萌（华测检测）[b]引言[/b] 近年来，我国食品安全问题受到高度重视，三聚氰胺、地沟油、苏丹红鸭蛋等热点话题，在媒体的频繁曝光下，已人尽皆知。但对于食品中生物胺中毒的问题，则较少受到公众的关注，事实上，由生物胺导致的食物中毒事件时有发生。如2013年深圳市一职工食堂疑因进食不新鲜的鲐鱼引起食物中毒；2010年张家港市某公司员工因食用不洁青占鱼导致集体食物中毒等。调查结果均证实中毒不是由致病菌引起，而是由变质鱼肉中所含的高含量组胺所致。食品中除了含有组胺以外，还常含有色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺等，这类物质统称为生物胺。生物胺作为食品中自发产生的一类化合物，对人体具有特殊的双面作用，少则有益，多则有害，因此 有必要对食品中的生物胺水平进行监测并加以控制，以减少其带来的健康风险。[b]1生物胺概述[/b] 生物胺是一类具有生物活性、含氨基的低分子质量有机化合物的总称，广泛存在于富含氨基酸、蛋白质的肉制品、水产品和发酵制品中，如鱼类、肉类、干酪、酒类、发酵香肠、调味品等。根据结构式可将生物胺分成3类：脂肪族——腐胺、尸胺、精胺、亚精胺等；芳香族——酪胺、苯乙胺、章鱼胺等；杂环族——组胺、色胺等。 食品中的生物胺主要是游离氨基酸在微生物产生的氨基酸脱羧酶的作用下脱去羧基形成的产物，也有部分生物胺是通过醛的胺化作用形成的。因此食品中蛋白的氨基酸组成以及存在微生物的种类对食品中生物胺的组分和含量有重要影响。发酵食品更容易污染具有高活性氨基酸脱羧酶的微生物，因此高浓度的生物胺往往出现在发酵食品中。部分重要生物胺的前体物质主要有：组氨酸→组胺酪氨酸→酪胺→章鱼胺色氨酸→色胺赖氨酸→尸胺精胺酸→精胺、亚精胺鸟氨酸→腐胺[b]2生物胺的生理作用与毒性[/b] 生物胺是生物体内正常的活性成分，对维持正常的内脏功能和免疫系统的代谢活性是必不可少的，在生物活性细胞中有许多重要作用，对于神经活性、肠道系统免疫活性、生长和代谢都有着促进和增强作用。生物胺的这些生物功能建立在DNA、RNA、蛋白质以及膜成分等多种分子之间静电反应及相互结合的基础上，因此体内生物胺的数量至关重要。 适量的生物胺有利于人体的健康，但是过量的生物胺会使人体中毒，引起头疼、血压变化、呼吸紊乱、心悸、呕吐等严重生理反应。组胺是生物胺中毒性最强的，过量的组胺会导致头疼、消化障碍及血压异常，甚至会引起神经性毒性；酪胺的毒性次之，过量也会引起头痛和高血压等反应，并且是动物体内的主要致突变前体物质；尸胺和腐胺的自身毒性较小，但是能抑制组胺和酪胺相关代谢酶的活性，使得组胺和酪胺的数量增加，从而加重人体的不适症状。另外，腐胺、尸胺、精胺和亚精胺还能与亚硝酸盐反应产生致癌物质亚硝基胺。青皮红肉的海鱼若存放不当，极易产生大量的组胺，对人体健康构成较大风险。 尽管早已发现过量的生物胺会引起人体中毒，但由于生物胺种类复杂，毒性不一，且不同的生物胺之间还可以相互转化，在人体内有复杂的生物胺代谢途径，不同人群对生物胺的耐受剂量也不同，因此难以确定一个标准量来衡量生物胺的毒性。对生物胺较为敏感的体质人群，在膳食中应当注意饮食的合理性，避免摄入过多的生物胺引起食物中毒。[b]3食品中生物胺的限量规定[/b] 由于生物胺的多样性和对人体作用的复杂性，国际上还没有较为全面的生物胺膳食摄入评估的数据，目前多数国家只对食品中的组胺做了限量规定。其中美国最为严苛，规定水产品中组胺含量不超过50 mg/kg，澳大利亚为100 mg/kg。欧盟规定食品中的组胺含量不超过200 mg/kg，另外还规定了食品中酪胺的含量不得超过100～800 mg/kg。乙醇会增强生物胺的毒性，因此酒类产品中生物胺限量标准比普通食品严格的多，欧洲部分国家规定葡萄酒中的组胺含量不高于10 mg/L，德国最为严格不得高于2 mg/L。我国仅对鱼类中的组胺含量做了规定，详见表1。[align=center]表1 我国关于食品中组胺的限量规定[/align] [table=548][tr][td] [align=center]标准[/align] [/td][td] [align=center]组胺 (mg/100g)[/align] [/td][td] [align=center]指标[/align] [/td][/tr][tr][td=1,3] GB 2733-2015《食品安全国家标准 鲜、冻动物性水产品》[/td][td]高组胺鱼类[/td][td]≤40[/td][/tr][tr][td]其他海水鱼类[/td][td]≤20[/td][/tr][tr][td=2,1] 不适用于活体水产品。高组胺鱼类：指鲐鱼、鲹鱼、竹荚鱼、鲭鱼、金枪鱼、秋刀鱼、马鲛鱼、青占鱼、沙丁鱼等青皮红肉海水鱼。[/td][/tr][tr][td=1,2] NY 5073-2006《无公害食品 水产品中有毒有害物质限量》[/td][td]鲐鲹鱼类[/td][td]≤100[/td][/tr][tr][td]其他红肉鱼类[/td][td]≤30[/td][/tr][/table][b]4生物胺的检测分析[/b] 生物胺本身为小分子物质，且大部分在可见和紫外光波长范围内无明显吸收，也没有荧光成分，因此在检测前需要进行处理使其衍生化后再用仪器分析。生物胺检测技术的研究在国内外已经开展多年，目前生物胺的检测方法极其多样化，灵敏度、精密度也各不相同。我国出台了一系列生物胺的检测标准，大多都采用液相色谱分析法，详见表2。[align=center]表2 我国关于生物胺的检测标准[/align] [table=553][tr][td] [align=center]标准号[/align] [/td][td] [align=center]标准名称[/align] [/td][td] [align=center]适用范围[/align] [/td][td] [align=center]检测项目[/align] [/td][td] [align=center]说明[/align] [/td][/tr][tr][td]SN/T2209-2008[/td][td]进出口水产品中有毒生物胺的检测方法 高效液相色谱法[/td][td]水产品（虾肉、鱼肉、贝肉）[/td][td]苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺和亚精胺[/td][td=1,4] 于2017-6-23被GB 5009.208-2016 《食品安全国家标准 食品中生物胺的测定》代替[/td][/tr][tr][td]GB/T20768-2006[/td][td]鱼和虾中有毒生物胺的测定 液相色谱-紫外检测法[/td][td]鱼和虾[/td][td]苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺和亚精胺[/td][/tr][tr][td]GB/T5009.45-2003[/td][td]水产品卫生标准的分析方法（第4.4条 组胺）[/td][td]黄鱼、带鱼、鲐鱼、鲚鱼、墨鱼（乌贼）、青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、蓝圆鲹（池鱼）、鲱鱼、湟鱼[/td][td]组胺[/td][/tr][tr][td]GB/T5009.208-2008[/td][td]食品中生物胺含量的测定[/td][td]酒类（葡萄酒、啤酒、黄酒等）、调味品（醋、酱油等）、水产品（鱼类及其制品、虾类及其制品）、肉类及乳制品[/td][td]色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺[/td][/tr][tr][td]GB/T21970-2008[/td][td]水质 组胺等五种生物胺的测定 高效液相色谱法[/td][td]水（生物胺含量在2.0mg/L～40.0mg/L之间）[/td][td]腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺[/td][td] [/td][/tr][tr][td]DB22/T1833-2013[/td][td]海水鱼类中组胺的测定 液相色谱-质谱/质谱法[/td][td]/[/td][td]组胺[/td][td] [/td][/tr][tr][td]GB/T23884-2009[/td][td]动物源性饲料中生物胺的测定 高效液相色谱法[/td][td]动物源性饲料鱼粉和肉骨粉[/td][td]组胺、腐胺、尸胺、酪胺、精胺和亚精胺的测定[/td][td]此标准适用于饲料中生物胺的检测，不适用于食品[/td][/tr][/table] 目前食品中生物胺的检测通用的方法是GB/T 5009.208-2008《食品中生物胺含量的测定》，新出台的标准GB 5009.208-2016《食品安全国家标准食品中生物胺的测定》整合了GB/T 5009.208-2008、SN/T 2209-2008、GB/T 20768-2006、GB/T 5009.45-2003这四个标准，于2017年6月23日正式实施。GB 5009.208-2016中覆盖了色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺共9种生物胺的检测，包括液相色谱法（HPLC）和分光光度法两种检测方法，详见表3。[align=center]表3 标准GB5009.208-2016中两种检测方法的比对[/align] [table=553][tr][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]液相色谱法[/align] [/td][td] [align=center]分光光度法[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]适用范围[/align] [/td][td]酒类（葡萄酒、啤酒、黄酒等）、调味品（醋和酱油）、水产品（鱼类及其制品、虾类及其制品）、肉类[/td][td]水产品（鱼类及其制品、虾类及其制品）[/td][/tr][tr][td] [align=center]检测项目[/align] [/td][td]色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺[/td][td]组胺[/td][/tr][tr][td] [align=center]使用仪器[/align] [/td][td]高效液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器。[/td][td]分光光度计[/td][/tr][tr][td] [align=center]原理[/align] [/td][td]水产品（鱼类及其制品、虾类及其制品）、肉类：试样用5%三氯乙酸提取，正已烷去除脂肪，三氯甲烷-正丁醇（1+1）液液萃取净化后，丹磺酰氯衍生，C18色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器检测，内标法定量。酒类（葡萄酒、啤酒、黄酒等）、调味品（醋和酱油）：试样用丹磺酰氯衍生，C18色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器检测，内标法定量。[/td][td]以三氯乙酸为提取溶液，振摇提取，经正戊醇萃取净化，组胺与偶氮试剂发生显色反应后，分光光度计检测，外标法定量。[/td][/tr][tr][td] [align=center]检出限[/align] [/td][td]酒类及醋：β-苯乙胺2mg/L、腐胺2mg/L、尸胺2mg/L、组胺2mg/L、酪胺2mg/L、章鱼胺5mg/L、 色胺5mg/L、亚精胺5mg/L、精胺5mg/L。水产品及肉类：均为20mg/kg。[/td][td]/[/td][/tr][tr][td] [align=center]定量限[/align] [/td][td]酒类及醋：β-苯乙胺5mg/L、腐胺5mg/L、尸胺5mg/L、组胺5mg/L、酪胺5mg/L、章鱼胺10mg/L、 色胺10mg/L、亚精胺10mg/L、精胺10mg/L。水产品及肉类：均为50mg/kg。[/td][td]组胺50mg/kg[/td][/tr][tr][td] [align=center]优点[/align] [/td][td]适用食品范围广，可同时检测9种生物胺，重现性好，灵敏度高，可做到较低的检出限。[/td][td]前处理过程简单，仪器检测快速，耗时短。[/td][/tr][tr][td] [align=center]缺点[/align] [/td][td]前处理过程复杂，仪器出峰需要较长的时间，整个试验过程耗时长，成本较高。[/td][td]只适用于水产品中组胺的检测，适用范围狭窄，灵敏度不高。[/td][/tr][/table][b]5不同食品中生物胺的特点[/b] 游离氨基酸及微生物种类对食品中生物胺起着决定性作用，以鱼类为代表的水产品及其制品是生物胺含量最高的一类食品，尤其是海产鲭科鱼类，如金枪鱼(吞拿鱼)、鲭鱼、沙丁鱼、大马哈鱼等，其含量可高达15 g/kg。水产品中生物胺种类和数量除食品本身因素外，还极易受保藏条件影响。腐败变质的金枪鱼中组胺和腐胺的含量较高，有学者将以组胺、腐胺为代表的特征生物胺总体指标，作为判断金枪鱼腐败程度的质量指标。新鲜或经过加工的肉类产品，经微生物代谢可产生多种生物胺，其中尸胺被认为可监控牛肉和鸡肉鲜度的指标。发酵肉类中的生物胺则由发酵菌种和原料中微生物产生的残余脱羧酶活性决定。纯乳中的生物胺含量很低，但乳制品中较高。干酪是组胺含量仅次于鱼类的食品，这主要是由于制作过程中酪蛋白催化降解，生成的大量游离氨基酸经过脱羧酶的作用形成胺类所致。葡萄酒中的生物胺是由乳酸菌在发酵过程中对氨基酸脱羧产生的。啤酒中生物胺的种类和含量与原料质量、酿造工艺以及酿造和贮藏过程中受微生物污染的程度相关。对水果来说，即使是同种水果不同个体所含生物胺种类和含量均不同，难以准确分析。新鲜蔬菜（白菜、莴苣、蘑菇、豆类等）和发酵后的蔬菜（如泡菜）中都含有不同程度的生物胺。[b]6如何控制生物胺的水平[/b] 生物胺的形成需要有游离氨基酸和能产生氨基酸脱羧酶的微生物存在，可以通过控制食品中游离氨基酸的含量、抑制产氨基酸脱羧酶的微生物的生长、降低氨基酸脱羧酶的活性、增强生物胺的降解水平来控制食品中生物胺的水平。6.1控制食品中游离氨基酸含量 氨基酸是生物胺形成的原料，无氨基酸和蛋白质的食品中是不含有生物胺的，而游离氨基酸丰富的食品中生物胺含量往往也较高。如黄酒中含有丰富的氨基酸，因此其生物胺含量通常也比其他酒类高。在生产工艺上可以通过控制反应底物游离氨基酸来降低反应产物生物胺的数量，但氨基酸具有重要的食品价值，在食品风味、功能及营养价值方面起着重要作用。虽然降低氨基酸含量能减少生物胺的含量，但对食品业会产生不利影响，因此较少采用该方法来控制食品中生物胺的含量。6.2控制产氨基酸脱羧酶微生物的生长 产氨基酸脱羧酶微生物的参与是形成生物胺的前提条件，因此可以通过无氨基酸脱羧酶微生物发酵或者控制产氨基酸脱羧酶微生物的生长而降低食品中生物胺的含量，这也是目前控制生物胺含量最有效的方法之一。发酵食品采用优良的发酵菌株可有效降低生物胺含量，如香肠接种不产生物胺的肠膜明串珠菌51-5D进行发酵，葡萄酒接种一些优良的酒酒球菌菌株，均可有效降低生物胺的含量。对不同食品采用真空包装、低温贮存、调节pH值、高渗处理等，来控制微生物的生长，也能有效抑制食品中生物胺的产生。但由于在不同食品中产氨基酸脱羧酶微生物的差异，不同的处理措施产生的结果也大不相同。如真空冷冻贮藏肉制品对抑制生物胺效果明显，但真空包装在降低鱼制品中生物胺含量方面作用有限，冷冻贮藏则效果明显。另外，抑制微生物生长的其他方法，包括辐照、添加杀菌剂、静水压力等，均能降低食品中生物胺的含量，但这些方法的采用要视食品特性而异。6.3控制氨基酸脱羧酶的活性 氨基酸脱羧酶直接作用于氨基酸，并将其脱羧形成相应的生物胺。因此一切能影响氨基酸脱羧酶活性的因素均可以用来控制生物胺的含量。影响氨基酸脱羧酶活性的主要因素为pH值、温度及含盐度等，因此可以通过改变这些因素而控制生物胺的含量。在碱性和低温条件下产胺微生物繁殖较慢，氨基酸脱羧酶活性较弱，高盐环境也能抑制组氨酸脱羧酶活性，但由于pH值、含盐量等一般是食品本身的特性，改变这些特性将会影响食品的品质和感官特性，因此该方法控制生物胺含量的应用上并不是很多。6.4增强生物胺的降解水平 为减少生物胺在食品中的含量，除控制生物胺的合成因素外，还可以加强降解已经存在的生物胺，使生物胺处在一个较低水平。胺氧化酶分为单胺氧化酶和二胺氧化酶，它们能把生物胺降解生成乙醛、氨和过氧化氢。将具有胺氧化酶活性的菌株作为优势菌株强化发酵或者直接作为起始发酵剂应用于发酵食品，可以有效降低食品中生物胺的水平。但具有胺氧化酶活性的菌株并不适合用于发酵酒类产品，因为乙醇可以有效抑制胺氧化酶的活性，因此有必要寻找新型的、能降解发酵酒中生物胺的微生物。[b]7结束语[/b] 由于微生物无处不在，几乎所有含蛋白质或氨基酸的食品中都含有生物胺，尤其是水产品和发酵食品。适量的生物胺有利于人体的正常生理活动，但生物胺的过量积累又会导致人体产生不良反应，引发食物中毒，严重时甚至危及生命。与之相关的食品安全和人体健康的研究正引起越来越多的重视，对生物胺的毒理学、摄入风险、检测分析及控制技术等方面已有一些研究成果，但仍存在很多亟待解决和探索的问题。如对生物胺的毒理学和风险评估研究还不是很完善，目前的研究大多集中在组胺这一种生物胺，对其他的生物胺研究较少，缺乏科学的统计数据为生物胺的限量规定做支撑，很多食品的生物胺指标无法做评价。生物胺的检测分析手段以HPLC应用最为广泛，但该法需要对样品进行衍生化处理，操作繁琐复杂，且成本较高，因此有必要开发简便、快速、灵敏、低成本的生物胺检测方法，以满足食品工业生产需求。生物胺的控制技术得到了一定的发展，但一些控制手段如通过控制食品中游离氨基酸含量和控制氨基酸脱羧酶的活性在减少生物胺生成量的同时，也破坏了食品的营养品质，如何平衡食品的营养品质和安全性也是未来的一个研究领域。

赖氨酸脱羧酶培养基按国标要求一个试管里放0.4ml，这个怎么放啊？那得多小的试管才行啊

酪氨酸酶活力的测定，文献中报道的方法如下：[color=#DC143C]测定波长475nm的吸光值随时间增长直线，从直线斜率求得酶活力，消光系数按E=3700mol-1L.cm-1计算。[/color]但是我不明白通过吸光值对时间的直线斜率怎么求得酶活力？还有为什么要指定消光系数?计算过程中有什么作用？希望得到高人的指点阿问题补充：我测定时酪氨酸酶用的是mushroom tyrosinase,以酪氨酸为底物，475nm处测定吸光度是基于生成的dopachrome量。

关于液相色谱法检测食品中酪氨酸含量的具体方法有人知道吗？？ 具体步骤是什么啊？？

切开从超市购回的袋状冬笋，发现白色颗粒状物质。做红外分析，其极有可能是酪氨酸。请问，这是为什么

file:///tmp/moz-screenshot.png项目可疑菌1可疑菌2可疑菌3可疑菌4三糖铁培养基斜面紫红色黄色黄色黄色底层黄色黄色黄色黄色硫化氢不变黑不变黑不变黑不变黑产气产气产气产气产气吲哚无色无色无色无色赖氨酸脱羧酶对照组紫色黄色黄色黄色试验组紫色黄色黄色黄色尿素酶黄色黄色黄色黄色KCN对照组生长生长

我国“替尼类”（酪氨酸激酶抑制剂）抗肿瘤药的市场现状2012年1月FDA批准辉瑞公司小分子酪氨酸激酶抑制剂阿西替尼上市,开始了又一轮抗肿瘤靶向药物研究的新高潮。酪氨酸激酶在肿瘤的发生、发展过程中起着非常重要的作用,以酪氨酸激酶为靶点进行药物研发已成为国际上抗肿瘤药物研究的热点。酪氨酸酶抑制剂在临床上通过抑制肿瘤细胞的损伤修复、使细胞分裂阻滞在G1期、诱导和维持细胞凋亡、抗新生血管形成等多途径实现抗肿瘤效果;其抗癌谱广,已经成为治疗各种癌症疾病的一线用药。伊马替尼是基于癌细胞分子作用机理而开发的第一个抗癌新药,开创了肿瘤分子靶向治疗的时代。目前我国已有8个酪氨酸激酶抑制剂上市,包括伊马替尼、厄洛替尼、舒尼替尼等,此类药物的市场情况如下表,其中只有埃克替尼一个为国产产品,其它均为进口产品。表1:酪氨酸激酶抑制剂靶向抗肿瘤药在中国上市情况通用名 商品名 中国上市年份 在中国上市的首家公司 伊马替尼 格列卫 2002 诺华 吉非替尼 易瑞莎 2004 阿斯利康 厄洛替尼 特罗凯 2006 罗氏 索拉非尼 多吉美 2006 拜耳 舒尼替尼 索坦 2007 辉瑞 尼洛替尼 达希纳 2009 诺华 达沙替尼 施达赛 2011 百时美施贵宝 埃克替尼 凯美纳 2011 浙江贝达药业有限公司 靶向治疗,是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点(该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子,也可以是一个基因片段),来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞。由于靶向制剂可以提高药效、降低毒性,从而增强了药品的安全性、有效性和病人用药的顺应性,所以日益受到国内外医药界的广泛重视。从2011年各大公司年报数据了解到,诺华的伊马替尼销售额最大,超过46亿美元,罗氏的厄洛替尼和辉瑞的舒尼替尼销售额都超过10亿美元。表2:2011年各大药企的酪氨酸激酶抑制剂产品全球销售额通用名 企业 2011年销售额 伊马替尼 诺华 46.59亿美元 厄洛替尼 罗氏 12.51亿瑞士法郎 舒尼替尼 辉瑞 11.87亿美元 索拉非尼 拜耳 7.25亿欧元 达沙替尼 达沙替尼 8.03亿美元 尼洛替尼 诺华 7.16亿美元 吉非替尼 阿斯利康 5.54亿美元 拉帕替尼 葛兰素史克 2.31亿英镑

一、培养基明细： 名称 3%氯化钠碱性蛋白胨水（APW） 硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂（TCBS）3%氯化钠三糖铁琼脂（TSI） 嗜盐性试验用培养基 3%氯化钠甘露醇试验用培养基 3%氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基 3%氯化钠MR-VP培养基 我妻氏血琼脂基础 氧化酶试剂 革兰氏染色液 ONPG V-P试剂盒 弧菌显色培养基

沙门氏菌检验培养基和试剂 缓冲蛋白胨水（BPW ) 四硫磺酸钠煌绿（TTB ）增菌液 亚硒酸盐胱氨酸（SC ）增菌液 亚硫酸秘（Bs）琼脂 HE(Hoktoen Entoric）琼脂。 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 沙门氏菌属显色培养基 三糖铁（TsI）琼脂 蛋白陈水、靛基质试剂 尿素琼脂（pH7.2 )。 氰化钾（KCN ）培养基 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚份B-D半乳糖苷（ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O和H 诊断血清。 API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK GN 生化鉴定卡

专家您好，我想问一个也许很简单的问题—为什么蛋白质中酪氨酸和色氨酸荧光会有两个激发波长而一个发射波长？

[font=宋体]在以下的生化反应中应该怎样接种，有没有顺序，请大家指教呀！[/font][color=#000000][font=宋体]尿素酶琼脂[/font][/color][color=#000000][font=宋体 ]V-P[/font][font=宋体 ]半固体琼脂[/font][/color][font=宋体 ][color=#000000]赖氨酸脱羧酶培养基[/color][/font][font=宋体 ][color=#000000]氰化钾培养基(KCN)[/color][/font][font=宋体 ][color=#000000]卫矛醇半固体琼脂(D)[/color][/font][font=宋体 ][color=#000000]吲哚培养基(I)[/color][/font][font=宋体 ][font=Verdana ]丙二酸盐[/font][/font]

1、防止培养基成分挥发氰化钾实验：氰化钾是剧毒药物，使用时需加小心以免中毒。因此在做氰化钾实验时，需在实验管和对照管同时滴加液体石蜡，滴加目的其一是为防止氰化钾挥发，以免造成操作者中毒；第二是防止氰化钾挥发后，致使药物浓度降低，细菌生长，出现假阳性。2、创造厌氧环境（1）氨基酸脱羧酶实验：进行氨基酸脱羧酶实验时，在实验管和氨基酸对照管中滴加菌液后需分别向各管中滴加2-3滴液体石蜡，进行液封。原因如下：某些菌在特定氨基酸存在情况下，诱导产生相应氨基酸脱羧酶，使氨基酸脱羧，产生一种碱性物质—尸胺，而该物质在厌氧条件下可稳定存在，使得培养基环境pH升高，克服培养基本身的酸性环境以及葡萄糖代谢产生的酸，从而使培养基呈紫色；而对照管中不含氨基酸，菌株利用葡萄糖产酸，培养基环境pH下降，使得培养基变黄。滴加液体石蜡主要目的是创造厌氧环境，并防止酸挥发。（2）葡萄糖利用、酚红葡萄糖利用GB4789.14-2003中蜡样芽孢杆菌葡萄糖利用和SN0176-92中蜡样芽孢杆菌酚红葡萄糖利用实验中，为了测定厌氧环境下蜡样芽孢杆菌可以利用葡萄糖产酸，因此为创造厌氧环境，须在接菌后滴加液体石蜡进行液封。（3）O/F实验SN 0173-1992 中副溶血性弧菌检测，对葡萄糖的发酵型和氧化型的代谢作用，在实验时向其中一只管滴加石蜡隔绝氧气，另一只不滴加；发酵型菌株在两只管中均发酵产酸；而氧化型只在未滴加石蜡的管中发酵产酸，而在滴加石蜡的管中不生长或轻度生长，从而区分出发酵型和氧化型。

福氏志贺氏菌CICC 21534CICC编号21534中文名称福氏志贺氏菌拉丁名称Shigellaflexneri其它中心编号形态学 http://www.china-cicc.org/UploadFiles/Photo/201006/Original/7046ffbf740044029a5fbc73dc7f6a88.jpg菌体呈短杆状，革兰氏染色阴性，无芽孢。 http://www.china-cicc.org/UploadFiles/Photo/201006/Original/5f71f429a59141c38152126b6b2d4187.jpg http://www.china-cicc.org/UploadFiles/Photo/201006/Original/9b8e7524143e4c8c90e2a4abf79374d7.jpg在EMB培养基上菌落无色透明，圆形，湿润，液滴状、边缘整齐、有光泽、菌落较小在SS培养基上菌落无色透明，圆形，湿润，液滴状、边缘整齐、有光泽、菌落较大关键特性葡萄糖半固体黄色，无动力氧化酶－葡萄糖铵－5％乳糖发酵－西蒙氏柠檬酸盐－七叶苷分解－赖氨酸脱羧酶－靛基质－鸟氨酸脱羧酶－甘露醇＋尿素酶－棉子糖－氰化钾生长－甘油－水杨苷分解－志贺氏菌属四种多价血清凝集＋三糖铁分解葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖，不产生硫化氢三糖铁试验 http://www.china-cicc.org/UploadFiles/Photo/201006/Original/ba22ef9f76754970aeed6e44d15ce771.jpg空白对照大肠埃希氏菌肠炎沙门氏菌CICC 21534葡萄糖半固体试验 http://www.china-cicc.org/UploadFiles/Photo/201006/Original/65d659d760824583ad2963616bb03295.jpg空白对照大肠埃希氏菌CICC 21534应用“GB/T 4789.05-2003食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验”阳性标准对照株。备注

饮食对部分药物的吸收有影响，或存在相互作用，必须按照各种药物的不同特性，科学地服药，才能确保药物的疗效，同时可降低不良反应发生。 　　单胺氧化酶抑制剂 在服用呋喃唑酮（痢特灵）、异烟肼（雷米封）、苯乙肼等单胺氧化酶抑制剂时，不宜食用动物肝脏、腌鱼、香蕉、菠萝、巧克力等富含酪胺的食物。牛奶、酵母、啤酒和葡萄酒中也含有较多的酪胺。酪胺能促进体内去甲肾上腺素的释放，在正常情况下，酪胺经肠道吸收后被单胺氧化酶氧化和分解。服用单胺氧化酶抑制剂后，体内单胺氧化酶活性降低，不能分解食物中的酪胺，引起去甲肾上腺素的大量释放，导致血压升高，出现颜面潮红、头痛头晕、恶心呕吐、心跳加快、视力模糊等症状，甚至发生高血压危象和蛛网膜下腔出血。 　　利尿药 在服用安体舒通、氨苯喋啶时，如果同时食用较多的鱼类、番茄、土豆、紫菜和香蕉、葡萄干等富含钾离子的食物，就可导致高血钾症的发生，出现胃肠痉挛、腹泻腹胀等症状，严重的可致心律失常。 　　喹诺酮类和四环素类药物 如氧氟沙星、左氧氟沙星、四环素、土霉素、强力霉素等，应避免与富含钙、镁、铁的食物同服。因为钙、镁、铁等金属离子能与这些药物发生化学反应，生成络合物，降低溶解度，影响药物吸收，从而使疗效降低。 　　磺胺类和氨基糖苷类抗菌药 磺胺嘧啶、磺胺甲基异�唑等磺胺药尿中浓度高，在酸性尿中，其溶解度降低，可在泌尿道内析出结晶，引起肾损害，出现结晶尿、血尿、尿痛、尿少和尿闭等症状，严重者还可致肾功能衰竭。妥布霉素、庆大霉素等氨基糖苷类药物主要经肾排泄并在肾脏皮质部蓄积，对肾脏有一定的毒性作用。在应用这些药物时，如果食用较多的肉类等能酸化尿液的食物，可能加重对肾脏的损害。因此，应多饮水，同时服用碳酸氢钠，少食肉类，多食水果和新鲜蔬菜，以碱化尿液，避免药物的不良反应。 　　左旋多巴 抗震颤麻痹药，服药时不能食用鱼、肉、动物肝脏、豆类、卷心菜等富含维生素B6的食物。维生素B6是多巴脱羧酶的辅基，使左旋多巴加速代谢脱羧成为多巴胺，而多巴胺不易透过血脑屏障，降低左旋多巴的疗效。同时，在外周组织形成的大量多巴胺，可导致恶心、呕吐、食欲减退、头痛、头晕、体位性低血压，甚至可引起肾功能下降和心律失常。还应避免与富含钙、镁、铁的食物同服，因为钙、镁、铁等金属离子能与左旋多巴分子结构中的两个游离酚羟基形成络合物，影响左旋多巴在胃肠道的吸收，降低药物疗效。 　　抗过敏药 服药期间不能食用肉制品、奶酪等富含组氨酸的食物。因为组氨酸在体内会转化为组织胺，而抗过敏药抑制组织胺分解，因此造成人体内组织胺蓄积，导致头痛、头晕、心慌等不适症状。 　　抗贫血药 应用硫酸亚铁片、富马酸铁片等治疗缺铁性贫血时，不宜食用豆制品、动物肝脏、海产品等。因为这些食物富含钙、镁、磷，他们可与铁离子生成不溶性的复合物而降低疗效。 　　助消化药 胃蛋白酶、淀粉酶、胰酶片、多酶片等助消化药的化学成分是蛋白质，服药期间忌饮茶，因茶叶中富含鞣质，会与蛋白质形成鞣质蛋白沉淀而难于吸收，降低药效。也不宜食用猪肝，猪肝含铜丰富，而铜离子易于和这些酶制剂的酸性基团结合，形成不溶性沉淀物，降低药效。 　　抗凝血药 服用双香豆素、华法林、硝苄丙酮香豆素等抗凝血药时，不宜食用动物肝脏、蛋黄、绿叶蔬菜等富含维生素K的食物。因为这些抗凝血药化学结构与维生素K相似，两者相互竞争与肝脏中有关的酶结合，使凝血酶原和凝血因子VII、IX、X的生成受抑制，影响药物的抗凝血作用。

[em09503][em09503][em09502]人体八种必须氨基酸（第一种较为顺口）1.“一两色素本来淡些”（异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、缬氨酸）。2.“写一本胆量色素来”（缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、赖氨酸）。3.鸡旦酥，晾（亮）一晾（异亮），本色赖。借来一两本淡色书。生糖、生酮、生糖兼生酮氨基酸：生酮+生糖兼生酮=“一两色素本来老”（异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸），其中生酮氨基酸为“亮赖”；除了这7个氨基酸外，其余均为生糖氨基酸。酸性氨基酸：天谷酸——天上的谷子很酸，（天冬氨酸、谷氨酸）碱性氨基酸：赖精组芳香族氨基酸在280nm处有最大吸收峰色老笨---只可意会不可言传. 一碳单位的来源肝胆阻塞死 （甘氨酸、蛋氨酸、组氨酸、色氨酸、丝氨酸）。（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸），顺序一定要记清，色 酪 苯丙，酶的竞争性抑制作用按事物发生的条件、发展、结果分层次记忆：1.“竞争”需要双方——底物与抑制剂之间；2.为什么能发生“竞争”——二者结构相似；3.“竞争的焦点”——酶的活性中心；4.“抑制剂占据酶活性中心”——酶活性受抑。糖醛酸，合成维生素C的酶古龙唐僧（的）内子（爱）养画眉（古洛糖酸内酯氧化酶）双螺旋结构的特点：右双螺旋，反向平行碱基互补，氢键维系主链在外，碱基在内维生素A总结V.A视黄醇或醛，多种异构分顺反。萝卜蔬菜多益善，因其含有V.A原。主要影响暗视觉，缺乏夜盲看不见，还使上皮不健全，得上干眼易感染。促进发育抗氧化，氧压低时更明显。DNA双螺旋结构：DNA，双螺旋，正反向，互补链。A对T，GC连，配对时，*氢键，，十碱基，转一圈，螺距34点中间。碱基力和氢键，维持螺旋结构坚。（AT2，GC3是指之间二个氢键GC间三个.螺距34点中间即3.4）RNA和DNA的对比如下：两种核酸有异同，腺鸟胞磷能共用。RNA中为核糖， DNA中含有胸。维生素B6B6兄弟三，吡哆醛、醇、胺。他们的磷酸物，脱羧又转氨。三羧酸循环乙酰草酰成柠檬，柠檬又成α-酮琥酰琥酸延胡索，苹果落在草丛中。β-氧化β-氧化是重点，氧化对象是脂酰，脱氢加水再脱氢，硫解切掉两个碳，产物乙酰COA，最后进入三循环。酮体酮体一家兄弟三，丙酮还有乙乙酸，再加β-羟丁酸，生成部位是在肝，肝脏 生酮肝不用，体小易溶往外送，容易摄入组织中，氧化分解把能功

01糖发酵管：包括蔗糖发酵管，乳糖发酵管，水杨苷发酵管等等02 ONPG培养基：现常配制成现成的生化管03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基

01糖发酵管：包括蔗糖发酵管，乳糖发酵管，水杨苷发酵管等等02 ONPG培养基：现常配制成现成的生化管03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基

一、 单项选择题（请在备选答案中选择一个正确的答案，并将其填写在括号内，每小题2分，共40分）1、测得 某一蛋白样品含氮量是0.2克，此样品的约含蛋白质多少克？（ ）A、1.00克 B、1.25克 C、1.50克D、3.20克 E、6.25克2、蛋白质的变性是由于？（ ） A、蛋白质氨基酸组成的改变 B、蛋白质氨基酸顺序的改变 C、蛋白质肽键的断裂， D、蛋白质空间构象的破坏E、蛋白质水解3、核酸分子中核苷酸之间的连接方式是？（ ） A、2 ，3—磷酸二酯键 B、3，5—磷酸二酯键 C、2，5—磷酸二酯键 D、糖苷键 E、氢键4、大部分真核细胞mRNA的3—末端都具有（ ） A、多聚 A B、多聚U C、多聚T D、多聚C E、多聚G5、成人体内氨的最主要的代谢去路为（ ）A、合成非必需的氨基酸 B、合成必需的氨基酸 C、合成NH4+随尿排出 D、合成尿素E、合成嘌呤、嘧啶，核苷酸等6、肌糖原不能直接补充血糖的原因是因为（ ）？A、肌肉组织是储存糖原的器官B、肌肉组织缺乏葡萄糖激酶C、肌肉组织缺乏葡萄糖-6-磷酸酶D、肌肉组织缺乏磷酸化酶E、肌糖原分解的产物是乳酸7、生物膜含最多的脂类是（　　　）？　A、甘油三酯 B、糖脂 C、磷脂 D、胆固醇 E、胆固醇脂8、下列那种激素，可以降低血糖浓度（ ） A、生长激素 B、糖皮质激素 C、肾上腺素 D、胰岛血糖素 E 、胰岛素9、底物浓度饱和后，再增加底物浓度（ ）？A、反应速度随底物浓度的增加而增加B、随着底物浓度的增加酶逐渐失活C、酶的结合部位全部被底物占据D、再增加酶的浓度反应速度不再增加E 、形成酶—底物复合体增加10、一分子葡萄糖酵解时净生成ATP分子数为 ？（ ） A、1 B、2 C、3 D、4 E、3611、酶的Km值的大小与（ ） A、酶性质有关 B、酶浓度有关C、酶作用温度有关 D、酶作用时间有关E、以上均有关12、将DNA核苷酸顺序的信息转变成蛋白质中氨基酸顺序的过程包括（ ） A、复制与转录 B、复制及反转录 C、翻译 D 、转录及翻译E 转录13、蛋白质生命合成中，直接负责传递信息的是（ ）？ A、蛋白质 B、tRNA C、mRNAD、rRNA E、DNA14、 蛋白质合成的操纵子调节学说属于那一水平的调节（ ）？A、复制水平的调节 B、转录水平的调节 C、翻译水平的调节 D、反转录水平的调节 E、以上都不是15、下列关于维生素的说法那一项是错误的（ ）？ A 、维持正常生命所必须 B、是体内的能量来源 C、是小分子化合物 D、体内需量少，但必须由食物供给 E、它们的化学结构各不相同16、下列那一种氨基酸经脱羧后，能生成一种扩张血管的化合物（ ）？ A、精氨酸 B、天冬氨酸 C、组氨酸D、谷氨酰胺 E、脯氨酸17、血中NPN （非蛋白质）明显增高的主要原因是（ ）？A、蛋白质进食太多 B、肝脏功能不全C、肾脏功能不全 D、尿素合成增加E、谷氨酰胺合成增加 18、红细胞糖酵解的特点之一是产生（　　　），它具有调节血红蛋白结合氧的功能。A、3—磷酸甘油酸　　　　　　B、2—磷酸甘油酸　　　C、3—磷酸甘油醛　　　 D、1，3—二磷酸甘油E、2，3—二磷酸甘油酸１9、引起手足抽搐的原因是因为血浆中（ ）A、 结合钙浓度降低 B、 结合钙浓度升高C、离子钙浓度升高D、离子钙浓度降低 E、离子钙浓度升高，结合钙浓度降低20、苯丙酮酸尿症患者，尿中排出大量的苯丙酮酸、苯丙氨酸，因为体内缺乏那种酶（ ） A、铬氨酸转氨酶 B、磷酸吡多醛 C、苯丙氨酸羟化酶 D、多巴脱羧酶 E 、铬氨酸羟化酶 二 、多项选择题（每小题2分，共10分）1、胞嘧啶核苷酸从头合成的原料，包括（ ） A、5—磷酸核糖 B、谷氨酰胺 C、CO2 D、一碳单位 E 、天冬氨酸2、关于翻译过程的描述正确的是（ ）A、mRNA 上三个相邻核苷酸编码一个氨基酸B、终止密码指令多肽链合成终止C、密码的最后的一个核苷酸较前两个具有较小的专一性D、一种氨基酸有一种以上的密码E、起始密码只有一个3、酶蛋白和辅酶之间有下列关系（ ）A、两者以共价键相结合,二者不可缺一 B、只有全酶才有催化活性C、在酶促反应中两者具有相同的任务D、一种酶蛋白通常只需一种辅酶E、不同的酶蛋白可使用相同辅酶，催化不同的反应 4、以下必需的氨基酸（ ）？ A、谷氨酸 b、半胱氨酸 C、色氨酸 D苏氨酸 E、纈氨酸5、2，3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）的作用是（ ）A、调节红细胞的运氧能力，降低血红蛋白对O2的亲和力B、作为血红蛋白带氧的载体C、促进红细胞内NADPH的生成D、调节红细胞的运氧功能，提高血红蛋白对O2的亲和力E 、2,3-DPG氧化时可生成ATP，是红细胞内能量的储存形式

多功能生物催化剂―――卤醇脱卤酶的研究进展 郑楷 汤丽霞 (电子科技大学生命科学与技术学院,四川成都610054) 摘要:光学纯的环氧化物及β-取代醇是一类高价值中间体,在手性药物及精细化工合成领域具有十分重要的应 用前景。卤醇脱卤酶是一类通过分子内亲核取代机制催化邻卤醇转化为环氧化物的脱卤酶,可以高效高选择地 催化环氧化物和邻卤醇之间的转化,因而可以用来合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等化合物。本文着重 介绍了卤醇脱卤酶的催化机理及其应用研究进展,并对研究的发展方向提出了一些设想。 关键词:卤醇脱卤酶 生物催化 亲核试剂 光学纯环氧化物与β-取代醇 中图分类号:Q814?9 文献标识码:A文章编号:0438-1157(2008)12-2971-07 1 卤醇脱卤酶研究概述 有机卤化合物已成为当今重要环境污染物之一,主要是由于工业排废以及人工合成卤化物在化 工合成以及农业上的广泛应用造成的。在自然界 中,大部分异生质卤化物自降解能力很差,同时许多化合物被疑是致癌或高诱变物质。因此,应用微 生物降解有机卤化物已引起人们广泛的关注。从 1968年Castro等[1]首次发现以2,3-二溴丙醇作为 唯一碳源而生存的黄杆菌(Flavobateriumsp?) 菌株至今,人们相继筛选到多种可以降解邻卤醇的 微生物[2-8]。其中包括从淡水沉淀物中分离的放射 形土壤杆菌(Agrobacteriumradiobacter)菌株 AD1和节杆菌(Arthrobactersp?)菌株AD2以及 从土壤中获得的棒状杆菌(Corynebacteriumsp?) 菌株N-1074等。它们降解有机卤化物的途径虽然 存在明显差异,但是卤醇脱卤酶作为关键酶之一, 催化碳卤键的断裂存在于所有的代谢途径中。 卤醇脱卤酶也叫卤醇-卤化氢裂解酶,通过分 子内亲核取代机制催化邻卤醇转化为环氧化物和卤 化氢,是微生物降解此类化合物的关键酶之一。大 部分已知的卤醇脱卤酶都已经被克隆并在大肠杆菌 中进行重组表达,并根据其序列同源性分为 HheA、HheB、HheC3类。相关的研究表明,卤 醇脱卤酶与依赖NAD(P)H的短链脱氢酶/还原 酶家族(SDR)具有一定的序列相似性,同时蛋白 质三级结构的研究进一步揭示卤醇脱卤酶与SDR 家族成员有一定的进化相关性[9]。SDR是一类依 赖于NAD(H)或NADP(H)并在功能上具有 多样性的一组酶类,主要催化醇、糖类、类固醇和 一些异生质的氧化还原反应[10-11]。由于辅酶结合 位点在卤醇脱卤酶中被卤离子结合位点取代,因而 卤醇脱卤酶是一类不需要辅酶参与的脱卤酶。同 SDR家族一样,在卤醇脱卤酶中严格保守的丝氨 酸、酪氨酸和精氨酸在催化过程中起着关键作用。 其催化机制(图1)为:保守的丝氨酸通过与底物 羟基氧原子之间形成氢键,稳定了底物的结合 精 氨酸可用以降低酪氨酸的pKa值 酪氨酸从底物 的羟基中夺取一个质子,然后以底物上的氧原子作 为亲核试剂,进攻邻位卤素取代的碳原子,进而释 放卤离子,形成环氧化物[9,12]。 卤醇脱卤酶备受关注的另一个原因是其在生物 催化领域的应用,可以用来合成具有光学纯的高价 值中间体。这些化合物在手性药物、手性农药以及 各类手性合成的合成领域中具有传统化学合成法所 无法比拟的优越性。其中光学纯的环氧化物以及用 来合成该类化合物的前体邻卤醇在有机合成中具有 特别重要的应用价值。因为环氧化物环具有非常活 泼的化学特性,易与亲核试剂发生反应生成一类重要的手性合成单元―――不对称醇类。因此,多种合 成光学纯环氧化物的生物学方法已被广泛研究,其 中包括人们熟知的脂肪酶、环氧化物水解酶等。卤 醇脱卤酶催化邻卤醇生成环氧化物将成为高效合成 光学纯的环氧化物的主要方法之一。本文将重点介 绍卤醇脱卤酶在催化合成环氧化物、短链β-取代 醇以及叔醇类化合物方面的研究进展。

用液相时遇到几个简单的问题不太清楚，请大家帮帮忙，谢谢! 　　1.查资料氨基柱的清洗要用5-10倍柱体积的含0.5- 1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗，0.5- 1.0%是指体积百分数还是质量百分数呢?　　2.拖尾峰的峰高比正常的峰高低吗?应该怎样积分，积半峰对吗?　　3.氨基酸分析时，用的混标溶液含有18种氨基酸(氯化铵、天门冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、丝氨酸Ser、甘氨酸Gly、组氨酸His、精氨酸 Arg、苏氨酸Thr、丙氨酸Ala、脯氨酸Pro、酪氨酸Tyr、缬氨酸Val、蛋氨酸Met、异亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、苯丙氨酸Phe、赖氨酸 Lyb各 2.5μmol/mL 胱氨酸Cys 1.25μmol/mL)，但只跑出17个峰，没有氯化铵的峰，氯化铵不属于胺类，添加在混标溶液中有什么作用呢?