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丹酚酸单甲酯

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    [color=#00008B][size=2]各位前辈，完全新手请教：买了8种脂肪酸单标，接下来该怎么处理这些标样呢？油酸甲酯、亚油酸甲酯、棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、二十四烷酸甲酯、、11.14二十烷二烯酸甲酯、山嵛酸甲酯、11-二十烷单烯酸甲酯[/size][/color]

  • 【金秋计划】基于ISSR和SCoT分子标记的丹参遗传多样性评价及生境因子对丹酚酸和丹参酮的影响

    优良的遗传基因是决定优质药用植物形成的基础和内在因素[1]。DNA分子标记可以从居群及分子的水平上来阐明优质药用植物产生的生物学本质[2]，已有大量报道表明基于DNA分子标记的遗传多样性分析揭示了厚朴、肉苁蓉、甘草等道地药材独特药材品质是由当地独特的环境与药材基因型相互作用所产生的[3-6]。目前，已开发出包括扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism，ALFP）、简单重复序列（simple sequence repeats，SSR）、相关序列扩增多态性（sequence related amplified polymorphism，SRAP）、简单重复序列间区（inter-simple sequence repeat，ISSR）、目标起始密码子多态性（start codon targeted polymorphism，SCoT）、单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）在内的大量分子标记可用于药用植物研究[7-9]，其中，ISSR和SCoT由于具有引物通用性、随机性、设计简单、重复性好等优势而更加适用于药用植物遗传多样性及亲缘关系分析[10, 11]。 《神农本草经》中提出“土地所出，真伪新陈，并各有法”。特定的大气、水文、土壤等环境条件造就了不同的药材特性[12]。因此，为了增加药用植物中有效成分的含量，提高药材的品质，需要探索分析药用植物的品质与赖以生存的环境之间的联系[13]。例如，年平均气温、年日照时数、pH、Sr、Ca、S和交换性K等生态因子都是影响远志有效成分和生物活性的主要因素[14]。日照时数、相对湿度是影响黄芪中黄芪甲苷和黄芪多糖及黄酮类成分的关键因子[15]。除遗传因素和环境因素的影响外，药材的栽培、采收技术和产地的初加工等人文因素都会对药用植物的次生代谢产物有影响[16]，近年来，随着野生资源的逐渐减少。栽培的中药材已经成为了常用中药的主要来源。大多药材栽培产区的药农在长期栽培过程中结合实践，积累了丰富的种植生产经验，有效的控制了药材的质量[17-18]。 丹参Salvia miltiorrhiza Bge.隶属唇形科（Labiatae）鼠尾草属Salvia L.，为多年生草本植物[19]，以其干燥根及根茎入药，用于治疗胸痹心痛、月经不调、疮瘍肿痛等病症[20]。丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮等是丹参中主要的二萜类有效成分[21-22]。迷迭香酸、丹酚酸A、丹酚酸B等则是主要的酚酸类成分[23-24]。现代药理学认为，丹参酮类和丹酚酸类化合物（尤其是丹酚酸B）均具有较强的抗肿瘤、抗菌消炎、心脏保护等多种药理作用，临床上广泛应用于心脑血管疾病的治疗[25-26]。丹参一般栽种在海拔较低的丘陵地带，野生丹参常见于草丛、林下、山坡及溪谷旁[27]。其对环境的适应性较强，广泛的分布于我国华东、华中、华北、华南等地区，西北、西南的部分省区也有分布。四川、山东、陕西、河南是丹参栽培的传统道地产区，其中，四川中江所产丹参在各产区丹参中品质较佳，一直作为中药丹参出口的优质道地药材，大量出口于中国周边东南亚国家。 近年以来，由于丹参长期的只种不选导致栽培品种退化，质量下降，使得道地性丧失。另一方面，由于过度采挖，导致野生资源遭到破坏，而临床需求量不断增大使得丹参资源日益紧缺、丹参的药材市场混杂，药材质量和数量难以保证，严重影响其疗效，制约其产业发展。因此，本研究以采自四川中江、陕西商州（镇安、山阳）、山东蒙阴（临朐、济阳、新泰、平邑）、河南伊川、山西曲沃等丹参主要栽培区的丹参样品以及栽培区土壤气候为研究对象，利用ISSR和SCoT标记对不同产区丹参进行遗传多样性评价，并结合有效成分、生态环境的分析，明确影响丹参品质的主导因子以及丹参种植的适宜环境，以期为丹参的高产稳产、优质及后续丹参扩大种植的产区选择提供理论依据。 1 仪器与材料 T100 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪（美国Bio-Rad公司）、GelDoc XR凝胶成像系统（美国Bio-Rad公司）、DYY-7C型电泳仪（北京六一生物科技有限公司）、BCD-532WDPT型超低温冰箱（青岛海尔股份有限公司）、LC-20A型高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（日本岛津公司）、CR22N型高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）、Thermo Scientific? iCAP? PRO XP ICP-OES（美国Thermo Fisher公司）等。本研究共采集22个丹参S. miltiorrhiza Bge.居群，每个居群随机选取3株植株分别取适量幼嫩叶片，用于丹参遗传关系的分析。选择部分产地丹参为代表测定丹参有效成分，同时采集丹参根际土壤，材料采集信息如表1、2所示。 2 方法 2.1 ISSR和SCoT分子标记分析 使用植物DNA提取试剂盒（浙江兰博生物科技有限公司）提取四川、山东、陕西、河南、山西5个省22个居群66份材料的DNA。由擎科生物技术有限公司合成UBC加拿大哥伦比亚大学设计的ISSR引物和Collard & Mackill开发的36条SCoT引物[28-29]。2种分子标记的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应体系均为10 μL 2×Taq [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Master MIX Ⅱ（北京天根生物科技有限公司）、引物1 μL、模版DNA 1 μL、ddH2O补齐至总体积20 μL。ISSR标记的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增步骤为：94 ℃预变性10 min，39个循环下94 ℃变性30 s、48～59 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min，最后再设置72 ℃继续延伸10 min。SCoT标记的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增步骤为：94 ℃预变性5 min，36个循环下94 ℃变性30 s、52.9～59.7 ℃退火90 s、72 ℃延伸1 min，最后72 ℃继续延伸10 min。 2.2 丹酚酸和丹参酮类成分测定 按照《中国药典》2020年版[20]所规定的提取方法及色谱条件，提取不同居群丹参中的丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹酚酸B，并利用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法（HPLC）进行含量测定。 2.3 气象指标调查 在中国气象数据网（http://data.cma.cn）上查询极大风速、最低气压、最高气压、最高温度、平均气温、平均最高气温、平均气压、平均水气压、平均2 min风速、平均相对湿度、日降水量≥0.1 mm日数、日照时数、最大风速、最大日降水量和最小相对湿度等15个气象指标。 2.4 土壤理化检测 参照《土壤分析技术规范》（第二版）[30]中土壤样品的采集、处理与贮存，采用五点取样法，收集丹参种植土壤，混合均匀，自然风干，过筛备用。并参照其中方法测定土壤有机质（油浴加热重铬酸钾氧化-容量法）、颗粒组成（比重计法）、阳离子交换量（乙酸钙法）、全N（凯氏蒸馏法）、全P（氢氧化钠熔融—钼锑抗比色法）、全K（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度法）、水解N（碱解扩散法）、有效P（碳酸氢钠法）、速效K（火焰光度计测定法[31]）、全量铜、锰、锌、钠、钙、镁、硼、铝（电感耦合等离子体原子发射光谱法）。 2.5 数据处理与分析 利用Excel 2019、SPSS 19.0进行数据的统计和分析，本研究所有数据均保证3个生物重复和3个技术重复。对于扩增产物的电泳结果，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”，通过Excel 2019统计扩增位点总数（total number of amplification bits，TB）和多态性位点数（number of polymorphic bits，PB）。采用非加权组算术平均法（UPGMA）进行聚类分析。使用POPGENE 1.32分析得到的存在/不存在数据矩阵，计算等位基因数（number of alleles，Na）、有效等位基因数（effective number of alleles，Ne）、Nei氏基因多样性指数（Nei’s gene diversity index，H）、香农信息指数（Shannon information index，I）、多态性百分比（percentage of polymorphic bits，PPB）等遗传参数。 3 结果与分析 3.1ISSR和SCoT标记多态性分析 本研究从42对ISSR引物中筛选出了14对扩增条带清晰，多态性好、重复性好的引物，用于后续ISSR多样性分析。共扩增出140条条带，其中有133条多态性条带，PPB达到95%，平均每对引物扩增得到10条条带。引物UBC 808、UBC 823、UBC 825、UBC 834扩增的条带数目最多，有12条，多态性条带也是12条，PPB为100%。引物UBC 841扩增得到的条带数目最少为7条，（图1-A，表3）。 利用POPGENE 1.32计算，得到Na、Ne、H和I。其中UBC 811的Ne、H、I各项指数最高，分别为1.68、0.37和0.53。UBC 825的Ne、H、I各项指数最低，分别为1.19、0.14和0.26。Na、Ne、H和I平均值分别为1.95、1.41、0.24和0.37（表3）。 从36对SCoT引物中共筛选出10个扩增条带清晰、重复性好的引物，用于扩增22个?丹参居群（66个样本）的DNA。共扩增出97条条带，其中93条为多态性条带，平均多态性率为95.88%（图1-B，表4）。SCOT 28引物的扩增条带数最低为7条，多态性条带也是7条，PPB为100%。SCOT 3引物的扩增条数最高（14条），多态性率为100%，表明SCoT引物也具有较高的多态性和信息量。SCoT 28的Ne、H、I各项指数最高，分别为1.70、0.40和0.58。SCoT 14的Ne、H、I各项指数最低，分别为1.33、0.19和0.31。Na、Ne、H和I平均值分别为1.96、1.51、0.30和0.45（表4）。 3.2 不同居群丹参遗传多样性分析 结合ISSR和SCoT标记计算不同居群丹参的遗传多样性参数，Na范围1.64～1.79，平均值为1.71，Ne为1.34～1.43，平均值为1.38。H为0.21～0.26，平均值为0.23，I为0.31～0.37，平均值为0.35。其中，山东产区各居群的杂合度较高，遗传多样性较为丰富，四川中江产区杂合度较低，遗传多样性较低，稳定性较强（表5）。 3.3 不同丹参居群间遗传距离、PCA及聚类分析 遗传距离是用来衡量居群之间亲缘关系的重要参数，遗传距离越小，代表居群间的亲缘关系越近。结合ISSR和SCoT标记，计算了居群间的遗传距离，如图2-A所示，方格颜色越蓝代表2个居群间的遗传距离越近，越红则越远。来自四川中江的5个居群（SCZJ-1、SCZJ-2、SCZJ-3、SCZJ-4、SCZJ-5）互相之间表现出较近的遗传距离，而其他居群间的遗传距离较远。PCA分析和UPGMA聚类分析均表明SCZJ-1、SCZJ-2、SCZJ-3、SCZJ-4、SCZJ-5聚到了一类，而山东产区的丹参居群混杂的聚到了河南、陕西产区的类群中（图2-B、C）。总体说明四川中江各居群间的遗传稳定性较强，亲缘关系较近，而山东各居群的遗传变异性较大，亲缘关系混杂。 3.4 不同居群丹参有效成分含量测定 测定了不同产区丹参中丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和总丹参酮的含量。色谱图见图3。各产地丹参的丹酚酸B含量均达到《中国药典》2020年版要求，其中，四川中江（SCZJ）的丹酚酸B含量远高于药典规定的3%，并且显著高于其他产区栽培丹参。陕西野生丹参（SXZA-Y、SXSY-Y）也具有较高的丹酚酸B含量，具体结果见图4。除了山西曲沃（SXQW）丹参酮总量未达到《中国药典》要求外，其他产地均达到《中国药典》的0.25%。此外，2个陕西野生丹参（SXZA-Y、SXSY-Y）的总丹参酮含量均未达到《中国药典》要求，且明显低于各产区栽培丹参。 山东蒙阴（SDMY）的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ以及总丹参酮含量均显著高于其他产区，并且，SDMY和山东济南（SDJN）的丹参酮ⅡA含量显著高于其他产区。此外，SCZJ、山东临朐（SDLQ）、山东新泰（SDXT）和河南伊川（HNYC）等产区也具有较高的丹参酮ⅡA含量。总体而言，SCZJ富含丹酚酸B，山东产区丹参的丹参酮含量普遍较高，而SXQW的丹参酮类化合物和丹酚酸B均显著低于其他产区。 3.5 丹参产地气候资料收集与分析 丹参各产地间的多个气象因子均有明显差异，其中，平均相对湿度在51.02%～80.91%，日降水量≥0.1 mm的天数在66～123 d，这2个气候因子均以四川中江最高，陕西商州次之，山西曲沃最低。最大日降水量32.0～151.8 mm，年日照时数在1 084.4～2 363.4 h，其中，四川中江和陕西商州的日照时数明显低于其他几个产地。平均气温在13.37～17.77 ℃，陕西商州最低，四川中江最高。平均最高气温（19.68～22.33 ℃）也是四川中江为最高，陕西商州为最低。山东产区最高气压、最低气压、平均气压、日照时数均高于其他产区，但其日降水量≥0.1 mm日数低于其他产区。山西曲沃产区的降水量最少，相对湿度最低（表6）。 3.6 丹参种植土壤理化性质分析 11个不同的产地中有6个产地为壤质黏土，2个产地为砂质壤土，2个产地为黏壤土，1个产地为砂质黏壤土。丹参种植土壤多为壤质黏土，没有过砂和过黏的土壤（表7）。进一步对不同产地丹参种植土壤的pH、有机质含量、阳离子交换量进行测定，结果显示SXQW丹参种植土壤pH最高（8.37），SDMY丹参种植土壤pH最小（6.75），不同产区土壤pH值介于6.75～8.37栽培产区丹参种植土壤pH值呈中性和弱碱性，由此可见，丹参在中性和微碱性的土壤中都可生长（图5-A）。丹参种植土壤中有机质含量以SDXT最高，为28.17 g/kg；以SXZA-Y最低，为7.15 g/kg，除了SDMY和SXZA-Y偏低外，有机质含量大多为10～20 g/kg（图5-B）。土壤阳离子交换量是衡量土壤肥力的指标和合理施肥的重要依据，本次研究结果表明不同采集地丹参种植土壤阳离子交换量均有显著性差异（P＜0.05）。其中SXSY-Y土壤阳离子交换量最高，为20.482 cmol(+)/kg。除SDXT和SDPY 2个产地含量较低外，其他几个产地丹参种植土壤阳离子交换量均在10～20 cmol(+)/kg（图5-C）。 3.7 不同产地丹参土壤中矿质元素分析 通过对丹参种植土壤速效N、P、K的研究发现，不同产地丹参种植土壤碱解N含量差别较大，含量在3.80～66.85 mg/kg，其中，SXQW土壤碱解N含量最低（3.80 mg/kg），SCZJ和SDMY 2个产地土壤碱解N含量较其他产地丰富。土壤速效P质量分数处于27.61～63.29 mg/kg，11份土壤样品速效P含量均较丰富。土壤速效K研究结果表明，SXQW土壤速效K量极高，达到420.95 mg/kg。不同产地全N量在1.00～4.97 g/kg不等，全P量在0.19～0.67 g/kg，全K量在9.27～25.46 g/kg（表8）。进一步对不同采集地丹参种植土壤中的微量元素进行测定，8种无机元素中Ca的含量最高，Cu的含量最低。各产地中Na、Ca、B和Mg元素的变化范围很大，这不仅与土壤的理化性质有关，而且与植物自生营养的吸收以及代谢产物的合成有关。道地产区SCZJ产地的丹参种植土壤中Al、Mn、Ca、Mg等无机元素含量明显低于其他大部分产地，B含量高于其他产地（表9）。 3.8 环境因子与丹参有效成分相关性 丹参药材中的有效成分与气象因子之间呈现出不同程度的相关性，风速、气压等与丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮呈显著（P＜0.05）或极显著正相关（P＜0.01）。日降水量≥0.1 mm日数与丹参酮Ⅰ含量呈显著负相关（P＜0.05）。平均水气压、平均相对湿度、日降水量≥0.1 mm日数与丹酚酸B含量成显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）正相关，日照时数与丹酚酸B含量成显著负相关（P＜0.05）（图6-A）。同时，将土壤理化指标及矿质元素含量与丹参有效成分进行相关性分析，发现隐丹参酮含量与土壤质地中＜0.002 mm粒径含量显著性负相关（P＜0.05），丹酚酸B含量与土壤有机质呈显著性负相关（P＜0.05）（图6-B）。隐丹参酮含量与丹参种植土壤中的Cu、Mg元素含量呈极显著（P＜0.01）正相关，丹酚酸类化合物中的丹酚酸B含量与碱解N（HN）含量呈极显著性正相关（P＜0.01），与K、速效K（AK）含量呈显著（P＜0.05）或极显著负相关（P＜0.01）（图6-C）。 综上所述，风速、气压以及土壤中Cu、Mg元素含量是促进丹参酮类成分积累的主要环境因子，气压、湿度、降水量、以及土壤中碱解N含量主要促进了丹酚酸B含量的积累。同样的，过多的降水，土壤粒径过小也会抑制丹参酮的积累。日照过长、土壤中有机质含量或是钾离子含量过高则阻碍了丹酚酸B的积累。 3.9 遗传因子与环境因子、有效成分之间的相关性 平均水气压与Na、I之间呈显著负相关，平均相对湿度与Na显著负相关，与Ne和I极显著负相关。平均最高气温与H呈显著负相关，日降水量≥0.1 mm日数与Na和H显著负相关，与Ne和I极显著负相关。日照时数与Na、Ne和I极显著正相关，与H显著正相关（图7-A）。pH、阳离子交换量、有机质含量以及土壤粒径含量等指标与遗传因子之间均不具有显著相关性（图7-B）。土壤中的N与H呈显著正相关，而碱解氮（HN）与H呈显著负相关。Al与H显著正相关，Ca与Ne显著正相关，与H极显著正相关（图7-C）。I与丹参酮ⅡA含量显著正相关，丹参酮I与Na呈显著正相关，与Ne、H和I呈极显著正相关，I与隐丹参酮含量显著正相关，而丹酚酸B含量与H和I显著负相关（图7-D）。综上所述，水气压、湿度、气温、降水、日照等气候因子以及土壤中N、Al和Ca影响了丹参的遗传变异。不同居群丹参的遗传多样性越强可以促进丹参酮类成分的积累，而遗传稳定性越强则有助于丹酚酸B含量的积累。 4 讨论 ISSR和SCoT标记由于引物设计具有随机性和通用性的特点，在以往多种药用植物的研究中均表现出高的多态性[32-34]。本研究利用这2种标记对不同居群丹参遗传多样性进行分析，基于PPB、Na、Ne、H、I、Ht、Hs等指标发现ISSR和SCoT都具有丰富的多态性，说明了它们都是鉴别丹参亲缘关系的有力标记。结合ISSR和SCoT标记分析的不同居群丹参之间的遗传距离指数进行聚类分析，四川中江所有居群（SCZJ1～SCZJ5）单独聚到一类，在DNA水平和其他群体产生了较大的差异，是由于四川丹参花发育异常导致不结实，长期采取无性繁殖[35-36]。这种繁殖方式加速了四川丹参的地理隔离进程，阻碍了与其他产区丹参之间的基因交流。而四川丹参表现出的色朱味浓、皮细而肥壮、丹酚酸B含量高等独特的性状，与其在基因型上与其他产区丹参的差异密切相关。但是，长期单一的无性繁殖方式会导致其种性退化，因此，想要促进四川丹参产业的可持续性发展，应加强对四川丹参的品种选育和资源保护。 温春秀等利用AFLP对几个丹参居群的遗传分化情况进行了研究，结果显示山东居群丹参的遗传多样性最丰富[37]。本研究得到的分析结果与其一致，山东产区丹参居群分布在不同聚类组中，并且其遗传距离和地理分布没有直接的相关性，显示山东丹参遗传变异较大，这可能是由于山东丹参栽培主要靠种子繁殖，同时丹参在山东种植区域分布很广，人工选育和引种的手段也是导致其遗传变异大，种质资源混杂的原因之一[38]。所以后续应加强山东丹参种植过程中的种子种苗选育过程，从而来保证其种质的稳定。 药材道地性的形成往往是生态环境与基因型相互作用的结果，不同产地之间的气候类型存在一定差异，或许是造就不同产区丹参遗传变异以及质量差异的重要原因。在本研究中，风速、气压与丹参酮类成分含量呈显著正相关，降水量≥0.1 mm日数与丹参酮I含量呈显著负相关。可能是由于降水较少，植物易受到干旱胁迫，轻度的干旱胁迫能够促进丹参酮类成分的积累[39]，且降水量≥0.1 mm日数与Na、Ne、H、I等遗传因子均显著负相关，而这些遗传因子与丹参酮类有效成分呈显著正相关，说明降水过多会制约丹参的遗传多样性，将不利于丹参酮类成分积累。但相对湿度不足的情况下，降水量过低则导致重度干旱，同时也会抑制有效成分的积累，这可能是山西产区有效成分偏低的原因。本研究还发现，水气压、相对湿度和日降水量≥0.1 mm日数与丹酚酸B含量呈显著正相关，日照时数与丹酚酸B含量呈显著负相关。已有研究表明，轻度的水分涝胁迫能显著提高丹酚酸B的含量，降低丹参酮的含量[40]。丹参是喜光植物，一定的日照时数有利于有机物的合成积累，但过长的日照时数则会引起土壤水分的蒸发，抑制丹参根系生长，因此日照时数保证的情况下，较少的日照时数和充足的降水量有利于植物根系的生长，从而导致分布在整个根的丹酚酸B含量的积累[41]。并且，水气压、相对湿度和日降水量≥0.1 mm日数与Na、Ne、H、I等遗传因子呈显著负相关，而这些遗传因子与丹酚酸B含量具有显著负相关关系。说明了这些气候因子可以增强丹参居群的遗传稳定性，从而促进丹酚酸B含量积累。总体而言，降水量、湿度和日照时数是影响丹参遗传变异和有效成分的主要气候因子，这与此前余彦鸽对野生丹参生态因子分析研究的结果相似[31]。其中，降水量介导了丹酚酸B和丹参酮含量积累的分流。因此，后期可根据当地的降水量、湿度和日照时数等条件判断是否适宜丹参种植。 除气候因素外，由于不同的土壤类型中土壤质地及理化性质差异会引起土壤水、热、养分、通透性的不同，从而影响到植物根系水分及养分吸收，最终也会对药用植物的生长发育和产量、质量造成一定影响[42-43]。本研究中，土壤粒径＜0.002 mm以后将不利于隐丹参酮的积累。这可能与植物成分在根系的分布类型有一定关系，水溶性成分相对于脂溶性成分的分布在全根中比较均匀，脂溶性丹参酮主要都集中在表皮上，所以更易受到土壤质地的影响。土壤中矿质元素是影响药用植物生长发育及次生代谢物积累的生态因子[44-46]，中药材生长所需要的矿质元素主要有N、P、K等10多种[47]。本研究发现，隐丹参酮含量与无机元素Cu和Mg含量呈显著正相关，Cu和Mg是植物所需的微量元素，适量的Cu和Mg积累能促进药用植物中有效成分合成。丹酚酸B含量与碱解N呈显著性正相关，与K、速效K呈显著负相关，碱解N含量与H遗传因子显著负相关，而H与丹酚酸B含量显著负相关，说明碱解N能促进丹参遗

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  • 2010年版《中国药典》数据：丹酚酸B

    2010年版《中国药典》数据：丹酚酸B

    丹酚酸B（Salvianolic acid B）为唇形科植物丹参Salvia Miltiorrhiza Bge.的根及根茎提取而得。丹酚酸B为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，是研究较多的丹酚酸之一，对心、脑、肝、肾等器官均具有重要药理作用。为棕黄色干燥粉末。味微苦、涩，具引湿性，可溶于水。【分子式】C36H30O16【分子量】718.62以下为使用资生堂耐强酸色谱柱CAPCELL PAK C18 ACR，按照2010年版《中国药典》丹参项下方法，对客户提供的实际样品丹酚酸B进行分析得到的色谱图，请参考。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610251455_615077_2222981_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610251455_615075_2222981_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610251455_615076_2222981_3.jpgHPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5; 4.6 mm i.d.×250mm流动相：甲醇/乙腈/甲酸/水=30/10/1/59流　速：1000 µL / min温　度：25°C检　测：PDA 286nm进样量：10µL样　品：按2010版药典含量测定项下方法进行前处理（丹酚酸B供试品溶液的制备）

  • 过硫酸钾氧化间苯二酚光度法测总氮

    请问用过硫酸钾氧化间苯二酚光度法测总氮时，消解池中产生的红色杂质是什么物质，吸附在玻璃壁上，影响信号值，这个问题该怎么避免，求大神指导。

  • 2015中国药典检测方案有奖问答01.25（已完结）——精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测

    2015中国药典检测方案有奖问答01.25（已完结）——精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测

    问题：精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测使用了哪几款液相色谱柱？答案：Platisil ODS 、Diamonsil C18、Leapsil C18 【活动奖励】幸运奖（2钻石币）：抽奖软件，当天随机抽取3个回答正确的版友ID号（最后一个ID号，截止至下午3：00），每人奖励2个钻石币吕梁山（ID：shih20j07）mengzhaocheng（ID：mengzhaocheng）梧桐（ID：mengzhou）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251513_583448_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251514_583449_1610895_3.png积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的检测样品制备制备方法1. 对照品：取芍药苷对照品、丹酚酸B对照品、丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL各含芍药苷80 μg、丹酚酸B 0.16 mg、丹参酮ⅡA10 μg的混合溶液，即得。2. 供试品：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.5 g，精密称定，精密加入75%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分析条件色谱柱Platisil ODS 150 x 4.6 mm，5 μm (Cat#：99501)流动相A：乙腈 B：0.1%磷酸溶液 梯度流速1.0 mL/min柱温30 ℃检测器芍药苷、丹酚酸B：UV 230 nm，丹参酮ⅡA：UV 270 nm 进样量5 μL 色谱图对照品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251002_583419_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 12.068 1598880 89096 10350.125 0.958 -- 2 59.100 863860 30575 99529.191 0.971 76.864 *药典要求理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251002_583420_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数 N USP拖尾因子 分离度 1 92.337 372136 25387 865104.545 0.974 -- 供试品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601251003_583421_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 [a

  • 【第三届原创参赛】丹参通脉颗粒剂中丹酚酸B的含量测定

    【第三届原创参赛】丹参通脉颗粒剂中丹酚酸B的含量测定

    RP-HPLC测定丹参通脉颗粒中丹酚酸B的含量目的：建立一种高效液相色谱法测定丹参通脉颗粒中丹酚酸B的含量的方法。方法：色谱柱　Kromasil C18 4.6×250mm 5μm，流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水 (30：10：1：59)，检测波长286nm，流速0.8ml.min-1。柱温30℃。结果: 丹酚酸B在9.2μg·mL-1（0.0184μg）―184μg·mL-1（0.368μg）范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r = 0.9995；丹酚酸B的回收率为100.46%，相对标准偏差RSD=1.87%,丹参通脉颗粒中丹酚酸B的含量为210.99mg.g-1, RSD=1.03% 。 结论：本法灵敏、准确、专属性强、重现性好，可作为丹参通脉颗粒剂中丹酚酸B的含量测定方法。关键词：丹参通脉颗粒；丹酚酸B[

  • 【求助】己二酸单乙酯分析

    大家好，小弟最近要想用液相方法分离己二酸单乙酯、己二酸二甲酯、己二酸，请问大家有做过的吗？紫外的吸收波长多少？流动相和浓度梯度应该如何设置？大家给一个建议啊。

  • 26.4 HPLC测定血栓心脉宁片中丹酚酸B的含量

    26.4 HPLC测定血栓心脉宁片中丹酚酸B的含量

    【作者】：刘传贵，董长萍，王福文【摘要】： 目的：建立高效液相色谱法测定血栓心脉宁片中丹酚酸 B 的含量。方法：采用 D iam on sil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5ìm)，流动相甲醇- 乙腈-0.5% 甲酸溶液（30:9:61），流速1.0mL·min-1，检测波长286nm。结果：丹酚酸B 在0.19~1.75ìg 范围内线性关系良好，峰面积与其浓度线性关系良好（r =0.999 9），平均回收率9 9 .0 0 % ，R S D = 0 . 6 0 % ，( n = 5 ) 。结论：本方法分离效果好、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。【作者单位】：吉林华康药业股份有限公司【关键词】： 高效液相色谱法；丹酚酸B；血栓心脉宁片http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207311339_380861_1838299_3.jpg

  • 【金秋计划】丹酚酸提取物通过调节胆汁酸代谢，预防雷公藤多苷所致急性肝损伤

    [b][size=15px][color=#595959]雷公藤多苷片(TWP)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是治疗[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]类风湿[/color][/size][size=15px][color=#595959]性[/color][/size][size=15px][color=#595959]关节炎[/color][/size][size=15px][color=#595959](RA)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]应用最广泛的中药制剂，但其[b]肝毒性[/b]往往限制了其广泛应用。（TWP治疗RA时，报告了包括肺炎、呕吐、腹泻和上[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]呼吸道感染[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]在内的不良事件。）目前为止，尚无有效的方法来减轻TWP的急性肝毒性。因此，寻找有效的方法预防TWP的肝毒性具有重要意义。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]丹参（SM）[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的功能，经常用于治疗心[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]血管[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]疾病和作为护肝药物。新的药理学和临床研究还表明，SM具有改善微循环和保护心脏的活性，以及抗肿瘤、保肝、抗氧化、[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]调节、抗炎等生物活性。[b]丹参酚酸提取物(SA)[/b]是丹参的亲水成分，具有显著的[b]抗氧化和保肝[/b]作用。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]采用[b]代谢组学和转录组学[/b]相结合的方法，研究SA对TWP诱导的大鼠[b]急性肝损伤[/b]的保护作用，并探讨其相关机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]采用UPLC-Q/TOF-MS对SA和TWP提取物进行鉴定。连续7天给药SA (200 mg/kg)。第7天灌胃TWP (360 mg/kg)诱导大鼠急性肝损伤。血清生化及H&E染色评价肝损害程度。利用肝脏代谢组学和转录组学探索其潜在机制，并利用q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和IHC等分子生物学实验验证相关信号通路。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]SA能预防TWP引起的肝损伤症状，如肝指数升高、ALT和AST升高、肝组织病理改变等。肝脏代谢组学研究表明，TWP可以显著改变肝脏中单个胆汁酸的含量，而SA对[b]胆汁酸生物合成途径[/b]的影响最为显著。肝脏转录组学结果显示，SA + TWP组改变的基因主要涉及[b]胆固醇代谢、脂质调节和胆汁酸稳态途径[/b]。编码farnesoid X受体(FXR)的Nr1h4基因表达显著改变，[b]FXR是胆汁酸稳态的重要调节因子[/b]。进一步研究证实，SA可以阻止TWP诱导的FXR及其下游信号下调，从而调节[b]胆汁酸代谢[/b]，最终预防TWP引起的急性肝损伤。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]SA可通过调节胆汁酸代谢途径对TWP诱导的肝损伤起到保护作用[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。SA可能为TWP诱导的急性肝损伤提供一种[b]新的保护策略[/b]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959] [/color][/size]

  • 过硫酸钾含氮量测定

    你好，请教前辈个关于水中总氮测定的问题，我在用HJ 636-2012标准附录A中的方法测定氢氧化钠和过硫酸钾的含氮量，在最后加入N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液后显紫色，样品溶液和标准溶液都出现了混悬杂质，而且连空白溶液也出现了少量悬浮物，连参比都无法做这是怎么回事，表示该过硫酸钾不能用？ps：····要做过硫酸钾和氢氧化钠的试剂验收记录，有没有人有相关的吸光度数据，参考一下~~~~万分感谢！

  • 乳粉中蛋白质、脂肪、亚麻酸、亚油酸的测定能力验证

    参加中国食品药品检定研究院组织的，乳粉中蛋白质、脂肪、亚麻酸、亚油酸的测定能力验证，有参加的朋友希望互相交流学习！交流群 113894479 这个是我们乳粉中蛋白质、脂肪、亚麻酸、亚油酸的测定能力验证的群，看见的朋友赶紧加一下！！！！

  • 关于总氮试验中过硫酸钾空白值偏高---过硫酸钾的采购经历！

    [size=4] 在进行总氮实验时候，由于国标的要求：“当测定在接近检测限时，必须控制空白试验的吸光度A[sub]0[/sub]不超过0.03。”空白值偏高往往是总氮测定中不符合要求的一大难题。然而，影响总氮空白值偏高的原因，除了用水、器皿之外，过硫酸钾试剂就是最主要因素了。之前，我们也采购过不同几家试剂厂生产的过硫酸钾试剂，都做了试验，结果几乎都不尽人意，进口试剂也尝试使用过，但成本太高，没有选择。[/size][color=#DC143C]1.关于总氮试验中过硫酸钾空白值偏高，你们是怎么样选择的,能否说说你们的选择经历？2.你们购买哪家试剂厂生产的过硫酸钾，空白值可以达到多少?[/color]

  • 过硫酸钾 总氮

    大家都是用那个厂家的过硫酸钾啊？现在做总氮用国药AR500g的过硫酸钾在275nm处的吸光度在0.052左右。是试剂的问题吗？如果是，大家都是用的哪家的？联系方式什么的以前做没出现过类似问题，近段时间出现的。急！！！！求支招。现在做总氮的那个过硫酸钾的含氮要求在0.0005%内(国标要求的)。好像现在的试剂都达不到。如果要重结晶的话要怎么做呢？之前另外一个同事做过重结晶，效果不好。（一直用的国药的试剂）

  • 【求助】丙二酸单叔丁酯的核磁共振谱图

    请问各位老师、同行，有谁做过或能找到丙二酸单叔丁酯的核磁共振谱图，提供给我参考，C和Ｈ都可以．万分感谢．我是常州的，有的话请联系我E-mail：CCao@ashland.com.万分感激．

  • 2015中国药典检测方案有奖问答01.18(已完结)——精制冠心口服液中芍药苷和丹酚酸B的检测

    2015中国药典检测方案有奖问答01.18(已完结)——精制冠心口服液中芍药苷和丹酚酸B的检测

    问题：精制冠心口服液中芍药苷和丹酚酸B的检测使用了哪几款液相色谱柱？答案：Platisil ODS 、Diamonsil C18、Leapsil C18三款液相色谱柱【活动奖励】幸运奖（2钻石币）：langyabeilei（ID：langyabeilei）大川之子,纵横四海（ID：chuangu120）999youran（ID：999youran）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601181507_582218_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601181508_582219_1610895_3.png积分奖励：所有回答正确的版友奖励10个积分（幸运奖获得者除外）。【注意事项】同样的答案，每人只能发一次PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。======================================================================= 精制冠心口服液中芍药苷和丹酚酸B的检测样品制备 制备方法对照品：取芍药苷对照品、丹酚酸B对照品适量，精密称定加75%甲醇制成每1 mL各含0.1 mg的混合溶液，即得。分析条件色谱柱Platisil ODS 250 x 4.6 mm，5 μm (Cat#：99503)流动相A：乙腈 B：0.1%磷酸 梯度流速1.0 mL/min柱温30 ℃检测器UV 230 nm进样量5 μL 色谱图对照品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601180949_582169_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 20.203 1848942 73448 16517.431 1.008 -- 2 71.747 693660 20853 137258.022 1.037 73.456 *药典要求理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000本品种同时使用了Diamonsil C18、Leapsil C18两款色谱柱，在药典规定条件下进行芍药苷、丹酚酸B的检测，均满足药典要求。

  • 【金秋计划】丹酚酸B靶向神经氨酸酶NEU1改善肾纤维化

    [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]1、慢性肾脏病患者肾小管上皮细胞（TEC）中NEU1升高[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]作者首先通过分析肾脏转录组学数据库检测神经氨酸酶（NEU1-NEU4）的表达，发现肾活检组织中NEU1而非NEU2-NEU4的mRNA显著上调，NEU1在大多数类型的CKD（IgA、糖尿病肾病、狼疮性肾炎等）中升高。此外，作者纳入临床样本发现肾纤维化患者的NEU1蛋白水平显著高于无肾纤维化患者，NEU1含量的增加主要与肾损伤分子1（KIM1）共定位，NEU1表达与肾小球滤过率呈负相关。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]2、NEU1在小鼠纤维化肾脏中上调[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]接下来，作者测定了小鼠中NEU1的蛋白水平，通过单侧输尿管梗阻（UUO）或叶酸刺激建立肾纤维化模型，发现NEU1 mRNA和蛋白水平在纤维化小鼠的肾脏中显著增加，肾脏切片的染色显示NEU1在TEC中的定位增加。此外，NEU1的水平与纤维化指数呈正相关。进一步在TEC中敲低/过表达究NEU1来研究NEU1在TEC损伤中的作用，发现NEU1介导的TGFβ诱导的HK-2细胞上皮/间质标志物改变。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]3、TEC特异性NEU1缺失抑制小鼠肾纤维化[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了研究 NEU1 在肾纤维化中的作用，作者构建了TEC 特异性缺失Neu1的小鼠，通过单侧输尿管梗阻（UUO），发现NEU1敲除显著改善了形态，减少胶原沉积，抑制肾小管坏死和肾小管间质炎症，抑制巨噬细胞浸润和肾小管细胞中的pNF-κB，抑制UUO 诱导的KIM1 表达，抑制了EMT进展，抑制了UUO诱导的炎症细胞因子水平。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]在另一种由叶酸诱导的肾纤维化模型中，Neu1CKO小鼠的形态和肾重也明显改善，NEU1敲低显著改善肾功能相关肌酐和血尿素氮水平，抑制叶酸诱导的KIM1表达，减少肾小管损伤和间质纤维化。巨噬细胞浸润，EMT标记基因表达，促炎细胞因子，纤维化因子等均由于肾小管上皮细胞中NEU1缺乏而明显逆转。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]4、NEU1过表达增强UUO诱导的小鼠肾纤维化[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]除功能丧失外，作者还使用AAV9-NEU1将其注射到小鼠的肾皮层中进行NEU1过表达，免疫荧光结果显示AAV9-NEU1成功转导到TEC中。此外，NEU1过表达加剧了UUO诱导的肾脏萎缩，管状膨胀和胶原蛋白在肾脏皮质和髓质中的沉积，增强了UUO诱导的KIM1表达和肾脏中的EMT进展，增加了UUO刺激的巨噬细胞浸润，促炎细胞因子，纤维化因子的表达。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]5、NEU1与ALK5在160–200区域相互作用[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了深入研究NEU1促进肾纤维化的潜在机制，作者通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]芯片检测差异表达基因，前三位富集的KEGG通路包括TGF-β信号通路，由于TGFβ是驱动CKD中EMT和纤维化的主要致病因素，作者以TGF-β信号通路为中心。通过测试NEU1与TGF-β受体直接互作的可能性，Co-IP发现NEU1选择性地与ALK5结合，但不能与ALK2、ALK3等受体结合。Co-IP结合质谱法确认NEU1与ALK5的相互作用，免疫荧光显示NEU1与ALK5共定位于人纤维化肾脏。此外，双分子荧光互补（BiFC）以及原位邻位连接测定（PLA）均验证了NEU1和ALK5在患者纤维化肾中的直接相互作用。进一步SPR、PLA和Co-IP确定了ALK5的特异性结合域，证实NEU1与ALK5在160–200区域相互作用。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]6、NEU1与ALK5互作并稳定ALK5以增强 ALK5-SMAD2/3信号通路[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了研究NEU1-ALK5互作对ALK5的影响，作者测量了ALK5在存在或不存在NEU1的情况下的稳定性，发现NEU1敲低促进ALK5降解，而NEU1过表达抑制ALK5降解，表明NEU1与ALK5相互作用并稳定ALK5。ALK5 能够磷酸化其底物SMAD家族，作者发现NEU1沉默显著抑制TGFβ诱导的SMAD2/3激活，而NEU1过表达在TGFβ存在下维持SMAD2/3连续激活。此外，酶活性位点（mtNEU1：D103A、Y370A、E394A）的突变降低了NEU1过表达对TGFβ诱导的ALK5-SMAD2/3激活的影响，这些结果表明，NEU1与细胞质中ALK5的GS 结构域（氨基酸160-200）互作，然后增强ALK5-SMAD2/3信号通路，导致肾纤维化。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]7、丹酚酸B靶向 NEU1保护肾脏[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了鉴定靶向NEU1的候选化合物，作者采用SPR筛选了来自药用植物的74种天然产物与重组人NEU1蛋白的结合亲和力，发现NEU结合亲和力最强的前两种化合物是来自丹参的丹酚酸B和和迷迭香酸中的迷迭香酸。Co-IP和PLA实验表明丹酚酸B显著抑制NEU1与ALK5之间的相互作用，TGFβ诱导的ALK5-SMAD2/3信号通路激活也被丹酚酸B阻断。随后，作者在小鼠模型中研究了丹酚酸B对肾损伤的保护作用，证实丹酚酸B可显著减轻UUO诱导的肾损伤和肾纤维化，抑制Kim1、Snai1和Snai2表达，抑制促炎细胞因子的产生，抑制ALK5的磷酸化和SMAD2/3的下游磷酸化，在缺血/再灌注诱导的小鼠模型中复制了丹酚酸B对肾损伤的保护作用。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了测试NEU1是否介导丹酚酸B的保护作用，作者采用了Neu1 CKO小鼠模型，发现在Neu1 CKO小鼠中，丹酚酸B的治疗未能进一步减少UUO刺激下的肾损伤和肾纤维化，不能进一步抑制UUO诱导的Kim1表达。此外，在Neu1CKO小鼠中，丹酚酸B处理对ALK5磷酸化的抑制作用没有进一步增强。这些数据表明NEU1是保护肾脏的丹酚酸B所必需的。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]总结[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]研究揭示了NEU1在慢性肾病中的新功能、新机制、新药物。研究人员首先基于临床样本、多种肾纤维化动物、细胞模型，发现NEU1在肾纤维化中过度活化。应用免疫荧光技术检测，发现高表达的NEU1主要定位在肾小管上皮细胞中。进一步构建了肾小管上皮细胞特异性NEU1敲除和过表达小鼠，在单侧输尿管结扎（UUO）和叶酸（FA）刺激模型下，敲除NEU1抑制上皮-间质转化、炎细胞因子产生和胶原沉积，从而改善肾纤维化、对抗肾损伤；相反，过表达NEU1则加重UUO诱导的肾纤维化。采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] array、Co-IP、BiFC、PLA等技术手段发现NEU1选择性结合TGFβ I型受体ALK5，截短质粒、SPR技术明确NEU1与ALK5的160-200氨基酸区域结合，从而稳定ALK5，促使ALK5-Smad2/3信号通路持续激活，诱发肾纤维化发生发展。研究人员进一步以人源NEU1为靶点，从中药中筛选具有肾脏保护作用的活性成分。从近百个中药单体化合物中发现中药丹参中的丹酚酸B与人源NEU1重组蛋白具有极强亲和力；通过动物水平研究，明确了丹酚酸B抑制NEU1、对抗ALK5-Smad2/3通路激活改善肾纤维化，利用NEU1敲除小鼠，证实丹酚酸B依赖于NEU1对抗肾损伤，为揭示丹参发挥肾保护作用的科学内涵提供直接靶点证据，也为靶向NEU1途径治疗慢性肾病的临床应用和药物研发开拓了新方向。[/size]

  • 【原创大赛】盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析

    【原创大赛】盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析

    盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析芬戈莫德最初是由冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)培养液中提取的抗生素成分经化学修饰后合成的免疫抑制剂。药物及实验动物：盐酸芬戈莫德为本所研制，实验用大鼠为Wistar雄性大鼠，6-8周龄，体重范围约200-250g/只，本所实验中心提供；大鼠代谢笼为苏州动物实验仪器厂产品。色谱条件色谱柱：Acquity BEH C18 (100mm×2.1mm,1.7μm)流动相：A：水（0.05%TFA）B：乙腈（0.05%TFA）质谱条件结果分析：通过比较大鼠灌胃盐酸芬戈莫德溶液后收集的尿液样品、空白尿液样品及分到的代谢产物的高分辨质谱和多级质谱数据，在给药后的尿液中共鉴定出了8个代谢产物（如下图）所有代谢产物的高分辨质谱数据的准确度均小于1PPm。通过比较大鼠灌胃盐酸芬戈莫德溶液后收集的胆汁样品、空白胆汁样品及分到的代谢产物的高分辨质谱和多级质谱数据，在给药后的胆汁中共推测出了4个代谢产物(如下图)。所有代谢产物的高分辨质谱数据的准确度均小于1PPm。结果与讨论：经过对于给药后大鼠尿液及胆汁样品分析，初步推测盐酸芬戈莫德在大鼠体内的代谢产物有8种。

  • 乳清蛋白粉里为什么要添加植脂末

    最近家里老人在喝**牌的乳清蛋白粉，是希望可以提高身体的免疫力避免老感冒的。喝了一罐之后老人说好像有效果，似乎感冒的次数比以前少了，然后又接着喝第二罐。 前天晚上想试试这个蛋白粉的口感，如果好喝我也可以提高一下免疫力。按照说明冲了一勺子在杯子里，发觉根本不像奶粉那样溶解，有些粉末成团飘在水里。然后我就看了下成分表，就发现里面竟然含有“植脂末”。 植脂末是以氢化植物油和酪蛋白为原料的产品，它有个别名叫奶精，如咖啡伴侣就是这个成分，有奶香味儿，却根本不是奶，用在乳制品里可以减少乳用量，节约成本。我们从外面购买的面包、蛋糕、饼干、洋快餐、冰激凌等等许许多多食品里面都含有这个成分。而植物油脂在氢化过程中会产生大量反式脂肪酸，长期食用会造成心血管疾病发病率增加、影响儿童生长发育等危害。 我们买保健食品是为了健康，但是为什么里面要添加对人体有害的成分，这样我们到底是吃还是不吃呢？ 有谁吃过其他牌子的蛋白粉，里面也有这个植脂末么？

  • 蛋白质与多肽蛋白质粉

    蛋白质与多肽蛋白质粉 人类的营养物质有许多种类，最为重要的为蛋白质，碳水化合物和脂肪，其它则是微量营养物质，如维生素、电解质和微量元素等。虽然每一种营养物质对人体来说都是不可或缺的，但绝大多数的营养学家都会有充分的理由认为，真正最重要的营养物质是蛋白质。一、蛋白质是构成人体的基本物质。 蛋白质是由氨基酸通过肽链相连而构成的，它是人体包括骨骼、肌肉、皮肤和脑的重要物质基础，同时氨基酸也是生成核酸的基本物质。我们知道，核酸既形成遗传密码，也是体内储存能量的基本物质。因而从根本上说，人体是由蛋白质组成的。构成人体蛋白质的生理功能概括有如下三个方面：1）人体组织的主要构成成份：如肌肉、骨骼、血液、皮肤、神经、肝、心等等。2）具有特殊生理功能：可以这样说，人类的一切生理活动都与蛋白质有关。如酶蛋白能催化机体的一切化学反应，包括蛋白质、脂肪、碳水化合物的消化等；载脂蛋白运送脂肪；血红蛋白运送氧；激素蛋白调节代谢与生理活动包括情感；血浆白蛋白调节渗透压、运输金属离子、胆红素和抗生素等。3）供给机体能量：成年人每日约需要更新400g蛋白质，每克蛋白质彻底分解能释放出约4 Kcal的热量。4）为机体提供氮原料：人体内所必需的嘧啶、嘌呤、肌酸、胆碱、肾上腺素、肉碱、牛磺酸等，都是以多肽、氨基酸为原料的。表1. 世界粮食组织（FAD）和世界卫生组织（WHO）根据中国人的体质和膳食结构推荐的中国人蛋白质的摄入量（RNLs）。年 龄蛋白质RNL（g/d） 初生—6个月 1.5-3 1岁 35 3岁 45 5岁 55 7岁 60 9岁 65 10-16岁 75-85 成年女性 65 成年男性 75 妊娠 +15 乳母 +20 根据统计资料：由于贫困、工作紧张、精神压力、减肥节食、以及肠胃疾病、癌症、贫血、肾病、各种结核病、肝硬化、腹水、烧伤、失血等，以及老龄人均不同程度地存在着蛋白质的摄入不足。 上世纪80年代以来，我国营养学家对7个省18个贫困地区，1万名学龄前儿童进行了为期4年的连续调查，发现营养不良现象非常严重，其中蛋白质的摄入量不足WHO规定的60%。近年社会医学工作调查，在发达地区由于生活节奏加快，精神压力异常增加，以及办公室白领阶层的减肥节食，也导致蛋白质摄入不足，代谢异常的人群增加。二、蛋白质缺乏的体征和临床症状 单纯的蛋白质营养不良又叫加西长病，这或许是来源于非洲的单词，单纯的能量不足时叫消瘦；临床上通常把这两种现象叫单纯性蛋白质能量营养不良症或PEM。单纯的PEM症在临床上较少见到，但在慢性消耗性疾病患者中则常见，尤其是在癌症患者和艾滋病的患者中几乎占到90%以上。 现代都市和贫困地区存在着相当数量的蛋白质营养不良族群，他们的临床表现主要是能量损失或不足，如体力不支、睡眠不安、怕冷、怕热、性冷淡、无法进行正常的体力劳动和运动，其次为肌肉组织萎缩、皮肤松驰；腿部、脸部易水肿、脂肪肝、无名皮疹、伤口愈合不良、记忆力下降、视力减弱等。再者免疫力低下易感冒、感染。在做血检时通常会发现这些族群的血浆蛋白处于正常值的下限，其中白蛋白、转铁蛋白、甲状腺素结合前体蛋白和视轴蛋白（retinol-binding protein）均处于低水平时，患者易于感染各种疾病并且出现早衰症状，如果是儿童则感染后死亡率增加30%-40%，对于这类人群WHO的专家最好的建议就是迅速补充优质（或全价）的蛋白质。三、优质蛋白质和劣质蛋白质的区别。 要弄清楚何为优质蛋白质？何为劣质蛋白质？我们要引入什么是必需氨基酸的概念。营养生理学家、生化学家发现构成人体蛋白质的氨基酸共有21种，而这些氨基酸中其中有4种是可以由体内含碳和含氮底物自己合成的，被称为非必需氨基酸，还有10个必需的氨基酸，是人类机体无法制造需要从饮食中摄取的，另有7个是介于这两者之间的被称为条件必需氨基酸。表2. 必需、条件必需和非必需氨基酸 必需氨基酸条件必需氨基酸 非必需氨基酸 亮氨酸牛黄酸 丙氨酸 异亮氨酸酪氨酸 谷氨酸 缬氨酸甘氨酸 天冬氨酸 赖氨酸丝氨酸 天冬酰胺 苯丙氨酸（酪氨酸）脯氨酸 蛋氨酸（半胱氨酸）谷氨酰酸 苏氨酸 胱氨酸 色氨酸 组氨酸 精氨酸 虽然蛋白质广泛存在于许多动物性和植物性食物中，但是必需氨基酸的构成异差很大，WHO把“蛋白质其组成恰好符合人体需要”的蛋白质称为理想蛋白质，在自然界这种理想的蛋白质普遍认为是鸡蛋蛋白，因此就把鸡蛋蛋白作为衡量蛋白质优劣的参照蛋白，科学家把它作为一把尺子来衡量各种蛋白质，并制定出标准，以4种必需氨基酸为最低限来决定其优劣，即色氨酸、苏氨酸、赖氨酸或者蛋氨酸（半胱氨酸）。 通过比较科学发现，肉、鱼、蛋、牛奶、乳酪含有优质蛋白，大豆、花生、豌豆也含有较多的高质量蛋白。进一步研究发现它们都不够完美，因而要求大家对优质的动物性蛋白和植物性蛋白进行了科学搭配才是最完美的全价蛋白质（complete protein）。表3. 部分高质量蛋白

  • 【每日一贴】腐殖酸蛋白饲料

    【中文名称】腐殖酸蛋白饲料【英文名称】humic acid-protein fodder【性状】 黑色固体。【用途】 用作饲料添加剂，促进禽畜生长，提高繁殖能力，减少疾病，助消化。【制备或来源】 将风化的煤粉碎后，用氢氧化钠综合提取，加尿素、硫酸铵等经混合、灭菌，然后，接种发酵、浓缩、干燥即得成品。【其他】 除含动物所需的蛋白质（≥48%）外，还含有动物生长激素。【生产单位】 黑龙江鹤岗市蛋白饲料厂

  • 重氮甲烷甲酯化问题

    我是一名新手，最近想用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]测定脂肪酸和三帖酸化合物及脂肪醇类，查阅资料发现三萜酸大部分采用重氮甲烷甲酯，脂肪酸却多种甲酯方式，并且外文中脂肪酸甲酯化也多用重氮甲烷，但是重氮甲烷很危险，为甚么好多人仍倾向于用重氮甲烷，因为我想一次都甲酯化所以想了解清楚一下。并且，甲酯化得混合样品能否继续硅烷化衍生 我还要测定里面的脂肪醇类。求各位老师传授经验，最好有重氮甲烷详细的制造和使用步骤

  • 双乙酰酒石酸单双甘油酯的测定

    哪位老师做过酸奶中[font=Verdana, Arial][color=#333333][back=#f4f1e2] 双乙酰酒石酸单双甘油酯的测定。没找到国标的方法。国标中只有食品添加剂 双乙酰酒石酸单双甘油酯的方法。[/back][/color][/font]

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