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  • 【原创大赛】Sil-NaUA色谱固定相制备

    【原创大赛】Sil-NaUA色谱固定相制备

    [align=center][font='times new roman'][size=16px]Sil-NaUA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱固定相制备[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]引言[/size][/font][/align]本章设计以表面活性剂NaUA为功能单体,通过一步法点击反应将其枝接到巯基功能化的硅球表面,制备得到了Sil-NaUA色谱固定相。通过傅里叶变换红外光谱仪和热重分析仪对Sil-NaUA色谱固定相进行表征,结果显示Sil-NaUA色谱固定相已被成功制备。进一步研究了Sil-NaUA填充色谱柱的保留机制。基于Sil-NaUA色谱柱典型的亲水作用色谱保留机制,将其应用于亲水性的核苷和核酸碱基、酰胺类物质、黄酮类物质和磺胺类药物的分离分析,展示了良好的亲水分离潜能。[align=center][font='times new roman'][size=16px]实验部分[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px][b] [/b][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][b] [/b][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]试剂和仪器[/size][/font][/align]本章所用试剂和仪器如表所示:[align=center][size=13px]试剂和仪器[/size][/align][align=center][/align][table][tr][td][align=left][size=13px]试剂和仪器[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px]公司名称[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]([/size][size=13px]3-[/size][size=13px]巯基丙基)三甲氧基硅烷([/size][size=13px]MPS[/size][size=13px],[/size][size=13px]95%[/size][size=13px])[/size][size=13px]、[/size][size=13px]10-[/size][size=13px]十一烯酸([/size][size=13px]99%[/size][size=13px])[/size][size=13px]、[/size][size=13px]对氨基苯甲酰胺、[/size][size=13px]硫代乙酰胺[/size][size=13px]、烟酰胺、丙二酰胺[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]阿法埃莎试剂有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]偶氮二异丁腈([/color][/size][size=13px][color=#000000]AIBN[/color][/size][size=13px][color=#000000])[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]北京伊诺凯科技有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]球形多孔硅胶(粒径[/size][size=13px]5[/size][size=13px] [/size][size=13px]μm[/size][size=13px],[/size][size=13px]孔径[/size][size=13px]3[/size][size=13px]00 Å [/size][size=13px])[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]富士硅化学株式会社[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]色谱甲醇、[/color][/size][size=13px][color=#000000]乙腈[/color][/size][size=13px][color=#000000]([/color][/size][size=13px][color=#000000]ACN[/color][/size][size=13px][color=#000000])[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]上海星可高纯溶剂有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]无水乙醇[/color][/size][size=13px][color=#000000]、氢氧化钠[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]天津市汇杭化工试剂有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]色谱用纯水[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]法国[/color][/size][size=13px][color=#000000]Millipore[/color][/size][size=13px][color=#000000]公司的[/color][/size][size=13px][color=#000000]Milli-Q[/color][/size][size=13px][color=#000000]系统纯化[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]甲苯、氯仿、环己醇、异丙醇[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]天津市大茂化学试剂厂[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]尿苷、尿嘧啶、根皮[/color][/size][size=13px][color=#000000]苷[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]北京百灵威科技有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]腺嘌呤、腺苷[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]韶[/color][/size][size=13px][color=#000000]远化学科技(上海)有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][/table][align=center][/align][table][tr][td][align=left][size=13px]试剂和仪器[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px]公司名称[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]羟查酮[/size][size=13px]、香叶木素、磺胺二甲基嘧啶[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px]美国[/size][size=13px]Sigma-[/size][size=13px]A[/size][size=13px]ldrich[/size][size=13px]化学试剂公司[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]磺胺嘧啶、磺胺[/size][size=13px]胍[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px]上海市阿拉丁生化科技有限公司[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]Nicolet iS20[/size][size=13px]傅里叶变换红外光谱仪[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]美[/color][/size][size=13px][color=#000000]国[/color][/size][size=13px][color=#000000]Thermo Fisher[/color][/size][size=13px][color=#000000]公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]GLK[/size][size=13px]型色谱柱装填系统[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]无锡加[/color][/size][size=13px][color=#000000]莱[/color][/size][size=13px][color=#000000]克色谱科技有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]超声波清洗机[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px]宁波新芝生物科技股份有限公司[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]P230II[/size][size=13px]高效液相色谱系统[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]大连依利特分析仪器有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]DZF-6020[/size][size=13px]型真空干燥箱[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]上海博迅实业有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]DF-101S[/color][/size][size=13px][color=#000000]集热式恒温加热磁力搅拌器[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]巩义市予华[/color][/size][size=13px][color=#000000]仪器有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]Discovory[/size][size=13px] TGA[/size][size=13px]热重量分析仪[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]美国[/color][/size][size=13px][color=#000000]TA[/color][/size][size=13px][color=#000000]仪器[/color][/size][size=13px][color=#000000]公司[/color][/size][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman'][size=16px]Sil-NaUA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱固定相的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]制备[/size][/font][/align]Sil-NaUA[font='宋体']色谱固定相制备需用到严格无水的甲苯[/font][font='宋体'],因此需要对甲苯试剂进行前处理[/font][font='宋体']具体步骤如下:[/font]1[font='宋体']、取干净的白纸、小刀、镊子和长勺[/font][font='宋体']备用,将油浴锅温度设为[/font]100[font='宋体']℃[/font][font='宋体'](甲苯的沸点为[/font]110[font='宋体']℃[/font][font='宋体']);[/font]2[font='宋体']、从试剂瓶中取出[/font][font='宋体']钠块少许[/font][font='宋体'],将其放于称量纸[/font][font='宋体']上,用小刀切成丝状,然后迅速将其放入圆底烧瓶中,倒入甲苯溶液(可见少量气泡出现),然后轻轻摇匀,使其充分接触,加[/font][font='宋体']入二苯甲酮作为[/font][font='宋体']指示剂[/font][font='宋体'];[/font]3[font='宋体']、连接冷凝装置,充氮气[/font]5 min[font='宋体'],将内部空气排出,将装置放入油浴锅中,冷凝回流数小时,观察溶液[/font][font='宋体']颜色变化,待溶液颜色变为深蓝色时,取下冷凝管,[/font][font='宋体']连接角管和[/font][font='宋体']锥形瓶;[/font]4[font='宋体']、将温度设定为[/font]130[font='宋体']℃[/font][font='宋体'],进行无水甲苯蒸馏[/font][font='宋体'],[/font][font='宋体']将蒸馏液置于提前干燥好并含有干燥分子筛的试剂瓶中储存,备用;[/font]5[font='宋体']、[/font][font='宋体']溶剂蒸馏完毕后,将装置冷却至室温,将[/font][font='宋体']含有钠块的[/font][font='宋体']圆底烧瓶取下,加入适量甲醇进行清洗,[/font][font='宋体']待钠块完全[/font][font='宋体']反应后,洗涤烧瓶,即可。[/font]NaUA[font='宋体']制备方法参考文献[/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]59[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font][font='宋体']:取等摩尔数的[/font]10-[font='宋体']十一烯酸和[/font][font='宋体']氢氧化钠[/font][font='宋体']分别溶解在无水乙醇中,超声分散均匀后,[/font][font='宋体']缓慢将[/font][font='宋体']氢氧化钠的乙醇溶液加入到[/font]10-[font='宋体']十一烯酸的乙醇溶液中,边加边搅拌,逐渐出现白色絮状沉淀物。[/font][font='宋体']抽滤去除[/font][font='宋体']溶剂,用无水乙醇反复洗涤白色絮状沉淀物,最后冷冻干燥[/font]12 h[font='宋体'],得到白色粉末[/font]NaUA[font='宋体'],储存备用。[/font]Sil-NaUA[font='宋体']色谱固定相[/font][font='宋体']制备过程分为两步,如图[/font]2-1[font='宋体']所示。第一步[/font][font='宋体']为巯基[/font][font='宋体']化硅球[/font][font='宋体']的制备:首先将[/font]30 mL[font='宋体']无水甲苯缓慢倒入[/font]100 mL[font='宋体']圆底烧瓶中,然后称取[/font]2.8 g[font='宋体']活化球形硅胶悬浮于无水甲苯[/font][font='宋体']中,快速加入[/font]3.1 mL MPS[font='宋体'],[/font][font='宋体']混匀后于[/font]110[font='宋体']℃[/font][font='宋体']在氮气保护下加热搅拌回流反应[/font]24 h[font='宋体']。反应结束后,[/font][font='宋体']冷却至室温,抽滤,依次使用甲苯、甲醇[/font]/[font='宋体']水和甲醇反复洗涤,[/font][font='宋体']然后将其置于[/font]110[font='宋体']℃[/font][font='宋体']真空干燥过夜,得到巯基功能化硅球([/font]Sil-MPS[font='宋体'])。[/font][font='宋体']第二步为十一烯酸钠枝接巯基[/font][font='宋体']化硅球[/font][font='宋体']的制备[/font][font='宋体']:称取[/font]2.8 g Sil-MPS[font='宋体']加入到[/font]100 mL[font='宋体']圆底烧瓶中,称取[/font]5.6 g NaUA[font='宋体']溶解于[/font]70 mL[font='宋体']甲醇中,充分分散后,加入到[/font]100 mL[font='宋体']圆底烧瓶中,然后称取[/font]300 mg[font='宋体']的[/font]AIBN[font='宋体'],三者充分混匀后,于[/font]60[font='宋体']℃[/font][font='宋体']在氮气保护下加热回流搅拌[/font]24 h[font='宋体']。反应结束后,[/font][font='宋体']冷却至室温,抽滤,依次用[/font][font='宋体']水、[/font][font='宋体']甲醇[/font]/[font='宋体']水和甲醇反复洗涤,[/font][font='宋体']然后将其置于[/font]110[font='宋体']℃[/font][font='宋体']真空干燥过夜,得到[/font]Sil-NaUA[font='宋体']色谱固定相。[/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009301104238286_5423_3890113_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]Sil-NaUA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]制备[/size][/font][/align]Sil-NaUA[font='宋体']色谱柱[/font][font='宋体']采用匀浆[/font][font='宋体']法装柱[/font][font='宋体'],以氯仿-[/font][font='宋体']环己[/font][font='宋体']醇([/font]9:11,v/v[font='宋体'])为匀浆液,[/font][font='宋体']将[/font]2.2 g Sil-NaUA[font='宋体']材料与匀浆[/font][font='宋体']液充分[/font][font='宋体']混匀分散。将混悬液缓慢置于匀浆罐中,以[/font][font='宋体']甲醇-异丙醇([/font]1:1,v/v[font='宋体'])[/font][font='宋体']为顶替液,调节压力至[/font]35 MPa[font='宋体'],装填色谱柱([/font]150 mm × 4.6 mm[font='宋体'])。保持压力[/font][font='宋体']约[/font]30 min[font='宋体'],[/font][font='宋体']装填结束,用甲醇冲洗[/font]Sil-NaUA[font='宋体']色谱柱[/font][font='宋体']。[/font]

  • 【分享】1986年4月26日的切尔诺贝利核泄漏事故

    http://i2.sinaimg.cn/dy/news/2006/0425/images/temp_lp_009.gif重返切尔诺贝利--与死神同居位于乌克兰的前苏联切尔诺贝利核电站发生爆炸事故,爆炸释放出的辐射量约为日本广岛原子弹爆炸能量的200多倍。由于这次事故,核电站周围30公里范围被划为隔离区,附近的居民被疏散。然而,故土总是难离,即使是这样一片浸透着死亡的生病的土地。近年来,陆续有300多名居民偷偷返回隔离区居住。他们生活得到底怎么样?日前,英国广播公司记者尼克·索普深入切尔诺贝利隔离区,拜访了这些依然与死神“同居”的人们。http://image2.sina.com.cn/dy/images/xfrd_03.gif  景色很美,但却像个坟场  说到在世界上最严重的核泄漏地区穿行,人们想到能只有恐惧。而在尼克·索普眼中,切尔诺贝利给人的第一印象是令人心动的美景:乌克兰北部清晨的薄雾中,一抹晨光穿透茂密的森林。银色的白桦树亭亭玉立,树叶正渐渐变成金黄;一排排松树郁郁葱葱,本该是采蘑菇的人流连忘返的天堂;纯净透明的蓝天上,点缀着朵朵白云,守护着这片世外桃源般的风景。然而让人无法忽视的是,丛林中随处可见红色的小三角和黄色的辐射标志,提醒着人们这个地方的过去。  库帕奇是记者一行旅途中经过的一个村子。但这个村子却没有房屋,远远看去,只有一些超出地面少许的土墩,就像一个规模庞大的墓地。但这不是人类的墓地,而是房屋的坟场。向导解释说,因为辐射太强的缘故,当地的房子都被埋了起来。  鲇鱼大得就像潜水艇  在核发电站附近,一个受到核辐射的池塘里,超过两米长的鲇鱼正在黄色的池水中游动,巨大的身躯看上去就像是一架潜水艇。记者从桥上丢下了大块大块的面包,它们游上来很快一抢而光,样子很是吓人。  在4号核反应堆前,也就是当年事故的发生地附近,盛开着一大片鲜艳的桔红色花朵。在切尔诺贝利,到处能看到有人在打扫草坪、修剪篱笆。这种行为让人感到不解,因为这里并没有任何重建行动。这让人产生了一种奇怪的感觉,就好像他们在尽力修饰着一具尸体,以便它被交还给亲人埋葬时显得体面一点。  红苹果落满树下无人拾  普利佩雅特,曾是大多数核发电厂工人的聚居地,如今却一片荒芜。那里的辐射量非常高,要到达普利佩雅特,要经过三个检查站。在普利佩雅特的中心广场,白杨树疯长,柏油路面开裂,公寓、酒店、办公室全都空无人迹。记者去过无数被战争毁灭的村庄,但还未曾见过这样被生命抛弃的城市。  在切尔诺贝利附近,随处可见红艳艳的野生苹果,普利佩雅特的中心也一样,树下的落果给这里铺上了一条深红的地毯。核辐射,就像白雪公主那个可恶的后妈,给这里所有的苹果都下了毒。如果谁把这里的苹果咬上一口,就会比白雪公主睡得更久,可能3万年也醒不过来。  没有风,突然间,一扇金属门却被吹开了。普利佩雅特,是一座幽灵之城。  300多人偷回隔离区定居  事故发生之后,有300多人偷偷跑回了自己的家园。这种行为是违法的,但政府对此睁一只眼闭一只眼,甚至还为他们开通了公共汽车,以方便他们去购物、看医生。  奥尔加·迈卡娅历维娜今年75岁。丈夫死后,她养了一只狗和几只猫做伴。她的女儿们如果要来看她,必须得到有关部门批准。她难道就不怕辐射吗?奥尔加·迈卡娅历维娜对记者的担心报之一笑:“它根本伤害不了我。”与迈卡娅历维娜的精神头儿形成鲜明对比的是,在这个处在辐射区边缘的村子里,几乎所有居民都说自己生了重病。一位妇女说,她有三个在事故发生后出生的孩子都天生残疾。  80公里外的居民也受影响  在距离切尔诺贝利80公里的莱司特维宁,有许多身患癌症、循环系统疾病、心脏病以及先天残疾的孩子,当地三分之二的男子因为身体虚弱而被军队拒之门外。今年早些时候,该地一个月内有9名壮年男子接连死去。  联合国发展项目的当地雇员正在鼓励这些居民把他们看作是幸存者而不是受害者。在联合国资助下,青年活动中心、设施良好的学校和医院已经建立起来。即使在这里,人们也能感受到全球范围内的灾难幸存者相互之间的关心。最近,人们最关心的就是发生在美国新奥尔良的飓风灾情。

  • 【求助】23Na谱求助

    最近准备做一些23Na谱的实验,可是核磁技术人员休假了,需要自己做,完全没经验,以下问题向大家请教:1)做23Na谱需要另外换探头吗?我们的核磁仪测试下拉菜单中,有测试H, C, F, Li, P, Si的测试模块,唯独没有Na. 2)文献中要求测试时Samples were not spun. 应该怎么操作?希望大家多多指教,不胜感激!

  • 【转帖】纳米氧化铝的晶型及粒度对其红外光谱的影响

    纳米氧化铝的晶型及粒度对其红外光谱的影响作  者:李莉娟 孙凤久 楼丹花 王闯机构地区:东北大学理学院,辽宁沈阳110004 上海宝钢股份有限公司特殊钢分公司,上海200940 出  处:《功能材料》 EI CAS CSCD 2007年第38卷第3期 479-481页,484页,共4页摘  要:利用硫酸铝铵热解法,通过控制焙烧温度,制备了不同晶型和粒度的纳米Al2O3。XRD物相分析表明,焙烧至900℃可得到纯γ-Al2O3,1200℃发生相转变,生成α-Al2O3。用Scherrer公式计算得到了各样品的晶粒度。对所制备的纳米Al2O3的红外光谱进行了详细研究。结果表明,不同晶型的纳米Al2O3具有不同的红外光谱特征,因此,红外光谱可以作为一种定性判断Al2O3是否发生了相转变的辅助手段。实验中发现所制备的纳米Al2O3的红外光谱存在吸收峰的蓝移和宽化,对出现此现象的原因进行了分析讨论。最后,对纳米金属氧化物材料出现谱移现象的原因进行了归纳总结。来源:维普资讯。

  • 质粒DNA制备基本原理及方法

    [font=宋体][font=宋体]质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,当前通常用其来特指细菌、真菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]分子。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在基因工程领域,质粒常常被当做基因的载体使用。在分子生物学中,质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]被当做基因运载工具具有非常广泛的应用。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的应用过程中,其纯度对于酶切、[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增等实验结果有着比较大的影响,因此需要保证质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]提取的纯度和效率。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在细菌中提取质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]通常按照以下步骤进行[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]第一步,培养细菌,使质粒扩增[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体] [font=宋体]第二步,进行细菌的收集和裂解[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体] [font=宋体]第三步,质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的提取过程中,其提取效果和其大小呈现出正比例关系,越小越容易进行提取,这主要是由于,如果质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]比较大的话,其特性机会和染色体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]比较接近,这样想要将二者分离开来难度就会变大。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在进行质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的分离时,适宜的条件是非常重要的,主要包括[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]浓度、时间和溶菌温度等,在适宜的条件下质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和染色体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]才能够更好的分离开来。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]细菌浓度对于质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的提取也是非常重要的,如果细菌的浓度比较高,那么在溶菌时,溶菌液很难和细菌液充分混合,导致溶菌不彻底的问题,这样会造成质粒的回收率比较低;[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]而如果细菌溶度比较低,溶菌液和菌液均分混合,会造成溶液中含有较多的蛋白质、染色体以及菌体碎片,在这样的情况下,沉淀时质粒回合这些物质共沉,进而导致质粒的回收率也会比较低。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在生物学的相关研究之中,细菌质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的提取是比较常规的技术和操作,主要的方法有碱裂解法、煮沸法以及[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]裂解法等,下面对碱裂解法进行介绍。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]碱裂解法[/font][/b][font=宋体] [font=宋体]碱裂解法是当前应用比较广泛的质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]提取方法,这种方法的优点在于提取的质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]纯度高,操作便捷,缺点是需要较长的提纯时间。研究人员在缩短这一方法的提纯时间方面做了大量的研究,但是没有得到理想的效果,当前这一方法提取[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的时间都在[/font][font=Calibri]1.5h[/font][font=宋体]以上。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]碱裂解法提取质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的基本原理[/font][font=Calibri]:[/font][font=宋体]首选,在菌液中加入溶液Ⅰ,细菌细胞悬浮,同时其中的[/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]会和[/font][font=Calibri]Ca2+[/font][font=宋体]以及[/font][font=Calibri]Mg2+[/font][font=宋体]鳌合,起到抑制[/font][font=Calibri]DNase[/font][font=宋体]活性的作用;然后,加入溶液Ⅱ,将细胞裂解,在这个过程中蛋白质和少量质粒将会变质;[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]再次,加入溶液[/font][font=宋体]Ⅲ,使多数蛋白质以及染色体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]被沉淀,并使得质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]复性。其中,该方法中起到裂解细菌作用的主要是溶液Ⅱ中的[/font][font=Calibri]NaOH[/font][font=宋体],正因如此该方法被称为碱裂解法,如果将其换为[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体],也能够提取出少量的质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体],这是由于[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]也是碱性的,可以一定程度上破坏细菌的细胞膜。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]在这一方法中需要注意,[/font][font=Calibri]NaOH[/font][font=宋体]溶液要现用现配,这个主要是由于其能够和空气中的[/font][font=Calibri]CO2[/font][font=宋体]反应,从而使溶液的碱性降低,这样会影响提纯的效率。[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]另外在加入溶液[/font][font=宋体]Ⅱ之后,操作时间不能够过长,这是因为染色体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]在碱性条件下片段会慢慢断裂。另外需要注意的是,在操作过程中,混匀是一定要轻柔,从而在保证细菌沉淀可以充分的扩散在试剂中的前提下,避免已变性质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和染色体基因组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]被机械剪切。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]此外,在溶液[/font][font=宋体]Ⅲ加入之后,其中的[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]会和蛋白质结合,会产生大量的沉淀,[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]还会和醋酸钾结合,生成[/font][font=Calibri]PDS[/font][font=宋体],这一物质的溶解度远低于[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体],从而可以将大部分蛋白质和染色体[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]共沉淀,进而获得质粒。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州能够提供快速、高通量、高品质以及个性化的[url=http://cn.sinobiological.com/services/plasmid-dna-preparation-service][b]质粒[/b][/url][/font][font=Calibri][url=http://cn.sinobiological.com/services/plasmid-dna-preparation-service][b]DNA[/b][/url][/font][font=宋体][url=http://cn.sinobiological.com/services/plasmid-dna-preparation-service][b]制备服务[/b][/url]。不仅满足实验室研究人员的小量质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]制备需求,也可为生物工业用户和医药公司等提供大规模的质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]制备服务。义翘神州升级改造后的质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]制备平台,采用[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别的生产线,对过程和最终产品的严格管控,确保了最终产品质量符合客户需求。义翘神州可以提供从μ[/font][font=Calibri]g[/font][font=宋体]级别,[/font][font=Calibri]mg[/font][font=宋体]级别至[/font][font=Calibri]g[/font][font=宋体]级别不同规模的科研级和工业级别的质粒生产服务,满足不同的需求。更多详情可以参看:[/font][font=Calibri]http://cn.sinobiological.com/services/plasmid-dna-preparation-service[/font][/font]

  • 【原创】考考瑞利(北二光)人

    【原创】考考瑞利(北二光)人

    &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&瑞利是原北二光吧哈,第一题:“光学”是由谁最早提出的?************************************************************************北二光号称中国最具规模光谱仪器厂吧哈,第二题:“spectrum”是由谁命名的? &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 瑞利北二光请答第三题:这是谁?啥玩艺?看TM什么哪? http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902162345_133489_1738214_3.jpg??????????????????????????????????????????????????????????????????????????

  • 【原创大赛】离子色谱法测定饮料中的山梨酸、苯甲酸和糖精钠

    离子色谱法测定饮料中的山梨酸、苯甲酸和糖精钠黄选忠 杜宏山 邹大喜(湖北兴山县疾病预防控制中心,443711)摘要 建立了以青岛盛翰色谱公司生产的SH-AC-1型阴离子交换柱为分离柱,以1.5 mmol/LNa2CO3为淋洗液,流量为1.5mL/min,采用等度洗脱的方式测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的方法,山梨酸、苯甲酸的线性范围为0~30.0mg/L, 糖精钠的线性范围为0~15.0mg/L,方法应用于饮料等样品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的测定,其结果与气相色谱法相吻合,加标回收率分别为:97.9%~98.4%、96.5~96.8%和100.6%~104.4%,5次平行测定的相对标准偏差分别为:1.68%~3.92%、2.32~4.08%和2.02%~3.95%(n=5),按样品稀释50倍计方法的检出限分别3.5、2.5和1.5 mg/L。关键词 离子色谱法,饮料,山梨酸,苯甲酸,糖精钠食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的测定方法国家标准推荐的主要有气相色谱法和高效液相色谱法等,其中,气相色谱法样品前处理方法繁杂,而高效液相色谱法虽然样品前处理方法简单但仪器价格偏贵基层实验室少有配置,使其应用受到限制。离子色谱法以其灵敏、快速、试剂消耗少、无环境污染等优点而备受广大分析工作者的青睐,已应用于食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠等多种添加剂的分析,但这些方法大多使用的是进口色谱柱并采用KOH淋洗液梯度洗脱方式进行测定,而进口色谱柱特别是具有梯度洗脱功能的离子色谱仪的价格普遍偏贵,目前基层实验室装备较少难以应用,因此研究用国产普通色谱柱和普通色谱仪测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠是一项有意义的工作,本工作研究了用国产普通色谱柱和色谱仪测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的各种条件和可行性,结果表明,以1.5 mmol/LNa2CO3溶液作淋洗液,流量为1.5ml/min,用SH-AC-1型阴离子交换柱为分离柱,采用等度洗脱的方式可使山梨酸、苯甲酸和糖精钠较好分离,各组分的峰面积与其浓度在一定的范围内具有良好的线性关系,且各组分的保留时间在14 min以内,具有分析应用价值。据此,建立了以青岛盛翰色谱公司生产的SH-AC-1型阴离子交换柱为分离柱,以1.5 mmol/LNa2CO3为淋洗液等度洗脱的方式测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的方法,山梨酸、苯甲酸的线性范围为0~30.0mg/L, 糖精钠的线性范围为0~15.0mg/L,方法应用于饮料等样品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的测定,获得了满意的结果。1、实验部分1.1主要仪器CIC-200型离子色谱仪(青岛盛翰色谱公司),抑制器:检测器:电导检测器,定量环体积为25μL;分离柱,SH-AC-1型阴离子交换柱(250×4.0mm i.d,青岛盛翰色谱公司,批号:1404016); 1.2 仪器工作条件 柱箱温度35℃,电流:50mA。1.3主要试剂山梨酸、苯甲酸和糖精钠标准溶液:1000 mg/L,按照文献方法配制。临用时用纯水将各种标准溶液稀释成含山梨酸、苯甲酸各250.0 mg/L、 糖精钠125.0mg/L的混合标准应用液; 75 mmol/LNa2CO3淋洗液贮备液,临用时用纯水稀释50倍使用。实验所用试剂均为AR及以上级,实验用水为超纯水(18.2ΜΩ·cm)。1.4 实验方法1.4.1 标准曲线的绘制 取0.10、0.20、0.60、1.00、2.00和3.00 mL混合标准液于25 mL容量瓶中加纯水至刻度,混匀,配制成含山梨酸、苯甲酸1.0、2.0、6.0、10.0、20.0、 30.0mg/L和糖精钠0.5、1.0、3.0、5.0、10.0和15.0mg/L标准系列,各进样1 mL上机(淋洗液:1.5mmol/L Na2CO3溶液;流量:1.5mL/min;量程:1档)测定各成份峰面积(S),以S对浓度绘制工作曲线。1.4.2 样品测定 将样品稀释50倍经0.45μm滤头过滤后进样1 mL上机(条件同1.4.1)测定各成份峰面积(S),以标准曲线法定量。2、结果与讨论2.1 Na2CO3浓度的选择 在高效液相色谱法中选择适当的淋洗液是改善分离度(R)的有效方法,为保证山梨酸、苯甲酸和糖精钠的有效分离,同时当以Na2CO3作淋洗液时,NO3-的保留时间与苯甲酸的保留时间比较接近,考虑到样品中可能存在的NO3-对苯甲酸测定的影响,为此进行了Na2CO3淋洗液浓度的选择实验,结果见表1。从表1可见,当Na2CO3浓度在1.0~表1 Na2CO3浓度对分离度和保留时间的影响(流量1.0 ml/min)组分/浓度(mg/L)1.0mmol/L1.5mmol/L2.0mmol/L保留时间(min)R保留时间(min)R保留时间(min)R山梨酸(20)11.4872.689.6302.668.4382.29苯甲酸(20)19.091.4615.5981.1613.4631.03NO3-(10)22.5091.7817.8701.6315.2121.60糖精钠(10)26.048/20.645/

  • 第九届原创 离子色谱法测定饮料中的山梨酸、苯甲酸和糖精钠

    第九届原创离子色谱法测定饮料中的山梨酸、苯甲酸和糖精钠黄选忠 杜宏山 邹大喜(湖北兴山县疾病预防控制中心,443711)摘要 建立了用国产SH-AC-1型阴离子交换柱为分离柱,以1.5 mmol/LNa2CO3为淋洗液,流量为1.5mL/min,采用等度洗脱的方式测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的方法,山梨酸、苯甲酸的线性范围为0~30.0mg/L,糖精钠的线性范围为0~15.0mg/L,方法应用于饮料等样品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的测定,其结果与气相色谱法相吻合,加标回收率分别为:97.9%~104.5%、96.3~100.9%和100.3%~104.5%,5次平行测定的相对标准偏差分别为:1.68%~3.92%、2.32~4.08%和2.02%~3.95%(n=5),按样品稀释50倍计方法的检出限分别3.5、2.5和1.5 mg/L。关键词 离子色谱法,饮料,山梨酸,苯甲酸,糖精钠食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的测定方法国家标准推荐的主要有气相色谱法和高效液相色谱法等,其中,气相色谱法样品前处理方法繁杂,而高效液相色谱法虽然样品前处理方法简单但仪器价格偏贵基层实验室少有配置,使其应用受到限制。离子色谱法以其灵敏、快速、试剂消耗少、无环境污染等优点而备受广大分析工作者的青睐,已应用于食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠等多种添加剂的分析,但这些方法大多使用的是进口色谱柱并采用KOH淋洗液梯度洗脱方式进行测定,而进口色谱柱特别是具有梯度洗脱功能的离子色谱仪的价格普遍偏贵,目前基层实验室装备较少难以应用,因此研究用国产普通色谱柱和普通色谱仪测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠是一项有意义的工作,本工作研究了用国产普通色谱柱和色谱仪测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的各种条件和可行性,结果表明,以1.5 mmol/LNa2CO3溶液作淋洗液,流量为1.5ml/min,用SH-AC-1型阴离子交换柱为分离柱,采用等度洗脱的方式可使山梨酸、苯甲酸和糖精钠较好分离,各组分的峰面积与其浓度在一定的范围内具有良好的线性关系,且各组分的保留时间在14 min以内,具有分析应用价值。据此,建立了用国产SH-AC-1型阴离子交换柱为分离柱,以1.5 mmol/LNa2CO3为淋洗液等度洗脱的方式测定食品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的方法,山梨酸、苯甲酸的线性范围为0~30.0mg/L,糖精钠的线性范围为0~15.0mg/L,方法应用于饮料等样品中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的测定,获得了满意的结果。1、实验部分1.1主要仪器CIC-200型离子色谱仪(青岛盛翰色谱公司),抑制器:检测器:电导检测器,定量环体积为25μL;分离柱,SH-AC-1型阴离子交换柱(250×4.0mm i.d,青岛盛翰色谱公司,批号:1404016);1.2 仪器工作条件 柱箱温度35℃,电流:50mA。1.3主要试剂山梨酸、苯甲酸和糖精钠标准溶液:1000 mg/L,按照文献方法配制。临用时用纯水将各种标准溶液稀释成含山梨酸、苯甲酸各250.0 mg/L、 糖精钠125.0mg/L的混合标准应用液;75 mmol/LNa2CO3淋洗液贮备液,临用时用纯水稀释50倍使用。实验所用试剂均为AR及以上级,实验用水为超纯水(18.25ΜΩ·cm)。1.4 实验方法1.4.1标准曲线的绘制 取0.10、0.20、0.60、1.00、2.00和3.00 mL混合标准液于25mL容量瓶中加纯水至刻度,混匀,配制成含山梨酸、苯甲酸1.0、2.0、6.0、10.0、20.0、 30.0mg/L和糖精钠0.5、1.0、3.0、5.0、10.0和15.0mg/L标准系列,各进样1 mL上机(测试条件为,柱箱温度:35℃,电流:50mA;淋洗液:1.5mmol/L Na2CO3溶液;淋洗液流量:1.5mL/min;量程:1档)测定各成份峰面积(S),以S对浓度绘制工作曲线。1.4.2样品测定 将样品稀释50倍经0.45μm滤头过滤后进样1 mL上机(条件同1.4.1)测定各成份峰面积(S),以标准曲线法定量。2、结果与讨论2.1 Na2CO3浓度的选择 在高效液相色谱法中选择适当的淋洗液是改善分离度(R)的有效方法,为保证山梨酸、苯甲酸和糖精钠的有效分离,同时当以Na2CO3作淋洗液时,NO3-的保留时间与苯甲酸的保留时间比较接近,考虑到样品中可能存在的NO3-对苯甲酸测定的影响,为此进行了Na2CO3淋洗液浓度的选择实验,结果见表1。从表1可见,当Na2CO3浓度在1.0~表1 Na2CO3浓度对分离度和保留时间的影响(流量1.0 ml/min) 组分/浓度(mg/L) 1.0mmol/L 1.5mmol/L 2.0mmol/L 保留时间(min) R 保留时间(min) R 保留时间(min) R 山梨酸(20) 11.487 2.68 9.630 2.66 8.438 2.29 苯甲酸(20) 19.09 1.46 15.598 1.16 13.463 1.03 NO3-(10) 22.509 1.78 17.870 1.63 15.212 1.60 糖精钠(10) 26.048 / 20.645 / 17.543 / [/td

  • 直谱光谱做钡的,有吗?

    现在,博士越来越多了,对咱们分析人员提的要求也越来越多了;这不,要我们分析钢中钡,有谁的直读光谱是做钡的,本人最关心你的曲线标样从哪搞来的,谢谢分享,有积分奖励?

  • 金属平均晶粒度的CNAS认可,望有经验的前辈们给点指导

    目前实验室在做CNAS认可,金属平均晶粒度是申报项目之一。关于金属平均晶粒度的不确定度报告,不太明白要不要做。是按GB/T 6394附录B的来做就行了?还是这个项目不需要提交不确定度报告 。给我们指导的老师对这块也不是太清楚 ,只是对化学分析那边提了很多。只能到论坛里希望前辈们指点一下。

  • 金属平均晶粒度的CNAS认可,望有经验的前辈们给点指导

    目前实验室在做CNAS认可,金属平均晶粒度是申报项目之一。关于金属平均晶粒度的不确定度报告,不太明白要不要做。是按GB/T 6394附录B的来做就行了?这个项目需不需要提交不确定度报告 。给我们指导的老师对这块也不是太清楚 ,只是对化学分析那边提了很多。只能到论坛里希望前辈们指点一下。

  • 【谱图】纳米粒子鉴别

    【谱图】纳米粒子鉴别

    我做了一个材料,较高倍率SEM照片显示大颗粒由无数的小粒子组成,小粒子非常小,处于纳米级,较低倍率的照片显示大颗粒表现为多面体,说我做的材料是纳米材料很勉强,但是的确看到了一次纳米粒子,我应该怎么描述材料的形貌呢?请有经验的朋友帮忙分析下![img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/07/200807282055_100440_1803816_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/07/200807282102_100441_1803816_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/07/200807282103_100442_1803816_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/07/200807282103_100443_1803816_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/07/200807282103_100444_1803816_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/07/200807282103_100445_1803816_3.jpg[/img]

  • 【求助】Which LIMS is popular in China

    Hi guys,I have to apologize that I have to type English for now as my computer has so far not set up to input Chinese charaters. I am currently working in a analytical lab in Canada, and I am thinking about buying a LIMS to help manage work flow. The cost of well known LIMS in North America are fairly high.I want to get a sense what kind of LIMS are popular in China and what roughly the cost would be. I have contacted one company in Beijing, but unfortunately their system does not have an English version.Can you please kindly share some information of the LIMS you are currently using? It's much appreciated.You can e-mail me too at menggl@yahoo.comThanksMartin

  • 钾 钠背景值过高

    各路大神,新手上路,最近做ICP钾钠的背景强度都特别高,分别选的766和589,用径向观测,之前背景可以在100一下,这两天走的背景已达到2000左右,编辑标线的时候只好扣除空白,矩管已经用王水泡过,包括一些清洗工作都做了,找不到原因,是否有可能是观测镜那里有问题

  • 【转帖】生命科学新的里程碑:DNA双螺旋结构发现前前后后

    作者:徐九武 文章来源:科技日报 生命科学新的里程碑:DNA双螺旋结构发现前前后后 丰富多彩、引人入胜的生命现象,历来是人们最为关注的课题之一。在探索生物之谜的历史长河中,一批批生物学家为之奋斗、献身,以卓越的贡献扬起生物学“长风破浪”的航帆。今天,当我们翻开群星璀璨的生物学史册时,不能不对J沃森(JinWatson)、F克里克(FrancisCrick)的杰出贡献,予以格外关注。50年前,正是这两位科学巨匠提出了DNA双螺旋结构模型的惊世发现,揭开了分子生物学的新篇章。如果说十九世纪达尔文进化论在揭示生物进化发展规律、推动生物学发展方面,具有里程碑意义的话,那么,DNA双螺旋结构模型的提出,则是开启生命科学新阶段的又一座里程碑。由此,人类开始进入改造、设计生命的征程。   诚然,生物科学的每一次突破都是其自身发展到一定阶段的产物,是不同学科新理论、新技术相互渗透融合的结果,但勿庸置疑,它首先是科学家个人创造性劳动的宝贵结晶。今天,了解DNA双螺旋结构模型产生的背景、条件,以及对生物学发展产生的积极影响,对我们深刻认识这一重大发现的科学价值,正确把握现代生命科学发展的规律和方向,是大有裨益的。正是基于这一认识,笔者撰写了这篇短文,权作对DNA双螺旋结构模型提出50周年的纪念。   浩繁纷杂的生物尽管千差万别,但不论哪一个种类,从最小的病毒直至大型的哺乳动物,都毫无例外地可以把自己的性状一代一代地传下去;而无论亲代与子代,还是子代各个体之间,又多少总会有些差别,即便是双胞胎也不例外。人们曾用“种瓜得瓜,种豆得豆”和“一母生九子,九子各别”,生动形象地概括了存在于一切生物中的这一自然现象,并为揭开遗传、变异之谜进行了不懈的努力。   17世纪末,有人提出了“预成论”的观点,认为生物之所以能把自己的性状特征传给后代,主要是由于在性细胞(精子或卵细胞)中,预先包含着一个微小的新的个体雏形。精原论者认为这种“微生体”存在于精子之中;卵原论者则认为这种“微生体”存在于卵子之中。但是这种观点很快为事实所推翻。因为,无论在精子还是卵子之中,人们根本见不到这种“雏形”。代之而来的是德国胚胎学家沃尔夫提出的“渐成论”。他认为,生物体的任何组织和器官都是在个体发育过程中逐渐形成的。但遗传变异的操纵者究竟是何物?仍然是一个谜。   直到1865年,奥地利遗传学家孟德尔在阐述他所发现的分离法则和自由组合法则时,才第一次提出了“遗传因子”(后来被称作为基因)的概念,并认为,它存在于细胞之内,是决定遗传性状的物质基础。1909年,丹麦植物学家约翰逊用“基因”一词取代了孟德尔的“遗传因子”。从此,基因便被看作是生物性状的决定者,生物遗传变异的结构和功能的基本单位。1926年,美国遗传学家摩尔根发表了著名的《基因论》。他和其他学者用大量实验证明,基因是组成染色体的遗传单位。它在染色体上占有一定的位置和空间,呈直线排列。这样,就使孟德尔提出的关于遗传因子的假说,落到具体的遗传物质———基因上,为后来进一步研究基因的结构和功能奠定了理论基础。尽管如此,当时人们并不知道基因究竟是一种什么物质。直至本世纪40年代,当科学工作者搞清了核酸,特别是脱氧核糖核酸(简称DNA),是一切生物的遗传物质时,基因一词才有了确切的内容。1951年,科学家在实验室里得到了DNA结晶;1952年,得到DNAX射线衍射图谱,发现病毒DNA进入细菌细胞后,可以复制出病毒颗粒… 在此期间,有两件事情是对DNA双螺旋结构发现,起了直接的“催生”作用的。一是美国加州大学森格尔教授发现了蛋白质分子的螺旋结构,给人以重要启示;一是X射线衍射技术在生物大分子结构研究中得到有效应用,提供了决定性的实验依据。   正是在这样的科学背景和研究条件下,美国科学家沃森来到英国剑桥大学与英国科学家克里克合作,致力于研究DNA的结构。他们通过大量X射线衍射材料的分析研究,提出了DNA的双螺旋结构模型,1953年4月25日在英国《发现》杂志正式发表,并由此建立了遗传密码和模板学说。之后,科学家们围绕DNA的结构和作用,继续开展研究,取得了一系列重大进展,并于1961年成功破译了遗传密码,以无可辩驳的科学依据证实了DNA双螺旋结构的正确性,从而使沃林、克里克同威尔金斯一道于1962年获得诺贝尔医学生理学奖。

  • 关于CNAS样品留样及备样

    CNAS老师初次现场评审的时候说实验室里面留样现场环境要求不对,也没有备样,想问问备样是有什么用的,以及备样和留样分样的环境要求和分样数量及存放时间要求?有没有哪个标准或者文件里有具体的规定?

  • CNAS认证前期准备工作:怎样选择光谱分析的标准物质

    我们公司在做CNAS认证的前期准备工作,在选择光谱标样时遇到一些问题,不知如何选择?烦请知道的朋友指导一下,本人万分感谢!我们公司生产的材料有: 碳钢ASTM A216,ASMT A352,合金钢ASTM A217,不锈钢ASTM A351,双相钢ASTM A995光谱分析方法标准有:ASTM E1086,GB/T 11170,ASMT E415,GB/T 4336我是根据光谤分析方法选,还是参照光谱仪测量范围选,还是参照材料成分范围选?

  • 宝刀未老,光辉岁月, 雷贝拉唑钠肠溶片有关物质方法学部分

    项目:有关物质(3.2.P.5.2.3)检查方法:HPLC法试验条件:色谱柱(柱长:250mm,内径:4.6mm,填料:C18,填料粒径:5μm)月旭色谱柱:SN:W10212097;PN:weL518425。UV检测器(检测波长:290nm)柱温:30℃流动相:0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60)流速:1.0ml/min运行时间:约30min具体试验操作:取含量测定项下的细粉适量(约相当于雷贝拉唑钠50mg),精密称定,置50ml量瓶中,加0.05mol/L氢氧化钠溶液20ml,超声溶解,放冷至室温,用甲醇稀释至刻度,摇匀,在3000rpm下离心10分钟,取上清液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml,用0.05mol/L氢氧化钠溶液-甲醇(2:3)稀释至100ml,作为对照溶液。精密量取对照溶液10μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%~25%;再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的2倍。对照溶液中的主峰面积As、供试品溶液中各杂质的峰面积Ai均通过自动积分测定,以各杂质峰面积与对照溶液主峰面积的比值计算得出各杂质的含量,总杂为各杂质和。计算公式:各杂质的量(%)=Ai/As杂质总量(%)=∑i3.2.P.5.3.2 有关物质因本品10mg和20mg规格处方一样,有关物质研究试验主要以规格为10mg样品进行。有关物质检查方法验证概要项目验证结果流动相选择0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60)。专属性各破坏条件下,产生的杂质与主成分能够有效分离,主成分峰未检出不纯物。线性和范围无相关研究内容。定量限、检测限雷贝拉唑钠的保留时间大约为9.3分钟,在±1分钟的时间范围计算基线噪音约为0.027,当S/N≒3时,雷贝拉唑钠的检测浓度为0.0125μg/ml,检测限为0.125ng,当S/N≒10时,定量限浓度为0.050μg/ml,定量限为0.50ng,准确度无相关研究内容。精密度主峰面积和保留时间精密度RSD值(n=6)均小于2.0%。溶液稳定性室温放置8小时稳定性较好,主峰面积的RSD值为0.16%,归一化含量RSD值为0.13%,均小于2.0%。耐用性流动相成分比例±2%;检测波长285nm~290nm;柱温为室温25℃~35℃,流速为1.0±0.05ml/min,pH值为7.0±0.2,磷酸盐浓度0.05±0.002mol/L。有关物质检查上市品和自制品均符合规定。3.2.P.5.3.2.1 流动相选择参照新药转正标准第73册收载的雷贝拉唑钠肠溶片质量标准WS1-(X-117)-2006Z有关物质检查项(检测波长290nm)、雷贝拉唑钠肠溶片进口药品质量标准(JX19990087)有关物质检查项检,本品有关物质检查项流动相同含量测定,即0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60),流动相选择试验结果见含量测定流动相选择试验结果。3.2.P.5.3.2.2方法专属性(色谱图见附件26~62)因本品10mg和20mg规格处方一致,专属性试验以10mg规格进行研究。(1)溶剂和空白辅料试验(色谱图见附件26~29)本品有关物质测定供试液的溶剂为0.05mol/L氢氧化钠溶液-甲醇(2:3)。精密称取处方量辅料0.6001g,置50ml量瓶中,加0.05mol/L氢氧化钠溶液

  • “色”路蹒跚,涓流成溪,雷贝拉唑钠肠溶片有关物质之杂质谱汇总分析

    “色”路蹒跚,涓流成溪,雷贝拉唑钠肠溶片有关物质之杂质谱汇总分析

    此篇文章,相对于杂质谱分析是个综述性质的。项目:有关物质试验条件及操作检查方法:HPLC法试验条件:色谱柱(柱长:250mm,内径:4.6mm,填料:C18,填料粒径:5μm)月旭色谱柱:SN:W10212097;PN:weL518425。UV检测器(检测波长:290nm)柱温:30℃流动相:0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60)流速:1.0ml/min运行时间:约30min具体试验操作:取含量测定项下的细粉适量(约相当于雷贝拉唑钠50mg),精密称定,置50ml量瓶中,加0.05mol/L氢氧化钠溶液20ml,超声溶解,放冷至室温,用甲醇稀释至刻度,摇匀,在3000rpm下离心10分钟,取上清液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml,用0.05mol/L氢氧化钠溶液-甲醇(2:3)稀释至100ml,作为对照溶液。精密量取对照溶液10μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%~25%;再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的2倍。对照溶液中的主峰面积As、供试品溶液中各杂质的峰面积Ai均通过自动积分测定,以各杂质峰面积与对照溶液主峰面积的比值计算得出各杂质的含量,总杂为各杂质和。计算公式:各杂质的量(%)=Ai/As杂质总量(%)=∑i1.专属性试验,主要是分析色谱条件能否满足分离出更多的杂质,以及色谱峰参数符合药典要求。有已知杂质更好,没有,就只能进行破坏产生杂质,分析汇总结果,列出杂质谱。一般做法就是以相对保留时间列表统计,然后再进行物理平衡,这样能从侧面验证,杂质检出的最大限量。举例:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292237_448395_1621890_3.png物料平衡,主要以响应值来进行平衡,如:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292239_448396_1621890_3.png杂质谱做出来了就要和原研上市品比较,主要考察杂质的个数以及对应情况,如:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292241_448397_1621890_3.png最好,直观比较,用工作站把各色谱峰进行比较,如:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292242_448398_1621890_3.png其他项目,我在这个月的原创里面谈了很多,如检出限定量限、精密度、稳定性等,就不谈了。2.稳定性考察的杂质谱比较,主要考察新增杂质个数及含量变化,若样品不稳定,也同条件下进行上市品考察比较,如:【检查】有关物质 本品有关物质检查采用高效液相色谱法,并对方法进行了方法学验证,验证试验结果均符合要求。本品流动相选择试验结果显示,以0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇 (40:60)为流动相能满足本品有关物质检查要求;根据本品专属性试验统计结果,将检测波长选择为290nm。限度确定:经过加速试验和长期试验,本品在加速条件为温度为40±2℃、相对湿度为75±5%加速试验条件下,考察至2个月时,本品有关物质变化情况为单杂在0.7%~1.7%,总杂在0.9%~5.4%(总杂限度为3.5%);温度为30±2℃、相对湿度为65±5%加速试验条件下,考察至6个月时,本品有关物质变化情况为单杂在0.7%~1.3%,总杂在0.9%~1.9%;长期试验条件下考察至18个月,本品有关物质变化情况为单杂在0.7%~0.9%,总杂在0.9%~1.3%。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292246_448399_1621890_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292247_448400_1621890_3.png再直观作图,杂质谱统计也要做就不累述了。作图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292250_448401_1621890_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292250_448402_1621890_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292252_448403_1621890_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292253_448404_1621890_3.png这样作图就很直观了,审批的老师看起来也不吃力,就有好运哈。说了半天,整张美图看看:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292257_448405_1621890_3.png总结:1.明确研究项目内容及要点,结合ICH以及相关国内的指导原则,规划试验项目及进展;2.每个项目分解后总结,就如涓流成溪一样,说明您要表达的试验意图,最好表图结合直观表达;3.开展一个项目,就如有关物质,要准备好至少两根同型号的色谱柱,还有其他主流品牌的,特殊色谱柱除外;这样有几大好处,如杂质谱好归属

  • 马尔文激光粒度仪上用的烧杯是特殊的吗

    大家好!我们公司用的是马尔文ms2000的激光粒度仪,我记得工程师调试的时候说那上面的那个烧杯好像是什么石英的,是抗超声的,但是我在网上看到石英的好像也没有比普通的更抗超声啊,而且石英的还蛮贵的,不知道有没有哪位高手确实知道这烧杯的价值,普通的烧杯如果能代替的话,钱就省老了,哈哈

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