植物互作研究中的难点和MST的解决方案
在植物领域的互作研究中,可能会遇到各种困难:1.蛋白与小分子互作:植物信号通路研究中常涉及到膜蛋白与离子/激素类等小分子(1kD以下)的互作,分子量差异大,互作检测信噪比低;2.难纯化:植物蛋白原核表达后常处于包涵体内,较难提纯;转基因植物蛋白表达量低,难纯化,且植物自发荧光高;GFP融合表达蛋白,无法纯化;体外缓冲液条件下无互作3.竞争结合实验:传统的竞争结合实验(Pull Down,BiFC等)操作步骤繁琐,假阳性高,样品消耗量大,且无法定量分析结合同一个目标的两种或以上分子的亲和力;4.蛋白质和核酸互作:常规EMSA的检测方法步骤繁琐,且涉及到放射性同位素等有害物质,同时无法进准确定量;RNA易降解;5.样品准备周期长,处理繁复,样品珍贵且数量少。传统互作实验样品消耗量大这些问题均可使用MST分子互作技术一一解决!