漆黄素

HPLC法测定胃力片中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量张红霞，金艺，许海燕，赵怀清(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016)摘要：目的建立胃力片中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱：Diamonsil c18(4．6 mm×200 mm，5弘m)，以甲醇一体积分数为0．1％的磷酸水溶液(体积比为82：18)为流动相，流速：1．0 mL·min～，柱温：35℃，检测波长：254 nm。结果大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1．42～12．79、2．02～18．14、1．28～11．52、0．76～8．36 mg·Lo内呈良好的线性关系，相关系数分别为O．999 1、O．999 4、O．999 0和0．999 6，平均回收率分别为102。7％(RSD=l。0％，魁=9)、10l。2％(RSD=2．7％，露=9)、99．4％(RSD=1。6％，n=9)和97．9％(RSD=2．8％，咒=9)。结论本方法可作为胃力片质量控制方法之一。关键词：胃力片；大黄酸；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚；高效液相色谱法http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207241901_379466_2355529_3.jpg

[align=center]茶黄素[/align][align=center] 邱雪[/align][align=left]摘要：[font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]茶黄素是一种金黄色色素，是茶叶发酵的产物[/back][/color][/font][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]。其在人体的身体健康保健中有不可忽视的作用。[/back][/color][/font][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]这篇文章将从多个方面向大家介绍茶黄素。并且介绍一些检测方法[/back][/color][/font][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]检测其在[/back][/color][/font][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]含量。[/back][/color][/font][/align][align=left][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]关键词：理化性质；应用；限量；检测；标准[/back][/color][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]1.[/back][/color][/font][font='arial'][color=#333333][back=#ffffff]前言[/back][/color][/font][/align]茶黄色素又称茶黄素，是存在于红茶中的一种金黄色色素，是茶叶[url=https://baike.baidu.com/item/%E5%8F%91%E9%85%B5/661835][color=#000000]发酵[/color][/url]的产物。在生物化学上，茶黄色素是一类多酚羟基具苯骈酚酮结构的物质，是第一个从茶叶中找到具有确切药理作用的化合物。茶黄色素占干茶重量的0.5%到2%，且取决于红茶加工的方法。茶黄色素在茶汤中鲜亮的颜色和浓烈的口感方面，起到了一定的作用，是红茶的一个重要的质量指标。茶黄色素以多酚类物质、[url=https://baike.baidu.com/item/%E5%84%BF%E8%8C%B6%E7%B4%A0][color=#000000]儿茶素[/color][/url]为主要成分，还含有[url=https://baike.baidu.com/item/%E6%B0%A8%E5%9F%BA%E9%85%B8][color=#000000]氨基酸[/color][/url]、维生索C、[url=https://baike.baidu.com/item/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0E][color=#000000]维生素[/color][/url][url=https://baike.baidu.com/item/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0E][color=#000000]E[/color][/url]、[url=https://baike.baidu.com/item/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0A%E5%8E%9F][color=#000000]维生素[/color][/url][url=https://baike.baidu.com/item/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0A%E5%8E%9F][color=#000000]A[/color][/url][url=https://baike.baidu.com/item/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0A%E5%8E%9F][color=#000000]原[/color][/url]、[url=https://baike.baidu.com/item/%E9%BB%84%E9%85%AE][color=#000000]黄酮[/color][/url]及[url=https://baike.baidu.com/item/%E9%BB%84%E9%85%AE%E9%86%87][color=#000000]黄酮醇[/color][/url]等。茶黄素是茶色素的主要成分，共有12种组分，其中茶黄素、[url=https://baike.baidu.com/item/%E8%8C%B6%E9%BB%84%E7%B4%A0-3-%E6%B2%A1%E9%A3%9F%E5%AD%90%E9%85%B8%E9%85%AF/9600430][color=#000000]茶黄素[/color][/url][url=https://baike.baidu.com/item/%E8%8C%B6%E9%BB%84%E7%B4%A0-3-%E6%B2%A1%E9%A3%9F%E5%AD%90%E9%85%B8%E9%85%AF/9600430][color=#000000]-3-[/color][/url][url=https://baike.baidu.com/item/%E8%8C%B6%E9%BB%84%E7%B4%A0-3-%E6%B2%A1%E9%A3%9F%E5%AD%90%E9%85%B8%E9%85%AF/9600430][color=#000000]没食子酸酯[/color][/url]、茶黄素-3,3’-双没食子酸酯和茶黄素-3’-没食子酸酯是4种最主要的茶黄素。在茶叶加工中主要由简单儿茶素和[url=https://baike.baidu.com/item/%E6%B2%A1%E9%A3%9F%E5%AD%90%E5%84%BF%E8%8C%B6%E7%B4%A0/9802086][color=#000000]没食子儿茶素[/color][/url]配对氧化缩合而成。茶黄素类的发现与红茶发酵过程的研究密切相关。[font='calibri'][size=13px][1][/size][/font]2.[font='b5+华光楷体_cnki'][size=18px] [/size][/font]分子结构和理化性质[font='calibri'][size=13px][1][/size][/font]茶黄素是一类具有苯并卓酚酮结构化合物的总称[font='calibri']?[/font]其中茶黄素（theaflavin[font='calibri']?[/font]TF1）、茶黄素-3-没食子酸酯（theaflavin-3-gallate[font='calibri']?[/font]TF2A）、茶黄素-3′-没食子酸酯（theaflavin-3′-gallate[font='calibri']?[/font]TF2B）和茶黄素双没食子酸酯（theaflavin-3[font='calibri']?[/font]3[font='calibri']′[/font]-digallate[font='calibri']?[/font]TF3）是4种主要的茶黄素[font='calibri']?[/font]其化学结构如图1。茶黄素的红外光谱表明[font='calibri']?[/font]所有茶黄素的最大吸收都出现在380nm和460nm。茶黄素纯物呈橙黄色针状结晶[font='calibri']?[/font]熔点237～240[font='宋体']℃[/font][font='calibri']?[/font]易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇和乙酸乙酯难溶于乙醚不溶于三氯甲烷和苯。茶黄素溶液呈鲜明的橙黄色水溶液呈弱酸性pH 约5．7[font='calibri']?[/font]颜色不受茶提取液 pH 影响[font='calibri']?[/font]但在碱性溶液中有自动氧化的倾向且随pH的增加而加强。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107161930268731_216_1608728_3.png[/img]图13. 茶黄素的药理功效[font='calibri'][size=13px][2][/size][/font]3.1 抗氧化自由基学说认为，正常人体内的自由基与抗氧化物质处于平衡状态。 当人体器官和组织的细胞膜在自由基过量时便可能遭受其进攻，引起脂质过氧化、蛋白质变性、DNA 链断裂、细胞解体、机体衰老，并可能诱发肿瘤等恶性疾病。 体内过量的超氧阴离子及双氧水等，是产生毒副作用的重要因素。 细胞中的主要抗氧化酶超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）能够将 超 氧 阴 离 子 催 化 分 解 为 双 氧 水 （Hydrogen Oxygen，H2O2），H2O2 在过氧化氢酶（Catalase，CAT）或硒谷胱甘肽过氧化物酶 （Selenium-glutathione Peroxidase，Se-GSH-Px）催化作用下迅速转化为无毒的 O2 和 H2O。 TFs 具有良好的抗氧化性，如 TFs可以清除自由基，防止脂质过氧化，提高 SOD、谷光 甘 肽 硫 转 移 酶 （Glutathione S -Transferase，GST）、醌还原酶（Quinone Reductase，QR）的活性，增强人体免疫力。在低密度脂蛋白 （Low Density Lipid，LDL）模型中，TFs 能够抑制二价铜离子介导的脂质过氧化。 研究表明，巨噬细胞中 LDL 氧化程度与金属离子浓度有关，金属离子浓度升高，LDL 氧化程度也升高，而 TFs 能抑制 LDL 的氧化，这与它能螯合金属离子有关。 YOSHIDA 等和 HAN 等用 TFs 类化合物分别处理鼠巨噬细胞和人内表皮细胞，以考察细胞 LDL 氧化能力，结果显示 TFs能与脂质氧合酶的活性中心铁结合，从而降低脂质氧合酶的活性，并抑制细胞 LDL 氧化。另外，TFs对外源性因子引起的生物膜脂质过氧化反应有较好的效果。如持续高强度的有氧运动会使肌肉酸痛肿胀，每天给予高强度有氧运动的男大学生1760 mg 富含茶黄素的红茶提取物，持续 9 天，发现其能够缓解酸痛肿胀，即茶黄素能够提高肌肉损伤恢复能力并降低氧化应激程度。茶黄素作为天然植物多酚类成分，可形成氢自由基，淬灭体内产生的自由基，从而保护组织，起到延缓衰老、抗突变、抗癌、杀菌消炎、防治心血管疾病和动脉粥样硬化等功能， 故在医药领域得到人们广泛关注。因此，加强茶黄素类成分抗氧化机理研究与临床用药的应用显得尤为迫切。3.2 抗心脑血管疾病 心血管疾病是心脏和血管疾患的总称，包括高血压、冠心病、脑血管疾病（中风）、周围血管疾病、血栓性疾病、动脉粥样硬化、心力衰竭、心脏病等。经济转型、城市化、工业化及全球化带来生活方式的改变，包括吸烟、缺乏活动、不健康饮食是导致心血管疾病增加的重要因素。每年死于心血管疾病的人数多于其它任何病因，成为全球头号死因。 MARON 等设计了一种含有75 mg TFs、150 mg儿茶素和150 mg其他多酚的胶囊， 给予240 名 18 岁以上高胆固醇成年人群低脂饮食 12周，且每日服用该胶囊。结果表明试验组能够使总胆固醇及低密度脂蛋白分别降低 11.3%和 16.4%，高密度脂蛋白与甘油三酯增长2%左右，降脂效果优于不含 TFs 的绿茶多酚胶囊。茶黄素不仅通过抑制脂肪酸合成、 激活脂肪酸的氧化消耗来降低脂肪积累，也通过肝激酶 B（Liver Kinase B1，LKB1）与活性氧途径激活 5'—磷酸腺苷 （Adenosine 5'-Monophosphate，AMP）依赖的蛋白激酶（Activated Protein Kinase，AMPK）达到抑制乙酰辅酶 A 羧化酶，降低肝脏脂质累积的作用。在试验组与对照组在粪便量上没有显著差异的情况下，茶黄素能够抑制高脂饮食肥胖鼠体重增加及内脏脂肪累积。茶黄素可以明显抑制由胶原、ADP、前列腺素 H2（PGH2）/血栓素 A2（TxA2）（TP）受体激动剂 U46619 等多种刺激剂引起的人体血小板聚集，且呈现出剂量依赖效应。茶 黄 素 还是血小板非受体酪氨酸激酶（NonReceptor Cytoplasmic Tyrosine Kinases，SYK）胶原引起的血小板活性的一个重要的靶点抑制剂，茶黄素组和对照组相比，小鼠肠系膜动脉血管形成血栓性堵塞的时间明显延长，充分证明了茶黄素对血小板功能的抑制，且优于目前临床使用的抗血小板药物，如存在着出血、引起胃肠道不适等副作用的药物阿司匹林。3.3 抗炎症作用炎症（Inflammation）是机体对于刺激的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍，包括感染引感染性炎症及非感染性炎症。任何能够引起组织损伤的因素，如致炎因子 （Inflammatory Agent）都可成为炎症的原因。每日口服 5 mg/kg 剂量的TF-3，3’-G 能够显 著改善三硝基苯磺酸（Trinitro Benzene Sulfonic Acid，TNBS）诱导的结肠炎，降低结肠上皮粘膜肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF -α）、 白细胞介素 -12（Interleukin 12，IL-12）、人干扰素-g（Interferon-g， IFN-g） 及诱导型一氧化氮合酶 （Inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS）基因与蛋白表达水平。同时茶黄素能抑制佛波酯促使的 TNF-α、白细胞介素 1β（Interleukin -1 beta，IL-1β）及白细胞介素6（Interleukin 6，IL-6）的活性。 TFs 能够有效阻止脂多糖 （Lipopolysaccharide，LPS） 诱导的巨噬细胞促炎反应，包括抑制IL-6、单核细胞趋化蛋白（Monocyte Chemoattractant Protein-1，MCP-1）、细胞间粘附分子-1（Intercellular Adhesion Molecule-1，ICAM-1）的表达，并有效阻止 LPS 诱导的核因子抑制蛋白（Inhibitor of Nuclear Factor kappa B alpha，IκBα）与核易位蛋白（Nuclear Translocation of REL-Associated Protein，RelA），胞外信号调控激酶（Extracellular Signal Regulated Kinase，ERK1/2）、c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun-N-Terminal Kinase，JNK）及 p38 丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-Activated Protein Kinase，p38 MAPK）的表达[14]；在急性肺损伤小鼠模型中，TF-3，3’-G 通过减少促炎因子降低急性肺损伤（Acute Lung Injury，ALI），抑制 LPS 诱导的NK及 p38 MAPK 丝裂原活化蛋白激酶的表达。风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）或骨关节炎（Osteoarthritis，OA）最明显的特征是关节软骨的损伤。引起关节损伤和疼痛的 IL-1β 和IL-18 在 RA 和 OA 中促炎症因子发挥重要作用。在 IL-1β 诱导建立的 OA 细胞模型中，TF-3，3’-G 能够明显改善 OA 软骨细胞形态，上调软骨细胞分子标志物 II 型胶原（Type II Collagen，Col II）mRNA 的表达， 还可以下调炎症因子 IL-1β 与IL-6 mRNA 的表达，降低炎症诱导酶环氧化酶（Cyclooxygenase-2，COX-2）蛋白表达量；并可增强软骨细胞合成因子活性、 减弱分解因子活性并抑制细胞炎症反应， 有效延缓大鼠软骨细胞炎性退变进程。 同时，茶黄素还可显著下调由血管紧张素 II（Angiotensin II，AngII） 诱导的促炎因子 IL -6mRNA 的表达，降低由 AngII 刺激产生的大鼠血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell，VSMC）中ROS水平，达到抵抗 AngII 引起的大鼠VSMC 细胞炎症作用。慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）的突出特征是慢性炎症致气道阻塞，引起不完全可逆的气流受限，从而引发一系列临床症状。以往的研究表明，气道黏液高分泌是导致气流受限的危险因素。在刺激气道的各种炎性因子中，中性粒细胞弹力蛋白酶（Neutrophil Elastase，NE）被认为是肺炎性级联反应的终效应分子，以及炎症气道微生态平衡的重要恶化性推动因素，茶黄素被证明能够起到抑制气道黏液高分泌的作用。此外以高频雾化的方式使大鼠吸入茶黄素乳酸-羟基乙酸共聚物（Poly Lactic Co Glycolic Acid，PLGA）纳米粒，能够抑制香烟引起的炎性气道黏蛋白（Mucoprotein 5AC，MUC5AC）高分泌作用。3.4 抗病毒与抗菌作用严重急性呼吸系统综合症（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）由 SARS 冠状病毒引起，该病毒属于包膜病毒，包含正极性单链 RNA，其所含有的一个开放的阅读框用于编辑两个重叠的多聚蛋白，PP1a（Polyprotein-1a，450 kDa）与PP1ab（Poplyprotein-1ab，750 kDa）负责病毒的复制。同时冠状病毒都编辑生成 Papline 类似蛋白及胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin，3CLPro）类似蛋白，用于病毒成熟过程中蛋白水解加工。 Papline 类似蛋白水解酶在 PP1a 蛋白上只含不超过 2 个的剪切位点，而 3CLPro 蛋白酶在PP1a 与 PP1ab 内在区域含有至少 11 个剪切位点。在720个筛选的天然化合物中仅发现 TF-3，3’-G 能够有效抑制3CLPro。并且 SARS 冠状病毒在胃肠道中的复制非常活跃， 红茶中的茶黄素类化合物具有预防该病毒对人体的侵染的应用潜力。1%的乳酸（pH4.0）能显著抑制对于单纯性 1型与 2 型疱疹病毒所引起的生殖器溃疡，但当pH4.5 时，则失去抑制活性状态。 茶黄素特别是TF-3，3’-G 能够在 5.7pH4.5 区间独立发挥作用，并在非洲绿猴肾细胞及人非小细胞肺癌细胞 A549 中得到验证。同时茶黄素还能够抗流感病毒，通过与血凝素 HA2 亚基结合，抑制病毒的神经氨酸酶活性从而抵抗高致病性禽流感（H5N1）病毒的感染。并且，TFs 可作为第二代杀微生物剂用于预防人类免疫缺陷毒（HumanImmunodeficiency Virus，HIV）的性传播，在高浓度时，还能抑制逆转录酶的活性。 白念珠菌（C.Albicans）是一种腐物寄生菌，作为机会性条件致病菌，平时生存于人体的皮肤、粘膜、 消化道及其他脏器中。当机体抵抗力降低时，白色念珠菌就会繁殖，达到一定量时，人体就会发病，通过微感染而引起的粘膜念珠菌病，对癌症、HIV 及重症病人还会造成致命性打击。茶黄素对白念珠菌 NCTC 3255 和 NCTC 3179 能够起到很强的抑制作用，其最低抑制浓度为1024 μg/mL，联合儿茶素时其最低抑菌浓度降为128 μg/mL。3.5 抗肿瘤在肝癌细胞体外处理中， 茶黄素类化合物能够通过抑制 STAT3 信号转导与转录激活因子磷酸化，并进一步阻止其下游抗凋亡蛋白 BCL-2 与生存素（Survivin）及入侵相关蛋白 MMP-2、MMP-9 来达到显著抑制肝癌细胞的迁移、入侵的作用，诱使其凋亡。此外，茶黄素类化合物对人类白血病细胞系 HL-60 与 K-562 呈剂量依赖性抑制，阻止细胞G1 期，活化 Caspase 3 和 Caspase 8，下调 BCL-2，同时上调 BAX 蛋白。4.检测[font='calibri'][size=13px][1][/size][/font]4.1 Roberts 法Roberts 法是根据茶黄素和一部分茶红素（TRsⅠ型）溶解于乙酸乙酯或4-甲基-戊酮（IBMK）这部分可利用其能溶于碳酸氢钠溶液而分离茶红素（TRsⅡ型）留在水层。该方法存在重复性差、测定含量值偏低的缺点[font='calibri']?[/font]但其方法简单、试剂价格便宜且同时测定茶红素的含量[font='calibri']?[/font]因此被广泛采用。4.2 a-氨基乙基二苯酸酯（Flavognost）试剂分析法Hiton 提出的一种快速测定方法。根据茶黄素分子中的苯并卓酚酮核可以与 Flavognost 试剂产生特异性反应产生绿色络合物测定其吸光值换算成茶黄素含量。与 Roberts 法相比[font='calibri']?[/font]该方法具有较好的重现性已被Ellis推荐为国际红茶最低质量标准的检测方法。但该法受到提取液、提取温度、水的pH值等因素的影响[font='calibri']?[/font]Flavognost 试剂仅与茶黄素顺式上的两个羟基结合[font='calibri']?[/font]使测定结果偏低[font='calibri']。[/font]同时Flavognost试剂不易购得。4.3 氯化铝比色法Likoleche-Nkhoma J W 等用 AlCl3 代 替Flavognost 试剂[font='calibri']?[/font]铝盐与茶黄素复合产生红色[font='calibri']?[/font]于波长525nm 具有最大吸收根据吸光值折算成茶黄素含量。该方法的测定值与 Flavognost 方法测定结构没有显著差异且铝盐的价格较便宜[font='calibri']?[/font]但样品中加入过量的铝盐会产生浑浊。4.4 Sephadex LH-20柱层析（Column Chromatography[font='calibri']?[/font]CC）法此方法是竹尾忠一提出的。该方法能有效地分离茶黄素而且对茶黄素的主要组分能定量[font='calibri']?[/font]但操作复杂。4.5 Whitehead 法Whitehead D L 等利用色素极性大小差异[font='calibri']?[/font]提出的一种快速测定茶黄素总量的方法[font='calibri']?[/font]该方法适于实验室和工厂的常规检测[font='calibri']?[/font]但测量值偏高。4．6 高效液相色谱法（High performance LiquidChromatography[font='calibri']?[/font]HPLC）Bailey R G 等使用光电二级管列检测器的反相 HPLC 研究红茶溶出物的性质[font='calibri']?[/font]4种茶黄素能够得到分离纯化[font='calibri']?[/font]提出了 HPLC 法测定茶黄素主要组分及其它物质的方法。HPLC 法更精确[font='calibri']?[/font]并能使各茶黄素单体得到较理想的分离。但该法需要高纯度的茶黄素标样。4.7 毛细管电泳法（Capillary Electrophoresis[font='calibri']?[/font]CE） Bee B L 等首次采用毛细管电泳测定儿茶素类化合物和茶黄素类化合物。Wright L P 等用非水相毛细管电泳测定红茶中的4种主要茶黄素[font='calibri']?[/font]并对有机溶剂的组成和电解质浓度对分离效果的影响进行了研究[font='calibri']?[/font]确定了最佳的分离溶剂组成为 V（乙腈）[font='宋体']∶[/font]V （甲醇）[font='宋体']∶[/font]V （乙酸）＝71[font='宋体']∶[/font]25[font='宋体']∶[/font]4和90mmol／L 的醋酸铵[font='calibri']?[/font]10min 内实现了茶黄素的基线分离[font='calibri']?[/font]与常规毛细管电泳相比具有显著的优势。4．8 高速逆流色谱法（High Speed CountercurrentChromatography[font='calibri']?[/font]HSCCC） 高速逆流色谱法可避免样品与固体载体的化学反应和死吸附等缺点[font='calibri']?[/font]每次分离样品结束后[font='calibri']?[/font]管道中的残留溶剂均可以冲出[font='calibri']?[/font]不会对后续分离产生任何影响[font='calibri']?[/font]因此高速逆流色谱法分离样品具有高的回收率。 总之茶黄素的分析测定方法各有利弊[font='calibri']?[/font]可以根据具体情况选择一种切实可行的分析方法。5.结语 茶黄素总的来说是对人身体有益，但是要适量食用，身体保健从平时做起。参考文献：[1][font='b5+华光楷体_cnki'][size=18px][color=#000000] [/color][/size][/font]王洪新 孙军涛 [J]食品与生物技术学报 茶黄素的制备、分析、分离及功能活性研究进展[2] 涂云飞 茶黄素药理功效及分离纯化研究进展 [j] 健康与文化[3] MARON D J， LU G P， CAI N S， et al. Cholesterol-loweringeffect of a theaflavin-enriched green tea extract [J]. Archives of Internal Medicine， 2003， 163(12)： 1448-1453[4] KUNDU T， DEY S， ROY M， et al. Induction of apoptosis in human leukemia cells by black tea and its polyphenol the aflavin [J]. Cancer Letter， 2005， 230(1)： 111-121

叶黄素是人类日常食用生果及蔬菜时可吸收到的营养素，但吸收利用率一般较低。如果缺乏叶黄素，可服用补充剂。如果是消化系统较差的老年人，可以使用舌下的喷剂来补充叶黄素。早在 1996 年叶黄素已被加入到膳食补充剂。另外，过量吸取叶黄素会对肝脏造成多余的负担，建议用量每日大约为 12 毫克。一般在绿叶的蔬菜中可以找得到。叶黄素本身是一种抗氧化物，并可以吸收蓝光等有害光线。[align=center][img=,324,276]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101153518939_6860_932_3.jpg!w324x276.jpg[/img][/align][color=#646464]本实验主要针对果汁中叶黄素的测定[/color][align=center][color=#646464][img=,600,405]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101153577234_9508_932_3.jpg!w640x433.jpg[/img][/color][/align][color=#646464][color=#646464]参考标准：《GB 5009.248-2016食品安全国家标准 果汁中叶黄素的测定》[/color][/color][b][color=#646464] [/color]萃取溶剂称取 1g BHT（二丁基羟基甲苯），以 200mL 环己烷溶解，加入 400mL 乙醚和 400mL 正己烷，混匀。1、样品提取称取 10g 果汁试样于 50mL 离心管中，加入 10mL 萃取剂，避光旋涡震荡提取 3min，4000r/min 离心 3min，重复提取两次，合并三次萃取液，室温减压浓缩至近干，用 3mL 萃取溶剂溶解待净化。2、样品净化Welchrom Alumina-N， 500mg/3mL活化： 5mL 萃取溶剂淋洗，保持柱体湿润，弃去。上样：将上述萃取液，以 1滴/s 的速度通过Welchrom Alumina-N 柱至鸡心瓶中。洗脱：用 3mL 萃取液洗脱至鸡心瓶中，室温减压浓缩近干，用甲醇定容至 10mL，过 0.45μm 滤膜待 HPLC 分析。3、仪器条件HPLC条件色谱柱：Ultimate AQ-C18 4.6×150mm，5μm仪器型号：Waters2695+PDA2996流动相：甲醇-乙腈=20：80柱温：35℃流速：1.0mL/min检测波长：445nm进样体积：10μL4、实验图谱及结果[/b][align=center][img=,600,488]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101326381133_6340_932_3.jpg!w640x521.jpg[/img][/align][align=center]图1 叶黄素样品加标 5mg/kg 液相色谱图[/align]由图1可看出经 Alumina-N 柱净化，采用月旭 Ultimate C18 色谱柱检测峰形良好，保留时间稳定。[color=#646464][/color][align=center][color=#646464][img=,600,486]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101154109028_1819_932_3.png!w640x519.jpg[/img][/color][/align]图2 叶黄素样品加标 10mg/kg 液相色谱色谱图[align=center][b][img=,600,111]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101154198884_9526_932_3.jpg!w640x119.jpg[/img][/b][/align][align=center]表1 叶黄素加标回收实验结果(n=10)[/align][b]由表1可知，采用月旭 Welchrom Alumina-N 小柱结合液相色谱法检测叶黄素，加标量为 5mg/kg 和 10mg/kg 的样品进行了检测，回收率在86.29%~97.27%，能够满足检测要求。5、实际样品检测为了保证果汁样品的代表性，从多家超市以及菜场选择具有代表性的 10 个果汁样品进行检测，结果均为未检出。6、结论本实验建立了叶黄素检测的 HPLC 检测方法，对于加标量为 5 和 10mg/kg 的样品进行了检测，回收率在 86.29%~97.27%，固相萃取柱方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测食品中的叶黄素的含量。7、订购指南[/b][align=center][img=,600,524]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101154281505_9762_932_3.jpg!w581x508.jpg[/img][/align]

求叶黄素的红外光谱，十分感谢！叶黄素资料：英文名称: Lutein 中文名称: 叶黄素 CAS号: 127-40-2 分子式: C40H56O2 分子量: 568.88 纯度: 98.00% 别名：α-Carotene-3,3'-diolβ, ε-carotene-3,3′-diolβ, ε-caroteneLutein [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812252139_126260_1781331_3.jpg[/img]

何莉萍CNS_08.148_核黄素[align=center][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]目录[/color][/size][/font][/align][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素的物理性质[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]1[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]2[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素的光物理和光化学性质[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]第二章核黄素的生理功能[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]2[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]1[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]4[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素与铁代谢[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]2[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]5[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]核黄素与心血管疾病[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]第三章 核黄素的应用[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]3[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]1[/size][/font][/url][font='等线'][size=14px]5[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]6[/size][/font][font='等线'][size=14px]7[/size][/font][url=#][font='等线'][size=14px].[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]微生物法[/size][/font][/url][url=#][font='等线'][size=14px]参考文献[/size][/font][/url] [font='等线'][size=14px]9[/size][/font][align=center][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第一章 核黄素的理化性质[/color][/size][/font][/align][size=16px]核黄素是一种水溶性[/size][font='times new roman'][size=16px]B[/size][/font][size=16px]族维生素[/size][size=16px]。[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]920[/size][/font][size=16px]年第[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px]次发现[/size][size=16px]，[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]933[/size][/font][size=16px]年第[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px]次从卵蛋白中分离出来[/size][size=16px]，[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]935[/size][/font][size=16px]年核黄素的化学结构被鉴定[/size][size=16px]。[/size][size=16px]核黄素是人体新陈代谢酶系统的一个组成部分[/size][size=16px]，[/size][size=16px]也是生物生命活动中不可缺少的维生素之一[/size][size=16px]，[/size][size=16px]与人体内碳水化合物[/size][size=16px]、[/size][size=16px]脂肪及氨基酸代谢有着密切的关系[/size][size=16px]，[/size][size=16px]核黄素缺乏可以引起体内多种代谢障碍。[/size][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素的物理性质[/color][/size][/font][size=16px]水溶性维生素，但微溶于水，在[/size][font='times new roman'][size=16px]27.5℃[/size][/font][size=16px]下，溶解度为[/size][font='times new roman'][size=16px]12mg/100mL[/size][/font][size=16px]。可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液，在碱性溶液中容易[/size][size=16px]分[/size][size=16px]解，在强酸溶液中稳定。耐热、耐氧化。光照及紫外照射引起不可逆的分解。[/size][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素的化学性质[/color][/size][/font][size=16px]分子式为[/size][font='times new roman'][size=16px]C[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]17[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]N[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][size=16px]，化学结构式见图[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，具有一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物。橙黄色晶体，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]280℃即熔化分解。在平常的湿度下稳定，而且不受空气中氧的影响。微溶于水，溶液呈现出强的黄绿色荧光。不溶于有机溶剂，在强酸溶液中稳定；在碱性条件下或者暴露于可见光或紫外线中时不稳定。食物中的核黄素很容易吸收，但单独服用，则只有15%的吸收率。核黄素在生物体储存量不多，多余的在尿液中排出，使尿液呈鲜黄色。核黄素在生物界分布极广，各种组织中均含有核黄素，广泛地分布在所有的叶菜，温血动物和鱼的肉中，但各种食物的含量相差很大，每[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]一[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]百[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]克[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]食物含量低的只有0.01mg，高的可[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3.5mg，以肝脏含量最高，浅色蔬菜和薯类含量最低。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251438050080_5202_1608728_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][font='times new roman'][size=13px]1[/size][/font][size=13px]核黄素的化学结构[/size][/align][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素的光物理和光化学性质[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]在生物学上，核黄素具有重要作用，如：向光性，趋光性和光治疗，其本身又是一类重要的光敏化剂[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]，研究表明这些重要的光生物学过程大多与核黄素的激发态有关。由于核黄素的吸收波段很宽（从紫外到可见光）且系间窜越的量子产额较高（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Φ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ISC[/size][/font][font='arial'][size=16px]=[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]67[/size][/font][font='arial'][size=16px])[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]，故无论在生物体内还是体外的组织和器官，只要能透过光，就能激发产生激发态，并与细胞内的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]或其他组分发生反应，导致细胞死亡或加速衰老[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]研究发现，核黄素在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]337nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]激光作用下，可产生激发三重态；而在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]248nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]激光作用下，既可产生激发三重态，又可生成氧化性自由基，核黄素氧化性自由基比激发三重态具有更强的氧化性[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第二章核黄素的生理功能[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与生长发育[/color][/size][/font][size=16px]核黄素为机体健康和正常生长所必需，其形成的辅酶是许多氧化酶系统不可缺少的组成部分，在生物氧化过程中参与氢的传递，促进碳水化合物，蛋白质，脂肪，核酸的代谢。其缺乏可产生一些重要的影响，其中最主要的是生长障碍。杨焕民等人以[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px]日龄大鼠作实验时发现，低温下补充适量核黄素有利于生长激素和胰岛素的分泌，从而有利于生长；且通过增加肾上腺皮质束状带宽度及束状带和髓质细胞数，降低血清[/size][font='times new roman'][size=16px]T3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]T4[/size][/font][size=16px]皮质醇水平，促进机体冷适应[/size][size=16px]，[/size][font='arial'][size=16px]提高机体耐寒力。因此耐寒环境下适量补加核黄素有利于动物的生长[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。人体研究也得出相应的结论[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]：孕期核黄素摄入量与新生儿出生体重呈正相关，强化核黄素的食品能有效地改善小学生营养状况和促进其生长发育。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与铁代谢[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素的缺乏将导致人和动物铁吸收、储存、利用降低，其机制可能通过影响体内[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NAD[/size][/font][font='arial'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FMN[/size][/font][font='arial'][size=16px]氧化还原酶而起作用，核黄素缺乏时引起人和动物生长停滞，因而铁缺乏的同时，核黄素的严重缺乏将抑制儿童和幼龄动物对铁的需求，从而掩盖肌体铁的缺乏。因此，无论治疗核黄素缺乏病还是缺铁性贫血，同时补充铁和核黄素都是有益的[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]国内外大量的动物实验表明，核黄素缺乏可能通过影响小肠中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NADH[/size][/font][font='arial'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FMN[/size][/font][font='arial'][size=16px]氧化还原酶（即铁蛋白还原酶）活力而参与铁代谢[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][6][/size][/font][font='arial'][size=16px]，即核黄素缺乏可能影响到体内铁的吸收，从而导致缺铁性贫血[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（IDA）[/size][/font][font='arial'][size=16px]发生率的增多。人群调查证实，核黄素缺乏者的平均血红蛋白量[/size][/font][font='times new roman'][size=16px](Hb)[/size][/font][font='arial'][size=16px]与血清铁蛋白（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SF[/size][/font][font='arial'][size=16px]）浓度均低于正常者，且其贫血率及缺铁率高于核黄素营养状况正常者，全血谷胱甘肽还原酶活性系数与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Hb[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SF[/size][/font][font='arial'][size=16px]均呈负相关[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]在核黄素与铁同时缺乏的研究中,动物实验表明,核黄素缺乏对缺铁大鼠的铁状况不但不进一步协同加速恶化,相反起一定程度的缓解作用[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]其[/size][/font][font='arial'][size=16px]原因可能是核黄素与铁同时缺乏时,核黄素缺乏因明显地抑制了大鼠的生长,使体重增长缓慢、血容量扩充不明显,使机体对铁的需求相对降低,即核黄素缺乏对铁状况有“节约效应”。而单纯缺铁时,体重增长抑制远不如核黄素和铁同时缺乏时明显,血容量仍大量扩充,机体对铁的需求大,饲料又缺铁,就易出现铁营养状况的恶化。因此,二者同时缺乏时,核黄素缺乏通过其对生长的抑制作用而掩盖铁状况的恶化。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与癌[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]大量的流行病学和动物实验资料表明,核黄素等微量营养素具有防癌和抗癌作用。据调查发现[/size][/font][font='arial'][size=16px]：[/size][/font][font='arial'][size=16px]伊朗[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='arial'][size=16px]中国等地居民因核黄素缺乏或严重摄入不足导致慢性食道炎普遍存在或食管癌区域高发[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font][font='arial'][size=16px]。林英等研究也证实:补充核黄素组的食管癌前病人的食管上皮细胞增生转换的好转率和稳定率明显高于安慰剂组。可见核黄素可抑制食管上皮增生或促进其向正常转化[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。除影响上皮组织完整性外,核黄素还有抗突变作用,经[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Ames[/size][/font][font='arial'][size=16px]试验检测,核黄素是黄曲霉毒素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B1[/size][/font][font='arial'][size=16px]突变剂的很有效的拮抗物[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]12[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px] 周纯先[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]13[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]指出:小鼠腹腔注射核黄素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]kg[/size][/font][font='arial'][size=16px]以上及饮水含核黄素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]时,可显著降低[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HgCl2[/size][/font][font='arial'][size=16px]致小鼠微核作用 随后李建端等以大鼠作实验时发现,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RPMI1640[/size][/font][font='arial'][size=16px]培养基中添加核黄素([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]26[/size][/font][font='arial'][size=16px]～[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]130μmol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px])可显著抑制甲基苄基亚硝胺([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MBNA[/size][/font][font='arial'][size=16px])的致细胞突变作用[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]14[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与心血管疾病[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素通过黄素辅酶参与机体的生物氧化还原反应，抑制脂质过氧化，减少自由基的生成，保护心血管系统免受氧化损伤。而核黄素缺乏会激发细胞凋亡，造成正常细胞损伤，削弱了机体的抗氧化能力。研究表明，氧化应激的过度和机体抗氧化能力的不足是心血管疾病和其他疾病的发病机制之一[/size][/font][font='arial'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15[/size][/font][font='arial'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。单细胞凝胶电泳实验显示，冠状动脉疾病患者与正常健康者对照比较[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]损伤程度显著升高，而且损伤程度与总抗氧化能力呈负相关。冠心病患者总抗氧化能力下降，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]损伤增加，而且[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]损伤增加与年龄相关的抗氧化酶减少和修复能力的下降有关。核黄素作为抗氧化剂，可能有助于保护[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]免于受损。刘秀玲等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][16][/size][/font][font='arial'][size=16px]报道，适宜浓度的核黄素能降低过氧化氢诱导的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='arial'][size=16px]氧化损伤。殷慧群[/size][/font][font='arial'][size=16px]等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][17][/size][/font][font='arial'][size=16px]研究证明，[/size][/font][font='arial'][size=16px]通过核黄素干预后[/size][/font][font='arial'][size=16px],有助于保护冠状动脉血管内皮,维持内皮功能的完整性[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='arial'][size=16px]综上所述，核黄素是机体必需微量营养素之一，具有广泛的生理功能，世界卫生组织（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]WTO[/size][/font][font='arial'][size=16px]）将其列为评价人体生长发育和营养状况六大指标之一。但我国人均每日摄取入核黄素（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]VB2[/size][/font][font='arial'][size=16px]）不足[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='arial'][size=16px]尤见于儿童、青少年、孕妇，。因此，正确引导儿童的食物消费，优化膳食模式，增加富含核黄素等一些微量营养素食物的摄入，如：动物内脏，奶类，蛋类，豆制品及蔬菜，并对缺乏者采用适宜的干预措施和核黄素药物治疗，仍是当前营养工作中的一个重要环节。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第三章 核黄素的应用[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]1[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6] 核黄素与放射性黏膜炎[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6] [/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]肿瘤患者在放疗、化疗过程中容易出现口腔黏膜炎、肠黏膜炎、胃溃疡等，严重时可导致全身性感染，危及生命。对于中晚期鼻咽癌，同期放化疗已经成为标准的治疗模式。然而同期放化疗在杀伤肿瘤细胞的同时也造成对正常组织的损伤，尤其是黏膜炎加重，降低了部分患者的耐受性，增加了患者的痛苦。在实际临床工作中也可能因为耐受性的问题而调整治疗强度，中断、甚至停止治疗。因此在治疗期间防治黏膜炎已成为鼻咽癌同期放化疗过程中面临的主要问题之一。[/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄[/size][/font][font='arial'][size=16px]素类药物对治疗黏膜炎和口腔溃疡有较好的疗效[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]18[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font][font='arial'][size=16px]。蒋秀美等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20][/size][/font][font='arial'][size=16px]报道，核黄素可用于预防造血干细胞移植后口腔黏膜炎，使黏膜炎损伤程度减轻，恢复时间比较快。[/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素缺乏间接地削弱了机体的抗氧化功能，而补充核黄素则可能增加机体的抗氧化功能，从而可以很好地预防黏膜炎和口腔溃疡，提高了放疗、化疗患者的耐受力[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3.2 核黄素与秋季腹泻[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px]秋季腹泻是儿科最常见的疾病之一，估计我国[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]岁以下小儿中腹泻病平均 每年[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]．[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]次/人，而秋季腹泻占[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]87%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='arial'][size=16px]主要病原是轮状病毒。临床应用核黄素治疗小儿腹泻，增加了机体的抗氧化功能，使肠黏膜细胞得到快速修复，从而使其吸收和分泌功能恢复正常[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3.3 核黄素与烧伤[/color][/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素是一种可用于中小面积烧伤创面的安全、有效的外用药。大面积烧伤的患者长时间大剂量应用抗生素[/size][/font][font='arial'][size=16px], 可诱发核黄素缺乏, 最终导致真菌感染加重, 辅以核黄素治疗有利于防止真菌感染[/size][/font][font='arial'][size=16px]。其机制可能是核黄素参与了生物氧化作用和机体三大代谢过程[/size][/font][font='arial'][size=16px], 足量的核黄素使体内酸性物质减少, 不利于真菌生长, 从而使患者不易发生真菌感染[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3.4 [/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]核黄素与心血管疾病[/color][/size][/font][font='arial'][size=18px] [/size][/font][font='arial'][size=18px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]核黄素类药物对患者心脏功能有一定的改善作用[/size][/font][font='arial'][size=16px], 核黄素通过黄素辅酶参与机体的生物氧化还原反应, 抑制脂质过氧化, 减少自由基的生成, 保护心血管系统免受氧化损伤。[/size][/font][font='arial'][size=16px]而核黄素缺乏会激发细胞凋亡[/size][/font][font='arial'][size=16px], 造成正常细胞损伤, 削弱了机体的抗氧化能力[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][align=center][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]第四章核黄素的检测[/color][/size][/font][/align][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].1.[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]高效液相色谱法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]原理[/size][/font][font='arial'][size=16px]试样在稀盐酸环境中恒温水解,调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='arial'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px],用木瓜蛋白酶和高峰淀粉酶酶解,定容过滤后,滤液经反相色谱柱分离,高效液相色谱荧光检测器检测,外标法定量。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][size=16px].[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][size=16px].[/size][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][size=16px]分析步骤[/size][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样制备[/size][/font][font='arial'][size=16px]取样品约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500g[/size][/font][font='arial'][size=16px],用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用。称取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2g[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10g[/size][/font][font='arial'][size=16px](精确至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]01g[/size][/font][font='arial'][size=16px])均质后的试样(试样中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的含量大于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5μg[/size][/font][font='arial'][size=16px])于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]具塞锥形瓶中,加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]121[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]下保持[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30min[/size][/font][font='arial'][size=16px],冷却至室温后取出。用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]氢氧化钠溶液调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='arial'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px],加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]混合酶溶液,摇匀后,置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解。将酶解液转移至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]容量瓶中,加水定容至刻度,用滤纸过滤或离心,取滤液或上清液,过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]45μm[/size][/font][font='arial'][size=16px]水相滤膜作为待测液。（注:操作过程应避免强光照射）[/size][/font][font='arial'][size=16px]不加试样,按同一操作方法做空白试验。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].仪器条件[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]a[/size][/font][font='arial'][size=16px])色谱柱:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]C18[/size][/font][font='arial'][size=16px]柱,柱长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]150mm[/size][/font][font='arial'][size=16px],内径[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6mm[/size][/font][font='arial'][size=16px],填料粒径[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5μm[/size][/font][font='arial'][size=16px],或相当者[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]b[/size][/font][font='arial'][size=16px])流动相:乙酸钠溶液([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]05mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px])-甲醇([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]65[/size][/font][font='宋体'][size=16px]∶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]35[/size][/font][font='arial'][size=16px]) [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]c[/size][/font][font='arial'][size=16px])流速:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]min[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]d[/size][/font][font='arial'][size=16px])柱温:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]e[/size][/font][font='arial'][size=16px])检测波长:激发波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]462nm[/size][/font][font='arial'][size=16px],发射波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]522nm[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]f[/size][/font][font='arial'][size=16px])进样体积:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20μL[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].标准曲线的制作[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样溶液的测定[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到相应的峰面积,根据标准曲线得到待测液中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的浓度。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].空白试验[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]要求空白试验溶液色谱图中应不含待测组分峰或其他干扰峰。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='arial'][size=16px]精密度[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px]%。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][font='arial'][size=16px].其他[/size][/font][font='arial'][size=16px] [/size][/font][font='arial'][size=16px]当取样量为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]00g[/size][/font][font='arial'][size=16px]时,方法检出限为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]02mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px],定量限为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]05mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].2[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]荧光分光光度法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]原理[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]440nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的浓度成正比。在波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]525nm[/size][/font][font='arial'][size=16px]下测定其荧光强度。试液再加入连二亚硫酸钠,将维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为试样中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]所产生的荧光强度。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]分析步骤[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样制备[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]试样的水解取样品约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500g[/size][/font][font='arial'][size=16px],用组织捣碎机充分打匀均质,分装入洁净棕色磨口瓶中,密封,并做好标记,避光存放备用。称取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2g[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10g[/size][/font][font='arial'][size=16px](精确至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]01g[/size][/font][font='arial'][size=16px],约含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]200μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px])均质后的试样于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]具塞锥形瓶中,加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60mL0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mol[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]的盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]121[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]下保持[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30min[/size][/font][font='arial'][size=16px],冷却至室温后取出。用氢氧化钠溶液调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='arial'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]试样的酶解加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]混合酶溶液,摇匀后,置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]培养箱或恒温水浴锅中过夜酶解。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]过滤将上述酶解液转移至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]容量瓶中,加水定容至刻度,用干滤纸过滤备用。此提取液在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='宋体'][size=16px]℃[/size][/font][font='arial'][size=16px]冰箱中可保存一周。注:操作过程应避免强光照射。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].氧化去杂质[/size][/font][font='arial'][size=16px]视试样中核黄素的含量取一定体积的试样提取液(约含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px])及维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]标准使用溶液分别置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]的带盖刻度试管中,加水至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]。各管加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]冰乙酸,混匀。加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL30g[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='arial'][size=16px]高锰酸钾溶液,摇匀,放置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2min[/size][/font][font='arial'][size=16px],使氧化去杂质。滴加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]%过氧化氢溶液数滴,直至高锰酸钾的颜色褪去。剧烈振摇试管,使多余的氧气逸出。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]的吸附和洗脱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]吸附柱硅镁吸附剂约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1g[/size][/font][font='arial'][size=16px]用湿法装入柱,占柱长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px](约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5cm[/size][/font][font='arial'][size=16px])为宜(吸附柱下端用一小团脱脂棉垫上),勿使柱内产生气泡,调节流速约为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60[/size][/font][font='arial'][size=16px]滴/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]min[/size][/font][font='arial'][size=16px]。（注:可使用等效商品柱）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]过柱与洗脱将全部氧化后的样液及标准液通过吸附柱后,用约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]热水淋洗样液中的杂质。然后用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]洗脱液将试样中维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]洗脱至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]容量瓶中,再用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]水洗吸附柱,洗出液合并至容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀后待测定。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='arial'][size=16px].标准曲线的制备[/size][/font][font='arial'][size=16px]分别精确吸取维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px]标准使用液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]25mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0mL[/size][/font][font='arial'][size=16px](相当于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]25μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0μg[/size][/font][font='arial'][size=16px]维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B2[/size][/font][font='arial'][size=16px])或取与试样含量相近的单点标准按[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='arial'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='arial'][size=16px]操作。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='arial'][size=16px].试样溶液的测定[/size][/font][font='arial'][size=16px]于激发光波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]440nm[/size][/font][font='arial'][size=16px],发射光波长[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]525nm[/size][/font][font='arial'][size=16px],测量试样管及标准管的荧光值。待试样管及标准管的荧光值测量后,在各管的剩余液(约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5mL[/size][/font][font='arial'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7mL[/size][/font][font='arial'][size=16px])中加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1mL20[/size][/font][font='arial'][size=16px]%连二亚硫酸钠溶液,立即混匀,在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20s[/size][/font][font='arial'][size=16px]内测出各管的荧光值,作各自的空白值。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='arial'][size=16px].精密度[/size][/font][font='arial'][size=16px]在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px]%。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font][font='arial'][size=16px].其他[/size][/font][font='arial'][size=16px]当取样量为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]00g[/size][/font][font='arial'][size=16px]时,方法检出限[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]006mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px],定量限：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='arial'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]02mg[/size][/font][font='arial'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100g[/size][/font][font='arial'][size=16px]。[/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]4[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6].[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]3[/color][/size][/font][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]微生物法[/color][/size][/font][size=16px]某一种微生物的生长繁殖必需某一种维生素，；例如干酪乳酸杆菌的生长需要核黄素，培养基中若缺乏这种维生素该细菌则不能生长。在一定条件下，该细菌生长情况，以及它的代谢物乳酸的浓度与培养基中该维生素含量成正比，因此可以用浑浊度的测定法来测试试样中核黄素的含量。[/size][size=16px]微生物法测定食物中核黄[/size][size=16px]素[/size][size=16px]是经典方[/size][size=16px]法，[/size][size=16px]特异性和灵敏度均高[/size][size=16px]，[/size][size=16px]但方法费时[/size][size=16px]，[/size][size=16px]周期较长[/size][size=16px]，已从国家标准中删除。[/size][font='等线'][size=14px][color=#2e75b6]参考文献[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][1]Bensasson R V,Land E J,Truscott T G.Flash Photolysis and Pulse Radiolysis in Biologyand Medicine [J],Oxford:Pergamon Press,1993:140-147[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][2]Ito K,Inous Yamamoto K,etal.8-Hydroxyguanosine formation at the5-GG3 sequences in double-stranded DNA by UV radiation with riboflavin[J].Journal Biological Chemistry.1993:268:13220-13227[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][3]Frier C Fontecave M,Mouscadet J,et al. Flavin-oligonucleotide conjugates sequence specific photocleavage of DNA [J].Chemical Communication,1998:2457-2458[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]4[/size][/font][font='arial'][size=12px]]陆长元,韩镇辉,蔡喜臣,陈雨玲,姚思德.核黄素(维生素[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]B2[/size][/font][font='arial'][size=12px])的光物理和光化学性质[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].中国科学([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]B[/size][/font][font='arial'][size=12px]辑化学),[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2000[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]05[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]428[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]435[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][5]Delane AA,Powers HJ.The influence of riboflavin deficiency on absorption and liver storage of iron in the growth rat[J].Br J Nutr,1986,8(1):41.[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][6]Delane AA,Powers HJ.Efeccts of combined riboflavin and iron deficicncy on the hematological status and iron concert ration of the rat[J].JNutr,1986,116:1257.[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]7[/size][/font][font='arial'][size=12px]]柳启沛,陈文根,张琪,翁聪颖,朱朝勇,邓春勤,朱元桢,张亚非,沈镇平,徐达道.铁、核黄素与贫血关系研究及其防治应用[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].医学研究通讯,[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]1994[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]10[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]29[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]30[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]8[/size][/font][font='arial'][size=12px]]项昭保,戴传云,朱蠡庆.核黄素生理生化特征及其功能[[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]].食品研究与开发,[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2004[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]06[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]90[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]92[/size][/font][font='arial'][size=12px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]95[/size][/font][font='arial'][size=12px].[/size][/font][font='arial'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]9[/size][/font][font='arial'][size=12px]][/size][/font][size=12px]陈文[/size][size=12px]根.核黄素缺乏对铁代谢的影响[/size][size=12px][[/size][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][size=12px]]国外医学+卫生学分册[/size][size=12px]，[/size][font='times new roman'][size=12px]1990[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]) [/size][/font][font='times new roman'][size=12px]283[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][10][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff]Mu?ozN.,GrassiA.,QiongShen,etal.PRECURSORLESIONSOFOESOPHAGEALCANCERINHIGH-RISKPOPULATIONSINIRANANDCHINA[J].TheLancet,1982,319(8277):876-879.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff][11]林英,王旗,朱明君,陈萍萍.核黄素营养水平对食管上皮增生转化的影响[J].河南预防医学杂志,1995(04):192-193.[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=12px][back=#ffffff][12]郭志成.维生素对突变的抑制作用[J].解放军预防医学杂志,1993(05):396-400.[/back][/size][/font][font='times new 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roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]29(9):1049-1052．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]17[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='times new roman'][size=12px]殷慧群，陈冬云，周云泳[/size][/font][font='times new roman'][size=12px].[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]核黄素对心肌缺血再灌注损伤时一氧化氮及其合酶的影响［J[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]］[/size][/font][font='times new roman'][size=12px].皖南医学院学报[/size][/font][font='times new roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2005[/size][/font][font='times new roman'][size=12px],[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]24(3):179-181．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]18[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='arial'][size=12px]符起亚，邓芳成，张治汉．长效核黄素治疗复发性口腔溃疡患者疗效观察及对血清[/size][/font][font='times new 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roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]］．中国肿瘤临床与康复，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2007[/size][/font][font='arial'][size=12px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]14[/size][/font][font='arial'][size=12px]([/size][/font][font='times new roman'][size=12px]3[/size][/font][font='arial'][size=12px]):[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]272[/size][/font][font='arial'][size=12px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]273[/size][/font][font='arial'][size=12px]．[/size][/font][font='times new roman'][size=12px][[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]20[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]][/size][/font][font='arial'][size=12px]蒋秀美，芮雪芹，濮益琴，等．长效核黄素预防血液病造血干细胞移植后口腔黏膜炎［[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]J[/size][/font][font='arial'][size=12px]］．江苏医药，[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]2009[/size][/font][font='arial'][size=12px]，[/size][/font][font='times new 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