推荐厂家
暂无
暂无
8-12天津港爆炸事件后,大家应该对此事非常关心本人也想酝酿写一点东西,因为这个事情,可能会对试剂生产/销售领域有不可预知的影响昨天收到某公司邮件,把他们可以提供的跟爆炸物检测相关的标样做了一个汇总,不错不错,反应很快,赞一个上传上来,供大家参考
[font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中,细胞增殖是一个关键过程,对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展,流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具,广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞,可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法,包括但不限于溴脱氧尿苷([/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体])掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等,以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法:[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体](氚离子)掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理:是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时,用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中,增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性,通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])使用的是具有放射性的同位素,操作较为复杂,同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果,用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体])此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]) 此方法时间较短,无法检测加入前细胞的增殖情况,而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成,而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理:将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点:[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同,每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔,这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数,将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数,在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中,注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体,[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次,洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理:示踪染料的荧光信号都很强,当细胞分裂时,母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中,细胞荧光信号会被减弱一半,所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞,这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法:[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞,将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体],加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体],其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体],在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记,在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体],离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次,尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体],然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]:[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物,其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代,在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中,而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体],不与胸腺嘧啶核苷结合,所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围:适用于体内检测目标细胞的增殖,一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射,经过一段时间后,取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞,后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔,最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体,目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞,阳性比例越高,增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖:流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量,所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖:[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体](增殖细胞核抗原),在细胞核合成且只存在于细胞核内,是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白,所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切,是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖:是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖:是转铁蛋白受体,表达于细胞的表面,该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面,正常细胞表达较少,与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url],更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询,详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
POCT仪器之——便携红外人体血氧饱和度监测仪揭秘 随着电子技术和传感器技术的发展,医院许多大型检测仪器实现了小型化,护士常常进行床边检测(又称“即时检验”Point-of-care Testing,POCT)。 人体除心率、血压、呼吸频率和温度外,脉搏血氧(PO)被认为是排在第5位的最关键健康状况指标。血红蛋白(Hb)是血细胞的重要组成部分,它负责将氧气从肺部输送到身体的其它组织。血红蛋白在任一时刻所含的氧气量被称为氧饱和度。氧饱和度以百分比表示,它是血红蛋白的含氧量与血红蛋白携氧能力之比。血氧饱和度是反映人体呼吸功能及氧含量是否正常的重要生理参数,它是显示人体各组织是否健康的一个重要生理参数,严重缺氧会直接导窒息、休克、死亡等悲剧的发生。 人体血氧饱和度仪应用在以下几个方面:病人在急救和转运过程中、消防抢险、高空飞行必须监测血氧;心脏病、高血压、糖尿病人,特别是老人都会有呼吸方面的问题,监测血氧指标可很好地了解自己的呼吸、免疫系统是否正常,血氧饱和度已成为普通家庭日常监测的重要生理指标;医护人员在查房和出诊是也将血氧作为必监测项目,使用数量有压过听诊器的趋势;呼吸疾病患者特别是长期打鼾的、使用呼吸机和制氧机的患者,在日常生活中使用血氧仪来监测治疗效果;户外动者、登山爱好者、体育运动者在运动时都使用血氧仪,及时知道自己的身体情况,并采取必要的保护措施。下面将市售的一款便携式人体血氧饱和度监测仪进行解析,揭开内部结构的神秘面纱。一、外观 血氧仪像一个大夹子:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482364_1807987_3.jpg电池仓在背面,使用两只7号电池。该仪器非常省电,不使用8秒钟后自动关机,两节电池可用30小时:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482365_1807987_3.jpg手指槽的上端有发射窗,下端有光信号接收窗:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482366_1807987_3.jpg将手指放进去,几秒钟后,显示出血氧饱和度、脉搏值:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482367_1807987_3.jpg二、系统结构原理便携式人体血氧饱和度监测仪结构原理见下图,开机后,电源提供1.8V和3V、12V三组直流电给电路使用,嵌入式微处理器(MCU)向光头驱动电路发出控制信号,使双发光二极管(红光、红外光)交替发出调制光,该两组光线穿过手指,被另一面的光电池接收,信号通过前置放大、整理电路,输入MCU进行分析、计算,结果由LED数字显示板显示出来。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271513_520299_1807987_3.jpg血氧饱和度监测原理:无创脉搏血氧饱和度测量是以朗伯 - 比尔定律,血液中还原血红蛋白 (Hb )和氧合血红蛋白(HbO2 )对光的吸收特性不同为基础的。通过两种不同波长的光(660nm红光和940nm近红外光)分别照射人手指组织后,再由光电检测器转换成电信号。在该波长处,氧合血红蛋白和还原血红蛋白的吸收差别较大,组织中的其他成分吸收光信号是恒定的, 经过光电检测器后得到直流分量 DC,而动脉血中的 HbO2 和Hb对光信号的吸收是随着脉搏搏动作周期性变化, 经过光电检测器后得到交流分量 AC, 由于 HbO2 和 Hb对同一种光线的吸收率各不相同, 微处理器计算所吸收的这两种光谱的比率,并将结果与存在存储器里的饱和度数值表进行比较,从而得出血氧饱和度。三、拆解主电路板可用指甲从上端缝隙处,将上盖分开:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170138_482369_1807987_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170138_482370_1807987_3.jpg电路板正面的元件不多,显示采用LED数字显示板,占据了电路板主要面积:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271514_520300_1807987_3.jpg电路板上的集成电路ULN2003A,74HC164:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170138_482372_1807987_3.jpgULN2003A是高耐压、大电流反相器,内部由七个硅NPN 达林顿管组成的驱动芯片,电路框图如下:[im