培养管

哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述：原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。一般把从动物有机体内取出细胞开始培养，到繁殖十代以内的细胞培养称为原代细胞培养。经过原代细胞培养，细胞分裂繁殖，培养物逐渐增多长满培养空间，继而相互之间接触，发生接触抑制现象，生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶内进行传（继）代培养。传（继）代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传（继）代培养。细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如果细胞系的生存期有限，则称为有限细胞系。已获得无限繁殖能力，能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系，用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增值形成的细胞群，称为细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原珠形状不同的细胞群，成为亚株。哺乳动物细胞培养条件不同哺乳动物细胞在各个阶段的培养，都需要有基础的培养条件，归纳如下：1、无菌无毒的环境：对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。2、营养：液体合成培养基包含糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分3、适宜的温度和pH：人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。4、气体环境：气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体，CO2维持培养液pH。德国WIGGENS CO2培养箱，为细胞生长提供最佳环境，为您的细胞培养保驾护航。

一说到培养箱，自然而然会浮现生化培养箱、恒温培养箱系列产品，它具有制冷和加热双向调温系统，温度可控的功能，是植物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研，教研`教育部门不可缺少的实验室设备，广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等等。??生化培养箱和恒温培养箱是常使用的两种，同是培养箱，有什么不同之处？??一、产品特点不同??(一)生化培养箱的产品特点：??适用于环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等科研、院校和生产部门。是水体分析和BOD测定，细菌、霉菌、微的培养、保存、植物栽培、育种试验的专用恒温设备。??1、带定时功能键的数显微电脑温度控制器，控温可靠；??2、采用镜面不锈钢内胆，半圆弧四角易清洁，箱内搁板间距可调；??3、采用玻璃观察窗，观察方便明了；??4、设有限温报警系统，超过限制温度即自动中断，保证实验安全运行，不发生意外； (二)恒温培养箱的产品特点：??恒温培养箱(电热恒温培养箱)适用于医疗卫生、医药工业、化学和农业科学等科研和工业生产部门做细菌培养、发酵及恒温试验用。??1、外壳采用冷轧钢板制作，表面使用静电喷塑工艺。??2、工作室采用不锈钢板或冷轧钢板加工成型，并经防锈防腐处理。??3、可选装指针式控温仪或微电脑智能控温仪，智能控温仪采用PID控制程序、大屏幕数码显示屏，轻触型操作按键，具有超温报警功能。??4、门中间设有双层钢化玻璃观察窗，便于直接观察培养物的变化。??5、磁性胶条密封，启闭方便、密封良好。二、控温精度不同：??1、生化培养箱主要用于生化反应的孵化，所以它们的门主要由玻璃组成，用于在特定温度孵化反应，操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化；亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养。??2、恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌，正如其名，其密封性好，温度和湿度都是可控恒定的，但不便于在外观察。 上海沪净医疗器械有限公司是华东地区净化设备行业中的公司之一，其凭借雄厚的实力，综合科技，完善的服务，敏锐的市场洞察力开发了一系列净化设备产品。我们拥有强大的销售团队、众多技术人才，良好的售后服务。可按ISO14644-1标准、GB50073-2001国家标准及国家GMP规范要求为微电子、生物医药、医院手术室、光纤光缆、食品饮料、精密仪器、半导体及新材料应用等行业的空气净化系统工程设计、施工、检测及技术服务。本公司可根据客户的现实要求和实际需要设计，定做安装洁净室系统及专用设备。 公司生产的净化工作台系列、风淋室系列、通风柜系列，生物安全柜系列一上市就受到了广大消费者和经销商的青睐和厚爱，沪净净化产品被广泛应用于医疗卫生、电子、制药、生物、食品、农林、畜牧兽医、检验检疫、航空航天、汽车制造、精密仪器、大专院校和各科研机构，在和东南亚市场享有的声誉。 经营理念：重诚信、重质量、重售后。企业精神：质量为先，信誉为重，管理为本，服务为诚。

细胞培养也叫细胞克隆技术，在整个生物工程技术领域，细胞培养都是一个必不可少的过程。目前主要有两种基本的细胞培养体系，一种是细胞在人工基质上单层生长（贴壁培养），另一种是细胞在培养基中自由漂浮生长（悬浮培养）。贴壁培养和悬浮培养的细胞无论在细胞形态和培养条件上有诸多不同。第一来源和形态不同： 悬浮细胞的生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，细胞大体呈球形或椭球型（见下图）。这类细胞一般为淋巴细胞等血液系统来源的细胞。悬浮细胞 贴壁细胞生长必须有可以贴附的支持物表面，依靠自身分泌的或培养基中提供的黏附因子才能爱表面生长和繁殖。细胞在未贴附于底物之前一般似球体样，当与底物贴附后，细胞将逐渐延伸展形成一定的形态（见下图）。贴壁培养细胞主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。 上皮细胞型 成纤维细胞型 贴壁细胞与悬浮细胞在显微镜下的区别贴壁细胞分为两种，上皮细胞型和成纤维细胞型，在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形，而且晃动培养液时，细胞不动。悬浮细胞漂在培养液中，呈圆形，晃动培养液时细胞也随着漂动。 第二培养条件和方式不同： 贴壁细胞一般使用滚屏或T瓶进行培养。如果使用微载体，也可以用微载体培养瓶或生物反应器进行培养。 培养过程中的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。 滚瓶机 微载体培养瓶 T瓶 悬浮细胞培养，可以使用小型细胞工厂、飞旋瓶、生物反应器进行培养。 细胞工厂和飞旋瓶培养中需要的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。生物反应器自带条件控制功能。 小型细胞工厂Celline 飞旋瓶生物反应器 WIGGNS培养箱在设计之初就考虑了培养箱内部兼容用电设备。在具有传统培养箱的所有功能之外，WIGGENS CO2培养箱系列，采用了高效的循环系统保证了温度、CO2、湿度的均匀性。内置电源插孔设计，箱体内可以直接使用磁力搅拌器，摇床等用电设备。箱体右侧中部开孔，带硅胶塞，方便培养过程监控及对设备进行验证。箱体底部的导轨设计，可用于大型滚平机的推进和推出操作。加固隔板设计，实现了一机多能，灵活使用的特点。WIGGENS 二氧化碳培养箱

p　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "简介/span/strong/pp　　用于重组蛋白和单克隆抗体(mAb)生产的细胞培养工艺有不同的方式。补料分批(Feb-Batch)工艺由于操作简单，且较易规模放大，被临床和商业化生产广泛采用，目前的技术发展已可在18天内获得20-30x10^6cells/mL的细胞密度，同时获得 10g/L的滴度水平。/pp　　灌流工艺以往更多用于生产不稳定的产品，如血液凝集因子和酶类产品，但也有用于生产 mAb产品，如Remicade(英利昔单抗)。在灌流培养中，通过培养基置换，降低产物在反应器内的滞留时间，而灌流速率取决于特异性的产物和/或工艺需求。/pp　　近几年，在上游工艺中，基于灌流的工艺强化获得了极大的发展，驱动力主要来自于对降低成本和占地的需求，以及提高设备灵活性。随着细胞系、培养基和细胞截留设备的发展，现在的灌流工艺已可获得较高的细胞密度和产量，使其成为一个非常有吸引力的选择，包括mAb的生产。例如，在mAb生产中，结合2vvd的培养基置换速率，通常可达到50-60x10^6cells/mL的稳态细胞密度，以及高达4g/L/day的生物反应器产率。此外，浓缩补料分批(CFB)也可以通过培养基置换，维持高细胞密度，而将产物截留在生物反应器内。/pp　　灌流和CFB的差异在于所用的中空纤维膜的孔径。对于抗体，使用Per.C6细胞系，可在12-13天内，达到21.4g/L的终产物滴度(峰细胞密度 150x10^6cells/mL)，而使用CHO细胞系时，可在16天内达到25.3g/L的滴度，峰细胞密度 180x10^6cells/mL。随着生物反应器产率的提高，可使用占地更小、成本更低的一次性设备，来替代大规模的不锈钢设备(10,000-25,000L)，通过增加设备轮转或连续工艺，生产等量的产物。/pp　　尽管灌流工艺可使用基于过滤的细胞截留设备，如TFF和ATF，在生物反应器内获得并维持高细胞密度，但通常会要求使用较高的培养基置换速率，以将高密度细胞的活性维持在可接受的水平。与不同工艺相关的培养基成本是评估其生产等量产物时经济性的关键因素。而即使单位培养基成本适当，较高的培养基置换速率也会显著影响生产产品成本(CoG)，亦即，上游操作成本与培养基成本紧密相关。/pp　　生产单位产品的总生产CoG和上/下游成本的比重会随产物滴度和设备尺寸的变化而变化。在分析CoG的所有输入值中，一旦工艺确定，培养基用量及其成本是固定的，不管设备、设施等是否发生改变。细胞培养工程师的一个主要目标是降低培养基成本，同时获得高产量。本文使用相同的基础(basal)和补料(feed)培养基，稍作优化，开发了具有高生物反应器产率的不同细胞培养工艺(补料分批、灌流和CFB)，并比较了不同操作模式的生物反应器产率及其相关的培养基成本。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "实验/span/strong/pp　　实验使用生产单克隆抗体的重组CHO细胞系，不同工艺使用相同的3L生物反应器，培养基使用专利的基础(basal)和补液(feed)培养基，后者又分为两种补液-A和补液-B，均富含葡萄糖、氨基酸、维他命等。详细细胞系和种子扩增、生物反应器操作信息请参看原文。/pp　　对于补料分批培养，反应器起始工作体积1.5L，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过3天的N-1灌流来达到目标密度。生物反应器补液以每日葡萄糖水平为基础进行。/pp　　对于CFB工艺，使用50kD PS中空纤维过滤器的灌流设备，对于灌流，使用0.2μm PES中空纤维过滤器的灌流设备。接种密度1x10^6cells/mL，工作体积1.3L，一般第2天开始培养基置换，最大置换速率1vvd。灌流培养在第8天开始进行细胞废弃(cell bleeding)，以维持所需细胞密度和活性。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b370cbae-a09d-4aad-901e-9998bacb5c16.jpg" title="1_副本.jpg"//pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "不同细胞培养模式图解(xu et al, 2017)/span/strong/pp　　细胞培养每日取样分析，详细分析内容和方法，请参考原文。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "讨论/span/strong/pp　　不同操作模式的细胞培养性能/pp　　实验测试操作模式包括：补料分批、灌流和CFB，使用相同的3L生物反应器规格以及基础和补料培养基组合，以便比较细胞/生物反应器产率和培养基成本。/pp　　补料分批模式 对于补料分批模式，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过N-1灌流，可使对数生长期降低2天，所以8天就可达到峰密度，而前者需要10天。两种条件达到的峰细胞密度范围均为20.2-26.2x10^6cells/mL。两种接种密度在第14天分别达到5.4± 0.1g/L和6.8± 0.2g/L的滴度。生物反应器单位体积产率(VPR)按最终生物反应器滴度除以培养周期计算。2x10^6cells/mL接种密度条件，相比0.5x10^6cells/mL，可获得更高的VPR(0.49± 0.01g/L/day vs. 0.39± 0.01g/L/day)，主要是由于前者降低了起始生长阶段的时间，延长了生产期。/pp　　灌流模式 在灌流培养中，使用了2种不同的培养基组成：1种只使用基础培养基，另一种为基础加补液-A。在培养过程中，通过合适的cell bleeding，维持较高的活性 85%。只使用基础培养基时，平均细胞密度为44± 4.1x10^6cells/mL，从第8天至32天的日产量为0.7± 0.04g/L/day。在基础+补液条件中，随细胞密度的增加，补液-A作为培养基置换的一部分，逐渐引入，而总培养基置换率保持为1vvd，平均细胞密度增加至73.9± 5.4x10^6cells/mL，日产量增加至2.29± 0.28g/L/day。细胞特异性产率从16.0± 1.2pg/cell/day增加至30.1± 2.3pg/cell/day，从而使反应器产量增加~230%。/pp　　浓缩补料分批模式(CFB) 与灌流相似，评估了只使用基础培养基和使用基础+补液培养基的条件。与灌流工艺相比，CFB不需要进行cellbleeding，细胞质累积至更高的水平。当只使用基础培养基时，在第18天达到峰细胞密度72.0± 9.6x10^6cells/mL，上清液滴度为12.2± 0.6g/L。使用基础+6%补液-A+2%补液-B时，峰细胞密度为117.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为21.4g/L，使用基础+8% 补液-A +8% Feed-B时，峰细胞密度为83.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为36.7g/L。可见，增加补液-A和补液-B的量，可显著提高细胞特异性产率至45.1pg/cell/day。/pp　　细胞特异性产率、生物反应器产率和产物质量/pp　　当只使用基础培养基时，批次、灌流和CFB工艺可达到相似的qP，范围为14.7-17.1pg/cell/day。在此条件下，累积的细胞数量会直接影响产物滴度和单位体积产率。正如预期，批次培养的VPR显著较低，仅为0.08g/L/day，而灌流和CFB工艺由于可维持更高的细胞密度，可获得相当的VPR，0.68-0.70g/L/day。/pp　　浓缩补液培养基通常用于补料分批工艺，以提高细胞生长和细胞特异性产率。在此研究中，补加补液培养基，可显著提高qP和VPR。对于补料分批培养，qP提高至29.4-32.0pg/cell/day，VPR达到0.39g/L/day(接种密度0.5x10^6cells/mL)或0.49g/L/day(接种密度2x10^6cells/mL)。N-1灌流获得的更高的接种密度可提高VPR，因为缩短了生长期的时间，延长了生产期，提高产量。但是，即使与只使用基础培养基的灌流和CFB相比，补料分批培养的VPR仍较低，因为细胞密度差别显著。/pp　　相比补料分批工艺，只使用基础培养基以1vvd的速率进行培养基置换时，可轻松地将细胞密度提高2-3倍。而与只使用基础培养基的条件相比，在灌流培养中补充10%补液-A可使VPR提高~230%，qP提高~90%。相似的，在CFB工艺中，补充不同比例的补液-A和补液-B可将VPR提高至1.19-2.04g/L/day。/pp　　最近有报道显示，长寿命的人浆细胞可在体外维持120pg/cell/day的IgG分泌率，对于基因工程哺乳动物细胞，最高生产速率估计为~100pg/cell/day。qP的提高将来自于细胞系和培养基的优化。所以，理论上，在灌流工艺中，如稳态细胞密度维持为100x10^6cells/mL时，每日产量可高达10g/L/day。/pp　　实验同时评估了不同操作模式的产物质量特征，结果显示，CFB会形成更高水平的HMW和稍高的酸性异构体，主要是由于产物所暴露的细胞培养环境。在补料分批和浓缩补料分批中，产物滞留时间为整个培养周期。此外，在仅使用基础培养基的CFB工艺中，HMW最高，说明培养基组成可能在HMW形成中扮演了重要的角色。但是，产生的HMW仍低于5%，且大部分可在纯化步骤中去除。另一方面，即使是相同的高细胞密度环境和相似的培养基组成，灌流培养的酸性异构体和HMW更低，可能是由于产物在罐内更低的滞留时间。/pp　　培养基成本分析/pp　　由于细胞系或培养基组成的变化会显著影响产物滴度/产率，所以对不同操作模式的比较需使用相同的细胞系和培养基条件才有意义。本文使用从小规模生物反应器获得的细胞培养性能，来比较不同操作模式的培养基成本，并假定在规模放大时，不同工艺没有显著的产率下降。需要指出的是，实验中的灌流速率没有在对数生长期，以细胞特异性为基础，进行良好的优化。相反，在整个培养周期中，将灌流速率固定为1vvd。在不同的培养阶段，对细胞特异性灌流速率进行精细调节，应可进一步降低培养基用量和成本。/pp　　当只使用基础培养基时，生产每克抗体的培养基成本在批量和灌流工艺中都很高。加入适量的补料培养基，可降低每克mAb的培养基成本，且即使补料培养基相对较贵，细胞密度和qP的增加相比培养基成本的增加更加显著。/pp　　使用N-1灌流的补料分批的培养基成本比常规补料分批工艺低，N-1灌流需要3x基础培养基置换，但因接种密度的提高，继而获得的滴度的增加，抵消了培养基用量的增加。N-1灌流的补料分批和灌流的培养基成本相当，~$10/g mAb。这说明，虽然往常认为由于较高的灌流速率，灌流的培养基用量更高，继而培养基成本更高，但只需要生物反应器产率达到一定的阈值，从培养基成本上来看，还是相当有竞争力的。/pp　　CFB工艺的培养基成本与其它操作模式的趋势不同。在只使用基础培养基的条件中，成本与批量和灌流工艺相当，但CFB培养基成本会随补料培养基的使用而增加，其相对较高的培养基成本( $17/g)可能是因为需要较长的细胞生长时间，在培养中，直到第10天，细胞密度达到峰水平，才开始出现显著的产物滴度增加。降低CFB培养基成本的一种方法是优化细胞寿命，延长批次时间，但更长的罐内滞留时间，可能会影响产物质量属性，或是进一步优化培养基，如替换昂贵的成分和优化其滴度。/pp　　总生产COG/pp　　除了培养基成本的不同，使用诸如灌流和CFB之类的工艺，结合一次性设备，在小规模上进行生物制品生产，可显著降低成本投入，从而获得更加灵活的生产策略，当产品需求增加时，可以快速地进行规模扩展(scale out)，而不是规模放大(ScaleuP)。与传统不锈钢设备相关的固定成本，可以转变为“可变”的成本结构。基于此处的案例，灌流工艺的培养基成本实际上低于补料分批工艺。/pp　　进行总成本分析时，如下游均以批量模式进行，且认为不同工艺的劳动力成本相当，则本文建模分析结果显示，N-1灌流的补料分批和灌流工艺的下游CoG/g相当，分别为$63/g和$59/g，而标准补料分批和CFB工艺的下游CoG/g稍高，分别为$71/g和$81/g。对于mAb和不稳定的产品，基于灌流的连续工艺都可以提供显著的经济优势。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "总结/span/strong/pp　　在本研究中，比较了不同操作模式下，生物反应器的产率，包括补料分批、灌流和CFB工艺。对于研究的细胞系，qP高度取决于所用的培养基，不管采用哪种操作模式，这使得累积细胞密度成为决定产物滴度和生物反应器产率的主要因素。结果显示，补料分批培养生物反应器产率最低(0.39-0.49g/L/day)，而基于灌流的培养方式，由于可维持更高的细胞密度，产率相对较高，灌流为2.29g/L/day，CFB为1.19-2.04g/L/day。灌流的一个显著优势是可以达到并维持极高的细胞密度，用于产物形成。/pp　　灌流工艺一个经常观察到的缺点是培养基用量较高，因为需要进行连续的培养基置换，以维持所需的高活细胞密度。这里的研究显示，高产率灌流培养的培养基成本实际上低于补料分批工艺。CFB工艺的培养基成本最高，虽然在18天内达到了36.7g/L的极高滴度，为降低CFB工艺的培养基成本，建议可以精调培养基置换率，以在起始的生长阶段获得更好的培养基利用，或通过培养基优化，提高细胞特异性产率。/pp　　i小编出于交流目的编译此文，由于水平有限，不当之处，敬请谅解，详细内容，请参看原文。/i/ppi　　原文：S.Xu, J.Gavin, R. Jiang, et al., Bioreactor Productivity and Media Cost Comparison for Different Intensified Cell Culture Processes. Biotechnol. Prog., 2017, Vol. 00, No.00./i/ppbr//p

IKA控温箱产品线新增两个新成员：培养箱 INC 125 F digital 和振荡培养箱 INC 125 FS digital。培养箱主要应用于生科领域，如微生物培养，稳定性研究或细胞培养。INC 125 FS digital 是一款具有可拆卸摇板的振荡培养箱。移除摇板，INC 125 FS digital 可用作普通培养箱。精确控温培养箱 INC 125 F digital 在 RT+8℃-100℃、振荡培养箱 INC 125 FS digital 在RT+8℃-80℃ 都有很高的温度稳定性。优良的箱体绝热性能和强制空气对流保证快速加热和精确、均匀控温。打开门后可迅速再次达到初始温度。快速清洗和去污 耐腐蚀材质的内腔易于清洁。使用去污模式，可有效降低培养箱中的交叉污染风险。用户友好的操作 通过清晰的数显显示屏，可以方便地使用计时器、定时器和定时器自动模式。培养箱的外门都可以打开 180°。振荡培养箱配有内部照明。节省空间 培养箱选配合适配件可进行堆叠放置。大大节省实验室空间。振荡培养箱 INC 125 FS digital 规格可选摇板具有通用设计，可配套容器固定夹或 STICKMAX 粘垫使用。摇板上有标记可安全放置样品。振荡培养箱 INC 125 FS digital 有两个机型可选，周转直径20 mm 或 25 mm 周转直径的摇板包含在交货清单中。 关于 IKA IKA 集团是实验室前处理、分析技术、 工业混合分散技术的市场领导者。电化学合成仪、磁力搅拌器、顶置式搅拌器、分散均质机、混匀器、恒温摇床、移液器、研磨机、旋转蒸发仪、加热板、恒温循环器、粘度计、量热仪、实验室反应釜等相关产品构成了IKA 实验室前处理与分析技术的产品线；而工业技术主要包括用于规模生产的混合设备、分散乳化设备、捏合设备、以及从中试到扩大生产的整套解决方案。IKA 还与全球知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。我们致力于为客户提供更好的技术, 帮助客户获得成功。IKA 成立于1910年，集团总部位于德国南部的Staufen，在美国、中国、印度、马来西亚、日本、巴西、韩国、英国、波兰等国家都设有分公司。

1、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。BIOCEN系列离心机WA系列恒温水浴 2、细胞传代当细胞密度达到80%~90%（过早产量不足，过晚细胞状态不佳，1:2至1:10以上的比率传代培养，一般1:3至1:5细胞一代，即从细胞接种到分离再培养的一段时间，非细胞有丝分裂次数）时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度）进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。WCI系列二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱专用摇床超高产率微型细胞工厂高密度培养专用摇瓶 3、细胞冻存当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入lml冻存液（90%胎牛血清，10%DMSO。 一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞），放入冻存管内（管内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入4℃冰箱中冻存30min，然后放入-20℃冰箱中冻存30min，再置于-80℃冰箱内过夜。第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。 细胞冻存和复苏的原则是：慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。WIGGENS液氮罐系列冻存管冻存支架4、注意事项（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热；（2）用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；（4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小；（5）严格的无菌操作；（6）贴壁细胞消化适度：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化；（7）传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作，每种细胞使用一套器材。避免交叉感染；（8）传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。悬浮细胞培养瓶贴壁细胞微载体培养瓶贴壁细胞滚瓶培养

人类诱导多能干细胞 (hiPSC) 是一类通过基因编辑技术（如 CRISPR-Cas9）对已经高度分化的人体细胞重新逆分化得到的多能性干细胞。hiPSC的出现为科学家构建复杂的疾病模型和推进药物发现提供了有利的工具。 然而，传统的hiPSC细胞系的构建与培养过程往往操作复杂且耗时耗力。特别是从异质编辑细胞池中构建的克隆hiPSC系的培养受到了传统细胞培养方法的桎梏，很难构建一个高效的hiPSC构建与培养工作流程。此外，现有的单细胞分离和培养方法通常对细胞的处理条件苛刻，操作步骤繁琐，不能充分保证单克隆性。 为应对hiPSC细胞系构建与培养过程中的诸多挑战，IotaSicences公司采用了以GRID技术为核心的高度自动化的单细胞可视化分选培养系统isoCell来构建 hiPSC系的分选与培养平台，并在不同培养基条件下对hiPSC进行了单细胞分选与培养研究。图1 单细胞可视化分选培养系统isoCell实物图 以isoCell为核心的hiPSC细胞分选与培养平台 isoCell是一款基于GRID技术的高度自动化细胞分选与培养平台。GRID是指在细胞培养基上采用FC40液体分隔出的网格小室，体积小，光学透明度高，可以容纳细胞在内生长，且各个小室之间物质不流通。isoCell系统配备了荧光和成像系统，用于在整个克隆工作流程中记录 GRID 小室的图像（见下图）。isoCell 可自动执行所有液体处理步骤，包括构建 GRID、将单细胞注射到GRID小室中以及交换培养基和收获单克隆集落。并且，isoCell可在整个工作流程中自动检测每一个 GRID 小室，并确保每一个单克隆hiPSC细胞系来源于单个细胞。 图2 GRID实物图 材料与方法 在分别铺了Laminin-521、Vitronectin-N和iMatrix 细胞培养基质的60毫米培养皿上制备的GRID网格以待使用。制备hiPSC的单细胞悬浮液，并使用 isoCell全自动地将细胞铺在GRID上（种植）。 使用isoCell自带的显微镜鉴定每个GRID室并标记每个包含单个细胞（第 0 天）的室，将该培养皿放入培养箱培养。在第3天，将标记的含有单个细胞的GRID小室加满600 nl培养基。从第5天开始，每天观察标记单细胞的GRID小室，并对选中的GRID小室补充培养基。最后，使用isoCell观察并标记构成了hiPSC单细胞群落的GRID小室，使用isoCell全自动收获标记的GRID小室中的hiPSC细胞（通常在 6-8 天之间）。 图3 以isoCell为核心的hiPSC细胞分选与培养平台工作流程图 高效的hiPSCS细胞分选与培养平台 按照上述的工作流程，利用三种不同的培养基质（包括 VTN-N、LMN-521 和 iMatrix）构建并培养了两个独立的hiPSC细胞系，并评估所得细胞的克隆效率。如图4所示，两个不同的hiPSC测试系在不同培养基质条件下，均在GRID室中显示出非常高的克隆效率，这表明采用GRID小室低容量培养方法和细胞的自动化温和处理可产生非常适合单细胞高效生长的培养环境。 图4 GRID中的单细胞 hiPSC 克隆效率（克隆效率表示培养第5天时单细胞长成细胞群落数占第0天单细胞数的百分比） 结论 以isoCell构建的hiPSC细胞分选与培养平台可以对hiPSC细胞进行全自动化且温和地单细胞分选与培养。通过isoCell特有的GRID小室网格技术与可视化分选相结合，可以确保每一个单克隆hiPSC细胞系均来自单个细胞，且isoCell的分选与培养条件温和，hiPSC单克隆细胞系成活率高。 单细胞可视化分选系统isoCell的优势：- 全自动化流程- 操作条件温和，对单细胞无损伤- 全培养、分析流程可追踪- 单细胞分离效率高达100%- 单克隆细胞系构建成活率高- 直接转移到PCR管或96孔板- 结构紧凑，体积小 单细胞可视化分选培养系统-isoCell已在Cell、Advanced Science、Small Methods、Nature Communications等知名期刊发表多篇文章，如下摘引了近年五篇具有代表性的文献和大家分享。 Soitu C, Stovall‐Kurtz N, Deroy C, et al. Jet‐Printing Microfluidic Devices on Demand[J]. Advanced Science, 2020, 7(23): 2001854.Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell, 2021, 184(9): 2454-2470. e26.Deroy C, Nebuloni F, Cook P R, et al. Microfluidics on Standard Petri Dishes for Bioscientists[J]. Small Methods, 2021, 5(11): 2100724.Deroy C, Wheeler J H R, Rumianek A N, et al. Reconfigurable microfluidic circuits for isolating and retrieving cells of interest[J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2022, 14(22): 25209-25219.Oliveira N M, Wheeler J H R, Deroy C, et al. Suicidal chemotaxis in bacteria[J]. Nature Communications, 2022, 13(1): 7608. 样机体验 为更好地服务中国科研工作者，Quantum Design 中国也建立了样机演示实验室，将为大家提供为专业的售前、销售、售后技术支持，欢迎各位老师垂询！ 用户名单 用户评价 路易莎埃姆斯，研究科学家：The Native Antigen Company（LGC 临床诊断集团旗下公司） “使用 isoCell 进行单细胞克隆工作从一开始就简单可靠，并且已无缝地融入我们的流程中。 该程序对细胞很温和，我们看到非常好的存活率，可以筛选大量克隆。 我们收到的客户服务是优质的。”

BINDER公司是世界上最大的温控箱专业制造商之一，其总部位于德国西南部的Tuttlingen — 一个世界医药技术研发创新的中心区域。多年来，BINDER公司一直致力于高质量、高安全的实验温控设备的研发与生产，不断追求技术革新，其在温度、湿度、气体测量与控制、生物安全等领域拥有多达70多项专利技术，保证了其在温控箱制造领域的世界领先地位。BINDER CO2培养箱设备属于高性能、高安全的细胞/组织培养箱，它采用了一系列的先进技术，能够满足细胞和组织培养的最高要求，BINDER 公司开发的CB系列高精度培养箱在遵循了现所有国际原则和规定（FDA/GMP/GLP规范）的同时，显示出了对细胞/组织培养未来发展的需求（高安全性培养），代表着细胞/组织培养箱未来发展的方向。自1998年以来，德国细胞生物学协会（DGZ）每年都授予全球BINDER技术创新奖。这一奖项由BINDER公司赞助设立，主要用于奖励那些在细胞生物学领域的基础研究中取得突出成就的科研工作者。作为世界上CO2培养箱的最大制造商之一，BINDER公司一贯重视并坚持与科研部门的密切合作。对于复杂的工程和项目，特别是在细胞/组织培养领域，BINDER公司无疑将是一个优秀的合作伙伴。BINDER CB系列CO2培养箱在中国市场的推广，得到广大中高端用户的大力支持，市场份额逐年递升。2007年，BINDER 研究人员针对客户的不同实验用途，新开发了C系列的CO2培养箱和更稳定、快捷的三气培养箱，以满足广大用户细胞培养的需求，新产品具体信息请咨询路易公司各办事处。

详细信息 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目招标公告 山东省-菏泽市-牡丹区 状态：公告 更新时间： 2023-02-13 招标文件: 附件1 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目招标公告 发布时间：2023-02-13 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目招标公告 项目概况： 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目的潜在投标人应在中国山东政府采购网、菏泽市政府采购公共服务平台、鲁采采电子招投标交易平台获取招标文件，并于2023-03-0709:00:00（北京时间）前提交投标文件。 一、项目基本情况： 项目编号：SDGP371700000202302000021 项目名称：菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目 预算金额：4878万元 最高限价：4878万元 采购需求： 标的 标的名称 数量 简要技术需求或服务要求 本包预算金额（单位：万元） A 高端数字胃肠、医用影像显示器系统、超高端DR、高端DR 1 详见招标文件 1016 B 高端CT 1 详见招标文件 2000 C 高端心脏彩超、超高端全身彩超、高端全身彩超 2 详见招标文件 1450 D 胚胎三气培养箱、生殖专用彩色超声、恒温试管架、液氮罐电子指纹锁、二氧化碳浓度检测仪、胚胎储存液氮罐、妇科臭氧仪 1 详见招标文件 412 合同履行期限：合同生效后5个工作日内交货安装完毕。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无。 3.本项目的特定资格要求： 3.1所投产品须具有医疗器械产品注册证； 3.2 投标人为制造商的，具有医疗器械生产许可证；投标人为代理商的，需具有有效的医疗器械经营备案凭证或医疗器械经营许可证； 3.3 在“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）、中国政府采购网（http://www.ccgp.gov.cn/）未被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为名单； 3.4 本项目不接受联合体投标； 三、获取招标文件： 1.时间：2023年02月14日8时30分至2023年02月20日17时00分，每天上午08:30至12:00，下午14:00至17:00（北京时间，法定节假日除外） 2.地点：请登录中国山东政府采购网（www.ccgp-shandong.gov.cn）、菏泽市政府采购公共服务平台（http://ggzypz.heze.gov.cn/home）、鲁采采电子招投标交易平台（https://www.lucaicai.com）下载； 3.方式：凡有意参加本次政府采购的潜在投标人必须在“中国山东政府采购网（www.ccgp-shandong.gov.cn）”进行注册并针对本项目登记备案；报名截止时间前未在中国山东政府采购网注册的或者只注册未在网上针对本项目备案的投标人不具备参与本项目的投标资格（山东政府采购信息公开平台技术支持电话：0531-968123）； 4.招标文件售价：0元。 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点： 1.截止时间：2023年03月07日09时00分（北京时间） 2.开标时间：2023年03月07日09时00分（北京时间） 3.开标地点：菏泽市公共资源（国有产权）交易中心开标一室（菏泽市开发区济南路与钱江路交叉口向南200米路西） 五、公告期限： 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜： 1.采购标的、采购数量以招标文件为准。 2.本次招标活动采用电子化招投标，在“中国山东政府采购网”注册并备案成功后，同时投标人需在鲁采采电子招投标交易平台上进行如下操作：在鲁采采电子招投标交易平台（https://www.lucaicai.com）递交加密版电子投标文件，网上开标以电子投标文件为准，电子版投标件必须电子签章。在线递交电子投标文件前，投标人应当使用响应文件编制工具客户端及CA为响应文件加密，加密时响应文件均只能使用同一把企业CA证书进行加密，否则引起的解密失败的责任由投标人自行承担。CA办理有一定周期，详见鲁采采电子招投标交易平台“CA及签章办理”栏目内容相关通知。鲁采采电子招投标交易平台具体操作步骤，可在鲁采采电子招投标交易平台首页“常用工具”栏目中下载《鲁采采投标人操作手册》进行查看，如遇技术问题，请与鲁采采技术支持联系17205305555。 3.关于本项目的疑问提出、答复、变更、修改、澄清、补充内容及对项目的暂停、延期通知等情况均在中国山东政府采购网、菏泽市政府采购公共服务平台、鲁采采电子招投标交易平台发布。投标人自行查阅网站信息，或于招标开标会议前向招标代理机构电话询问确认，未按要求查阅者自行承担相应后果，恕不予单独告知。 七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系： 1.采购人信息 名称：菏泽市中医医院 地址：菏泽市牡丹区丹阳路1036号 联系方式：13561399987 2.采购代理机构 招标代理机构：山东鲁华招标有限公司 地 址：济南市市中区千佛山西路36-2号301室 联系方式：0531-81763131 3.项目联系方式 项目联系人：盛老师 联系人电话：0531-81763131 附件： 附件下载 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 基本信息 关键内容：培养箱,液氮罐 开标时间：2023-03-07 09:00 预算金额：4878.00万元 采购单位：菏泽市中医医院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：山东鲁华招标有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目招标公告 山东省-菏泽市-牡丹区 状态：公告 更新时间： 2023-02-13 招标文件: 附件1 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目招标公告 发布时间：2023-02-13 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目招标公告 项目概况： 菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目的潜在投标人应在中国山东政府采购网、菏泽市政府采购公共服务平台、鲁采采电子招投标交易平台获取招标文件，并于2023-03-0709:00:00（北京时间）前提交投标文件。 一、项目基本情况： 项目编号：SDGP371700000202302000021 项目名称：菏泽市中医医院生殖中心、影像科、体检中心医疗设备采购项目 预算金额：4878万元 最高限价：4878万元 采购需求： 标的 标的名称 数量 简要技术需求或服务要求 本包预算金额（单位：万元） A 高端数字胃肠、医用影像显示器系统、超高端DR、高端DR 1 详见招标文件 1016 B 高端CT 1 详见招标文件 2000 C 高端心脏彩超、超高端全身彩超、高端全身彩超 2 详见招标文件 1450 D 胚胎三气培养箱、生殖专用彩色超声、恒温试管架、液氮罐电子指纹锁、二氧化碳浓度检测仪、胚胎储存液氮罐、妇科臭氧仪 1 详见招标文件 412 合同履行期限：合同生效后5个工作日内交货安装完毕。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无。 3.本项目的特定资格要求： 3.1所投产品须具有医疗器械产品注册证； 3.2 投标人为制造商的，具有医疗器械生产许可证；投标人为代理商的，需具有有效的医疗器械经营备案凭证或医疗器械经营许可证； 3.3 在“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）、中国政府采购网（http://www.ccgp.gov.cn/）未被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为名单； 3.4 本项目不接受联合体投标； 三、获取招标文件： 1.时间：2023年02月14日8时30分至2023年02月20日17时00分，每天上午08:30至12:00，下午14:00至17:00（北京时间，法定节假日除外） 2.地点：请登录中国山东政府采购网（www.ccgp-shandong.gov.cn）、菏泽市政府采购公共服务平台（http://ggzypz.heze.gov.cn/home）、鲁采采电子招投标交易平台（https://www.lucaicai.com）下载； 3.方式：凡有意参加本次政府采购的潜在投标人必须在“中国山东政府采购网（www.ccgp-shandong.gov.cn）”进行注册并针对本项目登记备案；报名截止时间前未在中国山东政府采购网注册的或者只注册未在网上针对本项目备案的投标人不具备参与本项目的投标资格（山东政府采购信息公开平台技术支持电话：0531-968123）； 4.招标文件售价：0元。 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点： 1.截止时间：2023年03月07日09时00分（北京时间） 2.开标时间：2023年03月07日09时00分（北京时间） 3.开标地点：菏泽市公共资源（国有产权）交易中心开标一室（菏泽市开发区济南路与钱江路交叉口向南200米路西） 五、公告期限： 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜： 1.采购标的、采购数量以招标文件为准。 2.本次招标活动采用电子化招投标，在“中国山东政府采购网”注册并备案成功后，同时投标人需在鲁采采电子招投标交易平台上进行如下操作：在鲁采采电子招投标交易平台（https://www.lucaicai.com）递交加密版电子投标文件，网上开标以电子投标文件为准，电子版投标件必须电子签章。在线递交电子投标文件前，投标人应当使用响应文件编制工具客户端及CA为响应文件加密，加密时响应文件均只能使用同一把企业CA证书进行加密，否则引起的解密失败的责任由投标人自行承担。CA办理有一定周期，详见鲁采采电子招投标交易平台“CA及签章办理”栏目内容相关通知。鲁采采电子招投标交易平台具体操作步骤，可在鲁采采电子招投标交易平台首页“常用工具”栏目中下载《鲁采采投标人操作手册》进行查看，如遇技术问题，请与鲁采采技术支持联系17205305555。 3.关于本项目的疑问提出、答复、变更、修改、澄清、补充内容及对项目的暂停、延期通知等情况均在中国山东政府采购网、菏泽市政府采购公共服务平台、鲁采采电子招投标交易平台发布。投标人自行查阅网站信息，或于招标开标会议前向招标代理机构电话询问确认，未按要求查阅者自行承担相应后果，恕不予单独告知。 七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系： 1.采购人信息 名称：菏泽市中医医院 地址：菏泽市牡丹区丹阳路1036号 联系方式：13561399987 2.采购代理机构 招标代理机构：山东鲁华招标有限公司 地 址：济南市市中区千佛山西路36-2号301室 联系方式：0531-81763131 3.项目联系方式 项目联系人：盛老师 联系人电话：0531-81763131 附件： 附件下载

茂默科学以客户为本、合作共赢的理念，致力于帮忙客户提供整体实验方案。力求解决行业内客户对科学仪器选型难、维护难的处境。通过不断优化公司运作和提升服务质量，目前已赢得业内人士和广大客户广泛认可，拥有广泛而稳固的合作伙伴和客户群体。茂默科学现介绍细胞培养实验室设备配置及用途，想要了解更多仪器、实验室仪器选配、实验室整体打包方案制定，敬请咨询~1. 超净工作台实验室设备目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作，具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式（垂直式）和外流式（水平层流式）。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。（1） 侧流式工作台：空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌，工作台结构为封闭式；（2） 外流式工作台：净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，工作台结构为开放式，但进行有害物质实验操作对操作者不利。 超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度，符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级，用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均1个，根据无菌状况必要时需要置换过滤器。 2. 显微镜倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备，主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许，建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，可随时拍摄并记录细胞生长情况。3. 培养箱体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，一般适生长温度为37℃，温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时，变不利于细胞生存，温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此，可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是、佳选择。（1） 恒温培养箱：应选隔水式或晶体管式自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。（2） CO2培养箱：目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2（常用浓度为5％），易于稳定培养液pH，适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时，为使培养瓶内与外界保持通气状态，可将瓶盖略微旋松，为避免细胞被污染，使用这种培养方式时，培养箱内空气必须保持清洁，需定期用紫外线照射或酒精消毒，同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽，防止培养液蒸发，保持箱内相对湿度。（3） 细胞培养耗材：培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。4. 烘箱（干燥箱）用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到160℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至100℃以下后可开门。5. 水纯化装置细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合，可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便，可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液枪、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。6. 冰箱细胞培养实验室必备设备，应专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。普通冰箱：储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品，可短期保存组织样本。-20℃低温冰箱、超低温冰箱：用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂，如酶、血清等。7. 细胞冷冻储存器储存器常用的液氮容器，根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素：容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度、低温度可达-196℃，使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发，需注意观察剩余液氮量，及时补充，避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择，可配置有电子控制器的液氮储存器，实现冻存自动化；并可监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；可配置报警系统，设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警；同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止容器内升温。另外，可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮，保证样品安全。8. 离心机细胞培养时，通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机；若要做细胞沉降，需要使用80-100G离心力，因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求，有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。9. 天平常用的有精密天平和分析天平。 分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平：取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平；取样量100-10mg，选用精确度0.01mg的天平；取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准，可选择有自动校准功能的天平，方便维护。天平使用需要注意清洁，避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。

基本信息 关键内容： 离心机,培养箱,液氮罐 开标时间： 2022-01-18 11:00 采购金额： 625.50万元 采购单位： 甘肃省妇幼保健院 采购联系人： 邱伟涛 采购联系方式： 立即查看 招标代理机构： 甘肃省公共资源交易中心 代理联系人： 常婕 代理联系方式： 立即查看 详细信息 甘肃省妇幼保健院二氧化碳培养箱等招标公告 甘肃省-兰州市-城关区 状态：公告 更新时间： 2021-12-28 招标文件: 附件1 招标单位: 正在招标 招标产品:,,,,,,, 招标编号:FYZC2021015 甘肃省妇幼保健院二氧化碳培养箱等招标公告 2021-12-28 16:11:04 【甘肃省妇幼保健院二氧化碳培养箱等招标公告】，招标编码为【FYZC2021015】，招标项目内容包括【三气培养箱、液氮罐、IVF工作站、二氧化碳培养箱、洁净工作台、台式离心机、气体检测仪】，投标截止到【2022-01-18 11:00】，欢迎合格的供应商前来投标 项目编号：FYZC2021015 项目名称：甘肃省妇幼保健院IVF实验室设备政府采购项目 一、采购需求：(预算金额：625.5万元) 序号 货物名称 数量 1 双人IVF工作站1 1套 2 双人IVF工作站2 1套 3 ICSI工作站 1套 4 三气培养箱1 2台 5 三气培养箱2 6台 6 二氧化碳培养箱 4台 7 洁净工作台 3台 8 负压吸引器 1台 9 台式离心机 3台 10 恒温试管架 2台 11 实验室空气净化过滤机 1台 12 气体检测仪 1台 13 液氮储存罐 6台 14 运输液氮罐 1台 二、申请人的资格要求 满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。 三、获取招标文件 时间：2021-12-29 00:00:00至2022-01-05 23:59:59，每天上午00:00至12:00，下午12:00至23:59 地点：甘肃省公共资源交易网(https://ggzyjy.gansu.gov.cn)在线免费获得 方式： 2021年 12月29日至2022年1月5日,每日00:00-23:59，社会公众可通过甘肃省公共资源交易网免费下载或查阅招标文件。拟参与甘肃省公共资源交易活动的潜在投标人需先在甘肃省公共资源交易网上注册，获取“用户名+密码+验证码”，以软认证方式登录 也可以用数字证书(CA)方式登录。这两种方式均可进行“我要投标”等后续工作。详见《甘肃省公共资源交易网》首页“下载中心”中“电子服务系统v2.0电子版操作说明”，下载标书的网站：甘肃省公共资源交易网(https://ggzyjy.gansu.gov.cn/)。 售价：0(元) 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 时间：2022-01-18 11:00:00 地点：甘肃省公共资源交易中心(兰州市城关区雁兴路68号)第一电子开标厅。 五、对本次招标提出询问，请按以下方式联系 1.采购人信息 名 称：甘肃省妇幼保健院 地 址：甘肃省兰州市七里河区北街143号 联系方式：0931-5188873 2.采购代理机构信息 名 称：甘肃省公共资源交易中心 地 址：兰州市城关区雁兴路68号 联系方式：0931-2909387 3.项目联系方式 项目联系人：常婕 电 话：0931-2909387 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 基本信息 关键内容：离心机,培养箱,液氮罐 开标时间：2022-01-18 11:00 预算金额：625.50万元 采购单位：甘肃省妇幼保健院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：甘肃省公共资源交易中心 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 甘肃省妇幼保健院二氧化碳培养箱等招标公告 甘肃省-兰州市-城关区 状态：公告 更新时间： 2021-12-28 招标文件: 附件1 招标单位: 正在招标 招标产品:,,,,,,, 招标编号:FYZC2021015 甘肃省妇幼保健院二氧化碳培养箱等招标公告 2021-12-28 16:11:04 【甘肃省妇幼保健院二氧化碳培养箱等招标公告】，招标编码为【FYZC2021015】，招标项目内容包括【三气培养箱、液氮罐、IVF工作站、二氧化碳培养箱、洁净工作台、台式离心机、气体检测仪】，投标截止到【2022-01-18 11:00】，欢迎合格的供应商前来投标 项目编号：FYZC2021015 项目名称：甘肃省妇幼保健院IVF实验室设备政府采购项目 一、采购需求：(预算金额：625.5万元) 序号 货物名称 数量 1 双人IVF工作站1 1套 2 双人IVF工作站2 1套 3 ICSI工作站 1套 4 三气培养箱1 2台 5 三气培养箱2 6台 6 二氧化碳培养箱 4台 7 洁净工作台 3台 8 负压吸引器 1台 9 台式离心机 3台 10 恒温试管架 2台 11 实验室空气净化过滤机 1台 12 气体检测仪 1台 13 液氮储存罐 6台 14 运输液氮罐 1台 二、申请人的资格要求 满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。 三、获取招标文件 时间：2021-12-29 00:00:00至2022-01-05 23:59:59，每天上午00:00至12:00，下午12:00至23:59 地点：甘肃省公共资源交易网(https://ggzyjy.gansu.gov.cn)在线免费获得 方式： 2021年 12月29日至2022年1月5日,每日00:00-23:59，社会公众可通过甘肃省公共资源交易网免费下载或查阅招标文件。拟参与甘肃省公共资源交易活动的潜在投标人需先在甘肃省公共资源交易网上注册，获取“用户名+密码+验证码”，以软认证方式登录 也可以用数字证书(CA)方式登录。这两种方式均可进行“我要投标”等后续工作。详见《甘肃省公共资源交易网》首页“下载中心”中“电子服务系统v2.0电子版操作说明”，下载标书的网站：甘肃省公共资源交易网(https://ggzyjy.gansu.gov.cn/)。 售价：0(元) 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 时间：2022-01-18 11:00:00 地点：甘肃省公共资源交易中心(兰州市城关区雁兴路68号)第一电子开标厅。 五、对本次招标提出询问，请按以下方式联系 1.采购人信息 名 称：甘肃省妇幼保健院 地 址：甘肃省兰州市七里河区北街143号 联系方式：0931-5188873 2.采购代理机构信息 名 称：甘肃省公共资源交易中心 地 址：兰州市城关区雁兴路68号 联系方式：0931-2909387 3.项目联系方式 项目联系人：常婕 电 话：0931-2909387

公司近日获得Celartia公司的Petaka细胞培养板的中国区代理权！ Petaka细胞培养板对于国内的用户来讲，或许是一个比较陌生的产品。单是却已经风靡欧美等国，受到各国科学家的一致追捧！甚至有专家预言，它的出现，将改变大家的细胞培养观念！ Petaka细胞培养板为什么会如此之大的影响力呢？首先，基本性能优于传统的细胞培养；其次，高仿真的体外模拟环境；最后，多功能用途，一板多用； 更多的信息请查看http://premedlab.com/productshow.aspx?id=92&proid=300或者查询www.celartia.com。 更多的操作显示，请观看v.youku.com/v_show/id_XNDQ5ODkyNjky.htmlPetaka细胞培养板-操作演示 简而言之， Petaka细胞培养系将改变研究人员传统的培养观念！为细胞培养提供更加真实的体外模拟环境，为获得更加精确的数据提供有理的保证。

一提到细胞培养，这是多少实验者的噩梦，简直… … 说多了都是泪。小编经过软磨硬泡终于从师兄师姐那里讨到了细胞培养秘籍，今天就大方一回，分享给大家。★ 血清与培养基的选择一般实验血清的添加比例为10%，也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。对于培养基，建议选择商品化的，比较成熟，稳定性也较好。★ 培养瓶的选择目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖，保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。细胞培养过程中，对于适应能力强的肿瘤细胞，可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293T等细胞，建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。★ 细胞传代传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。▶ 湿消化法：待细胞变圆，成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化，1000rpm离心5min，弃去上清，用新鲜培养基重悬传代。▶ 干消化法：胰酶浸润后弃去胰酶，待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。不同细胞的细胞间连接强度不一样，消化时间不同；不同细胞的贴壁能力不同，消化时间不同；消化时应观察细胞形态，避免因过度消化影响细胞活性。★ 细胞冻存与复苏当细胞生长状况较好或者代数较早时，需及时大量的冻存。细胞冻存密度通常为1-3×106个/ml。通常4℃放置0.5h，-20℃放置2h，-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。细胞复苏38℃水浴不时摇动，在1分钟内使其完全融化，1000rpm离心5min,弃去上清，用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。★ 污染防控细胞培养最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。实验中需保持良好的操作习惯，所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。ECHO强大的活细胞成像工作站INCUBATOR+REVOLUTION智能电动化显微镜

每年暑假，200余支南京林业大学（以下简称“南林大”）研究生社会实践团队来到田间地头和厂房车间，进行生态政策宣讲、生态科技服务等，为当地百姓传播生态知识，带来生态理念。这个名为“美丽中国行”的常规活动，8年来共有近5000名研究生的足迹踏上了全国20多个省市。　　自2020年9月我国提出“双碳”目标后，南林大积极推动对接国家“双碳”战略的“南林实践”。作为一所以林为特色和优势的“双一流”建设高校，南林大为我国“双碳”目标实现提供智力和人才支撑。　　绿色基因植入学子心田　　“将绿色基因植入学子的心田，给他们打上厚重的绿色生态底色，为国家‘双碳’目标实现提供人才，是我们人才培养一直以来的特色和优势。”据南林大教务处处长王立彬介绍，近年来，南林大完善课程设置，不断增加生态类选修课数量，目前绿色文明类通识选修课程由2016年的12门增加至59门，学生选修学分由原来2个学分，增加到4-6个学分。　　南林大还鼓励并要求各学院开设本院专业与生态环境学科交叉的必修课和选修课。目前，所有学院都开设了生态环境类必修或选修课程。浸染绿色的交叉课程吸收林科优势专业的营养，促进“非林”专业与林科专业间的深度融合，为所有学生带来生态绿色的丰厚滋养。　　扎实有效的绿色主战场培养了一批批绿色学子。在每年的毕业设计展上，“零污染”“零甲醛”、巧用废弃物等作品琳琅满目，生态环保是每一届毕业生创作关注的重要主题。据了解，艺术院研究生毕业作品中，环保类设计占80%以上。　　“科技护林、生物质负碳能源利用技术、无醛高性能胶粘剂研发… … ”在第七届中国国际“互联网+”大学生创新创业大赛上，南京林业大学学子捧回5个金奖。而这5个桂冠无不打上“双碳”元素。　　绿色成果进入千万家　　2019年5月，南林大成立中国特色生态文明建设与林业发展研究院； 2021年11月，南林大携手上海瓶行宇宙环保科技有限公司成立“双碳”研究项目组并设立“双碳”研究项目基金，将进一步打造南林低碳品牌，创建全国低碳校园示范。　　这是南林大对接国家“双碳”战略的生动实践，也是为该校“双碳”成果培育和绿色人才培养提供了平台和载体。　　立足学校特色和优势，在生态文明建设需求上寻找课题，研发绿色科技成果，创造生态科技产业，为国家和社会生态文明建设提供咨询服务和智力支持，为国家”双碳“目标实现贡献南林智慧… … 这是南林大教师自觉的价值追求。　　2021年，围绕“双碳”热点，该校组织申报“沿海滩涂农林复合系统能源作物和林木培育及与碳汇能力提升关键技术研究”等3个项目立项江苏省碳达峰碳中和科技创新专项资金。　　该校专家在林木遗传育种、森林保护、农林废弃物利用、林产化工、生态与环境、园林规划与设计等方面创造了大量绿色科技成果和产业，直接推动了我国生态科技事业发展，为地方经济建设作出了突出贡献。　　据统计，近年来，南林大教师申报的生态环保类科研项目占学校科研总项目数的70%以上。　　科研反哺教学，教师聚焦绿色生态项目，必然给学生带来绿色的思维和知识，满怀生态情怀的老师也必然会培养出绿色学子。　　不仅如此，南林大专家、学者还带领学生走出校门，把生态科技成果和理论向社会推广、传播。　　该校师生深入企业，钻进树林，来到田间地头，指导企业和农民创造生态科技产业，解决实际生产和生态环境问题，不仅改善了地方生态环境，还促进了农民增收致富，学校连续8年获“挂县强农富民工程突出单位”。　　挂靠在南林大的“江苏环境与发展研究中心”，以生态伦理与环境保护为研究方向，作为江苏省“科技思想库基地”，为江苏省政府的生态文明建设等相关决策提供咨询服务和智力支撑。该校专家、学者每年深入地方开展生态科技服务活动达400人次以上。　　绿色文化传播校内外　　“让黄河流碧水，赤地变青山”“替山河装成锦绣，把国土绘成丹青”… … 在南林大校园各主干道，这种绿色标语一字排开；“树人树木”的景观石刻点缀于绿草红花之间。校训“诚朴雄伟，树木树人”，校歌“为了碧水青山”。　　打造低碳校园，离不开低碳文化。作为一所林业高校，南林大努力打造生态化低碳文化，力争让每一栋建筑都说话，让每一个空间都传情，让一草一木都育人。　　每年南林大校园樱花盛开，灿若云霞，以“生态文明责任与使命”为主题的“生态文化节”便会如期举行，目前已连续举办5届，共组织开展生态文化高层论坛、南林幸运树评选、大学生绿色科技创新作品展、生态书画摄影作品展等130余项活动，让生态文化“随风潜入夜，润物细无声”般地涵养学子心田。　　在南林大，形式多样的生态主题活动不胜枚举，学子在丰富多彩的活动中，生态意识和生态责任自觉悄然形成。　　该校林学院教师把课堂搬到田野、公园和农家小院，引导学子通过改造废旧物品来实现循环利用，将图纸上的设计方案转化为一个个精致的庭院意境。这项花园设计与营建竞赛活动如今已连续举办14届，已成为该校一项传统品牌生态文化活动。　　此外，学校利用春季樱花开放时节、植树节、世界环境日等重要节日节点，组织师生广泛开展植树、节能和节水教育、绿色出行等环保宣传和生态文明实践行动。

微生物检测培养基质量控制问答1、培养基灭菌后成份会有所蒸发减少，如何处理这个问题？答：正常情况下蒸发量较少，可忽略不计。2、培养基融化后出现浑浊是有哪些方面的原因引起的？应如何避免？答：可能的情况有:1. 培养基配置用水不符合规定；2. 灭菌过程温度升温慢或降温慢；3. 培养基储存不当；4. 融化时沸腾时间较长等。3、准备好的培养基有效期如何验证？答：定期取出培养基验证其无菌性，促生长能力等方面。4、培养基配制好灭菌后，在高压容器中保温降至50℃左右，可不可行？答：建议最-好不要，避免过度受热。5、脱水培养基对湿度是否有要求？多少适宜？答：按要求室温干燥环境储存即可。6、培养基pH值测定温度在25℃，这个温度应怎么控制？答：可水浴控制培养基温度。7、配制培养基过程中，按说明书称定量，加规定的纯化水，煮沸溶解，为了避免煮沸过程总减少水分，是否要在配制过程适当增加水?答：可适量增加，自己掌握。8、商品培养基一定要当天配当天用吗？可否在一周内用完？答：不是即配即用的培养基的话，储存的当，可以使用。9、称量培养基时，注意不要吸入粉末，这粉末是指何物？答：就是你所称量的干粉培养基 ，因为培养基的粉末对呼吸道有刺激作用，而且培养基中的某些成分，如亚硒-酸盐、叠氮-化钠、乙酰胺等，长期吸入并在体内累积到一定量会对人体健康有危害。所以培养基配制称量需做好个人防护，且最-好选择少粉尘环保型颗粒培养基。10、煮培养基，用不锈钢锅在电磁炉上煮可行？硫乙醇培养基是否要煮沸？如何煮沸？用不锈钢锅在电磁炉上煮沸可行吗？可不可以水浴煮沸呢？答：硫乙醇应煮沸，量大时，我实验室用不锈钢锅在电磁炉上煮沸。不建议水浴煮沸，因为水浴煮沸琼脂粉很难溶，导致琼脂分装不均匀，前段分装的琼脂含量少，后段分装的琼脂含量高，导致有的管或瓶中的FT凝固。11、如培养基在高压灭菌器中温度需自然下降20度才开盖吗？答：高温灭菌器有安全阀，温度下降到安全阀可打开时将培养基取出室温冷却，各型号灭菌器安全开盖温度不尽相同。12、平板涂布和平板划线培养基表面水分过多，菌落蔓延如何解决？答：对于采用表面接种形式培养的固体培养基，应先对琼脂表面进行干燥：揭开平皿盖，将平板倒扣于烘箱或培养箱中（温度设为25℃～50℃）；或放在有对流的无菌净化台中，直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。

1、细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。1.1 平衡盐溶液（balanced salt solution，BSS）BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank' s与Hank' s的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank' s常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份，参与细胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液，前者缓冲能力较弱，适合于密闭培养；后者缓冲能力较强，适合于5% CO2的培养条件。表1-1 几种常用的BSS配方（g/L）名称PBS（无Ca2+、Mg2+）PBS（含Ca2+、Mg2+）Earle’sHank’sD-Hank’sKrebs-RingerNaCl8.008.006.808.008.007.00KCl0.200.200.400.400.400.34CaCl2--0.200.14-MgCl2• 6H2O-0.10---MgSO4• 7H2O--0.20.2-Na2HPO41.151.15-0.0480.0480.10Na2HPO4• 2H2O--0.14--0.207KH2PO40.200.20-0.060.06NaHCO3--2.200.350.35-葡萄糖--1.001.00-1.80酚红--0.010.010.01-目前用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外，血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。目前，血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5~20 %，最常用是10 %。1.2 合成细胞培养基合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基（minimal essential medium, MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见下表：哺乳动物细胞培养基：培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后，可广泛用于多种细胞培养，并用于病毒学、疫苗生产等MEM细胞培养基MEM（Minimal Essential Medium）培养基有含Earle' s平衡盐的类型，也有含Hanks' 平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。是最基本、适用范围最广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’s modified Minimal Essential Medium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’s modified DMEM ）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交瘤细胞培养，以及无血清培养的基础细胞培养基。GMEM细胞培养基Glasgow’s MEM培养基是MEM的改进型，用于支持BHK-21细胞的生长。原配方以BME为基础， 加入10%磷酸胰蛋白(月示)肉汤，氨基酸和维生素浓度加倍。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，广泛适于多种正常细胞和肿瘤细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞，也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后营养成份丰富，血清使用量也减少，常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。McCoy' s5AMcCoy' s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)原代细胞的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。William' s Medium E适用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。神经元基础培养基可为神经元生长提供基础营养物质。昆虫细胞培养基：培养基名称特性及应用范围Grace' s昆虫培养基Grace昆虫培养基（Grace' s Insect Medium）最初设计为支持澳大利亚白星橙天蚕蛾 (Antherea eucalypti) 细胞 的生长，是对Wyatt培养基的改良，以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用这种培养基建立了第一个连续细胞系。适当补充添加剂后，该基本培养基已用于培养各种昆虫细胞，包括多种鳞翅类以及一些双翅类昆虫。Grace昆虫细胞培养基主要作为 培养基基础，用于培养Sf9 和Sf21细胞系，也用于其它鳞翅类昆虫细胞系的生长和维持。Grace' s培养基(Grace’s Insect Cell Culture Medium) 是无血清培养基，使用时需要补充血清，从而为细胞提供必要的营养因子。添加5 -20%胎牛血清后，Grace昆虫细胞培养基可以用于培养多种昆虫细胞。IPL-41 昆虫培养基 IPL-41昆虫培养基（IPL-41 Insect Medium）旨在用于大规模扩增草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）细胞系，也常用于通过杆状病毒表达系统（BEVS）进行蛋白表达。 IPL-41培养基是对原始IPL配方的改良，由美国农业部昆虫病理实验室Weiss等人开发，用于大规模扩增草地贪夜蛾衍生细胞系。Weiss向基础培养基中加入了胎牛血清和TPB培养基（Tryptose Phosphate Broth），成功地实现了IPL-21 AE (III)细胞系的大规模连续培养。该培养基主要用于培养和维护鳞翅类衍生细胞系和扩增这些细胞系的病毒。IPL-41培养基基础也以用于无血清夜蛾细胞的杆状病毒重组蛋白表达。Shield' s & Sang Insect向Sheilds-Sang M3昆虫培养基中添加10%胎牛血清后广泛用于培养各种果蝇细胞系。Sheilds-Sang M3昆虫培养基（Sheilds and Sang M3 Insect medium） 基于D22培养基。该培养基支持黑腹果蝇衍生细胞的生长。Sheilds和Sang将原配方中的氯化物除去，用谷氨酸盐提供钠和钾离子，并用游离氨基酸替代乳白蛋白水解物。Bis-Tris作为缓冲剂放置pH变动。Schneider' s 果蝇培养基 很多昆虫组织培养基的配方是模拟特定昆虫体液的主要物理化学性质。针对相同物种的不同培养基成分的相似度可能比针对不同物种的培养基之间更低。有多种培养基用于果蝇细胞和组织的体外培养。应用最多的是Schneider 培养基、D-22 培养基。果蝇细胞用于研究各种生物化学过程，包括遗传学、内分泌学、生理学和细胞生物学等方面，以及重组蛋白的表达。加入5-20% 胎牛血清后Schneider培养基能够支持黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）原代细胞和建立的细胞系的快速生长。该培养基用于培养和维护果蝇胚胎衍生的细胞系以及其它双翅目昆虫细胞培养物细胞培养基常用几种重要的添加成分及使用过程中应注意的问题酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34 g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25 mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好单独配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。赖氨酸（L-lysine）：分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长，也可以用于组织学(Histology)分析时的粘片剂。Poly-L-lysine和Poly-D-lysine都可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化并吸收，摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。如果遇到Poly-L-lysine有细胞毒性的情况，可以考虑选用Poly-D-lysine，因为右旋的聚赖氨酸是不会被生物吸收利用的，所以毒性更低。远慕生物致力于生物技术和生命科学等行业领域，专注于植物生物学技术研究，以满足全球不断增长的食品，能源、医药日益增长的需求和发展。目前远慕生物制造和提供的产品主要有动物细胞培养产品（包括细胞培养基、FBS、缓冲溶液、抗菌剂和其他试剂）和植物生物学产品（包括植物组织培养基、凝胶系列产品、植物生长调节剂、抗生素&抗菌剂、生化试剂以及植物组培容器和耗材）。

霉菌培养箱操作使用注意事项霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域,是水体分析、BOD测定，细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。要菌培养箱使用时的注意事项具体如下:1、用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度，使箱体安置平稳2、搬运时必须小心，搬运时与水平面的夹角不得小于45°3、加湿器的安装:将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上，再将仪器的加湿管与加湿器相连，相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作作。4、当使用温度较低时，应定期倒掉位于箱内底部积水盘内的积水.5、如箱内不用杀菌时，应将面板上的杀菌开关置于“关”的位置.6、当温度设定好之后，不能随便将控温旋钮来回多次旋转，以免压缩机启动频繁，造成压缩机出现过载现象，影响压缩机的使用寿命。7、仪器背部装有二组保险盒，2A为制冷加热负载保险丝盒，8A为控制电源保险丝盒，若机器运转出现故，例如控温失灵，不加热或不制冷，须切断电源，分别检查保险丝是否完好，再检查相应部位。8、当湿度传感器长时间处于高湿状态，会形成结露即湿度显示值会居高不下，若需要准确的湿度显示值，则应关机后，将培养箱箱门打开，让湿度传感器处于室温中，自然干爆后，即可继续使用。9、为了保证设备的外观完好，禁止用酸或碱及其它腐蚀性物品来擦表面，箱内可以用干布定期擦干。激活 Windows转到“设置”以激活Wind10、当仪器在停止使用时，应拔掉电源插头。 ● 仪器试用环境适用于恒温试验、环境试验、低温培养、冷藏保存等场合。是水体分析培养、发酵、各种恒温试验、环境试验、水体分析、 BOD测定、微生物培养物质变性试验和培养基、血清、药物等物品的储存等。广泛应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环 境保护等研究应用领域。●仪器特点◆ 配备进口带刹万向脚轮，外形小，承重性好，双轮设计转动顺畅，移动安全便捷。◆ 门与箱体之间采用耐高温之高张性密封条以确保测试区的密闭，保证测试数据的精度和稳定。 以高质量抗菌不锈钢材质和经圆边处理而制成的光滑表面.易于清洁和保持完美的清洁度。◆ 独特的风道结构，进口风扇马达搭配耐高、低温的多翼式结构循环搅拌风叶，以达到空气的强制对流垂直扩散循环效果。◆ 采用模糊PID智能控制方式，具有可编程的程序运行模式，温度控制输出功率由微电脑自动演算，以达高精度及高效率之 用电效益。◆ 配备外部RS232通讯接口及警报输出端口，方便用户连接外部PC机对试验数据进行监控显示和打印输出。加强了人机对话功能，有效确保了试验的直观性。◆ 标配有漏电保护、独立的可调温度安全装置、压缩机过压保护、冷却风机过热保护、开门报警、停电报警、传感器报警 等功能确保用户使用的绝对安全性。◆ 控制系统具有自动除霜和手动除霜两项除霜功能供用户选择(做长期试验时建议选择自动除霜功能),可有效避免设备 运行中因蒸发器结霜严重而造成设备箱体内温湿度产生漂移等现象。◆ 配置进口品牌压缩机和德国EBM散热风机.霍尼韦尔PT1000三芯高精度温度传感器。◆培养箱内部可以选配万用防水插座，便于用户在培养箱内使用其它实验设备。◆具备超大可视观察窗，能在外门不被开启的情况下，全方位、立体式观察设备内部各个区域的实验情况。风道结构：独特的风道结构，进口耐高温电机搭配耐高温的多翼式结构循环搅拌风叶，以达到空气的强制对流垂直扩散循环效果。放置隔板：:用户可随意调节测试区域隔板间间距和 言密，具跳也瓦方便安装和取出雨板

p　　生物医药产业是高新科技产业，随着生物医药产业的快速发展，我国生物制药产业也进入了快速上升期，而单克隆抗体药物在整个产业中无疑是最为重要的组成部分。目前生物制药产业发展面临人才短缺的挑战，而我国高等专业教育尚不能满足生物制药产业发展的需求，大部分生物医药相关专业毕业生缺乏该产业急需知识和技能而面临就业难。在职职工专业教育是生物医药产业正常运营的基础保障，更是各国药政机构监管的重点。随着新技术新方法和药政监管新政策持续涌现，生物医药技术专业教育和继续教育尤其重要。中国蛋白药物质量联盟将针对我国生物医药产业发展现状和国际产业技术的发展进步，特别是各国药政监管要求，推出生物制药产业技术系列职业培训。本期设为无血清细胞培养技术培训。/pp　　无血清细胞培养技术培训/pp　　自上世纪八十年代初期Jennie Mather博士主编出版第一部无血清细胞培养技术专著及在美国长岛冷泉港实验室举办第一届无血清细胞培养技术实验培训课程以来，无血清细胞培养技术迅速被生物医学研究机构及生物技术企业所使用，在基础研究及工业生产中起着极其重要的作用。/pp　　此培训旨在帮助大家了解无血清细胞培养的基本技术、思考如何选择和利用无血清细胞培养来满足基础研究及工业生产的需求，使无血清细胞培养技术在各领域得到更多更好的利用。/pp　　strong一、主办单位/strong/pp　　中国蛋白药物质量联盟/pp　　strong二、培训时间/strong/pp　　时间：2017年06月07日 PM 1:00-5:00/pp　　地点：上海远洋宾馆，虹口区东大名路1171号(近霍山路)多功能厅/pp　　strong三、培训目标人群/strong/pp　　本次培训旨为生物医药产业的技术研发负责人、细胞培养业务骨干温故知新 为职场新人、在校大学生以及对细胞培养感兴趣的相关人员夯实基础。/pp　　strong四、培训内容/strong/pp　　此培训班将首先由Mather博士介绍无血清细胞培养技术的发展历史，包括其在Sato博士实验室建立原代细胞无血清培养技术以及在基因泰克(Genentech)公司建立蛋白药生产CHO细胞无血清培养方法等历史回顾，其后由李荣皓博士介绍原代细胞、蛋白药表达细胞、疫苗生产细胞及细胞治疗所使用的细胞等多种不同类型细胞细胞的无血清细胞培养方法，和大家一起分析和讨论技术细节。最后中国蛋白药物质量联盟将颁发培训证书/pp　　strong五、主讲嘉宾简介/strong/pp　　Jennie Mather博士(美国)，珠海恺瑞生物科技有限公司共创人，是哺乳动物无血清细胞培养技术的创始人之一，1970至1978年在美国圣地亚哥加州大学(UCSD)Gordon Sato博士的实验室从事博士及博士后研究工作期间与实验室同事共同创建了无血清细胞培养技术。Mather博士在国际上首次使用F12/DMEM无血清细胞培养液从事无血清细胞培养，其后为Genentech公司创建了CHO细胞高密度无血清细胞培养方法，用来生产抗体及蛋白药物，先后为Herceptin等8个临床使用的蛋白药的工业化生产做出了重大贡献。Mather博士多年来一直活跃在无血清细胞培养技术领域，发表了多篇具有开创意义的无血清细胞培养技术的文章并组织撰写了世界上第一本无血清细胞培养技术专著，为无血清细胞培养技术的推广和和应用做出了杰出的贡献。Mather博士曾应邀于1981年在世界著名的美国长岛冷泉港实验室举办上国际上首次全面的无血清细胞培养技术讲习班，将无血清细胞培养技术迅速推广到国际生物医学研究及生物工程技术领域。Jennie与中国学术界的关系源远流长，在上世纪80年代初期通过其实验室访问学者中科院动物所庄临之教授将无血清细胞培养技术介绍到国内，并亲自于上世纪90年代至2000年代先后在北京举办了三届无血清细胞培养技术讲习班。/pp　　李荣皓博士，上世纪80年代师从于中国无血清细胞培养技术鼻祖庄临之研究员，其间利用无血清细胞培养技术建立了国际首例人胎盘滋养层细胞株以及国际首个无血清细胞培养麝香蛋白表达细胞株。1992年李博士加入美国Genentech公司Jennie Mather博士研究组，先后从事过细胞培养工艺开发以及蛋白新药研发工作。1996年李博士加入 Signal Pharmaceutical, Inc. (现Celgene公司)，成为该公司资深新药研发科学家，利用其无血清细胞培养技术为公司建立了数个高难度原代细胞药物筛选实验模型。数年之后李博士应Mather博士邀请，加盟Mather博士创建的Raven Biotechnologies公司，全面负责公司新药研发包括从早期的实验研究到临床试验抗体药生产的各个重要技术环节，并发明了国际首个细胞蛋白标记物高通量筛选(cell array)技术专利，为公司研发项目的顺利进行做出了杰出的贡献。/pp　　2006年李博士与另外两位旅美中国科学家在北京共同创办了Autekbio公司，成为中国第一家从事抗体药生产的服务公司。李博士作为公司的技术主管，负责为公司客户开发抗体生产细胞株，并为客户设计国产化的高密度无血清细胞培养基，使得抗体生产成本大为降低。2010年李博士应邀加入恒瑞，在短暂担任公司首任抗体部技术负责人职务之后离职回美，随后与Jennie Mather博士及武军先生共同创建了珠海恺瑞生物科技有限公司。/pp　　strong六、会议议程/strong/ptable border="0" cellspacing="0" cellpadding="0" width="606"tbodytr style=" height:35px" class="firstRow"td width="95" style="border-width: 1px border-style: solid border-color: windowtext padding: 0px 7px " height="35"p style="text-align:center"strongspan style="font-size:19px font-family:宋体"时间/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height="35"p style="text-align:center"strongspan style="font-size:19px font-family:宋体"报告题目/span/strong/p/tdtd width="88" style="border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height="35"p style="text-align:center"strongspan style="font-size:19px font-family:宋体"报告人/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: none padding: 0px 7px " height="35"p style="text-align:center"strongspan style="font-size:19px font-family:宋体"单位/span/strong/p/td/trtr style=" height:28px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="28"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"13:20-13:30/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="28"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"欢迎致辞/span/p/tdtd width="88" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="28"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:宋体"史晋海博士/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="28"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"中国蛋白药物质量联盟秘书长/span/p/td/trtr style=" height:37px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="37"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"13:30-14:15/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="37"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"无血清细胞培养技术的发展历史及经验/span/p/tdtd width="88" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="37"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:宋体"Jennie Mather/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="37"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"国际无血清细胞培养鼻祖/span/pp style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"珠海恺瑞生物科技有限公司/span/p/td/trtr style=" height:36px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"14:15-15:00/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"原代细胞的无血清细胞培养方法/span/p/tdtd width="88" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:宋体"李荣皓博士/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"国际著名细胞培养专家，/span/pp style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"珠海恺瑞生物科技有限公司/span/p/td/trtr style=" height:24px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="24"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"15:00-15:30/span/strong/p/tdtd width="511" colspan="3" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="24"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:楷体"茶歇/交流/span/strong/p/td/trtr style=" height:44px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"15:30-16:15/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"蛋白药表达细胞和疫苗生产细胞的无血清细胞培养方法 /span/p/tdtd width="88" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:宋体"李荣皓博士/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"国际著名细胞培养专家，/span/pp style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"珠海恺瑞生物科技有限公司/span/p/td/trtr style=" height:44px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"16:15-17:00/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"细胞治疗所使用的细胞的无血清细胞培养方法/span/p/tdtd width="88" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:宋体"李荣皓博士/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"国际著名细胞培养专家，/span/pp style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"珠海恺瑞生物科技有限公司/span/p/td/trtr style=" height:44px"td width="95" style="border-right: 1px solid windowtext border-bottom: 1px solid windowtext border-left: 1px solid windowtext border-top: none padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family: Symbol"17:00-17:30/span/strong/p/tdtd width="224" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-indent: 77px"span style=" font-family:宋体"问答讨论/span/p/tdtd width="88" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"strongspan style=" font-family:宋体"李荣皓博士/span/strong/p/tdtd width="198" style="border-top: none border-left: none border-bottom: 1px solid windowtext border-right: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " height="44"p style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"国际著名细胞培养专家，/span/pp style="text-align:center"span style=" font-family:宋体"珠海恺瑞生物科技有限公司/span/p/td/tr/tbody/tablep　　strong七、注册事宜/strong/pp　　培训说明：本次培训免费，证书费(自愿)500元/人，差旅食宿自理。/pp　　获取更多资讯，敬请联系中国蛋白药物质量联盟秘书处：/pp　　联系人：蔡老师/pp　　电 话：+86-22-65378072/pp　　手 机：+86-18702257197/pp　　邮 箱：cailijuan1986@126.com/pp style="text-align: right "　　中国蛋白药物质量联盟/pp style="text-align: right "　　2017年05月13日/pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "生物制药产业技术系列职业培训——无血清细胞培养技术培训/span/strong/pp style="text-align: center "strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "　　参会报名表/span/strong/pp/ptable border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"tbodytr style=" height:38px" class="firstRow"td style="border-width: 1px border-style: solid border-color: rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="38"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"单位名称/span/strong/p/tdtd colspan="2" style="border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="38"br//tdtd style="border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="38"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"联 系 人/span/strong/p/tdtd style="border-top: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="38"br//td/trtr style=" height:36px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"单位地址/span/strong/p/tdtd colspan="2" style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"联系电话/span/strong/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//td/trtr style=" height:76px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="76"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style=" font-family:宋体"行业类别/span/strong/p/tdtd colspan="2" style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="76"p style="line-height: 29px"span style=" font-family:宋体"联盟单位□ 非联盟单位□ /span/pp style="line-height: 29px"span style=" font-family:宋体"学生□ 赞助单位□/span/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="76"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"电子邮件/span/strong/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="76"br//td/trtr style=" height:36px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"学员姓名/span/strong/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"部 门/span/strong/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"职 务/span/strong/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"手 机/span/strong/p/tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"p style="text-align:center line-height:29px"strongspan style="font-size:16px font-family: 宋体"电子邮件/span/strong/p/td/trtr style=" height:36px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//td/trtr style=" height:36px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//td/trtr style=" height:36px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//td/trtr style=" height:36px"td style="border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-left: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-top: none rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//tdtd style="border-top: none rgb(0, 0, 0) border-left: none rgb(0, 0, 0) border-bottom: 1px solid rgb(0, 0, 0) border-right: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 0px 7px " height="36"br//td/tr/tbody/tablep　　(请您查收填写参会报名表，填写后将报名表发送office@cpdqa.org)br//ppbr//p

被推荐的领军人才须在50岁以下，仍然工作在科研一线，并主持国家和北京市的重大项目，而检验培养成效的一条不成文的标准是：使之具备“冲击”院士的实力。　　北京市将通过项目带动、产学研用结合、国际合作交流等形式，在未来10年培养百名科技领军人才。这项名为科技北京百名领军人才培养工程的人才计划日前启动实施。　　具备科研水平一流、管理能力突出、成果国际前沿、专业贡献重大等特征，并能够引领和促进新兴学科形成与产业关键技术发展的人才，在未来将成为首都发展急需的科技领军人才。　　科技领军人才的培养，将以培育壮大首都战略性新兴产业为目标，同时实现人才的跨越发展。记者了解到，被推荐的领军人才须在50岁以下，仍然工作在科研一线，并主持国家和北京市的重大项目，而检验培养成效的一条不成文的标准是：使之具备“冲击”院士的实力。　　人才+团队+领域　　北京泰德制药股份有限公司副总经理张扬、北京理工大学教授林程、中科院化学所研究员宋延林等27名人员入选首批科技北京百名领军人才培养工程。　　首批入选人员来自生物制药、医疗卫生、现代农业、工业设计、新能源汽车、新能源、新材料、电子信息、装备制造、轨道交通、节能环保、公共安全、城市建设13个领域，平均年龄44.2岁，最年轻的仅38岁。其中，来自高校1人，医院3人，科研院所6人，企业17人。　　据悉，北京市将对入选人员及时给予科研项目配套，推荐入选人员及其团队承担国家和北京市科技计划项目，对于入选人员在研项目和申报项目优先给予经费支持和保障，充分发挥科技计划对领军人才的培养和支持作用 同时，结合入选人员及其团队实际情况和需要给予一定数额培养经费，支持和引导所在单位加大人才培养投入，探索建立多元化人才培养投入机制 入选人员及其团队可优先使用首都科技条件的仪器设备开展科研工作 优先推荐入选人员领衔的实验室和研究中心申报认定北京市重点实验室和北京市工程技术研究中心 为领军人才提供科研成果知识产权保护、技术市场交易政策指导和中介服务，加强对领军人才及其团队成果转化、产业化的科技金融服务。　　该项工程还要求，依托科技领军人才的培养，立足首都发展需求，构建一批由科技领军人才领衔的成熟、稳定、高效的科技创新团队，并推动科技领军人才及其创新团队的创新成果在首都转化为现实生产力，引领和带动北京市战略性新兴产业的形成和发展。　　领军“创业创效”　　科技北京百名领军人才培养工程是《首都中长期人才发展规划纲要(2010-2020年)》(简称《纲要》)确定的12项重点人才工程之一。区别于国家“千人计划”、北京市海外人才聚集工程等人才计划，该工程重点在于对首都发展急需人才及团队的培养，并寄望于在未来产业发展中起到支撑和引领的作用。　　此外，科技领军人才不仅被要求在学术道德、科研能力、组织协调、项目管理等方面有突出表现 还要具备出众的个人魅力和团队凝聚力，能带出一支优秀团队。　　领军人才是在首都战略性新兴产业和重大科技攻关项目中发挥重大作用、具有突出贡献引领性人才，北京希望通过一系列人才措施，使他们成为科技创新水平领先、创业创效中领军、产业发展中领航的科技英才。　　值得注意的是，此次首批入选领军人才培养工程的人员中，不乏同时入选“千人计划”、北京市海外人才聚集工程等人才计划的杰出人才。　　据悉，“十二五”期间，北京将进一步贯彻落实“千人计划”、北京市海外人才聚集工程和中关村高端人才聚集工程等人才战略举措，在全球范围内招纳和吸引高端领军创新人才和高层次创业人才，并在关键技术、高新产业、新兴学科、人才机制创新等方面获得新突破，取得一批新成果。

详细信息 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目公开招标公告 湖南省-长沙市 状态：公告 更新时间： 2022-05-23 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目公开招标公告 2022年05月23日 15:48 公告信息： 采购项目名称 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目 品目 货物/专用设备/医疗设备/其他医疗设备,货物/专用设备/医疗设备/医用激光仪器及设备,货物/专用设备/医疗设备/医用超声波仪器及设备,货物/专用设备/医疗设备/医用电子生理参数检测仪器设备 采购单位 中南大学湘雅医院 行政区域 长沙市 公告时间 2022年05月23日 15:48 获取招标文件时间 2022年05月23日至2022年06月17日每日上午:8:30 至 12:00 下午:14:30 至 17:30（北京时间，法定节假日除外） 招标文件售价 ￥400 获取招标文件的地点 微信公众号“51医疗采购”—自助服务—51小程序（或微信小程序“51医疗招标”） 开标时间 2022年06月22日 09:00 开标地点 湖南五一招标有限公司（湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼）。 预算金额 ￥389.480000万元（人民币） 联系人及联系方式： 项目联系人 袁女士、李先生 项目联系电话 0731-89752082 采购单位 中南大学湘雅医院 采购单位地址 湖南省长沙市湘雅路87号 采购单位联系方式 廖先生、0731-89752083 代理机构名称 湖南五一招标有限公司 代理机构地址 湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼 代理机构联系方式 袁女士、李先生、0731-89752082 项目概况 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目 招标项目的潜在投标人应在微信公众号“51医疗采购”—自助服务—51小程序（或微信小程序“51医疗招标”）获取招标文件，并于2022年06月22日 09点00分（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目编号：HNWY-2022112 项目名称：中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目 预算金额：389.4800000 万元（人民币） 采购需求： 包号 条目号 品目名称 简要技术要求 数量 采购总限价 （万元） 是否 进口 使用科室 是否需要专用耗材或试剂 1 1 全自动精浆生化分析仪 详见招标文件 1 9.5 国产 生殖医学中心 是 2 1 医用培养箱 详见招标文件 2 16 进口 生殖医学中心 否 3 1 四维彩色多普勒超声波诊断仪 详见招标文件 1 75 进口 生殖医学中心 否 4 1 培养箱监控温度探头 详见招标文件 8 4 国产 生殖医学中心 否 2 液氮罐温度监控 详见招标文件 50 20 国产 否 3 负压吸引器 详见招标文件 1 6 进口 否 5 1 恒温玻璃热板 详见招标文件 1 3.5 进口 生殖医学中心 否 2 桌面培养箱 详见招标文件 2 24 进口 否 3 氮气发生器 详见招标文件 1 20 进口 否 4 液氮罐 详见招标文件 4 12 国产 否 5 纯水超纯水一体机 详见招标文件 1 9.8 进口 否 6 1 透明带红外激光光学系统 详见招标文件 1 45 进口 生殖医学中心 否 7 1 脉搏碳氧血氧测量仪 详见招标文件 1 4 进口 儿科 否 8 1 钬激光 详见招标文件 1 5 国产 泌尿系肿瘤专科 否 9 1 心电分析仪 详见招标文件 2 13.6 进口 健康管理中心 否 10 1 动脉硬化检测装置 详见招标文件 1 29 进口 健康管理中心 否 11 1 BLS婴儿模型 详见招标文件 8 12.4 进口 护理部 否 12 1 电动吸痰器 详见招标文件 2 4 进口 护理部 否 13 1 平板电脑 详见招标文件 30 9 国产 护理部 否 14 1 复苏系统 详见招标文件 1 3.48 进口 急诊科 否 15 1 成人气管插管模型 详见招标文件 1 3.8 进口 急诊科 否 备注：本项目的最小投标单位为包，本项目按包分别确定中标人。投标人必须对包内所有品目进行投标，否则投标无效。 合同履行期限：详见招标文件要求 本项目( 不接受 )联合体投标。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求： （1）强制采购：政府采购实行强制采购的节能产品。 （2）优先采购：政府采购鼓励采购节能环保产品。 （3）价格评审优惠：政府采购促进小微企业发展（包括政府采购支持监狱企业发展、政府采购促进残疾人就业）。 3.本项目的特定资格要求：（1）所投货物若纳入医疗器械管理的，投标人须具有医疗器械生产或经营许可证（或相应的备案凭证）；（2）所投货物若纳入医疗器械管理的，货物须具有有效的医疗器械产品注册证（或备案凭证）；（3）单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人，不得参加同一合同项下的政府采购活动；（4）为本采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的，不得再参加此项目的其他招标采购活动；（5）投标截止时间前列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单，列入政府采购严重违法失信行为记录名单（处罚期未满）的，拒绝其参与政府采购活动。 三、获取招标文件 时间：2022年05月23日 至 2022年06月17日，每天上午8:30至12:00，下午14:30至17:30。（北京时间，法定节假日除外） 地点：微信公众号“51医疗采购”—自助服务—51小程序（或微信小程序“51医疗招标”） 方式：小程序内微信支付购标费用。在小程序中上传法定代表人授权委托书彩色扫描件（附被授权人、法定代表人身份证彩色扫描件）、投标人营业执照彩色扫描件，以上资料为加盖投标人原始公章的彩色扫描件。未按上述要求线上申请的，招标文件获取将不予受理。缴费成功后可下载，售后不退。请投标人确认所有要参与投标的包号，并一次性进行申请。 售价：￥400.0 元，本公告包含的招标文件售价总和 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 提交投标文件截止时间：2022年06月22日 09点00分（北京时间） 开标时间：2022年06月22日 09点00分（北京时间） 地点：湖南五一招标有限公司（湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼）。 五、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜 1、本采购项目接受进口产品投标。 2、（非）专门面向中小企业采购。 3、如遇操作问题，可拨打统一服务热线：0731-84785151/84315151，热线服务时间为工作日上午8时30分至12时，下午14时30分至17时30分。 4、本公告同时在中国政府采购网（http://www.ccgp.gov.cn/）、中南大学湘雅医院（https://www.xiangya.com.cn/）发布。 七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称：中南大学湘雅医院 地址：湖南省长沙市湘雅路87号 联系方式：廖先生、0731-89752083 2.采购代理机构信息 名 称：湖南五一招标有限公司 地 址：湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼 联系方式：袁女士、李先生、0731-89752082 3.项目联系方式 项目联系人：袁女士、李先生 电 话： 0731-89752082 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 基本信息 关键内容：氧指数测定仪,氮气发生器,培养箱,液氮罐 开标时间：2022-06-22 09:00 预算金额：389.48万元 采购单位：中南大学湘雅医院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：湖南五一招标有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目公开招标公告 湖南省-长沙市 状态：公告 更新时间： 2022-05-23 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目公开招标公告 2022年05月23日 15:48 公告信息： 采购项目名称 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目 品目 货物/专用设备/医疗设备/其他医疗设备,货物/专用设备/医疗设备/医用激光仪器及设备,货物/专用设备/医疗设备/医用超声波仪器及设备,货物/专用设备/医疗设备/医用电子生理参数检测仪器设备 采购单位 中南大学湘雅医院 行政区域 长沙市 公告时间 2022年05月23日 15:48 获取招标文件时间 2022年05月23日至2022年06月17日每日上午:8:30 至 12:00 下午:14:30 至 17:30（北京时间，法定节假日除外） 招标文件售价 ￥400 获取招标文件的地点 微信公众号“51医疗采购”—自助服务—51小程序（或微信小程序“51医疗招标”） 开标时间 2022年06月22日 09:00 开标地点 湖南五一招标有限公司（湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼）。 预算金额 ￥389.480000万元（人民币） 联系人及联系方式： 项目联系人 袁女士、李先生 项目联系电话 0731-89752082 采购单位 中南大学湘雅医院 采购单位地址 湖南省长沙市湘雅路87号 采购单位联系方式 廖先生、0731-89752083 代理机构名称 湖南五一招标有限公司 代理机构地址 湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼 代理机构联系方式 袁女士、李先生、0731-89752082 项目概况 中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目 招标项目的潜在投标人应在微信公众号“51医疗采购”—自助服务—51小程序（或微信小程序“51医疗招标”）获取招标文件，并于2022年06月22日 09点00分（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目编号：HNWY-2022112 项目名称：中南大学湘雅医院生殖医学中心、健康管理中心、护理部、急诊科等一批设备采购项目 预算金额：389.4800000 万元（人民币） 采购需求： 包号 条目号 品目名称 简要技术要求 数量 采购总限价 （万元） 是否 进口 使用科室 是否需要专用耗材或试剂 1 1 全自动精浆生化分析仪 详见招标文件 1 9.5 国产 生殖医学中心 是 2 1 医用培养箱 详见招标文件 2 16 进口 生殖医学中心 否 3 1 四维彩色多普勒超声波诊断仪 详见招标文件 1 75 进口 生殖医学中心 否 4 1 培养箱监控温度探头 详见招标文件 8 4 国产 生殖医学中心 否 2 液氮罐温度监控 详见招标文件 50 20 国产 否 3 负压吸引器 详见招标文件 1 6 进口 否 5 1 恒温玻璃热板 详见招标文件 1 3.5 进口 生殖医学中心 否 2 桌面培养箱 详见招标文件 2 24 进口 否 3 氮气发生器 详见招标文件 1 20 进口 否 4 液氮罐 详见招标文件 4 12 国产 否 5 纯水超纯水一体机 详见招标文件 1 9.8 进口 否 6 1 透明带红外激光光学系统 详见招标文件 1 45 进口 生殖医学中心 否 7 1 脉搏碳氧血氧测量仪 详见招标文件 1 4 进口 儿科 否 8 1 钬激光 详见招标文件 1 5 国产 泌尿系肿瘤专科 否 9 1 心电分析仪 详见招标文件 2 13.6 进口 健康管理中心 否 10 1 动脉硬化检测装置 详见招标文件 1 29 进口 健康管理中心 否 11 1 BLS婴儿模型 详见招标文件 8 12.4 进口 护理部 否 12 1 电动吸痰器 详见招标文件 2 4 进口 护理部 否 13 1 平板电脑 详见招标文件 30 9 国产 护理部 否 14 1 复苏系统 详见招标文件 1 3.48 进口 急诊科 否 15 1 成人气管插管模型 详见招标文件 1 3.8 进口 急诊科 否 备注：本项目的最小投标单位为包，本项目按包分别确定中标人。投标人必须对包内所有品目进行投标，否则投标无效。 合同履行期限：详见招标文件要求 本项目( 不接受 )联合体投标。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求： （1）强制采购：政府采购实行强制采购的节能产品。 （2）优先采购：政府采购鼓励采购节能环保产品。 （3）价格评审优惠：政府采购促进小微企业发展（包括政府采购支持监狱企业发展、政府采购促进残疾人就业）。 3.本项目的特定资格要求：（1）所投货物若纳入医疗器械管理的，投标人须具有医疗器械生产或经营许可证（或相应的备案凭证）；（2）所投货物若纳入医疗器械管理的，货物须具有有效的医疗器械产品注册证（或备案凭证）；（3）单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人，不得参加同一合同项下的政府采购活动；（4）为本采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的，不得再参加此项目的其他招标采购活动；（5）投标截止时间前列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单，列入政府采购严重违法失信行为记录名单（处罚期未满）的，拒绝其参与政府采购活动。 三、获取招标文件 时间：2022年05月23日 至 2022年06月17日，每天上午8:30至12:00，下午14:30至17:30。（北京时间，法定节假日除外） 地点：微信公众号“51医疗采购”—自助服务—51小程序（或微信小程序“51医疗招标”） 方式：小程序内微信支付购标费用。在小程序中上传法定代表人授权委托书彩色扫描件（附被授权人、法定代表人身份证彩色扫描件）、投标人营业执照彩色扫描件，以上资料为加盖投标人原始公章的彩色扫描件。未按上述要求线上申请的，招标文件获取将不予受理。缴费成功后可下载，售后不退。请投标人确认所有要参与投标的包号，并一次性进行申请。 售价：￥400.0 元，本公告包含的招标文件售价总和 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 提交投标文件截止时间：2022年06月22日 09点00分（北京时间） 开标时间：2022年06月22日 09点00分（北京时间） 地点：湖南五一招标有限公司（湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼）。 五、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜 1、本采购项目接受进口产品投标。 2、（非）专门面向中小企业采购。 3、如遇操作问题，可拨打统一服务热线：0731-84785151/84315151，热线服务时间为工作日上午8时30分至12时，下午14时30分至17时30分。 4、本公告同时在中国政府采购网（http://www.ccgp.gov.cn/）、中南大学湘雅医院（https://www.xiangya.com.cn/）发布。 七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称：中南大学湘雅医院 地址：湖南省长沙市湘雅路87号 联系方式：廖先生、0731-89752083 2.采购代理机构信息 名 称：湖南五一招标有限公司 地 址：湖南省长沙市芙蓉中路一段88号天健壹平方英里H栋25楼 联系方式：袁女士、李先生、0731-89752082 3.项目联系方式 项目联系人：袁女士、李先生 电 话： 0731-89752082

相信经过前两期小编的详细介绍：无菌成品检测培养基的生产工艺，验证情况等，大家已经对无菌检测培养基有了初步了解了。那么，小编会给大家总结下成品培养基的特点。照例，在新解说开始之前，我们先进行一个小测验。这么多天过去了，不知道大家还记得多少呢？问：无菌检测培养基的严格的生产流程包含哪些？选择高质量的干粉培养基做为原料，使用一次性无菌耗材转移至灌装线对瓶子进行纯化水清洗，并干燥使用一次性过滤器降低生物负载并截留颗粒使用一次性管路进行罐装灭菌程序灭菌目视检查澄清度问：无菌检测培养基的验证包括哪些验证？答：物理特性的验证微生物特性的验证包装性能的验证不记得的小伙伴们，戳生产工艺复习哦！现在正式进入无菌检测培养基的特点篇无框式螺旋帽优化消毒程序这种无框式设计在擦拭消毒的时候，有效规避死角，都可以消毒到可以避免消毒剂在表面的残留，从而引发假阴性大直径隔垫易于操作人员安全高效刺入大直径的隔垫，方便插入，有效避免了粒子脱落。尤其是冲洗液的隔垫，常规设计的需要多次插入，使用这个大直径隔垫就方便多了二维码追溯系统产品瓶子上的二维码，记录了产品货号，批号，有效期等信息，通过扫码枪扫描就可以读取，使用更方便。满足很多公司对日益严格的数据完整性需求。颜色-外包装盒及螺旋盖易于分辨 不同的产品颜色不同，这样使用的时候就不容易出错。绿色是TSB红色是FTM黑色是冲洗液从无菌检测培养基的工艺到验证，再到这篇文章，我们向大家简单介绍了产品的部分情况与优点，希望能够给大家带来一些有用的知识，提高工作效率。相见不嫌晚为了更好得供应中国用户，默克无菌检测培养基得产品线已经在南通的生命科学亚太区生产中心生产了！ 在保证质量的同时，大大缩短了供货周期。以下是具体的产品货号，如果您有相关需求，可以扫描下方二维码简单登记，我们将尽快与您联系。感谢您对默克微生物检测的支持！

党的二十大报告指出：“实现碳达峰碳中和是一场广泛而深刻的经济社会系统性变革。”当前，在推进这场系统性变革的过程中，如何充分发挥高校基础研究深厚和学科交叉融合的优势，加快构建“双碳”科技创新体系和人才培养体系，对于如期实现“双碳”目标至关重要。高校发展现状与“双碳”目标存在一定错位人才培养。当前，培养具备科学素养、创新意识、跨界能力的“双碳”人才，将给高校人才培养工作带来一定挑战。一是认知不足。尽管相关部门已经对“双碳”进行了一定普及和宣传，但不少教师、管理者对“双碳”所关注的核心要义仍然没有形成清晰的认识，无法深刻理解其在人才培养活动中的价值。二是融合困难。基于“双碳”目标的实现，一些高校对人才培养目标、课程体系及学科设计的调整速度相对较慢，针对创新型人才的培养重视程度不足，对于如何将“双碳”有机融入相关人才培养活动，也没有形成可操作的方案。师资力量。当前，“双碳”相关专业逐渐增多，对高校教师队伍建设的挑战会越来越明显。一是基础性专业师资不足。推动“双碳”是一项复杂的系统工程，要求基础师资量大而面广。然而，各高校中涉及“双碳”的教师数量较少，且没有接受过系统培训，很多教师自身不具备“双碳”教育的经验和经历。二是高水平创新人才缺乏。局限于以往的学科、专业设置，我国尚未设置专门的“双碳”学科领域，与之相关的高水平创新型专业人才相对缺乏。专业和课程建设。专业方向定位是否科学、合理、准确，直接关系到“双碳”人才培养目标的达成度及培养质量。尽管我国已提前布局，不少高校与“双碳”相关的专业和课程建设也取得了一定成效，但专业和课程的内涵建设仍有待加强。一是专业建设质量。目前，国家主要通过修订本科专业类教学质量国家标准、实施一流专业建设计划、推进“保合格、上水平、追卓越”三级专业认证体系等方式，开展专业内涵建设。接下来，如何在专业内涵建设中适度体现“双碳”目标，将成为一个亟待解决的问题。二是课程建设水平。高校课程内涵建设主要包括内容体系设计、课程思政等诸多方面，如何有机地将“双碳”目标嵌入高校课程内涵建设的各个方面，进一步提升课程建设水平，提高创新策源能力，必将成为另一个亟待解决的问题。协同治理落实。“双碳”目标的实现，需要气象、能源、环境、材料、建筑、经济、管理及法律等相关专业学科协同参与、共同推进，这给我国高校落实学科协同治理带来了一定挑战。一是顶层设计问题。“双碳”具有鲜明的交叉融合特点，需要各学院、各部门之间落实协同工作，而当前我国的大多数高校在顶层设计、协同治理方面还存在很大的提升空间。二是协同创新问题。推动实现“双碳”目标，既要探索科学认知，探究最前沿的科学问题，也要推动科学传播，凝聚全社会共识。这就需要优化协同治理体系，强化交叉学科建设，目前不少高校在这方面也存在较大的提升空间。加快构建“双碳”科技创新体系和人才培养体系加强专业人才培养。当前，相关高校须将“双碳”目标融入人才培养活动，强化国家目标、市场需求与人才培养之间的内在联系，加快培养低碳行业专业人才。一是提高教师思想认识水平。通过各种形式的学习、交流及培训等活动，促使教师在思想上认可“双碳”目标的重要性，将其内化为教书育人的动力。二是加强通识教育。鼓励开设与“双碳”相关的通识课程，引导学生学习负碳、零碳、低碳和脱碳知识，树立绿色低碳理念，加深对“双碳”的了解，真正让“双碳”融入课堂和生活。三是强化实践教学。通过德育、思政及专业课程实践环节，引导学生从身边做起，传播绿色低碳育人文化，践行绿色低碳发展理念。强化师资队伍建设。专业化和高水平的师资队伍建设是实现“双碳”目标的关键。为此，高校须加强“双碳”领域所需人才的培养、引进等工作。一是提升基础师资水平。可以通过举办各种类型的高级研讨班、进修班等形式，培养“双碳”领域的基础性师资人才；还可以集中选择部分教师，开展以知识普及、业务传授等为主要内容的培训活动，以补充基础性师资。二是加强人才引进和交流。高校需要提前布局，对我国“双碳”领域所需的高层次人才，加大引进力度。尤其要借鉴相对成熟的欧盟碳交易人才培养经验，加大对海外碳金融、碳管理领域优秀人才的引进力度，支持碳金融、碳管理师资队伍建设。三是实施人才特区政策，推进师资队伍高端化。在“双碳”领域排筛出一批世界级名家和杰出领军人物，从而有针对性地寻求合作。有条件的高校，还可以布局、建立一批“双碳”科学家工作室，为高端人才量身定制发展平台，促进我国“双碳”科学研究尽快跻身“世界舞台”。深化专业和课程内涵建设。锚定“双碳”目标，高校需要继续深化专业和课程的内涵建设。一是构建专业内涵建设评价体系。参考一流专业建设方案，高校要构建“双碳”相关专业内涵建设的评价体系，如专业目标、师资队伍、支撑条件、教学改革、培养质量、专业特色等，并设计出量化指标。二是推动专业优化与调整。高校需要深化人才培养供给侧结构性改革，通过关、停、并、转等形式，进行专业优化与调整，培育建设新能源、储能、智慧能源等新兴专业学科，并开设与“双碳”有关的专业方向。三是注重开展专业交叉融合。相关高校可以依托既有资源和优势，设立碳金融、碳管理等方向的人才培养和培训基地，增设碳金融、碳管理专业和研究生培养二级学科或交叉学科，推进碳金融、碳管理专业建设，加快培养碳金融、碳管理等领域紧缺人才；以能源、环境、经济、管理及法律等专业为基础，突破专业壁垒，开展交叉融合创新，支持多专业协同，培养复合型低碳人才。推进协同治理活动。为实现学校发展与治理体系、治理能力现代化的要求相匹配，高校要努力构建协同治理体系。一是倡导多方协同培养，进一步完善高校产教融合与校企协同育人机制，如推广政产学研用融合发展制度，推动校企在创新驱动等领域开展合作，并通过专业共办等多种形式与手段，构建协同发展模式，打造协同治理体系。二是打造多元协同治理体系。从顶层设计、部门协同现实出发，打造出各方主体深度参与的多元协同治理体系，从而推进“双碳”领域教育教学活动的顺利有效开展，形成我国高等教育领域人才培养“多主体、强合作、共发展”的多元协同运行系统。（作者姚山季系南京工业大学经管学院教授、教务处副处长，韩雪媛系南京工业大学经管学院硕士研究生）

生物培养分为静态培养和振荡培养。振荡培养，亦称悬浮培养，是指把微生物细胞接种于液体培养基中，并放置在摇床或振荡器上不停振荡的一种培养方法。广泛应用于菌种筛选和微生物扩大培养，是微生物生理、生化、发酵和其他生命科学研究领域中常用的培养方式。振荡培养不适用于含有易挥发性化学溶剂，低浓度爆炸气体和低燃点气体的物质以及有毒物质的培养。那静态培养与振荡培养有什么区别呢？CO2培养箱为细胞培养模拟了一个适宜的培养环境，包括温度，CO2浓度和湿度等外部条件。如干细胞在静态培养条件下，细胞贴附在底部瓶壁，溶解氧和营养物质会形成浓度梯度。然而悬浮细胞在温和的振荡培养条件下，消除了浓度梯度，增加了溶解氧浓度，更有利于生长。在细菌和细胞培养时，振荡培养可改善与培养基成分的接触和氧的供应，特别是对真菌的培养，不会形成菌膜或者菌团。霉菌静置培养得到的菌体能明显看到是有菌丝的，形态与平板上生长状态有些类似；而摇床培养得到的菌体是球形的，即菌丝聚集成团。所以在微生物工业上与振荡培养具有同样效果的搅拌培养也已被广泛应用。组织培养中的旋转培养法也是振荡培养的一种。摇床振荡培养的作用：1、传质，就是底物或代谢产物更好在体系内转移和发挥作用。2、溶氧，在好氧培养过程中，空气是滤过开放的，所以通过振荡可以让更多空气中氧气溶解于培养基中。3、体系均一，有利于对不同参数的取样测定。

人NK/T细胞淋巴瘤细胞的处理方法与培养步骤！ NK/T细胞淋巴瘤（NK/T cell lymphoma）是起源于成熟NK/T细胞的淋巴系统恶性肿瘤。NK细胞和T细胞具有共同的祖细胞，两者在功能和某些抗原的表达上具有相似之处，NK/T细胞淋巴瘤因起源于这两种细胞而得名。 细胞说明信息平台编号：Bio-129794规格：1×10⁶ Cells/T25培养瓶细胞信息：SNK-6细胞名称：人NK/T细胞淋巴瘤细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。组织来源：淋巴细胞培养条件：1640培养基（GIBCO,货号11875093） +10%澳洲来源进口胎牛血清（GIBCO,货号10091148）+1%双抗形态：悬浮；淋巴母细胞样规格：1×10^6 cells/瓶用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞收到后的处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置 2-4 小时。镜下观察：未超过 80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入 6ml 完全培养基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2、加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在 1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。4、按 5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按 1：2 的比例分到新的含 5-6 ml 培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到 2ml 小管细胞，收到细胞后，用 75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至 T25 培养瓶或 6cm 培养皿，加入 5ml 左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过 80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过 80%，可直接进行传代（方法同上）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

变异链球菌的菌落特征与使用范围及培养方法！ 变异链球菌属于甲型溶血性链球菌类，菌体较小，呈圆形或卵圆形，常成双或以短链状排列，革兰染色呈阳性。它在胰蛋白胨培养基中和含有95％氮气及5％二氧化碳混合气体的环境下生长良好。 一、菌种简介平台编号：Bio-53150规格：冻干物拉丁属名：Streptococcus Mutans菌株名称：变异链球菌其他编号：ATCC700610培养基编号：116或114,5% CO2 or 厌氧培养温度：37培养时间：48 小时用途：对红霉素、利福平、利福霉素AMP、壮观霉素、链霉素敏感。血清型C。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。 二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板） 三、菌落特征变异链球菌在血平板培养基上呈旺溶血，菌落较小，呈灰白色、圆形，表面突起，菌落质地较硬，有嵌入培养基内生长的趋势。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

人急性髓系白血病细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-129531规格：1×10⁶ Cells/T25培养瓶细胞信息：MUTZ-3细胞名称：MUTZ-3人急性非淋巴白血病细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）传代方法：1:2传代 传代情况：2~3天换液 培养体系：温度：37℃ ；气相：空气，95%；CO2，5% 细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 冻存条件：完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮 用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 四、细胞接收后的操作流程与注意事项1、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决。2、贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（最高不能超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。3、生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。 五、特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养。3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的培养操作与应用！ 一、背景 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞分离自甲状腺组织；甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体，属于内分泌器官。在哺乳动物身体中，它位于颈部甲状软骨下方，气管两旁。甲状腺表面有结缔组织被膜，表面结缔组织深入到腺实质，将实质分为许多不明显的小叶，小叶内有很多甲状腺滤泡和滤泡旁细胞。甲状腺控制使用能量的速度、制造蛋白质、调节机体对其他贺尔蒙的敏感性。 甲状腺依靠制造甲状腺素来调整这些反应，有T3和T4。这两者调控代谢、生长速率还有调解其他的身体系统。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲状腺也生产降钙素，调节体内钙的平衡。其中，甲状腺滤泡上皮细胞（也称为滤泡细胞或主要细胞）是在甲状腺细胞是负责生产和分泌甲状腺激素，甲状腺素（T4）和三碘甲状腺原氨酸（T3）。 二、培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类； 1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 用于RCCS模拟微重力影响大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性和分泌功能的研究： 釆用微重力细胞培养系统（the rotary cell culture system,RCCS）,研究模拟微重力对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性和相关分泌功能的影响,为航天员在失重环境中甲状腺应激和病理性改变的防治提供理论依据。 研究方法应用RCCS技术构建FRTL-5细胞模拟微重力培养系统。将大鼠甲状腺滤泡上皮细胞FRTL-5细胞株随机分为模拟微重力组（simulated microgravity group,SMG）和正常重力对照组（normal gravity group,NG）,分别于培养第6h、12 h、24 h、36 h取细胞及上清液,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,化学发光免疫分析法检测T3、T4、FT3、FT4,ELISA检测上清液中Tg和TPO水平 应用倒置相差显微镜观察培养第6 h、12 h、24 h、36 h后细胞表面形态 透射电镜观察培养12 h和36 h的细胞超微结构 激光共聚焦显微镜观察培养36 h的细胞微丝骨架荧光强度变化。 结果：（1）MTT结果显示,SMG组FRTL-5细胞经6 h、12 h、24 h、36 h培养后,各时相细胞增殖均较NG组受到明显抑制（P0.05）,其中24 h最为明显（P0.01） 36 h表现为两种情况,一是SMG组的细胞增殖恢复,二是NG组的细胞增殖速度快速提升。 （2）流式细胞仪测细胞周期显示,与NG相比,FRTL-5细胞微重力培养6 h、12 h、24 h、36 h后G1期细胞比例显著增高 除6 h外,S期细胞比例明显降低 而各时相的G2/M期细胞比例表现为模拟失重早期（6-12 h）降低,其中12 h出现低谷值,24 h一过性显著增高,36 h回落。研究结果提示,SMG组FRTL-5细胞培养6-12 h阶段DNA合成下降,24 h的DNA合成趋活跃,而36 h的DNA合成后期比例又呈现下降趋势并向NG组的比例靠近。 （3）化学发光免疫分析法检测结果显示,RCCS培养6 h组FRTL-5细胞上清液中FT3、T4和FT4水平显著降低（P0.05）,其余各时相的T3、T4、FT3、FT4则未受明显影响。 （4）ELISA测细胞上清液结果显示,与NG相比,SMG组FRTL-5细胞Tg和TPO分泌均明显升高（P0.01）,表现为6 h即显著升高,随后呈下降趋势,24-36 h阶段又趋上升,其中SMG组的6 h与24 h以及24 h与36 h之间有显著差异（P0.01）。 （5）倒置相差显微镜观察结果显示,模拟失重环境下FRTL-5细胞形态发生显著变化,实验早期细胞逐渐趋于死亡状态,24 h后细胞数量又有所增长。 （6）透射电镜结果显示,模拟失重第12 h,36 h的FRTL-5细胞超微结构发生显著变化。 （7）模拟微重力培养36 h后,激光共聚焦显微镜观察荧光素FITC标记的FRTL-5细胞,发现细胞微丝骨架局部解聚,张力纤维减少,结构和排列紊乱,细胞伪足少见,细胞形状呈不规则。 微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

上海远慕生物科技有限公司为了回馈广大科研工作者特此做出培养基促销优惠活动啦，培养基均现货促销！价格绝对出乎你的意外，望有需要的老师赶快联系我们吧! 培养基是远慕公司自主研发的项目之一，产品质量有保证！说明书都会随货发给您！我们我是符合国家标准的，我们也可以按照客户提供的要求给您配制，我们承诺产品有任何质量问题都是免费退换的！ 远慕生物严格遵守“质量优先、客户优先、技术优先、服务优先”“四项优先”原则；产品已被广泛应用于化学、化工、生命科学的基础研究和开发应用、制药、疾病诊断与控制、人口与健康、生物技术等诸多领域，并销往全国各地，公司客户遍布国内各大学、研究所、卫生防疫、制药公司、生物公司等单位，得到广大客户的一致好评。我们的宗旨是“为客户提供最优质的产品和服务”。 远慕欢迎您！培养基促销其他产品：结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA） 250g/瓶 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） 250g/瓶 胰蛋白胨大豆琼脂 90mm×10个/包 革兰氏染色液 10ml×4支/盒 氧化酶试纸 10片/瓶 氧化酶试剂 1g/瓶 阪崎肠杆菌显色培养基（DFI琼脂） 1000ml/瓶 鸟氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 赖氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 精氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 氨基酸脱羧酶试验对照 1ml×10支/盒 无菌液体石蜡 2ml×10支/盒 氰化钾（KCN）培养基 1ml×10支/盒 氰化钾（KCN）对照培养基 1ml×10支/盒 D-蔗糖发酵管 1ml×10支/盒 D-山梨醇发酵管 1ml×10支/盒 阿拉伯糖发酵管 1ml×10支/盒 卫矛醇半固体琼脂 1ml×10支/盒 棉子糖发酵管 1ml×10支/盒 产品名称 规格 采样袋/均质袋 100个/袋 SCDLP液体培养基基础 250g/瓶 SCDLP增菌肉汤 10ml×20支/箱 磷酸盐缓冲液（pH7.2） 250g/瓶 磷酸盐缓冲液（pH7.2） 225ml×20瓶/箱 磷酸盐缓冲液（pH7.2） 9ml×20支/箱 生理盐水 225ml×20瓶/箱 生理盐水 9ml×20支/箱 假单胞菌CFC选择性培养基基础 250g/瓶 假单胞菌CFC选择性培养基基础添加剂 1ml×10支/盒 假单胞菌琼脂基础培养基基础/CN琼脂基础 250g/瓶 萘啶酮酸 1.5mg×10支/盒 甘油 1ml×10支/盒 营养琼脂斜面（限供汽运） 10ml×20支/箱 营养琼脂（NA） 250g/瓶 氧化酶试纸 10片/瓶 氧化酶试剂 1g/瓶 革兰氏染色液 10ml×4支/盒 乙酰胺培养基 1ml×10支/盒 葡萄糖酸钾培养基 1ml×10支/盒 精氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 赖氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 氨基酸脱羧酶试验对照 1ml×10支/盒 液体石蜡 2ml×10支/盒 硝酸盐蛋白胨水培养基 250g/瓶 明胶培养基（营养明胶培养基） 250g/瓶 山梨醇麦康凯（SMAC）琼脂 250g/瓶 亚碲酸钾溶液 0.25mg×10支/盒 头孢克肟溶液 0.005mg×10支/盒 改良山梨醇麦康凯（CT-SMAC）琼脂 90mm×10个/包 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG(LST-MUG) 1000ml/瓶 含新生霉素的缓冲胰蛋白胨大豆肉汤（BTSB+N）基础 250g/瓶 三糖铁(TSI)琼脂 250g/瓶 三糖铁(TSI)琼脂斜面 4ml×10支/盒 革兰氏染色液 10ml×4支/盒 氧化酶试纸 10片/瓶 半固体琼脂 250g/瓶 半固体琼脂管 1ml×10支/盒 营养琼脂（NA） 250g/瓶 营养琼脂（NA） 90mm×10个/包 蛋白胨水 1ml×10支/盒 Kovacs氏靛基质试剂 10ml×4支/盒 鸟氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 赖氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 氨基酸脱羧酶试验对照 1ml×10支/盒 无菌液体石蜡 2ml×10支/盒 山梨醇发酵管 1ml×10支/盒 棉子糖发酵管 1ml×10支/盒 纤维二糖发酵管 1ml×10支/盒 缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR-VP培养基） 1ml×10支/盒 甲基红试剂 10ml×4支/盒 V-P试剂 10ml×4支/盒 西蒙氏柠檬酸盐琼脂斜面 4ml×10支/盒 大肠杆菌O157：H7套装生化鉴定管（10种）（SN0973） 12支/套×10套 无菌脱纤维绵羊血 100ml/瓶 肝浸液培养基 250g/瓶 胰蛋白胨琼脂培养基 250g/瓶 精氨酸脱羧酶试验 1ml×10支/盒 氨基酸脱羧酶试验对照 1ml×10支/盒 无菌液体石蜡 2ml×10支/盒 3%过氧化氢溶液 2ml×10支/盒 氧化酶试纸 10片/瓶 氧化酶试剂 1g/瓶 阿拉伯糖发酵管 1ml×10支/盒 葡萄糖发酵管 1ml×10支/盒 半乳糖发酵管 1ml×10支/盒 硝酸盐肉汤 250g/瓶 硝酸盐肉汤 5ml×10支盒 硝酸盐还原试剂 10ml×4支/盒

干细胞分化成肝类器官并且进行串联培养方案1 实验目的 该 SOP 描述了由肝癌细胞系（HepaRG）和原代人肝星状细胞 （SteCs） 组成的肝球体的培养，形成肝脏类器官。此外，还描述了将肝脏类器官整合到 MOC 中，可以与其他类器官串联起来共培养。肝球体的生长大约需要 3 小时。从 384 孔微孔板中去除肝球体大约需要 2~5 小时，具体取决于所需的肝球体数量。将肝球体整合到 MOC 中至少需要 1 小时，这也取决于所需 MOC 的数量及所需的肝球体数量。应计算准备细胞培养的额外时间（约 1 周）以及 MOC 的交付时间。 本 SOP 深入描述了 Corning Spheroid Microplate 384 孔板（参考号 3830）的装载、这些肝球体的后续收集和计数以及它们与 MOC 的集成以进行进一步的动态培养。 所有描述的工作步骤都应在无菌操作条件下执行。应特别遵循正确洗手以及始终使用手套。 2 负责人 主要负责人：Alexandra Lorenz SOP 作者：Naomia Sisoli-Sambo、Juliane Hübner 与本 SOP 中描述的工作步骤的偏差必须立即报告给 Alexandra Lorenz 女士。如果更改获得批准，则必须相应地修改 SOP。 3 多器官芯片（MOC） 的无菌处理 为避免污染，必须遵守无菌实验室工作的通用准则。在将 MOC 放入生物安全柜之前，应先喷洒经批准的杀菌剂（例如 80% 乙醇）对其进行消毒，然后用无菌纸巾擦拭（建议使用浸泡在消毒剂中的市售纸巾）。必须特别注意引入的任何部件（注射器适配器、组织培养小室支架和泵连接端口）它们的连接和盖子。掉在地上的部件必须用无菌、高压灭菌的备件更换。因此，在运行 MOC 时，必须始终提供适当数量的无菌备件。 除离心、细胞计数和培养（37°C，5% CO2）外，所有工作步骤均应在超净工作台中进行。 4 所需材料 名称备注分化的HepaRG细胞8 mio cells/vial HPR116NS, Biopredic星状细胞 （SteCs）SC-5300 （Provitro）ScienCellSteCs培养基SC-5301 （Provitro）ScienCell80%乙醇消毒组织例如 Bode Chemie GmbH（德国）的 Bacillol AF 纸巾HepaRG 培养基Williams E基础培养基（500 ml） 不含酚红，含 2.24 g/L NaHCO3），例如PAN-Biotech P04-29510 或 HIMEDIA AL240-500ML 10% FCS （50 ml）；5 x 10-5mol/L 氢化可的松半琥珀酸盐（500 µ l 来自 25 mg/ml 原液）；5 µ g/ml 胰岛素（250 µ l 来自 10 mg/ml 储备液），例如PAN P07- 04300 2mM 谷氨酰胺（5 ml 来自 200 mM 原液）；5 µ g/ml 硫酸庆大霉素（50 µ l 来自 50 mg/ml 原液）；0.25 µ g/ml 两性霉素 B（500 µ l 来自 250 µ g/ml 原液）；分化培养基含 2% DMSO 的 HepaRG 培养基Trypsin/EDTA 5x用于收集 HepaRGs0.25% 胰蛋白酶/2.21mM EDTA，例如康宁 25-053-CITrypsin/EDTA 1x用于收集 SteCs0.05% 胰蛋白酶/0.53mM EDTA，例如康宁 25-052-CIPBSw/o Ca 和 Mg，例如康宁 21-031-CVR Gilson Platemaster 96 道移液器用于 384 孔板的 Gilson Platemaster 适配器移液器吸头试剂容器灭菌Axygen RES-SW96-HP-SI 或 RES-SW12-HP-SI用于 15/50ml 管的离心机二氧化碳培养箱显微镜细胞计数装置泵控制单元TissUse 有限公司泵管2 毫米 x 1.6 毫米聚氨酯泵管，SMC（美国）扳手 1扳手尺寸 7 毫米 （ISO 272）扳手 2扳手尺寸 10 毫米 （ISO 3318）内六角扳手扳手尺寸 1.5 毫米 （ISO 4762）泵连接端口来自 SMC（美国）的 KJS02-M3 型，内六角，端口尺寸 M3微孔板384 孔黑色透明圆底超低吸附肝球体微孔板康宁 3830大口径提示康宁 TF-205-WB-R-S24孔超低吸附板康宁 3473细胞培养处理的培养瓶和培养皿例如康宁定轨振荡器PS-M3D Grant Instruments灰色和斜体字部分由 TissUse GmbH 提供 5 实验操作5.1 样品准备在肝球体形成前 5 天，根据实验需要解冻尽可能多的分化 HepaRG 细胞。一个循环需要 40 个肝球体（每个由 24,000 个 HepaRG 细胞和 1,000 个星状细胞组成）。每个接种满的 384 孔微孔板将提供大约 300 个肝球体。要完全接种满一个 384 孔微孔板，需要 921.6 万个分化的 HepaRG 细胞。由于一瓶分化的 HepaRG 细胞含有大约 800 万个活细胞，因此应计算每个接种满的 384 孔板需要两瓶。请注意：细胞是在完全融合时接种的，以避免去分化。因此，在接种过程可以丢掉一些细胞，因为准备有富余。 每个小瓶 500 µ l 分化的 HepaRG 细胞（订单号 116NS）应在 9.5 ml HepaRG 培养基中稀释，以将 DMSO 降低至0.5%的终浓度。以0.2 x 106/cm2的密度将活细胞计数后种到适当的细胞培养皿中（例如，800 万个细胞种到60 mm 2培养皿上，2个培养皿；或1600 万个细胞种到一个 T75 培养瓶上）。5-12 小时后必须在无菌条件下将培养基更换为 10 ml 分化培养基（2% DMSO）。随后，每两到三天将培养基更换为 10 ml 新鲜分化培养基。 SteCs 应在肝球体形成前约 2 天解冻并放入培养物中。一个装有 SteCs 的 T175 培养瓶将提供至少五个 384微孔板。首先需要预热SteCs 的培养基，一个小瓶约 1-2 x 106 SteCs 需用 9 ml 培养基，离心，重悬于 1 ml 新鲜培养基中，然后接种到含有 24 ml 温热的星状细胞培养基的 T175 细胞培养瓶中。第二天更换培养基以去除死细胞。 对于扩大培养，SteCs 可以生长到 70% 的融合，然后细胞开始增殖。无菌条件下的培养基更换必须每两到三天进行一次。不应使用通道数高于 P8 的 SteCs。 图 1 单层分化的 HepaRG 细胞和 HHSteC 的相差显微镜。 （A） HHSteC 在第 9 代的相差图像和（B） 在接种后 4 天分化的 HepaRG 细胞。比例尺 100 µ m。 5.2 细胞的收集准备 HepaRG 细胞进行收集，用 10 到 20 ml PBS 冲洗两次。洗涤后，使用胰蛋白酶/EDTA（5x；0.25% 胰蛋白酶/2.21mM EDTA；室温）从细胞培养瓶底部分离细胞。为此，将培养皿中的适量胰蛋白酶/EDTA 涂抹在细胞上，并在 37°C 下孵育 5 至 10 分钟。开始 HepaRGs 的胰蛋白酶消化后，使用胰蛋白酶/EDTA（1x；0.05% 胰蛋白酶/0.53 mM EDTA）收集星状细胞，并在 37°C 下孵育 5 至 10 分钟。通过这种方式，几乎可以同时收集细胞。用显微镜检查细胞的溶解情况并轻轻敲击细胞培养瓶的侧面以加速该过程并脱壁仍贴壁的细胞。一旦所有细胞从培养容器底部脱离，通过添加相同量的胰蛋白酶抑制剂或两倍量的培养基来抑制反应。将细胞溶液转移到 50 ml 离心管中， 然后用 10 ml PBS 冲洗培养容器两次，并将 PBS 添加到离心管中。细胞团块可以通过溶液的重复再悬浮来分散。此时可以合并来自多个培养容器的相同类型的细胞。 一旦进入溶液，将细胞以 300 x g 离心 5 分钟，然后吸出上清液并将细胞沉淀重悬于 1 至 2.5 ml 细胞培养基中。对 SteCs 和 HepaRG 细胞都使用 HepaRG 培养基（不含 DMSO）。用细胞计数跟踪细胞的再悬浮。请彻底混合细胞溶液（HepaRG 和 SteCs）。用 40 µ l HepaRG 培养基（1:5 稀释）稀释 10 µ l HepaRG 细胞溶液。彻底混合新溶液并用 10 µ l 台盼蓝工作溶液（1:2 稀释，总共 1:10 稀释）稀释 10 µ l HepaRG 溶液。彻底混匀 StesCs 细胞悬液，并用 10 µ l 台盼蓝工作溶液（1:2 稀释）稀释成 10 µ l 细胞悬液。在室温下孵育计数溶液 2 至 3 分钟。计数前充分混合。 将计数溶液加载到先前准备好的血细胞计数板中，并在计数室的四个大方格内对每种细胞类型的活细胞和死细胞进行计数。计算每个细胞类型的每个大方块的活细胞的算术平均值。 每毫升的细胞计数计算如下： 或者根据操作说明使用 SOL Counter （半导体式全自动细胞计数仪） 自动确定每毫升的细胞计数。 5.3 在384 孔微孔板中培养肝球体5.3.1 细胞悬液的制备每个肝球体需要 50 µ l 细胞悬液。这相当于每个微孔板 19.2 ml （50 µ l x 384）。由于移液过程中的波动，每板应制备至少 22 ml（最好是 23 ml）的细胞悬液。要在 50 µ l 的体积中生成具有 1,000个 SteCs 和 24,000 个HepaRGs（1:25 比例）的肝球体，细胞悬浮液的浓度应为 20,000个 SteCs/ml 和 480,000 HepaRGs/ml。 使用 （1） 中计算的每毫升细胞计数生成肝球体细胞悬液所需的收集 HepaRG 细胞和 SteCs 的确切体积，具体取决于所需的肝球体细胞悬液体积： HepaRG 和 SteCs 悬浮液的计算体积用于球状细胞悬浮液，添加培养基以达到所需的体积（例如，一个 384 孔球状板为 23 ml）。 5.3.2 将细胞种到 384 孔微孔板中移液器和所有其他设备需要用乙醇 （80%） 擦拭，并在使用前放置在无菌细胞培养工作台下。先前制备的肝球体细胞悬浮液应彻底混合，并将加载一个微孔板所需的大致量填充到试剂储液罐中（推荐储液罐：RES-SW12-HP-SI，Rillenreservoir）。使用 Gilson Platemaster 96 通道移液器和 384 孔板适配器将 50 µ l 细胞悬液种到 384 孔微孔板的每个孔中。 注意：- 将 50 µ l 细胞悬液直接放在每个孔的底部- 确保所有移液器吸头都牢固地推到 96 通道移液器上。- 对于没有气泡的精确移液，推荐使用反向移液技术。- 为确保细胞在悬浮液中均匀分布，在每次移液步骤前轻轻摇动悬液管。 应将接种满的微孔板短暂离心（250 g，1-2 分钟），以确保孔壁上没有细胞悬浮液，并将细胞收集在孔底。肝球体在 37 °C 和 5% CO2 条件下连续 3 天。图 2 肝球体形成的光学显微镜。 HepaRG 细胞和 SteCs 在肝球体形成的第 1 天和（B）第 3 天的 384 孔超低吸附板（A）的孔中。比例尺 100 µ m。5.4 从 384 孔微孔板中取出肝球体为了收集肝球体，将 384 孔微孔板放在层流罩下。使用 200 µ l 移液器和大口径移液器吸头，小心地将肝球体从 384 孔微孔板中取出。可以在一个移液器吸头中收集多个肝球体。在平底 24 孔低吸附板的每个孔中收集 40 个肝球体。计数肝球体，并将 40 个肝球体放入每个孔中。可用深色背景（例如黑色铝箔纸）更容易看到 24 孔低吸附板中的肝球体。将 40 个肝球体转移到一个孔中后，小心取出旧培养基并加入约 1.5 ml 新鲜 HepaRG 培养基。之后，在显微镜下对每个孔中的肝球体进行计数。丢弃任何看起来太小或聚合不良的肝球体，类似于薄层而不是肝球体。 注意：用移液器吸头收集肝球体时不要吸入任何空气。肝球体应始终悬浮在培养基中。空气的吸入会导致肝球体卡在移液器尖端。应该习惯于在拿起肝球体之前用培养基润湿移液器尖端。此外，使用移液器的时候使用超过所需的程量。这两点都可以降低肝球体粘附在内移液器吸头表面或肝球体漂浮在培养基表面上的风险。 为避免融合并进一步提高肝球体的圆度，将 24 孔低吸附板置于振荡器上，直到 MOC 实验开始（12 至 48 小时）。为此，用乙醇彻底消毒振荡器，并将其放入培养箱（37 °C；5 % CO2）中。将超低吸附板放在振荡器上，使用以下设置并确保培养基不会因摇晃而溢出： 轨道式往复式Vibrio循环式模式4030°5°00时间25OFF5ON 5.5 将肝球体转移到多器官芯片平台（MOC）在将肝球体转移到 MOC 之前，请确保 MOC 已做好充分准备（充满培养基、正确拧入、清洁、蠕动泵的功能已验证；有关详细信息，请参阅 SOP 1 或 6）。拧下所需培养小室的盖子，并通过将板保持在倾斜位置来收集超低吸附板孔底部边缘的肝球体。可用深色背景（例如黑色铝箔纸）更容易看到 24 孔低吸附板中的肝球体。 使用大口径移液器吸头吸取肝球体。握住移液器，尖端朝下，使肝球体沉淀在尖端。然后通过将移液器尖端放入培养基中，让肝球体沉入所需培养小室的底部。尝试在培养小室加入尽可能少的培养基。转移所有肝球体后，将盖子拧回培养小室上。 40 个肝球体用于 MOC 的一个循环（仅加载一个培养小室）。 图 3 2-OC（二联芯片） 培养小室中的 40 个肝球体。 （A） 融合1天的肝球体。 （B）融合14天后的肝球体。 5.6 MOC中的培养基更换要更换装有肝球体的培养小室中的培养基，请拧下相应培养小室的盖子。使用标准移液器吸头吸出所需量的旧培养基，并添加所需量的新鲜培养基（100% 培养基更换是可以的）。将盖子拧回培养小室上。 请注意以下事项：- 尽管肝球体应生长到培养小室的底部，但在去除旧培养基时，请确保不要绘制任何肝球体。如有必要，检查移液器吸头。- 去除旧培养基时，请勿将任何培养基从 MOC 的微流道中吸出，以免在流路内形成气泡。- 通过移液将其移到插入壁上，缓慢而小心地添加新鲜培养基，以避免插入可能干扰肝球体的湍流。- 用新鲜培养基填充培养小室时，不要超过培养小室内盖的螺纹。

细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同，英文都是medium。当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，而将粉剂配成液体后，多称为培养液。培养液中常常补加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。细胞培养基的质量标准和检测方法澄清度水是细胞培养基的溶剂。细胞培养基中的营养成分只有完全溶解于水才能被细胞吸收摄取，细胞才能生长增殖，因此细胞培养基是否溶解以及培养液是否透明澄清直接影响培养基使用。该项目是通过对水溶解后的细胞培养基的澄清度检查，判断细胞培养基的澄清度。 按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅸ B进行。pH 值哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品，用注射用水（水温20℃-30℃）溶解至1L，加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中，用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅵ H进行；加入规定量的碳酸氢钠到上述溶液中，按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅵ H进行干燥减量的质量分数细胞培养基具有吸湿性，在空气中放置水分会很快升高，干燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂，其丰富的营养成分有利于微生物生长，控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持细胞培养基的养分。按中华人民共和国药典2005 年版二部附录Ⅷ L 干燥失重测定法进行。渗透压溶剂通过半透膜由低浓度向高浓度溶液扩散的现象称为渗透，阻止渗透所需施加的压力，称为渗透压。细胞必须生活在等渗环境中，动物细胞借助K＋、Na＋维持渗透平衡。大多数细胞对渗透压有一定的耐受性。但是培养液渗透压过高容易使细胞脱水wei缩，培养液渗透压过低容易使细胞膨胀破裂，因此要控制培养基的渗透压范围。按中华人民共和国药典2005 年版二部附录Ⅸ G 渗透压摩尔浓度测定法进行。细菌内毒素细菌内毒素是许多病原性细菌所产生的毒素。它的特殊性在于不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有生物活性的物质。培养基细菌内毒素过高，对生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程药品等注射用的药品都需要检查细菌内毒素。 因此本项目的检验符合生物制品质量控制要求。常规细胞培养基的细菌内毒素标准定为＜10 EU/ml。称取本品规定量（见表4-12）的1/100，加入细菌内毒素检查用水10 mL溶解，吸取该溶液0.1 mL加细菌内毒素检查用水3.9 mL，混匀即得试样。按中华人民共和国药典2005 年版二部附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。微生物限度细胞培养基不是无菌产品，其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖，导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中细菌和霉菌，是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华人民共和国药典》2005版二部附录第100页的口服给药制剂的微生物限度标准，并严于该标准，规定细胞培养基产品的细菌数每1g不得超过200个，霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1 g，加入无菌纯化水10 mL溶解，混匀即得试样。按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。细胞生长试验这是一个性能特性表述的要求。细胞培养基的功能就是培养哺乳类动物细胞，因此经过细胞培养效果的检验是产品质量优劣的直观表述，这也是很多生物制药用户要求的一项指标。目前国内尚无细胞培养和计数的法定方法，可参考《体外培养的原理与技术》中细胞计数fa论述的内容给出。按产品说明书配制培养液进行细胞培养，前四天用含10％小牛血清的培养液培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基是否有促生长的能力。后三天用不含小牛血清的培养液维持培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基中是否有不利细胞生长的毒素。本试验用细胞为VERO细胞。细胞培养液的储存，细胞培养液的储存条件一般为2－8℃、密闭、避光保存，但要注意如下几点：1） 过滤后的完全培养液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用，一般在2－3周内使用完。培养液中的L-谷氨酰胺是不稳定的，不同温度L－谷氨酰胺的降解。2） 灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的培养基溶液，一般可在4℃保存6～9个月，也可冷冻保存，用时解冻3） 高压除菌后的培养基应置4℃保存，不能因为其可耐受高温而忽略储存温度。4） 添加某些生长因子、激素等添加物，可能会改变培养液的储存条件，比如温度、时间等方面的要求