吸液包

液相色谱分析样品，按照要求在流动相加入磷酸调节pH后，分析过程中出现鼓包，走空针没有鼓包出现，想求助一下会是什么原因造成的

求安捷伦[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]谱的定性定量分析软件安装包，拜托各位大佬了

新能源汽车液冷电池包热工测试运行中需要注意一些配件的温度，无锡冠亚告诉大家因为一旦不注意，配件温度过高，就会影响新能源汽车液冷电池包热工测试的运行。　　新能源汽车液冷电池包热工测试运行工况参数好坏，对其工作的经济型和安全性影响很大，其中在新能源汽车液冷电池包热工测试的系统中，新能源汽车液冷电池包热工测试的蒸发温度可通过装在压缩机吸气截止阀端的压力表所指示的蒸发压力而反映过来。蒸发温度和蒸发压力是根据新能源汽车液冷电池包热工测试系统的要求确定的，偏高不能满足新能源汽车液冷电池包热工测试降温需要，过低会使压缩机的制冷量减少，运行的经济性较差。　　新能源汽车液冷电池包热工测试制冷剂的冷凝温度可根据冷凝器上压力表的读数球的，冷凝温度的确定与冷却剂的温度、流量和冷凝器的形式有关。　　新能源汽车液冷电池包热工测试压缩机的吸气温度是指从压缩机吸气截止阀前面的温度计读出的制冷剂温度。为了保证新能源汽车液冷电池包热工测试心脏-压缩机的安全运转，防止产生液击现象，吸气温度要比蒸发温度高一点。在设回热器的制冷剂的新能源汽车液冷电池包热工测试，保持吸气温度是合适的。　　新能源汽车液冷电池包热工测试压缩机排气温度可以从排气管路上的温度计读出。它与制冷剂的绝热指数、压缩比及吸气温度有关，吸气温度越高，压缩比越大，排气温度就越高，反之亦然。　　新能源汽车液冷电池包热工测试节流前的液体过冷可以高制冷效果，过冷温度可以从节流阀前液体管道上的温度计测得，一般情况下它较过冷器冷却水的出水温度高出一点。　　新能源汽车液冷电池包热工测试运行好坏都是对新能源汽车测试的影响很大的，所以要适当调整新能源汽车液冷电池包热工测试每个参数，保证在合理的情况下运行。

我们想用高效液相色谱仪分析饲料中的氨基酸（呵呵，我们也只有一台waters的e2695型液相色谱仪，没有氨基酸分析仪），请问大家都用什么方法啊，我们买了郑州牧专的氨基酸分析包，可是作出来结果老是不准，就是结果偏低。另外之前负责氨基酸分析的女孩突然辞职了，可我只见过她前处理的大致步骤，不知道里面有啥关键点要必须掌握，所以我想问问大家你们有用氨基酸分析包的没啊，请指教一下吧，谢谢了

请教大神，我最近用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]想检测溶液中的银离子浓度，因为我现在做的是水处理方向，我想要在水包油乳液里吸附银离子，测一下吸附前后乳液里银离子的含量对比一下，我的溶液里有一些甲苯。测的话需要先对溶液消解，怎么消解好呢

每次做纺织品能力验证实验时，样品都是用类似锡纸包卷起来，我们实验室为了样品保存，也需要买一些锡纸，不知道此类锡纸主要成分是什么，为什么需要用锡纸包卷，有什么要求呢

尿干化学法分析仪和传统显微镜镜检是基于两种不同原理的检验手段，因此检测结果可能存在一定程度的差异。临床中两种诊断血尿方法常配合使用以达到检测效率与质量的统一，总结起来，对检测结果的影响因素主要有以下几方面。　　3．1 假阳性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阳性，但镜检却呈阴性 。其原因包括：(1)尿液分析仪潜血实验可与完整红细胞阳性反应，也能够与血红细胞释放的血红蛋白(hemoglobin，Hb)进行反应，这与显微镜只能够观察到完整的红细胞存在差异。健康人群尿Hb水平极低，定为阴性；(2)肌红蛋白(myoglobin，Mb)分子中包含Hb基团，当骨骼肌、心肌严重受损，血MB浓度升高，经肾排泄，导致尿液MB水平升高，潜血反应因此呈阳性，而显微镜检查却呈阴性；(3)部分患者尿中存在对热不稳定的酶，也可导致试剂块发生颜色变化，发生潜血反应；氧化性物质的污染也是造成潜血反应假阳性因素；高温或标本存放时间过长导致潜血反应阳性率增高 ；(4)尿试纸条超过保质期，或没有妥善保存、操作不当、仪器故障等均可能造成假阳性。　　3．2 假阴性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阴性，但镜检却呈阳性。其原因包括：(I)食物、药物影响：某些饮食、药物可引起尿液成份的改变如当尿液中存在大量的维生素时，维生素具有的强还原性使其竞争性结合反应产生的氧，导致尿试纸条无法出现潜血反应即出现假阴性反应；(2)高蛋白、高比重尿样削弱了试剂块潜血反应的敏感度，使能够发生反应的成分被包裹，反应试剂无法接触到，从而出现假阴性结果。　　3．3 离心对检测结果的影响 离心中若速度过快，致使有形成分遭到破坏；但过慢时，沉渣中可能无法找到，以至于漏掉。因此对检验结果出现怀疑时，可实验潜血证实进行验证。总之，随着尿干化学分析仪普及，工作效率得到了极大提升，也使检测红细胞敏感度提高，但显微镜镜检也是无法替代的。对于疑似阳性反应的病例，应采用尿沉渣镜检进行复测，以求结论准确，提高检测可靠性。

如果不小心，液氮罐可能会意外地掉进细胞中，对细胞造成严重损害。那么，当液氮罐掉进细胞时，我们该如何处理呢?　　1. 立即移除液氮罐　　当液氮罐掉进细胞中时，第一步是立即移除液氮罐。这可以通过使用钳子或其他合适的工具将液氮罐从细胞中取出。在这个过程中，需要注意不要进一步损伤细胞或污染实验环境。　　2. 冲洗细胞　　一旦液氮罐被移除，下一步是冲洗细胞。这可以通过将细胞置于含有适当缓冲剂的培养基中进行。缓冲剂可以帮助稀释液氮和减轻细胞受到的损害。同时，冲洗还有助于清除细胞表面的残留液氮。　　3. 检查细胞状态　　冲洗后，需要对细胞进行检查，以确定其状态。这可以通过使用显微镜观察细胞形态和结构来完成。如果细胞出现明显的损伤或死亡，那么可能需要重新开始实验或采取其他措施修复细胞。　　4. 细胞培养和恢复　　如果细胞没有受到严重损害，那么接下来的步骤是将细胞继续培养和恢复。这可以通过将细胞放入新的培养皿中，并提供适当的培养基和条件来完成。在此过程中，可以使用细胞培养技术和方法来促进细胞的生长和再生。　　5. 监测细胞恢复　　一旦细胞开始恢复，我们需要密切监测细胞的恢复情况。这可以通过定期观察细胞形态、增殖和功能来完成。如果发现细胞的恢复速度较慢或存在其他异常情况，可能需要调整培养条件或采取其他干预措施。　　总之，当液氮罐掉进细胞时，及时处理是至关重要的。通过立即移除液氮罐、冲洗细胞、检查细胞状态、细胞培养和恢复以及监测细胞恢复等步骤，我们可以最大程度地减少细胞受损并帮助其恢复。当然，在实验室操作中，预防措施也是非常重要的，包括正确使用液氮罐、操作时保持专注和谨慎等。只有这样，我们才能更好地保护细胞并确保实验的准确性和可靠性。　　预防措施　　在实验室工作中，事故的发生往往可以通过采取预防措施来避免。对于液氮罐掉进细胞的情况，以下是一些预防措施的建议：　　1. 储存和运输细胞时，确保液氮罐被正确放置并固定。使用适当的支架和保护装置可以降低液氮罐掉入细胞的风险。　　2. 在操作期间保持专注和谨慎。避免在操作液氮罐时分心或急躁，以免发生意外。　　3. 定期检查液氮罐的状态。确保液氮罐没有损坏或出现其他问题，以减少安全隐患。　　通过采取这些预防措施，可以降低液氮罐掉落细胞的风险，保护细胞和实验的安全。[url=http://www.mvecryoge.com/]金凤液氮罐[/url]　　应对不同情况　　[url=http://www.yedanguan365.com/]液氮罐[/url]掉进细胞的情况可能会有所不同，因此我们需要根据具体情况采取不同的应对策略。以下是一些常见的情况及相应的处理方法：　　1. 液氮罐只接触到细胞表面而未完全陷入细胞：在此情况下，可以尝试使用吸管或其他工具轻轻将液氮罐从细胞上移开，然后进行细胞冲洗和恢复。　　2. 液氮罐陷入细胞内部：在这种情况下，需要谨慎地将液氮罐从细胞中取出，以避免进一步损伤细胞。然后进行细胞冲洗和恢复。　　3. 细胞受到严重破坏或死亡：如果细胞受到严重损害或死亡，可能需要重新开始实验或采取其他措施来修复细胞。这可能包括使用新的细胞系或进行其他细胞培养操作。

流式细胞胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中，每秒钟能测量数千个至数万个细胞，能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析，带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞，用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术，将荧光显微镜的激发光源改为激光，使其具有了更好的单色性与激发[/

问题：最近1号仪器两个项目主峰均严重拖尾，后带包峰（如图绿色峰峰型）。且一对照品（含量约98%）在另一仪器同样条件做，出峰为平滑曲线；色谱柱为新购入，排除色谱柱问题，怀疑是1号仪器系统存在污染。解决过程：1??由于晚上无人，只能先仪器只带预柱，10%异丙醇水溶液低流速过夜冲洗，第二天进样新配置对照品溶液，出峰与之前绿色峰一样。2??去除色谱柱，反接流通池，水甲醇切换冲洗40min，进样1??同一样品，出峰为红色峰，包峰消失，但仍然峰展宽。3??更换新预柱芯，进样1??同一样品，出峰为蓝色峰，峰款为之前一半。问题解决。疑惑：1??10%异丙醇水溶液冲洗时直接反接流通池是否更节省时间？2??由于仪器维护相关知识大部分是自己摸索，平时工作安排又很紧张，很多时候排查问题不成系统，会浪费很多时间，这次问题虽然找到最终原因了，但感觉过程还有问题，请大佬们多多指教。[img=,690,516]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/03/202203021259581080_9454_3310244_3.png[/img]

[color=#444444]最近液相色谱，有时会有鼓包（峰宽较宽的小峰），但是时间不确定，不知道是什么原因[/color]

定义：单细胞研究，就是针对单个细胞的研究，这是相对于群体细胞的研究。研究意义：细胞是生命活动的基本单位，研究细胞的结构功能及行为，有利于揭示复杂生命体的生命活动规律，探究生理生化现象，获得统计平均结果。然而，现代研究表明，单个细胞内的成分存在巨大差异，平均分析结果不能反映单个细胞内成分的真实情况，会带来误导信息。癌症等疾病总是从个别细胞的变异开始，极少量异常细胞信号会被群体信号所掩盖，不能及时获得有关病变的信息。另外，细胞间的信号传导，应激反应等活动在细胞内迅速发生，传统方法无法做到实时监测。对于数量较少且较为珍贵的细胞样本，如干细胞、元祖细胞及患者样本，传统分析方法需要大量的细胞样本，并不适宜。关于物质在细胞内的空间分布，亚细胞结构如细胞器的分析，传统方法也不能满足。这些都要求我们在一定范围内从单细胞水平研究细胞的生命活动。单细胞分析方法：毛细管电泳、微流控芯片、图像分析、动力学分析及纳米技术等。目前单细胞分析存在的难点：首先无论是针对一个特异性大分子，还是在OMIC水平上进行分子分析，都存在单细胞提取物数量少，难以分析的困难，这甚至可以说是不可能完成的，因此增加灵敏度势在必行。除此之外高通量分析也是一个瓶颈，要想获得单细胞分析确切的分析结果，研究人员必须快速而准确的分析多个细胞，这并不容易。另外单细胞分析也常常需要进行多种方式分析，这不仅是由于细胞存在于一种异质性环境汇总，而且也在同一时间，也需要测量多个参数。

请问大家有没有遇到液相色谱在停泵之后，再重新起动之后，基线会出现一个很大的鼓包，有时候要30多分钟才能重新平衡好的现象呢？已排除色谱柱原因，流动相也换过品牌，我们自己测试就算不用缓冲盐用纯乙腈也会出现这个现象。有没有大神有解决思路呢？万分感激！[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007261106319655_7425_4037928_3.png[/img]

配制饱和氢氧化钠溶液，我配出来有2种现象：1、往水里面加氢氧化钠直至不溶解，溶液浑浊，放置一段时间有药品析出。2、往氢氧化钠里面加少量水，溶液浑浊，放置一段时间后变成一大块晶体，再加水也溶解不了。怎么解释上面第二种现象呢，我配制饱和氯化钙溶液也出现同样的情况。

液相色谱测法莫替丁有关物质，头一针走溶剂30分钟正常，第二针进样30分钟出现鼓包，以后各针都有什么原因，求助

液相测法莫替丁有关物质，头一针溶剂正常，第二针进样30分′钟出现鼓包，以后针针都有，影响检测什么原因

由于春节大家都放假了，液氩白白浪费有点可惜，能否在液氩的杜瓦罐瓶身包一层泡沫之类的减缓热交换？节省点液氩。

求助一下安捷伦液相工作站c.01.06安装包，公司的光盘找不到了，找客服不给安装包

提起美式食品，人们就会想起汉堡包。但美国食品分析公司Clear Labs 5月10日发布报告说，美国市面上的汉堡包超过10％存在问题。他们甚至在少数汉堡包中检测到人类与老鼠的DNA（脱氧核糖核酸）。不过，该公司以及美国食品安全专家都指出，食品里出现人类与老鼠DNA难以避免，不一定就会对人的健康造成损害。该公司研究人员最近对加利福尼亚州22个零售店销售的汉堡包进行了基因组分析，涉及77个品牌的258份样品。结果显示，13．6％的汉堡包存在问题，如所含成分与标签标示不相符、卫生问题与病菌污染等。研究人员还在一份汉堡包样品中发现了人类DNA，在3份汉堡包样品中发现老鼠DNA。报告分析认为，人类DNA可能来源于汉堡包加工过程中操作人员的头发、皮肤或指甲等。报告解释称：“尽管令人不快，但需要强调的是，人类或老鼠DNA不太可能对消费者健康造成损害。”报告指出，美国食品和药物管理局允许食品中存在一定量的人类与老鼠DNA，因为这在生产过程中无法完全避免。在他们研究中检测到的人类与老鼠DNA量很可能符合监管的要求范围。佐治亚大学食品微生物学教授迈克尔·多伊尔表达了类似看法。他说：“在食品中发现一些老鼠和人类DNA并不令人意外……听上去很恶劣，但需要客观看待。这与其说与人类健康相关，还不如说是审美关切。”此外，素食汉堡包问题颇多。在89份样品中，23．6％存在所含成分与标签不一致等问题。比如，两份素食汉堡包样品中出现牛肉DNA，一份黑豆汉堡包里根本不含黑豆。最引人关注的是，4．3％的样品里含有假结核耶尔森氏菌、嗜水气单胞菌等病菌的DNA。不过，多伊尔评价说，这一结果会有一点误导，因为基因组分析技术无法区分出死与活的细胞，发现死细胞的病菌DNA并没有多大意义。而且，所发现的病菌要么不是人们通常担心的病菌，要么数量较少不足以致病。

细胞液量很少，几乎澄清，稀释50倍后直接进样分析。菜鸟求助：不知道前处理需不需要蛋白沉淀呢?细胞液中的蛋白质是否会干扰元素测定。另外，想求合适的前处理方法。谢谢。

在购买液质时仪器销售往往都只跟你提我的仪器有多少多少优点的，而对于其缺点却只字不提，用户在使用之前根本无法得知，各位使用过各家仪器的版友不烦来曝一曝你所用过的液质都有哪些缺点的？有些版友可能会有一些忧虑而不敢曝，咱们依事实讨论，别怕得罪仪器商！

市场上供应的大多数培养液的配方非常接近，这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法，这个方法是保守的，在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中，观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞，不过也很容易扩展到贴壁细胞。细胞的生长参数1. 翻倍时间（ Doubling Time ）细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的参数中是最容易测量的。翻倍时间应该在细胞处于对数期复制时测量，对于 Sf9 和 Sf21 细胞来说通常是介于 16-24 小时之间，不过大多数在 20-22 小时。dt=t × ln2/ln(Ct/Co) ，其中 dt 为翻倍时间， Co 为起始细胞数目， Ct 为经过时间 t 后的细胞数目， t 为 Co 和Ct 两次计数之间的间隔时间，所有的时间都以小时为单位。2. 细胞大小（ Cell Size ）细胞的大小是监测细胞健康程度的一个非常有用的参数。如果细胞是健康的，细胞的大小均一，都处于该细胞株体积正常变化范围的下限。细胞的大小在不同的细胞株变化是很大的。对于我用过的 Sf9 和 Sf21 ，典型的直径是 16-18 m m ，不过我知道有些细胞株小至 14 m m 或者大至 19 m m 仍然很健康。3. 滞后期（ Duration of Lag ）当细胞的密度较低时，会有一个滞后期，其长短取决于分装或者传代后细胞的密度。一般说来，该密度越低，滞后期越长。对于一个特定的细胞株来说，当这个密度高出一个阈值时，滞后期的长短与密度无关；而低于一个阈值时，滞后期无限长，细胞不再增殖。4. 低密度分装极限（ Low Density Split Tolerance ）能够在一个较短的滞后期（小于 12 小时）复苏的细胞形状较好。不过这是细胞株的特性，需要进行实验来确定你的细胞株的密度极限。我的细胞株有些在分装成密度为 5 × 104 细胞 /ml 时仍然可以很好复苏，有些细胞株分装成 5 × 105 细胞 /ml 就不能复苏了。5. 高密度极限（ High Density Maximum ）这是你的细胞能生长的最大密度，高于这个密度你的细胞将进入平台期。这个指标既和细胞株有关，又和使用的培养液有关。我建议先把你的细胞株培养至平台期，然后把一些分装到新鲜的培养液中以后，使剩下的继续生长至平台期，同时密切监测细胞状况。一般来说，细胞的培养要避免密度超过高密度极限的 80% 。对于我培养的细胞，这个极限值从 2 × 106 至 12 × 106 细胞 /ml 不等。实验步骤第一阶段：1. 准备合适体积的由 25% 体积新培养液和 75% 旧培养液（即细胞原先适应的培养液）组成的混合培养液 I。2. 将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液 I 中。3. 使细胞生长到通常培养时的较高密度，监测细胞生长参数。4. 继续以步骤 2 中的密度分装细胞到新鲜的混合培养液 I 中，直到生长参数达到可以接受的水平。有时候分装一次就可达到要求。5. 一旦细胞稳定下来，以通常使用的最低分装密度分装细胞至新鲜的混合培养液 I 中，同样监测细胞参数。6. 细胞达到较高密度后，继续以步骤 5 中的分装密度把细胞分装到新鲜的混合培养液 I 中，直到细胞的生长参数达到可以接受的水平。7. 如果细胞恢复到正常状态，进行第二阶段的实验。8. 如果细胞不能达到正常状态，新培养液可能不适于培养这种细胞。9. 如果细胞在新培养液中的生长参数达到平衡状态，虽然与正常状态不同，但是可以为实验接受，也可进行第二阶段的实验。第二阶段：1. 准备适量的由 50% 新培养液和 50% 旧培养液组成的混合培养液 II 。2. 将细胞以两倍最低分装密度分装至混合培养液 II 中。3. 如第一阶段一样，监测细胞生长指数，使细胞达到稳定状态。然后将分装密度降到最低分装密度，再使细胞达到稳定状态。第三阶段：步骤同第一阶段和第二阶段，使细胞适应混合培养液 III （ 75% 新培养液和 25% 旧培养液）。第四阶段：1. 步骤同第一阶段、第二阶段和第三阶段，使细胞适应新培养液。2 . 当细胞在新培养液中达到稳定后，监测细胞的生长指数，看是否波动过大。

接到个师弟的电话，说起他在操作火焰原吸时，雾化室突然爆炸，爆炸的气体冲击出来，把灯室也炸坏了，幸好无人员受伤。到底什么原因会造成雾化室爆炸呢？是废液管液封没做好还是其他？？

为什么使用安捷伦1200液相40分钟后股包（流动相、柱子都重新换过)进样是异丙吡唑酮反应液

[color=#333333]液相测面包中的丙酸，使用国标5009.120。样品找不到目标峰。丙酸标液响应也很小。求大神们解答[/color][color=#333333][/color]

（1）细胞核的分离： 将培养的细胞制成细胞混悬液，或以胰蛋白酶消化法于培养盖上收集培养细胞。应用MgSO4染色分离方法分离细胞核（Van den Engh et al 1986, 在Traok和Van Den Engh 34章　）。细胞混悬液浓度为5×106/ml。利用RNA酶消化后，使核从细胞分离，细胞核混悬液浓度为4～5×106细胞核/ml。（2）细胞固定和酸的处理：在5 ml试管内加冷的100%酒精不断旋转以达到满意的固定。在冰上停留10 min。在4 ℃离心（×150 g）10 min。重复加三次冷的100%酒精入试管内，离心，倾去。置于冰上10 min，再离心。然后加入相当核悬液1/2量的0.1 n HCl , 0.5% Triton X-100。室温停留10 min。加入IBM-0.25%Triton X-100（IBM配方：50 mmol/l KCl, 10 mmol/L MgSO4, 5 mmol/L HEPES pH8.0）。再离心，重复IBM漂洗（这时细胞核可在不染色情况下，以荧光显微镜观察）后，以2×SSC-0.1%Tween漂洗1×3min，继之加入等量2%的多聚甲醛在1×PBS-5 mmol/l MgSO4。在室温静置站立10min。倾去上清液，加IBm -Triton X-100漂洗，离心，使细胞核混悬液最终浓度为108/ml，（可用IBM-Triton X-100稀释约50倍，在血球计数器计数），混悬液镜检应含单个，完整的细胞核。（3）细胞核混悬液杂交①配制杂交混合液：甲酰胺5份，20×SSC1份，50%硫酸葡聚糖2份，pH调至7.0。此原液（stock solution）可贮存在4 ℃冰箱内。应用时加1份10 mg/ml鲱鱼精子DNA（herring sperm DNA）。②混合1 μl的细胞核混悬液（108/ml）与18μl的杂交混合液，充分混匀。将此19 μl混合液移入1.5 ml容积的Eppendorf 管中（核含量约为105）。③加入100 ng/每管的AAF标记DNA探针（如为生物素标记DNA探针浓度为20～40 ng/每管）。④置70 ℃10min使DNA探针和核DNA变性。⑤和组织切片与DNA探针杂交方法相较，不同的是在加热变性后切勿置冰上迅速冷却以终止反应，而应迅速转入37 ℃孵育过夜。（4）杂交后漂洗在每管中加入1.25 ml 50%甲酰胺-2×SSC（pH7.0），在42 ℃静置10～15min。偶尔旋转以助混匀。冷却至室温。加100 μl经dimethylsuberimidate(DEMS)处理的血细胞（107/ml）混匀，离心，室温，10min，轻弹试管使沉淀的小块散开，加入1.25 ml 2×SSC(pH7.0)，42 ℃，继之，静置于室温10～15min，如前离心，再加1.25 ml IBM-Triton X-100,室温静置5min，离心。注：DEMS处理红细胞方法：经漂洗并离心去除白细胞和血清的红细胞在盐液如PBS中，细胞含量为108/ml，以K2CO3和DEMS溶液处理3次，第1次：K2CO3为20 mmol/L,DEMS为3 mmol/L，以后2次：K2CO3依然为20 mmol/L，而DEMS为10 mmol/L。在应用前将K2CO3和DEMS液混合加入红细胞混悬液中。在最后2次漂洗液中，应用100 mmol/l K2CO3将pH调至9～10。在25 ℃，15min后，加入50 μl，100 mmol/l 的柠檬酸（citric acid）/每ml细胞混悬液的浓度以达固定红细胞的目的。固定的红细胞离心倾去上清液后，用2×SSC稀释到108/ml，加0.1%叠氮钠可在4 ℃保存至少1年。（5）AFF标记的荧光显示：加200 μl的PBS含0.05%Tween和2%正常血清（NGS），轻轻振荡混匀，室温静置10min，加20 μl 1：100的单克隆抗AFF抗体，37 ℃孵育45min，加1.25 ml的PBS-Tween，室温静置10min，加20间歇性振荡，离心，倾去上清液，加200 μlPBS含0.05%Tween –2%NGS,振荡，室温静置10min，加20 μl的羊抗小鼠–FITC荧光标记抗血清，稀释度1：100～1：300。孵育于37 ℃ 45min，加1.25 ml PBS –Tween,室温静置10min，离心，倾去上清液。（6）生物素标记探针的荧光显示：加200 μl 4×SSC含0.1%Trion X-100 和5%BSA。室温静置10 min后，加20 μl抗生物素标记FITC抗血清15 μg/ml，孵育在37 ℃ 30min，以1.5 ml 4×SSc –0.1% Trion X-100洗1次，加入1.25 ml IBm –Triton X-100,室温静置10～15min，间歇振荡、离心。（7）荧光显微镜观察：将细胞核混悬液稀释于250 μl的IBM-Trion X-100中，轻加振荡混匀。为抗荧光褪色可加等量的抗褪色溶液至载片上的细胞核涂片上，选择适当的激发波长观察。（8）流式细胞计：将750 μl的细胞核混悬液通过流式细胞仪（Flow cytometry, FCM），DEMS处理过的红细胞作为对照（Df 530/30nm, Omega ·Optical Inc, Brattleboro, VT）。