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我们在使用液相色谱仪时,经常会遇到梯度条件。那么用二元高压梯度使用时,最高的比例是多少呢?(二元高压使用的是静态混合器,四元低压一般使用的是动态混合器)希望大家积极讨论!
在做液相色谱梯度洗脱时,用的是高压混合,发现两相溶剂极性相差小混合后,运行程序空走基线比较稳定,但两相溶剂极性相差大混合后,运行程序空走基线就不稳定,这是什么原因,是否是混合器的混合效果差,请教各位老师,谢谢!
低压混合的工作原理:常见的低压混合器是一个四进一出的装置,四个进口分别由四个电磁阀控制着,连接四个储液瓶中。一个出口连接泵。泵工作后在泵-出口-混合器的连通的管腔内实现负压,这是低压混合的动力来源。混合器的四个入口处的电磁阀控制各个入口的开启状态。开启储液瓶的液体就会在负压的作用下到达混合器。通过电磁阀控制各个入口电磁阀开启的时间调整混合液的比例。这是低压混合的工作原理。低压混合器的主要常见问题:1) 比例混合不准确。忽略溶剂的粘度使得混合比例失真,这是设计上固有缺陷。但是影响不大。原因是粘度不同,在相同负压下的流速不同,电磁阀只是控制开启时间,所以不够精确。比如:胶水和甲醇在50:50条件下基本上很合后的都是甲醇(例子比较极端,但好理解)。在粘度相差比较小的时候还是比较准的。2) 低压容易生气泡。尤其在没有在线脱气装置的情况下。3)容易产生电磁阀密闭不严的问题。这个是要讨论的。经常做梯度或者使用一个通道会出现这样的问题。现象是:1. 未开启的通道,但其对应的储液瓶液体减少。证明该通道电磁阀入口密闭不严;2. 走双通道时候一个储液瓶中的液体过快,另一个过慢。证明“快的”一个有问题。3. 保留时间明显变长或者变短。要怀疑一下这个问题,留意一下是不是有2.提到的现象。 处理方法:1) 更换新的混合器。这是最根本方法,但是比较贵。2) 个人曾使用解决的方法。确定密闭不严的通道(判断方法可以采用上面提到的),然后关闭其他通道,但是用次通道走50%甲醇,流速2.0ml/min,开启purge阀。5分钟后,缓慢降流速到0.2,旋紧purge阀,流速条到0。小心取出该储液瓶的输液管,用封口膜把输液管的终端密封死。最后,调试其他通道看看问题是否排除。