细菌接种仪

之前用接种胶囊，成本较高，用土壤或者废水做接种液也不太好掌控，可不可以用养鱼的硝化细菌呢？之前尝试过法国科迪的消化细菌，标样是做出来了，但是成本也高，如果尝试消化细菌可以把标样做出来，是不是就可以用硝化细菌？

一、灭菌1、 洗净两个250mL锥形瓶。（注：1提前准备好，以节约时间；2可开启培养箱37℃）2、 用滤纸称量1g蛋白胨、0.5gNaCl（也可直接加入到锥形瓶中称量，但是速度较慢，需防止过量），倒入锥形瓶中。3、 称量0.3g牛肉浸膏，用玻璃棒沾少许，滴加到锥形瓶中（因取量较少，所以玻璃棒不宜沾多，以防过量）。4、 加入100mL去离子水，稍加热溶解（注：1营养琼脂培养液需加热至沸腾使琼脂充分溶解；2此时，可开启高压灭菌锅开始预热升温，注意检查灭菌锅内水量。）5、 调pH至6.8±0.1，加入约15滴1mol*L-1 NaOH溶液（7-8滴）。6、 将营养汤锥形瓶包扎封口，放入高压灭菌锅中121摄氏度灭菌约15min，（A号控温不稳定），（注：做实验要求既好又快，合理安排时间，提前做好准备，计算好时间）。7、 灭菌结束后，迅速去除两瓶营养肉汤，放入超净台中冷却，待接种，（此时开启紫外灯灭菌。）二、接种1、 灭菌后的肉汤放入超净台中，约需1h冷却；2、 戴好口罩，用75%酒精喷洗手杀菌，坐于超净台前，点起酒精灯，从冰箱中拿出冷藏的菌种，对接种铂丝灭菌冷却接种，（提前开启培养箱，设定温度为37°C，振荡速度为100rpm）。3、 接种完毕，放入振荡培养箱中培养18-24h，（一般18h细菌活性最强，最适宜做实验，所以实验前需计算好时间。）（注：离开实验室时，注意再次查看振荡培养箱的温度，振荡是否都开启。）

请问哪位过菌种的接种呢？有没有相关的标准啊我是要来做质控的，谢谢

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。　　试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一，微生物检验中常用的生化反应介绍如下： 　　一、糖酵解试验　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。　　试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。　　二、淀粉水解试验　　某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。　　试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。　　淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。

一、细菌的分布： 微生物种类繁多，繁殖迅速，分布广泛，不论自然界的空气、土壤、水，生活中的食物、各种物体和器械表面，以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微生物，其中以细菌、放线菌最多。因此，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。 （一）空气中细菌的检查（设计性实验选题） （二）水中细菌的检查（设计性实验选题） （三）人体皮肤表面细菌的检查（设计性实验选题） 【附录】细菌菌落的计数方法 ①选择生长均匀，无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察，用记号笔在平板底上进行点数（以免遗漏），然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。 ②如菌落多而密集，可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线，分为http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123705956.gif四区，再分别选择菌落密集和稀疏的两个区，再做平分线，使每一小区为平皿面积的1／8 或1／16，然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数，所得数乘以8或16，即为该平皿的菌落总数。（图４-1） ③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上，计算10个小方格内的菌落数，如为30个，则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米，则半径为4.5厘米，整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×（4.5）2=191个菌落。二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系，当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖；当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境，来抑制或杀灭微生物，以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。 （一）物理因素对细菌的影响 1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验 （二）化学因素对细菌的影响 化学消毒剂的杀菌作用（三）生物因素对细菌的影响 噬菌体的特异性裂解细菌试验 【材料】大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。 【方法】 （1）将琼脂平板划分成三等份，注明1、2、3。 （2）分别以接种环取菌后，在1、3处涂布痢疾杆菌，2处涂布大肠杆菌。http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123903343.gif（3）分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央，（注意不要交叉污染），另取一接种环的肉汤放于3处中央。 （4）置37℃孵育24小时后取出，观察噬菌斑出现的位置（见图4-2），并记录之。 （四）细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法 　　又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌圈。测量抑菌圈的大小，即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。 【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18～24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子；含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 【方法】 （1）将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。 （2）将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面，相互间应间隔一定距离。 （3）37℃培养24小时后，观察结果。 【结果】 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见表4-1 （五）中草药对细菌的抑菌作用测定

问:分离的细菌如何鉴定?答:细菌的传统鉴定 1. 形态特征及染色结果 ①革兰氏染色 ②鞭毛染色 ③荚膜染色 ④细胞壁染色（NaCl法：1.取1d25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。2.挑一环培养6h的细菌在25%的NaCl中涂匀，自然凉干。3.滴加0.01%的结晶紫于其上，30s后水洗干燥，油镜观察。） ⑤抗酸染色 2. 培养特征观察取菌龄24-28h的菌3.6接种于PDA平板，PDA斜面，营养肉汤中培养24h，进行琼脂柱，明胶穿刺培养，30℃培养24h。 3. 生理生化实验需氧性测定和运动性测定：将斜面培养24h的待测菌用接种针穿刺到培养基管底，3d后观察变化。如果菌落沿培养基表面生长，表明为好氧菌，反应为阳性，如果菌落沿穿刺线生长，反应为阴性。培养基成分：蛋白胨0.2g，NaCl0.5g，K2HPO40.2g，琼脂0.5-0.6g，葡萄糖1.0g，水100ml。 4. 生长温度测定在肉汤培养基（外加1%葡萄糖）中用接种针接种，在恒温水浴锅中不同温度下（[c

[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]　　[b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]　　1. 仪器与试剂：VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡（生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]　　2. 试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定，其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]　　3.VITEK-AMS鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应GNI+、GPI、YBC卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时，挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]　　4. 双歧检索鉴定法：根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]　　5. 常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 [/size][size=4]　　[b]二、结果[/b][/size][size=4]　　1. UIO发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出现UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出现UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出现UIO4株，占6.7%。[/size][size=4]　　2.UIO发生原因：在44株出现UIO中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48h），2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。[/size][size=4]　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告UIO菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]　　[b]三、讨论[/b][/size][size=4]　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]　　参考文献[/size][size=4]　　1，叶应妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]　　2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]

微生物接种和菌种保藏注意事项下列各方法可根据实验室具体条件与需要选做。 (一) 液体石蜡保藏法 1.液体石蜡灭菌 在250mL三角烧瓶中装入100mL液体石蜡，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，12l℃湿热灭菌30min，然后于40℃温箱中放置l4d(或置于105～110℃烘箱中lh)，以除去石蜡中的水分，备用。 2.接种培养 同斜面传代保藏法。 3.加液体石蜡 用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌种斜面上，加入量以高出斜面顶端约1cm为宜。 4.保藏 棉塞外包牛皮纸，将试管直立放置于4℃冰箱中保存。利用这种保藏方法，霉菌、放线菌、有芽孢细菌可保藏2年左右，酵母菌可保藏1～2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。 5.恢复培养 用接种环从液体石蜡下挑取少量菌种，在试管壁上轻靠几下，尽量使油滴净，再接种于新鲜培养基中培养。由于菌体表面粘有液体石蜡，生长较慢且有粘性，故一般须转接2次才能获得良好菌种。 (二) 冷冻干燥保藏法 1.准备安瓿管 选用内径5mm，长10.5cm的硬质玻璃试管，用10%HCl浸泡8～10h后用自来水冲洗多次，最后用去离子水洗1～2次，烘干，将印有菌名和接种日期的标签放人安瓿管内，有字的一面朝向管壁。管口加棉塞，121℃灭菌30min。 2.制备脱脂牛奶 将脱脂奶粉配成20%乳液，然后分装，121℃灭菌30min，并作无菌试验。 3.准备菌种 选用无污染的纯菌种，培养时间，一般细菌为24～48h，酵母菌为3d，放线菌与丝状真菌7～10d。 4.制备菌液及分装 吸取3mL无菌牛奶直接加入斜面菌种管中，用接种环轻轻搅动菌落，再用手摇动试管，制成均匀的细胞或孢子悬液。用无菌长滴管将菌液分装于安瓿管底部，每管装0.2mL。 5.预冻 将安瓿管外的棉花剪去并将棉塞向里推至离管口约15mm处(图24—2A)，再通过乳胶管把安瓶管连接于总管的侧管上，总管则通过厚壁橡皮管及三通短管与真空表及干燥瓶、真空泵相连接(图24—1)，并将所有安瓶管浸入装有干冰和95%乙醇的预冷槽中，(此时槽内温度可达-40～-50℃)，只需冷冻1h左右，即可使悬液冻结成固体。 6.真空干燥 完成预冻后，升高总管使安瓿管仅底部与冰面接触，(此处温度约-10℃)，以保持安韶管内的悬液仍呈固体状态。开启真空泵后，应在5～15min内使真空度达66.7Pa以下，使被冻结的悬液开始升华，当真空度达到26.7～13.3Pa时，冻结样品逐渐被干燥成白色片状，此时使安瓿管脱离冰浴，在室温下(25~30℃)继续干燥(管内温度不超过30C)，升温可加速样品中残余水分的蒸发。总干燥时间应根据安瓿管的数量，悬浮液装量及保持剂性质来定，一般3~4h即可。 7.封口样品 干燥后继续抽真空达1.33Pa时，在安瓿管棉塞的稍下部位用酒精喷灯火焰灼烧，拉成细颈并熔封(图24-2B、C)，然后置4℃冰箱内保藏。 8.恢复培养 用75%乙醇消毒安瓿管外壁后，在火焰上烧热安瓿管上部，然后将无菌水滴在烧热处，使管壁出现裂缝，放置片刻，让空气从裂缝中缓慢进入管内后，将裂口端敲断，这样可防止再用无菌的长颈滴管吸取菌液至合适培养基中，放置在最适温度下培养。 冷冻干燥保藏法综合利用了各种有利于菌种保藏的因素(低温、干燥和缺氧等)，是目前最有效的菌种保藏方法之一。保存时间可长达10年以上。

细菌对于碳水化合物的代谢试验原理为：由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。1.糖（醇、苷）类发酵试验　　　（1）原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解1～2种糖类，还有的不能分解。细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。　　（2）培养基：在培养基中加入0.5%～1%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。　　（3）方法：将分离的纯种细菌，以无菌操作接种到糖（醇、苷）类发酵培养基中，置培养箱中培养数小时至两周后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应保持湿度，以免培养基干燥。　　（4）结果：接种的细菌，若能分解培养基中的糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应。若产气可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。若不分解，培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。　　（5）应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。

（一）温度 　　各种细菌都需在最适生长温度的范围内生长。当外界温度明显高于最适生长温度，细菌被杀死；如果在低于细菌的最低生长温度时，细菌代谢活动受抑制，则出现抑菌作用。 　　1.高温：细菌蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜及酶类因热力作用发生变性或凝固，活性消失，代谢发生障碍导致细菌死亡。大多数无芽胞细菌55℃～60℃加热30～60min即被杀死；加热100℃立即死亡，有芽胞的破伤风芽胞梭菌需煮沸3h才被杀死。热力灭菌分湿热和干热两种。在同一温度下，前者的效力大于后者 　　（1）湿热：常用的方法有 　　1）巴氏消毒法：方法有两种：一是61.1℃～62.8℃30min；另一是71.7℃l5～30s，目前主要用于牛乳消毒。 　　2）煮沸法：煮沸100℃（1个大气压状态下）。5min中可杀死细菌繁殖体，如于水中加入2％碳酸钠，则可提高其沸点至105℃，既杀死芽胞，又防止金属器皿生锈。 　　3）流通蒸气灭菌法：常用阿诺（Arnold）流通蒸气灭菌器或蒸笼。利用一个大气压下100℃水蒸气进行消毒。经10～30min细菌繁殖体被杀死，但对芽胞的作用不大。 　　4）间歇灭菌法：采用间歇加热方式达到灭菌目的。方法是将待灭菌物品置于Arnold灭菌器内，经l00℃加热15～30min，每日一次，连续3次。每次灭菌后，取出再置37℃孵箱过夜，使残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气加热使之被杀死。这样可达到杀死芽胞又使不耐100℃的物质保存下来。 　　5）加压蒸汽灭菌法：利用密闭的耐高压的高压蒸汽灭菌器，在蒸汽不外溢的条件下，使锅内压力增高，蒸汽的温度也随之增高，大大加强其杀菌效力。通常在103.4kPa的压力下达121.3℃，维持15～20min可杀灭所有细菌芽胞和繁殖体。本法适用于耐高温、耐湿物品的灭菌，如普通培养基、生理盐水、手术敷料等。 　　（2）干热 　　1）烧灼：是常用的干热灭菌法。微生物实验室使用的接种环、接种针、瓶口和试管口常在火焰上烧灼灭菌。 　　2）干烤：在密闭干烤箱内加温至160℃～170℃维持2h是对一般玻璃器皿、注射器、瓷器的灭菌方法，适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品医学教.育网搜集整理。 　　2.低温：一般细菌耐低温，在低温条件下，细菌代谢活动降低不再繁殖，能较长时间维持生命，故常用于保存菌种。为避免解冻时对细菌的损伤，可在低温状态下真空抽干，去尽水分，此法称冷冻真空干燥法，可保存细菌数年至数十年，是目前保存菌种的最好方法。

感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性]培养基[/url]中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp[sup]r[/sup]等)得到表达，然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性[://]培养基[/url]上。重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其编码α肽链的DNA序列，此结构称为[i]lac[/i]Z'基因。[i]lac[/i]Z'基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段(146个氨基酸)。任何携带着[i]lac[/i]Z'基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后，便会产生出有功能活性的半乳糖苷酶，在IPTG(异丙基β—D—硫代半乳糖苷)诱导后，在含有Xgal(5-溴-4-氯-3-吲哚-6-D-半乳糖苷)的培养基平板上形成蓝色菌落（半乳糖苷酶能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝）。而当有外源DNA片段插入到位于[i]lac[/i]Z'中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，也就不能分解Xgal而显蓝色，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料 超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、恒温水浴、离心管、试管、培养皿、锥形瓶、接种针、玻璃涂棒、酒精灯、镊子、牙签、大肠杆菌DH5a 、质粒(二) 试剂0.1mol／L CaCl2溶液 LB液体培养基 LB固体培养基 氨苄青霉素(Amp)：用无菌水配制成100mg／mL溶液，置—20℃冰箱保存。Xgal：将Xgal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg／mL，不需过滤灭菌，分装小包装，避光贮存于-20℃。IPTG：取2g IPTG溶于8mL双蒸水中，再用双蒸水补至10mL，用0.22um滤膜过滤除菌，每份1mL，贮存于-20℃。[实验步骤](一) 制备感受态细胞1、吸取15µl E.coil菌液，接种于20ml LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜，待OD600=0.5左右将该菌悬液以1：50接种量转于50ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20-30min测一次OD600，至OD600=0.6左右，停止培养。2、培养液转入离心管中，在冰浴10min，4℃下5000rpm离心10min。3、弃上清液，用4ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置30min。4、4℃下5000rpm离心6min。5、弃上清液，用2ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀，冰上放置片刻后即制成感受态细胞悬液。6、以上制好的感受态细胞悬液可在冰上放置，24小时内直接用于转化实验，也可加入15%高压灭菌过的甘油，混匀后，分装于1.5ml离心管中，每管100µ l感受态细胞悬液，置-70℃条件下保存。.(二) 质粒DNA转化大肠杆菌1、取100µl摇匀后的感受态细胞悬浮液（如是冷冻保存液，则需化冻后马上进行下面的操作），加入5µl连接产物，轻轻摇匀，冰上放置30min后，于42 IPTG水浴中保温90s，然后迅速在冰上冷却2min。2、加入900µl LB液体培养基，则总体积约1ml，混匀于37℃振荡培养90分钟使受体菌恢复正常生长状态并使转化体产生抗药性Amp[sup]r[/sup]。3、在预制的LB琼脂平板上，加40uL 20mg／mL的Xgal和4uL 200mg／mL的IPTG溶液，并用灭菌玻璃推子(酒精灯上烧后冷却)，均匀涂布于琼脂凝胶表面，37℃倒置吸收。4、将恢复培养的菌体4000rpm离心5min，移去上层900µl LB培养基，用余下的100µl重悬菌体至均匀。(四) α互补现象的检查将重悬菌体均匀涂布于含X-gal+IPTG+氨苄青霉素的LB平板上，37℃倒置培养12—24h，出现菌落。其中白色菌落从理论上讲为重组克隆。如果进一步验证，可挑取多个白色菌落分别接种到1ml含有氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养6-8h，然后提取质粒酶切验证，或进行菌落PCR扩增鉴定。

1．固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后，单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团，称为菌落（colony）。(1)菌落的形态特征：大小、形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等）、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。据细菌菌落表面特征不同，可将菌落分为3型： ①光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型，如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征：菌落溶血有下列3种情况。①α溶血：又称草绿色溶血，菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致；②β溶血：又称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环，是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致；③γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化，红细胞没有溶解或缺损。(3)色素：有些细菌产生水溶性色素，使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色，产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味：某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味，如铜绿假单胞菌（生姜气味）、变形杆菌（巧克力烧焦的臭味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）、白色假丝酵母菌（酵母味）和放线菌（泥土味）等。

http://img.ycwb.com/news/attachement/jpg/site2/20101030/90fba60187190e35b72d07.jpg 济南市中心医院病原微生物学实验室培养皿中的细菌济南市中心医院是卫生部确定的全国19个超级细菌监测哨点医院之一。其病原微生物学实验室肩负着监测超级细菌的重任。检测超级细菌需要经过四道程序：工作人员首先将从临床患者感染部位提取的样本放在培养基上接种，然后再送入二氧化碳培养柜中进行18-24个小时的培养。培养出细菌后，进行细菌鉴定和药物敏感性试验，如果发现疑似耐药性反应，就会将其送到“临床基因扩增检验实验室”做基因分析，最快两三天就可以确认是否是超级细菌。

1 水中大肠菌群（Coliform group）细菌的检测 1 .1目的和原理 如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起肠道传染病。由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个。 大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，能发酵乳糖，在乳糖培养基中经37℃ 24小时培养，能产酸产气，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌。本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，此一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。本法除了用于检测水样（淡水或海水）外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50克样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡1—2分钟，便成10-1稀释，以用于检验。 1.2 材料与器皿 （1）培养基二倍浓度的乳糖胆汁液体培养基一倍浓度的乳糖胆汁液体培养基伊红——美蓝琼脂（E．M．B．）培养基亮绿乳糖胆汁（B．G．B）液体培养基营养琼脂培养基（2）灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染液、灭菌培养皿 1.3 方法与步骤 （1）假定试验①用10ml水样，接种到二倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接三支 。②用lml水样，接种到一倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接种三支。③制备水样 10-1和 10-2的稀释液。④分别接种lml10-1和 10-2稀释液到一倍浓度的乳糖胆汁管中，每个稀释液接种三支。⑤在35℃中培养48小时，观察有无气体和酸产生。⑥在48小时以内，培养管内倒置的杜汉氏管中有任何量的气体积累，便可断定为阳性假定试验。若培养管内液体清晰而杜氏管中有气泡时，可能为放置不当而残存的空气泡，不可与产气的阳性反应相混同。无气泡着为阴性。产酸者呈黄色。(2) 确信试验①取呈阳性和阳性可疑的初步发酵试管，轻轻振荡或转动，然后以无菌的金属接种环，转移1环培养物至亮绿乳糖胆汁管中，于35C℃培养48小时。如在倒置的杜汉氏管中产气，不论其量多寡，皆为阳性确信试验。②凡初步发酵试验管在24小时之前就显示活跃的发酵（产气量占杜汉氏管10％以上）的试管，应及时转移至确信试验的培养基。（3）完成试验①取上述阳性确信试验管，在伊红一美蓝平板上划线分离，为了确保获得分离的单菌落，须注意以下事项：a．划线间距至少相隔0.5厘米 b．接种针尖端要稍弯曲 c．先对发酵管轻击，并使之倾斜，以免接种针挑取到任何膜状物或浮渣，d.划线时要用针尖的弯曲部分接触琼脂培养基平面，以免刮伤或戳破培养基。划线后培养皿倒置，于35C培养24小时。② 24小时后，观察在EMB平板上出现的单个菌落，具核心及深绿色金属光泽者为较典型的大肠菌群菌落。尽可能挑取典型的或接近典型的大肠菌群菌落，在营养琼脂斜面上划线，置37 ℃培养24小时。挑取斜面培养物制成涂片，进行革兰氏染色，凡属革兰氏阴性杆菌，即确认了大肠菌群细菌的存在。③ 在EMB平板上呈较典型的大肠菌群细菌还可再次转接至乳糖胆汁发酵管中，在37℃下培养48小时，产生气体者即确认了大肠菌群细菌的存在。④ 根据证实有大肠菌群细菌存在的阳性管数查表5－10，以确定大肠菌群数。整个试验的步骤见图5－7所示。 图5－7 大肠菌群细菌的检测 1.4 结果及分析 将上述各个试验阶段的结果列表记录，并最后算出水中所含大肠菌群的最大可能值（表5－10）。 表5－10 最近似数（MPN）指数和95%置信度检索表 出现阳性反应的试管数每100ml中的MPN指数95% 置信度 在3支10ml 试管中在3支1ml 试管中在3支0.1ml 试管中下限 上限 0013 0.59 0103 0.5 13 10040.520 1017121 1107123 11111336 12011336 2009136 20114337 21015344 21120789 22021447 2212810150 300234120 301397130 3026415380 310437210 3117514230 31212030380 3209315380 32115030440 32221035470 330240361300 331460712400 33211001504800 本试验所用的培养基系选择培养基，许多细菌都不能利用培养基中的乳糖来发酵产气产酸，而大肠菌群细菌及少数其它种类的细菌可发酵乳糖产气产酸。培养基中的胆汁（牛、羊或猪的胆酸盐）是表面活性剂，它不会抑制大肠菌群细菌的生长，但能抑制其它革兰氏阳性细菌，如芽孢形成菌的生长。在胆汁缺乏时可用0.1克的十二烷基磺酸钠替代。溴甲酚紫（或亮绿）是pH的指示剂，大肠菌群在发酵乳糖产气外还同时产酸，该指示剂有助于我们判断发酵的进程。在假定试验的初步发酵管中，可能有极少数能发酵乳糖产气的非大肠菌群细菌混在阳性可疑反应管中，通过确信试验和完成试验，对初步发酵中的阳性可疑管进行复发酵试验，并进行革兰氏染色和细菌形态观察，即可将那些少量的非大肠菌群细菌（“假阳性管”）删除去，放在记录时须把三步试验都呈阳性的试管数计入阳性反应管。 1.5 培养基配制 （1）乳糖胆汁液体培养基： 蛋白胨 20.0克 乳糖 5.0克 胆酸钠 5.0克 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液 1毫升 蒸馏水 1000毫升. 将蛋白胨、乳糖、胆盐加热溶解于1000毫升蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1毫升，充分混匀，分装于有倒置杜汉氏小管的试管中，注意小管中不得有气泡，115℃灭菌20分钟。（2）伊红－美蓝琼脂（E．M．B）培养基①蛋白胨琼脂培养基（其成分为蛋白胨10.0克；琼脂18.0克；蒸馏水1000毫升；pH7.6） ②20％乳糖 2毫升 ③2％伊红溶液 2毫升 ④0.5％美蓝溶液 1毫升 将已灭菌的蛋白胨琼脂培养基加热溶化，冷却至60 ℃左右时，将已灭菌的乳糖溶液、伊红溶液及美蓝溶液按上述量以无菌操作加入，摇匀后即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏，故必须严格控制灭菌温度，一般为115℃，20分钟。（3）亮绿乳糖胆汁（B.G.B.）液体培养基蛋白胨 10.0克 乳糖 10.0克 胆酸钠 20.0克 亮绿 0.0133克 蒸馏水 1000毫升 pH 7.4 分装试管后，加入杜汉氏小管，115℃灭菌20分钟。

.4 水质的细菌学检测 9.4.1 水中细菌总数的检测 9.4.1.1 目的和原理 水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。由于重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。本试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细期总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中，37℃、24小时培养后所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水中总菌数不得超过 100个。 9.4.1.2 材料和器皿 （1）培养基①营养琼脂培养基②2216E培养基：蛋白胨 5.0克 酵母膏 1.0克 FePO4 0.01克 琼脂 18.0克 陈海水 1000毫升 pH 7.6～7.8 （2）无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及 9mL灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。 9.4.1.3 方法和步骤 （1）采集水样。（2）吸取10 ml水样（河水、污水、游泳池水或港湾水等），注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。（3）按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、10-4。（4）根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、10-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿 1ml。稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30—300个之间。（5）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培养基（用于河水样）或2216E培养基（用于海水、港湾水样）约15ml，立即旋摇培养血，充分混匀，水平放置至固化。（6）接种河水的培养皿，倒置于37℃培养24小时。接种海水样，港湾水样的培养皿，应倒置后于18—20℃下培养到长出明显菌落（5天左右）止。 9.4.1.4 结果与分析 取同一稀释度的平板培养物，依菌落计算原则进行计算。（1）菌落计算原则平皿菌落的计算，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，防止遗漏，也可借助于菌落计数器计数。对长得相当接近，但不相触的菌落，应予以—一计数。对链状菌落，应当作为一个菌落来计算。平皿中若有较大片状菌落时则不宜采用，若片状菌落少于平皿的一半时，而另一半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。算出同一稀释度的平均菌数，供下一步计算时用。（2）计算方法①首先选择平均菌落数在30～300者进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数（见表5－9的例1）。②若有两个稀释度的平均菌落数都在30—300之间，则应按两者的比值来决定。若其比例小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的数字（见表7-例2和例3）。③如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表5－9例4）④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表5－9例5）。⑤如果全部稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表5－9例6）。③菌落计数的报告，菌落在100以内时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（见表5－9的“报告方式”栏）。 表5－9 稀释度选择及菌落报告方式 例次 不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比 菌落总数（个／ml）报告方式（个／ml） 10 -1 10 -2 10-3 1136016420-1640016000或1.6×104 22760295 461.63775038000或3.8×104 3289027160 2.22710027000或7×104 4无法计数4651513-513000510000或5.1×105 527 11 5 -270 270或2.7×102 6无法计数305 12- 30500 31000或3.1×104

细菌DNA的提取2006-10-24 17:19这里提供的是由Marmur于1961年建立，经Dale等人简化和发展，此方法略加修改后可用于其他细菌种类。主要原理是：采用去垢剂破碎细菌细胞，酚－氯仿萃取蛋白，使用核糖核酸酶和蛋白酶K进行进一步的纯化，所提取的DNA无RNA和蛋白质污染，可用于限制性内切酶消化，分子克隆。⑴材料①20倍SSC缓冲液：3mol/l NaCl; 0.3mol/l 醋酸钠；pH 7.0(高压灭菌后，4摄氏度保存可长期使用)②酚/氯仿（1：1）：一般市售的酚需要重蒸处理，市售的酚常含有杂质而呈粉色和淡黄色，需要重蒸二次，收集沸点160℃部分，小瓶分装，瓶内空腔充氮气，－20℃密封保存，以免氧化，用前从冰箱中取出，68℃蒸馏水饱和，加入8—羟基喹啉（100g酚加0.1g），酚变为黄色。8—羟基喹啉是抗氧化剂，并能部分抑制核糖核酸酶，含8—羟基喹啉的酚用等体积1.0mol/L pH 8.0Tris 缓冲液抽提，再用0.1mol/L pH 8.0含0.2％β－巯基乙醇的Tris缓冲液抽提数次，酚溶液的pH应大于7.6。此酚溶液在平衡缓冲液覆盖下4℃可保存一个月，纯化和制备酚溶液都要带手套，以免损伤皮肤。③核糖核酸酶：无DNA酶污染，将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/LTris－Cl(pH 7.5)15mmol/L Nacl 溶液中，浓度为10mg/ml.于100℃加热15分钟，缓慢冷却至室温，分装后于－20℃保存。④蛋白酶K ⑤TES缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, pH 8.0; 10mmol/L NaCl;1mmol/l EDTA⑵方法①取单菌落接种于5mlLB培养液中，37℃振荡培养过夜。（使用试管）②将上述菌液接种于200mlLB培养液中，37℃振荡培养过夜。（使用500ml或1000ml三角瓶）③离心，收集沉淀（5000r/m,10分钟）④将沉淀悬浮于20ml 20倍SSC缓冲液中，混匀。⑤加入200mg SDS，室温下振荡过夜，使细菌细胞充分裂解，裂解液呈粘稠状⑥加入等体积的酚/氯仿溶液，温和地混匀，细心地回收上层水相（注意不要触及二相之界面），重复萃取三次⑦加入2倍体积无水乙醇，此时可见到絮状DNA沉淀或用玻璃棒绕取收集⑧将DNA溶于15ml 2倍SSC溶液中，加入核糖核酸酶（最终浓度50ug/ml），37℃保温1小时⑨加入蛋白酶K（50ug/ml）,继续保温1小时⑩加入等体积苯酚萃取一次，在回收的水相中加入2.5倍体积的无水乙醇，－20℃静止过夜25000g，4℃，离心15分钟，收集沉淀，用－20℃无水乙醇洗涤一次；将DNA在真空干燥器中抽干，溶于10mlTES缓冲液中，4℃保存备用。⑶说明①本方法可用于其他种类细菌，但是溶菌条件需略加修改，对革兰氏阳性菌（如葡萄球菌），在SDS处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁，对于另外一些细菌（如分枝杆菌），在加入SDS后，将溶液加温至65℃是可取的。②一些种类的细菌含大量核酸酶，去垢剂不能完全抑制其活性，用TES缓冲液代替SSC缓冲液可通过EDTA的作用抑制核酸酶活性，必须注意的是，TES缓冲液离子强度较低，在加入乙醇之前需用醋酸钠调节DNA溶液的离子强度（醋酸钠的最终浓度为0.3mol/L）③DNA溶液中残留少量酚和氯仿，可在乙醇沉淀之前用水饱和乙醚萃取去除④比较纯净的DNA溶液的Ａ260/A280及A260/A235大于1.7

[font=&]如题，求大佬指教，主要问题是我想用含Cd的培养基筛选耐Cd的溶磷菌，[/font][font=&]那么我是该直接用含Cd的解磷培养基筛选土样中的细菌呢，还是先筛选耐Cd细菌，再将筛出的细菌接种到解磷培养基上筛选溶磷菌呢？[/font][font=&]因为之前看到很多前辈说在培养基中加氯化镉（2.5水）灭菌后会产生沉淀，影响实验效果，我就想的用上面这个步骤，求教是否可行或有何方法可以更好的筛选耐Cd溶磷菌？[/font][font=&]还有就是Cd的添加量问题，如何用2.5水的氯化镉配置含Cd量为100mg/L的培养基？是称取0.1g氯化镉溶解到100mL容量瓶中，在培养皿中加入9ml培养基1ml镉母液吗？[/font]

名称： 标本的接种和移种法SOP关键词：接种和移种目的：使细菌能得到充分的生长和能分离出单个菌落获得纯培养而供分析鉴定之用适用范围：临床微生物室实验室标本的接种和移种法接种标本是细菌实验室的一项基本操作技能，目的是使细菌能得到充分的生长和能分离出单个菌落获得纯培养而供分析鉴定之用，所以作此项技术的操作应按以下方式进行：1.左手的操作要点：左手负责持平板、试管、烧瓶等物品，操作中，左手应尽量减少摆动，否则，不利于保持物品的无菌状态。1.1左手持物品时，最好固定在一个空间方位上，以避免因移动使空气中的细菌进入器皿，造成随机性污染。1.2所持的器皿其开口尽量避免向上，持平皿时，可以让平板的表面与地面尽量垂直，试管与器皿烧瓶也可倾斜。当从标本器皿或平板上挑取接种物或菌落后应立即塞上试管塞或扣上平皿，随即接种标本。2.右手的操作要点：握有接种工具的右手，将接种环或针沿伸到标本之前应作好接种环或针，镊子等工具的火焰消毒工作，待冷却后才沿伸到标本容器中挑取接种物，在挑取标本后，其接种工具应尽量避免接触试管壁及试管口等。随后将接种物在培养基上分离划线。3.移种或接种的基本步骤：3.1右手持接种工具，在火焰上烧灼3次灭菌。3.2左手持起标本容器或原代培养物的平皿或试管等。3.3用接种工具挑取适量标本或细菌，挑取标本时，应注意选择真实反映感染情况的部分，如粪便挑取粘液脓血部分。纯化细菌应从原代培养物上挑取单个菌落。从液体培养基中取菌，只需将接种环在培养液中蘸取一环即可。3.4接种时可根据要求采用不同的接种方法。3.5接种后，应在火焰上反复烧灼接种工具并作一定的编号记录，所用工具应放回原处。

如题，求大佬指教，主要问题是我想用含Cd的培养基筛选耐Cd的溶磷菌，那么我是该直接用含Cd的解磷培养基筛选土样中的细菌呢，还是先筛选耐Cd细菌，再将筛出的细菌接种到解磷培养基上筛选溶磷菌呢？因为之前看到很多前辈说在培养基中加氯化镉（2.5水）灭菌后会产生沉淀，影响实验效果，我就想的用上面这个步骤，求教是否可行或有何方法可以更好的筛选耐Cd溶磷菌？还有就是Cd的添加量问题，如何用2.5水的氯化镉配置含Cd量为100mg/L的培养基？是称取0.1g氯化镉溶解到100mL容量瓶中，在培养皿中加入9ml培养基1ml镉母液吗？

中文名称: 罗伯特科赫 　 外文名: Robert Koch 　 生卒年: 公元1843年—1910年 　 洲: 欧洲 　 国别: 德国 　 省: 哈茨,克劳斯特尔城科赫,德国医生和细菌学家，世界病原细菌学的奠基人和开拓者。1843年12月11日科赫生於德国克劳斯塔尔。5岁时就能借助报纸自己读书，这预示着具有的超凡智慧及毅力。他在高中读书时表现出对生物学的浓厚兴趣。1862年科赫考入格丁根大学学医。1866年在德国格丁根大学学医毕业（获医学博士学位）后,赴柏林进行6个月的化学研究，在那里又受到Virehow的影响，在1867年科赫到汉堡作了一段时间的住院医师，然后先在Langenhagen开业，不久于1869年到Posen省的Rackwitz开业，在Posen他通过了地区医官考试。1870年婚后科赫到东普鲁士一个小乡村沃尔施泰因当外科医生,在那建立了一个简陋的实验室,并多年在此从事病原微生物研究。科赫在没有科研设备，也无法与图书馆联系，更无法与其他科研人员接触情况下开始研究炭疽病。他的实验室就在他的家里，他的科研设备除了他妻子送给他的显微镜外，其余都是他自己设法解决的。1876年他到布雷斯劳用3天时间以公开表演实验的方式证明炭疽杆菌是炭疽病的病因，并报告了炭疽病菌的生活史是从杆菌—芽孢—杆菌的循环，芽孢可以放置较长时间而不死。他认为每种病都有一定的病原菌,纠正了当时认为所有细菌都是一个种的观点,从而兴起了关於疾病生源的研究。1880年科赫应邀赴柏林工作,在德国卫生署任职。在这里他拥有了良好的实验室和助手。1881年他创立了固体培养基划线分离纯种法；应用这种方法,主要的传染病病原菌被相继发现。此后,他转向结核病病原菌研究。他改进染色方法,发现了当时未能得到的纯种结核杆菌。为了大量培养出纯种的结核菌,他又改用在凝固的血清上接种培养,并将培养出的纯种结核菌制成悬液,通过注射豚鼠的腹腔实验,4～6周后豚鼠即死於结核病。他用实验证明结核菌不论来自猴﹑牛或人均有相同症状。并进而阐明了结核病的传染途径。1882年3月24日结核杆菌是科赫在德国柏林生理学会上宣布结核杆菌是是结核病的病原菌。并研究出纯培养其菌的方法。1882年出版了有关结核杆菌的经典著作。1883年科赫被任命为德国霍乱委员会主席并。被派往埃及调查那里的霍乱暴发流行情况。1883年后,他到埃及和印度去调查那里的霍乱暴发流行情况。他和他的同事一起发现了霍乱病原菌是形如逗号的霍乱弧菌，并发现该菌可以经过水﹑食物﹑衣服等途径传播。根据他对霍乱弧菌的生物学知识以及其传播方式的了解，科赫提出控制霍乱流行的法则，这些法则于1893年被各大国批准并形成至今仍沿用的控制霍乱方法的基础。科赫因对霍乱研究作出的贡献而获10万德国马克奖金，他的这项研究工作也对保护饮水规划有重大影响。同时他还发现了阿米巴痢疾和两种结膜炎的病原体。1890年他提出用结核菌素治疗结核病。1891～1899年,他还在埃及﹑印度等地研究了鼠疫﹑疟疾﹑回归热﹑锥虫病和非洲海岸病等。1905年发表了控制结核病的论文,并获得诺贝尔生理学或医学奖。1910年5月27日因患心脏病卒於德国巴登。终年67岁。研究领域：医学领域中的病原细菌学科赫在病原细菌学方面作出了非凡的贡献：世界上第一次发明了细菌照相法；世界上第一次发现了炭疽热的病原细菌——炭疽杆菌；世界上第一次证明了一种特定的微生物引起一种特定疾病的原因；世界上第一次分离出伤寒杆菌；世界上第一次发明了蒸汽杀菌法；世界上第一次分离出结核病细菌；世界上第一次发明了预防炭疽病的接种方法；世界上第一次发现了霍乱弧菌；世界上第一次提出了霍乱预防法；世界上第一次发现了鼠蚤传播鼠疫的秘密；世界上第一次发现了睡眠症是由采采蝇传播的。制定科赫法则：（科赫为研究病原微生物制订了严格准则,被称为科赫法则,包括:一种病原微生物必然存在 於患病动物体内,但不应出现在健康动物内 此病原微生物可从患病动物分离得到纯培养物 将分离出的纯培养物人工接种敏感动物时,必定出现该疾病所特有的症状 从人工接种的动物可以再次分离出性状与原有病原微生物相同的纯培养物。）创立了固体培养基划线分离纯种法。曾获奖项：1、1905年荣获生理学或医学诺贝尔奖海德堡大学及2、柏林市、Wottstein市及他的老家Ctausthal市均授予他名誉市民称号3、获柏林市、维也那等学术团体的名誉会员称号4、被授予德国的皇冠勋章5、被授予红鹰大十字勋章（为医学界第一位获此荣誉者）6、因对霍乱研究作出的贡献而获10万德国马克奖金7、博洛尼亚(Bologna)大学授予以他名誉博士学位8、德国政府於1907年为纪念他的成就,设了一笔100万马克的基金9、1897年被选为英国皇家学会会员10、1903年被选为法国科学院院士

最近在做微生物方面的方法验证，有几个检出限的问题想请教一下各位。1.粪大肠多管发酵法（HJ347.2-2018）的检出限是根据MPN值确定的，我们方法验证报告中需要体现吗，需要的话该怎么做？2.粪大肠的滤膜法（HJ 347.1-2018）中明确规定了检出限：接种量为100mL时，检出限为10CFU/L 接种量为500mL时，检出限为2CFU/L。这是怎么得出来的？3.细菌总数 平皿计数法（HJ 1000-2018）中没有说明检出限，验证报告中要给出吗？多谢各位了！

一、目的和要求(1) 了解水细菌学检验的卫生学意义和基本原理，掌握水中细菌总数的检验方法。(2）了解平板菌落计数原则。二、原理水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求各不相同，无法找到一种在某种条件下使水中所有细菌均能生长繁殖的培养基。因此，通常选择一种大部分细菌能生长的培养基，通过生长出来的菌落大致计算水中细菌总数。目前一般是采用普通肉膏蛋白陈琼脂培养基。三、仪器与试剂(1)高压蒸汽灭菌器。(2）显微镜。(3）灭菌水。(4）肉膏蛋白陈琼脂培养基。蛋白陈 l0g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000m将上列成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4-7.6，过滤，分装于玻璃容器中，经121℃ (151b①/in2）高压蒸汽灭菌20min，冷暗处备用。四、实验步骤1．水样的稀释根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管做10倍系列稀释。①11b=0. 453 592掩，下同。2．接种以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，再倾注约15mL已融化并冷却到45℃左有的培养基，并立即转动平皿，使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注3个平皿。每次检验时另用3个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。3．培养待冷却凝固后，翻转平皿，使皿底向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。3个平皿中的平均菌落数即为水样1mL中的细菌总数。4．菌落计数做平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大状菌落生长时，则不宜采用；而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数；若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。五、数据处理1．按各种不同情况进行计算(1) 首先选择平均菌落数在30-300者进行计算，当有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告。(2) 若有两个稀释度，其平均菌落数均为30-300，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的菌落总数。(3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。(5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告。2．菌落计数的报告菌落数在100以内时按实有数报告。大于100时，采用2位有效数字，在2位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示，报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。六、注意事项(1）严格无菌操作，防止污染。(2）根据水样污染程度选择稀释倍数，必要时做预实验。

三糖铁琼脂培养基( l ）成分 蛋白胨 20g 硫酸亚铁 0.2g 牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g 乳糖 10g 002％酚磺酞指示液 12.5ml 蔗糖 10g 琼脂 12～15g 葡萄糖 1g 水 1000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2 ～3cm ) 短斜面。( 3 )用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。

枸橼酸盐培养基( 1 )成分 氯化钠 5g 枸橼酸钠（无水） 2g 硫酸镁 0.2g 1.0 ％溴麝香草酚蓝指示液 10ml 磷酸氢二钾 1g 琼脂 14g 磷酸二氢铵 1g 水 l000ml ( 2 )制法 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成斜面．（3 ）用途 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48 ～ 72 小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7 天。

中文名称: 亚历山大弗莱明 　 外文名: Alexander Fleming 　 生卒年: 公元1881-1955年 　 洲: 欧洲 　 国别: 苏格兰 　 省: 亚尔郡 　 亚历山大弗莱明，英国细菌学家,1881年生于苏格兰亚尔郡。1908年毕业于英国圣玛丽学院获得医学学士和理学学士学位。翌年，他又通过考试，成为皇家外科学会的正式会员。早在1906年，他就开始跟随当时英国著名传染病学家赖特从事传染病的预防研究，并先后发表了很多医学论文。第一次世界大战爆发后，弗莱明服兵役并从事创伤病的研究。一战以后，他于1919年又回到了圣玛丽医学院，重新开始了他的细菌研究工作。弗莱明有两次在实验室里获得意外发现的故事已广为人知。第一次是1922年，患了感冒的弗莱明无意中对着培养细菌的器皿打喷嚏。后来他注意到，在这个培养皿中，凡沾有喷嚏黏液的地方没有一个细菌生成。随着进一步的研究，弗莱明发现了溶菌酶——在体液和身体组织中找到的一种可溶解细菌的物质，他以为这可能就是获得有效天然抗菌剂的关键。但很快他就丧失了兴趣：试验表明，这种溶菌酶只对无害的微生物起作用。1928年夏季的一天，弗莱明在准备用显微镜观察培养皿中的葡萄球菌时，发现培养皿中的葡萄球菌由于被污染而长了一大团霉，而且霉团周围的葡萄球菌被杀死了，只有在离霉团较远的地方才有葡萄球菌生长。他把这种霉团接种到无菌的琼脂培养基和肉汤培养基上，结果发现在肉汤里，这种霉菌生长很快，形成一个又一个白中透绿和暗绿色的霉团。通过鉴定，弗莱明推断这种霉菌一定产生了某种具有强大杀菌作用的物质。于是，他把经过过滤所得的含有这种霉菌分泌物的液体叫做“青霉素”。接着弗莱明又把这种霉菌接种到各种细菌的培养皿中，发现葡萄球菌、链球菌和白喉杆菌等都能被它抑制。这一结果极大地鼓舞了正急于找到一种治疗化脓性感染药物的弗莱明。经过一系列试验和研究，弗莱明认为青霉素可能成为一种可以全身应用的抗菌药物。于是，他又和助手们进行了更广泛的试验和实验性研究，获得了令人振奋的结果。　　　弗莱明把这一重大发明写成一篇论文发表在1929年的英国皇家《实验病理季刊》上，并把这种由青霉菌产生的物质命名为青霉素。由于当时艾利希的六O六药正名声大噪，多马克的磺胺也举世瞩目，加之弗莱明的实验还没有完结，青霉素还不能大量很快分离出来，所以他的发现被人们忽略了。　　1939年，正在牛津工作的德国生化学家钱恩和澳大利亚病理学家弗洛里继续了弗莱明的研究，他们重新研究了青霉素的性质、分离和化学结构，终于解决了青霉素的浓缩问题。两年后制成首批青霉素。第一个采用此药的病人是个警察，他的头部，脸部，肺部受到严重的细菌感染，接受治疗仅仅5天，病情大为好转，康复之快令人惊异。不幸的是，由于没有足够的青霉素继续治疗，一个月后终于死亡。第二次世界大战促使青霉素大量生产，1943年，已有足够青霉素治疗伤兵，1950年，产量可满足全世界需求。　　青霉素的发现与研制成功，成为医学史上一项奇迹。1945年，弗莱明与弗洛里和钱恩共同获得诺贝尔生理学和医学奖。　青霉素的发现是人类发展抗菌素历史上的一个里程碑。直到今天，它仍是流行最广、应用最多的抗菌素。青霉素能杀灭各种病菌，还可以治疗各种炎症。而且它对人体几乎没有毒性。因此除了极少数对青霉素过敏的人，大多数病人都能借助青霉素恢复健康。亚历山大弗莱明于1955年3月11日逝世，终年74岁。相关研究领域：细菌学医学

没人发帖我来活跃气氛：发光细菌的微毒检测生物发光是某些生物的一种生理现象，海洋生物中更为多见。自1672年R．Boyle观察到发光的菌体所发出的光易被化学物质抑制后，许多科学家相继对细菌的发光效应进行了大量的研究。本世纪70年代至80年代初，国外科学家首次从海鱼体表分离和筛选出对人体无害，对环境敏感的发光细菌，用于检测水体生物毒性，现已成为一种简单、快速的生物毒性检测手段。80年代初我国引进了这项技术，并先后分离出海水型和淡水型的发光细菌，用以检测环境污染物的急性生物毒性；近年来还分离出明亮发光杆菌暗变种检测环境污染物致突变性，扩大了检测范围。一、发光细菌检测的原理与操作（一）基本原理发光菌检测法是以一种非致病的明亮发光杆菌作指示生物，以其发光强度的变化为指标，测定环境中有害有毒物质的生物毒性的一种方法。细菌的发光过程是菌体内一种新陈代谢的生理过程，是光呼吸进程，是呼吸链上的一个侧支，即菌体是借助活体细胞内具有ATP、萤光素（FMN）和萤光素酶发光的。综合化学反应过程为： 该光波长在490nm左右。这种发光过程极易受到外界条件的影响。凡是干扰或损害细菌呼吸或生理过程的任何因素都能使细菌发光强度发生变化。当有毒有害物质与发光菌接触时，发光强度立即改变，并随着毒物浓度的增加而发光减弱。这种发光强度的变化，可用一种精密测光仪定量地测定。美国Microbics公司设计制造了一套微毒测定仪器。国内中国科学院南京土壤研究所，华东师范大学生物系也分别成功地研制了DXY－2型和SDJ－1型的生物发光光度计（生物毒性测试仪）。（二）典型操作1．典型操作方法 目前国内外细菌发光的测定常用的有二种方法。（1）新鲜发光细菌培养测定法 即将发光菌接种于液体培养基中，在适当条件下（20℃±0.5℃）振荡培养到对数生长期，配制为含3％NaCl盐度的适当浓度的菌悬液加入测试管中，再加入待测液，使之和菌种接触，作用5min～15min后，读出井记录对照管和样品管发光强度。此法操作较为简便。（2）冷冻干燥发光细菌制剂测定法，把培养到对数生长期的发光细菌，以冷冻干燥法制成冻干粉剂，使用时加入冷的2％NaCl溶液复苏，使其恢复到原来的生理状态和发光水平，然后用于测定。这是国家标准方法，其优点是可实行测定的质量控制。冻干粉可长期保藏方便使用，操作简便，节约时间。2．试剂与材料（1）测试菌种 明亮发光杆菌（Ptotobacterium phosphoreum）T3小种。①新鲜明亮发光杆菌悬浮液。②或明亮发光杆菌冻干粉（800万Cell／g）。（2）培养基①液体培养基 酵母膏5.0g，胰蛋白胨5.0g，NaCl30.0g，Na2HPO45.0g，KH2PO41.0g，甘油3.0g加蒸馏水至1000ml。pH7.0±0.5。②固体培养基 培养液（按上述配方）1000ml，琼脂169g，pH7.0±0.5。（3）稀释液 3％NaCl，2％NaCl。（4）参比毒物 0.02mg／L～0.24mg／L的HgC12系列标准溶液。（5）仪器与器材①DXY－2型生物发光光度计（中国科学院南京土壤研究所研制）及2ml或5ml比色管。②恒温振荡器，培养箱，手提式高压消毒锅。③10ul或20ul微量加液器，1ml注射器，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]，容量瓶，三角瓶。（6）检测样品 视实验目的而定。二、发光细菌法的应用根据发光细菌法的原理和方法，凡能干扰或破坏发光细菌呼吸、生长、新陈代谢等生理过程的环境因子，例如有毒有害的物质等都可以运用发光细菌法检测生物毒性。其主要应用包括：1．发光细菌对水、土、气中化合物的急性毒性评价及快速评价水源水和地面水的质量，渔业水体，农田灌溉水体等的检测。2．工业废水，废气和固体废弃物的急性毒性与评价，及污染源的毒性追踪与判断，河流流经地域的排污分担率的估算，污水合格排放的稀释率的推算与评定。3．土壤重金属急性毒性效应测定和评价，土壤金属毒性的协同或拮抗效应监测。4．化学品的毒性评价与安全性评定，化学危险品的风险评定，以及环境污染物的致突变性的评价。5．环境保护处理设施效果的监控。随着环境学科的发展，发光细菌法的应用范围和前景将愈来愈宽广。三、发光细菌法测定急性毒性的操作程序（一）发光细菌新鲜菌悬液的制备（第1法）1．斜面菌种培养 于测定前48h取保存菌种，于新鲜斜面上接出第一代斜面，20℃±0.5℃培养24h后立即转接第二代斜面，20℃±0.5℃培养24h，再接出第三代斜面20℃±0.5℃培养12h后备用。每次接种量不超过一接种耳。2．摇瓶菌液培养 取第三代斜面菌种近一环，接种于装有50ml培养液的250ml三角瓶内，20℃±0.5℃，184rpm／min下培养12h－14h备用。3．将培养液稀释至每毫升108个细胞～109个细胞，初始发光度不低于800mV，置水浴中备用。（二）菌液复苏（第2法）取冷藏的发光菌冻干粉，置冰浴中，加入0.5ml冷的2％NaCl溶液，充分摇匀，复苏2min，使其具有微微绿光，初始发光度不低于800mV。（三）样品采集与处理1．水样（1）从不同工业废水的各排放口，每4h采样一次，连续采集24h后，均匀混合后备用。（2）纳污水体 取其入口，中心，出口三个断面混合水样备用。（3）以同上方法采集清洁水，作空白对照。浊度大的污水，需静置后取上清液。一般样品不需加任何处理。水样按3％比例投加NaCl置冰箱备用。2．气体样品 以大气采样法取大气样品于气体吸收液中吸收5ml，按3％比例投加NaCl，置冰箱备用，同法收集清洁空气作为对照组。3．固体样品 取固体废弃物，按《工业固体废物有害特性试验与监测分析方法》制备浸出液，以取上清液，按3％比例投加NaCl，置冰箱备用。（四）试验浓度的选择在预备试验的浓度范围内，按等对数间距或百分浓度取3个～5个试验浓度，同时设空白对照和参比毒物系列浓度组。（五）发光细菌法生物毒性测定1．工业废水或有毒物质的生物毒性测定（1）发光菌悬液初始发光度测定取4.9ml3％NaCl溶液于比色管内，加新鲜发光菌悬液或冻干粉复苏菌悬液10ul，若测量发光度在800mv以上，允许置冰浴中备用。（2）取已处理待测废水样品，按等对数间距或百分浓度编号，并注明采集点。（3）按表依次加入稀释液，待测水样及参比毒物系列浓度溶液。（4）打开生物毒性测试仪电源，预热15min调零点，备用。（5）每管加入菌悬液0.01ml，准确作用5min或15min，依次测定其发光强度，记录毫伏数。每个浓度设三管重复。 2．工业废气（或有害气体）的生物毒性测定（1）气体直接通入法 用注射器直接注入气体于菌悬液中，经10min～20min测定发光菌光强度的变化。（2）气体吸收法 方法同工业废水测定法。（3）固体菌落法 挑选固态培养到对数生长期的发光菌单茵落，连同培养基切下，置比色管内，测定初始发光强度，然后用注射器将待测气体注入菌苔表面，经10min～20min后，测定发光度的变化。（六）实验结果处理与评价1．记录工业废水，废气的生物毒性实验数据及其计算。（1）相对发光率或相对抑光率计算公式： （2）EC50值 在半对数座标纸上，以横座标为对数浓度，以纵座标为相对抑或发光率，作图，求得EC50值。2．数据处理与评价（1）建立相对抑光率与参比毒物系列浓度的回归方程，求出样品的生物毒性相当于参比毒性的水平，以评价待测样品的生物毒性。（2）以EC50值评定样品的生物毒性水平 总之发光细菌法是检测环境生物毒性的一种好方法，它具有快速、简便、灵敏